JPH08502496A

JPH08502496A - 傷の治癒促進方法およびそのための組成物

Info

Publication number: JPH08502496A
Application number: JP6510465A
Authority: JP
Inventors: シュルツ、マーク・ワーナー; デイビー、ピーター・ジェームズ
Original assignee: グラニュロン・プロプライエタリー・リミテッド
Priority date: 1992-10-28
Filing date: 1993-10-27
Publication date: 1996-03-19
Also published as: EP0669828A4; CA2147508A1; EP0669828A1; ZA938054B; AU5365894A; WO1994009800A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、哺乳類の眼球組織のガラス質もしくはガラス質の抽出物またはガラス質の１種以上の成分を適用する、傷の治癒を誘発、剌激、増進、加速または促進する方法に関する。また本発明は、皮膚組織に実質的に影響を与えることなく、肉芽組織の成長と増殖を選択的に剌激することのできるガラス質もしくはガラス質の抽出物またはその１種以上の単離成分を含む、局部用組成物を狙いとしたものである。

Description

【発明の詳細な説明】傷の治癒促進方法およびそのための組成物本発明は、哺乳類の眼球組織のガラス質もしくはガラス質の抽出物またはガラス質の１種以上の成分を適用する、傷の治癒を誘発、剌激、増進、加速または促進する方法に関する。また本発明は、皮膚組織に実質的に影響を与えることなく、肉芽組織の成長と増殖を選択的に刺激することのできるガラス質もしくはガラス質の抽出物またはその１種以上の単離成分を含む、局部用組成物を狙いとしたものである。本明細書中では「ガラス質」という言葉は、「硝子体液」の省略名称として用いるが、これはバラズ（Ｂａｒａｓｚ）およびデンリンガー（Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ）（１９８４年）の命名法を採用したものである。ガラス質には、水晶体、毛様体および網膜によって囲まれた結合組織が含まれる。本発明を記述するに当たって、皮膚は外側の外皮層と内側の真皮層からなると考えられる。これら二つの層は第３の皮下組織層の上にある；肉芽組織は皮下組織層から作られる。ここで「皮膚組織」というのは表皮および真皮組織をいうのであって、皮下または肉芽組織を言うのではない。傷に対応して、重なり合っている３つの組織応答の相状態：炎症、肉芽組織の生成、およびマトリックスの形成と再構築、がある。これらの相状態は図１に示してある。炎症相は血管の損傷と関連している。これにより血液細胞および血漿成分が周囲の組織に浸出し、化学誘引物質（ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｎｔａｎｔ）とマイトジェンの血小板放出をも含む凝血過程を引き起こす。これは更に、血小板同様、傷治癒の次の相にとって重要な好中球および単球といった血液細胞の傷組織への侵入を引き起こす（クラーク、（Ｋｌａｒｋｅ）１９８８年）。肉芽組織は線維芽細胞、単球誘導性マクロファージ、組織マクロファージおよび新しい血管からなる。「肉芽組織」なる語は、その粒状形状に由来するものであり、組織学的には多くの新規に形成された血管によるものである。肉芽組織は慢性の非治癒性の傷のような傷の修復部位または骨の損傷部位で見いだされうるもので、そこでは肉芽組織は大部分が特定の筋線維芽細胞（以降は「造骨細胞（ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ）」と呼ぶ）をからなる。傷部位への線維芽細胞の増殖および新しい血管の成長は同時に且つ相互依存的に生じ、マクロファージおよび血小板から出てくる化学誘引物質および成長因子によって剌激される。このような化学誘引物質および成長因子にはトロンビン、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、表皮成長因子（ＥＧＦ）および血小板誘導成長因子（ＰＤＧＦ）が含まれる（レイボビッチ（Ｌｅｉｂｏｖｉｃｈ）およびロス（Ｒｏｓｓ）、１９７５年）。血管再生（Ｒｅｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）は隣接する血管から成長する毛細管から起こり、次いで滑らかな筋肉が回復される。この段階は増殖している治癒組織へ酸素と必須栄養物を供給するので傷治癒にとって重要なところである。皮膚が失われた深い傷の場合は、線維芽細胞は皮下層から傷の部位へ移動し、最初フィブロネクチン（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）およびヒアルロン酸に富んだ多量の緩い細胞外マトリックスを蓄積する（カーキネン他（Ｋｕｒｋｉｎｅｎｅｔａｌ.,）１９８０年）。傷そのものの内部で線維芽細胞は表現型変調（ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）を起こしていわゆる「筋線維芽細胞（ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）」となる。筋線維芽細胞はマトリックス合成機能を失うことなく高い移動度と収縮能をもっている。筋線維芽細胞は肉芽組織の中で最も数が多い。筋線維芽細胞はアクチンに富んでおり、傷の内部で配列し傷を閉鎖するために収縮を起こす（ギャビアニ他（Ｇａｂｂｉａｎｉｅｔａｌ .,）１９７２年）。再-上皮組織形成は線維増殖と同時に起こり、これはバクテリア感染と組織液体の消失を防止するための重要な機構である。上皮細胞は、移動と同時に著しい表現型変化を生じ、細胞の移動度を増加する。多くの他の細胞種同様、表皮細胞の移動は細胞増殖には依存しない。一旦再上皮組織形成が完了すれば、細胞は元の表現型に戻る。傷治癒の第３のオーバーラップ相はマトリックス形成および再構築である。肉芽組織の細胞外マトリックスの組成および構造は最初に沈着した時間から連続的に変化し、サイトカイン、例えば腫瘍増殖因子-β〔ＴＧＦ-β〕によって制御される（ロバーツ他（Ｒｏｂｅｒｔｓｅｔａｌ.,）１９８６年）。肉芽組織の形成中、フィブロネクチン（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）は、細胞移動のための基層、筋線維芽細胞が傷の収縮を効果的に行うための結合およびコラーゲンフィブリル形成のための融着部位を提供する。コラーゲン種Ｉ、IIIおよびＶが発生し、傷の引張強度を発現し、プロテオグリカンは組織の変形に対して復元力を提供する。第２期治癒（ｓｅｃｏｎｄａｒｙｉｎｔｅｎｔｉｏｎ）による治療を必要とする傷は、表皮も真皮もない、縁が広く離れた傷である。その結果、治癒は基部から上へおよび縁から内部へと進む。真皮はこの点ではほとんど傷治癒活性を示さず、結果的に傷部位を満たす肉芽組織の大部分は傷の縁の皮下脂肪からおよび傷の皮下床から出てくる。上記のように、肉芽組織は皮下組織の周辺結合組織要素の増殖と移動のよって形成される。；それは第１の例では、肉芽組織は種々の量の炎症細胞と共に毛管ループおよび線維芽細胞からなる。速やかな機能回復をもたらし、深く広い第２期徴候の傷の部位に傷跡が残らないようにするための臨床的必要性および慢性非治癒性第２期徴候の傷の治癒を開始し、加速するための必要性から、人に試みるために非常に多くの物質が試験に用いられてきた。これらの物質は多くのソースから得られたもので一般的には成長因子の組み合わせがはっきりしない（バン・ブラントおよびクラウスナー（ＶａｎＢｒｕｎｔａｎｄＫｌａｕｓｎｅｒ）、１９８８年；ブックレー他（Ｂｕｃｋｌｅｙｅｔａｌ.,）、１９８５年）。傷治癒を加速する試みとして、血小板誘導傷治癒処法（ＰＤＷＨＦ）が局部に使用されてきた。ＰＤＷＨＦを、これにこの処方中にある成長因子を組み合わせることによって、慢性非-治癒性皮膚傷の治癒を刺激することも考えられる。ある研究は、ＰＤＷＨＦが異なる病因による傷に等しく良く効くことを示している（ナイトン他（Ｋｎｉｇｈｔｏｎｅｔａｌ.,）、１９８８年）。人を対象とした広範な研究で、カーター他（Ｃａｔｅｒｅｔａｌ.,）（１９８８年）は３種の粗調製品：オ−トロガス血清、豚のリゼイト（豚のケラチン細胞から得られた）および子牛血小板リゼイト、を用いた。３種はいずれも非-治癒性の、強く潰瘍化した傷のある患者に試験し、ある程度の成功を見た（カーター他、１９８８年）。哺乳類の眼の抽出物についてもその潜在的な傷治癒特性が試験されてきた。英国特許第１３４２７６１号では、眼の全抽出物が角膜の傷の瘢痕化を強めることが示された。更に英国特許第１６０３０３４号には、抽出物、例えば表皮層の細胞の再生を助けるガラス質からの組織再生抽出物の水溶液を開示している。表皮細胞への同じ効果が米国特許第４，６７０，２５７号明細書でも開示されており、そこでは例えばガラス質からの、眼球組織の水性塩抽出物を用いている。皮膚の表皮層や真皮層でなく、肉芽組織を選択的に標的として傷の治癒を加速することのできる物質を同定し開発する必要性がある。このような物質は傷の治癒管理、特に表皮および真皮のなくなった第２期治癒傷の傷治癒管理に多大の進歩をもたらすであろう。これらの物質はまた損傷した骨の治癒の間に肉芽組織を促進するためにも有用であろう。したがって、本発明のひとつの態様は皮膚組織に対して肉芽組織を選択的に加速成長させることのできる哺乳類眼球組織からのガラス質処方を提供する。ガラス質処方は、単離したガラス質、ガラス質抽出物または必要とする活性をもつガラス質のひとつ以上の成分を含んでいてもよい。ガラス質抽出物は水性抽出物であってもよいし、または塩抽出物であってもよい。ガラス処方は一般的には局部投与に適した形態で適用する。本発明のこの態様では、哺乳類眼球組織のガラス質またはその抽出物を含む局部組成物が提供され、局部組成物として上記ガラス質またはその抽出物は表皮および真皮組織に対して肉芽組織の成長を選択的に加速する。便宜上、ガラス質の「抽出物」という表現は、ガラス質から単離および／または生成された１種以上の活性成分をいう。更に短縮した呼び方として、本発明のガラス質処方および局部組成物を今後ガラス質ベースの治癒処方（ＶＢＨＦ）と呼ぶ。「局部組成物」という用語はここではその最も広い意味で用いられ、皮下組織の１種以上の層および直接骨損傷部への組成物の適用を含む。「表皮組織」という表現はその最も広い意味で用いられ、特にケラチン細胞を目的としている。「真皮組織」という表現もまたその最も広い意味で用いられ、皮膚線維芽細胞を含む。皮下／肉芽組織もまたその最も広い意味で用いられ、血管平滑筋細胞および筋線維芽細胞を含む。本発明はＶＢＨＦは血管平滑筋と筋線維芽細胞の増殖を刺激するが、実質的に皮膚線維芽細胞およびケラチン細胞を刺激しないという発明者らの驚くべき発見に一部基づいている。本発明の好ましい態様では、哺乳類眼球組織のガラス質またはその抽出物を含む局部組成物を提供しており、このガラス質またはその抽出物は血管平滑筋および／または筋線維芽細胞の成長を選択的に刺激するが、皮膚線維芽細胞および／またはケラチン細胞を実質的に剌激しない。その選択的効果は好都合なことにそして特にイン・ビトロで観察され且つ評価される。「ガラス質抽出物」という言葉は哺乳類眼球組織から単離したガラス質、次いで少なくとも１段階の精製または分別を受けたガラス質、またはその中の何らかの活性成分を含む。哺乳類とは一般には、子牛、羊、馬または豚のような家畜類、または山羊またはマウス、兎またはテンジクネズミのような実験用動物である。本発明の最も好ましいガラス質源は子牛からのものである。もう一つの態様では、ガラス質は分別され、単離され精製された成分の一種以上または成分混合物は、ガラス質またはその抽出物同様肉芽組織および皮膚組織に選択的効果がある。本発明のこの態様では、哺乳類ガラス質またはその抽出物から単離可能な成分を提供し、これらの成分は血管平滑筋細胞または筋線維芽細胞のような肉芽組織の成長を加速しまたは促進することができるが、ケラチン細胞および真皮由来の線維芽細胞のような皮膚細胞にはほとんど増殖効果をもたない。この成分は単離され精製されたものであることが好ましく、これは本組成物が、重量、活動度、抗体結合または他の便利な方法により測定して少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３５％、更に好ましくは少なくとも４５％、なお好ましくは少なくとも５５〜６５％、もっと好ましくは少なくとも７５〜９０％の成分を含むことを意味する。本発明のＶＢＨＦは更にその組成物に加えられる一種以上の外因性因子を含んでもよく、これもまた傷治癒過程に役立つであろう。本発明のこの態様で考えられるこのような外因性因子には、ＰＤＷＨＦ、ＦＧＦ、ＥＧＦまたはインシュリン様成長因子（ＩＧＦ）、一種以上の抗生物質または他の抗菌剤またはビタミンＥ、Ｄおよび／またはＫのようなビタミン類が含まれるが、これに限定されるものはない。またＶＢＨＦは医薬的に許容できるキャリアおよび／または希釈剤を含んでもよい。ＶＢＨＦは直接局部に付けてもよいし、あるいは泡剤（ｍｅｄｉｃａｔｅｄｆｏａｍ）、ゲル、クリームまた液体の中に組み込んで使用してもよい。あるいはまた包帯、手当用品、ガーゼまたは縫合糸のような固体マトリックス中に組み込んでもよい。ＶＢＨＦは単離したまたは精製したものであってもよいし、または凍結または冷結真空乾燥されたものであってもよく、この場合には使用前に元へ戻す。ＶＢＨＦに組み込んで役に立つであろう従来の薬剤を記載するためには、ブリティッシュ・ファーマコペイア（ＢｒｉｔｉｓｈＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）（１９８０年）を参考にするのが便利である。本発明のＶＢＨＦは、糖尿病、抹消血管疾患または圧縮ただれ、床ずれに関係ある潰瘍、種々のやけどような真皮組織の損傷、皮下組織／肉芽組織の加速成長を必要とする術後の皮膚を失った皮膚損傷、骨の損傷の際の肉芽組織の加速治癒、皮膚移植に先立つ皮下組織／肉芽組織の加速成長のような肉芽組織の成長を必要とする傷の第２期治癒の傷の治癒に特に有用であると考えられる。本発明のこの態様では、動物の傷の治癒を刺激し、増強し、加速しまたは促進する方法が意図されており、この方法には傷を先に説明した効果的な量のＶＢＨＦと、傷が治療するに充分な時間と条件下で接触することを含む。このような傷は一般に上記の第２期治癒によって治癒される。効果的な量とは傷治癒を剌激し、増強し、加速しまたは促進するに有効なＶＢＨＦの量であり、これは血管平滑筋細胞または筋線維芽細胞を刺激し、ケラチン細胞または皮膚線維芽細胞には実質的に効果的な刺激がないということで評価するのが便利である。上記の「傷」という言葉は骨の損傷も含んでいる。治療の対象となる動物はひと、先に説明した家畜動物類、先に説明した実験動物類、愛玩動物（例えば、犬または猫）または捕獲した野生動物であってもよい。しかし最も好ましい動物はひとである。傷治癒プロトコルにはＶＢＨＦの一回きりの適用も含まれるし、または治療すべき傷、傷の大きさおよび患者の治癒能力によって１時間ごと、１日２回、数日ごと、毎週、数週間ごと、または毎月のように何回かの適用も含んで良い。この方法はまた更に抗生物質または他の抗菌剤、麻酔薬または他の傷治癒促進剤の一種以上と共に治療することを含んでいてもよい。ＶＢＨＦは単離して使用してもよいし、濃縮または希釈を必要とするかも知れない。ここで意図している希釈は１：２から１：１０の大きさであるが、好ましくは１：２から１：５である。ＶＢＨＦを濃縮する場合は、凍結真空乾燥または濾過を含むいくつかの方法で行ってもよく、濃縮の範囲は２から１０倍である。もうひとつの態様では、ＶＢＨＦは凍結真空乾燥を行うなどして非液体形態で使用してもよい。このような形態は包帯、手当用品、ガーゼまたは縫合糸のような固体マトリックスへ適用するのに特に有用であるかもしれない。本発明を更に限定を意味するものでない以下の図および／または実施例によって記述する。図面の簡単な説明図１は傷治癒の段階を示す図式表現である。図２は血管平滑筋細胞への三重水素で標識したチミジンの結合に及ぼすＶＢＨＦの効果の図式表現である。図３は筋線維芽細胞への三重水素で標識したチミジンの結合に及ぼすＶＢＨＦの効果の図式表現である。図４は造骨細胞への三重水素で標識したチミジンの結合に及ぼすＶＢＨＦの効果の図式表現である。図５は皮膚線維芽細胞への三重水素で標識したチミジンの結合に及ぼすＶＢＨＦの効果の図式表現である。図６はケラチン細胞への三重水素で標識したチミジンの結合に及ぼすＶＢＨＦの効果の図式表現である。図７は血管内皮への三重水素で標識したチミジンの結合に及ぼすＶＢＨＦの効果の図式表現である。図８は血管平滑筋の増殖に及ぼすＶＢＨＦの効果を示す図式表現である。図９は筋線維芽細胞の増殖に及ぼすＶＢＨＦの効果を示す図式表現である。図１０は皮膚線維芽細胞の増殖に及ぼすＶＢＨＦの効果を示す図式表現である。図１１はケラチン細胞の増殖に及ぼすＶＢＨＦの効果を示す図式表現である。図１２は血管内皮の増殖に及ぼすＶＢＨＦの効果を示す図式表現である。図１３は血管平滑筋細胞の移動に及ぼすＶＢＨＦの効果を示す図式表現である。図１４は筋線維芽細胞の移動に及ぼすＶＢＨＦの効果を示す図式表現である。図１５は皮膚線維芽細胞の移動に及ぼすＶＢＨＦの効果を示す図式表現である。図１６はケラチン細胞の増殖に及ぼすＶＢＨＦの効果を示す図式表現である。図１７は血管平滑筋の形態に及ぼすＶＢＨＦの効果を示す写真表現である。Ａ：ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖのＦＣＳ；Ｂ：ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖのＦＣＳと１：２希釈ＶＢＨＦ；Ｃ：ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖのＦＣＳと１：４希釈ＶＢＨＦ図１８は筋線維芽細胞の形態に及ぼすＶＢＨＦの効果を示す写真表現である。Ａ：ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖのＦＣＳ；Ｂ：ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖのＦＣＳと１：２希釈ＶＢＨＦ；Ｃ：ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖのＦＣＳと１：４希釈ＶＢＨＦ図１９は皮膚線維芽細胞の形態に及ぼすＶＢＨＦの効果を示す写真表現である。Ａ：ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖのＦＣＳ；Ｂ：ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖのＦＣＳと１：２希釈ＶＢＨＦ；Ｃ：ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖのＦＣＳと１：４希釈ＶＢＨＦ図２０はケラチン細胞の形態に及ぼすＶＢＨＦの効果を示す写真表現である。Ａ：ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖのＦＣＳ；Ｂ：ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖのＦＣＳと１：２希釈ＶＢＨＦ；Ｃ：ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖのＦＣＳと１：４希釈ＶＢＨＦ実施例１ガラス質の単離屠殺したばかりの子牛の眼から次のようにしてガラス質を取り出す。好ましくは以下に概略説明した方法はすべてフード内の層流中で行う。（ｉ）眼の外側を７０％ｖ／ｖエタノール中で洗浄する。（ii）１９Ｇの針を付けたシリンジを水性ガラス質液の入っている窪みに差し込み、水性ガラス質液を収集する。（iii）角膜の回りをメスで切開し、角膜を取り出す。（iv）鉗子を用いて水晶体を取り出す。（ｖ）次いでガラス質を無菌の１０ｍｌシリンジ中に収集する。（vi）次にシリンジとその中身を−７０℃で凍結する。実施例２ガラス質ベースの治癒処方剤の調製実施例１の方法によりＶＢＨＦを単離して用い、または付加的成分として、一種以上の医薬的に許容できるキャリアおよび／または希釈剤、ベクロメタゾン（Ｂｅｃｌｏｍｅｔｈａｓｏｎｅ）またはセトリミド（Ｃｅｔｒｉｍｉｄｅ）のような乳化成分または塩水溶液、蛋白質、抗生物質、炭水化物から選ばれる成分を加える。それに代わるものとしてまたはそれに加えて、ガラス質は不要な成分を除くためにまたは必要な活性成分を単離し精製するために分別する。ＶＢＨＦを調製したら、それをそのまままたは凍結してまたは冷結真空乾燥して保存または輸送する。実施例３傷の治療（ｉ）傷を創縁切除し、感染があれば適当な抗生物質または抗菌剤を適用してそれを除く。（ii）傷を０．９％ｗ／ｖ無菌塩水溶液中で洗浄する。（iii）ＶＢＨＦの１ｍｌのアリコートをシリンジ中から使用し、傷の上に均等にかける。（iv）プラスチックを裏張るしたガーゼ（傷と同じ大きさに切ってある）を０．９％ｗ／ｖの無菌塩水溶液で湿らせ、これを傷の上に置く。（ｖ）ガーゼの上からプラスチックのラップで覆う。（vi）治療は１２時間毎に繰り返す。実施例４皮膚移植片の調製（ｉ）肉芽組織の適当な層ができるまで、実施例３のステップ（ｉ）から（ｖ）を行う。（ii）それから成長しつつある真皮組織に皮膚移植片を適用することができる。（iii）必要ならＶＢＨＦによる治療を続ける。実施例５虚血潰瘍の治療病院環境で臨床治療を行った。患者は左脚部下方に５ｃｍ×３ｃｍの潰瘍がある以外は健康な７２才の男性であった。潰瘍は６カ月にわたって行われてきた種々の専売の手当用品に答えることができなかった。加えて、この治療期間中皮膚移植も行われてきたが、結果として患者は何回も入院を必要とした。このような治療法はいずれも不成功であった。傷は表皮と真皮の組織を欠いており、広範な肉芽組織成長による第２期の治癒を必要とした。患者は、実施例３で概略説明したＶＢＨＦの適用を１２時間毎に行う治療法を開始した。この治療の結果、患者の潰瘍は１４日たって完全に治癒し、１８カ月の試験期間中全く再発はなかった。実施例６糖尿病潰瘍の治療病院環境で臨床治療を行った。患者は右脚下部に７ｃｍ×４ｃｍの慢性潰瘍がある以外は健康な７６才の男性であった。２５年にわたって種々の専売の手当用品と皮膚移植法が行われたが治癒は完全でなく、その間潰瘍は再発していた。傷の治癒を成功させるためには肉芽組織の成長加速が必要であった。患者は実施例２に概要説明したＶＢＨＦを局部適用して治療を開始した。この治療法の結果、患者の潰瘍は１２日後には９０％治癒し、２２日後には完全に治癒した。そして１７カ月の試験期間中、潰瘍の再発はなかった。実施例７外傷後の潰瘍の治療最初病院環境で臨床治療を行い、後には自宅で患者自体が行った。患者は外傷後の潰瘍が治っていない４８才の女性であった。潰瘍は５ｃｍ×５ｃｍの大きさで左脚部の下部にあった。種々の手当用品を用いた方法では潰瘍の治癒に進展はなく、新しい皮膚の成長も求められなかった。それに加えて、５年間の潰瘍病歴中、繰り返し皮膚移植により短期間傷は回復したが、皮膚移植片はいずれも退化してしまった。傷は上皮と真皮の両方の組織を含む表皮組織がなく、傷治癒がうまく行くためには肉芽組織成長を必要とした。患者は実施例３に概略説明したＶＢＨＦの局部適用を含む治療法を開始した。この治療の結果、潰瘍は２１日後完全に治癒した。実施例８糖尿病潰瘍の治療８２才の女性患者に病院環境で臨床治療を行った。患者は次の２個の潰瘍をもっていた：ひとつは右足前部（５ｃｍ×２ｃｍ）、他方は右脚部の裏側（１０ｃｍ×１０ｃｍ）であった。どちらの潰瘍も糖尿病が原因となっている抹消血管限定の結果であった。潰瘍は５カ月にわたる種々の専売の手当用品と高圧治療の効き目がなかった。裏側の潰瘍は腱を通って浸透し、脚の切断も有り得るものであった。患者は右脚部裏側の潰瘍に対して、ＶＢＨＦ（実施例３に概要を記載した）の局部適用を含む治療法を開始した。右足前部の潰瘍にはコントロールとして１規定の塩水溶液を適用した。１４日後、右脚裏側の潰瘍は肉芽組織が広範に成長したが、右足前部の潰瘍は変化がなかった。右脚裏側の潰瘍は次いで実施例４に概略説明した治療法を開始した。どちらの場合でも、肉芽組織が速やかに成長し、２２日後右足前部の潰瘍は完全に治癒し、一方右足前部の潰瘍は３８日後に完全に治癒した。実施例９ＶＢＨＦの選択的効果１．細胞源血管平滑筋細胞１２週令のウサギの大動脈を標準法（ギャンベルおよびキャンベル（ＣａｍｐｂｅｌｌａｎｄＣａｍｐｂｅｌｌ）、１９９３年）による酵素分散（ｅｎｚｙｍａｔｉｃｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ）することによって、血管平滑筋細胞を得た。細胞は牛の胎児の０．５％ｖ／ｖの血清を加えたダルベコ’ズ・ミニマル・エッセンシャル・メディアム（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｉｎｉｍａｌＥｓｓｅｎｔｉａｌＭｅｄｉｕｍｕ）（ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ）中で培養した。筋線維芽細胞筋線維芽細胞を、コーンオイル中の１％ｖ／ｖハズ油１ｍｌ、次いで２０ｍｌの空気をラットに皮下注射することにより誘導したセリェの肉芽腫パウチ（Ｓｅｌｙｅ’ｓｇｒａｎｕｌｏｍａｐｏｕｃｈ）（セリェ、１９５３年）を酵素分散して得た。細胞はＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ中で培養した。皮膚線維芽細胞ひとの皮膚線維芽細胞をシドニー大学（ニュー・サウス・ウエールズ、オーストラリア）のレベッカ・メイゾン（ＲｅｂｅｃｃａＭａｓｏｎ）博士から入手し、ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ中で培養した。ケラチン細胞ひとのケラチン細胞（表皮）を、ケラチン成長媒体（ＫＧＭ）と共にシドニー大学（ニュー・サウス・ウエールズ、オーストラリア）のレベッカ・メイゾン（ＲｅｂｅｃｃａＭａｓｏｎ）博士から入手した。実験用に細胞をＤＭＥＭ中で培養した。内皮細胞内皮細胞をホリガン等（Ｈｏｒｒｉｇａｎｅｔａｌ.,）の方法（１９８８年）で子牛の大動脈から単離し、ＲＰＭＩ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳの媒体中で培養した。２．ＶＢＨＦＶＢＨＦを氷上に置いたプラスチックシリンジ中で実施例１および２にしたがって調製した。ＶＢＨＦを必要なときまで凍結して保存し、使用時に、ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳまたはＲＰＭＩ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ（内皮細胞）のどちらかの中で、１：２、１：４、１：８および１：１６に順次希釈した。汚染を抑制するためにペニシリンＧを用いた。３．³Ｈ-チミジンの結合血管平滑筋細胞ＤＭＥＭ＋１０％ｖ／ｖＦＣＳ中に置いた２４ウエル（ｗｅｌｌ）の植物中へ５×１０⁴細胞／ウエルの細胞を植え付けた。細胞は１８時間ぴったりとくっつけたままにし、それから細胞をＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ中で完全に洗浄した。次いでウエルを６グループに分割して、１グループ４個のウエルとし、次の条件下に置いた：１．ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ２．ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ＋１：２ＶＢＨＦ３．ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ＋１：４ＶＢＨＦ４．ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ＋１：８ＶＢＨＦ５．ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ＋１：１６ＶＢＨＦＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳを含むウエルはＶＢＨＦを加えたものに対してコントロールとして作用した。細胞は更に３７℃で２４時間インキュベートし、その時点で各ウエルに０．５ｍＣｉの³Ｈ-チミジン（アメルシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ））を加えた。４時間のインキュベート後、細胞を２．５ｃｍのガラスマイクロファイバー製フィルター（ワットマンインターナショナル、英国）上で採取し、洗浄し、３ｍｌの水で３回溶解（Ｉｙｓｅ）した。フィルターを風乾し、それから７ｍｌのベックマン・レディー・セイフ（ＢｅｃｋｍａｎＲｅａｄｙＳａｆｅ）発光体を加えたシンチレーションびんに入れた。ベックマン・ＬＳ６０００ＴＡ・β-カウンター中で、ブランクに比較して試料のカウントを計測した。各実験条件の４個のウエルを平均し、コントロール（ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ）と統計的に比較した。分散のワンウエイ解析のためにシグマスタット（Ｓｉｇｍａｓｔａｔ）統計プログラムを利用した。１：２および１：４希釈のＶＢＨＦはこれらの実験の各々において（図２）、平滑筋細胞への³Ｈ-チミジン吸収をコントロールよりも約６．４倍刺激した。１：８および１：１６希釈のものも³Ｈ-チミジン吸収を刺激したが、その程度は少なく、投与量に依存していた。³Ｈ-チミジンの吸収の刺激は試験したすべての希釈物にとって意味のあるものであった。希釈比１：２および１：４のＶＢＨＦはポジティブのコントロール（ＤＭＥＭ＋１０％ｖ／ｖＦＣＳ）よりも更に³Ｈ-チミジン吸収を刺激した（図２）。筋線維芽細胞細胞を５×１０⁴細胞／ウエル個植え付けた。プロトコルは上記のものと同じであった。１：２希釈のＶＢＨＦは３つの実験の各々において、コントロール以上（１．７倍）に筋線維芽細胞への³Ｈ-チミジンの吸収を刺激した（図３）。他の希釈比のもの（１：４、１：８および１：１６）はいずれも³Ｈ-チミジン結合にそれほどの増加は認められなかった。皮膚線維芽細胞細胞を５×１０⁴細胞／ウエル個植え付けた。プロトコルは上記のものと同じであった。１：４および１：８希釈のＶＢＨＦは皮膚線維芽細胞への³Ｈ-チミジンの結合を相当減少させたが、１：２および１：１６希釈のＶＢＨＦは全く効果がなかった（図５）。ケラチン細胞プロトコルは上記のものと同じであった。１：４、１：８および１：１６希釈のＶＢＨＦは結合を減少させたが、１：２希釈のものは全く効果がなかった（図６）。内皮細胞プロトコルはコントロールの媒体がＲＰＭＩ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳである以外は上記の通りであった。すべての希釈倍率のＶＢＨＦについて、内皮細胞への³Ｈ-チミジンの結合をかなり減少させた（図７）。４．細胞増殖細胞増殖に及ぼす希釈率１：２、１：４、１：８および１：１６でのＶＢＨＦの効果を評価するために実験を行った。細胞を板状に広げ（ｐｌａｔｅｏｕｔ）、１８時間ぴったりくっつけたままにした。次いで実験時間ゼロでの細胞の数を測定するためにヘモサイトメータ（ｈａｅｍｏｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）を用いて４個のウエルをカウントした。残りのウエルはＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ（または内皮細胞の場合はＲＰＭＩ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ）で洗浄し、それから次のような適当な媒体を供給した：１．ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ２．ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ＋１：２ＶＢＨＦ３．ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ＋１：４ＶＢＨＦ４．ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ＋１：８ＶＢＨＦ５．ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ＋１：１６ＶＢＨＦ内皮細胞の場合は、上記の１から５のプロトコルはＲＰＭＩ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳを用いて行った。実験はそれぞれの細胞タイプにつき、１条件当たり４個のウエルを用いて行った。細胞のカウントは血管平滑筋細胞と筋線維芽細胞では２日目、皮膚線維芽細胞と内皮細胞では３日目、そしてケラチン細胞では５日目に行った。これは細胞タイプの違いによる増殖速度の違いを反映していた。血管平滑筋細胞平滑筋細胞の数は１：２および１：４希釈のＶＢＨＦが存在する場合は２．５倍とかなり増加したが、１：８および１：１６倍希釈の場合は効果がなかった（図８）。筋線維芽細胞筋線維芽細胞の数は１：２希釈のＶＢＨＦの場合のみコントロールよりかなり増加した（図９）。皮膚線維芽細胞どの希釈率のＶＢＨＦでも皮膚線維芽細胞の数はほとんど変化はなかった（図１０）。ケラチン細胞同様に、ケラチン細胞の数も、どの希釈率のＶＢＨＦでもほとんど変化はなかった（図１１）。内皮細胞１：２、１：４および１：８希釈のＶＢＨＦでは内皮細胞の場合増殖妨害が見られた（図１２）。ゼロ日目の細胞数は４．０８±０．５１×１０⁴細胞／ウエルであったが、１：２倍希釈のＶＢＨＦの場合、３日目では６．７８±０．４５ ×１０⁴細胞／ウエルであり、ＲＰＭＩ＋０．５％ｖ／ｖ血清だけの場合は３日目で２５．０９±３．１９×１０⁴細胞／ウエルであった。成長妨害効果は投与量依存性があり、１：１６希釈のＶＢＨＦの場合には細胞数はコントロールであるＲＰＭＩ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳのレベルになった（図１２）。５．細胞移動５種類の細胞タイプについて、１×１０⁵細胞／ｍｌの濃度でＤＭＥＭ＋１０％ｖ／ｖＦＣＳ（内皮細胞の場合はＲＰＭＩ＋１５％ｖ／ｖＦＣＳ）中に懸濁させ、次いで各ウエルの中心に置いた環状のウエルインサートの中へ２００μｌをピペットで入れた。細胞を層全面（ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）中へ終夜ぴったりとくっつけたままにしておき、インサートを取り除き、細胞を充分に洗浄して、実験媒体を加えた。それぞれの細胞をタイプにつき、各実験条件当たり４個のウエルを用いた。実験条件は上記と同じであった（１〜５）。インサートを取り除き、実験媒体を加えたら、細胞を７日間にわたって細胞の中心のサークルから半径方向への移動を自由に行わせた。３日目に新しい媒体とＶＢＨＦを加えた。７日目に細胞は中和緩衝剤処理した１０％ホルマリン中で固定し、１％ｖ／ｖのトルイジンブルーで染色した。細胞によって覆われた培養基質の面積をポイントカウンティングモルフォメトリー（ｐｏｉｎｔｃｏｕｎｔｉｎｇｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｙ）によって測定し、全ウエル表面のパーセントとして表した。各細胞タイプ当たり４個のウエルは、実験時間ゼロで固定し、染色した。血管平滑筋細胞１：２および１：４希釈のＶＢＨＦの存在では、血管平滑筋細胞の移動はＤＭＥＭ＋０．５ｖ／ｖＦＣＳを含むコントロールウエルよりもかなり増加した（図１３）。その効果は投与量依存性であった。血管平滑筋細胞は単層として成長しないで、細胞成長が刺激される状況では細胞は多層となって成長することができる。これは１：２および１：４希釈のＶＢＨＦが存在する場合およびポジティブコントロールの場合に顕著であり、トルイジンブルーによる染色も培養基質の面積のより広い範囲にわたるだけでなく、強度も著しく強かった。筋線維芽細胞１：２希釈のＶＢＨＦの場合のみ、筋線維芽細胞の移動をコントロールよりもかなり刺激した（図１４）。皮膚線維芽細胞ＶＢＨＦのどの希釈倍率についてもコントロールと比べて、皮膚線維芽細胞の外方向への成長に顕著な差はなかった（図１５）。ケラチン細胞同様に、どの希釈倍率のＶＢＨＦでもケラチン細胞の移動に効果はなかった。内皮細胞７日後に細胞で覆われた培養基質の面積は、ＶＢＨＦを加える前の日数ゼロ時点のものよりも小さくなっており、１：２および１：４希釈倍率のＶＢＨＦは内皮細胞にとって毒性があるようであった。その効果は、１：８および１：１６では毒性効果はより少なく、投与量依存的である。６．細胞形態ＶＢＨＦによって誘発される細胞の形、大きさまたは配向の何らかの変化を観察するために、各細胞タイプにつき４個のウエルを次のものに曝した：１．ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ２．ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ＋１：２希釈ＶＢＨＦ３．ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ＋１：４希釈ＶＢＨＦ内皮細胞の場合は、１〜３はＲＰＭＩ＋０．５ｖ／ｖＦＣＳを用いて行った。血管平滑筋細胞１：２および１：４希釈のＶＢＨＦが存在する場合はいずれも、平滑筋細胞の数はコントロール（ＤＭＥＭ＋０．５％ｖ／ｖＦＣＳ）よりもはっきり増加したが、細胞が全面にわたっていること以外は、細胞の形、大きさまたは配向の変化はほとんどなかった（図１７）。筋線維芽細胞これに対して、筋線維芽細胞の形は１：２希釈ＶＢＨＦが存在する場合、コントロールの平べったい細胞（図１８Ａ）から自動性細胞特有の長く伸びたリボン型へと変化した（図１８Ｂ）。その程度はより少ないが１：４希釈ＶＢＨＦの場合も同様であった（図１８Ｃ）。皮膚線維芽細胞皮膚線維芽細胞の形態は、１：２または１：４希釈のＶＢＨＦまたは０．５％ｖ／ｖＦＣＳが存在しても特に変化はなかった（図１９）。ケラチン細胞ケラチン細胞を最初培養した時は、細胞は平らで、表皮様であり単層成長していた。二つの区別できる細胞集団が明瞭に存在し、全面単層で一様に広がったより大きい細胞のより小さい集団が存在した。増殖と移動のすべての研究をこの表現型の細胞について行ったところ、１：２および１：４希釈のＶＢＨＦは形態に効果がなかった。結果を図２０に示した。実施例１０造骨細胞の増殖に及ぼすＶＢＨＦの効果ひとの胎児の造骨細胞様の細胞の培養物をＶＢＨＦを用いて処理し、イン・ビトロでの造骨様細胞の細胞分裂速度を変調するビタミンＤ１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃ およびＴＧＦ-βによりもたらされる効果と比較した。試験パラメータとして４８時間処理後の細胞の数および細胞への［³Ｈ］-チミジンの結合を比較することが含まれている。ふたつのコントロール処理と比較して既知および未知の処理を試験した。第１のものは処理を行わず、第２のコントロールにはダルベコのＰＢＳを用いてその初期濃度の７５％ｗ／ｖに希釈しておいた媒体中で培養した細胞を含んだ。組成物は氷の上で受け取り、０-４℃の冷凍庫中に保存した。第１次細胞培養物（長い骨の繊維性小柱（ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ）の端からのもの）ＦＢＣ２００８９３の入った２個のフラスコをトリプシン処理（ｔｒｉｐｓｉｎｉｓｅ）し、細胞を洗浄し、ＢＧＪ媒体（ＧＩＢＣＯ）１ｍｌ中に６×１０⁴細胞の濃度で再懸濁し、ホスホアスコルベートと１０％ｖ／ｖＦＣＳを補充した。細胞は２４ウエルの培養物プレート中の１ｍｌアリコート中に終夜放置した。媒体は翌日アスパイアー（ａｓｐｉｒｅ）し、１ｍｌ／ウエルの２％ｖ／ｖＦＣＳを補充したＢＧＪ媒体と入れ替えた。種々のファクターを培養物へ持ち込む方法の概要を表１に記載した。４個のものについて実施した処理は２４のウエルのプレートの列（ｃｏｌｕｍｎ）にランダムに配置した。各々の処理の培養物を４８時間インキュベートし、その後培養物は細胞濃度または［³Ｈ］-チミジン結合の測定に供した。処理の結果としての細胞培養物の違いはマイクロ・ソフト・エクセルのパッケージのＡＮＯＶＡを用いて評価した。処理間の差の有意性はテューキー（Ｔｕｋｅｙ）の多重相関（ｍｕｌｔｉｐｌｅｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ）法を用いてｐ＜０．０５レベルで行った。０．５ｎｇ／ｍｌ濃度のＴＧＦ-βによる細胞の処理は細胞の形態に影響を与えた。培養物はＰＢＳまたは無処理（Ｎｉｌｔｒｅａｔｍｅｎｔ）のいずれの処理によるものよりもより全面的であるように見えた。ＴＧＦ-βで処理した培養物は立方体形態をもった細胞のパーセントがより高いようであったが、ＰＢＳコントロール培養物は繊維芽細胞形態をしている細胞が支配的であった。ＶＢＨＦで処理した培養物はＴＧＦ-βで処理した培養物と同じ形態および同じ培養物表面被覆状態であった。これらふたつの処理を受けた培養物は十分全面的であるように見えた（培養物表面を全面的に被覆している）。ＡＮＯＶＡを９５％信頼限界（ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅｉｎｔｅｒｖａｌ）で使用した結果、ＶＢＨＦおよびＴＧＦ-βで処理した培養物とＰＢＳで処理した培養物の間には細胞数に統計的有意差があった。 ³Ｈ-チミジン結合の結果は図４に示してある。ＡＮＯＶＡを用いてこれらのデータを解析した結果、未処理２％ＦＣＳ補充ＢＧＪ媒体中に保持した培養物と媒体がダルベコのＰＢＳで元の濃度の７５％に希釈した培養物とのチミジン結合速度の間には有意差はないことがわかった。ＰＢＳで処理した培養物とＶＢＨＦで処理した培養物との間には有意差がある（ｐ＜０．０５）。ＰＢＳを用いて培養媒体を元の濃度の７５％に希釈することは、未処理コントロールと比較した場合、ひとの胎児の骨に由来する細胞の細胞数または細胞分裂分裂の速度に及ぼす効果はほとんどなかったようである。これらの組成物を使用するには培養媒体をその通常の濃度の７５％へ希釈することを必要としたので、したがって、培養媒体をＰＢＳで７５％に希釈したものは、提供された組成物の効果を評価するためのコントロールとしてより適当であると考えられた。ＴＧＦ-βはファクターが使用される系に依存して骨細胞に多くの効果を及ぼすことが明らかになってきている。本研究では、ＴＧＦ-βは細胞増殖を減じ、それに相当してチミジン結合を減少する。ＴＧＦ-β処理によるこの細胞分裂の妨害は恐らく本研究で用いた細胞密度に関係したであろう。低い細胞濃度では造骨細胞様細胞の培養は初期の分化段階、したがって細胞分裂が速い段階にある細胞が支配的になる傾向がある。このような場合には、ＴＧＦ-βの主効果は細胞にこの分化段階の進行を促進させ、同時に細胞分裂の速度を低下させる。逆に骨細胞培養物の濃度が高いときには細胞は分化する傾向がある。このため細胞分裂の速度を減少することになる。このような培養物をＴＧＦ-βで処理するときは、培養物は細胞分裂を増加する傾向がある。このことはＴＧＦ-βが異なった条件下で細胞分裂の速度に異なる影響を与えることを説明している。本研究に於ける分化の状態は細胞形態の観察によって定性的に評価することができる。培養物中で分化した造骨細胞はより立方体形態を示し、一方分化の少ない細胞は培養した線維芽細胞に似ている。培養物中で立方体の形をした細胞のパーセンテージが増すにつれて、ＴＧＦ-βとＶＢＨＦとは細胞形態に影響するようになる。分化状態を評価するより定性的な方法はアルカリホスファターゼの生産のような分化の生化学的な標識を測定することである。ＶＢＨＦで処理した細胞はコントロール培養物の細胞よりもより立方体であり、より大きかった。更に、この組成物で処理した培養物は４８時間後には完全に全面的であった。ＶＢＨＦによる骨細胞培養物の処理は、４８時間のインキュベーション期間中ずっとコントロール培養物と比べてかなり細胞数が少ないようであった。しかし、４８時間の終了時点ではチミジン結合の刺激が見られた。４８時間の終了時点での細胞数（処理期間中の増殖の尺度である）と４８時間処理の最後の４時間にわたって測定したチミジン結合との間の違いは、ふたつの異なる時間帯での細胞の活性を反映しているのかもしれない。ＶＢＨＦは分化効果をもっているということが有り得る。これらの培養物中での細胞の分化のあと、チミジン結合として測定した増殖活性が増加するのかもしれない。この増殖の増加は最初の４８時間を越えたある時間範囲に対しては細胞の増加によっては測定できないかもしれない。参考文献：

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者デイビー、ピーター・ジェームズオーストラリア連邦2122ニュー・サウス・ウェールズ、イーストウッド、クランウィリアム・ストリート31番

Claims

【特許請求の範囲】１．皮膚組織に較べて肉芽組織の成長を選択的に加速する、哺乳類眼球組織のガラス質またはその抽出物を含む局部用組成物。２．更に一種以上の医薬的に許容できるキャリアおよび／または希釈剤を含む請求項１記載の局部用組成物。３．更に一種以上の傷治癒促進剤および／または抗菌剤を含む請求項１または２記載の局部用組成物。４．眼球組織が家畜動物由来のものである請求項１記載の局部用組成物。５．家畜動物が子牛、羊、馬、豚種および山羊からなる群から選ばれる請求項４記載の局部用組成物。６．家畜動物が子牛種である請求項５記載の局部用組成物。７．固体支持体上に固定または染み込ませた請求項１記載の局部用組成物。８．固体支持体が包帯、手当用品（ｄｒｅｓｓｉｎｇ）、ガーゼまたは縫合糸である請求項７記載の局部用組成物。９．イン・ビトロで血管平滑筋細胞および／または筋線維芽細胞の成長を選択的に刺激するが、皮膚線維芽細胞および／またはケラチン細胞の成長を刺激しない、哺乳類眼球組織由来のガラス質またはその抽出物を含む局部用組成物。１０．更に一種以上の医薬的に許容できるキャリアおよび／または希釈剤を含む請求項９記載の局部用組成物。１１．更に一種以上の傷治癒促進剤および／または抗菌剤を含む請求項９または１０記載の局部用組成物。１２．眼球組織が家畜動物由来のものである請求項９記載の局部用組成物。１３．家畜動物が子牛、羊、馬、豚種および山羊からなる群から選ばれる請求項１２記載の局部用組成物。１４．家畜動物が子牛種である請求項１３記載の局部用組成物。１５．固体支持体上に固定または染み込ませた請求項９記載の局部用組成物。１６．固体支持体が包帯、手当用品、ガーゼまたは縫合糸である請求項１５記載の局部用組成物。１７．冷結真空乾燥状態にあり、必要に応じて使用前に水性媒体中で戻される請求項１または９記載の局部用組成物。１８．請求項１または９記載の組成物の効果的な量を、ある期間傷の治癒を促進するに充分な条件下で、傷と接触させることを含む、動物の傷の治癒を増強しまたは加速するための方法。１９．治療されるべき動物がひと、家畜動物または愛玩動物である請求項１８記載の方法。２０．治療されるべき動物がひとである請求項２０記載の方法。２１．傷が第２期治癒（ｓｅｃｏｎｄａｒｙｉｎｔｅｎｔｉｏｎ）によって治癒される請求項１８記載の方法。２２．傷が潰瘍である請求項２１記載の方法。２３．傷が真皮組織にわたる損傷である請求項１８記載の方法。２４．傷が骨の損傷である請求項１９記載の方法。２５．治癒されるべき傷が皮膚の移植である請求項１８記載の方法。２６．傷が表皮または真皮組織を欠いている手術後の皮膚損傷である請求項１８記載の方法。２７．更にもうひとつの傷治癒促進剤および／または抗菌剤の局部適用を含む請求項１８記載の方法。２８．眼球組織が家畜動物に由来するものである請求項１８記載の方法。２９．家畜動物が子牛、羊、馬、豚種および山羊からなる群から選ばれる請求項２８記載の方法。３０．家畜動物が子牛種である請求項２９記載の方法。３１．組成物が包帯、手当用品、ガーゼまたは縫合糸上に局部適用される請求項１８記載の方法。