JPH08501153A

JPH08501153A - 液体の凝固／溶解を検出する方法および装置

Info

Publication number: JPH08501153A
Application number: JP6506687A
Authority: JP
Inventors: トーマスイクスナー
Original assignee: グラディポールリミテッド
Priority date: 1992-09-04
Filing date: 1993-09-06
Publication date: 1996-02-06
Also published as: EP0738389A4; CA2143842A1; US5601995A; WO1994006007A1; EP0738389A1

Abstract

(57)【要約】試験試料が液体状態と凝固状態との間で変化する該試料の感受性を試験する方法および装置。試験試料（４）を多孔質シートに付着される。試料は、多孔質シートを通り流れが止まった際凝固するまで、シートを介して拡散する。試料の拡散の範囲または試料の拡散の割合を示すパラメータ、例えばシート（１）の両側の薄い電極（２，３）の間の導電率／インピーダンスを評価することにより、試料の凝固および／またはその後の溶解がおこる時を決定することができる。

Description

【発明の詳細な説明】液体の凝固／溶解を検出する方法および装置発明の分野本発明は、若干の液体が凝固し、次に溶解する感受性を検出する装置および方法に関する。本発明の装置および方法は、患者における血液凝固状態を評価するのに特に適する。これらはまた、患者における繊維素溶解状態を評価するのに適合する。背景技術広範囲の実験室凝固試験が、終点として試験溶液が液体から凝固形態に変化する際の相の変化を測定する現象に基づいている。この変化は、可溶性血漿タンパク質フィブリノーゲンが酵素トロンビンの作用により不溶性のフィブリンに転化することに基づく。また、逆の変化は、溶液の溶解活性を測定し、これにより不溶性フィブリンが酵素プラズミンにより可溶性分解生成物に崩壊する試験において用いられる。例えば、血液凝固試験は、抗凝血物質または止血欠陥により治療した患者における出血の可能性を評価するのに重要である。最も頻繁に実施される凝固試験、皮膚出血時間の終点は、標準化された皮膚切開からの血流の停止である。これは通常、傷口からの血流が停止するまでの傷口の周期的ブロッティングにより決定される。この試験は通常血小板の欠陥により特に長くなる。他の凝固試験は通常、試験血漿と特定の試薬とを混合し、混合物が突然凝固する終点までの時間を計ることにより実施される。凝固終点は、チルドチューブによるように物理的に、または光電子的凝固機械によるように増加した濁度により光学的に決定される。この現在のイノベーションは、多くの先駆的な開発により刺激された。これらの第１のものは、好都合なドライカード、例えばナイコカード(Nyco Card) （ナイコメドファーマ(Nyco Med Pharma)）を、抗体反応（例えばＦＤＰ，Ｄ −ダイマー）を迅速に試験するのに用いることである。これらの装置は免疫反応性膜に面する多孔質モジュールを有する。試験試料をこのような表面に塗布し、毛管作用により吸引する。試験に用いる抗原または抗体を、連続的洗浄およびインキュベーション段階の後の色反応により定量する。第２に、小さい毛管凝固試験装置が最近開発された。これらは、レーザー（バイオトラック(Bio Track) 、チバ−コーニング(Ciba-Corning)）または感圧系（ナイコメド）を用いて検出した凝固を伴う小さい毛管に吸引された血液または血漿に基づく。このような装置の１つは乾燥凝固剤を特徴とし、一方他のものは未塗布ガラス毛管に依存する。不都合なことに、これらの従来技術の装置は、レーザーまたは感圧装置を必要とする極めて複雑なものである。液体が凝固するかまたは溶解する感受性を測定するのに在来の方法および装置より一層簡単で好都合であり且つ一層適合する方法および装置が必要とされていることは当業者に明らかである。臨床的に携帯的形態で用いられるかあるいはまた組立てられて中央実験室においてはるかに多数の試料を処理することができる小さい試験モジュールを提供するのが望ましい。現在、凝固／溶解試験領域には携帯迅速方法に対する重要な市場がある。比較的大きい実験室は通常、大規模操作のために高価な高性能装置を購入する。小さい安価な臨床試験装置は、特に患者の結果の迅速な解釈が必要であり、スクリーニング試験がまれにのみ陽性である多くの臨床的事態において重要な役割を有する。従来技術の欠点を改良するために、従来技術より選択され、少なくとも好適例において従来技術の装置より安価であり、使用および製造が容易である、試験試料が凝固状態と液体状態との間で変化する傾向を測定する方法および装置を提供することを提案する。発明の開示第１の概念において、本発明は、試験試料が液体状態から凝固状態へ変化する傾向を検出するにあたり； (i) 不浸透性層と接触している多孔質シートの少なくとも一方の表面に多孔質シートを設け、 (ii)試験試料をシートの露出表面に付着させ、 (iii) 試料をシートの一部を介して拡散させ、 (iv) 試験試料が凝固する傾向を示す試料のシートにおける拡散の程度および／または試料のシートにおける拡散の速度を示すパラメータを評価することを特徴とする検出方法を提供する。第２の概念において、本発明は、試験試料が液体状態と凝固状態との間で変化する傾向を検出する装置において、多孔質シート、このシートの一方の表面と接触している不浸透性層および凝固／溶解検出手段を備え、検出手段が、試料のシートにおける拡散の程度および試料のシートにおける拡散の割合を示すパラメータを評価するように適合されていることを特徴とする検出装置を提供する。本発明の方法および装置は以下のように操作する。試験試料が多孔質シートに付着すると、該試料は付着点からシートの領域を介して分散する。この液体が分散すると、液体の先端が凝固剤と継続的に接触する。多孔質相の個別の帯域中に１種以上の凝固剤が存在することができ、これにより試験試料液体をこれらと連続的に混合することができる。結局、この先端は凝固しはじめ、試料が多孔質シートを介してさらに拡散することが抑制される。試料の先端が十分に凝固した際には、多孔質シートで試料のさらなる拡散速度は事実上０となり、拡散した試料の面積は一定である。従って、当業者には、試料の多孔質シートにおける拡散の程度および／または試料の多孔質シートにおける拡散の速度を示すパラメータを評価することにより、凝固が行なわれた際に正確な評価が得られることが明らかである。本発明の１つの例において、評価されたパラメータは、拡散した試料により覆われた面積またはこの面積が拡大する速度である。このパラメータは、特に全血試料を用いる場合には、任意の適切な光学的手段によりヒトの目によっても評価することができる。このような光学的評価手段を血漿試料の場合にに用いた場合には、試験試料中に染料を含ませて視覚的検出を補助するかまたは多孔質シートの一部に染料を浸透させるのが好ましい。このような光学的測定手段を用いて、試験試料を多孔質シートに付着させ、凝固の前に、拡散した試料により覆われた範囲の領域を測定し凝固が生じた時を評価することができる。あるいはまた、操作者は、拡散した試料の領域の成長の割合を監視することができる。本発明の装置の少なくとも１つの不透過性層の等級付けを含ませて、拡散した試料の範囲の測定を補助することができる。面積の拡大の速度が０に近づく際には、凝固が発生している。本発明の他の例において、凝固を検出するのに適切なパラメータは、電気的感知手段により評価することができる。例えば、薄い電極を多孔質シートのいずれかの表面上に設けることができる。これらの電極間の導電率または電気的インピーダンスは、これらの間の湿潤面積に依存する。試験試料を多孔質シートに付着させる前に、電極間のインピーダンスは、導電率が０で無限大に近づく。試験試料がシートを介して拡散すると、これは電極間の湿潤面積を増大させ、インピーダンスを低下させ、導電率を増大させる。試験試料がさらにシートを介して拡散すると、インピーダンスはさらに低下し、導電率はさらに増大する。従って、電極間のインピーダンス／導電率が試料のシートにおける拡散の程度の尺度であることが明らかである。電極間の導電率／インピーダンスの変化の速度を試験することにより、媒質中の試料の拡散の速度を評価することができる。上記したように、試料の先端が凝固する際には、多孔質シートを介しての試料のさらなる拡散が、ここに形成したフィブリンの量および透過性に依存して著しく低下する。従って、通常の試料の先端が凝固する際には、時間に伴う導電率の増大および対応するインピーダンスの低下は事実上ない。電極間の導電率／インピーダンスの変化を監視することにより、この時点において電極間の導電率／インピーダンスの変化の速度は０に近づくため、凝固が発生する時を検出することができる。凝固反応によりシートにおいて形成されたフィブリンがその後繊維素溶解プラスミンにより溶解する場合には、液体試料が多孔質シートにさらに浸透する。従って、導電率が再び増大しはじめる時間を用いて試料中の繊維素溶解感受性を示すことができる。図面の簡単な説明本発明を添付した図面を参照して、例によって説明する。図１は、本発明の第１の例による液体の凝固の感受性を測定する装置の縦断面図である。図２は、本発明の第２の例による液体の凝固の感受性を測定する装置の斜視図である。図３は、本発明の第３の例による若干の液体の凝固の感受性を測定する装置の斜視図である。図４は、本発明の第４の例による液体の凝固の感受性を測定する装置の斜視図である。図５は、代表的な凝固時間および耐繊維素溶解試験に関する導電率および時間の測定の関係を示すグラフである。図６は、本発明の第５の例による液体の凝固および溶解の感受性を測定する装置の斜視図である。本発明の実施態様第１に図１を参照し、本発明の装置は表面電極２と３との間にはさまれた多孔質シート１を備え、この間に小電圧を印加する。液体の試験試料４を電極２の最上部表面６に付着させて開口５を介して降下させ、シート１に拡散させる。試験試料を塗布する前に、表面電極２と３との間の抵抗は導電率は０で無限に近づく。試験試料の凝固までの時間を測定することが必要である場合には、試験試料４の塗布は、電極２、３間の抵抗を自動的に低下させ、これにより記録装置８における「開始」時間を示す。試験試料がシート１を介して降下するので、これは電極２と３との間の領域をぬらし、抵抗を下げ、導電率を増大させる。試験試料４は、上記したようにシート１を介して拡散し、次第に広い領域を覆う。試料が拡散すると、その先端は次第に、多孔質シート１を介して含浸した凝固剤と混合する。最終的に、試料の先端は凝固し、凝血７が形成される。当業者に明らかなように、試料が凝固する速度は、試料自体の特性並びに、吸収剤媒質のシートにおける凝固剤または溶解剤のタイプまたは量に依存する。液体がシートにさらに拡散する結果生ずる凝血のその後の溶解は、繊維素溶解活性剤の存在およびその特別の効果に依存する。電極２および３にリード線９および１０を介して接続されたチャート式記録計８は、例えば図５に示すように電極間の導電率／抵抗を記録する。上記したように、凝血７が形成されると、試料４が拡散する割合が低下し、電極間の導電率の増加の割合が対応して低下する。導電率／抵抗または電極間の導電率／抵抗の変化を時間の関数として監視することにより、試料が凝固する時点を正確に示すことができる。予備研究において、用いられる多孔質シートは試験に用いられる血漿を吸収し、拡散させる役目を有する薄い濾紙を有していた。シート１が薄いシートから成り０．０５ミリリットルという少量の試料さえも広範囲に拡散するのが好ましい。膜の材料は血液または血漿試料から水を吸収してはならない。その理由は、このために予測不能な拡散パターンが生じるからである。好ましくは、シート１は小さい均一な孔を有し、従って吸収された試験試料の拡散は規則的であり、フィブリンおよび／または血小板凝集体による吸蔵をうけやすい。シートは、好ましくは乾燥安定剤を含んで試料を凝固させ、従って形成したフィブリンおよび／または血小板凝集体が試料のその後の拡散を有意に遅延させる。好ましくは、この媒質シート１内に含めることができる凝固剤は、組織因子（トロンボプラスチン）、接触活性剤およびＡＰＴＴ状試験に用いられるリン脂質並びにラッセルバイパーベノム(Russell's viper venom) を含む種々の他の凝固活性剤、接触生成物（活性化因子ＸＩ）および血小板活性化剤を含む。また、トロンビンおよび活性化因子Ｘは、安定剤と共に試験に用いられるこのような紙に塗布して、抗トロンビン薬剤、例えば低分子量ヘパリンを監視するのに用いることができる。このような試験は、正常の血漿に対し長い凝固時間を与え、抗凝固状態を評価するのに用いることができる。基準トロンビン状酵素濃度による凝固が発生した後の導電性の変化の速度から、フィブリノゲンレベルを説明することができる。高いフィブリン含量の結果毛管流が遅くなり、時間がたつにつれ変化が少なくなる。低いフィブリノゲンレベルにより一層多孔質である凝血が得られ凝血を介しての透過性を一層大にすることができる。因子VIIIに関する特異的アッセイは、膜上で乾燥したＡＰＴＴ試薬と別の領域において乾燥した好血性（因子VIII欠陥）血漿に基づき、従ってこれを第１に希釈試験血漿により溶解する。血小板を含む他の血液凝固因子に関するアッセイを、特異的欠損血漿を用いて同様に開発することができる。媒質１中に含めることができる他の成分は、適用点から最も遠い帯域において非潮解性塩として用いられるカルシウムである。この濃度を約０．０２５Ｍに調整し、他の試薬は、試験適用の時間から３０〜６０秒以内に達成された拡散帯域で試験感度に最適である。緩衝添加物および塩は、フィブリンゲルが最も不透過性である高いｐＨ（７．５〜８．５の範囲内）およびイオン強度（０．１〜０．２Ｍ［ＮａＣｌ］の範囲内）の物理的条件を与えるのに必要である。媒質中に含めることができる他の主要成分は、界面活性剤および親水性ポリマーである。界面活性剤は、液体の界面における表面張力を制御し、これは、拡散の速度を調整するのに重要である。適切な濃度の親水性ポリマーは、乾燥成分の溶解速度および液体の多孔質材料を介しての移送速度を制御するのに必要である。多孔質相のゼラチン被膜は、フィブリン凝血の付着を増大させる。特定のポリマー、例えばアラビアゴムもまたフィブリン（これが形成した際）の液体移送速度に対する限定的効果を増大させる。ここで用いられる代表的な親水性コロイドは、ポリビニルアルコールおよびアルギン酸ナトリウムを１％の濃度で含む。フィブリノゲン、ウシのおよび／またはポリマーで共有結合変性したものを加えて、若干の試験においてフィブリンゲル強度を増大させることができる。このようなポリマーの濃度は、先端における高い濃度のため、膜を介しての液体の不規則な拡散を回避するように調整しなければならない。他の乾燥成分には、よく知られているタンパク質安定剤、ラクトース、酸化防止剤およびアジ化ナトリウムが含まれる。若干の環境において、血液凝固試験系に用いる２種の不相溶成分（例えば特異的因子欠損血漿およびカルシウム）を試験モジュール中に２箇所の個別の帯域においてまたは２枚の個別の重複するシート上に導入することができる。このようにして、各成分に対して異なる最適条件を貯蔵中維持することができ、これらは、試験試料によりぬれる際にのみ一緒に混合される。繊維素溶解研究に関して、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼまたは組織プラスミノゲン活性化物質を血液凝固剤混合物に含ませる。凝血が発生した後、その後の導電性の増大またはインピーダンスの低下は、個体における繊維素溶解に必要な時間を示す。これはしばしば、繊維素溶解に対して耐性を有する患者、例えばストレプトキナーゼに対する抗体を有する患者において延長される。本発明の方法および装置はまた、皮膚出血時間処置に用いることができ、ここで標準化された傷から出る血液が表面電極と下層の皮膚との間の導電性の増大により漸次定量される。図４に示すように、多孔質シート１２は患者の傷口上に直接配置することができる。この例は、患者の皮膚出血試験を行うために特に適切である。この例において、シート１２の一方の表面のみを不透過性層で覆って患者の傷口から出る血液を直接シート１２の露出部にあてることができる。図４において、シート１２の外側上の不透過性層は、表面電極１３により設ける。組み合わせたシート／電極組立体を、患者の腕１４に対して直接配置する。患者から血液の試料を得るために、ランセット１５を最上部層１３および多孔質シート１２を介して患者の腕１４に押しつける。ランセットは、標準の大きさの傷口１７を形成する標準化された切断表面を有する。血液が傷口から出ると、上記したように、血液はシート１２中に吸い込まれ、分散する。下部電極１８を、傷口部１７から十分離れた患者の皮膚と接触させる。患者の正常な血液の凝固を妨げないように、凝固影響剤をシート１２中に含有させないのが好ましい。先に、代表的な腕の切開部を示す。しかし、下部脚部上の部位にこのよう優れた装置を用いて、増大した静脈血圧に対する要求を簡単にするのが好ましい。通常、このタイプの皮膚出血時間試験は、傷口部位において放出された血小板、コラーゲンおよび組織因子を含む凝血促進性機構を測定することを意図する。血小板の機能に関する一層良好な特異性を達成するために、弱い抗凝固剤を吸収材料シート１２において用いると血小板の凝集が比較的重要になる。さらに、血小板アゴニスト、例えばＡＤＰまたはコラーゲンを膜に誘導することができる。患者からの血液の凝固特性を測定することが望ましい場合には、組立体を、試料が一定の温度、好ましくは３７℃、即ち人体の温度に維持されるように加熱するのが好ましい。このことは、患者の皮膚に対して本発明の装置を単に保持するかあるいはまた別の加熱／冷却手段を提供することにより達成される。上記したように、患者からの血液試料が多孔質媒質１２を介して拡散するので、電極１８と１３との間の電気抵抗または導電率を測定するように設定されたチャート式記録計８でこれを監視することができる。本発明の装置において、極めて低い電圧レベル、例えば１ボルトより低い電圧を用いて、電極−液体界面における分極を回避することが好ましい。印加された電圧は一定であるかまたは好ましくはパルスまたは交流である。パルス電圧を用いる場合には、応答を付加的なインピーダンスの変化に関してオシロスコープにより分析して、凝固を確認することができる。図３に示すように、吸収媒質と各表面上の電極２，３を有する個々のモジュールを温度調節した平坦な表面１１に取付けて組立体および試料を３７℃に維持することができる。これにより若干のモジュールを同時に使用することができ、各モジュールをチャート記録計８に接続する。異なるモジュールは異なる凝固影響剤で処理された多孔質シート１を有するのがよい。これ等のモジュールのそれぞれに同一の試料を適用すると、操作者は各凝固影響剤の同一液体試料に対する有効性を確かめることができる。他の例において、電極３を除去してプレート１１をこの上に組立てた若干の試験モジュール用の共通の負の支持板として作用させる。また表面電極上に絶縁フィルムを組込むことも本発明の範囲内に入る。これ等の絶縁部分は試料の拡散範囲を評価するため表面電極上の特定の位置に整列させることができる。説明するため、試料が多孔質シートに拡散されると、試料が導電率を増し、電極間の抵抗率を減ずる。拡散液が絶縁フィルムに達する場合、シートに拡散する試料の位置を示す導電性の荷電が一時的に休止する。本発明の他の例において、導電率／抵抗率の評価に簡単な電圧分析が好ましい場合には、表面電極を不活性でない異なる材料、例えばアルミニウムおよび銅でつくることができる。従って試験試料との接触により小さい一時的電圧差が生ずる。この電位を、多孔質シートにおける試料液の拡散を監視するのに直接用いることができる。導電率／抵抗率の測定値を、簡単なプログラミング法を用いて次の分析および／または従来の単位への転換を行うコンピュータインターフェースにより集積することができる。当業者には、経時電極間の導電率または抵抗率を監視することにより、個人の視覚的または光学的分析を介して可能であるより一層正確な凝固時間の指示が得られることは明らかである。一例として、０．２ｍｍ以内の吸収媒質シートの試験試料の電気抵抗および分量との間の関係を表１に示す。表１吸収された血漿容量抵抗Ω ０ μｌ ∞ ５４０１０２５２０１２本発明の他の例を図２に示すが、この例では不透過性透明上部シート２を備え、このシートはシートにおける試料の拡散範囲および／またはシートにおける拡散割合を光学的に測定することができる。この例は一つの不透過性層を備え、多孔質シートの露出側は図４の例と同様の患者に直接適用される。或いはまた、多孔質媒質１を一つが透明である不透過性層の間に介挿する。この例は、人がシートにおける試料の拡散範囲および／またはシートにおける試料の拡散割合を簡単に見ることを可能にする。透明な上部シート２上に拡散試料を光学的に測定するのに助けとなる目盛りまたは基準点を設けることができる。また、光学的変化を見ることが可能であり、細い電極ワイヤが多孔質媒質の細条における各凝固感知領域の上にある。本発明の他の例では、図６に示すように、多孔質シート１は、中心試料付着点２４から放射状に延びる複数個の同様の腕２５を備える。再びシート１の少なくとも１つの表面が不透過性層２６により下に置かれる。また光学的不透過性層２７も各凝固感知領域の上にある分離した細いワイヤ電極２８を備え、該電極は記録計接続部２９に導かれる。前述のように、試料を多孔質シートに付着する場合には、試料はシート全体に亘り、この場合各腕２５に沿って分散する。各腕は異なる凝固／溶解剤を有するのが好ましく、一つの腕はコントロールとして作用し、凝固／溶解剤を含まない。各腕２５が凝固／溶解剤を含浸している場合、各腕２５に沿った異なる点で凝固または溶解がおこる。各アームにおける試料の拡散の範囲および／または各腕における試料の拡散割合を監視することにより、種々の凝固剤または溶解剤の有効性を決定することができる。もう一度、試料の拡散の範囲または拡散の割合の評価は、前述のように、視覚的に或いは電気的に決定することができる。当業者には、本発明の方法および装置は、凝固した状態から液体状態に変化する液体の傾向を評価するのに等しく用いることができる。簡単に前述したように、試験試料の血液凝固が起きた後、凝血が試料を液体状態に戻す血液凝固剤中に既に存在する溶解剤により溶解するようになる。勿論多孔質シートを不透過性層により両表面に結合する場合形成される凝血は溶解剤を添加することなく時間のたつにつれて液状に戻り得る。従って血液凝固が起こった後、溶解速度を示すパラメータを測定することにより、凝固状態から液状に変化する液体の感受性を測定することができる。説明するため、試験試料がその凝固状態からその液状に変わった際、拡散し始め再度試料の拡散の範囲および／またはシートにおける試料の拡散の割合が増加する。試料のこの更なる拡散は前述のように視覚的に認めることができるかまたは試料の更なる拡散が導電率を増すかまたは表面電極感の抵抗率を減ずるので電気的に測定することができる。工業的応用多孔質シートの使用により、本発明の装置および方法を多数の個々の血液凝固／溶解因子に対する試験に適合させることができる。個々の完全な凝固／溶解プロフィルは、本発明の試験モジュールのパネルを組合せることによって迅速且つ安価に達成することができる。本発明は、個人が一つまたは２つの不透過シート或いは表面電極により結合される若干のモジュールを買うことを可能にする。このヒトは試験試料、例えば血液を多孔質シートを、皮膚に直接接触させるかまたは適当な試料採取手段を介してシートに付着させることができる。試料の凝固／溶解は、シートにおける試料の拡散の範囲またはシートにおける試料の拡散の割合を示す適当なパラメータを測定することにより検出することができる。図示する例では、拡散試料の領域の視覚的検出または電気的評価を用いるが、任意の他のパラメータを同等に適用することができる。本発明は、簡単で安価な臨床試験装置が重要な役割を有し、特に患者の迅速な説明および診断を必要とする医学分野のみでなく獣医分野において優れていると考えられる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９４年９月２日【補正内容】管作用により吸引する。試験に用いる抗原または抗体を、連続的洗浄およびインキュベーション段階の後の色反応により定量する。第２に、小さい毛管凝固試験装置が最近開発された。これらは、レーザー（バイオトラック(Bio Track) 、チバ−コーニング(Ciba-Corning)）または感圧系（ナイコメド）を用いて検出した凝固を伴う小さい毛管に吸引された血液または血漿に基づく。このような装置の１つは乾燥凝固剤を特徴とし、一方他のものは未塗布ガラス毛管に依存する。不都合なことに、これらの従来技術の装置は、レーザーまたは感圧装置を必要とする極めて複雑なものである。液体が凝固するかまたは溶解する感受性を測定するのに在来の方法および装置より一層簡単で好都合であり且つ一層適合する方法および装置が必要とされていることは当業者に明らかである。臨床的に携帯的形態で用いられるかあるいはまた組立てられて中央実験室においてはるかに多数の試料を処理することができる小さい試験モジュールを提供するのが望ましい。現在、凝固／溶解試験領域には携帯迅速方法に対する重要な市場がある。比較的大きい実験室は通常、大規模操作のために高価な高性能装置を購入する。小さい安価な臨床試験装置は、特に患者の結果の迅速な解釈が必要であり、スクリーニング試験がまれにのみ陽性である多くの臨床的事態において重要な役割を有する。従来技術の欠点を改良するために、従来技術より選択され、少なくとも好適例において従来技術の装置より安価であり、使用および製造が容易である、試験試料が凝固状態と液体状態との間で変化する傾向を測定する方法および装置を提供することを提案する。発明の開示第１の概念において、本発明は、血液試料が液体状態から凝固状態へ変化する傾向を検出するにあたり； (i) 不浸透性層と接触している多孔質シートの少なくとも一方の表面に多孔質シートを設け、 (ii)血液試料をシートの露出表面に付着させ、 (iii) 試料をシートの一部を介して拡散させ、 (iv) 血液試料が凝固する傾向を示す試料のシートにおける拡散の程度および／または試料のシート・における拡散の速度を示すパラメータを評価することを特徴とする検出方法を提供する。第２の概念において、本発明は、血液試料が液体状態と凝固状態との間で変化する傾向を検出する装置において、多孔質シート、このシートの一方の表面と接触している不浸透性層および凝固／溶解検出手段を備え、検出手段が、試料のシートにおける拡散の程度および試料のシートにおける拡散の割合を示すパラメータを評価するように適合されていることを特徴とする検出装置を提供する。本発明の方法および装置は以下のように操作する。血液試料が多孔質シートに付着すると、該試料は付着点からシートの領域を介して分散する。この液体が分散すると、液体の先端が凝固剤と継続的に接触する。多孔質相の個別の帯域中に１種以上の凝固剤が存在することができ、これにより試験試料液体をこれらと連続的に混合することができる。結局、この先端は凝固しはじめ、試料が多孔質シートを介してさらに拡散することが抑制される。試料の先端が十分に凝固した際には、多孔質シートで試料のさらなる拡散速度は事実上０となり、拡散した試料の面積は一定である。従って、当業者には、試料の多孔質シートにおける拡散の程度および／または試料の多孔質シートにおける拡散の速度を示すパラメータを評価することにより、凝固が行なわれた際に正確な評価が得られることが明らかである。本発明の１つの例において、評価されたパラメータは、拡散した試料により覆われた面積またはこの面積が拡大する速度である。このパラメータは、特に全血試料を用いる場合には、任意の適切な光学的手段によりヒトの目によっても評価することができる。このような光学的評価手段を血漿試料の場合にに用いた場合には、試験試料中に染料を含ませて視覚的検出を補助するかまたは多孔質シートの一部に染料を浸透させるのが好ましい。このような光学的測定手段を用いて、試験試料を多孔質シートに付着させ、凝固の前に、拡散した試料により覆われた範囲の領域を測定し凝固が生じた時を評価することができる。あるいはまた、操作者は、拡散した試料の領域の成長の割合を監視することができる。本発明の装置の少なくとも１つの不透過性層の等級請求の範囲１．血液試料が液体状態から凝固状態へ変化する傾向を検出するに当り、 (i) 不浸透性層と接触している多孔質シートの少なくとも一方の表面に多孔質シートを設け、 (ii)血液試料をシートの露出表面に付着させ、 (iii) 試料をシートの一部を介して拡散させ、 (iv) 血液試料が凝固する傾向を示す試料のシートにおける拡散の程度および／または試料のシートにおける拡散の速度を示すパラメータを評価することを特徴とする血液試料が液体状態から凝固状態へ変化する傾向を検出する方法。２．請求の範囲１記載の方法を実施し、凝固が起きた後、溶解の速度を示すパラメータを評価することを特徴とする血液試料が液体状態から凝血状態へ変化する傾向を検出する方法。３．血液試料の成分に曝露されると、試料をそれぞれ凝固または溶解させる凝固剤および／または溶解剤を多孔質シートに含浸させることを特徴とする請求の範囲１または２記載の方法。４．多孔質シートを２つの不透過性表面の間に介挿することを特徴とする請求の範囲１，２または３記載の方法。５．評価するパラメータが拡散試料の領域であることを特徴とする請求の範囲１〜４のいずれか一つの項に記載の方法。６．領域を光学的手段により評価することを特徴とする請求の範囲５記載の方法。７．多孔質シートの両表面に表面電極を設け、電極間のインピーダンス、導電率を評価することにより凝血または溶解を検出することを特徴とする請求の範囲１〜４のいずれか一つの項に記載の方法。８．多孔質シートに複数個の腕を設け、各腕に異なる凝固若しくは溶解剤を含ませ、試料を中心の試料付着点に付着させて各腕に沿って拡散させることを特徴とする請求の範囲１〜７のいずれか一つの項に記載の方法。９．試料を一定温度、好ましくはほぼ３７℃に維持することを特徴とする請求の範囲１〜８のいずれか一つの項に記載の方法。１０．血液試料を媒質に与える前に、試料を染色するかまたは染料を多孔質シートに含浸させることを特徴とする請求の範囲１〜９のいずれか一つの項に記載の方法。１１．血液試料を、患者の切開部位に直接付着させることにより多孔質シートの露出表面に付着させることを特徴とする請求の範囲１記載の方法。１２．媒質の外面に第１表面電極を備え、第２表面電極を患者の切開部位から離間した位置の患者の皮膚に備えることを特徴とする請求の範囲１１記載の方法。１３．血液試料が液体状態と凝固状態との間で変化する傾向を検出する装置において、多孔質シート、このシートの一つの表面と接触している不透過性層およびシートにおける試料の拡散範囲および／またはシートにおける試料の拡散割合を示すパラメーターを評価するのに適する凝固／溶解検出手段を備えたことを特徴とする血液試料が液体状態と凝固状態との間で変化する傾向を検出する装置。１４．血液試料の成分けに曝露されると、試料をそれぞれ凝固または溶解させる凝固剤および／または溶解剤を多孔質シートに含浸させたことを特徴とする請求の範囲１３記載の装置。１５．多孔質シートを２つの不透過性層の間に介挿したことを特徴とする請求の範囲１４記載の装置。１６．検出手段が媒質中の試料の拡散領域を評価する光学的手段を有することを特徴とする請求の範囲１３，１４または１５記載の装置。１７．検出手段が試料の拡散領域および／または試料の拡散割合を評価するのに適合する電気的感知手段を有することを特徴とする請求の範囲１３〜１６のいずれか一つの項に記載の装置。１８．電気的感知手段が多孔質シートの両側に設けた表面電極を有することを特徴とする請求の範囲１３〜１８のいずれか一つの項に記載の装置。１９．多孔質シートが中心の試料付着点から放射状に存在する複数個の腕を有し、各腕には異なる凝固または溶解剤が含浸されていることを特徴とする請求の範囲１３〜１８のいずれか一つの項に記載の装置。２０．更に、試料を一定温度、好ましくはほぼ３７℃に維持するための加熱／冷却手段を有することを特徴とする請求の範囲１３〜１９のいずれか一つの項に記載の装置。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．試験試料が液体状態から凝固状態へ変化する傾向を検出するに当り、 (i) 不浸透性層と接触している多孔質シートの少なくとも一方の表面に多孔質シートを設け、 (ii)試験試料をシートの露出表面に付着させ、 (iii) 試料をシートの一部を介して拡散させ、 (iv) 試験試料が凝固する傾向を示す試料のシートにおける拡散の程度および／または試料のシートにおける拡散の速度を示すパラメータを評価することを特徴とする試験試料が液体状態から凝固状態へ変化する傾向を検出する方法。２．請求の範囲１記載の方法を実施し、凝固が起きた後、溶解の速度を示すパラメータを評価することを特徴とする試験試料が液体状態から凝血状態へ変化する傾向を検出する方法。３．試験試料の成分に曝露されると、試料をそれぞれ凝固または溶解させる凝固剤および／または溶解剤を多孔質シートに含浸させることを特徴とする請求の範囲１または２記載の方法。４．多孔質シートを２つの不透過性表面の間に介挿することを特徴とする請求の範囲１，２または３記載の方法。５．評価するパラメータが拡散試料の領域であることを特徴とする請求の範囲１〜４のいずれか一つの項に記載の方法。６．領域を光学的手段により評価することを特徴とする請求の範囲５記載の方法。７．多孔質シートの両表面に表面電極を設け、電極間のインピーダンス、導電率を評価することにより凝血または溶解を検出することを特徴とする請求の範囲１〜４のいずれか一つの項に記載の方法。８．多孔質シートに複数個の腕を設け、各腕に異なる凝固若しくは溶解剤を含ませ、試料を中心の試料付着点に付着させて各腕に沿って拡散させることを特徴とする請求の範囲１〜７のいずれか一つの項に記載の方法。９．試料を一定温度、好ましくはほぼ３７℃に維持することを特徴とする請求の範囲１〜８のいずれか一つの項に記載の方法。１０．試験試料を媒質に与える前に、試料を染色するかまたは染料を多孔質シートに含浸させることを特徴とする請求の範囲１〜９のいずれか一つの項に記載の方法。１１．試験試料を、患者の切開部位に直接付着させることにより多孔質シートの露出表面に付着させることを特徴とする請求の範囲１記載の方法。１２．媒質の外面に第１表面電極を備え、第２表面電極を患者の切開部位から離間した位置の患者の皮膚に備えることを特徴とする請求の範囲１１記載の方法。１３．試験試料が液体状態と凝固状態との間で変化する傾向を検出する装置において、多孔質シート、このシートの一つの表面と接触している不透過性層およびシートにおける試料の拡散範囲およびシートにおける試料の拡散割合を示すパラメーターを評価するのに適する凝固／溶解検出手段を備えたことを特徴とする試験試料が液体状態と凝固状態との間で変化する傾向を検出する装置。１４．試験試料の成分けに曝露されると、試料をそれぞれ凝固または溶解させる凝固剤および／または溶解剤を多孔質シートに含浸させたことを特徴とする請求の範囲１３記載の装置。１５．多孔質シートを２つの不透過性層の間に介挿したことを特徴とする請求の範囲１４記載の装置。１６．検出手段が媒質中の試料の拡散領域を評価する光学的手段を有することを特徴とする請求の範囲１３，１４または１５記載の装置。１７．検出手段が試料の拡散領域および／または試料の拡散割合を評価するのに適合する電気的感知手段を有することを特徴とする請求の範囲１３〜１６のいずれか一つの項に記載の装置。１８．電気的感知手段が多孔質シートの両側に設けた表面電極を有することを特徴とする請求の範囲１３〜１８のいずれか一つの項に記載の装置。１９．多孔質シートが中心の試料付着点から放射状に存在する複数個の腕を有し、各腕には異なる凝固または溶解剤が含浸されていることを特徴とする請求の範囲１３〜１８のいずれか一つの項に記載の装置。２０．更に、試料を一定温度、好ましくはほぼ３７℃に維持するための加熱／冷却手段を有することを特徴とする請求の範囲１３〜１９のいずれか一つの項に記載の装置。