JPH08510230A - 抗腫瘍剤としてのインシュリン状成長因子▲ｉｉ▼ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は腫瘍の治療のための、とくに黒色腫細胞の成長禁止用及び皮膚黒色腫の治療用の薬剤の製造にＩＧＦ−ＩＩを使用することに関する。薬剤は系統的にまたは局部的に投与され得る。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 抗腫瘍剤としてのインシユリン状成長因子ＩＩ 技術分野 本発明は腫瘍の治療のため、とくに皮膚黒色腫の治療用の薬剤の製造にＩＧＦ −ＩＩを使用することに関する。 技術的背景 イギリスにおける皮膚黒色腫の発生率はおよそ１年につき８０００件で、毎年 増加しており、この病気の治療は通常効果がない。初期の黒色腫は手術で取り除 かれかつ生化学的治療を受けることができるが、これは僅かに成功するのみであ る。最近の研究はインターロイキン−２を基礎にした型式がおよそ２０％部分／ 完全応答率を結果として生じ得ることを示したが散在性の腫瘍を治療するための 新規な治療を開発する必要がある。 毛様体および脈絡膜の黒色腫は成人における最も一般的な初期の眼球内悪性腫 瘍でありそして患者のおよそ半分において致命的である。イギリスにおける発生 率は１年につき７／１００万である。死亡は、初期の治療に続いて１５年以内に 発生し、そしてほとんど独占的に肝臓における転移が事実上すべての腫瘍関連死 亡の原因である。摘出または局部除去の必要をうまく回避することにより視力を 保つことができる技術の開発にも拘わらず、全体の患者の生存は変わらないまま であつた。最も致命的な場合において、腫瘍散在は多分患者が治療に行く前 に発生した。超自然的な転移病の駆除に向けられる定義されない形の治療と結合 される、早期の腫瘍の広がりの認知、または転移を生じる多くの危険での患者の 識別は今までのところではこれらの腫瘍の将来の処理に関する我々の一番の希望 である。 インシユリン状成長因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）は血漿および他の体液中に存在 するペプチドである。それは、３個の二硫化物結合を含む６７のアミノ酸からな りかつその最初のシーケンスはＩＧＦ−１に対して６４％の同族関係を示す。そ れは細胞型の広い範囲の成長を刺激することが可能である。ＩＧＦ−ＩＩはヒト 血漿から精製されかつ完全なアミノ酸シーケンスが知られている。ヒトＩＧＦ− ＩＩに対する広範囲の同族関係を有するシーケンスが他の種の血漿から精製され たＩＧＦ−ＩＩ中に存在する。ＩＧＦ−ＩＩは系統的かつ局部的双方の作用を有 しかつ異なる特別な結合たんぱく質と主として連係すると思われ、その中の６個 が順番に並べられかつＩＧＦＢＰ１，ＩＧＦＢＰ２，ＩＧＦＢＰ３，ＩＧＦＢＰ ４，ＩＧＦＢＰ５およびＩＧＦＢＰ６と呼ばれる。これらは積極的および消極的 方法においてＩＧＦ−ＩＩの生物学的機能および活性を調節すると思われる。Ｉ ＧＦ−ＩＩは主として多くの異なる細胞型中の血漿膜の外方面上に露出されるＩ ＧＦ−型１レセプターとの相互作用により作用すると思われる−しかしながら作 用の相対的な特異性が結合たんぱく質の影響のため認められ得る。ＩＧＦ −ＩＩはまたそれが細胞膜上に同様に認められた別個のかつ関連のない型２へ結 合するので別個の作用を有する。 ＩＧＦ−ＩＩは餓死した動物中の異化状態を実験的に減少しかつＩＧＦ−１の 幾つかの代謝作用を打ち消すことが示された（コイア氏等著、内分泌学、１９９ ２年、第１３０巻、第２４２３頁乃至第２４２５頁）。 インシユリン状成長因子ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩはインシユリンに対す る構造的かつ機能的同族関係を有する細胞分裂促進性ポリペプチドであるように 示された。それらは多数の胎児のおよび未発達の細胞型における差異を支持する ことができかつ幾つかの癌に関して成長パターンはＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−Ｉ Ｉ遺伝子発現を反映するかも知れない。 ハインツ−エリアン氏等著、内分泌学、（１９９１年）第１２９巻、第４号、 第１７６９頁は、細胞分裂促進および成長の規則において両ＩＧＦレセプターの 必須の役割があることを報告する。 ＩＧＦ−ＩＩの大規模大量生産が組み換えＤＮＡ技術を使用することにより現 今では容易に達成され得る。 シヨーフイールドおよびエングストローム氏はインシユリン状成長因子の構造 および生物学的機能、第２４０頁乃至第２５７頁（１９９２年、ＯＵＰ）におい て広範囲のヒト腫瘍によるＩＧＦ−ＩＩの発現に関する論評を掲載している。 ＩＧＦ−ＩＩ腫瘍発現における高度の関心の理由は １）肝外成人組織が通常多量のＩＧＦ−ＩＩを作らないためおよび ２）ＩＧＦ−ＩＩが多数の細胞型の有糸分裂促進物質であるためである。 論理的結論はＩＧＦ−ＩＩが腫瘍成長を開始または促進し得るかまたはし得な い予定外の細胞増殖を発生するように作用するかも知れないということである。 しかしながらデータは系統から系統へ異なり、そして記述的なデータから潜在的 なまたは実際のオート／パラクリン成長を示すことができるけれども、細胞培養 または異種移植片培養に依存して、実験的データは腫瘍成長に関してＩＧＦ−Ｉ Ｉの作用を制限するそれらの潜在率の評価において異なる。 シヨーフイールド氏等（英国雑誌、キヤンサー、第６３巻、第６８７頁乃至第 ６９２頁、１９９１年）は、腫瘍成長についてのＩＧＦ−ＩＩの潜在的な役割を 検査するために、ＩＧＦ−ＩＩｃＤＮＡを含有しかつ発現する組み換えレトロウ イルスを構成しかつこれをクローニングされた腫瘍形成のマウス繊維芽細胞細胞 線に感染させるのに使用した。細胞がヌードマウスに感染させられたときＤＮＡ 構成からＩＧＦ−ＩＩを発現するこれらのクローンは親の、非ＩＧＦ発現細胞線 より非常に長い潜伏期間により腫瘍を起こすことが認められた。公表された実験 の解釈が議論し始められた。実験は見られた反増殖作用がＩＧＦ−１１により直 接取り次がれかつ構成、細 胞線（例えば成長能力におけるクローン間の変化）または実験を実施するために 考案された方法の他の態様によることが可能であることを示さない。 我々の研究は今や、外因性のＩＧＦ−ＩＩ、すなわち治療下の腫瘍に直接付与 されるＩＧＦ−ＩＩが腫瘍成長に関して抑制または遅延作用を有するがＩＧＦ− Ｉがこの作用を持たないことを示した。これは予期しないかつ意外なことであり そして以前に公表された結果により予測されなかつた。ＩＧＦ−ＩＩは細胞増殖 抑制または細胞破壊剤よりむしろ有糸分裂促進物質であるように伝統的に支持さ れる。したがつてこの結果は完全に直観に反している。日付けを記載すべきＩＧ Ｆ−ＩＩの反増殖作用についての従来の報告はなかつた。増殖ついてのペプチド ＩＧＦ−ＩＩの直接作用を示すために、介在方法なしで、直接供給が要求された 。我々はここで、直接または間接メカニズムに関係なく、反増殖作用がペプチド それ自体の作用と矛盾がないことを示している支持データを有するその実験の結 果を報告する。 発明の開示 本発明は腫瘍の治療用の、とくに皮膚黒色腫の治療用のかつ黒色腫細胞の成長 禁止用の薬剤の製造のためのＩＧＦ−ＩＩの使用に関する。 ＩＧＦ−ＩＩは系統的にまたは局部的に投与されかつ局所に付与され得る。 本発明はまたＩＧＦ−ＩＩの投与による腫瘍の治療方 法に関する。 図面の簡単な説明 第１図は腫瘍潜伏の相互接種の作用を示す図である。 第２図は腫瘍潜伏についての外因性ＩＧＦ−ＩＩの作用を示す図である。 使用されたＩＧＦ−ＩＩはカビ・フアーマシアにより製造された。 発明を実施するための最良の形態 例１ 生体外のＩＧＦ−ＩＩの成長禁止作用 ヒト黒色腫細胞線（Ａ３７５）成長についてのＩＧＦ−ＩＩの作用を評価する ために予定された一連の実験において、予備研究において注目されたことはＩＧ Ｆ−ＩＩが成長抑制であつたということである。 ａ）ＩＧＦ−ＩＩは３本の細胞線、すなわちヒト黒色腫細胞線Ａ３７５細胞、 Ａ３７５の生体内通路により引き出された副線、ＮＵＰＲＩおよび後方ぶどう膜 メラニン細胞、Ｍｅ１６６に添加された。細胞線は結成なしの媒体中で微量測定 プレートにおいて成長させられかつＤＮＡ合成が³Ｈ−チミジンにより細胞を拍 動することにより４８時間で評価分析された。広範な一連の実験においてＩＧＦ −ＩＩの１０ｎｇ／ｍｌまたはより大きい濃度が³Ｈ−チミジン摂取により測定 されるような細胞増殖を禁止すべく示された。表１参照。 ｂ）ＩＧＦ−ＩＩの反増殖作用が流動血球計算分析により評価されるような遅 いＳ−相または早いＧ２／Ｍの間中取り次がれた。これらの実験においてＩＧＦ −ＩＩ治療Ａ３７５細胞はミトロマイシンおよび臭化エチジウムにより染色され かつ細胞サイクルの増殖相が分析された。結果は細胞サイクル中のＧ２／Ｍブロ ツクを連想させる。他の３本の黒色腫細胞線（Ａ３７５，ＮＵＰＲＩおよびＭｅ １６６の副クローン）を使用するさらに他の研究において３本の線の２本がまた ＩＧＦ−ＩＩにより成長禁止を受け易かった。Ａ３７５による結果に関して表２ を参照。 我々の結果は皮膚黒色腫細胞線の成長がＩＧＦ−ＩＩにより調節され、そして この作用が多分型２レセプター 結合部位により発生することを示す。 また、ＩＧＦ−ＩＩおよびこの配位子の黒色腫細胞への結合に続いている信号 変換が細胞増殖に鋭気用を及ぼすことが示され、そして明らかにこの知見が潜在 的な治療意義からなる。 例２ 混合された腫瘍中にペプチドを発現するトランス効果 腫瘍細胞成長の抑制が、ＩＧＦ−ＩＩについて期待され得るような、分泌され る徴候により取り次がれたかどうかまたは構成からの発現が細胞のアントノマス 特性に作用していたかどうかの調査。 この例はシヨーフイールド氏等の以前の研究を確認しかつ発現ＩＧＦ−ＩＩの 効果がトランス中にあり（すなわち拡散性因子を通って）そして投与反応に従う ことを示す。 異なる比率において細胞を含有している腫瘍形成および非腫瘍形成構成がヌー ドマウスに注入する前に混合された。腫瘍形成細胞の数は５×１０⁸／移植片に 維持されかつ抑制された細胞が２０×この数まで加えられた。対照実験はこれが 接種材料の大きさに依存様式において抑制された細胞の腫瘍潜伏を減少する一方 非トランスフエクシヨン細胞の潜伏の増加が不釣り合いであることを示した。 一定数の腫瘍形成細胞（５×１０⁸）が第１図に付与された示された比率で等 しいかまたはより大きい数の抑 制された細胞に沿って単一の部位に接種された。Ｂａｌｂ／ｃは親腫瘍形成クロ ーン細胞を意味し Ｂａｌ１２はＩＧＦ−ＩＩ発現細胞を意味し Ｂａｌｂ／ｃ／Ｂａｌ１２はそれらの細胞の混合物を意味する。 Ｂａｌ９はＩＧＦ−ＩＩならば低レベルを発現する細胞を意味し Ｂａｌ９／Ｂａｌ１２はそれらの細胞の混合物を意味し異なる接種材料でのＢａ ｌ１２は対照として使用され、すなわち混合された移植片におけると同一の細胞 の数が各部位に単独で置かれた。 第１図において腫瘍形成細胞が種々の比率において正常な細胞とともに接種さ れたときの潜伏日数が示される。 第１図に示されたデータは増加する抑制されたＩＧＦ−ＩＩ分泌細胞の数が親 細胞線の腫瘍形成を低減可能であることを示す。これはＩＧＦ合成に関連付けら れない代謝禁止相互作用または細胞を支持するＩＧＦ−ＩＩ構成のトランス作用 特性に依存することが可能であつた。Ｂａｌ９細胞線を発現する低いＩＧＦ−Ｉ Ｉの使用はより少ない腫瘍形成移植片が、親Ｂａｌｂ／ｃ線に比較されるとき、 抑制された細胞の非常に低い入力で抑制された細胞により相互に移稙される抑制 効果をより受け易いことを示した。これはトランス効果がＩＧＦ−ＩＩ発現の直 接的なまたは間接的な結果であることを示唆する。 例３ 腫瘍潜伏についての外因性ＩＧＦ−ＩＩの効果 ５×１０⁶の細胞が通常の肩甲骨上の部位でマウスに移植されかつアルゼツト 浸透性小型ポンプが、近くに移植された、燐酸塩緩衝塩水５０μｇ／ｍｌＢＳＡ 、牛血清アルブミン、（ＲＩＡ等級）中に溶解されたＩＧＦ−ＩＩにより負荷さ れた。幾つかの場合において短いカテーテル管がポンプの端部に取着されかつ単 一の縫合を経由してそれを安定化するために下に横たわる筋肉層に取着された。 各場合において移植片へのポンプ出力の方向および近接が、移動が発生しないこ とを保証するために、１２時間後およびその後毎日チエツクされた。７日後ポン プが移植の後部の後ろに小さい切り込みを作ることにより取り除かれかつ腫瘍部 位が２４時間間隔での触診により監視された。腫瘍形成は触診できる塊りが皮膚 の下に感じられ得る２日間の第１日として記録された。切除時これは通常直径約 ２〜４ｍｍの別個の小さい腫瘍塊りからなるように認められた。 Ｂａｌ１２＊は選択的な媒体の不存在において培養中の連続する通路に続いて そのＩＧＦ−ＩＩ構成を自然に失うＢａｌ１２の線である。潜伏期は移植と第１ 触診との間の日数において抑制される。各データ点が５匹の個々のマウスにおけ る腫瘍の平均潜伏期である。グループ内の潜伏期の間の変化は各場合に平均の１ ０％以内であつた。 ５×１０⁶Ｂａｌｂ／ｃ親細胞が日数ゼロで７引きの マウスに接種された。２匹に浸透性小型ポンプ（０．４７μｌ／時間が２１．５ ｎｇＩＧＦ−ＩＩ／時間供給すべく負荷される）が配置され、２匹が４２ｎｇ／ 時間供給するポンプを受容しかつ単一のマウスが８３ｎｇ／時間供給するポンプ を受容した。マウスは毎日の触診および以前に注目されたような第１の腫瘍触診 の時間により監視された。 第２図において腫瘍潜伏期についての外因性ＩＧＦ−ＩＩの効果が一定数の腫 瘍形成細胞（５×１０⁶）が示された比率において等しいまたはより大きな数の 抑制された細胞に沿って単一部位に接種されたときで示される。対照（Ｂａｌ１ ２）として混合された移植片におけると同一数の細胞が各部位に単独で置かれた 。 我々は７日間にわたつて供給されるＩＧＦ−ＩＩの潜伏期の投与傾向を示すこ とができた。高い相関関係（ｒ²＝０．７５３および相関係数０．８６８）によ り増加したＩＧＦ−ＩＩの投与が減少した親細胞線の腫瘍形成を結果として生じ る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 スコットナー ルンディン アンナ スウェーデン国，178 32 エケロ，ロボ バーゲン ３ (72)発明者 ブーラー アーマディプ シンフ イギリス国，シー ビー ２ ３ デー ワイ ケンブリッジ，ドーニング ストリ ート，ユニバーシティー オブ ケンブリ ッジ，デパートメント オブ アナトミー

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．腫瘍治療用薬剤の製造に際してＩＧＦ−ＩＩを使用することを特徴とする 腫瘍治療用薬剤の製造のためのＩＧＦ−ＩＩの使用。 ２．黒色腫細胞の成長禁止用薬剤の製造に使用することを特徴とする請求の範 囲第１項に記載のＩＧＦ−ＩＩの使用。 ３．皮膚黒色腫の治療用薬剤の製造に使用することを特徴とする請求の範囲第 １項または第２項に記載のＩＧＦ−ＩＩの使用。 ４．皮膚黒色腫の治療のための系統的投与用薬剤の製造に使用することを特徴 とするＩＧＦ−ＩＩの使用。 ５．皮膚黒色腫の治療のための局部的投与薬剤の製造に使用することを特徴と するＩＧＦ−ＩＩの使用。 ６．ＩＧＦ−ＩＩの投与による腫瘍の治療方法。