JPH08512290A

JPH08512290A - ３−（アミノアシル−アミノ）サッカリドおよびその製造方法

Info

Publication number: JPH08512290A
Application number: JP6523885A
Authority: JP
Inventors: クラウスブッフホルツ，; マルティナノル−ボルヒェルス，; マルティナピーチュ，
Original assignee: フェラインデルツッカーインドゥストリー
Priority date: 1993-05-03
Filing date: 1994-04-28
Publication date: 1996-12-24
Also published as: EP0697023A1; AU6722594A; WO1994025474A1; EP0697023B1; DE4314407A1; DE59407347D1; US5665876A; ATE173737T1

Abstract

(57)【要約】本発明は、一般式Ｉ：［式中、Ｒ¹は水素原子、カルボキシル基またはフェニル基または１〜１０個のＣ原子を有するアルキル基を表し、該基はフェニル基、カルボキシル基、ヒドロキシル基、メルカプト基またはアミノ基により置換されていてもよく、Ｒ²は水素原子、ペプチド化学で常用のアミノ保護基またはペプチド基を表し、Ｒ³は水素原子またはフルクトシル基を表し、ｎは０または１である］で表される３−（アミノアシル−アミノ）サッカリドおよびその製造方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】３−（アミノアシル−アミノ）サッカリドおよびその製造方法本発明は、３−（アミノアシル−アミノ）サッカリドおよび３−アミノ−アロサッカロースから該サッカリドを製造する方法に関する。アミノ酸およびサッカリドの結合は主として糖ペプチドまたは糖タンパク質中におよび少ない割合で細菌のリポ多糖中に存在する。糖ペプチドはサッカリドおよびタンパク質の結合領域として糖タンパク質中に存在する部分構造である。血液および多数の分泌液中に溶解した形でおよび膜二重層に定着した形で見出される糖タンパク質は、近年、その機能が生物学的制御法において認められ、研究されて以来注目を集めている。多くの場合に認識信号として炭水化物側鎖が用いられる。しかしながらタンパク質および炭水化物側鎖の共有結合の形式は、多数の天然に存在する糖タンパク質にもかかわらずほとんど区別されず、このことは糖タンパク質の生合成に起因する。両方の成分はグリコシド結合を介して結合され、その際Ｎ−糖タンパク質およびＯ−糖タンパク質に区別される。Ｎ−糖タンパク質においては、多くの場合に、アスパラギン成分の側鎖アミド基が２−アセトアミド−２−デソキシ−Ｄ−グルースとβ−Ｎ−グリコシド結合している。しかしながら近年このほかにＮ−グリコシル−およびＮ−ガラクトシル構造が見出された。Ｏ−糖タンパク質においては、多くの場合に、２− アセトアミド−２−デソキシ−Ｄ−ガラクトースのα−Ｏ−グリコシド結合またはＤ−キシロースとセリンまたはトレオニンのヒドロキシル基とのβ−Ｏ−グリコシド結合が存在する（H.Paulsen,Synthesen,Konformationen und Roentogen-s trukturanalysen von Saccharidketten der Core-Regionen von Glycoproteinen ,Angew,Chem,102(1990)851〜867,H.Kunz,Synthese von Glycopeptiden-Partials trukturen biologischer Erkennungskomponenten,Angew.Chem.99(1987)297〜311 ,J.Montreuil,Primary Strukture of Glycoprotein Glycans,Adv.Carbohydr.Che m.Biochem.37(1980)157〜223)。細菌に由来のリポ多糖中にアミド結合を介してアミノ糖と結合している個々のアミノ酸、たとえば志賀赤痢菌（Shigella dysenteriae）タイプ７のリポ多糖のＯ−特異的側鎖に４−アミノ−４，６−ジデソキシ−Ｄ−グリコピラノシル基のアミノ基を介して結合しているＮ−アセチルグリシン（Y.A.Knirel et al.,Carb ohydr.Res.179(1988)５１〜６０）、または３−アミノ−３，６−ジデソキシ− Ｄ−グルコピラノシル基のアミノ基を介して大腸菌（Escherichia coli）０１１４のリポ多糖のＯ−特異的側鎖と結合しているＮ−アセチル−Ｌ−セリン（V.L. L'vov et al.,Carbohydr.Res.112（１９８３）２３３〜２３９）が検出された。これらの物質は抗原として作用する。本発明は、以下の式Ｉ：［式中、Ｒ¹は水素原子、カルボキシル基またはフェニル基または１〜１０個のＣ原子を有するアルキル基を表し、該基はフェニル基、カルボキシル基、ヒドロキシル基、メルカプト基またはアミノ基により置換されていてもよく、その際前記置換基は保護基を有していてもよく、Ｒ²は水素原子、ペプチド化学で常用のアミノ保護基またはペプチド基を表し、Ｒ³は水素原子またはフルクトシル基を表し、ｎは０または１である］で表される新規の３−（アミノアシル−アミノ）サッカリド、特に３−（Ｌ−アミノアシル−アミノ）−Ｄ−アロピラノシル−β−Ｄ −フルクトフラノシド（以下に３−（アミノアシル−アミノ）アロサッカロースと記載する）および３−（Ｌ−アミノアシル−アミノ）−Ｄ−アロピラノースに関する。更に本発明は３−アミノ−３−デソキシ−Ｄ−アロ−ピラノシル−β −Ｄ−フルクトフラノシド（３−アミノ−アロサッカロースと記載する）から出発して前記の物質を製造する方法に関する。本発明による３−（アミノアシル−アミノ）−アロサッカリドは、アミノ酸のカルボキシル基が酸アミド結合を介して３−アミノ−アロサッカロースのアミノ基に結合している物質である。従ってこの化合物は糖タンパク質とは異なり炭水化物およびアミノ酸のグリコシド結合を有せず、前記のリポ多糖に類似の結合構造を有する。３−（アミノアシル−アミノ）−アロサッカロースは糖ペプチド合成の方法を用いて、炭水化物およびタンパク質がＮ−グリコシド結合を介してでなく、酸アミド結合を介して結合している新しい形式の糖ペプチドの製造を可能にする。このために出発物質として特に酸および塩基性のアミノ酸が適している、それというのもアミノ酸サッカリド中のアミノ酸基がそれぞれなお２つの官能基を有し、従ってペプチド鎖を２つの側に形成することができるからである。糖ペプチドの製造は、一般に２つの出発成分の多官能性にもとづききわめて問題であり、多くの場合にサッカリドおよびアミノ酸またはペプチドの所に保護基の導入を必要とする。保護基を導入せずに得られる３−アミノ−アロサッカロースの導入により、今やサッカリド成分中の３−アミノアシル基を合成するために保護基を省くことが可能である。３−（アミノアシル−アミノ）−アロサッカロースのフルクトシル基の分離により３−（アミノアシル−アミノ）アロースを得ることができ、これを糖ペプチドの製造に用いることができる。この場合にアミノ酸基に更にアミノ酸を結合することによりペプチド鎖を形成することができ、およびアロースを介してオリゴサッカリド鎖を製造することができる。本発明による化合物およびこれから製造された誘導体は、学際的研究および使用に、たとえば糖タンパク質の生物学的機能を解明するために、抗体の誘導のために、生物学的認識および選択性の探求のためにおよび薬理的作用物質の開発のためにおよび酵素および微生物の可能な抑制物質として使用可能である。３−（Ｌ−アミノアシル）−アミノ−アロサッカリドの製造はサッカロースから出発する。この多官能性分子中で、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（ Agrobacterium tumefaciens）を用いた微生物の酸化によりグルコシル基のＣ− ３にケト基を導入し、ケト基を引き続き、たとえばアンモニア、ヒドロキシルアミンまたはヒドラジンを用いた還元性アミノ化により、水素原子および金属触媒を用いて、選択的にアミノ基に移行することができる。クロマトグラフィーによる精製後アミノ化生成物、３−アミノ−アロサッカロースが得られる（M.Pietsch,Dissertation TU-Braunschweig,1993）。この合成法は、同じようにして、すでに還元したサッカリドからジアミンを製造するために欧州特許公開第０３９９４４８号明細書に記載されている。３−アミノ−アロサッカロースは３−（アミノアシル−アミノ）−アロサッカリドの出発生成物として用いる。反応は意想外にも、Ｍ．Ｋｉｙｏｚｕｍｉｅｔａｌ．，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．１４（１９７０）３５５〜３６４に記載の方法により達成される。このために３−アミノ−アロサッカロースを、Ｎ −末端の保護されたアミノ酸およびジアミノ酸またはＮ−およびＣ−末端の保護されたアミノジカルボン酸または相当する保護されたペプチドとピリジン／水混合物中でＮ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いてアミノ酸のカルボキシル官能基を活性化して反応させる。引き続き保護基を分離することができる。反応生成物の精製は、たとえばカラムクロマトグラフィーにより可能である。精製した物質の構造の検出は¹³Ｃ−ＮＭＲ分光学および高速原子衝撃質量分析法（ＦＡＢ−ＭＳ）により行う。３−（アミノアシル−アミノ）サッカリドの製造方法として以下の工程が提案される。１．たとえばアグロバクテリウム・ツメファシエンスＮＣＰＰＢ３９６の菌株の細菌を用いてサッカロースを酸化し、３−ケトサッカロースを形成する。２．３−ケトサッカロースの還元アミノ化および生じた生成物混合物の後処理および分離および３−アミノ−アロサッカロースの単離。３．その他のアミノ基およびカルボキシル基がペプチド化学で常用の保護基により保護されてもよい、活性化されたカルボキシル基を有するアミノ酸またはペプチドを用いた３−アミノ−アロサッカロースのＮ−アシル化。４．上記物質のアミノ酸基から１個以上の保護基および／またはサッカロース基からフルクトシル基の分離および生成物の単離および精製。カルボキシル基の活性化のためにジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）が有利であるが、多くの量でサッカリドのヒドロキシル基と反応しないかぎり、カップリング試薬として１，２−ジヒドロ−２−エトキシキノリン−１−カルボン酸エチルエステル（ＥＥＤＱ）およびほかの活性化されたカルボキシル基、たとえば無水物、エステル、アジドまたはハロゲン化物を使用することができる。アミノ保護基として、穏やかな方法で再び分離できるペプチド化学で周知のすべての基を使用することができる。たとえばベンジルオキシカルボニル基（ＣＢＺ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル基（ＢＯＣ）およびトリフェニルメチル基（Ｔｒｔ）が挙げられ、これらは触媒作用した水素化またはハロケン水素酸、特にトリフルオロ酢酸を用いた酸の加水分解により再び分離する。カルボキシル保護基として、たとえばアルキルエステル、および特にベンジルエステルが挙げられ、これを酸またはアルカリにより分離することができる。ベンジル基は更に特に穏やかに水素化分解により除去することができる。アミノ酸として、多くの量でタンパク質の加水分解により得られる“天然の” Ｌ−アミノ酸が有利であるが、所定の目的のために合成により製造したラセミ体のアミノ酸またはＤ−アミノ酸または天然に存在しないアミノ酸を使用することができる。更にアミノ酸の代りに相当するペプチドを使用することができる。本発明を以下の実施例により詳細に説明する。例１３−アミノ−アロサッカロースと純粋の炭化水素側鎖を有するアミノ酸のカップリング３−（Ｌ−ロイシル−アミノ）−アロサッカロース３−アミノ−アロサッカロース２００ｍｇをＮ−ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン１３７ｍｇ（０．０５９ミリモル）といっしょに溶剤（ピリジン／Ｈ₂Ｏ、４：１）１３ｍｌに溶かし、氷浴中で冷却した。引き続き、冷却下でＤＣＣ（１．０ミリモル、溶剤０．５ｍｌに溶かした）を撹拌および冷却して緩慢に滴加した。数時間後冷却を終了した。反応時間（撹拌して）約１７時間後反応混合物に氷酢酸の滴加により反応を中断し、１５分撹拌後得られた未溶解のジシクロヘキシル尿素を濾過した。溶剤をトルエンを添加して温和に回転蒸発機で（４０℃、真空）除去した。反応生成物に水およびジエチルエーテルを加えて分離漏斗に移行し、水相をジエチルエーテルで数回抽出した。水相中の反応生成物を凍結乾燥し、生成物をカラムクロマトグラフィー（開始相：シリカゲル、溶離剤：酢酸エチルエステル／エタノール／水、５：３：１）により精製した。３−（Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−Ｌ− ロイシル−アミノ）−アロサッカロースが３５％の収率で得られた。Ｃ₂₃Ｈ₄₂Ｎ₂Ｏ₁₃（Ｍ＝５５４ｇ／モル） ¹³Ｃ−ＮＭＲデータ（７５．５ＭＨｚ，Ｄ₂Ｏ／アセトン−ｄ₆）； δ＝１７８．０（Ｃ１″），１５８．３（Ｃ７″），１０５．０（Ｃ２′），９３．０（Ｃ１），８２．６（Ｃ５′），８２．２（Ｃ８″），７７．５（Ｃ３′ ），７４．６（Ｃ４′），６９．４／６６．１／６５．７（Ｃ２，４，５），６２．９／６２．４（Ｃ６′，１′），６０．８（Ｃ６），５５．３／５３．４（Ｃ３，２″），４０．８（Ｃ３″），２８．５（Ｃ９″−１１″），２５．１（Ｃ４″），２３．１（Ｃ５″，６″）ＦＡＢ−質量分析（ｐｏｓ．マトリックスグリセリン）：ｍ／ｚ＝５５５（Ｍ＋Ｈ）⁺，３９３（Ｍ−フルクトシル基＋Ｈ）⁺，７６１［Ｍ＋２グリセリン＋Ｎａ］⁺ ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）保護基の分離を９０％トリフルオロ酢酸を用いて実施した。このために反応生成物を冷たい９０％トリフルオロ酢酸に溶かし、４℃で２０〜３０分放置した。引き続きこの物質を冷たい乾燥したジエチルエーテルの添加により沈殿し、濾過し、ジエチルエーテルで数回後洗浄した。カラムクロマトグラフィーによる精製後、３−（Ｌ−ロイシル−アミノ）−アロサッカロースが得られた。同様にして以下の物質を製造した。３−（Ｎ−ＢＯＣ−Ｌ−アラニル−アミノ）−アロサッカロースＣ₂₀Ｈ₃₆Ｎ₂ Ｏ₁₃ （Ｍ＝５１２ｇ／モル） ¹³Ｃ−ＮＭＲデータ（７５．５ＭＨｚ，Ｄ₂Ｏ／アセトン−ｄ₆）； δ＝１７０．８（Ｃ１″），１５４．９（Ｃ４″），１０４．２（Ｃ２′），９１．６（Ｃ１），８２．７（Ｃ５′），７８，２（Ｃ５″），７６．４（Ｃ３′ ），７３．７（Ｃ４′），６９．０／６５．５／６５．０（Ｃ２，４，５），６１．８（Ｃ６′，１′），６０．１（Ｃ６），５５．３（Ｃ３），４９．５（Ｃ２″），２８．１（Ｃ６″−８″），１７．９（Ｃ３″）３−（Ｎ−ＢＯＣ−Ｌ−フェニルアラニル−アミノ） −アロサッカロースＣ₂₆Ｈ₄₀Ｎ₂Ｏ₁₃ （Ｍ＝５８８ｇ／モル） ¹³Ｃ−ＮＭＲデータ（７５．５ＭＨｚ，Ｄ₂Ｏ／アセトン−ｄ₆）； δ＝１７６．３（Ｃ１″），１５８．０（Ｃ１０″），１３７．０（Ｃ４″），１２８．９／１２８．５／１２８．１（Ｃ５″−９″），１０４．５（Ｃ２′），９２．５（Ｃ１），８２．４（Ｃ５′），８１．０（Ｃ１１″），７７．４（Ｃ３′），７４．３（Ｃ４′），６９．２／６５．７／６５．４（Ｃ２，４，５），６６．５（Ｃ６′），６２．４（Ｃ１′），６０．５（Ｃ６），５６．０／５３．０（Ｃ３，２″），４０．５（Ｃ３″），２８．１（Ｃ１２″−１４″）ＦＡＢ−質量分析（ｐｏｓ．マトリックスグリセリン）：ｍ／ｚ＝５８９（Ｍ＋Ｈ）⁺，４２７（Ｍ−フルクトシル基＋Ｈ）⁺，６１１［Ｍ＋Ｎａ］⁺ これらの化合物からＢＯＣ基をトリフルオロ酢酸を用いて分離することができる。例２３−アミノ−アロサッカロースと酸性または塩基性のアミノ酸のカップリング３−（４−Ｌ−アスパルチル−アミノ）−アロサッカロースＣ₁₆Ｈ₂₈Ｎ₂Ｏ₁₃ （Ｍ＝４５６ｇ／モル）このために３−アミノ−アロサッカロース１５０ｍｇ（０．４４ミリモル）をＮ−ｔ−ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギン酸ベンジルエステル１４２ｍｇといっしょに溶剤（ピリジン／Ｈ₂Ｏ、４：１）１３ｍｌに溶かし、氷浴中で冷却した。引き続き、冷却下でＤＣＣ（０．７ミリモル、溶剤０．５ｍｌに溶かした）を撹拌および冷却して緩慢に滴加した。数時間後冷却を終了した。反応時間（撹拌して）約１７時間後反応混合物に氷酢酸の滴加により反応を中断し、１５分撹拌後得られた未溶解のジシクロヘキシル尿素を濾過した。溶剤をトルエンを添加して温和に回転蒸発機で（４０℃、真空）除去した。反応生成物に水およびジエチルエーテルを加えて分離漏斗に移行し、水相をジエチルエーテルで数回抽出した。水相中の反応生成物を凍結乾燥した。アスパラギン酸基のα−カルボキシル基の所でベンジル保護基の分離を水素化分解により実施した。このために環流冷却器を有する３口フラスコ中の凍結乾燥した粗製生成物（２００ｍｇ）をメタノール２２ｍｌに溶かした。あらかじめ空気酸素を窒素により排除した後で、溶液を触媒（パラジウム／活性炭，１０％Ｐｄ）の存在下で撹拌しながら３０〜４０℃の温度で３時間貫流する水素で処理した。触媒を濾過し、溶剤を回転蒸発機で（３０℃、真空）除去後、生成物をカラムクロマトグラフィー（開始相：シリカゲル、溶離剤：酢酸エチルエステル／エタノール／水、５：３：１）により精製した。３−（Ｎ−ＢＯＣ−４−Ｌ−アスパルチル−アミノ）−アロサッカロースが４４％の収率で得られた。ＢＯＣ保護基の分離を９０％トリフルオロ酢酸を用いて実施した。このために反応生成物を冷たい９０％トリフルオロ酢酸０．７ｍｌに溶かし、４℃で１５〜２０分放置した。引き続きこの物質を冷たい乾燥したジエチルエーテルの添加により沈殿させ、濾過し、ジエチルエーテルで数回後洗浄した。カラムクロマトグラフィーによる精製後、３−（４−Ｌ−アスパルチル−アミノ）−アロサッカロースが得られた（収率７７％）。 ¹³Ｃ−ＮＭＲデータ（７５．５ＭＨｚ，Ｄ₂Ｏ／アセトン−ｄ₆）； δ＝１７４．７／１７４．１（Ｃ１″，４″），１０４．８（Ｃ２′），９３．２（Ｃ１），８２．７（Ｃ５′），７７．３（Ｃ３′），７４．９（Ｃ４′），６９．６／６６．２／６５．９（Ｃ２，４，５），６３．２／６２．３（Ｃ６′ ，１′），６１．１（Ｃ６），５３．５／５２．５（Ｃ３，２″），３７．３（Ｃ３″）ＦＡＢ−質量分析（ｐｏｓ．マトリックスグリセリン）：ｍ／ｚ＝４５７（Ｍ＋Ｈ）⁺，２９５（Ｍ−フルクトシル基＋Ｈ）⁺，９１３［２Ｍ＋Ｈ］⁺ 同様にして３−（Ｎａ−ＢＯＣ−Ｎ−ＣＢＺ−Ｌ− リシル）アミノ−アロサッカロースＣ₃₁Ｈ₄₉Ｎ₃Ｏ₁₅（Ｍ＝７０３ｇ／モル）を製造した。 ¹³Ｃ−ＮＭＲデータ（７５．５ＭＨｚ，Ｄ₂Ｏ／アセトン−ｄ₆）； δ＝１７６．３（Ｃ１″），１５８．０／１５７．９（Ｃ７″，１２″），１３７．０（Ｃ１４″），１２８．９／１２８．１／１２８．０（Ｃ１５″−１９″ ），１０４．５（Ｃ２′），９２．５（Ｃ１），８２．４（Ｃ５′），８１．０（Ｃ８），７７．４（Ｃ３′），７４．３（Ｃ４′），６９．２／６５．７／６５．４（Ｃ２，４，５），６６．５（Ｃ６′），６２．４（Ｃ１′），６０．５（Ｃ６），５６．１／５３．０（Ｃ３，２″），４０．５／４０．６（Ｃ３″− ６″，１３″），２８．１（Ｃ９″−１１″）ＦＡＢ−質量分析（ｐｏｓ．マトリックスグリセリン）：ｍ／ｚ＝７２６（Ｍ＋Ｎａ）⁺ トリフルオロ酢酸で保護基を分離し、触媒による水素化によりこれから３−（Ｌ−リシル）アミノ−アロサッカロースが得られた。例３３−（４−Ｌ−アスパルチル−アミノ）−アロサッカロースのグリコシド結合の加水分解による分離酸性加水分解により、３−（４−Ｌ−アスパルチル−アミノ）−アロサッカロースから３−（４−Ｌ−アスパルチル−アミノ）−アロースを得た。このために３−（４−Ｌ−アスパルチル−アミノ）−アロサッカロース１５０ｍｇに塩酸５ｍｌ（０．５Ｎ）を加えて１０分で６０℃に加熱した。引き続き反応溶液をすぐに２０℃に冷却し、水酸化ナトリウム溶液で中和した。反応混合物から生成物の分離をＣａ²⁺形のカチオン交換体での分取液体クロマトグラフィーを用いて（溶離剤：Ｈ₂Ｏ、７０℃）行った。３−（４−Ｌ−アスパルチル−アミノ）アロースが使用された３−（４− Ｌ−アスパルチル−アミノ）アロサッカロースに対して収率８０％で得られた。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９４年１１月２８日【補正内容】請求の範囲１．一般式Ｉ：［式中、Ｒ¹は水素原子、カルボキシル基またはフェニル基または１〜１０個のＣ原子を有するアルキル基を表し、該基はフェニル基、カルボキシル基、ヒドロキシル基、メルカプト基またはアミノ基により置換されていてもよく、その際前記置換基は保護基を有していてもよく、Ｒ²は水素原子、ペプチド化学で常用のアミノ保護基またはペプチド基を表し、Ｒ³は水素原子またはフルクトシル基を表し、ｎは０または１である］で表される３−（アミノアシル−アミノ）サッカリド。２．以下の化合物から選択されるサカリド：３−（４−Ｌ−アスパルチル−アミノ）−３−デソキシ−Ｄ−アロピラノシル−β−Ｄ−フルクトフラノシド３−（Ｌ−アラニル−アミノ）−３−デソキシ− Ｄ−アロピラノシル−β−Ｄ−フルクトフラノシド３−（Ｌ−ロイシル−アミノ）−３−デソキシ−Ｄ−アロピラノシル−β− Ｄ−フルクトフラノシド３−（Ｌ−リシル−アミノ）−３−デソキシ−Ｄ−アロピラノシル−β−Ｄ −フルクトフラノシド３−（Ｌ−フェニルアラニル−アミノ）−３−デソキシ−Ｄ−アロピラノシル−β−Ｄ−フルクトフラノシド３−（４−Ｌ−アスパルチル−アミノ）−３−デソキシ−Ｄ−アロピラノース。３．中間および最終生成物をクロマトグラフィーにより精製する請求の範囲１または２記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ピーチュ，マルティナドイツ連邦共和国Ｄ―47259 ドゥイスブルクヘルマン―シュピレケ―シュトラーセ 33

Claims

【特許請求の範囲】１．一般式Ｉ：［式中、Ｒ¹は水素原子、カルボキシル基またはフェニル基または１〜１０個のＣ原子を有するアルキル基を表し、該基はフェニル基、カルボキシル基、ヒドロキシル基、メルカプト基またはアミノ基により置換されていてもよく、その際前記置換基は保護基を有していてもよく、Ｒ²は水素原子、ペプチド化学で常用のアミノ保護基またはペプチド基を表し、Ｒ³は水素原子またはフルクトシル基を表し、ｎは０または１である］で表される３−（アミノアシル−アミノ）サッカリド。２．以下の化合物から選択されるサカリド：３−（４−Ｌ−アスパルチル−アミノ）−３−デソキシ−Ｄ−アロピラノシル−β−Ｄ−フルクトフラノシド３−（Ｌ−アラニル−アミノ）−３−デソキシ− Ｄ−アロピラノシル−β−Ｄ−フルクトフラノシド３−（Ｌ−ロイシル−アミノ）−３−デソキシ−Ｄ−アロピラノシル−β− Ｄ−フルクトフラノシド３−（Ｌ−リシル−アミノ）−３−デソキシ−Ｄ−アロピラノシル−β−Ｄ −フルクトフラノシド３−（Ｌ−フェニルアラニル−アミノ）−３−デソキシ−Ｄ−アロピラノシル−β−Ｄ−フルクトフラノシド３−（４−Ｌ−アスパルチル−アミノ）−３−デソキシ−Ｄ−アロピラノース。３．３−アミノーアロサッカロースを式ＩＩ：（式中、Ｒ¹、Ｒ²およびｎは前記のものを表し、ｘは活性の基を表す）の相当する保護されたアミノ酸と反応させ、場合によりフルクトシル基および／または存在する保護基を分離し、３−（アミノアシル−アミノ）サッカリドを単離することを特徴とする、請求の範囲１または２記載の物質の製造方法。４．中間および最終生成物をクロマトグラフィーにより精製する請求の範囲３記載の方法。