JPH08501062A - 非特異的な細胞の免疫刺激方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 殺菌性を高めるための非特異的で主な防禦細胞（大食細胞）の増加技術は、酸化応答及び殺菌性を高めるべく大食細胞を刺激するために、食作用があり生物学的に適合した微分子を利用する。この方法は、アスベスト又は煙又はたばこの微粒子のような有毒又は炎症性の微分子を必要としない。この微分子は生物分解性を有していることが好ましい。刺激は即座に生じる。患者は刺激された大食細胞の利益を１〜４日間受ける。実験では、１００倍以上の酸化応答の増加が立証された。１００倍の、迅速な、短い期間の酸化応答及び殺菌性の増強を生み出すという、この生体内における食作用微分子は、脊椎動物又は人間のために以前に述べられたことはない。増強された酸化応答及び死滅能力は非免疫特異性（一つの有機体でないことや一つのワクチンでないことを意味する）であり、バクテリア及びウィルスの両方同時に広く適用できる。その効果により、月間隔で繰り返し使用したとき、非組織有毒残留性の効果及び能力を７日間示すことが立証された。食作用微分子により生体内で生成された気管支肺胞洗浄液から分離された大食細胞刺激因子を含む合成物は、同じ非特異的な大食細胞の免疫増加を与えることができる。食作用微分子又は大食細胞刺激因子を含む合成物での治療は、外傷、外科手術、流行病、生物学的交戦及び他の接触感染を見越して、又はこれらの危険を予防するために有用である。

Description

【発明の詳細な説明】 非特異的な細胞の免疫刺激方法 定義 １．食細胞−バクテリアやその他外界からの微分子を食作用により包み込む細胞 。 ２．大食細胞（マクロファージ）−食作用機能を示す網内系組織から得られる細 胞。大食細胞は食細胞である。 ３．活性化−細胞を休息状態から生物学的機能を活動的に発揮する状態に変える こと。例えば、大食細胞又は食細胞は、異物に遭遇したときに活性化される。異 物に遭遇すると、大食細胞はその物を死滅させたりあるいは他の方法で壊すため に酸化化学物質のレスピラトリーバーストを放つ。 ４．顕在化−細胞から応答を引き出すこと。例えば、レスピラトリーバーストの 活性を顕在化させるために外界からの異物が大食細胞に与えても良い。 ５．刺激−細胞をある状態から他の状態に転化することであり、これによって、 その刺激された状態は、細胞が刺激されていないときよりも生物学物質に対して より活性となる。本発明においては、大食細胞の活性化や応答の顕在化に対立す るものとしての大食細胞の刺激の相違は極めて重要である。 ６．サイトカイン−感染に対する応答において動物によってつくられる物質の群 。サイトカインは、その機能においてホルモンと似ており、これによりそれらは ある細胞内につくられ、他の細胞における応答を活発にする。サイトカインは、 インターフェロン、インタールーキン及び腫瘍の壊死因子などの物質を含む。 発明の背景 発明の分野 本発明は、一般に死滅潜在能力を高めるための大食細胞の刺激に関する。さら に詳しくは、本発明は、刺激因子投与後のある日数で死滅活性が高まるべく、患 者の大食細胞を刺激するように、患者に刺激因子を投与することを含む。 従来技術の開示 現在、肺胞大食細胞などのような食細胞が細菌感染をコントロールするのに重 要な役割を果たすことは良く知られている。ベイバー ニューイング．ジェイ． メド．，２９８：６５９−６８ １９７８年（Ｂａｂｏｉｒ，Ｎｅｗ Ｅｎｇ． Ｊ．Ｍｅｄ．，２９８：６５９−６８（１９７８））には、バクテリア細胞が侵 襲するなど外界からの物質に遭遇すると、食細胞はレスピラトリーバーストを生 じせしめて、そこに超酸化陰イオン（Ｏ₂ ^-)、一重項酸素（Ｏ₂)及び過酸化水素 水（Ｈ₂Ｏ₂)などの高酸化種が生成されることが説明されている。レスピラトリ ーバーストの目的は、侵襲する微生物その他の外界からの物質を崩壊するために 食細胞により用いられ得る一群の酸化剤を提供することにある。多くの薬品は、 粒状あるいは可溶の何れも、レスピラトリーバーストを活性化させることができ る。粒状の活性剤は、オプソニンを作用させるバクテリア、チモザン（イースト 細胞壁の製剤）、及びラテックス球体を含む。可溶の活性剤の中には、複合プラ ント生成物であるホルボールミリスチン酸塩アセテート、あらゆる種類のイオン 透過担体、補体Ｃ５ａ、及びフッ化物イオンがある。活性化は食細胞を必要とす るのではなく、むしろ、レスピラトリーバーストの発生を目的として食細胞を活 性化させるためには、外界からの興奮剤と食細胞の表面との単なる接触で十分で あろう。食細胞の酸素による細胞毒性のメカニズムは、クレバノフ アドバ．ホ ストデフ．メク．， （ｖｏｌ．１，編集者ジェイ．ガリン及びエイ．ファウシ ，レイベンプレス，ニューヨーク１９８２年１１１−１６３頁））（Ｋｌｅｂａ ｎｏｆｆ，Ａｄｖ．Ｈｏｓｔ Ｄｅｆ．Ｍｅｃｈ．，（Ｖｏｌ．１，ｅｄｓ．Ｊ ．Ｇａｌｌｉｎ ａｎｄ Ａ．Ｆａｕｃｉ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８２ ｐｐ．１１１−１６３））で詳細に議論されている。 また、ベイバーは、レスピラトリーバーストの活性化は、食細胞の活性化に付 随する光放射の化学ルミネッセンス現象を監視することにより検出できることを 説明している。光放射は、食細胞により生成された酸化種から生じる。例えば、 一重項酸素は酸素が電気的に興奮した状態であり、大気酸素に自発的に戻ること ができ、またこの復帰は光パルスを伴う。しかしながら、現在一般的には、超酸 化陰イオンが化学ルミネッセンス応答の原因であると信じられている。 大食細胞の活性化を研究するために多くの調査グループが化学ルミネッセンス を用いている。例えば、ドナルドソンたち ビーアール．ジェイ．イーエックス ピー．パス．，６５：８１−９０ １９８４年（Ｄｏｎａｌｄｏｓｏｎ ｅｔａ ｌ．，Ｂｒ．Ｊ．ｅｘｐ．Ｐａｔｈ．，６５：８１−９０（１９８４））は、温 石綿アスベスト及びコーニエバクテリウムパーバム（Ｃｏｒｎｙｅｂａｃｔｅｒ ｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）で処理された大食細胞が、塩水で処理された大食細胞よ りも大きなレベルの反応性酸化種を顕在化させることを示すために、化学ルミネ ッセンス測定を用いた。さらにドナルドソンは、温石綿アスベスト又はコーニエ バクテリウムパーバムを注射した５日後のＣＦ₁マウスから採収された腹膜の滲 出物が、化学ルミネッセンス測定において約２〜３倍の増加を有していたことを 示した。ドナルドソンたちは、アスベストで活性化された大食細胞は、多くの吸 入された微分子（例えば、バクテリア、イースト、花粉及びアスベスト自体）に よって誘発され活性酸素種の量を増加させるために刺激されること、及び肺胞域 におけるこれらの活性酸素種の過多は上皮のダメージやひいては線維症を引き起 こすことを示唆している。化学ルミネッセンスの応答測定が用いられた他の例に は、チダたちのインフェクト．イムノ．，５５：１４７６−１４８３ １９８７ 年（Ｃｈｉｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，５５：１４７６ −１４８３（１９８７））が含まれており、これは、子ウサギと大人ウサギとに 熱殺菌されたウシ結核菌のカルメットゲランかん菌（ＢＣＧ）株をワクチン注射 した研究を報告しており、子ウサギの肺胞大食細胞（ＡＭ）は、ＢＣＧをワクチ ン注射された年上のウサギの肺胞大食細胞に比べ、化学ルミネッセンス応答を誘 発するホルボールミリスチン酸塩アセテート（ＰＭＡ）に対して乏しい応答体で あり、肺感染に対する感染性の増加原因となるであろう新生児や子どもの動物の 肺胞大食細胞の不足をこのように示している。化学ルミネッセンスの応答測定が 用いられた他の例には、ハヤカワたちのジェイ．ルーク．バイオル．，４５：２ ３１−２３８ １９８９年（Ｈａｙａｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋ． Ｂｉｏｌ．，４５：２３１−２３８（１９８９））が含まれており、これには、 ウサギにワクチン注射したＢＣＧからの肺胞大食細胞（静脈注射してから３週間 後）が、これを生体外で種々のしよう液製剤とともに培養したとき、化学ルミネ ッセンス（ＣＬ）応答に有意な変化が生じることを示すために化学ルミネッセン ス分析が用いられた研究が報告されている。化学ルミネッセンスの応答測定が用 いられた他の例には、ミアビックたちのジェイ．インベスト．サーグ．，２：３ ８１−３８９ １９８９年（Ｍｙｒｖｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ． Ｓｕｒｇ．，２：３８１−３８９（１９８９））が含まれており、これは、表皮 ブドウ球菌からの細胞外のスライムが、ＰＭＡに誘発されたウサギの肺胞大食細 胞の化学ルミネッセンス応答に影響することが見出された研究を報告している。 化学ルミネッセンスの応答測定が用いられた他の例には、ウメハラたちのセル． イムノ．，１１９：６７−７２ １９８９年（Ｕｍｅｈａｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎ．，１１９：６７−７２（１９８９））が含まれており、 これは、Ｌフコースがウサギの肺胞大食細胞を刺激する移動抑制因子（ＭＩＦ） ／大食細胞活性因子（ＭＡＦ）を抑止する（ＰＭＡに誘発された酸化応答が用い られた）ことを示すために、化学ルミネッセンス応答が用いられた研究を報告し ている。化学ルミネッセンスの応答測定が用いられた他の例には、ギリダーたち のジェイ．ルーク．バイオル．，４９：４４２−４４８ １９９１年（Ｇｉｒｉ ｄｈａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．，４９：４４２−４４８（ １９９１））が含まれており、これは、ヘルペスの単一ウィルスタイプ２の感染 によるウサギの肺胞大食細胞の刺激を示すために化学ルミネッセンス応答が用い られた研究を報告している。 感染からの防御を提供できる材料を見つけるために多くの努力がされてきた。 ラームたちの米国特許第４，７０７，４７１号及び第４，７９５，７４５号には 、水溶性のアミノ化されたβ−１，３−Ｄ−グルカンによる予防治療は、動物が 悪性の肺炎双球菌から保護されるように大食細胞の活性を刺激できることが開示 されている。メッサーの米国特許第５，０４５，３２０号には、種々の異なる配 位子（リガンド）を付加した固体サポートによる免疫化はＴセルの間接的な応答 を顕在化させ増加させ得ることが開示されている。ウイリアムズたちの米国特許 第４，９００，７２２号には、感染の治療に用いられる一組のリン酸化されたグ ルカンが開示されている。コンロンたちの米国特許第５，０７８，９９６号には 、大食細胞の殺種瘍性活性を活性化させるために顆粒球の刺激因子を用いたこと が 開示されている。米国特許第３，１１９，７４１号には、非特異的な免疫学的薬 剤として有用なアシル化されたバクテリアのリポ多糖類が開示されている。 多種類のバクテリア感染及びウィルス感染に対する防御を提供する短期で非特 異的な治療が望まれている。そのような治療は、手術や生物学的交戦、自然災害 などのような感染に到る結果を見越して理想的に用いられるであろう。大食細胞 の酸化死滅能力の調整を高めることは、そのような結論に対して有益であろうが 、そのような刺激の継続時間は、細胞及び複合蛋白質のダメージ、線維症、及び その他慢性の活性酸素種の生成物から生じる害をさけるために制限されることが 好ましい。 発明の概要 したがって、本発明の目的は、非特異的な細胞を免疫刺激する免疫調整技術を 提供することにある。 また、本発明の他の目的は、短期間大食細胞を刺激する食作用微粒子を用いる ことにより短い継続時間で大食細胞を高調整する方法を提供することにある。 さらに本発明の他の目的は、死滅潜在能力を高めるために大食細胞の刺激に用 いて好ましい合成物を提供することにある。 本発明によれば、高活性が必要とされる数日前に食作用微分子を患者に注射す ることにより、酸化応答を著しく高めるために大食細胞を刺激することが可能と なる。実験では、刺激された大食細胞は、正常な刺激されない大食細胞に比べ１ ００倍の活性能力となることを示している。しかしながら、この刺激は、短い継 続時間であり、しかもこの治療過程が、高活性酸素の生成物による危険を生体内 で長期間停止させないように、１週間後には正常な状態まで徐々に消失して行く 。 実験では、チモザン、ラテックス微分子又は熱殺菌されたＢＣＧのような食作 用（１〜５μｍ）微分子の製剤が大人のウサギに静脈注射された。その製剤は、 ホルボールミリスチン酸塩アセテート（ＰＭＡ）又はオプソニンが作用されたチ モザン（Ｏｐ−ｚｙｍ）の顕在化化学ルミネッセンスを著しく高めるために、肺 胞大食細胞を１〜４日で即座に刺激した。ウサギに注射された微分子から得られ る肺胞大食細胞は、その化学ルミネッセンス応答が正常なウサギから得られる肺 胞大食細胞に比べて１００倍以上の高いレベルを示した。特に、定住性のウサギ から得られる肺胞大食細胞は、ＰＭＡで試したとき正常なもので約３，０００ｃ ｐｍ生じるのに対して、肺胞大食細胞の採収の３日前に２０ｍｇのチモザンを静 脈注射したウサギから得られる肺胞大食細胞は、ＰＭＡで試したときに９００， ０００ｃｐｍ以上生じた。対照的に、微分子は、化学ルミネッセンス応答を高め るために、生体外で正常な肺胞大食細胞を刺激しなかった。しかも、肺胞大食細 胞は、生体内で非食作用（直径〜２５μｍ）微分子により刺激され得なかった。 刺激の効果は、短い継続時間であり、微分子の製剤を注射してから５〜７日で減 衰した。また、正常なウサギから得られる肺胞大食細胞は、化学ルミネッセンス 応答を高めるために、肺洗浄液に大食細胞の刺激因子の現れを示す微分子で刺激 されたウサギから得られた肺洗浄液で、３〜１８時間肺胞大食細胞を培養するこ とにより、生体外で刺激されうることも認められた。 図面の簡単な説明 既述した目的及び他の目的、観点、及び利点は、図面を参照して以下に示され る本発明の好適な実施例の詳細な説明により、より理解される。 図１は、ＰＭＡで顕在化された化学ルミネッセンス応答を高めるために、肺胞 大食細胞を採収する１，２，又は３日前にチモザンが注射されたウサギから採収 されたＢＡＬで正常なウサギの肺胞大食細胞を生体外で刺激したことを示すグラ フであり、 図２は、ラテックスで顕在化された化学ルミネッセンス応答を高めるために、 ウサギに注射されたチモザンから採収される種々の濃度のＢＡＬで正常なウサギ の肺胞大食細胞を生体外で刺激したことを示すグラフである。 本発明の好適な実施例の詳細な説明 食作用微分子が、大食細胞を短い継続時間で高調整するのに有効であることを 立証する多くの実験が行われた。１．材料と方法 試薬 組織培養試薬はカーティンマセゾンサイアンティフィックカンパニーインコー ポレイテッド（メリーランド州コロンビア）から購入された。ポリスチレン及び ＰＭＭＡラテックス微分子は、ポリサイアンシーズインコーポレイテッド（ペン シルバニア州ウェリントン）から購入された。他の化学品は、別な方法で特定し ない限り、シグマケミカルカンパニー（ミズーリ州セントルイス）から購入され た。 動物 生後４〜５か月のニュージーランドの白ＳＰＦウサギの雄及び雌がハズレント ンリサーチプロダクトインコーポレイテッド（ペンシルバニア州デンバー）から 購入された。この動物たちは、使用に供する前に新環境に慣らすために我々の施 設で３〜４日間飼育された。 大食細胞の収集 ウサギたちはペントバルビタール（７５〜８５ｍｇ／ｋｇ）を静脈に与えられ ることにより犠牲になり、又はウサギたちは塩酸ケタミン／ロンポン（ｒｏｍｐ ｏｎ）（４０ｍｇ／ｋｇ及び５〜１０ｍｇ／ｋｇ筋内）で麻酔をかけられ、次い で麻酔をかけられた状態で全血を採られるかあるいは空気塞栓された。肺胞大食 細胞は、ここに関連文献として組み込まれるミリックたち ジェイ．イムノール ．８６：１２８−１３２ １９６１年（Ｍｙｒｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍ ｕｎｏｌ．８６：１２８−１３２（１９６１））に開示された冷食塩水２００ｍ ｌを用いた肺洗浄技術によって採収された。採収された細胞は、遠心分離（２０ ０ｘｇ，１０分）により、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン （１００μｇ／ｍｌ）、及びＬグルタミン（２ｍＭ）を含むがフェノールレッド 及びしょう液は含まないＲＰＭＩ１６４０媒体（ｐＨ７．２）内で３Ｘに洗浄さ れた。この細胞は、同じ媒体内で３×１０⁷セル／ｍｌの細胞密度を得るために 再懸濁された。 細胞生存力 肺胞大食細胞の生存力は、トリパンブルー（０．２５％）の除外染色により決 定された。 ウサギ肺胞大食細胞の生体内における刺激のためのプロトコール 生体内で肺胞大食細胞を刺激するために、大人のウサギに、４ｍｌの食塩水に 懸濁されたウシ結核菌の熱殺菌されたＢＣＧ株１０ｍｇ又は２ｍｌの食塩水に懸 濁されたチモザン２０ｍｌが注射された。肺胞大食細胞は、注射してから１〜７ 日後に採収された。 化学ルミネッンス分析 化学ルミネッンス応答は、ここに関連文献として組み込まれるギリダーたちジ ェイ．ルーク．バイオル．４９：４４２−４４８ １９９１年（Ｇｉｒｄｈａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｏｉｌ．４９：４４２−４４８（１９９１） ）に以前開示された手順で分析された。この分析は、暗順応の３．５ｍｌポリプ ロピレンの閃光水薬瓶を用いた散光により行われた。３７℃のハンク調整食塩溶 液（ＨＢＳＳ）（ｐＨ７．２）、０．１ｍｌの細胞懸濁液（３×１０⁶細胞）、 及び３０μｌ，０．５μｇ／ｍｌ、ラテックス（７．５μｌ，２５０μｇ／ｍｌ ）、ポリビードポリスチレンミクロスフェア、直径１．０３μｍの２．５％固体 ラテックス、又はオプソニンが作用されたチモザン（Ｏｐ−ｚｙｍ）、（３０μ ｌ；１００μｇ／ｍｌ）により構成されたタイプの分析混合液が、化学ルミネッ ンス応答を顕在化させるために加えられた。毎分当たりのカウント（ｃｐｍ）は 、ベックマンＬＳ１００Ｃ閃光カウンターを用いた閃光分光測定法により記録さ れた。 気管支肺胞の洗浄液（ＢＡＬ）の収集 気管支肺胞の洗浄液は、微分子に刺激されたウサギだけでなく対照のウサギか らも収集された。ウサギから採取された肺は、１００ｍｌの冷食塩水を用いて洗 浄され、この液体は、細胞と細胞の屑を取り除くために３００ｘｇで１０分間遠 心分離された。表面に浮かんだ液体は、６００００ｘｇで４℃、２時間遠心分離 され、表面に浮かんだ液体が０．４５μｍの孔サイズで濾過され、推定されてい る大食細胞の刺激因子（ＭＰＦ）を含む粗製気管支肺胞の洗浄液として用いられ た。 生体外における気管支肺胞洗浄液を用いた正常ウサギの肺胞大食細胞の刺激 正常なウサギから新鮮に採収された肺胞大食細胞は、刺激された動物からの種 々の濃度（１０〜１００％）の気管支肺胞洗浄液を用いて、３〜１８時間、細胞 密度が１×１０⁶／ｍｌのＲＰＭＩ１６４０媒体でテフロンフラスコ内で培養さ れた。培養後、細胞はＲＰＭＩ１６４０媒体で２Ｘに洗浄され、顕在化薬として ＰＭＡ又はＯＰ−ｚｙｍを用いて化学ルミネッンス応答の分析が行われた。正常 な動物からの気管支肺胞洗浄液により、又はこれなしで培養された肺胞大食細胞 は対照に供された。２．実験 酸化応答を高めるための、チモザン投与後の生体内における大人ウサギの肺胞大 食細胞の刺激 大人のウサギに、２ｍｌ食塩水に含まれたチモザン微分子２０ｍｇが静脈注射 された。投与された次の日に、動物たちは犠牲にされ、肺胞大食細胞が採収され 、ＰＭＡ又はＯｐ−ｚｙｍのいずれかが、採収された肺胞大食細胞からの化学ル ミネッンスを顕在化させるために用いられた。表１は試験日における２種類の顕 在化薬の測定値ｃｐｍ＊１０^-4±ＳＥＭを表している。 表１は、微分子の注射により生じた極めてドラマチックな短期間の刺激効果を示 している。注射後即座にＣＰＭ値が増加すると同時に、採収３日前に微分子が投 与されたとき、異常に高いレベルのＰＭＡの又はＯｐの顕在化された酸化応答が 観察された。チモザンが投与された３日後に採収された肺胞大食細胞は、９００ ， ０００以上のＰＭＡ顕在化ＣＰＭを生じ、Ｏｐ−ｚｙｍの顕在化ＣＰＭは１，０ ００，０００以上となった。さらに、正常な肺胞大食細胞では５００ＣＰＭ以下 であったものが、刺激された肺胞大食細胞では約２，０００ＣＰＭへ休息値が増 加することも観察された（休息値とは、顕在化薬が提供されていないときのＣＰ Ｍ値を言う）。４日目から７日目に観察された酸化応答の減衰は、大食細胞の刺 激を誘発すると認められる微分子が極めて短い継続時間であることを立証してい る。 気管内の微小滴注入（例えば噴霧器など）のような投与の代替え方法でも、類 似した結果となった。大人のウサギたちには、肺胞大食細胞の採収４日前に、２ ｍｌの食塩水に含まれた２０ｍｇのチモザンが気管内に注射された。対照のウサ ギたちには、２ｍｌの食塩水が与えられた。採収された肺胞大食細胞は、顕在化 薬としてＰＭＡ又はＯｐ−ｚｙｍを用いて化学ルミネッンス応答の分析が行われ た。表２には、チモザンが静脈注射されたウサギたちから得られた肺胞大食細胞 の増強酸化応答を示すデータが表されている（このデータは３つの別の実験を表 している）。 表２は、肺胞大食細胞の採収４日前に２ｍｌの食塩水に含まれた２０ｍｇのチモ ザンを静脈注射されたウサギたちからの肺胞大食細胞は、１，０００，０００Ｃ ＰＭ以上のＯｐ−ｚｙｍ顕在化化学ルミネッンス応答を生じることを示している 。 チモザンが注射された動物からの洗浄液の細胞分析と、肺胞大食細胞が刺激応答 を含むことの証明 大人のウサギたちには、２ｍｌの食塩水に含まれた２０ｍｇのチモザンが注射 された。このウサギたちのグループは犠牲にされ、その細胞（肺胞大食細胞）が チモザンの注射後１，２，３，又は４日後に洗浄によって採収された。細胞の生 存力はトリパンブルー（０．２５％）の除外染色テストにより決定され、特異な 細胞の数は、ライト−ジームザ（Ｗｒｉｇｈｔ−Ｇｉｅｍｓａ）溶液を用いて細 胞遠心機のスライド製剤の変色を評価することにより決定された。表３は、正常 な及びチモザンが注射された大人のウサギからの肺胞大食細胞（ＡＭ）の特異な 数、リンパ球（Ｌｙｍ）、及び多形核白血球（ＰＭＮ）を表している（結果は± ＳＥＭ（ｎ＝４））。 表３は、中性好性白血球が１日目に合計２５％、２日目に１６％、３日目に６％ 、４日目に２％の回復を有することを示している。Ｏｐ−ｚｙｍ又はＰＭＡの増 強化学ルミネッンス応答におけるチモザンが注射されたウサギからの肺胞大食細 胞は、対照のウサギ（表１）からの肺胞大食細胞に比べて、約２０〜２００倍の 増加を示すという事実、及び肺胞大食細胞の個体群が８５％であってＰＭＮの個 体群が採収された細胞のわずか約６％である３日目に、生体内における刺激効果 が最も大きくなるという事実から、肺胞大食細胞は、酸化バーストの発生を有す る支配的な細胞個体群であるということを、そのデータは立証している。 チモザン、熱殺菌されたＢＣＧ、又はラテックス微分子を静脈注射した後におけ る大人のウサギからの肺胞大食細胞の生体内における刺激の比較 大食細胞を刺激する他の微分子の効果の比較を研究するために、大人のウサギ に、２ｍｌの食塩水に含まれる２０ｍｇのラテックス、２ｍｌの食塩水に含まれ る２０ｍｇのチモザン、４ｍｌの食塩水に含まれる１０ｍｇの熱殺菌されたＢＣ Ｇ（ＨＫ−ＢＣＧ）を、肺胞大食細胞の採収２日前に静脈注射した。酸化応答は ＰＭＡ（０．５μｇ／ｍｌ）、ラテックス（１００μｇ／ｍｌ）又はオプソニン が作用されたチモザン（１００μｇ／ｍｌ）によって顕在化された。表４は、Ｐ ＭＡ、ラテックス及びＯｐ−ｚｙｍにより顕在化される酸化応答を高めるために 、チモザン、熱殺菌されたＢＣＧ、及びラテックスにより大人のウサギの肺胞大 食細胞を生体内で刺激したことを示すデータを表している。 表４は、熱殺菌されたＢＣＧ及びラテックスの微分子もまた、化学ルミネッンス 応答を著しく増強させるために、生体内における正常なウサギの肺胞大食細胞の 刺激に高い効果があることを示している。他の微分子についての予備的な結果も 類似していた。生体内での正常なウサギの肺胞大食細胞の刺激が、顕在化薬に関 してのみならずウサギたちに注射されたタイプの微分子製剤に関しても非特異的 であることをその結果は指摘している。投与された微分子は、その刺激機能が最 大になったのち数日間で生物分解することが好ましい。特に、上記の表に示され たような刺激機能を発揮するために、微分子は、１〜４日間は実質的に無傷のま まで維持されなければならない。しかしながら、４日目以後は刺激機能に減少が 見られたとき（表１）、微分子は、微分子自体が患者に対して医学的な攻撃を示 さないように肉体上の機能によって抑制されることが好ましい。 生体内で肺胞大食細胞を刺激するための非食作用（〜２５μｍ）ラテックス微分 子の機能不全 上記の実験では、採用された微分子は食作用（例えば直径１〜５μｍ）を有し ていた。肺胞大食細胞の刺激において微分子のサイズが重要な役割を果たすかど うかを決定するために、大人のウサギに、直径２５μｍ程度の非食作用ラテック ス微分子２０ｍｇが静脈注射された。このラテックスビーズは２ｍｌの食塩水に 懸濁された。肺胞大食細胞は注射した２日後に採収され、ＰＭＡ又はＯｐ−ｚｙ ｍの顕在化化学ルミネッンス応答の分析が行われた。表５は、直径２５μｍ程度 の非食作用ラテックス微分子２０ｍｇを大人のウサギの生体内に静脈注射しても 肺胞大食細胞を刺激しない結果となった。 表５は、非食作用微分子が原因となる刺激は重要ではないことを明らかに示して いる。表５と上記結果とを比較すると、致死能力を高めるために、微分子のサイ ズが大食細胞を刺激するうえで重要な役割を果たしていることは明らかである。 生体外で正常な肺胞大食細胞を刺激するためのチモザンの機能不全 チモザン微分子が生体外で正常な定住動物の肺胞大食細胞を刺激することがで きるかどうかを決定するために、正常なウサギから採収された新鮮な肺胞大食細 胞が、５％ＣＯ₂、３７℃で１８時間ＲＰＭＩ１６４０媒体で５ｍｇのチモザン ／ｍｌの肺胞大食細胞懸濁液で培養された。チモザンなしで培養された肺胞大食 細胞は対照として供された。培養後、その細胞は洗浄され、顕在化薬としてＰＭ Ａを用い化学ルミネッンス応答の分析が行われた。表６は、ウサギに静脈注射し たとき、酸化応答を高めるために、チモザン微分子は生体内で正常な肺胞大食細 胞を刺激しないことを示している。 表６は、チモザン微分子で１８時間肺胞大食細胞を培養すると、実際酸化応答の レベルが減少する結果となったことを示している。正常な肺胞大食細胞を１８時 間培養すると、新鮮に採収された肺胞大食細胞により生じた化学ルミネッンス応 答のレベル（３，０００〜５，０００ＣＰＭ）に比べ、ＰＭＡで顕在化された化 学ルミネッンス応答（２５，０００ＣＰＭ）が増強された結果となった。この現 象は、上述したハヤカワたち ジェイ．ルーク．ボイル．，４５：２３１−２３ ８ １９８９年（Ｈａｙａｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ． ，４５：２３１−２３８（１９８９））に「自発的な刺激」として言及されてい る。 チモザンが注射されたウサギから生じた気管支肺胞の洗浄液を用いた正常な肺胞 大食細胞の生体外での刺激 図１は、正常なウサギから新鮮に採収された肺胞大食細胞が、３時間、細胞を 採収する３日前にチモザン微分子が注射されたウサギから得られた気管支肺胞の 洗浄液で培養したとき、それは、ＰＭＡで顕在化された化学ルミネッンス応答が 、未処理の肺胞大食細胞に比べて２倍以上の増加で、正常な肺胞大食細胞を刺激 したことを示している。図１において、気管支肺胞の洗浄液を採収する３日前に ２ｍｌの食塩水に含まれるチモザン２０ｍｇがウサギに静脈注射された。対照の ウサギから採収された肺胞大食細胞は、気管支肺胞の洗浄液の製剤（５０％）で ３７℃で３時間培養され、その後、顕在化薬としてＰＭＡを用いて酸化応答の分 析が行われた。なお、気管支肺胞の洗浄液を用いて生体外で刺激された肺胞大食 細胞による酸化バーストのレベルは、微分子注射で生体内での刺激に比べて極め て 低かった（上記表１参照）。 図２は、正常なウサギからの肺胞大食細胞が、チモザンが注射されたウサギか ら得られた気管支肺胞の洗浄液の濃度を種々に変えて１８時間培養されたとき、 気管支肺胞の洗浄液は、ラテックスで顕在化された化学ルミネッンス応答が未処 理の肺胞大食細胞で観察されたのと比べて１５倍の高い増加で、正常な肺胞大食 細胞を刺激したことを示している。図２において、２０ｍｇのチモザンが静脈注 射された２日後に、気管支肺胞の洗浄液がウサギから採収された。対照のウサギ から採収された肺胞大食細胞は、種々の濃度の気管支肺胞の洗浄液で１８時間３ ７℃で培養され、その後、顕在化薬としてラテックスを用いて化学ルミネッンス 応答の分析が行われた。図２は、正常なウサギから得られた洗浄液で正常な肺胞 大食細胞を培養しても、正常な肺胞大食細胞を刺激しなかったことを示している 。 図１及び図２は、チモザンが注射されたウサギの気管支肺胞の洗浄液が、微分 子にさらされていない大食細胞を刺激することができる大食細胞刺激因子（例え ばサイトカイン）を含んでいるということを示唆している。チモザンが注射され たウサギの気管支肺胞の洗浄液のみが、生体外で正常な肺胞大食細胞を刺激でき る大食細胞刺激因子を含んでいた。大食細胞刺激因子は、上記データに示された 短い継続時間の刺激効果を達成するために、分離され得、食作用微分子なしで患 者に投与され得ることが予想される。したがって、そのような投与のある日数後 に致死能力が高まるべく、患者の大食細胞が刺激されるように、その患者に大食 細胞刺激因子を含む製剤を提供する（例えば注射（静脈、気管内、腹膜内、筋内 、皮下その他）、噴霧器、又は坐薬や経口又は鼻への噴射などのような他の手段 で提供する）。気管支肺胞洗浄液に現れた大食細胞刺激因子は比較的不安定であ り、１５日間以上、−６０℃での保管では、生存力の約５０％は消失する。３．応用 上記実験で発見された重要な事項は、（１）食作用サイズの微粒子製剤による 大人のウサギへの注射は、ＰＭＡ、Ｏｐ−ｚｙｍ又はラテックスを用いて生体外 で顕在化させたとき、極めて大きな酸化バーストを与えるために、１〜４日目に 生体内で肺胞大食細胞を刺激したこと、（２）肺胞大食細胞は、使用された微粒 子の製剤によっては生体外で刺激されえなかったこと、（３）肺胞大食細胞は、 大きな非食作用の微粒子製剤を注射することによっては生体内で刺激されなかっ たこと、（４）正常な肺胞大食細胞は、チモザンが注射されたウサギから得られ た気管支肺胞の洗浄液により生体外で刺激されたことである。 微粒子の製剤の静脈注射により刺激された肺胞大食細胞の実験で観察された顕 在化された酸化バーストの大きさは、オイル内で熱殺菌されたＢＣＧによる免疫 後３週間で達成される最大刺激と等しいということは特に興味深いことである（ チダたち インフェクト．イムノ．，５５：１４７６−１４８３ １９８７年（ Ｃｈｉｄａ ｅｔ ａｉ．，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，５５：１４７６−１ ４８３（１９８７）），ギリダーたち ジェイ．ルーク．バイオル．，４９：４ ４２−４４８ １９９１年（Ｇｉｒｉｄｈａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋ． Ｂｉｏｌ．，４９：４４２−４４８（１９９１）），及びハヤカワたち ジェイ ．ルーク．バイオル．，４５：２３１−２３８ １９８９年（Ｈａｙａｋａｗａ ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．，４５：２３１−２３８（１９８９ ））参照）。この応答レベルは本当に印象的である。なぜなら、生体外で顕在化 されたとき正常な動物からの定住性動物の肺胞大食細胞と比べて、酸化基を生じ させるために、肺胞大食細胞の能力が１００倍以上に増加したことを示している からである。この応答は、最大刺激が生じる前２〜３日のみ注射後の間隔がある 点で、古典的なＴ細胞媒介の大食細胞の刺激とは著しく相違している。 肺胞大食細胞が、使用された微粒子の製剤によっては生体外で刺激され得なか った事実は特に興味深いことである。これは、第２の細胞タイプが肺胞大食細胞 の刺激剤に含まれているかもしれないことを示唆している。また、食作用サイズ の微分子の要求は注目に値する。我々は非食作用のラテックス微分子を用いて肺 胞大食細胞の検出可能な刺激を誘発することはできない。微分子が食作用のサイ ズでなければならないという要求は、注射された微粒子の食作用が大食細胞から 得られ、刺激因子の生成に最後に応答するリンパ球のような第２の細胞タイプを 活性化するサイトカインの生成の引き金となることを示唆している。このことに ついては、インタールーキン−１又は腫瘍壊死因子の何れかが、最終的に刺激因 子を総合する細胞を活性化させる候補となり得る。微粒子が注射されたウサギか ら得られた洗浄液（図１及び２）が生体外で正常な肺胞大食細胞を刺激したとい う観察は、刺激因子が注射されたウサギの肺に蓄積されたことを示している。 この発見された刺激のメカニズムは、急速かつ短時間のメカニズムであり、細 胞が介在された防禦組織の非特異的な形を示している。古典的な細胞が介在した 免疫が進展する時間がなかった環境下において、１００倍以上の潜在能力が肺の 大食細胞における酸化応答で増加し、結合する死滅能力は他の感染だけでなく肺 の感染を制御するのに高い有益な効果を有している。 患者が今にも予定された外科手術を受けようとしている状況、又は兵士が今に も計画された侵入を受けよう、或いは生物学的な交戦に遭遇しようとしている状 況、又は接触感染に遭遇するであろうその他の状況において、食作用のある微分 子の製剤又は大食細胞刺激因子を含んだ製剤の何れかをその事象が生じる１〜４ 日前、好ましくは２〜３日前にその人に与える。 微分子の投与は、注射、エーロゾル化された投与量の吸入、又は他の好ましい 手段によっても良い。 ウサギの活性を著しく高める大食細胞の刺激に効果を有する微分子の製剤を考 慮して、人間に対する好ましい投与量のレンジは、体重のｋｇあたり０．５〜２ ｍｇとする。このような推定は、最大応答の約７５％を示すウサギのデータに基 づいている。もっと多くの投薬も可能であると思われる。最大の応答のために充 分な微分子を提供することが目標である。大食細胞を刺激するために用いられる 微粒子が食作用（例えば、直径０．３〜５μ）を有することが決定的に重要であ る。上記の結果を考慮すると、ほとんどあらゆるタイプの微分子が、死滅能力を 増強させるべく大食細胞を即座に刺激するのに好ましい。微分子は生物分解性で あることが好ましい。例えば、好ましい生物分解性の微分子は、Ｌ−乳酸／グリ コール酸のホモ及びコポリマーの合成物である生物分解性ミクロスフェア（タバ タたち ジェイ．バイオムド．マット．レス．２２：８３７−８５８ １９８８ 年（Ｔａｂａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔ．Ｒｅｓ．２２： ８３７−８５８（１９８８））参照）、ゼラチン微分子（架橋されたもの）、分 解性澱粉複合物、ポリ２−ヒドロキシエチルＬ−グルタミン（ＰＨＧＥ）のよう な生物分解性水素（ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｈｙｄｒｏｇｅｌ）（マーチ ャントたち ジェイ．バイオムド．マット．レス．１７：３０１−３２５ １９ ８３年（Ｍｅｒｃｈａｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔ．Ｒｅｓ ．１７：３０１−３２５（１９８３））参照）、ヒドロキシブチレート−ヒドロ キシバレレートコポリマー（ヤシンたち バイオマティリアルズ１３：９−１６ １９９２年（Ｙａｓｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ １３：９ −１６（１９９２））参照）、コンカナバリンＡ、有機体の起始（ｏｒｇａｎｉ ｃ ｏｒｉｇｉｎ）のコロイド状の微分子、ボロックコポリマーポリエチレンサ クシネート−ｂ−ポリエチレングリコール（ＰＥＳ／ＰＥＧ）（アルバートソン たち アクタ ポリメリカ ３０：９５−１０４ １９８８年（Ａｌｂｅｒｔｓ ｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃａ ３０：９５−１０４ （１９８８））参照）、キチン質、及びセルロースを含む。もし、生物分解性の 微分子が用いられた場合には、最適な短期間の大食細胞の刺激が要求される１〜 ４日の間、体内で比較的無傷でなければならない。 興味ある主な点は、最大の微分子の誘発される刺激に必要な間隔は、バクテリ ア侵入、住みつき、及び外科手術がつづく明白な感染の期間として共通に観察さ れる３日目から４日目に一致する。もし、大食細胞の刺激がこの間隔内で達成さ れると、感染の危険性は大いに減少するであろう。したがって、接触感染（ウィ ルスやバクテリア）にさらされている患者には、短期間で患者の大食細胞が短い 期間（１〜４日）内に死滅能力を高めるために刺激されるように、懸濁食作用微 分子が与えられる。 大食細胞の刺激組織が癌患者に対して役に立つであろうという命題を根拠づけ る２つの理論的解釈がある。第１には、いくつかの腫瘍は活性化された大食細胞 、特に肉腫によって破壊されるということが確立されている。第２には、リンパ 細胞の起始の腫瘍のいくつかは、極めて日和見感染する結果となりうる著しい免 疫抑制を引き起こすことである。したがって、これまで述べてきたように、抗菌 性の活性だけでなく抗腫瘍の活性のレベルを高めるために大食細胞を刺激するよ うな組織は、そのような患者にとって有益な効果を有している。加えて、この創 意に富む組織の大食細胞刺激能力は、後天性免疫不足症候群（ＡＩＤＳ）に悩ま されている患者たちに有用であろう。ＡＩＤＳ及び癌患者は、２次感染の感染性 を増加させ、彼らの大食細胞組織は通常彼らの病気の極めて後の段階まで保たれ る。 したがって、この大食細胞の増加効果は、２次感染や日和見感染を防いだり処置 したりすることにとても有用である。この効果は１週間持続し、組織細胞に対し て無毒であると予測されることから、癌患者及びＡＩＤＳ患者に対して月１回の 間隔で投与を繰り返すことができる。 微分子の製剤は、静脈注射あるいは腹膜内注射によって投与することができる 。その製剤は、等浸透圧の微分子の懸濁液を注射できるように従来の緩衝剤だけ でなく食塩水で調製される。 また、微分子のエーロゾル放出も用いることができる（例えば、噴霧器又は測 定された投与量の吸入器による）。微分子の噴霧法の主な利点は非侵襲性の放出 手順であることである。もし、微分子が、肺へのエーロゾル放出のために測定さ れた投与量の吸入器（ＭＤＩ）に処方された場合、高圧ガスに分散させ圧力下で 缶に封入する必要がある。その高圧ガスは、一般的に用いられているＣＣｌ₃Ｆ （フレロン１１又はＣＦＣ−１１），ＣＣｌ₂Ｆ₂（フレロン１２又はＣＦＣ−１ ２）及びＣＣｌＦ₂−ＣＣｌＦ₂（フレロン１１４又はＣＦＣ−１１４）のような フレロン又はＣＦＣｓの何れか又はこれらを組み合わせたものである。しかしな がら、近年においては、１，１，１，２−テトラフルオロエチレン（ＨＦＣ−１ ３４ａ）のように、もっとオゾンにやさしい高圧ガスを用いることに重きがおか れており、高圧ガス２２７、炭化水素（プロパン、ブタン、イソブタン他）、フ ルオロカーボン（パーフルオロペンタン）、ジメチルエーテルなども、測定され た投与量の吸入器の塗布において、またこれらのガスの何れか又はこれらを組み 合わせて用いることができる。ほとんど全てのＭＤＩ塗布を用いると、一般的に は合成混合物の９０重量％以上が高圧ガスで構成される。オレイン酸、レシチン 、ソルビタントリオレート（ｓｏｒｂｉｔａｎ ｔｒｉｏｌｅａｔｅ）などの表 面活性剤もまた金属製バルブを潤滑したり微分子を混合物内へ分散させる手助け としたりするために含んでも良い。 上述したように、短期間で大食細胞を刺激するための代替え製剤は、食作用微 分子への遭遇に対する応答において細胞から放たれる大食細胞刺激因子を含んで いる。図１及び図２に示されたように、大食細胞刺激因子は、肺胞大食細胞を採 収する２〜３日前に生体内で食作用微分子にさらされた動物からの気管支肺胞洗 浄液の中に存在する。この大食細胞刺激因子は、食作用微分子を用いて又は組み 換え若しくは他の好ましい技術によって予め処置された動物の体液から得ること ができる。上述した微分子の製剤に類似した大食細胞刺激因子を含む製剤は、エ ーロゾル、静脈注射若しくは腹膜内注射若しくは気管内注射、又は他の好ましい 手法によって放出するために調製することができる。大食細胞刺激因子は、患者 に対する大食細胞刺激因子の提供を促進する製薬的に享受できる担持液体、ガス 、バインダー、エリキシルに溶解させたり分散させたりする。 好ましい実施例により本発明を説明したが、当業者は、添付した請求の範囲の 真意及び観点の範囲内において、本発明は種々に改変できることを明確に理解す る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 これまで私の発明を説明したが、私が新規なものとして請求し特許によって確 保したいものは次のとおりである。 １．患者が増強された大食細胞活性を必要とする日を決定する工程と、 前記患者に、効果的な投与量の食作用微分子を、前記患者が増強された大食細 胞活性を必要とする前記日の１〜４日前に投与し、これにより前記食作用微分子 が大食細胞活性を増強させるために前記患者の大食細胞を刺激する工程と、 を有するバクテリア感染及びウィルス感染の食作用治療を必要とする患者の大食 細胞を生体内で刺激する方法。 ２．前記投与の工程が注射により行われる請求項１記載の方法。 ３．前記投与の工程が吸入により行われる請求項１記載の方法。 ４．前記食作用微分子が、投与されてから４日間以上患者の体内で生物分解性を 有する請求項１記載の方法。 ５．前記食作用微分子が、オプソニンを作用させるチモザン、ラテックス、ポリ スチレン、熱殺菌されたＢＣＧ、及び熱殺菌された表皮ブドウ球菌からなる群か ら選ばれる請求項１記載の方法。 ６．患者がバクテリア又はウィルス因子に感染していること、及び前記患者が増 強された大食細胞の活性から利益を得ることを決定する工程と、 前記患者に効果的な投与量の食作用微分子を投与し、これにより投与してから １〜４日後に大食細胞活性を増強させるために、前記食作用微分子が前記患者の 大食細胞を刺激する工程と、 を有する殺菌活性や殺ウィルス活性を必要とする患者の大食細胞を生体内で刺激 する方法。 ７．前記投与の工程が注射により行われる請求項６記載の方法。 ８．前記投与の工程が吸入により行われる請求項６記載の方法。 ９．前記食作用微分子が、投与されてから４日間以上患者の体内で生物分解性を 有する請求項６記載の方法。 １０．前記食作用微分子が、オプソニンを作用させるチモザン、ラテックス、ポ リスチレン、熱殺菌されたＢＣＧ、及び熱殺菌された表皮ブドウ球菌からなる群 から選ばれる請求項６記載の方法。 １１．患者がＨＩＶウィルスに感染していること、及び前記患者が増強された大 食細胞の活性から利益を得ることを決定する工程と、 前記患者に効果的な投与量の食作用微分子を周期的な基準で投与し、これによ り投与してから１〜４日後に大食細胞活性を増強させるために、前記食作用微分 子が前記患者の大食細胞を刺激する工程と、 を有する後天性免疫不足症候群（ＡＩＤＳ）に悩まされている患者の治療方法。 １２．前記周期的な基準が１ヶ月に１回である請求項１１記載の治療方法。 １３．前記投与の工程が注射により行われる請求項１１記載の方法。 １４．前記投与の工程が吸入により行われる請求項１１記載の方法。 １５．前記食作用微分子が、投与されてから４日間以上患者の体内で生物分解性 を有する請求項１１記載の方法。 １６．前記食作用微分子が、オプソニンを作用させるチモザン、ラテックス、ポ リスチレン、熱殺菌されたＢＣＧ、及び熱殺菌された表皮ブドウ球菌からなる群 から選ばれる請求項１１記載の方法。 １７．患者が癌の状況にあること、及び前記患者が増強された大食細胞の活性か ら利益を得ることを決定する工程と、 前記患者に効果的な投与量の食作用微分子を周期的な基準で投与し、これによ り投与してから１〜４日後に大食細胞活性を増強させるために、前記食作用微分 子が前記患者の大食細胞を刺激する工程と、 を有する癌に悩まされている患者の治療方法。 １８．前記周期的な基準が１ヶ月に１回である請求項１７記載の治療方法。 １９．前記投与の工程が注射により行われる請求項１７記載の方法。 ２０．前記投与の工程が吸入により行われる請求項１７記載の方法。 ２１．前記食作用微分子が、投与されてから４日間以上患者の体内で生物分解性 を有する請求項１７記載の方法。 ２２．前記食作用微分子が、オプソニンを作用させるチモザン、ラテックス、ポ リスチレン、熱殺菌されたＢＣＧ、及び熱殺菌された表皮ブドウ球菌からなる群 から選ばれる請求項１７記載の方法。 ２３．高圧ガス、及び前記高圧ガスに分散された効果的な量の食作用微分子を含 み、前記高圧ガスは合成物の少なくとも９０重量％で構成されるバクテリア感染 及びウィルス感染を予防するための計量された投与量の吸入器用合成物。 ２４．前記食作用微分子が、直径が５μｍ以下である請求項２３記載の合成物。 ２５．前記食作用微分子が、オプソニンを作用させるチモザン、ラテックス、ポ リスチレン、熱殺菌されたＢＣＧ、及び熱殺菌された表皮ブドウ球菌からなる群 から選ばれる請求項２３記載の合成物。 ２６．患者が増強された大食細胞活性を必要とする日を決定する工程と、 前記患者に、効果的な投与量の大食細胞刺激因子を、前記患者が増強された大 食細胞活性を必要とする前記日の１〜４日前に投与し、これにより前記大食細胞 刺激因子が大食細胞活性を増強させるために前記患者の大食細胞を刺激する工程 と、 を有するバクテリア感染及びウィルス感染の食作用治療を必要とする患者の大食 細胞を生体内で刺激する方法。 ２７．前記投与の工程が注射により行われる請求項２６記載の方法。 ２８．前記投与の工程が吸入により行われる請求項２６記載の方法。 ２９．前記大食細胞刺激因子が、効果的な投与量の食作用微分子により１〜４日 間予備処理された動物の気管支肺胞洗浄液から得られる請求項２６に記載の方法 。 ３０．大食細胞刺激因子及び前記大食細胞剌激因子を患者に与えるのに適した担 体を有するバクテリア感染及びウィルス感染を予防するための合成物。 ３１．前記大食細胞刺激因子が、効果的な投与量の食作用微分子により１〜４日 間予備処理された動物の気管支肺胞洗浄液から分離される請求項３０に記載の合 成物。