JPH08508163A

JPH08508163A - クローン化ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体

Info

Publication number: JPH08508163A
Application number: JP6521115A
Authority: JP
Inventors: ベイン，マービン・エル; クリネシユミド，ブラツドリイ・ブイ; ストラーダー，キヤサリーン・デイー
Original assignee: メルクエンドカンパニーインコーポレーテッド
Priority date: 1993-03-15
Filing date: 1994-03-10
Publication date: 1996-09-03
Also published as: EP0689547A4; EP0689547A1; CA2158345A1; AU6445394A; AU685789B2; WO1994021660A1

Abstract

(57)【要約】ヒトアドレナリン受容体のα１Ｃサブタイプをクローニングし、ｉｎｖｉｔｒｏアッセイを使用してヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に特異的に結合する化合物をスクリーニングする。該化合物は、良性前立腺肥大の症状を軽減するために有効な化合物を包含する。本発明は、このようなアッセイ、アッセイで使用されるクローン化ヒト受容体、及び他のヒトタンパク質が除去された単離ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体、及び、ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に選択的に結合し、この新規なクローン化受容体の使用によって同定される化合物を包含する。

Description

【発明の詳細な説明】発明の名称クローン化ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体関連出願の引照本出願は、１９９３年３月１５日出願の審査中の米国特許出願第０８／０３２，８４９号の一部継続出願である。発明の背景ｉ．発明の背景本発明は、ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体アンタゴニストとして使用する化合物の効力及び選択性をクローン化ヒトα１受容体を用いて判定する方法に関する。本発明はまた、クローン化受容体自体、本発明方法によって同定された化合物、かかる化合物を単独でまたは他の作用薬との併用によって使用する方法に関する。本発明によって同定された化合物と、テストステロン５-αレダクターゼインヒビターとの併用は、病状軽減、特に良性前立腺過形成（良性前立腺肥大、ＢＰＨとしても知られる）の病状軽減のために特に好ましい。 ii．背景ヒトアドレナリン受容体は、アドレナリンα受容体とアドレナリンβ受容体との２種類に大別される複合的（ｉｎｔｅｇｒａｌ）膜タンパク質である。どちらの種類も、カテコールアミン、ノルエピネフリン及びエピネフリンと結合することによって末梢交感神経系の作用を媒介する。ノルエピネフリンはアドレナリン作動性神経終末によって産生され、エピネフリンは副腎髄質によって産生される。これらの化合物に対するアドレナリン受容体の結合親和性が分類の１つの基礎となる。α受容体は、エピネフリンに対するよりも強力に、また合成化合物イソプロテレノールに対するよりもはるかに強力にノルエピネフリンに結合する。β受容体の場合にはこれらのホルモンとの結合親和性が逆転する。多くの組織中では、平滑筋収縮のようなα受容体の活性化によって誘発される機能性応答と、β受容体の結合によって誘発される応答とが対立している。その後、種々の動物及び組織のソースから得られた受容体の薬理学的キャラクタリゼーションによって、α受容体とβ受容体との機能の差異をより明確に且つ詳細に識別できるようになった。その結果、アドレナリンα受容体及びアドレナリンβ受容体を更に、α１、α２、β１及びβ２というサブタイプに細分した。 α１受容体とα２受容体との機能的な差異が認識され、これらの２種類のサブタイプのどちらかに選択的に結合する化合物が開発された。即ち、ＷＯ９２／００７３では、アドレナリン受容体のα１サブタイプに選択的に結合するテラゾシンのＲ（＋）鏡像異性体の選択的能力が報告された。α２受容体のアゴニスト刺激はエピネフリン及びノルエピネフリンの分泌を阻害し、α２受容体のアンタゴニスト作用は逆にこれらのホルモンの分泌を増進すると考えられるので、上記化合物の α１／α２選択性は重要な意義を有していると開示された。従って、フェノキシベンザミン及びフェントラミンのように、アドレナリンα２受容体に媒介されて血漿カテコールアミン濃度の増加を誘発しこれに伴って生理的続発症（心拍数増加及び平滑筋収縮）を生じさせる非選択性アドレナリンα遮断薬の使用を減らすことができる。アドレナリンα受容体に関する背景情報の概論としては、ＲｏｂｅｒｔＲ. Ｒｕｆｆｏｌｏ，Ｊｒ.，α−Ａｄｒｅｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，（ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＢａｓｉｃａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙシリーズ、Ｋａｒｇｅｒ，１９９１）が注目されており、該文献では、α １／α２下位分類の基礎、分子生物学、シグナル形質導入（Ｇ-タンパク質相互作用、並びに、アドレナリンα受容体の３’-末端から離れていてＧ-タンパク質相互作用及びリガンド結合活性に重要な部位の所在）、アゴニスト構造と活性との関係、受容体機能、及び、アドレナリンα受容体親和性を示す化合物の治療的用途が開示されている。動物組織由来のα受容体サブタイプのクローニング、配列決定及び発現は、α １受容体をα１Ａ（Ｌｏｍａｓｎｅｙら，Ｊ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ.，２６６：６３６５-６３６９（１９９１），ラットα１Ａ；Ｂｒｕｎｏら，ＢＢＲＣ．１７９：１４８５-１４９０（１９９１），ヒトα１Ａ）、α１Ｂ（Ｃｏｔｅｃｃｈｉａら，ＰＮＡＳ，８５；７１５９-７１６３（１９８８），ハムスターα１Ｂ；Ｌｉｂｅｒｔら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９８９），イヌα１Ｂ；Ｒａｍａｒａｏら，Ｊ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ.，２６７：２１９３６−２１９４５（１９９２），ヒトα１Ｂ）の下位分類を可能にし、より最近では、ウシ脳を用いた研究によって新しくα１Ｃサブタイプが提唱されている（Ｓｃｈｗｉｎｎら，Ｊ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ. ，２６５：８１８３−８１８９，１９９０；Ｈｉｒａｓａｗａら、ＢＢＲＣ１９５：９０２-９０９（１９９３）は、ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体のクローニング、機能発現及び組織分布を記載した；Ｈｏｅｈｅら，ＨｕｍａｎＭｏl.Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１（５）：３４９（８／９２）は、アドレナリンα１Ｃ受容体遺伝子中の２対立遺伝子ＰｓｔＩ制限断片多型の存在を指摘した：別の研究はα１Ｄ受容体サブタイプの存在さえも示唆した、Ｐｅｒｅｚら，Ｍｏｌ.Ｐｈａｒｍ.，４０：８７６-８８３，１９９２）。α１受容体サブタイプの各々はそれ自体の薬理学的特異性及び組織特異性を示す。Ｓｃｈｗｉｎｎ及び彼の共同研究者らは、クローン化ウシα１Ｃ受容体が α１Ａサブタイプに属すると考えられていた薬理学的特性を示すことを指摘した。しかしながら、α１Ａサブタイプを発現させる組織中で発現しないこと及びクロロエチルクロニジンに感受性であることに基づいてこの受容体に新しい名称が与えられた。アドレナリンα受容体サブタイプの分類は病態生理学的症状に関連する。良性前立腺肥大ＢＰＨは典型的には年齢５０歳以上の男性の病気であり、その症状は加齢に伴って悪化する。この病気の症状としては排尿困難及び性的機能不全があるがこれだけではない。これらの症状は前立腺の腫脹または肥大によって誘発される。前立腺の寸法増大に伴って男性尿道を通る流体の自由な流れに妨害が生じる。同時に、腫脹した前立腺のノルアドレナリン神経支配が増し、膀胱頚部及び尿道のアドレナリン緊張が増し、尿道を通る尿流が更に制流される。前立腺肥大のメカニズムは十分に理解されている。男性ホルモンである５α- ジヒドロテストステロンが主因であると同定されている。男性の生涯を通じて、男性精巣による５α-ジヒドロテストステロンの連続的産生が前立腺を次第に増殖させる。多くの男性では、ほぼ５０歳を過ぎると、この腫脹した前立腺が上記に指摘したような病理症状によって尿道を閉塞し始める。上記に要約したようなメカニズムの解明の結果として最近では、ＢＰＨの悪化を抑制し多くの場合には逆転するために有効な作用薬が開発されている。これらの作用薬の中心的存在がＭｅｒｃｋ＆Ｃｏ.，Ｉｎｃ.の製品ＰＲＯＳＣＡＲ（登録商標）（フィナステリド）である。この化合物は、テストステロンを５α -ジヒドロテストステロンに変換する酵素であるテストステロン５−αレダクターゼを阻害する作用を有しており、その結果として、前立腺腫脹が抑制され、しばしば前立腺腫瘤が縮小する。ＰＲＯＳＣＡＲ（登録商標）のような作用薬の開発はＰＢＨの長期間抑制に対しては好ましい展開である。しかしながら、この病気が長期間にわたって進行することからも判るように、その回復も直ぐには生じない。ＢＰＨに罹患した男性患者は当分の間は苦しみが続き、実際、作用薬が十分な即効性を発揮するという望みを失いそうになる。この問題に応じた１つの解決方法は、即効性の症状軽減を与えることによって徐効性の治療薬を補完する医薬的に活性の化合物を同定することである。アドレナリンα１受容体に結合して尿道平滑筋の緩和を誘発し、これによって病気のために高められたアドレナリン緊張を減少させる作用薬がこの活性の有望な候補となるであろう。このような作用薬の１つが、前立腺肥大の場合に排尿を誘発するための、欧州特許ＥＰ０２０４５９７に報告されたアルフゾシンである。同様に、国際特許ＷＯ９２／００７３には、アドレナリン受容体のα１サブタイプに結合するテラゾシンのＲ（＋）鏡像異性体の選択的能力が報告されている。更に、参照によってその記載内容が本明細書に含まれる国際特許ＷＯ９２／１６１２１３には、５-α-レダクターゼ阻害化合物とアドレナリンα１受容体遮断薬（テラゾシン、ドキサゾシン、プラゾシン、ブナゾシン、インドラミン、アルフゾシン）との併用が開示されている。しかしながら、これらの化合物のα１Ａ、α１Ｂまたはα１Ｃサブタイプ特異性に関しては、これらの精製物がまだ入手不可能なので情報が全くない。本発明は、クローン化ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体及びヒトα１Ｃ受容体に結合する化合物の同定方法を提供することによってこの状況を打開する。典型的には、アドレナリン受容体に富むことが判っている動物組織を使用することによって活性化合物を同定する。このため、潜在的なアドレナリン受容体アンタゴニストをスクリーニングするためにネズミ組織を使用した。しかしながら、種変異性のため、動物組織中で活性に見える化合物がヒトにおいては活性でなかったり十分に選択性でなかったりすることもあり得る。この結果、特に多量化合物のスクリーニングプログラムを使用したときには、かなりの時間及び労力の浪費となる。また、ヒトにおいては極めて有効な化合物を異種動物受容体に対しては十分な親和性をもたないという理由で見逃してしまう危険もある。これに関連して、１つの種においても生物活性タンパク質の配列中の唯１つのアミノ酸変異が実質的な薬理学的差異を生じることが指摘された。例えば、Ｆｏｎｇら（Ｊ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ.，２６７：２５６６８-２５６７１，１９９２）は、ヒトニューロキニン-１受容体の配列と相同ラット受容体との間には２２のアミノ酸残基の違いが存在することを指摘した。彼らは更に、突然変異受容体の研究中に、ヒト受容体中でラット受容体のアンタゴニスト結合親和性を再現するために、２つのアミノ酸残基の置換だけで必要かつ十分であることを証明した。Ｏｋｓｅｎｂｅｒｇら（Ｎａｔｕｒｅ，３６０：１６１−１６３，１９９２）は、ヒト及び齧歯類の５-ヒドロキシトリプトアミン受容体間の主要な薬理学的差異を与えるのが１つのアミノ酸の変異であることを示した。同様に、Ｋｕｈｓｅら（Ｎｅｕｒｏｎ，５：８６７-８７３，１９９０）は、１つのアミノ酸の交換が、新生ラットのグリシン受容体サブユニットの薬理学的特性を変化させることを示した。上記のように予測が極めて難しく不可能でさえあるため、ヒトにおいて活性の化合物を同定するための化合物スクリーンが要望されていた。本発明者らは、ヒトアドレナリン受容体の新規なα１Ｃサブタイプをクローニングすることによってこれらの問題を解決した。本発明者らは、その努力の結果として、ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体と特異的に相互作用する化合物を同定し得る新規なスクリーニングアッセイの開発に到達した。Ｍａｒｓｈａｌｌら（Ｂｒ.Ｊ.Ｐｈａｒｍ .，１０７：３２７（１９９２））は、アドレナリンα１Ｃ受容体と特異的に相互作用する化合物がヒト前立腺の収縮の原因であろうと推測した。本発明は、ヒトα１Ｃ受容体と結合する化合物の同定方法を提供する。更に、化合物と他のヒトα１受容体サブタイプとの結合について試験し、また、化合物を他の受容体タイプに対してカウンタースクリーニングすることによって、化合物がヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に対する特異性を有するか否かを判断し得る。本発明によって同定された化合物はＢＰＨの急性症状を軽減するために使用し得る。本発明方法で同定された新規な作用薬または本発明のアッセイで活性を示す既知の作用薬は、この病気の急性症状と闘うＢＰＨ患者を助けるために新規な方法で使用され得る。従って本発明は、単独で使用し得るかまたはＰＲＯＳＣＡＲ（登録商標）のようなより持続性の抗ＢＰＨ治療薬との併用によって使用し得る化合物を同定するために有用である。本発明の他の用途としては、高度に組織特異性の局在アドレナリンα１Ｃ受容体の遮断を誘発する化合物の同定がある。この遮断の効果は、眼内圧低下、心臓不整脈の制御であり、また、α１Ｃ受容体に媒介される多数の中枢神経系事象である。更に、クローン化α１Ｃ受容体は、アドレナリンα１Ｃ受容体の組織特異的発現をスクリーニングするために使用され得る。アドレナリンα１Ｃ受容体によって誘発されるかまたはこれによる分析に使用され得る同様の効果も本発明の一部を形成している。発明の概要ヒトアドレナリン受容体のα１Ｃサブタイプをクローニングし、ｉｎｖｉｔｒｏアッセイで使用して該受容体に結合する化合物をスクリーニングする。該化合物は、該受容体の活性を特異的に阻害する化合物も包含する。本発明は、このようなアッセイ、該アッセイに使用されるクローン化受容体（ｃＤＮＡ）、単離されたヒトアドレナリンα１Ｃ受容体、クローン化受容体を発現する細胞、及び、この新規なクローン化受容体の使用によって同定された化合物、即ちヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に選択的に結合する化合物、例えば受容体の特異的アンタゴニストを包含する。本発明の１つの実施態様によれば、ヒトα１Ａまたはヒト α１Ｂ受容体に対する親和性の１２倍以上の親和性をヒトα１Ｃ受容体に対して有している化合物を使用して良性前立腺肥大（ＢＰＨ）を治療する方法が提供される。図面の簡単な説明図１は、ＰＣＲによって得られたヒト心臓ｍＲＮＡのｃＤＮＡの、配列番号４で示す配列である。図２は、ヒト心臓から得られた読取り枠の配列番号５で示す配列とウシアドレナリンα１Ｃ受容体の配列番号６で示す配列との比較である。図３は、図１の心臓ｍＲＮＡに由来の配列を用いたヒト海馬ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングによって得られたｃＤＮＡの、配列番号７で示す配列である。図４は、オリゴヌクレオチドを用いたヒトゲノムＤＮＡライブラリーのＰＣＲ増幅によって得られたヒトα１Ｃ遺伝子の３’コーディング領域の、配列番号１０で示す配列である。図５は、図３及び図４で示したヒトα１ＣのＤＮＡの結合部分の、配列番号１１で示す配列である。図６は、ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の、配列番号１２で示すアミノ酸配列である。図７は、５’非翻訳領域を示すヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の、配列番号１１で示すヌクレオチド配列と配列番号１２で示すアミノ酸配列との位置合わせである。図８は、ＣＯＳ細胞中のヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の発現を示す。発現ベクター単独をトランスフェクトした細胞及びヒトアドレナリンα１Ｃ受容体コーディング配列を含む発現ベクターをトランスフェクトした細胞から夫々得られた膜を用いた結合データを示す。図９は、発現ベクターを含むヒトアドレナリンα１Ｃ受容体でトランスフェクトしたＣＯＳ細胞から得られた膜を用いた化合物の結合曲線を示す。図１０は、ヒトα１Ａ受容体の、配列番号１３で示すヌクレオチド配列である。図１１は、ヒトアドレナリンα１Ａ受容体の、配列番号１４で示すアミノ酸配列である。図１２は、ヒトアドレナリンα１Ｂ受容体の、配列番号１７で示す部分配列である。図１３は、ヒトアドレナリンα１Ｂ受容体の、配列番号２０で示す部分配列である。図１４は、ヒトアドレナリンα１Ｂ受容体の、配列番号２３で示す部分配列である。図１５は、配列番号２４で示すヒト／ラットα１Ｂの複合アドレノレセプターである。図１６は、複合ヒト／ラットα１Ｂアドレナリン作動性受容体の、配列番号２５で示すアミノ酸配列である。図１７は、ヒトアドレナリンα１Ａ、１Ｂ及び１Ｃ受容体の発現ベクターによってトランスフェクトされたＣＯＳ細胞から得られた膜を用いた化合物の結合曲線である。図１８は、頭部欠失したヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の、配列番号２６で示す配列である。図１９は、ＰｓｔＩ部位を有するヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の、配列番号２７で示すヌクレオチド配列である。図２０は、ＰｓｔＩ部位をコードする対立遺伝子によってコードされたヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の、配列番号２８で示すアミノ酸配列である。図２１は、図１９の配列番号２７のヌクレオチド配列と図２０の配列番号２８のアミノ酸配列との位置合わせである。図２２は、ヒトアドレナリンα１Ａ受容体の、配列番号２９で示すヌクレオチド配列である。図２３は、ヒトアドレナリンα１Ａ受容体の、配列番号３０で示すアミノ酸配列である。図２４は、図２２の配列番号２９のヌクレオチド配列と図２３の配列番号３０のアミノ酸配列との位置合わせである。発明の詳細な説明本発明者らは、ヒトアドレナリンα受容体の１-Ｃサブタイプを同定し、クローニングし、発現させた。この受容体の部分的コーディング領域を、逆転写酵素 -複製連鎖反応技術ＲＴ-ＰＣＲによって作製した。即ち、全部のα１受容体の３つのサブタイプ（Ａ、Ｂ、Ｃ）５番目及び６番目のトランスメンブランドメインに保存されているアミノ酸をコードする縮重オリゴヌクレオチドを用いて、ヒト心臓ｍＲＮＡを鋳型として用いるＲＴ-ＰＣＲ反応をプライムした。予想サイズの産物をクローニングし配列決定した。増幅されたｃＤＮＡの翻訳は、ウシα１Ｃ受容体（図２の配列番号５及び６）に９５％相同のタンパク質をコードする読取り枠を生じた。この部分配列を使用して、ヒト海馬ライブラリーからより大きいｃＤＮＡクローン（図３、配列番号６）を作製した。ウシα１Ｃ受容体のｃＤＮＡ配列と６個の最終アミノ酸とに基づくプライマーを用いたヒトゲノムＤＮＡのＰＣＲ増幅によって、残りのコーディング配列が得られた（図４、配列番号１０）。次に、図３の配列番号６及び図４の配列番号１０に示す部分配列を用いて完全受容体を組立て、図５の配列番号１１の配列を作製した。この配列の翻訳を図６の配列番号１２の配列に示す。ヌクレオチド配列とアミノ酸配列との位置合わせ及び５’-非翻訳配列を、図７の配列番号１１及び配列番号１２に示す。予め得られた配列番号１０のクローンの放射性標識３’-末端の５１２個のヌクレオチドでヒトゲノムライブラリーをスクリーニングすることによって、ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の３’-末端の６個のアミノ酸を確認した。この方法で完全なヒトエキソン２を作製し、配列決定した。この遺伝子のヌクレオチド配列を図１９の配列番号２７で示し、アミノ酸配列を図２０の配列番号２８で示す。出願人らは、このクローンが、以下の事項を除いて遺伝子の出発３’-末端部分に等しいことを知見した。（１）新しいクローンと予め得られたクローンとの間に５個の不活性（ｓｉｌｅｎｔ）ヌクレオチド変異が存在する（終止コドンを含む５個の最終コドンの各々が第３ヌクレオチド中に不活性変異を有する）、及び、（２）ヌクレオチド１６３６位（アミノ酸３４７）に、シトシンからチミンへの塩基変異があり、その結果として、この位置にＰｓｔＩ部位が形成され、付随的に１つのアミノ酸がＡｒｇからＣｙｓに変異する。従って、Ｈｏｅｈｅら〔ＨｕｍａｎＭｏｌ.Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１（５）：３４９（８／９２）〕によって指摘されていた２対立遺伝子ＰｓｔＩ制限断片多型（ＲＦＬＰ）の部位の存在及びその位置が確認された。双方の対立遺伝子のクローンを用いた薬理学的試験によって、ＡｒｇからＣｙｓへの変異は薬理学的に識別できないことを確認した（表II、実施例１１、後出）。クローン化ヒトα１Ｃ受容体は哺乳類細胞系（図８参照）中で発現されたとき、受容体に結合しその機能を変更するリガンドを発見するために使用される。更に、クローン化α１Ｃ受容体は、ＲＮアーゼ保護アッセイによって、大動脈及び前立腺などのヒト組織中のｍＲＮＡレベルを定量し得る。これらの目的のために、受容体の完全コーディング配列が提供される。しかしながら、受容体のリガンド結合及びシグナル形質導入セグメント（Ｇ-タンパク質相互作用）がインタクトである限り、配列の３’-末端の頭部欠失は受容体の機能に影響を与えない。従って、配列番号１１で与えられた配列に加えて、配列番号２６で示される３’端の頭部欠失した配列が開示されており、これは完全にヒトα１Ｃ配列から構成されている。 α１Ｃ受容体に対して親和性を示す化合物の結合特異性は、クローン化α１Ｃ受容体でトランスフェクトしたＣＯＳ細胞から得られた膜に対する親和性と、別のタイプのアドレナリンαまたはβ受容体を発現することが判っている組織から得られた膜に対する親和性とを比較することによって証明される。このためには更に、クローン化ヒトα１Ａ及びハイブリッドヒト／ラットα１Ｂ（細胞質カルボキシ末端領域だけがラット配列）をＣＯＳ細胞中で発現されたヒトα１Ｃ受容体と共に使用し得る。クローン化ヒトα１Ａ、α１Ｂ及びα１Ｃ受容体を発現させ、これらの結合特性を既知の選択性アンタゴニストと比較する方法は、化合物を選択し予測可能な薬理学的活性を有する新規な化合物を発見するための合理的な方法である。ひとたびヒト受容体をクローニングしＣＯＳ細胞またはＣＨＯ細胞のような細胞中で発現させると、受容体から他のヒトタンパク質が除去される。次に、膜関連受容体結合アッセイのために当業界で周知の方法によって、ヒトアドレナリンα受容体の種々のサブタイプを発現する細胞から膜を単離する。例えば、Ｓｃｈｗｉｎｎら（Ｊ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ.２６５：８１８３-８１８９，１９９０）の方法を使用し得る。問題の化合物を使用して、既知の定量可能なα受容体リガンドと競合的に結合させる。例えば、放射性標識したプラゾシン、ニグルジピン、５-メチルウラピジル、テラゾシン、ドキサゾシン、フェノキシベンザミン、ＷＢ４１０１、ベノキサチアン、ＨＥＡＴ（２-〔β-（４- ヒドロキシ-３-ヨードフェニル）エチルアミノメチル〕テトラロンまたはフェントラミンをこのために使用し得る（例えば、ＲｏｂｅｒｔＲ.Ｒｕｆｆｏｌｏ，Ｊｒ.，α-Ａｄｏｒｅｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，（ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＢａｓｉｃａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｓｅｒｉｅｓ，Ｋａｒｇｅｒ，１９９１），２９頁参照）。¹² ⁵ ヨウ素検出が容易なので、このためには¹²⁵Ｉ-ＨＥＡＴが好ましい。標識されない試験化合物の量が増加すると、競合によって標識化合物が受容体から排除される。これらの実験から、各試験化合物及び受容体サブタイプのＩＣ₅₀値を決定する。従って、本発明によれば、以下の段階を含むヒトα１Ｃ受容体に特異的な化合物の同定方法が提供される。ａ．ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体をクローニングする、ｂ．クローン化アドレナリンα１Ｃ受容体を発現ベクターにスプライシングし、原核細胞または真核細胞に構築物を導入したときに受容体の発現が誘発されるべく十分な転写及び翻訳シグナルにα１Ｃ受容体が操作可能に結合された構築物を作製し、ｃ．導入される上記構築物の非存在下ではヒトアドレナリンα１Ｃ受容体を発現しない原核細胞または真核細胞に上記構築物を導入し、ｄ．段階ｃ．で産生された細胞から単離した細胞または膜を、ヒトアドレナリン α受容体に結合することがわかっている、定量可能化合物と共にインキュベートし、次いで定量可能化合物を競合によって受容体から排除するためにある濃度範囲で試験化合物を添加し、定量可能化合物の５０％が受容体から排除されたときの試験化合物の濃度を試験化合物のＩＣ₅₀として測定し、ｅ．段階ｄ．のインキュベーション条件と同じ条件下で、ヒトα１Ｃ受容体以外の導入されたクローン化ヒトアドレナリンα受容体のサブタイプを天然に発現するかまたは有している細胞または細胞の膜をインキュベートし、非α１Ｃ受容体に対する試験化合物のＩＣ₅₀を測定し、ｆ．α１Ｃ受容体に対する試験化合物のＩＣ₅₀とα１Ｃ以外のアドレナリンα受容体のサブタイプに対する試験化合物のＩＣ₅₀とを比較し、α１Ｃ受容体に対するＩＣ₅₀が低いほうの化合物を同定する。ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の配列を提供することに加えて、本発明者らはまた、Ｂｒｕｎｏら〔ＢＢＲＣ１７９：１４８５-１４９０（１９９１）〕によって報告された配列とは異なるヒトアドレナリンα１Ａ受容体の配列を発見した。新しい配列はラットアドレナリンα１Ａ受容体の配列により高い相同を示している。この新規なヒトアドレナリンα１Ａ受容体の配列が本発明で開示され、請求の範囲に記載されている（実施例１２、図２２、２３、２４、配列番号２９及び３０参照）。これらの２つの受容体間のアミノ末端アミノ酸の違いに基づくリガンド結合の違いはこれまで全く観察されなかったが、これらの違いを判定するためには、化合物を双方のクローンでスクリーニングする方法しかない。本発明によって新規なヒト配列が提供されるので、これまでに公表されたヒトアドレナリンα１Ａ受容体配列を用いて本発明方法に従って同定された化合物は、このクローンに対して確認できる。上記に説明し更に下記に例示するクローニング、配列決定、発現及びスクリーニング作業の結果として、多数の化合物について、クローン化ヒトα１Ｃ受容体に高い親和性で特異的に結合する能力を試験した。ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に特異的な化合物、即ち、ヒトα１Ａまたはヒトα１Ｂ受容体に対する親和性の１２倍以上の親和性をヒトα１Ｃに対して有している化合物をこの方法によって同定する。このようにして、Ｓ（＋）ニグルジピン、（Ｓ（＋）-１，４-ジヒドロ-２，６-ジメチル-４-（３-ニトロフェニル）-３，５-ピリジンジカルボン酸３-（４，４-ジフェニル-１-ピペリジニル）-プロピルメチルエステル塩酸塩）、及び、５-メチルウラピジル（５-メチル-６〔〔３-〔４-（２-メトキシフェニル）-１-ピペラジニル〕プロピル〕アミノ〕-１，３-ジメチルウラシル）などの化合物がヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に選択的に結合することが知見された。これらの化合物は、ＢＰＨのように治療を必要とする場合にα１Ｃ受容体に拮抗すべく有効な薬用量で投与され得る。本発明の方法に従ってヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の選択的なアンタゴニストであると同定された化合物は、カウンタースクリーニングによって更に明らかになる。これは、種々の生物機能の媒介を担当する他の受容体を用いて当業界で公知の方法で行われる。ヒトアドレナリンα１受容体の種々のサブタイプ間で選択性であり且つアドレナリンα２受容体、アドレナリンβ受容体、ムスカリン受容体、セロトニン受容体などの他の受容体に低親和性である化合物が特に好ましい。このような非特異的活性の欠如は、本文中に開示された方法と同様に、発現されたクローン化受容体を用いて種々のヒトアドレナリンα１受容体に高親和性の化合物を同定する方法によって確認できる。更に、機能性生物試験を使用して、同定された化合物がアドレナリンα１Ｃ受容体アンタゴニスト作用を有するか否かを確認する。本特許の開示に従って同定された化合物は、潜在する毒性を最小限に抑えてヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の最適な阻害を達成するために、定型的な試験方法によって決定される適正用量で単独使用され得る。更に、ＢＰＨの作用を軽減する他の作用薬を同時投与または順次投与するのが望ましい。即ち、１つの実施態様によれば、本文の開示に従って同定された化合物とヒトテストステロン５-α レダクターゼインヒビターとを投与する。多くのこのような化合物が現在も当業界で周知であり、例えば、ＰＲＯＳＣＡＲ（登録商標）（フィナステリドという名称でも知られる４-アザ-ステロイド、例えば参照によってそれらの記載内容が本明細書に包含される米国特許第４，３７７，５８４号及び第４，７６０，０７１号参照）のような化合物がある。本発明に従って同定された化合物は、ヒト５ -αレダクターゼアイソザイム２に対して選択性を有するので主として前立腺組織中で活性のＰＲＯＳＣＡＲ（登録商標）と、アイソザイム１（特に皮膚から検出される）の阻害に特異的に活性の化合物類との組合わせで併用してもよく、また、双方のアイソザイムに作用する化合物類と併用してもよい。良性前立腺肥大（ＢＰＨ）のようなアンドロジェン過剰症の治療及び／または前立腺癌の予防及び治療、並びに前立腺炎の治療には、ジヒドロテステロンの産生を有意に阻害するように双方のアイソザイムに活性の完全薬（ｄｒｕｇｅｎｔｉｔｙ）を得るのが望ましい。また、尋常性ざ瘡、脂漏症、女性多毛症及びアンドロジェン性脱毛症などの皮膚及び頭皮の症状を治療するためには、双方のアイソザイムに対する二重インヒビターとして活性の完全薬を得るのが望ましい。更に、このような５α-レダクターゼ１及び２に対する二重インヒビターは、５α-レダクターゼ１インヒビターまたはフィナステリド（ＰＲＯＳＣＡＲ（登録商標））のような５α-レダクターゼ２インヒビターと併用でき、本発明に従ってヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の選択的アンタゴニストであると同定された化合物と併用してアンドロジェン過剰症の症状を治療する併用療法に使用できる。５α-レダクターゼアイソザイムの二重インヒビターはまた、カリウムチャンネルオープナー例えばミノキシジルと併用して、男性型禿頭症の治療に使用でき、この組み合わせとヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の選択的アンタゴニストとの併用も本発明の一部を形成する。５α-レダクターゼ１及び２の二重インヒビターとして活性の化合物は、ＷＯ９３／２３４２０，ＥＰ０５７２１６６；ＷＯ９３／２３０５０；ＷＯ９３／２３０３８；ＷＯ９３／２３０４８；ＷＯ９３／２３０４１；ＷＯ９３／２３０４０；ＷＯ９３／２３０３９；ＷＯ９３／２３３７６；ＷＯ９３／２３４１９，ＥＰ０５７２１６５；ＷＯ９３／２３０５１に記載されている。これらの各々の記載内容は本明細書に含まれるものとする。本発明の目的はまた、本発明の新規な治療方法に使用するための適当な外用、経口、全身性及び非経口医薬製剤を提供することである。ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の特異的拮抗作用に使用するための有効成分であることが本発明によって同定された化合物を含有する組成物は、全身性投与に適した慣用の賦形剤中の種々の治療薬剤形で投与できる。例えば、化合物を、錠剤、カプセル剤（各々が定期放出製剤及び持続放出製剤を含む）、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、溶液剤、懸濁液剤、シロップ剤及び乳濁液剤のような経口剤形または注射によって投与し得る。同様に、化合物は、静脈内（注射（ｂｏｌｕｓ）及び注入）、腹腔内、皮下、吸蔵を任意に伴う外用、または筋肉内の形態で投与されてもよい。いずれの形態も製薬業者には周知の形態である。有効ではあるが毒にはならない量の所望化合物をα１Ｃ拮抗薬として使用し得る。生成物の日用薬用量は、１日に成人１人あたり０.０１〜１,０００ｍｇの広い範囲内で変更し得る。経口投与の場合には、要治療患者に対する薬用量を症状に応じて調節できるように、組成物が０.０１、０.０５、０.１、０.５、１.０、２.５、５.０、１０.０、１５.０、２５.０及び５０.０ｍｇの有効成分を含む刻み目付きまたは刻み目なしの錠剤の形態で提供されるのが好ましい。通常は、有効量の薬剤が、１日に体重１ｋｇあたり約０.０００２ｍｇから約５０ｍｇとなる薬用量レベルで投与する。より特定的にはこの範囲は、１日に体重１ｋｇあたり約０.００１ｍｇから７ｍｇである。アドレナリンα１Ｃ受容体及びテストステロン５-αレダクターゼインヒビターを併用するときにはそれらの投与量を所望の効果を得るように調節する。当業者には理解できるであろうが、アドレナリンα１Ｃ受容体インヒビターによる治療を開始してＢＰＨの急性症状を軽減したときには、５-αレダクターゼインヒビターの必要量は少ない。また、これらの種々の作用薬の薬用量を個別に最適化し、いずれかの作用薬を単独使用したときよりも病状を軽減する相乗効果を得るように併用してもよい。本発明の化合物は、１日分の薬用量を１回で投与するか、または１日分の薬用量を２回、３回または４回に分けて投与するのが有利である。更に、本発明の化合物は、適当な鼻腔用賦形剤の外用のように経鼻腔形態で投与してもよく、または当業者に周知の皮膚浸透性皮膚貼付薬の形態を用いて皮膚浸透経路で投与してもよい。皮膚浸透デリバリー系の形態で投与できれば勿論、投薬計画全体にわたって薬剤が断続的でなく連続的に供給されるであろう。尋常性ざ瘡、男性型禿頭症を含むアンドロジェン性脱毛症、脂漏症、女性多毛症、良性前立腺肥大、前立腺炎の治療、前立腺癌の予防及び／または治療のためには、１２倍以上の選択性でアドレナリンα１Ｃ受容体阻害を示す化合物を、４，７β-ジメチル-４-アザ- ５α-コレスタン-３-オンのような５α-レダクターゼ１インヒビターに加えて、治療有効量のフィナステリドのような５α-レダクターゼ２インヒビターと共に、経口、全身性または非経口用の単一医薬製剤の形態にして併用し得る。または、アドレナリンα１Ｃ受容体アンタゴニストと５α-レダクターゼ１または２インヒビターとを、経口、全身性または非経口用の個別の製剤として投与する併用療法も使用できる。また、尋常性ざ瘡、男性型禿頭症を含むアンドロジェン性脱毛症、脂漏症、女性多毛症のような皮膚及び頭皮関連疾患に対しては、本発明の化合物及び５α-レダクターゼ１及び２に対する二重インヒビターを外用投与に適した製剤として調製し得る。例えば、ニグルジピンまたは５-メチルウラピジルとフィナステリドとを経口用もしくは外用の単一製剤として投与してもよく、または、有効な作用薬の各々を別々の製剤、例えば別々の経口用製剤として投与してもよく、または、フィナステリドの経口用製剤と５α-レダクターゼの２つのアイソザイムの二重阻害を示す化合物から成る外用製剤とを併用してもよい。５α-レダクターゼインヒビターの薬用量及び製剤形態に関しては米国特許第４，３７７，５８４号及び第４，７６０，０７１号の記載を参照するとよい。更に、５α-レダクターゼインヒビターは、治療有効量のカリウムチャンネルオープナー、例えば、ミノキシジル、クロマカリン、ピナシジル、Ｓ-トリアジン、チアン-１-オキシド、ベンゾピラン、ピリジノピラン誘導体のクラスから選択された化合物または医薬として許容されるその塩との併用投与が有用であることが知見されたので、本発明の化合物は、男性型禿頭症を含むアンドロジェン性脱毛症を治療するための併用療法にも使用され得る。活性物質を単一の外用製剤として投与してもよく、または各活性物質を個別の製剤として、例えば個別の外用製剤として投与してもよく、または式Ｉの化合物の経口製剤を例えばミノキシジルのような外用製剤と併用してもよい。カルシウムチャンネルオープナーの薬用量及び製剤形態に関しては米国特許第４，５９６，８１２号及び第４，１３９，６１９号並びに１９９２年２月２０日公開のＷＯ９２／０２２２５を参照するとよい。２種類以上の活性物質で併用治療する場合、活性物質が個別の製剤形態であるときは、活性物質を同時に投与してもよく、または時間をずらして夫々を別々に投与してもよい。本発明の化合物を使用する投薬計画は、患者の体型、人種、年齢、体重、性別及び医療条件、治療すべき病気の容態、投与経路、患者の腎機能及び肝機能、使用される特定化合物などを含む種々の要因に従って選択される。標準的な知識をもつ医師及び獣医師は、病気の進行を阻止、抵抗または停止させるために必要な薬剤の有効量を容易に決定し処方し得る。毒性を伴わずに効力を生じる範囲の薬剤の濃度を最も正確に判断するためには、標的部位に対する薬剤の有効性に関する動力学に基づいて投薬計画を作成することが必要である。これは、薬剤の分配、平衡及び除去に関する考察を含む。本発明の方法において、本文中に詳細に記載した化合物は、有効成分を形成でき、典型的には、経口錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤などの所望の投与形態に応じて適宜選択され且つ慣用の製剤作業に矛盾しない適当な医薬用希釈剤、賦形剤または担体（本文中ではまとめて“担体材料”と総称する）と混合して投与される。例えば、錠剤またはカプセル剤の形態で経口投与するためには、有効薬剤成分をエタノール、グリセロール、水などのような医薬として許容される不活性の無毒な経口担体と組み合わせる。更に、希望または必要に応じて、適当な結合剤、潤滑剤、崩壊剤及び着色剤も混合物に混入し得る。適当な結合剤の非限定例としては、澱粉、ゼラチン、グルコースまたはβ-ラクトースのような天然糖、トウモロコシ甘味料、アラビアゴム、トラガカントゴム、アルギン酸ナトリウムのような天然及び合成のゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどがある。これらの剤形で使用される潤滑剤の非限定例は、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどがある。崩壊剤の非限定例としては、澱粉、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどがある。液体はトラガカント、アラビア、メチルセルロースなどの合成及び天然のゴムの適度に香味を付けた懸濁剤または分散剤として形成される。使用され得る他の分散剤はグリセリンなどである。非経口投与のためには、滅菌懸濁液及び溶液が望ましい。静脈内投与が望ましいときには通常は適当な防腐剤を含有する等張性調製物を使用する。活性薬剤成分を含有する外用調製物は、アルコール、アロエベラゲル（ａｌｏｅｖｅｒａｇｅｌ）、アラントイン、グリセリン、ビタミンＡ及びＥ油、鉱油、ＰＰＧ２ミリスチルプロピオネートなどの当業界で周知の種々の担体材料と混合して、例えばアルコール溶液、外用クレンザー、クレンジングクリーム、皮膚用ゲル、皮膚用ローション及びクリーム状またはゲル状シャンプーを形成し得る。例えば、欧州特許ＥＰ０２８５３８２参照。本発明の化合物はまた、小単層小胞、大単層小胞及び多層小胞のようなリポソームデリバリー系の形態で投与され得る。リポソームはコレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンのような種々のリン脂質から形成され得る。本発明の化合物はまた、化合物分子と結合する個別担体としてモノクローナル抗体を使用することによってデリバリーされてもよい。本発明の化合物はまた、標的に到達可能な薬剤担体である可溶性ポリマーと結合されてもよい。このようなポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリル-アミドフェノール、ポリヒドロキシ-エチルアスパルトアミドフェノールまたはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシドポリリシンがある。更に、本発明の化合物は、薬剤の調節放出を行うために有用な生物分解性ポリマーのクラス、例えば、ポリ乳酸、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロ- ピラン、ポリシアノアクリレート及びヒドロゲルの架橋または両性ブロックコポリマーに結合し得る。以下の実施例は本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例の記載に限定されない。実施例１ｐｈα１ＸのＰＣＲ増幅、クローニング及び配列決定ヒトα１Ａ、ラットα１Ｂ及びウシα１Ｃ受容体のアミノ酸ホモロジーに基づいて、受容体の３つのサブタイプ全部をコードするｃＤＮＡを増幅するように縮重オリゴヌクレオチドを設計した。これらのオリゴヌクレオチドを以下に示す。オリゴヌクレオチドＭＹＣ及びＷＬ’を、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＣｅｔｕｓのＲＮＡＰＣＲキットを用いたヒト心臓ｍＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）の逆転写ＰＣＲ増幅のプライマーとして使用した。簡単に説明すると、ランダムオリゴヌクレオチドプライマー（反応１）またはオリゴｄＴプライマー（反応２）を用い、０.５μｇのｍＲＮＡを２０μｌの容量中で逆転写した。反応液１及び２をプールし、以下のＰＣＲ増幅の鋳型として使用した。ＰＣＲ反応：一次反応（５０μｌ）５μｌのＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＣｅｔｕｓの遺伝子増幅キット（ＧｅｎｅＡｍｐＫｉｔ）の１０×緩衝液８μｌの１.２５ｍＭのｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰの各々の原液３μｌの第一ｃＤＮＡ鎖１μｌの２５ピコモルのオリゴＭＹＣ１μｌの２５ピコモルのオリゴＷＬ’ ０.２５μｌの１.２５単位のＡｍｐｌｉｔａｑＤＮＡポリメラーゼ３１.７５μｌの水反応条件；９４℃で１分、４５℃で２分、７２℃で２分のサイクルを４０回。二次反応（１００μｌ）９.５μｌのＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＣｅｔｕｓのＧｅｎｅＡｍｐＫｉｔの１０×の緩衝液１６μｌの１.２５ｍＭのｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰの各々の原液５μｌの第一ｃＤＮＡ鎖２μｌの５０ピコモルのオリゴＭＹＣ２μｌの５０ピコモルのオリゴＷＣ’ ０.５μｌの２.５単位のＡｍｐｌｉｔａｑＤＮＡポリメラーゼ６５μｌの水反応条件；９４℃で１分、４５℃で２分、７２℃で２分のサイクルを４０回。試料規模（Ｐｒｅｐｓｃａｌｅ）の三次反応３×２００μｌ：１９.５μｌの１０×緩衝液３２μｌの１.２５ｍＭのｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰの各々の原液５μｌの二次ＰＣＲ反応液４μｌの１００ピコモルのオリゴＭＹＣ４μｌの１００ピコモルのオリゴＷＣ’ １μｌの５単位のＡｍｐｌｉｔａｑＤＮＡポリメラーゼ１３４.５μｌの水反応条件；９４℃で１分、５０℃で２分、７２℃で２分のサイクルを３０回。ＰＣＲ産物をＱｉａｇｅｎスピンカラムで精製し、制限エンドヌクレアーゼＳｐｅＩ及びＸｂａＩによって消化した。次に、フラグメントをＳｐｅＩ／ＸｂａＩ切断したｐＧＥＭ９Ｚｆ（−）に結合した。結合ミックスを大腸菌ＸＬ-１ブルーの形質転換に使用した。プラスミドＤＮＡを白色形質転換体から単離し、ジデオキシチェーンターミネーション法によって配列決定した。得られた塩基配列を図１の配列番号４で示す。実施例２部分的α１ＣのｃＤＮＡクローンの単離ヒト海馬から単離したｍＲＮＡから調製したｃＤＮＡライブラリー（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を、ｐｈα１Ｘをプローブとして用いたプラークハイブリダイゼーションによってスクリーニングした。以下のハイブリダイゼーション条件を使用した。５×ＳＳＣ（１×ＳＳＣは０.１５Ｍの塩化ナトリウム、０.０１５Ｍのクエン酸ナトリウム）と、５０％ホルムアミドと、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液（１％のＦｉｃｏｌｌ、１％のポリビニルピロリドン、１％のウシ血清アルブミン）と、０.１５ｍｇ／ｍｌのサケ精子ＤＮＡと、を４２℃で一夜ハイブリダイズさせる。フィルターを２×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ中で室温で５分間ずつ３回洗浄し、次いで１×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ中で５０℃で３０分間の洗浄を１回行った。陽性クローンをオートラジオグラフィーによって同定した。ファージミド（Ｐｈａｇｅｍｉｄ）ＤＮＡを陽性プラークから救出し、ジデオキシチェーンターミネーション法によって配列決定した。得られた塩基配列を図３の配列番号７で示す。実施例３ α１Ｃの３’ＣＧのＰＣＲ増幅、クローニング及び配列決定ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体のコーディング領域の３’端を以下の２つのオリゴヌクレオチドを用いてヒトゲノムＤＮＡから増幅した。及び以下の条件を使用した。１０μｌのＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＣｅｔｕｓのＧｅｎｅＡｍｐＫｉｔの１０×緩衝液１６μｌの１.２５ｍＭのｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰの各々の原液６μｌの１μｇのヒトゲノムＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ）２μｌの５０ピコモルのオリゴＳ３Ｃ２μｌの５０ピコモルのオリゴ３’Ｃ０.５μｌの２.５単位のＡｍｐｌｉｔａｑＤＮＡポリメラーゼ６３.５μｌの水反応条件；９４℃で１分、５０℃で２分、７２℃で２分のサイクルを４０回。ＰＣＲ産物をＱｉａｇｅｎスピンカラムで精製し、制限エンドヌクレアーゼＥｃｏＲＩによって消化した。次に、フラグメントをＥｃｏＲＩ切断したｐＧＥＭ３Ｚｆ（−）に結合した。結合ミックスを使用して大腸菌ＸＬ-１ブルーを形質転換した。白色形質転換体からプラスミドＤＮＡを単離し、ジデオキシチェーンターミネーション法で配列決定した。塩基配列を図４の配列番号１０で示す。実施例４ヒトアドレナリンα１ｃ受容体の完全コーディング領域の組立ｃＤＮＡクローン（実施例２及び図３の配列番号７参照）と３’ＣＧ（実施例３及び図４の配列番号１０参照）とを共通ＰｖｕII部位（図３の配列番号７の１５５２-１５５７及び図４の配列番号１０の５９-６４）で結合させることによって、ヒトアドレナリンα１ｃ受容体の完全コーディング領域を組立てた。完全ヌクレオチド配列を図５の配列番号１１で示す。アミノ酸配列を図６の配列番号１２で示す。図７は、５’-非翻訳配列を含むｃＤＮＡの構造を示す。図示された３’の２７個のヌクレオチド（６アミノ酸）が配列の作製に使用されたＰＣＲプライマーの配列である。しかしながら、リガンド結合及びシグナル形質導入の双方に対する受容体の機能は、受容体のカルボキシ末端から遠隔の配列に依存している。完全ヒト配列を図１８の配列番号２６で示す。この配列は３’末端の頭部が欠失している。実施例５クローン化アドレナリンα１Ｃ受容体の発現ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体の完全配列（配列番号１１）を真核細胞発現ベクターｐｃＤＮＡ１-ｎｅｏ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にサブクローニングした。得られたプラスミドをエレクトロポレーションによってＣＯＳ−７細胞にトランスフェクトした。７２時間後に細胞を採取し、発現された受容体タンパク質を含む膜を、Ｓｃｈｗｉｎｎら，Ｊ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ.,２６５：８１８３-８１８９，１９９０に記載されたようにして調製した。α１Ｃ受容体遺伝子を含むベクターをトランスフェクトしたＣＯＳ-７細胞から調製された膜（５-２５μｇ、図８参照）はα１アンタゴニスト〔¹²⁵Ｉ〕-ＨＥＡＴに特異的に結合したが、ベクター単独をトランスフェクトしたＣＯＳ-７細胞から調製された膜はα１アンタゴニスト〔¹²⁵Ｉ〕-ＨＥＡＴに結合しなかった（図８）。これは、アドレナリンα１Ｃ受容体が発現されたことを証明する。結合反応液（総量＝２００μｌ）は、５０ｍＭのＴｒｉｓ-ＨＣｌ，ｐＨ７.４と、５ｍＭのＥＤＴＡと、１５０ｍＭのＮａＣｌと、１００ｐＭの〔¹²⁵Ｉ〕-ＨＥＡＴと、発現プラスミドをトランスフェクトしたＣＯＳ-７細胞から調製された膜とを含んでいた。反応液を振盪しながら室温で１時間インキュベートした。Ｂｒａｎｄｅｌ細胞採取装置によって反応液をＷｈａｔｍａｎＧＦ／Ｃガラス繊維フィルターで濾過した。フィルターを氷冷緩衝液で３回洗浄し、結合した放射能を測定した。１０μＭのプラゾシンの存在下に非特異的結合が測定された。実施例６スクリーニングアッセイ：アドレナリンα１Ｃ受容体結合また、トランスフェクトしたＣＯＳ-７細胞から調製された膜を、ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に結合する化合物を同定するために使用し得る。これらの競合結合反応液（総量＝２００μｌ）は、５０ｍＭのＴｒｉｓ-ＨＣｌ，ｐＨ７.４と、５ｍＭのＥＤＴＡと、１５０ｍＭのＮａＣｌと、１００ｐＭの〔¹²⁵Ｉ〕-ＨＥＡＴと、α１Ｃ発現プラスミドをトランスフェクトしたＣＯＳ-７細胞から調製された膜と、漸増量の非標識リガンドとを含む。反応液を振盪しながら室温で１時間インキュベートする。Ｂｒａｎｄｅｌ細胞採取装置によって反応液をＷｈａｔｍａｎＧＦ／Ｃガラス繊維フィルターで濾過した。フィルターを氷冷緩衝液で３回洗浄し、結合した放射能を測定した。結合データを分析し、繰返し曲線調整プログラム（ｉｔｅｒａｔｉｖｅｃｕｒｖｅｆｉｔｔｉｎｇｐｒｏｇｒａｍ）によってＩＣ₅₀を測定した。結果を図９に示す。実施例７ヒトアドレナリンα１Ａ受容体の発現ヒトアドレナリンα１Ａ受容体の完全コーディング領域（Ｂｒｕｎｏら，ＢＢＲＣ. ，１７９：１４８５-１４９０，（１９９１）；図１０の配列番号１３及び図１１の配列番号１４参照）を、真核細胞発現ベクターｐｃＤＮＡ１-ｎｅｏ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にサブクローニングした。得られたプラスミドをエレクトロポレーションによってＣＯＳ-７細胞にトランスフェクトした。７２時間後に細胞を採取し、発現された受容体タンパク質を含む膜を、Ｓｃｈｗｉｎｎら，Ｊ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ. ，２６５：８１８３-８１８９，１９９０に記載されたようにして調製した。α１Ａ受容体遺伝子を含むベクターをトランスフェクトしたＣＯＳ -７細胞から調製された膜はα１アンタゴニスト〔¹²⁵Ｉ〕-ＨＥＡＴに特異的に結合したが、ベクター単独をトランスフェクトしたＣＯＳ-７細胞から調製された膜はα１アンタゴニスト〔¹²⁵Ｉ〕-ＨＥＡＴに結合しなかった。結合反応液（総量＝２００μｌ）は、５０ｍＭのＴｒｉｓ-ＨＣｌ，ｐＨ７.４と、５ｍＭのＥＤＴＡと、１５０ｍＭのＮａＣｌと、１００ｐＭの〔¹²⁵Ｉ〕-ＨＥＡＴと、発現プラスミドをトランスフェクトしたＣＯＳ-７細胞から調製された膜とを含んでいた。反応液を振盪しながら室温で１時間インキュベートした。反応液をＢｒａｎｄｅｌ細胞採取装置によってＷｈａｔｍａｎＧＦ／Ｃガラス繊維フィルターで濾過した。フィルターを氷冷緩衝液で３回洗浄し、結合した放射能を測定した。１０μＭのプラゾシンの存在下に非特異的結合が測定された。実施例８ヒトアドレナリンα１Ｂ受容体の発現１．ヒトアドレナリンα１Ｂ受容体の部分的ｃＤＮＡのＰＣＲ増幅５ＸＢクローンの増幅オリゴヌクレオチド５ＸＢ及びＡ１Ｂを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎコピーキット（ＣｏｐｙＫｉｔ）を用いるヒト心臓ｍＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）の逆転写ＰＣＲ増幅のプライマーとして使用した。簡単に説明すると、オリゴヌクレオチドＷＣ’をプライマーとして用い、２０μｌの容量中で１.０μｇのｍＲＮＡを逆転写した。一次反応（５０μｌ）５μｌのＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＣｅｔｕｓのＧｅｎｅＡｍｐＫｉｔの１０×緩衝液８μｌの１.２５ｍＭのｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰの各々の原液２.５μｌの第一ｃＤＮＡ鎖１μｌの２５ピコモルのオリゴ５ＸＢ１μｌの２５ピコモルのオリゴＡ１Ｂ０.２５μｌの１.２５単位のＡｍｐｌｉｔａｑＤＮＡポリメラーゼ３２.７５μｌの水反応条件；９４℃で１分、５８℃で２分、７２℃で２分のサイクルを４０回。ＰＣＲ産物をｐＣＲベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に直接結合し、大腸菌ＩＮＶαＦ’（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の形質転換に使用した。プラスミドＤＮＡを白色形質転換体から単離し、ジデオキシチェーンターミネーション法によって配列決定した。塩基配列を図１２の配列番号１７で示す。２．ＥＦＫクローンの増幅オリゴヌクレオチドＥＦＫ及び５Ｂ１を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎのコピーキットを用いたヒト大動脈ｍＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）の逆転写ＰＣＲ増幅のプライマーとして使用した。簡単に説明すると、オリゴｄＴをプライマーとして用い、２０μｌの容量中で１.０μｇのｍＲＮＡを逆転写した。一次反応（５０μｌ）５μｌのＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＣｅｔｕｓのＧｅｎｅＡｍｐＫｉｔの１０×緩衝液８μｌの１.２５ｍＭのｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰの各々の原液２.０μｌの第一ｃＤＮＡ鎖１μｌの２５ピコモルのオリゴＥＦＫ１μｌの２５ピコモルのオリゴ５Ｂ１０.２５μｌの１.２５単位のＡｍｐｌｉｔａｑＤＮＡポリメラーゼ３３.２５μｌの水反応条件；９４℃で１分、５８℃で２分、７２℃で２分のサイクルを４０回。ＰＣＲ産物をｐＣＲベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に直接結合し、大腸菌ＩＮＶαＦ’（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の形質転換に使用した。プラスミドＤＮＡを白色形質転換体から単離し、ジデオキシチェーンターミネーション法によって配列決定した。塩基配列を図１３の配列番号２０で示す。３．ヒトアドレナリンα１Ｂ受容体の部分的ｃＤＮＡの組立５ＸＢ配列（配列番号１７）とＥＦＫ配列（配列番号２０）とを共通のＢａｍＨＩ部位で接合することによって、ヒトアドレナリンα１Ｂ受容体をコードする部分的ｃＤＮＡクローンを組立てた。４．ラットアドレナリンα１Ｂ受容体の３’端の増幅オリゴヌクレオチドＳ４Ｂ及び３’Ｂ２を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎのコピーキットを用いるラット心臓ｍＲＮＡの逆転写ＰＣＲ増幅のプライマーとして使用した。簡単に説明すると、オリゴｄＴをプライマーとして用い、２０μｌの容量中で０.６μｇのｍＲＮＡを逆転写した。一次反応（５０μｌ）５μｌのＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＣｅｔｕｓＧｅｎｅＡｍｐＫｉｔの１０ ×緩衝液８μｌの１.２５ｍＭのｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰの各々の原液２.０μｌの第一ｃＤＮＡ鎖１μｌの２５ピコモルのオリゴＥＦＫ１μｌの２５ピコモルのオリゴ５Ｂ１０.２５μｌの１.２５単位のＡｍｐｌｉｔａｑＤＮＡポリメラーゼ３３.２５μｌの水反応条件；９４℃で１分、５８℃で２分、７２℃で２分のサイクルを４０回。ＰＣＲ産物をｐＣＲベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に直接結合し、大腸菌ＩＮＶαＦ’（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の形質転換に使用した。プラスミドＤＮＡを白色形質転換体から単離し、ジデオキシチェーンターミネーション法によって配列決定した。塩基配列を図１４の配列番号２３で示す。５．機能性ヒト／ラットハイブリッドアドレナリンα１Ｂ受容体の組立及び発現ヒトアドレナリンα１Ｂ受容体の部分的ｃＤＮＡを、ラットアドレナリンα１Ｂ受容体のｃＤＮＡの３’端に、共通ＢｓｓＨII制限エンドヌクレアーゼ部位で接合した。この複合配列を図１５の配列２４で示し、アミノ酸配列を図１６の配列２５で示す。ヒト／ラットアドレナリンα１Ｂ受容体の完全コーディング領域を、真核細胞発現ベクターｐｃＤＮＡ１-ｎｅｏ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にサブクローニングした。得られたプラスミドをエレクトロポレーションによってＣＯＳ-７細胞にトランスフェクトした。７２時間後に細胞を採取し、発現された受容体タンパク質を含む膜を、Ｓｃｈｗｉｎｎら,Ｊ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ.，２６５：８１８３ -８１８９，１９９０に記載されたようにして調製した。α１Ｂ受容体遺伝子を含むベクターをトランスフェクトしたＣＯＳ-７細胞から調製された膜はα１アンタゴニスト〔¹²⁵Ｉ〕-ＨＥＡＴに特異的に結合したが、ベクター単独をトランスフェクトしたＣＯＳ-７細胞から調製された膜はα１アンタゴニスト〔¹²⁵Ｉ〕 -ＨＥＡＴに結合しなかった。結合反応液（総量＝２００μｌ）は、５０ｍＭのＴｒｉｓ-ＨＣｌ，ｐＨ７.４と、５ｍＭのＥＤＴＡと、１５０ｍＭのＮａＣｌと、１００ｐＭの〔¹²⁵Ｉ〕-ＨＥＡＴと、発現プラスミドをトランスフェクトしたＣＯＳ-７細胞から調製された膜とを含んでいた。反応液を振盪しながら室温で１時間インキュベートした。反応液をＢｒａｎｄｅｌ細胞採取装置によってＷｈａｔｍａｎＧＦ／Ｃガラス繊維フィルターで濾過した。フィルターを氷冷緩衝液で３回洗浄し、結合した放射能を測定した。１０μＭのプラゾシンの存在下に非特異的結合が測定された。実施例９選択的結合アッセイヒトα１受容体サブタイプ発現ベクターをトランスフェクトしたＣＯＳ-７細胞から調製された膜はまた、ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に選択的に結合する化合物を同定するために使用し得る。これらの競合結合反応液（総量＝２００μ ｌ）は、５０ｍＭのＴｒｉｓ-ＨＣｌ，ｐＨ７.４と、５ｍＭのＥＤＴＡと、１５０ｍＭのＮａＣｌと、１００ｐＭの〔¹²⁵Ｉ〕-ＨＥＡＴと、夫々のα１サブタイプ発現プラスミドをトランスフェクトしたＣＯＳ-７細胞から調製された膜と、漸増量の非標識リガンドとを含む。反応液を振盪しながら室温で１時間インキュベートする。反応液をＢｒａｎｄｅｌ細胞採取装置によってＷｈａｔｍａｎＧＦ／Ｃガラス繊維フィルターで濾過した。フィルターを氷冷緩衝液で３回洗浄し、結合した放射能を測定した。結合データを分析し、繰返し曲線調整プログラムによってＩＣ₅₀ を測定した。この分析の結果を表１に示す。実施例１０ヒトアドレナリンα１-Ｃ受容体の新規な対立遺伝子の同定及びクローニングプローブ３’ＣＧ：単離したｃＤＮＡクローンに基づくセンスプライマーとウシα１ｃのｃＤＮＡの６個の最終アミノ酸に基づくアンチセンスプライマーとを用い、ヒトアドレナリンα１ｃ受容体の完全エキソン２に特異的な５２５ｂｐのフラグメントを、ヒトゲノムＤＮＡからＰＣＲ増幅した。このＰＣＲ産物をサブクローニングし、配列決定によって確認した（実施例３、配列番号１０参照）。ゲノムライブラリースクリーニングラムダＦｉｘIIベクター（２×１０⁶組換え体；Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ）中で合成したヒトＷ１３８線維芽細胞ゲノムライブラリーを（３’ＣＧ）でスクリーニングした。ランダム-プライムした標識キット（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）によってこのプローブを³²Ｐ-ｄＣＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）で標識した。Ｈｙｂｏｎｄ-Ｎナイロンの二重フィルター（Ａｍｅｒｓｈａｍ，ＵＫ）を用いて、合計８００,０００のプラークをスクリーニングした。ハイブリダイゼーションに先立って、フィルターの変性（１.５ＭのＮａＣｌ＋０.５ＭのＮａＯＨ）、中和（１ .５ＭのＮａＣｌ＋１ＭのＴｒｉｓ.Ｃｌ，ｐＨ８.０）及び洗浄（０.２ＭのＴｒｉｓ.Ｃｌ，ｐＨ７.５＋２ＳＳＣ）を各５分間ずつ行った。ＵＶクロスリンカー（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ）によってＤＮＡを架橋させた。次に、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝０.１５ＭのＮａＣｌ、０.０１５Ｍのクエン酸ナトリウム，ｐＨ７.０）と、０.０２％のポリビニルピロリン酸塩と、０.２％のＦｉｃｏｌｌと、０.２％のウシ血清アルブミンと、１５０μｇの裁断し煮沸したサケ精子ＤＮＡと、１０⁶ｃｐｍの³²Ｐ-標識化プローブとの中でフィルターを４２℃で４０時間ハイブリダイズさせた。０.１× ＳＳＣ＋１％ＳＤＳ溶液中でフィルターを６０℃で２０分間洗浄した。２０個の “陽性”プラーク／クローンを３’ＣＧプローブで更に２回スクリーニングして、アドレナリンα１Ｃ受容体の２つのクローンを確認し、これらを夫々４８.１Ｃ及び５３.１Ｃと命名した。クローン５３.１Ｃを更に分析／検査した。エキソン２のサブクローニング５３.１ＣラムダＤＮＡをプレート溶菌法（ｐｌａｔｅｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄ）によって増幅し、Ｑｉａｇｅｎミディ-ラムダキット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）で精製した。ＥｃｏＲＩ制限酵素によって切り出した２.６Ｋｂのバンドを３’ＣＧプローブを用いたサザン分析によって同定した。このフラグメントを次にｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）ベクターにサブクローニングした。ＤＮＡ配列決定Ｓａｎｇｅｒのチェーンターミネーション法によってＤＮＡを両方向でヌクレオチド配列解析した。結果及び考察このゲノムクローンの配列解析から、クローン５３.１ｃは５’-端にイントロンが結合（ｆｌａｎｋ）した完全エキソン２の配列を含むことが確認された。また、ヌクレオチド１６３６位、アミノ酸位置３４７にシトシン（Ｃ）からチミン（Ｔ）へのヌクレオチド変異が存在することも判明した。この変異は、ＰｓｔＩ部位を発生させ、コドンをアルギニン（Ａｒｇ）からシスチン（Ｃｙｓ）に変異させる。このデータは遺伝子の既知／公表ｃＤＮＡ配列とは違っている。ヒトゲノムＤＮＡのサザン分析は、遺伝子／エキソン２中のＰｓｔＩ部位を追認する。実施例１１ α１-ｃ対立遺伝子の比較薬理学ヒトα-１ｃ受容体のために２つの遺伝子をクローニングした。コーディング領域は、単一のヌクレオチドの違いを有している。遺伝子は、受容体のＣ末端の近傍のアミノ酸３４７にＣｙｓまたはＡｒｇをコードしている。ヌクレオチドの違いはＰｓｔＩ制限酵素認識部位の内部に存在し、従って、制限断片長多型（ＲＦＬＰ）が生じる。８３の非近縁個体中で、対立遺伝子１（ＬＰＲ）の頻度は０ .３４、対立遺伝子２（ＬＣＲ）の頻度は０.６６である（Ｈｏｅｈｅら「アドレナリンα１Ｃ受容体遺伝子の２つの対立遺伝子のＰｓｔＩＲＦＬＰ（Ａｔｗｏ -ａｌｌｅｌｅＰｓｔＩＲＦＬＰｆｏｒｔｈｅａｌｐｈａ-１Ｃａｄｒｅｎｅｒｇｉｃｒｅｃｅｐｔｏｒｇｅｎｅ）」，ＨｕｍａｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｅｎｅｔｉｃｓ１：３４９，１９９２；対立遺伝子１は２.１ｋｂのＰｓｔＩフラグメントによって形成され、対立遺伝子２は１.６及び０.５ｋｂの２つのバンドを生じる）。アミノ酸の違いは受容体の細胞内テール内部で生じるので、発現された受容体間の薬理学的差異は予想できない。ヒトアドレナリンα１ｃ受容体の２つの対立遺伝子形態の薬理学的プロフィルを検査するために、対立遺伝子２のゲノムエキソン２のフラグメントを対立遺伝子１のｃＤＮＡクローンに共通ＰｖｕII制限部位で結合した。ｐｃＤＮＡ１／ＮＥＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）発現ベクターを用いて２つの対立遺伝子形態をＣＯＳ-７細胞中で過渡的に発現させた。¹²⁵Ｉ-ＨＥＡＴの存在下に種々のアンタゴニストと共に行った競合的阻害試験は、双方の薬理学的プロフィルに有意な違いがないことをを示した（表II）。実施例１２新規なアドレナリンα１-Ａ受容体のクローニングｄｏｕｂｌｅ-ｃｏｓベクターｓＣｏｓ-１中にＦＧ２９３細胞系ゲノムＤＮＡを含むコスミドライブラリーを以下のごとくスクリーニングした。公表されたヒトα１ａ受容体ｃＤＮＡクローン（Ｂｒｕｎｏら，ＢＢＲＣ，１７９：１４８５ -１４９０（１９９１）及び図１０の配列番号１３参照）を、ベクターｐｃＤＮＡ１ｎｅｏにクローニングして、クローンｐＥＸα１ａを作製した。約２００, ０００個のクローンを含むフイルターを、α１ａ（ＴＭＤ１-３）、α１ｂ（ＴＭＤ１−５）及びα１ｃ（ＴＭＤ１−５）に対応するＰＣＲによって作製された混合エキソン１プローブを用い、コロニーハイブリダイゼーション（〔Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８９〕）によってスクリーニングした。９５℃で１分間、５２℃で３０秒間及び７２℃で１.５分間のサイクルを２５回繰り返した。このスクリーニングでは、１.５μＭの各非標識ｄＮＴＰと５０μＣｉの３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌのα-〔³²Ｐ〕ｄＣＴＰとを含む１２μｌの反応液中で、１０ｎｇのｐＥＸ α１ｂ、ｐＥＸ α１ｃまたはｐＥＸ α１ａと、１０ピコモルの以下の各プライマーとを用いた。プライマーとして、α１ｂには、５’ＭＥＴ（５’ＧＡＡＴＣＣＣＧＡＣＣＴＧＧＡＣ），配列番号３１及び３’ＢＡＭ（５’ＧＧＡＴＣＣＴＣＡＧＧＧＴＣ），配列番号３２を用い、α１ｃには、５’５９７（５’ＣＣＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＴＣＴＣＧＧＧ），配列番号３３及び３’１２１９（５’ＧＡＣＧＣＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣ），配列番号３４を用い、α１ａには、５’７６（５’ＧＴＣＡＴＧＡＴＧＧＣＴＧＧＧＴＡＣＴＴＧ），配列番号３５を用いた。５×ＳＳＣ、３５％ホルムアミド、０.０２％のＳＤＳ、０.１％のラウロイルサルコシン、２％のブロッキング緩衝液（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）中で、フィルターを１×１０⁶ｃｐｍ／ｍｌのプローブと共に４２℃で１８時間インキュベートした。フィルターを、２リットルの０.５×ＳＳＣ、０.１％のＳＤＳで５５℃ で洗浄し、ＫｏｄａｋＸＡＲ-５フィルムに露光した。１２個の陽性一次クローンをマスタープレートから採取し、α１ａ-特異的プローブを用いて再度スクリーニングした。第２ラウンドの陽性クローンからコスミドＤＮＡを調製し、エンドヌクレアーゼＥｃｏＲＩまたはＨｉｎｄIIIによって消化し、サザンブロット分析した。フラグメントを電気泳動によって分離し、サザン法（〔Ｓｏｕｔｈｅｒｎ，１９７５＃１４〕）に従って、２０×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝０.１５Ｍの塩化ナトリウム、０.０１５Ｍのクエン酸ナトリウム，ｐＨ７.０）と共に、ニトロセルロース膜（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）に移した。前記同様にして膜をハイブリダイズさせ、洗浄し、分析した。α１ａ、 α１ｂまたはα１ｃ特異的プローブで行ったゲノムサザンブロットに制限パターンを比較することによって、α１ａ、α１ｂ及びα１ｃ受容体クローンを同定した。α１ａ受容体エキソン１のＤＮＡを含むコスミドをエンドヌクレアーゼＰｓｔＩによって制限消化し、α１ａの特異的プローブを用いて上述のようにサザンブロット分析した。２.３及び１.６ｋｂの２つのフラグメントを検出し、ＰＧＥＭ３ＺＦのＰｓｔＩ部位にサブクローニングした。２.３ｋｂのフラグメント中に正しい５’末端配列が存在することを、逆方向反復配列及び非反復配列間の接合の両側の配列決定によって確認した。α１ａ受容体遺伝子の５’端をｃＤＮＡクローンに共通ＰｓｔＩ部位で結合した。図２２〜図２４の配列番号２９及び３０参照。実施例１３典型的なカウンタースクリーン１．アッセイの名称：ドーパミンＤ２，Ｄ４のｉｎｖｉｔｒｏスクリーンアッセイの目的：このアッセイの目的は、ヒトドーパミン受容体Ｄ２、Ｄ３またはＤ４を発現する細胞への〔３Ｈ〕スピペロンの結合に特異的に影響する作用物質を除去することである。方法：ＶａｎＴｏｌら（１９９１）；Ｎａｔｕｒｅ（Ｖｏｌ３５０）６１０-６１３頁、の方法の修正方法。クローナル細胞系中で安定に発現した特異的ドーパミン受容体サブタイプを含む凍結ペレットを、２ｍｌの溶解緩衝液（１０ｍＭのＴｒｉｓ-ＨＣｌ／５ｍＭのＭｇ，ｐＨ７.４）に溶解する。これらの膜の遠心（２４,４５０ｒｐｍで１５分）後に得られたペレットを、ＥＤＴＡ、ＭｇＣｌ₂、ＫＣｌ、ＮａＣｌ、ＣａＣｌ₂及びアスコルビン酸塩を含む５０ｍＭのＴｒｉｓ-ＨＣｌ，ｐＨ７.４に再懸濁させて、１ｍｇ／ｍｌの懸濁液とする。０.２ｎＭの〔３Ｈ〕-スピペロンを含む総量５００μｌ中で５０〜７５μｇの膜を添加することによってアッセイを開始する。１０μＭのアポモルヒネを用いて非特異的結合を証明する。室温で２時間インキュベーション後、５０ｍＭのＴｒｉｓ- ＨＣｌ，ｐＨ７.４を用い、０.３％ＰＥＩ中に予備浸漬したＧＦ／Ｂフィルターで高速濾過することによってアッセイを終了する。２．アッセイの名称：セロトニン５ＨＴ１ａアッセイの目的：このアッセイの目的は、クローン化ヒト５ＨＴ１ａ受容体への結合に特異的に影響する作用物質を除去することである。方法：Ｓｃｈｅｌｅｇｅｌ＆ＰｅｒｏｕｔｋａのＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ３５：１９４３-１９４９（１９８６）の修正方法。クローン化ヒト５ＨＴ１ａ受容体を発現する哺乳類細胞を、氷冷した５ｍＭのＴｒｉｓ-ＨＣｌ、２ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７.４）に溶解し、ポリトロンホモジナイザーで均質化する。ホモジェネートを１０００×ｇで３０分間遠心し、次に上清を３８,０００×ｇで再度３０分間遠心する。結合アッセイは、５０ｍＭのＴｒｉｓ-ＨＣｌ、４ｍＭのＣａＣｌ₂、１ｍｇ／ｍｌのアスコルビン酸塩中に、０.２５ｎＭの〔３Ｈ〕８-ＯＨ-ＤＰＡＴを含む。１０μＭのプロプラノロールを用いて非特異的結合を証明する。室温で１時間インキュベーション後、ＧＦ／Ｃフィルターで高速濾過してアッセイを終了する。実施例１４典型的な機能アッセイヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に対する化合物の特異性を確認し、化合物の生物活性を証明するために以下の機能試験を実施し得る。１．ｉｎｖｉｔｒｏのラット、イヌ及びヒトの前立腺及びイヌの尿道ＴａｃｏｎｉｃＦａｒｍｓの体重２５０〜４００ｇの雄のスプレーグ・ドーリーネズミを麻酔（メトヘキシタル；５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射）にかけ、頸部脱臼によって殺す。前立腺の腹側葉を摘出するために下腹部を切開する。雑種のイヌから摘出した前立腺の各々を、尿道開口部に沿って縦に６〜８片に分割し、必要ならば使用前に氷冷した酸素添加クレブス溶液に一夜保存する。前立腺に近いイヌの尿道を約５ｍｍの環状に切断し、環状筋肉の収縮性を測定するために環を切り開く。良性前立腺肥大の経尿道手術で得られたヒト前立腺チップも必要ならば氷冷クレブス溶液に一夜保存する。３７℃に加温した酸素添加クレブス溶液〔ＮａＣｌ，１１８ｍＭ；ＫＣｌ，４ .７ｍＭ；ＣａＣｌ₂，２.５ｍＭ；ＫＨ₂ＰＯ₄，１.２ｍＭ；ＭｇＳＯ₄，１.２ｍＭ；ＮａＨＣＯ₃，２.０ｍＭ；デキストロース，１１ｍＭ〕を収容したシャーレに組織を入れる。余剰の脂質材料及び結合組織を丁寧に除去する。組織切片を４ -０の外科用絹糸でガラス組織ホルダーに結び付け、５％ＣＯ₂／９５％Ｏ₂を吹込んだ３７℃のクレブス緩衝液を収容した５ｍｌのジャケット付き組織浴に入れる。組織を、Ｓｔａｔｈａｍ-Ｇｏｕｌｄ力変換器に接続し、１ｇ（ラット、ヒト）または１.５ｇ（イヌ）の張力を作用させ、組織を１時間平衡させる。Ｈｅｗｌｅｔｔ-Ｐａｃｋａｒｄ７７００シリーズのストリップチャートレコーダーで収縮を記録する。３μＭ（ラット用）、１０μＭ（イヌ用）及び２０μＭ（ヒト用）のプライミング用量のフェニレフリンを１回投与した後で、アゴニストに対する累積濃度反応曲線を作成する。１時間後まで組織を１０分おきに洗浄する。浴に基剤またはアンタゴニストを添加し、１時間インキュベートし、次いでアゴニストに対する累積濃度反応曲線を再度作成する。ＧｒａｐｈＰａｄＩｎｐｌｏｔソフトウエアを用いて各グループのＥＣ₅₀値を計算する。３以上の濃度を試験したときはＳｃｈｉｌｄプロットからｐＡ２（-ｌｏｇＫｂ）値が得られた。３未満のアンタゴニスト濃度を試験したときは、式Ｋｂ＝〔Ｂ〕／（ｘ-１）に従ってＫｂ値を算出する。式中、ｘはアンタゴニストの存在下と非存在下とのアゴニストのＥＣ₅₀の比であり、〔Ｂ〕はアンタゴニスト濃度である。２．麻酔したイヌの尿道内圧の測定目的：良性前立腺肥大症は、前立腺質量の増加による前立腺尿道の物理的な受動的閉塞及び前立腺収縮による能動的閉塞の双方によって尿流量の減少を生じさせる。プラゾシン及びテラゾシンのようなアドレナリンα受容体アンタゴニストは、能動的な前立腺収縮を阻止し、尿流量を改善してヒトの症状を軽減する。しかしながら、これらは非選択的α-１受容体アンタゴニストであり、血管に対しても顕著な作用を与える。本発明では、ヒト前立腺の支配的サブタイプとしてα−１Ｃ受容体サブタイプを同定したので、この受容体を特異的標的とすることによって付随的な血管系の変化を生じることなく前立腺収縮を阻害することが可能になった。アドレナリンα受容体の選択的アンタゴニストの効能及び効力を評価するために、以下のモデルを使用して麻酔にかけたイヌの尿道内圧及び動脈圧中のアドレナリン媒介変化を測定する。達成すべき目標は、（１）前立腺／尿道収縮及び血管応答を担当するα-１受容体のサブタイプを同定し、（２）このモデルを使用してアドレナリンα受容体の新しい選択的アンタゴニストを評価することである。この方法で、アドレナリンα受容体の新規なアンタゴニスト及び標準アンタゴニストを評価し得る。方法：この試験では雑種の雄イヌ（７〜１２ｋｇ）を使用する。ペントバルビタールナトリウム（３５ｍｇ／ｋｇの静注と４ｍｇ／ｋｇ／時の静脈内注入を併用）でイヌを麻酔にかける。気管内にチューブを挿入し、Ｈａｒｖａｒｄｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓｐｏｓｉｔｉｖｅｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ大動物換気装置を用いて動物を室内空気で換気する。動脈圧及び薬剤投与量を夫々測定するために、カテーテル（ＰＥ２４０または２６０）を、大腿動脈経由で大動脈及び大腿静脈経由で大静脈に配置する（各血管に各１本つの２本のカテーテル）。ペニスの脇で恥骨上方を１／２インチ以内に切開し、尿管、膀胱及び尿道を露出させる。尿がビーカーに自由に流入するように尿管を結紮しカニューレを挿入する。膀胱のドームを収縮させて尿道の基部及び末端の剥離を容易にする。臍帯を膀胱頸部で尿道の下方に通し、臍帯の他の１片を尿道の末端下方で前立腺末端から約１-２ｃｍに配置する。膀胱を切開し、Ｍｉｌｌａｒマイクロ-チップ圧力変換器を尿道に挿入する。変換器を保持させるために、膀胱の切開部を２-０または３-０の絹糸で縫合する（巾着縫合）。変換器のチップを前立腺尿道に配置し、前立腺を静かに圧迫して尿道圧力の大変化を調べることによってＭｉｌｌａｒカテーテルの位置を確認する。尿道内圧及び動脈圧の変化に関する用量反応曲線を作成するためにアドレナリンα-１アゴニストであるフェニレフリンを投与する（０.１-１００μｇ／ｋｇの静注；０.０５ｍｌ／ｋｇの量）。アドレナリンαアンタゴニスト（または基剤）を漸増量で投与後に、動脈圧及び尿道内圧に対するフェニレフリンの作用を再度測定する。各動物毎に４または５つのフェニレフリン用量反応曲線を作成する（１つが対照、３つまたは４つが異なる用量のアンタゴニストまたは基剤を使用した場合）。フェニレフリンで誘発される動脈圧及び尿道内圧の変化に基づいてアンタゴニストの相対的効力をＳｃｈｉｌ分析によって測定する。平均曲線のグループを、曲線間の勾配、反応最小値、反応最大値を定数に維持する４パラメータ論理演算式で同時に調整する（ＡＬＬＦＩＴソフトウエアパッケージ使用）。アンタゴニスト用量毎の用量比（用量反応曲線の対照から右方向へのシフト）を、夫々の曲線に対するＥＤ₅₀の比として算出する。次に、これらの用量比を用いてＳｃｈｉｌｄプロットを作成し、Ｋｂ（静注量μ ｇ／ｋｇで表す）を測定する。Ｋｂ（フェニレフリンの用量反応曲線の２倍の右方向シフトを生じるアンタゴニスト用量）を用い、尿道内圧及び動脈圧のフェニレフリン応答の阻害に基づいてアンタゴニストの相対的効力を比較する。相対的選択性は動脈圧のＫｂと尿道内圧のＫｂの比として計算される。基底動脈圧に対するα-１アンタゴニストの作用もモニターする。動脈圧の変化及び尿道内圧の変化に対するアンタゴニストの相対的効力の比較から、尿道内圧を上昇させるα受容体サブタイプが全身血管系にも存在するか否かを推測できる。この方法によって、血管系には全く作用しないでフェニレフリンによる尿道内圧の上昇を阻止し得るアドレナリンα１Ｃ受容体アンタゴニストの選択性が確認され得る。実験終了後のイヌは、ペントバルビタールまたは飽和ＫＣｌを静脈内に過剰投与して殺した。【配列表】配列番号:1 配列の長さ:28 配列の型:核酸鎖の数:両方トポロジー:直鎖状配列の種類:cDNA ハイポセティカル:No アンチセンス:No 配列配列番号:2 配列の長さ:26 配列の型:核酸鎖の数:一本鎖トポロジー:直鎖状配列の種類:cDNA ハイポセティカル:No アンチセンス:No 配列配列番号:3 配列の長さ:26 配列の型:核酸鎖の数:一本鎖トポロジー:直鎖状配列の種類:cDNA ハイポセティカル:No アンチセンス:No 配列配列番号:4 配列の長さ:235 配列の型:核酸鎖の数:両方トポロジー:両形態配列の種類:cDNA ハイポセティカル:No アンチセンス:No 配列配列番号:5 配列の長さ:78 配列の型:アミノ酸鎖の数:一本鎖トポロジー:直鎖状配列の種類:ペプチドハイポセティカル:No アンチセンス:No フラグメント型:中間部フラグメント配列配列番号:6 配列の長さ:93 配列の型:アミノ酸鎖の数:一本鎖トポロジー:直鎖状配列の種類:ペプチドハイポセティカル:No アンチセンス:No フラグメント型:中間部フラグメント配列配列番号:7 配列の長さ:1601 配列の型:核酸鎖の数:両方トポロジー:両形態配列の種類:cDNA ハイポセティカル:No アンチセンス:No 配列配列番号:8 配列の長さ:26 配列の型:核酸鎖の数:一本鎖トポロジー:直鎖状配列の種類:cDNA ハイポセティカル:No アンチセンス:No 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【手続補正書】特許法第１８４条の７第１項【提出日】１９９４年８月２９日【補正内容】補正請求の範囲〔１９９４年８月２９日（２９.８.１９９４）国際特許局で受理；請求項７及び１２を補正；新請求項２２-２４を追加；その他の請求項は補正なし（４ページ）〕１．ヒトアドレナリン受容体のα１-ＣサブタイプをコードするＤＮＡから本質的に成るＤＮＡ。２．原核細胞または真核細胞に導入されたときに受容体が発現されるように、受容体をコードするＤＮＡが調節配列に操作可能に結合されていることを特徴とする請求項１に記載のＤＮＡ。３．受容体が、図５の配列番号１１で示される核酸配列、遺伝コードの重複性を介してヒトα１Ｃ受容体をコードするその変異体、または、インタクトなＧ-タンパク質及びリガンドの結合部位を備えた機能性ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体のコードを継続しているその頭部欠失体を有することを特徴とする請求項２に記載のＤＮＡ。４．図５の配列番号１１、図１８の配列番号２６または図１９の配列番号２７の配列を有する請求項３に記載のＤＮＡ。５．当該受容体をコードするクローン化核酸構築物を含む細胞によって発現されるヒトアドレナリンα１Ｃ受容体。６．クローン化ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体を発現する細胞。７．ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に選択的に結合する化合物の同定方法であって、前記化合物は前記アドレナリンα１Ｃ受容体に対して、アドレナリンα１Ｃ受容体以外のヒトアドレナリンα受容体に対する親和性の１２倍を上回る高い親和性を有しており、方法が、ａ．ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体をクローニングする段階と、ｂ．クローン化アドレナリンα１Ｃ受容体を発現ベクターにスプライシングし、原核細胞または真核細胞に当該構築物を導入したときに受容体の発現を誘発するに十分な転写及び翻訳シグナルにα１Ｃ受容体が操作可能に結合された構築物を作製する段階と、ｃ．導入される当該構築物の非存在下ではヒトアドレナリンα１Ｃ受容体を発現しない原核細胞または真核細胞に前記構築物を導入する段階と、ｄ．段階ｃで産生された細胞から単離した細胞または膜を、ヒトアドレナリンα受容体に結合することが知られている定量可能化合物と共にインキュベートし、次いで定量可能化合物を競合によって受容体から排除するためにある濃度範囲で試験化合物を添加し、定量可能化合物の５０％が受容体から排除されたときの試験化合物の濃度を試験化合物のＩＣ₅₀として測定する段階と、ｅ．段階ｄのインキュベーション条件と同じ条件下で、ヒトα１Ｃ受容体以外の導入されたクローン化ヒトアドレナリンα受容体のサブタイプを天然に発現するかまたは有している細胞または細胞の膜をインキュベートし、非α１Ｃ受容体に対する試験化合物のＩＣ₅₀を測定する段階と、ｆ．α１Ｃ受容体に対する試験化合物のＩＣ₅₀と、α１Ｃ以外のアドレナリンα 受容体のサブタイプに対する試験化合物のＩＣ₅₀とを比較し、α１Ｃ受容体に対するＩＣ₅₀が１／１２以下である化合物を同定する段階と、を含むことを特徴とする方法。８．ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に特異的に結合する化合物を医薬として有効な量で投与する良性前立腺肥大の症状を軽減する方法。９．化合物が、Ｓ（＋）-ニグルジピン、（Ｓ（＋）-１，４-ジヒドロ-２，６-ジメチル-４-（３-ニトロフェニル）-３，５-ピリジンジカルボン酸３-（４，４-ジフェニル-１-ピペリジニル）-プロピルメチルエステル塩酸塩）、または、５-メチルウラピジル、５-メチル-６〔〔３-〔４-（２-メトキシフェニル）-１-ピペラジニル〕プロピル〕アミノ〕-１，３-ジメチルウラシルであることを特徴とする請求項８に記載の方法。１０．前記化合物がヒトテストステロン５-αレダクターゼを阻害するのに有効な化合物と共に投与されることを特徴とする請求項８に記載の方法。１１．ヒトテストステロン５-αレダクターゼを阻害するのに有効な化合物が、５-αレダクターゼアイソザイム１のインヒビターであることを特徴とする請求項１０に記載の方法。１２．５-αレダクターゼインヒビターがフィナステリドであることを特徴とする請求項１０に記載の方法。１３．ヒトテストステロン５-αレダクターゼを阻害するのに有効な化合物が、５-αレダクターゼアイソザイム１及びアイソザイム２の二重インヒビターであることを特徴とする請求項１０に記載の方法。１４．フィナステリド及びＳ（＋）-ニグルジピンまたは５- メチルウラピジルを医薬として有効な量で投与する良性前立腺肥大の症状を軽減する方法。１５．ヒトアドレナリン受容体のα１-Ａサブタイプ全体をコードするＤＮＡから本質的に成るＤＮＡ。１６．原核細胞または真核細胞に導入された受容体が発現されるように、受容体をコードするＤＮＡが調節配列に操作可能に結合されていることを特徴とする請求項１５に記載のＤＮＡ。１７．受容体が図２２の配列番号２９で示される核酸配列、遺伝コードの重複性を介してヒトアドレナリンα１Ａ受容体をコードするその変異体、または、インタクトなＧ-タンパク質及びリガンド結合部位を備えた機能性ヒトアドレナリン α１Ａ受容体のコードを継続しているその頭部欠失体を有することを特徴とする請求項１６に記載のＤＮＡ。１８．当該受容体をコードするクローン化核酸構築物を含む細胞によって発現されるヒトアドレナリンα１Ａ受容体。１９．配列番号２９の配列に９５％を上回る相同性を示す配列を有しているクローン化ヒトアドレナリンα１Ａ受容体を発現する細胞。２０．ヒトアドレナリンα１Ａ及びα１Ｂ受容体に比べてヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に対して１２倍以上の特異性を有する化合物を阻害有効量で要治療患者に投与する良性前立腺肥大の治療方法。２１．ヒトアドレナリンα１Ａ及びα１Ｂ受容体に比べてヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に対して１２倍以上の特異性を有する阻害有効量の化合物と、阻害有効量のヒトテストステロン５-αレダクターゼインヒビターとを含む組成物。２２．ヒトα１Ａ及びα１Ｂ受容体に比較してヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に対して１２倍以上の特異性を有する阻害有効量の化合物と、阻害有効量のヒトテストステロン５-αレダクターゼの１型選択インヒビター、２型選択インヒビターまたは１型及び２型の選択インヒビターとを含む組成物。２３．ヒトアドレナリンα１Ａ受容体またはヒトアドレナリンα１Ｂ受容体に対する当該化合物の結合親和性を１２倍よりも大きく上回る結合親和性でヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に結合する治療有効量の化合物を患者に投与する良性前立腺肥大患者の治療方法。２４．前記化合物を、阻害有効量のヒトテストステロン５ -αレダクターゼの１型選択インヒビター、２型選択インヒビターまたは１型及び２型の選択インヒビターと共に投与する請求項２３に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ (72)発明者クリネシユミド，ブラツドリイ・ブイアメリカ合衆国、ペンシルバニア・19403、ジエフアーソンビル、ストニーブルツク・ドライブ・206 (72)発明者ストラーダー，キヤサリーン・デイーアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07044、ベローナ、モーニングサイド・ロード・119

Claims

【特許請求の範囲】１．ヒトアドレナリン受容体のα１-ＣサブタイプをコードするＤＮＡから本質的に成るＤＮＡ。２．原核細胞または真核細胞に導入されたときに受容体が発現されるように、受容体をコードするＤＮＡが調節配列に操作可能に結合されていることを特徴とする請求項１に記載のＤＮＡ。３．受容体が、図５の配列番号１１で示される核酸配列、遺伝コードの重複性を介してヒトα１Ｃ受容体をコードするその変異体、または、インタクトなＧ-タンパク質及びリガンドの結合部位を備えた機能性ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体のコードを継続しているその頭部欠失体を有することを特徴とする請求項２に記載のＤＮＡ。４．図５の配列番号１１、図１８の配列番号２６または図１９の配列番号２７の配列を有する請求項３に記載のＤＮＡ。５．当該受容体をコードするクローン化核酸構築物を含む細胞によって発現されるヒトアドレナリンα１Ｃ受容体。６．クローン化ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体を発現する細胞。７．ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に特異的に結合する化合物の同定方法であって、ａ．ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体をクローニングする段階と、ｂ．クローン化アドレナリンα１Ｃ受容体を発現ベクターにスプライシングし、原核細胞または真核細胞に当該構築物を導入したときに受容体の発現が誘発されるべく十分な転写及び翻訳シグナルにα１Ｃ受容体が操作可能に結合された構築物を作製する段階と、ｃ．導入される当該構築物の非存在下ではヒトアドレナリンα１Ｃ受容体を発現しない原核細胞または真核細胞に前記構築物を導入する段階と、ｄ．段階ｃで産生された細胞から単離した細胞または膜を、ヒトアドレナリンα 受容体に結合することが知られている定量可能化合物と共にインキュベートし、次いで定量可能化合物を競合によって受容体から排除するためにある濃度範囲で試験化合物を添加し、定量可能化合物の５０％が受容体から排除されたときの試験化合物の濃度を試験化合物のＩＣ₅₀として測定する段階と、ｅ．段階ｄのインキュベーション条件と同じ条件下で、ヒトα１Ｃ受容体以外の導入されたクローン化ヒトアドレナリンα受容体のサブタイプを天然に発現するかまたは有している細胞または細胞の膜をインキュベートし、非α１Ｃ受容体に対する試験化合物のＩＣ₅₀を測定する段階と、ｆ．α１Ｃ受容体に対する試験化合物のＩＣ₅₀と、α１Ｃ以外のアドレナリンα 受容体のサブタイプに対する試験化合物のＩＣ₅₀とを比較し、α１Ｃ受容体に対するＩＣ₅₀のほうが低い化合物を同定する段階と、を含むことを特徴とする方法。８．ヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に特異的に結合する化合物を医薬として有効な量で投与する良性前立腺肥大の症状を軽減する方法。９．化合物が、Ｓ（＋）-ニグルジピン、（Ｓ（＋）-１，４-ジヒドロ-２，６- ジメチル-４-（３-ニトロフェニル）-３，５-ピリジンジカルボン酸３-（４，４ -ジフェニル-１-ピペリジニル）-プロピルメチルエステル塩酸塩）、または、５ -メチルウラピジル、５-メチル-６〔〔３-〔４-２-メトキシフェニル）-１-ピペラジニル〕プロピル〕アミノ〕-１，３-ジメチルウラシルであることを特徴とする請求項８に記載の方法。１０．前記化合物がヒトテストステロン５-αレダクターゼを阻害するのに有効な化合物と共に投与されることを特徴とする請求項８に記載の方法。１１．ヒトテストステロン５-αレダクターゼを阻害するのに有効な化合物が、５-αレダクターゼアイソザイム１のインヒビターであることを特徴とする請求項１０に記載の方法。１２．５-αレダクターゼインヒビターがフィナステリドであることを特徴とする請求項１１に記載の方法。１３．ヒトテストステロン５-αレダクターゼを阻害するのに有効な化合物が、５-αレダクターゼアイソザイム１及びアイソザイム２の二重インヒビターであることを特徴とする請求項１０に記載の方法。１４．フィナステリド及びＳ（＋）-ニグルジピンまたは５-メチルウラピジルを医薬として有効な量で投与する良性前立腺肥大の症状を軽減する方法。１５．ヒトアドレナリン受容体のα１-Ａサブタイプ全体をコードするＤＮＡから本質的に成るＤＮＡ。１６．原核細胞または真核細胞に導入された受容体が発現されるように、受容体をコードするＤＮＡが調節配列に操作可能に結合されていることを特徴とする請求項１５に記載のＤＮＡ。１７．受容体が図２２の配列番号２９で示される核酸配列、遺伝コードの重複性を介してヒトアドレナリンα１Ａ受容体をコードするその変異体、または、インタクトなＧ-タンパク質及びリガンド結合部位を備えた機能性ヒトアドレナリン α１Ａ受容体のコードを継続しているその頭部欠失体を有することを特徴とする請求項１６に記載のＤＮＡ。１８．当該受容体をコードするクローン化核酸構築物を含む細胞によって発現されるヒトアドレナリンα１Ａ受容体。１９．配列番号２９の配列に９５％を上回る相同性を示す配列を有しているクローン化ヒトアドレナリンα１Ａ受容体を発現する細胞。２０．ヒトアドレナリンα１Ａ及びα１Ｂ受容体に比べてヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に対して１２倍以上の特異性を有する化合物を阻害有効量で要治療患者に投与する良性前立腺肥大の治療方法。２１．ヒトアドレナリンα１Ａ及びα１Ｂ受容体に比べてヒトアドレナリンα１Ｃ受容体に対して１２倍以上の特異性を有する阻害有効量の化合物と、阻害有効量のヒトテストステロン５-αレダクターゼインヒビターとを含む組成物。