JPH08503452A

JPH08503452A - タキサン類をバッカチン▲ｉｉｉ▼及び１０−デアセチルバッカチン▲ｉｉｉ▼に転化する方法

Info

Publication number: JPH08503452A
Application number: JP6506470A
Authority: JP
Inventors: アール．カーバー，デビッド; アール．プラウト，ティモシー; エイ．エウォルド，ハーニタ; エル．ヘンダーソン，ドニア
Original assignee: ナプロバイオセラピューティクス，インコーポレイテッド
Priority date: 1992-08-14
Filing date: 1993-08-16
Publication date: 1996-04-16
Anticipated expiration: 2014-10-06
Also published as: DK0656000T3; US5256801A; CA2142354C; WO1994004519A1; PT656000E; EP0656000B1; NZ255790A; DE69327789D1; ES2142877T3; ATE189454T1; EP0656000A4; AU5015693A; DE69327789T2; GR3033069T3; KR0177588B1; EP0656000A1; KR950702975A; CA2142354A1; JP2958119B2

Abstract

(57)【要約】Ｃ−１３位置にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物を含む混合物を少なくとも１種の硼水素化物還元性塩と反応溶媒中で接触させることから成る上記式（II）（式中、Ｒ₁＝ＨまたはＲ₁＝COCH₃）の化合物を製造する方法。

Description

【発明の詳細な説明】タキサン類をバッカチンIII及び１０− デアセチルバッカチンIIIに転化する方法本国際出願は米国特許第５，２０２，４４８号及び米国一部継続出願第０７／９８６，８５２号に基づく。発明の分野本発明は部分的に精製されたタキサン（taxane）混合物をバッカチン（baccat in）III又は１０−デアセチルバッカチンIIIに転化する方法に関する。具体的に述べると、本発明はルイス酸の存在下で硼水素化物の還元性塩を使用して１０− デアセチルタキソール、セファロマニン（cephalomannine）、タキソール、その他のタキサン類を関連バッカチン類に転化する方法に関する。発明の背景タキソール（１）はウエスタン・イチイ（Western Yew）（Taxus brevifolia）に見いだされたジテルペノイドである。タキソールは臨床試験で優れた抗癌活性を示した。しかし、タキソールは供給の少ない天然植物から抽出されるものであるので、それについて広範な試験を行うことは困難であった。タキサン類を含有する植物の減少を避けるためにタキソールの全合成が試みられたが、これらの試みはこれまでのところは不成功に終わっている。しかし、バッカチンIII及び１０−デアセチルバッカチンIII等の他の天然産タキサン類からのタキソールの半合成には重要な進歩がなされた。バッカチンIII及び１０−デアセチルバッカチンIIIをタキソールに転化する方法として少なくとも３つの方法が報告されている。バッカチンIII の構造にはＣ−１３位に側鎖がない、Ｒ₁＝COCH₃であるタキソールの基本ジテルペノイド構造がある。１０−デアセチルバッカチンIIIの構造はＣ−１０位がＲ₁ ＝Ｈであることを除けば上記構造と同様である。しかして、その基本ジテルペン構造により、バッカチンIII、及び１０−デアセチルバッカチンIIIのような他の関連バッカチン類はタキソールを半合成する場合の重要な出発原材料である。バッカチンIIIと１０−デアセチルバッカチンIIIの意義はタキソールの抗癌試験が更に行われればそれにつれて高まると予想される。かねてから、僅かに修飾されたＣ−１３側鎖を持つ水溶性のタキソール様化合物が抗癌剤として可溶性が小さい天然産タキソールよりも望ましいと思われている。このことはタキソール及び第二、第三世代のタキソール様化合物を合成する出発原材料としてのバッカチン III及び１０−デアセチルバッカチンIIIについての未解決の需要を増大させるものである。バッカチンIII及び１０−デアセチルバッカチンIIIの現在の供給源はイングリッシュ・イチイ（English Yew）（Taxus baccatta）等の、タキサン類を含有する天然植物からの抽出である。これら原材料の供給するものはバッカチンIIIである。１０−デアセチルタキソール、その他のタキサン類の１０−デアセチルバッカチンIIIへの転化は１０−デアセチルバッカチンIIIの供給を増大させる実行可能な方法である。ミラー（Miller）は、セファロマニンは重炭酸ナトリウムの存在下におけるメタノリシスにより１９％の収率でバッカチンIIIに転化されると報告した。ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Journal of Organic Chemistry）、第４６巻、第１４６９−１４７４頁（１９８４年）を参照されたい。純タキソールからはバッカチンＩＩＩが９７％の収率で合成されることがマグリス（Magr is）等により報告された。ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー、第５１巻、第３２３９−３２４２頁（１９８６年）の“変性タキソール類、３．バッカチンIIIの合成とアシル化”を参照されたい。マグリス等の方法によるバッカチンIIIの合成は次のようにして行われた：乾燥CH₂Cl₂（2.0 mL）中の純タキソール試料１００mgをBu₄NBH₄（５０mg）と１時間反応させ、そしてその反応をA cOH・０．５mLで停止させた。この混合物を１０分間撹拌し、蒸発させ、そして生成物を分取ＴＬＣで単離した。この方法は純タキソールからバッカチンIIIを９７％の収率で与えると報告された。マグリス等の報文は、また、この同じ反応を純タキソールに代えて未精製のタキソール／セファロマニン混合物より成る出発原材料について行うと、バッカチンIIIの収率は低下すると言う結果になることを示した。純タキソールのバッカチンIIIへの高収率での転化は純タキソールを利用できる実験室では極めて有用である。しかし、粗製タキサン混合物（タキソール／セファロマニン、その他のタキサン類を含有）をバッカチンIII及び１０−デアセチルバッカチンIIIに高収率で転化する方法の必要が存在する。イチイ材からのタキソールの商業規模での抽出ではタキソール、１０−デアセチルタキソール及びセファロマニンを含めて有意量のタキサン類が生成する。これらの混合物は（タキソールの精製中に副生成物として捨てられる）有用なタキサン類を含有している。マグリス等の方法は、タキソール、１０−デアセチルタキソール及びセファロマニンを低い割合で含有する部分的に精製された混合物をバッカチンIII及び１０−デアセチルバッカチンIIIに転化させるときに特に高い収率が得られると言う結果は明らかにしていない。タキソールを商業的な使用のために大規模に処理するに当たって、マグリス等の収率を達成することに関連したコストは経済的には実行可能でない。マグリス等の方法では高価な還元性塩である硼水素化テトラブチルアンモニウムが使用される。更に、この方法は０℃の温度で行われるもので、これは最終生成物に冷却コストを付加する。ほとんどのタキサン抽出法は若干のタキソール、１０−デアセチルタキソール、セファロマニンと有意量の他の物質を含有する副生成物をもたらす。従って、限定されるものではないが、タキソール、１０−デアセチルタキソール及び／又はセファロマニンを含めてタキサン類のこれらの部分的に精製された混合物をバッカチンIII及び／又は１０−デアセチルバッカチンIIIに高収率で転化する安価な方法の必要が残っている。発明の概要本発明の１つの目的はタキサン抽出法の部分的に精製された有機副生成物を１０−デアセチルバッカチンIIIに転化することである。本発明の１つの目的はタキサン抽出法の部分的に精製された有機副生成物をバッカチンIIIに転化することである。本発明のもう１つの目的は選択されたタキサン類をバッカチンIIIに転化する方法を提供することである。本発明の更に他の目的はバッカチンIIIを室温で高収率で製造する簡単な方法を提供することである。本発明の更に他の目的は１０−デアセチルバッカチンIIIを室温で製造する簡単な方法を提供することである。本発明の更に他の目的はタキソール、セファロマニン、１０−デアセチルタキソール、その他の物質の部分的に精製された混合物をバッカチンIII又は１０− デアセチルバッカチンIIIに転化する安価な方法を提供することである。この発明は、Ｃ−１３位にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物を含有する混合物を反応溶媒中、ルイス酸の存在下で少なくとも１種の硼水素化物の還元性塩と接触させることによるバッカチンIII及び／又は１０−デアセチルバッカチンIIIの製造法を提供する。バッカチンIIIを得ようとする場合、この混合物がタキソールを１５〜５０重量％含有するならば、好ましい反応溶媒はテトラヒドロフラン（非極性のドナー溶媒）である。この混合物がタキソールを５０重量％含有するとき、好ましい反応溶媒はジクロロメタンである。この混合物が１５重量％未満のタキソールを含有するならば、反応溶媒はグライム（gl yme）、ジグライム（diglyme）、トリグライム（triglyme）又はそれらに代えてＴＨＦの群から選ばれる。好ましいルイス酸は塩化錫（II）又は塩化コバルト（ II）等の金属ハロゲン化物である。この発明は、更に、Ｃ−１３位にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物成分を含有する混合物を溶媒として芳香族炭化水素、好ましくはトルエンを用いて硼水素化物の還元性塩と接触させることによるバッカチンIIIの製造法を提供する。更に、この発明はタキソールとＣ−１３位にエステル結合を有する少なくとも１種の他のタキサン化合物を含有する混合物を反応溶媒中で硼水素化物の還元性塩と接触させることによるバッカチンIIIの製造法であって、上記混合物中のタキソールがバッカチンIIIに転化されない上記の方法を提供する。上記のように、本発明は、Ｃ−１３位にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物を含有する混合物を反応溶媒中、ルイス酸の存在下で少なくとも１種の硼水素化物の還元性塩と接触させることによってバッカチンIIIのみならず１０−デアセチルバッカチンIIIも製造する方法を提供するものである。１０−デアセチルバッカチンIIIを製造するための好ましい反応溶媒はテトラヒドロフラン（非極性のドナー溶媒）である。トリグライムは１０−デアセチルタキソールの約３分の１を１０−デアセチルバッカチンIIIに転化させた。グライムは塩化コバルトの存在下で１０−デアセチルバッカチンIIIを収率２１％で与えた。塩化メチレンは塩化錫の存在下で１０−デアセチルバッカチンIIIを収率２４％でもたらした。好ましいルイス酸は塩化錫（II）又は塩化コバルト（II）等の金属ハロゲン化物である。本発明は、更に、Ｃ−１３位にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物成分を含有する混合物をトリグライム反応溶媒中で硼水素化物の還元性塩と接触させることによる１０−デアセチルバッカチンIIIの製造法を提供する。トリグライムの代わりにCH₃（OCH₂CH₂）_x OCH₃（ただし、ｘは１〜５の整数に等しい）を含めてグライム族の化合物を用いることができるだろう。グライム及びジグライムがトリグライムの場合より少ない材料を１０−デアセチルバッカチン IIIに転化させると予想される。本発明の説明本発明はタキソール、１０−デアセチルタキソール及びセファロマニンを含有するタキサン類の部分的に精製された混合物をバッカチンIII及び１０−デアセチルバッカチンIIIに高収率で転化する方法に関する。マグリス等の報文は、彼等の方法がタキソールとセファロマニンを含有している部分的に精製されたタキサン混合物について実施されたことを報告したが、しかしこの混合物からのバッカチンIIIの収率は“良好”と報告されているだけであった。マグリス等の報文は１０−デアセチルタキソールを含有するタキサン混合物に対してマグリス等の方法を使用するいかなる試みも報告しなかった。従って、本発明を比較する基準として、マグリス等の方法をタキサン類の２つの別個の混合物について実施した。１つの方法はバッカチンIIIを回収すべく実施され、第二の方法は１０−デアセチルバッカチンIIIを回収すべく実施された。バッカチンIIIに関する第一のマグリス等の方法はタキソールを高水準で含有するタキサン類の混合物に対して実施された。この実験においては、マグリス等の方法をタキソール４７％及びセファロマニン１．０％（ＨＰＬＣで定量）を含有する部分的に精製された乾燥タキサン混合物５１mgについて０℃で実施した。この方法は上記材料に対してジクロロメタン中で還元性塩として硼水素化テトラブチルアンモニウムを用いて１時間行われた。この混合物からのバッカチンIIIの収率は６６．０％であった。これは有意な収率である。ただし、この収率は純タキソールからのバッカチンIIIの収率９７％よりは実質的に低い。この６６％と言う収率が、従って、次のバッカチンIIIの例が比較可能な基準となる。１０−デアセチルバッカチンIIIに関するマグリス等の第二の方法は１０−デアセチルタキソールをタキソール、セファロマニン、バッカチンIII及び１０− デアセチルバッカチンIIIと共に含有するタキサン類の混合物に対して実施された。この実験においては、マグリス等の方法をタキソール３．５％、セファロマニン２．３％、１０−デアセチルタキソール１．７３％及び１０−デアセチルバッカチンIII・５．７４％（ＨＰＬＣで定量）を含有する部分的に精製された乾燥タキサン混合物５１mgについて０℃で実施した。この方法はこの材料に対してジクロロメタン中で還元性塩として硼水素化テトラブチルアンモニウムを用いて１６時間行われた。この混合物からの１０−デアセチルバッカチンIIIの収率は −３７５．００％であった。この負の収率は１０−デアセチルタキソール１．２１mgの分解のみならず、出発原材料中の１０−デアセチルバッカチンIII・３mg の分解をも示すものである。これは材料の有意の損失である。この−３７５．００％と言う収率が、従って、次の１０−デアセチルバッカチンIIIの例が比較可能な基準となる。本発明の好ましい態様は若干のタキサン類を含有する混合物を反応溶媒中で化学量論量よりは少なく、かつ化学量論量までの量のルイス酸の存在下で硼水素化物の還元性塩と接触させることを含む。この好ましい方法においては、硼水素化テトラブチルアンモニウムの使用は高コストと結び付くので硼水素化ナトリウムが用いられる。この好ましいルイス酸は金属ハロゲン化物のような化合物である。ルイス酸の使用可能性を調べる試験には２つの段階がある。第一は、ルイス酸は強い求核試薬と共有結合しているべきであること、第二は、ルイス酸は硼水素化物と反応してボラン類を生成させるべきではないことである。塩化マグネシウム（これは強い求核試薬と共有結合するとは思われない）を試験したが、１０− デアセチルバッカチンIII又はバッカチンIIIの収率を向上させなかった。SnCl₂ 及びCoCl₂等のより共有結合性の高いルイス酸はバッカチンIII及び１０−デアセチルバッカチンIIIの収率をマグリス等の方法の基準収率より有意に向上させた。本発明の別の態様で使用される硼水素化物の還元性塩、反応溶媒及びルイス酸のタイプはある種特定の材料を１０−デアセチルバッカチンIIIに転化させると共に、他のタキサン類もバッカチンIIIに転化させる商業的に実行可能な方法をもたらすように選ばれている。本発明の諸方法はタキサン混合物から室温で１０−デアセチルバッカチンIII 及びバッカチンIIIをマグリス等の方法が０℃で生成させる基準より高い割合で生成させる。本発明の方法では、部分的に精製されたタキサン類から形成された出発原材料からのバッカチンIII及び１０−デアセチルバッカチンIIIの収率を向上させるべく色々な反応溶媒と色々なルイス酸が用いられる。バッカチンIIIを製造する本発明の諸態様で使用される反応溶媒は出発原材料中のタキソール水準に基づいて選ばれる。グライム（CH₃OCH₂CH₂OCH₃）はタキソールが１５％未満の出発原材料中で若干良好に働くが、ただしこの範囲ではテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）も有用である。反応溶媒としてのＴＨＦはタキソールの純度が１５％乃至４５〜５０％である出発原材料において好ましい。タキソールの純度が４５〜１００％である出発原材料では、反応溶媒としてのジクロロメタンがバッカチンIIIを大量に生成させる。溶解性の問題はあるけれども、それにもかかわらず反応溶媒としてのトルエンは同じ４５〜１００％のタキソール純度を有する出発原材料でジクロロメタンより実質的に高い収率でバッカチンIII をもたらした。本発明の１番目の態様においては、出発原材料を反応溶媒としてのトルエン及び還元性硼水素化物塩としての硼水素化テトラブチルアンモニウムと混合することによってバッカチンIIIが収率７６．７％で製造された。出発原材料はタキソール４７％、セファロマニン１．０％、その他の物質を含有していた。バッカチンIIIは１週間の反応時間後に０℃において収率７６．７％で転化されたのである。バッカチンIIIのこの収率は、この反応においてトルエンが使用されたことと関連する、予想され、かつ現実となった溶解性問題にもかかわらず実現されたものである。本発明の２番目の態様においては、バッカチンIIIは硼水素化ナトリウムをジクロロメタン中でタキソール１５．０％及びセファロマニン３．２％を含有する出発原材料と０℃で接触させることによって製造された。反応１６時間後にバッカチンIIIはＨＰＬＣ分析で８５．８％の収率で生成した。硼水素化ナトリウムを使用した場合の硼水素化テトラブチルアンモニウムを使用した場合を越える利点は、第一に経費の点である。前者のそれは１グラムにつき約＄０．１１であるが、他方後者のそれは１グラムにつき＄１．００である。マグリス等の文献には純タキソールをバッカチンIIIに転化させるために硼水素化ナトリウムを使用することが記載されるけれども、この硼水素化物の還元性塩はプロパノールと共に使用され、それはＣ−７位に所望とされないエピ化をもたらした。マグリス等はこの硼水素化ナトリウムを断念し、ジクロロメタンとの関連で更に高価な硼水素化テトラブチルアンモニウムを使用して純タキソールからバッカチンIIIを９７％の収率で得たのである。３番目の態様において、ジクロロメタン中の硼水素化テトラブチルアンモニウムに対する１０％（出発原材料中のタキソール基準）の塩化錫の添加は、０℃、１時間でバッカチンIIIを１２１．７％の収率でもたらした。それは正に出発原材料中のセファロマニン及びタキソール以外の材料が開裂してバッカチンIIIを生成させたと思われる。ある種特定のタキソール化合物が糖、その他の生物学的物質に結合し、これらがこの方法においてバッカチンIIIに転化されただろうと推測される。本発明の４番目の好ましい態様においては、バッカチンIIIは反応溶媒としてグライムを使用してタキソール３．５％及びセファロマニン２．３％を含有するタキサン混合物の出発原材料を、塩化コバルトのペレット７％を含有する硼水素化ナトリウム／塩化コバルトペレットと接触させることによって収率７２％で製造された。反応は室温で１４４時間行われた。本発明の５番目の別の態様においては、タキサンの割合が同じである出発原材料を使用するグライム中、塩化錫（０．１％）の存在下における硼水素化ナトリウムとの同様の反応で室温、７２時間後に６６％と言うバッカチンIIIの収率がもたらされた。本発明の６番目の別の態様においては、同じ出発原材料から、ＴＨＦ中、塩化錫（０．１％）（出発原材料中のタキソール含量基準）の存在下において、硼水素化ナトリウムにより７１％と言うバッカチンIIIの収率がもたらされた。７番目の態様は硼水素化ナトリウムの還元性塩を使用し、種々の反応溶媒を試験する方法に由来するものであった。エタノールを使用したときに驚くべき結果が達成され、しかもこの反応は−３０℃で行われた。即ち、この硼水素化物の還元性塩はセファロマニンと他のある種のタキサン類を選択的に開裂させたが、タキソールを開裂させなかったのである。この反応によるバッカチンIIIの収率は５８％であったが、２４時間後にもタキソールは１００％残っていた。出発原材料をタキサン類の混合物の存在下でバッカチンIIIに選択的に開裂させるこの反応の能力は、タキサンの精製、抽出法において顕著な利用性を持つものである。本発明の８番目の態様においては、出発原材料を反応溶媒としてのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）及び硼水素化物の還元性塩としての硼水素化ナトリウムと混合することによって１０−デアセチルバッカチンIIIが収率５２％で製造された。出発原材料はタキソール３．５％、セファロマニン２．３％、１０−デアセチルバッカチンIII・０．６９％、１０−デアセチルタキソール１．３％、その他の物質を含有していた。７２時間後に室温において５２％の１０−デアセチルバッカチンIIIの収率が達成された。この同じ方法は高割合のタキソールをバッカチンIIIに転化させた。本発明の９番目の態様においては、１０−デアセチルバッカチンIII・０．６９％及び１０−デアセチルタキソール１．３１％を含有する出発原材料をジクロロメタンと０．１％のSnCl₂中で室温において硼水素化ナトリウムと接触させることによって１０−デアセチルバッカチンIIIを製造した。反応１２０時間後に１０−デアセチルバッカチンIIIがＨＰＬＣ分析で２４％の収率で生成した。１０番目の態様においては、反応溶媒のCH₃OCH₂CH₂OCH₃（グライム）に７％（出発原材料中のタキソール基準）の塩化コバルトを加え、硼水素化ナトリウムと室温において１４４時間接触させた。この方法で１０−デアセチルバッカチンII Iが収率２１％でもたらされた。１０−デアセチルバッカチンIIIはまた０．１％のSnCl₂を使用した同様の実験においても低い正の収率で得られた。本発明の１１番目の好ましい態様においては、タキソール３．５％、セファロマニン２．３％、１０−デアセチルバッカチンIII・０．６９％及びデアセチルタキソール１．３％を含有するタキサン混合物の出発原材料を反応溶媒のCH₃（O CH₂CH₂）₃OCH₃（トリグライム）中で硼水素化ナトリウムと接触させることによて１０−デアセチルバッカチンIIIを３７％の収率で製造した。反応は室温で１４４時間行われた。この反応は１０−デアセチルタキソールの１０−デアセチルバッカチンIIIへの正の転化を与えるのにルイス酸の添加を要しなかった。事実、１０−デアセチルタキソールはその２９％しか使用されなかったが、それでも１０−デアセチルバッカチンIIIには３７％の増加があった。それは、正に１０−デアセチルタキソール以外の材料が開裂されて１０−デアセチルバッカチンIIIを生成させていると思われる。転化されているこれら他の化合物の具体的な同定は現時点では達成されていない。マグリス等の報文に認められるように、バッカチンIIIを形成する際に使用される硼水素化物類は水素化物イオンをエステルカルボニル基に送ることによってエステルを還元していると考えられる。この文献は、反応性の硼水素化物の還元性塩（特に、硼水素化テトラブチルアンモニウムが用いられる場合）がプロトン系化合物と接触しているときにこれら反応のエステル開裂能の低下に対する解決法を与えなかった。このことは、部分的に精製されたタキサン出発原材料には水やアルコール等、種々のプロトン系化合物が見いだされるので、実質的な問題となる。これらプロトン系物質のあるものは植物材料（Taxus）中で自然に生成し、またあるものは種々の抽出、精製工程で加えられる。更に、水酸化物及びアルコキシドの塩基性イオンも存在し得る。これらの材料は所望とされないエピ化と開裂を引き起こし、その結果バッカチンIIIの収率が実質的に低下する可能性が出ると共に、同様に１０−デアセチルバッカチンIIIと１０−デアセチルタキソールの両者の分解をもたらすと思われる。出発原材料中のこれら望ましくない化合物の影響を打ち消すために、本発明の好ましい態様は、反応に対して化学量論量より少なく、かつ化学量論量までのルイス酸を添加することを含む。金属ハロゲン化物のSnCl₂及びCoCl₂がこの方法において特に有用なルイス酸であることが判明した。これら金属ハロゲン化物は酸素アニオンの存在下において速やかに反応して金属酸化物を形成し、続いて非タキサン反応性のCl^-アニオンを放出する。かくして、出発原材料の多くの望ましくない成分は効果的に中和され、硼水素化物を、更に具体的には、混合物中のタキサン類と反応させる。次の非限定的実施例は部分的に精製されたタキサン混合物または精製されたタキサン試料からバッカチンIII及び１０−デアセチルバッカチンIIIを製造する特定の方法を提供するものである。科学的、技術的用語は全てこの技術分野で通常の技能を有するものが理解している通りの意味を有する。次の実施例においてＨＰＬＣはスペクトラ・フィジックス８８００ターナリー・ポンプ（Spectra Physics ８８００ Ternary Pump）、レオダイン（Reodyne）式ハンド・インゼクターのスペクトラ・フィジックスＳＰ８７８０（自動試料採取器）、ＳＰ４４００クロムジェット（Chromjet）積分器及びスペクトラ（Spectra）−１００（可変式波長検出器）より成る装置で実施した。¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルはバリアン（Varian）ＶＸＲの３００ＳＭＨｚ分光器を用いて得た。元素分析はハッフマン・ラボラトリー（Huffman Laboratories）〔コロラド州（Colorado）、ゴールデン（Golden）〕によって行われた。本発明によって製造されたバッカチンIII 及び１０−デアセチルバッカチンIIIを精製する方法は種々知られ、かつ当業者によって理解されているものであり、従って実施例に与えられた精製法は単に例として挙げられたものであって、本発明を限定しようとするものではない。例Ｉ（従来の技術）表Ｉａ例Ｉにおける反応条件は次の通りである。反応溶媒 CH₂Cl₂ 反応温度（℃）０反応時間１時間還元性塩硼水素化テトラブチルアンモニウム添加試薬なし４７．０４％のタキソールと１．０４％のセファロマンニンを含む５１mgのタキサン（出発原料）を２５mLの丸底フラスコの中で窒素ガス雰囲気の下で２．０ mLのジクロロメタン中に攪拌した。その溶液を氷浴中で０℃まで冷却した後、２５mgの硼水素化テトラブチルアンモニウムを加えた。その混合物を１時間攪拌させてから、反応を０．５mLのAcOHを加えることにより停止させた。バッカチン(Baccatin) IIIを含む有機溶液を２５mL／ｇの５０体積％酢酸／H₂ O の中へ注入した。その有機溶液を繰返し混和しない有機溶媒で抽出した。この場合ジクロロメタンを使った。有機相を採集して無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機相を真空で除くと粘稠な油を生成した。その残渣をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィーにより窒素圧を用いジクロロメタン／５％メタノールで溶出して精製した。選択された画分を減圧（２０mmHg）下で蒸発乾固させた。乾燥した有機物質をメタノール／H₂O （８０／２０）の１５％溶液から再結晶させて、１１．１３mgのバッカチンIIIを６６．０３％の収率で得た。表Ｉｂ出発原料（mg） 51.000 ％タキソール 47.040 タキソール重量（mg） 23.990 ％セファロマンニン 1.040 セファロマンニン重量（mg） 0.530 バッカチンIIIの理論収量 16.481 （タキソールからの、mg）バッカチンIIIの理論収量 0.374 （セファロマンニンからの、mg）全理論収量（mg） 16.855 バッカチンIIIの実際収量(mg) 11.130 バッカチンIIIの収率％ 67.532 （タキソールに関して）バッカチンIIIの収率％ 66.033 （タキソールとセファロマンニンに関して）残留タキソール（mg） 11.710 消費されたタキソール％ 51.189 残留セファロマンニン（mg） 0.000 消費されたセファロマンニン（mg） 100.000 その結果生成したバッカチンIIIは次の特徴を有し、融点およびＣ₃₁Ｈ₃₈Ｏ₁₁ についての元素分析（Huffman Laboratories，Golden，Colorado により行なわれた）、製品明細事項は以前にバッカチンIIIについて報告されたものに一致した。プロトン磁気共鳴スペクトル（３００MHz；重水素化クロロホルム；化学シフトppm；結合定数J，Hz）：1.11（s，6H），2.06（s，3H），2.25（s，3H），2.2 9（s，3 H），2.31（m，3H），2.57（m，1H），3.88（d，J=6.8，1H），4.15（d，J=8.3 ，1H），4.31（d，J=8.3，1H），4.47（m，1H），4.90（t，J=8.1，1H），4.98 （dd；J=8.7，1.2；1H），5.62（d，J=7.1，1H），6.32（s，1H），7.49（t，J= 7.3，2H），7.61（td；J=7.7，1.2；1H），8.11（d，J=7.7，2H）．例 II 例IIにおける反応条件は以下の通りである。表 II a 反応溶媒トルエン反応温度（℃）０反応時間１週間還元用塩硼水素化テトラブチルアンモニウム添加試薬なし出発原料は、タキススブレビホリア（Taxusbrevifolia）植物バイオマスからのタキソールを抽出および精製する過程で採集された部分精製されたタキサンから作られた。その出発原料はＨＰＬＣにより４７．０４％のタキソールと１．０４％のセファロマンニンを含むと測定された。５５mg量の出発原料を２．０mLのトルエンと共に、磁気攪拌機を取り付けた２５０mLの丸底フラスコの中で窒素ガス雰囲気の下で混合した。溶解が完了した後、その溶液を０℃に冷やした。硼水素化テトラブチルアンモニウム（４０mg）を加えて、その不均一混合物を攪拌させた。その反応はＴＬＣにより監視され、そして反応の遅いために、この反応は一週間進行させられた。次の従来の技術の精製手順が用いられた。反応物を１ML の５０％酢酸／H₂Oの中へ注ぎ込み、そしてガスの発生が止むまで攪拌させた。その混合物を次に１０mLの水と１０mLの混和しない有機溶媒で希釈した。有機相を３回抽出し、一緒に集め、真空で減量し、そしてジクロロメタン／５％メタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。バッカチンIII を含む画分を蒸発乾固させてから、メタノール／H₂O（８０：２０）から再結晶させた。１３．９５mgの収量は７６．７％バッカチンIIIの収率を表わした。バッカチンIIIのプロトンＮＭＲと融点は従来文献に報告されている値と一致した。表II b 出発原料（mg） 51.000 ％タキソール 47.040 タキソール重量（mg） 25.872 ％セファロマンニン 1.040 セファロマンニン重量（mg） 0.572 バッカチンIIIの理論収量 17.774 （タキソールからの、mg）バッカチンIIIの理論収量 0.403 （セファロマンニンからの、mg）全理論収量（mg） 18.177 バッカチンIIIの実際収量（mg） 13.950 バッカチンIIIの収率％ 78.487 （タキソールに関して）バッカチンIIIの収率％ 76.745 （タキソールとセファロマンニンに関して）残留タキソール（mg） 2.370 消費されたタキソール％ 90.840 残留セファロマンニン（mg） 0.249 消費されたセファロマンニン（mg） 56.469 トルエンは、それを無極性溶媒にする約２．３の誘電率を有する。タキソール抽出工程で得られたタキサン類の部分精製された混合物はしばしば抽出工程の間にH₂Oとアルコールの付加のために極性物質を含む。それ故、当業者は、一部極性の出発原料をトルエン中に溶解することに伴なう潜在的溶解度の問題のために、トルエンを選択することをためらったであろう。それ故、トルエンに伴なう溶解度の問題にも拘わらず、溶媒としてトルエンの使用が、反応を完結まで継続させたとき、７６．７％のバッカチンIIIの収率を結果としてもたらしたことは非常に驚くべきことであった。その結果は基準とした操作手順よりも１０％も高い収率を示す。同様に他の芳香族炭化水素、例えば、ベンゼン、１，３，５−メチルベンゼン、１，２−ジメチルベンゼン、１，３−ジメチルベンゼン、１，４−ジメチルベンゼン、は潜在的溶解性の問題を有するが、この操作手順においてはトルエンの代りにされることもできた。例 III 例III における反応条件は次の通りである。表 III a 反応溶媒 CH₂Cl₂ 反応温度（℃）０反応時間１６時間還元性塩 NaBH₄ 添加試薬なし商業的根拠においてタキサン反応における硼水素化テトラブチルアンモニウムの使用は該硼水素化物の高価のために非常に望ましくない。硼水素化テトラブチルアンモニウムの安価な代替品は硼水素化ナトリウムである。過去において硼水素化ナトリウムはタキサン反応において回避されていた。何故ならばそれはタキソールをバッカチンIII変換する反応においてイソプロピルアルコールと共に使用されるとき、ジオール８のような望ましくない生成物、およびＣ−７ヒドロキシル基をエピマー化してバッカチンＶを与えるような望ましくない反応がもたらされたからである。これらの問題を避けるために、硼水素化ナトリウムとイソプロピルアルコール溶媒が、ジクロロメタン中の硼水素化テトラブチルアンモニウムと取り替えられた。５０．２mgのタキサン（出発原料）の乾燥混合物と２．０mLのジクロロメタンから成る溶液を０℃に冷やした。その溶液を次に４．７mgの硼水素化ナトリウムと混合した。反応物は０℃で１６時間攪拌された。反応においてバッカチンIII は次に例ＩおよびIIに示したように従来の方法により精製および採集された。生成物のプロトンＮＭＲと融点は以前文献に報告されたバッカチンIIIの値に一致した。表III b 出発原料（mg） 50.200 ％タキソール 15.100 タキソール重量（mg） 7.701 ％セファロマンニン 3.180 セファロマンニン重量（mg） 1.622 バッカチンIIIの理論収量 5.290 （タキソールからの、mg）バッカチンIIIの理論収量（mg） 1.144 （セファロマンニンからの、mg）全理論収量（mg） 6.434 バッカチンIIIの実際収量（mg） 5.520 バッカチンIIIの収率％ 104.338 （タキソールに関して）バッカチンIIIの収率％ 85.792 （タキソールとセファロマンニンに関して）残留タキソール（mg） 3.560 消費されたタキソール％ 53.772 残留セファロマンニン（mg） 0.952 消費されたセファロマンニン％ 41.300 例Ｉにおいて示したMagrisらの手順を高度に精製された出発原料（４７％タキソール）を用いて実施して僅かに６６％のバッカチンIIIの収率を得た。対照的に、例IIIの出発原料は僅かに１５％のタキソールを含むものであったが、それでもバッカチンIIIの収率は８５％であった。さらに、望ましからぬ生成物の実質的な生産は起らなかった。例 IV 例 IV における反応条件は次の通りである。表 IV a 反応溶媒 CH₂Cl₂ 反応温度（℃）０反応時間１時間還元性塩硼水素化テトラブチルアンモニウム添加試薬 SnCl₂（１０％）５０mg量の出発原料（４７％タキソールを含む）を２．０mLのジクロロメタンと共に、磁気攪拌機を取り付けた２５mLのフラスコの中で窒素ガス雰囲気の下で混合した。溶解が完了した後、反応物を氷浴の中で０℃に冷やした。次に２．５ mgの塩化スズ（出発原料のタキソール含量に基づき１０モル％）と２５mgの硼水素化テトラブチルアンモニウムを反応物に加えた。反応物を１時間攪拌させてから、次に１０−２５ml／ｇの５０体積％の酢酸／水溶液の中へ注ぎ込んで反応を停止させた。その混合物を混和しない有機溶媒で繰返し抽出した。この例で使用された溶媒はジクロロメタンであった。有機相を集めて真空で減量した。この物質をジクロロメタン／５％メタノール混合物で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。それらの画分を集めて真空で減量し、メタノール／水から再結晶させた。結果はバッカチンIIIの１２１．０％の収率であった。採集されたプロトンＮＭＲおよび融点のデータはバッカチンIIIのそれらと一致した。表 IV b 出発原料（mg） 50.000 ％タキソール 47.040 タキソール重量（mg） 23.520 ％セファロマンニン 1.040 セファロマンニン重量（mg） 0.520 バッカチンIIIの理論収量 16.158 （タキソールからの、mg）バッカチンIIIの理論収量 0.367 （セファロマンニンからの、mg）全理論収量（mg） 16.525 バッカチンIIIの実際収量（mg） 20.110 バッカチンIIIの収率％ 124.459 （タキソールに関して）バッカチンIIIの収率％ 121.697 （タキソールとセファロマンニンに関して）残留タキソール（mg） 7.450 消費されたタキソール％ 68.325 残留セファロマンニン（mg） 0.000 消費されたセファロマンニン％ 100.000 ジテルペノイド構造を有する種々のタキサンが従来文献に報告されている。セファロマンニンまたはタキソールのＣ−１３側鎖と異なりＣ−１３側鎖を有するタキサンがタキソール抽出工程から得られた混合物中に存在するだろうことは予想される。異なるＣ−１３側鎖を有するタキサンの一群は「結合タキサン」である。これらのタキサンは糖類のような生化学分子に付着または「結合」されていると思われる。少なくとも一つの既知の「結合タキサン」はワーキシロシルタキソールである。前記の１２１％の収率は、出発原料のＨＰＬＣ分析においてタキソールまたはセファロマンニンであるとは見えないタキサン類の開裂からの結果である。これらの同定されないタキサン類を開裂させる能力はバッカチンIIIの収率において非常に望ましい増加を結果として生ぜしめる。例Ｖ例Ｖにおける反応条件は次の通りである。表 V a 出発原料(sm) 10 ｇ出発原料中のタキソール 350 mg 出発原料中のタキソール％ 3.5％出発原料中のセファロマンニン 230 mg 出発原料中のセファロマンニン％ 2.3％還元性塩 NaBH₄ 10:1 添加試薬 SnCl₂（0.1％）タキソール（３．５％）セファロマンニン（２．３％）を含む１０ｇのタキサン（出発原料）を５００mLの丸底フラスコの中で窒素ガス雰囲気の下に２００mL のＴＨＦの中へ攪拌して加えた。その混合物に硼水素化ナトリウムを出発原料に基づき１０：１の化学量論比に、および０．１％の塩化スズ（出発原料中のタキソールのモル％に基づく）を加えた。反応を室温で７２時間行わせた。この期間の後、バッカチンIIIを含む有機溶液を次の方法で精製した。その有機溶液をグラム当り１０mLの５０体積％酢酸／水の中へ注ぎ込んだ。次にその有機溶液を不混和性の有機溶媒、この場合ＴＨＦ、で繰返し抽出した。有機相を集めて、無水硫酸ナトリウムの上で乾燥してから、真空で蒸発させて粘稠な油にした。この油をジクロロメタン／５％メタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。選択された画分を次に減圧（２０mmHg）で蒸発乾固させた。その乾燥有機物質を次にメタノール／水（８０：２０）の１５％溶液から再結晶させた。１７１mgのバッカチンIIIが７１％の収率で回収された。生成物の¹ＨＮＭＲ分析と融点は以前バッカチンIIIについて報告されたものと一致した。表 V b 反応溶媒 THF 添加物 NaBH₄ 反応温度Ｃ室温反応時間 72 時間バッカチンIIIの理論収量 241 mg バッカチンIIIの実際収量(hplc) 171 mg バッカチンIIIの収率 71 ％残留タキソール(hplc) 28 mg 残留タキソール％ 8 ％残留セファロマンニン 42 mg 残留セファロマンニン％ 18 ％対照的に、例Ｖに記載したものと同じ手順を同じタキソール／セファロマンニン百分率を有する出発原料３０ｇにより操作した。使用された溶媒はジクロロメタン（Magrisらの方法で使用されたように）であった。バッカチンIIIの収率は、反応の完了を決定するためＴＬＣにより分析すると、僅か３６％、２６０mg（１０ｇの原料から得られた収率はこれより高い）に過ぎなかった。ＴＬＣに基づき、ジクロロメタン中の反応は７２時間に対して１２０時間行なわれた。例 VI 例VIにおける反応条件と出発原料は次の通りである。表 VI a 出発原料 10 ｇ出発原料中のタキソール 350 mg 出発原料中のタキソール％ 3.5％出発原料中のセファロマンニン 230 mg 出発原料中のセファロマンニン％ 2.3％還元性塩 NaBH₄ 10:1 添加試薬 SnCl₂（0.1％）タキソール（３．５％）とセファロマンニン（２．３％）を含む１０ｇのタキサン出発原料を丸底フラスコの中で窒素ガス雰囲気の下に２００mLのグライムの中へ攪拌して加えた。硼水素化ナトリウム（出発原料に基づき１０：ｌの化学量論比）および（０．１％）塩化スズ（出発原料中のタキソールのモル百分率に基づく）を反応物に添加した。反応を室温で７２時間行なわせた。この期間の後、バッカチンIIIを含む有機溶液を次の方法により精製した。その有機溶液をグラム当り１０−２５mLの５０体積％酢酸／H₂O の中へ注ぎ込んだ。次にその有機溶液を不混和性の有機溶媒、この場合グライム、で繰返し抽出した。有機相を集めて、無水硫酸ナトリウムの上で乾燥してから、真空で蒸発させて粘稠な油にした。この油をジクロロメタン／５％メタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。選択された画分を次に減圧（２０mmHg）で蒸発乾固させた。その乾燥有機物質を次にメタノール／水（８０：２０）の１５％溶液中で再結晶させた。１５９mgのバッカチンIIIが６６％の収率で回収された。生成物の¹ ＨＮＭＲ分析と融点はバッカチンIIIについて以前に文献に報告された値と一致した。表 VI b 反応溶媒グライム添加物 NaBH₄ 反応温度Ｃ室温反応時間 72 時間バッカチンIIIの理論収量 241 mg バッカチンIIIの実際収量(hplc) 159 mg バッカチンIIIの収率％ 66 ％残留タキソール(hplc) 19 mg 残留タキソール％ 5 ％残留セファロマンニン 33 mg 残留セファロマンニン％ 14 ％前記例VIと同じ反応がジグライム (高分子量の溶媒) を使用して行なわれ、そして５２％の収率が得られた。対照的に、同じ反応を塩化スズを用いずトリグライムを使って１４４時間行なった。この場合、収率は４６％であった。再び、対照に、０℃で行なわれかつ経済的に魅力のない基準のMagrisらの方法は、混合物が４７％タキソールである場合に６６％の収率をもたらした。例VIの収率は、僅かに３．５％タキソールである出発原料からのものである。反応が室温で反応溶媒としてジクロロメタンを使用して１２０時間行なわれた場合に気づかれたように、その結果は僅かに５３％バッカチンIIIであった。グライムとＴＨＦのような無極性ドナー溶媒をルイス酸の存在で使用することは、ルイス酸の存在でCH₂C l₂（無極性、非供与体溶媒）の使用よりも実質的に良好なバッカチンIIIの収率を部分精製タキサン出発原料（５０％以下のタキソールを含む）から結果としてもたらすように見える。例 VII 例VII における反応条件および出発原料は次の通りである。表 VII a 出発原料 10 ｇ出発原料中のタキソール 350 mg 出発原料中のタキソール％ 3.5％出発原料中のセファロマンニン 230 mg 出発原料中のセファロマンニン％ 2.3％還元性塩 NaBH₄(ペレット) 10:1 添加試薬 CoCl₂ (７％) タキソール（３．５％）とセファロマンニン（２．３％）を含む１０ｇのタキサン出発原料を５００mLの丸底フラスコの中で窒素ガス雰囲気の下で２００mLのグライムの中へ攪拌して加えた。硼水素化ナトリウム（出発原料に基づき１０：１の化学量論比）および７％の塩化コバルト（出発原料中のタキソールのモル百分率に基づく）をペレットの形で反応に加えた。反応を室温で１４４時間行なわせた。その１４４時間の後に、バッカチンIIIを含む有機溶液を次の方法により精製した。反応混合物をグラム当り１０mLの５０体積％の酢酸／H₂Oの中へ注いだ。その有機溶液を次に不混和性の有機溶媒、この場合グライム、で繰返し抽出した。有機相を集めて、無水硫酸ナトリウムの上で乾燥した。その有機相を次に真空で蒸発させて粘稠な油にした。この油をジクロロメタン／５％メタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。選択された画分を次に減圧（２０mmHg）で蒸発乾固させた。その乾燥有機物質を次にメタノール／水（８０：２０）の１５％溶液中で再結晶させた。１７４mgのバッカチンIIIが７２％の収率で回収された。生成物のプロトンＮＭＲおよび融点はバッカチンIIIについて以前に報告された文献の値と一致した。表 VII b 反応溶媒グライム添加物 NaBH₄ ／CoCl₂ ペレット反応温度Ｃ室温反応時間 144 時間バッカチンIIIの理論収量 241 mg バッカチンIIIの実際収量(hplc) 174 mg バッカチンIIIの収率％ 72 ％残留タキソール(hplc) 25 mg 残留タキソール％ 7 ％残留セファロマンニン 45 mg 残留セファロマンニン％ 20 ％例 VIII Magrisらは硼水素化ナトリウムとイソプロピルアルコールはバッカチンIII、バッカチンＶおよびジオール８の望ましくない混合物を結果として生じると報告したけれども、エタノールを溶媒として選択した。下に示すような操作手順がルイス酸なしでかつエタノールを反応溶媒として行なわれたときに、驚くべき結果が展開した。その結果は、−３０℃において１０：１の化学量論量の硼水素化ナトリウムはセファロマンニンおよびその他のタキサン類をタキソールを越えて分裂させたことであった。例VIIIの反応条件および出発原料は次の通りである。表 VIII a 出発原料（質量） 10 g 出発原料中のタキソール 350 mg 出発原料中のタキソール％ 3.5 ％出発原料中のセファロマンニン 230 mg 出発原料中のセファロマンニン％ 2.3 ％反応溶媒エタノール添加物 NaBH₄ 反応温度Ｃ -30 ℃ 反応時間 24 時間還元性塩 NaBH₄ 10:l 添加試薬なし３．５％のタキソールと２．３％のセファロマンニンを含む１０ｇのタキサン出発原料を５００mLの丸底フラスコの中で窒素ガス雰囲気の下で２００mLのエタノールの中へ攪拌して加えた。その溶液を−３０℃まで冷やしてから、１０：１の化学量論比の硼水素化ナトリウムを混合物に加えた。反応物を２４時間攪拌させた。その混合物を次にグラム溶液当り１０−２５mlの５０体積％酢酸／H₂Oの中に注ぎ込んだ。その有機溶液を不混和性有機溶媒、この場合ジクロロメタン、で繰返し抽出した。有機相を集めて、無水硫酸ナトリウムの上で乾燥させ、そして真空で蒸発させて粘稠な油にした。この油をジクロロメタン／５％メタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。選択された画分を次に減圧（２０mmHg）で蒸発乾固させた。その乾燥有機物質を８０：２０のメタノール／水の１５％溶液から再結晶させた。バッカチンIIIの５８％収率がＨＰＬＣ分析により実現した。ＨＰＬＣ分析はまた、１００％の残留タキソールが存在することも示した。それ故バッカチンIIIの収量はセファロマンニンおよびその他の非タキソールタキサンから来た。最終生成物の¹ＨＮＭＲと融点は以前にバッカチンIIIについて報告されたものに一致した。表 VIII b バッカチンIIIの理論収量 241 mg バッカチンIIIの実際収量（hplc） 140 mg バッカチンIIIの収率％ 58 ％残留タキソール（hplc） 350 mg 残留タキソール％ 100 ％残留セファロマンニン 193 mg 残留セファロマンニン％ 84 ％例 IX（従来の技術）例IXにおける反応条件は次の通りである。表 IX a 反応溶媒 CH₂Cl₂ 反応温度（℃） 0 反応時間 16 時間還元性塩硼水素化テトラブチルアンモニウム添加試薬なし４７．０４％のタキソール、１．０４％のセファロマンニン、１．７３％の１０−デアセチルタキソール、５．７％の１０−デアセチルバッカチンIIIを含む６９mgのタキサン（出発原料）を２５mLの丸底フラスコの中で窒素ガス雰囲気の下で２．０mLのジクロロメタンの中に攪拌して加えた。氷浴中で溶液を０℃に冷やした後、２５mgの硼水素化テトラブチルアンモニウムを加えた。その混合物を１時間攪拌させてから、０．５mLのAcOHを加えることにより反応を停止させた。１０−デアセチルバッカチンIIIを含むと推定されるその有機溶液を２５mL／ｇの５０体積％の酢酸／H₂Oの中に注ぎ込んだ。その有機溶液を不混和性有機溶媒で繰返して抽出した。この場合ジクロロメタンが使用された。有機相を集めて無水硫酸ナトリウムの上で乾燥させた。その有機相を真空で蒸発させて粘稠な油を生成した。この残渣をシリカゲル上で窒素圧を用いジクロロメタン／５％メタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。選択された画分を減圧（２０mmHg）の下で蒸発乾固させた。乾燥有機物質をメタノール／H₂O（８０／２０）の１５％溶液から再結晶させた。１０−デアセチルバッカチンIIIは生成しなかった。実際上、３mgの１０− デアセチルバッカチンIIIが失なわれ、同様に０．６mgの１０−デアセチルタキソールが失なわれた。収率は負（−）の３７５．００％（マイナス）であった。この収率は損失物質を考慮に入れている。表 IX b 出発原料（mg） 69.0 10−デアセチルタキソール％ 1.73 10―デアセチルタキソール重量（mg） 1.19 10−デアセチルバッカチンIII％ 5.74 10−デアセチルバッカチンIII重量（mg） 3.96 10−デアセチルバッカチンIIIの理論収量（10−デアセチルタキソールからの、mg） 0.800 10−デアセチルバッカチンIIIの実際の収量（mg） 0.96(-3.00) 10−デアセチルバッカチンIIIの収率％（10−デアセチルタキソールに関する） -375.00 残留10−デアセチルタキソール（mg） 0.520 消費された10−デアセチルタキソール％ 56.300 例Ｘ例Ｘの反応条件は次の通りである。表Ｘa 出発原料（Sm） 10 g 出発原料中のタキソール 350 mg 出発原料中のタキソール％ 3.5 ％出発原料中の10−デアセチルタキソール 131 mg 出発原料中の10−デアセチルタキソール％ 1.3 ％還元性塩 NaBH₄ 10:l 添加試薬 SnCl₂（0.1％）タキソール（３．５％）、１０−デアセチルタキソール（１．３％）、１０− デアセチルバッカチンIII（０．６％）を含む）１０ｇのタキサン（出発原料）を５００mLの丸底フラスコの中で窒素ガス雰囲気の下で２００mLのＴＨＦの中に攪拌して加えた。出発原料に基づき１０：１の化学量論比の硼水素化ナトリウムおよび０．１％の塩化スズ（出発原料中のタキソールのモル％に基づく）を前記混合物に加えた。反応を室温で７２時間行なわせた。この期間の後、バッカチン IIIと１０−デアセチルバッカチンIIIを含む有機溶媒を次の方法で精製した。その有機溶液をグラム当り１０mLの５０体積％酢酸／H₂Oの中に注ぎ込んだ。次にその有機溶液を不混和性有機溶媒、この場合ＴＨＦ、で繰返し抽出した。有機相を集め、無水硫酸ナトリウムの上で乾燥させ、そして真空で蒸発させ粘稠な油にした。この油をジクロロメタン／５％メタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。選択された画分を次に減圧（２０mmHg）の下で蒸発乾固させた。乾燥有機物質を次にメタノールから再結晶させた。１１５mgの１０ −デアセチルバッカチンIIIが回収され、５２％収率となった。生成物の¹ＨＮＭＲ分析と融点は以前に１０−デアセチルバッカチンIIIについて報告されたものに一致した。表Ｘb 反応溶媒 THF 添加物 NaBH₄ 反応温度Ｃ室温反応時間 72 時間 10−デアセチルバッカチンIIIの理論収量 88 mg 10−デアセチルバッカチンIIIの実際収量（hlpc） 115 mg 10−デアセチルバッカチンIIIの収率％ 52 ％残留10−デアセチルタキソール（hplc） 10 mg 変換された10−デアセチルタキソール％ 92 ％対照的に、例Ｘに記載の方法と同じ手順を、同じタキソールと１０−デアセチルタキソールの含有百分率を有する１０ｇの出発原料について行なった。使用された反応溶媒はジクロロメタン（Magrisらの方法に使用されたように）であった。１０−デアセチルバッカチンIIIの収率は、ＴＬＣにより分析すると僅かに２４％、９０mgであった（より多量の原料からもたらされたより低い収率）。６９ mgの残留１０−デアセチルタキソールがあり、４７％のデアセチルタキソールが変換された。ＴＬＣ分析に基づいて、ジクロロメタン中の反応は、７２時間に対して１２０時間行なわれた。結果として生成した１０−デアセチルバッカチンIIIは諸特性、融点およびＣ₂ ₉ Ｈ₃₅Ｏ₁₀についての元素分析（Huffman Laboratories，Golden，Coloradoによりなされた）を測定された。生成物は以前に１０−デアセチルバッカチンIIIについて報告されたものに一致した。プロトン核磁気共鳴スペクトル（３００MHz；重水素化クロロホルム；化学シフトppm；結合定数J，Hzで）：1.10（s，6H），1.74（s，3H），2.06（s，3H），2.29（s，3H），2.57（m，1H），4.00（d，J=7.0，1H），4.17（d，J=9.O，1H ），4.20（m，1H），4.32（d，J=9.0，1H），4.80（brt，1H），4.96（dd，J=8. 7，1.2；1H），5.24（s，1H），5.63（d，J=7.0，1H），7.49（t，J=7.32，2H），7.62（t，J=7.57，1H），8.11（d，J=7.32，2H）．例 XI 例XIにおける反応条件および出発原料は次の通りである。表 XI a 出発原料（質量） 10 g 出発原料中のタキソール 350 mg 出発原料中のタキソール％ 3.5 ％出発原料中の10−デアセチルタキソール 131 g 出発原料中の10−デアセチルタキソール％ 1.3 ％還元性塩 NaBH₄（ペレット）10:1 添加試薬 CoCl₂（７％）タキソール（３．５％）およびセファロマンニン（２．３％）を含む１０ｇのタキサン出発原料を５００mLの丸底フラスコの中で窒素ガス雰囲気の下に２００ mLのグライムの中に攪拌して加えた。硼水素化ナトリウム（出発原料に基づき１０：１の化学量論比）および７％塩化コバルト（出発原料中のタキソールのモル％に基づく）を、ペレットの形で、反応物に加えた。反応を室温で１４４時間行なわせた。１４４時間後、１０−デアセチルバッカチンIIIを含む溶液をそれから次の方法で精製した。反応混合物をグラム当り１０mLの５０体積％酢酸／H₂O の中に注ぎ込んだ。その有機溶液を次に不混和性有機溶媒、この場合グライム、で繰返し抽出した。有機相を集めてから、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機相を次に真空で蒸発させて粘稠な油にした。その油をジクロロメタン／５％メタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。選択された画分を次に減圧（２０mmHg）の下で蒸発乾固させた。乾燥有機物質を次にメタノールから再結晶させた。８７mgの１０−デアセチルバッカチンIIIが回収されて２１％の収率になった。生成物のプロトンＮＭＲおよび融点は１０−デアセチルバッカチンIIIについて以前に報告された文献の値に一致した。表 XI b 反応溶媒グライム添加物 NaBH₄／CoCl₂ペレット反応温度（℃）室温反応時間 144 時間 10−デアセチルバッカチンIIIの理論収量 88 mg 10−デアセチルバッカチンIIIの実際収量（pchl） 87 mg 10−デアセチルバッカチンIIIの収率％ 21 ％残留10−デアセチルタキソール（hplc） 41 mg 変換された10−デアセチルタキソール％ 69 ％どのルイス酸が好収量の１０−デアセチルバッカチンIIIまたはバッカチンIII を不完全精製のタキソールの混合物から生成物させるかを、不適切な実験なしで決定するためには、次の二段階の試験を分析しなければならない。第一に、そのルイス酸は強い求核性種、例えば、酸素陰イオン、と共有結合を作ることができなくてはならない。従って、塩化マグネシウムは特に好ましいルイス酸ではなかろう。第二に、そのルイス酸は硼水素化物還元性塩と反応してボラン（即ち、B₂ H₆）を形成してはならない。強い求核試薬と共有結合することができかつボランを生成する反応をしないルイス酸は本発明において使用されることができる。例えば、SbCl₃、ZnCl₂、CuCl₂、PbCl₂、GeCl₂、SnBr₂、SnI₂、およびCoBr₂は前記二段階試験の下で選択されるルイス酸であるだろう。種々の実験は、１０−デアセチルバッカチンIIIまたはバッカチンIIIの大規模製造を行なうには０．１％より多いルイス酸を必要するだろうことを示す。さらに、大量の出発原料が使用されるときには、反応をＴＬＣにより密接に監視すること、および分裂反応が容易に起り得るように混合物がよく攪拌されていることを確信できることが極めて重要である。本発明は、不完全精製のタキサン混合物をバッカチンIII並びに１０−デアセチルバッカチンに変換するために新しい高収率の方法を開示する。これらの方法は結果として、当業者に既知の方法によりさらに精製を加えられた後に本質的に純粋になるバッカチンIII及び１０−デアセチルバッカチンIIIの高収率をもたらす。結果として生じる化学種の特性評価は、その生成物の構造がバッカチンIII または１０−デアセチルバッカチンIIIであることを確認する。バッカチンIIIと１０−デアセチルバッカチンIIIの好収率に加えて、これらの方法は商業的に実施可能であり、低コストで、そして室温で行なわれる。硼水素化ナトリウムおよび硼水素化テトラブチルアンモニウム以外の硼水素化物還元性塩の使用、およびその他のルイス酸の使用が本発明により予期される。従って、本発明はこれまである程度の綿密さを本発明の方法に指向してきた。しかし、本発明は、その修正または変更がここに含まれた発明概念から逸脱することなしに本発明の方法に対してなされ得るように、従来の技術に照らして解される次の請求事項により定義されることは理解されるべきである。本発明が特定的に記載したものの他にも実施されても良いことが理解される。

【手続補正書】特許法第１８４条の７第１項【提出日】１９９３年１２月２８日【補正内容】請求の範囲１．Ｃ−１３位置にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物を含む混合物を少なくとも１種の硼水素化物還元性塩と反応溶媒中でルイス酸の存在で接触させることから成る式（I）の化合物を製造する方法。２．室温から−３０℃までの範囲の温度で行なわれる請求項１に記載の方法。３．硼水素化物還元性塩は硼水素化ナトリウムである請求項１に記載の方法。４．硼水素化物還元性塩は硼水素化テトラブチルアンモニウムである請求項１に記載の方法。５．反応溶媒はCH₃OCH₂CH₂OCH₂，CH₃OCH₂CH₂OCH₂CH₂OCH₃，CH₃OCH₂CH₂OCH₂CH₂ OCH₂CH₂OCH₃，から成る群より選択される請求項１に記載の方法。６．反応溶媒はテトラヒドロフランである請求項１に記載の方法。７．反応溶媒はジクロロメタンである請求項１に記載の方法。８．該混合物は少なくとも１５％−５０％の、タキサノールであるタキサン類を含みかつ反応溶媒はテトラヒドロフランである請求項１に記載の方法。９．該混合物は５０重量％より多い、タキサノールであるタキサン類を含みかつ反応溶媒はジクロロメタンである請求項１に記載の方法。 10．該混合物は１５重量％未満の、タキサノールであるタキサン類を含みかつ溶媒はCH₃OCH₂CH₂OCH₃，CH₃O(CH₂CH₂O)CH₃，CH₃O(CH₂CH₂O)₃CH₃，から成る群より選択される請求項１に記載の方法。 11．ルイス酸はハロゲン化金属である請求項１に記載の方法。 12．ハロゲン化金属は塩化スズである請求項１１に記載の方法。 13．ハロゲン化金属は塩化コバルトである請求項１２に記載の方法。 14．Ｃ−１３位置にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物成分を含む混合物を硼水素化物還元性塩と芳香族炭化水素中で接触させることから成る式（I）の化合物を製造する方法。 15．該芳香族炭化水素はトルエンである請求項１４に記載の方法。 16．該硼水素化物還元性塩は硼水素化テトラブチルアンモニウムである請求項１４に記載の方法。 17．該方法は０℃の温度で実施される請求項１４に記載の方法。 18．タキソールであるタキサン化合物と少なくとも１種の、タキソールでないＣ−１３の位置にエステル結合を有する他のタキサン化合物の混合物を硼水素化物還元性塩と反応溶媒中で接触させることから成る式（I）の化合物を製造する方法において、混合物中のタキソールであるタキサン化合物は上記の定義のような式（I）に変換されないことを特徴とする式（I）の化合物を製造する方法。 19．還元性塩は硼水素化ナトリウムである請求項１８に記載の方法。 20．反応溶媒はエタノールである請求項１９に記載の方法。 21．−３０℃の温度で実施される請求項２０に記載の方法。 22．Ｃ−１３位置にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物を含む混合物を少なくとも１種の硼水素化物還元性塩と反応溶媒中でルイス酸の存在で接触させることから成る式（II）の化合物を製造する方法。 23．硼水素化物還元性塩は硼水素化ナトリウムである請求項２２に記載の方法。 24．反応溶媒はCH₃(OCH₂CH₂)_x OCH₃（式中、ｘは１から５までの整数である）より選択される請求項２２に記載の方法。 25．反応溶媒はテトラヒドロフランである請求項２２に記載の方法。 26．反応溶媒はジクロロメタンである請求項２２に記載の方法。 27．ルイス酸はハロゲン化金属である請求項２２に記載の方法。 28．ハロゲン化金属は塩化スズである請求項２７に記載の方法。 29．ハロゲン化金属は塩化コバルトである請求項２７に記載の方法。 30．Ｃ−１３位置にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物成分を含む混合物と硼水素化物還元性塩をトリグライム中で接触させることから成る式（II）の化合物を製造する方法。 31．該硼水素化物還元性塩は硼水素化ナトリウムである請求項３０に記載の方法。 32．該方法は２２°−２７℃の温度で実施される請求項３０に記載の方法。 33．Ｃ−１３の位置にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物を含む混合物を少なくとも１種の硼水素化物還元性塩と反応溶媒中でルイス酸の存在で接触させることから成る式

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＲ，ＮＯ，ＮＺ (72)発明者エウォルド，ハーニタエイ. アメリカ合衆国 80203 コロラド州デンバー，ナンバー 920，イー．セブンティーンスアベニュー 300 (72)発明者ヘンダーソン，ドニアエル. アメリカ合衆国 80304 コロラド州ボウルダー，ナンバー 595，ナインティーンスストリート 4500

Claims

【特許請求の範囲】１．Ｃ−１３位置にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物を含む混合物を少なくとも１種の硼水素化物還元性塩と反応溶媒中でルイス酸の存在で接触させることから成る式（1）の化合物を製造する方法。２．室温から−３０℃までの範囲の温度で行なわれる請求項１に記載の方法。３．硼水素化物還元性塩は硼水素化ナトリウムである請求項１に記載の方法。４．硼水素化物還元性塩は硼水素化テトラブチルアンモニウムである請求項１に記載の方法。５．反応溶媒はCH₃OCH₂CH₂OCH₂，CH₃OCH₂CH₂OCH₂CH₂OCH₃，CH₃OCH₂CH₂OCH₂CH₂ OCH₂CH₂OCH₃，から成る群より選択される請求項１に記載の方法。６．反応溶媒はテトラヒドロフランである請求項１に記載の方法。７．反応溶媒はジクロロメタンである請求項１に記載の方法。８．該混合物は少なくとも１５％−５０％の、タキサノールであるタキサン類を含みかつ反応溶媒はテトラヒドロフランである請求項１に記載の方法。９．該混合物は５０重量％より多い、タキサノールであるタキサン類を含みかつ反応溶媒はジクロロメタンである請求項１に記載の方法。 10．該混合物は１５重量％未満の、タキサノールであるタキサン類を含みかつ溶媒はCH₃OCH₂CH₂OCH₃，CH₃O(CH₂CH₂O)CH₃，CH₃O(CH₂CH₂O)₃CH₃，から成る群より選択される請求項１に記載の方法。 11．ルイス酸はハロゲン化金属である請求項１に記載の方法。 12．ハロゲン化金属は塩化スズである請求項１１に記載の方法。 13．ハロゲン化金属は塩化コバルトである請求項１２に記載の方法。 14．Ｃ−１３位置にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物成分を含む混合物を硼水素化物還元性塩と芳香族炭化水素中で接触させることから成る式（1）の化合物を製造する方法。 15．該芳香族炭化水素はトルエンである請求項１４に記載の方法。 16．該硼水素化物還元性塩は硼水素化テトラブチルアンモニウムである請求項１４に記載の方法。 17．該方法は０℃の温度で実施される請求項１４に記載の方法。 18．タキソールであるタキサン化合物と少なくとも１種の、タキソールでないＣ−１３の位置にエステル結合を有する他のタキサン化合物の混合物を硼水素化物還元性塩と反応溶媒中で接触させることから成る式（I）の化合物を製造する方法において、混合物中のタキソールであるタキサン化合物は上記の定義のような式（I）に変換されないことを特徴とする式(I) の化合物を製造する方法。 19．還元性塩は硼水素化ナトリウムである請求項１８に記載の方法。 20．反応溶媒はエタノールである請求項１９に記載の方法。 21．−３０℃の温度で実施される請求項２０に記載の方法。 22．Ｃ−１３位置にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物を含む混合物を少なくとも１種の硼水素化物還元性塩と反応溶媒中でルイス酸の存在で接触させることから成る式（II）の化合物を製造する方法。 23．硼水素化物還元性塩は硼水素化ナトリウムである請求項２２に記載の方法。 24．反応溶媒はCH₃（OCH₂CH₂）_x OCH₃（式中、ｘは１から５までの整数である）より選択される請求項２２に記載の方法。 25．反応溶媒はテトラヒドロフランである請求項２２に記載の方法。 26．反応溶媒はジクロロメタンである請求項２２に記載の方法。 27．ルイス酸はハロゲン化金属である請求項２２に記載の方法。 28．ハロゲン化金属は塩化スズである請求項２７に記載の方法。 29．ハロゲン化金属は塩化コバルトである請求項２７に記載の方法。 30．Ｃ−１３位置にエステル結合を有する少なくとも１種のタキサン化合物成分を含む混合物と硼水素化物還元性塩をトリグライム中で接触させることから成る式（II）の化合物を製造する方法。 31．該硼水素化物還元性塩は硼水素化ナトリウムである請求項３０に記載の方法。 32．該方法は２２゜−２７℃の温度で実施される請求項３０に記載の方法。