JPH08500816A

JPH08500816A - スフィンゴシン−１−ホスフェートその誘導体および擬態物による細胞能動性の阻害方法、並びにスフィンゴシン−１−ホスフェートおよびその誘導体の合成方法

Info

Publication number: JPH08500816A
Application number: JP5517540A
Authority: JP
Inventors: イガラシ，ヤスユキ; ルアン，フーギャン; サダヒラ，ヨシト; カワ，シゲユキ; ハコモリ，セン−イチロー
Original assignee: ザ・バイオメンブレイン・インスティテュート
Priority date: 1992-04-03
Filing date: 1993-04-01
Publication date: 1996-01-30
Also published as: WO1993019760A1; US5877167A; US5260288A; US5391800A; CA2130992A1; EP0671917A4; US5663404A; EP0671917A1

Abstract

(57)【要約】腫瘍細胞と阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体およびスフィンゴシン−１−ホスフェートのまたはその誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤とを接触させることからなる腫瘍細胞の走化性および／または化学侵入能動性を阻害する方法。細胞と食運動性阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェトの誘導性、およびスフィンゴシン−１−ホスフェートのまたはその誘導体よりなる群から選ばれる薬剤とを接触させることからなる腫瘍細胞および好中球の食運動性活性を阻害する方法。治療の必要な宿主に転移阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体、およびスフィンゴシン−１−ホスフェートのまたはその誘導体よりなる群から選ばれる薬剤、およびその薬剤の薬学的に許容しうる塩を投与することからなる腫瘍細胞転移を阻害する方法。治療の必要な宿主に炎症阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体、およびスフィンゴシン−１−ホスフェートのまたはその誘導体よりなる群から選ばれる薬剤、およびその薬剤の薬学的に許容しうる塩を投与することからなる好中球の血管壁への能動性および侵入による炎症を阻害する方法。スフィンゴシン−１−ホスフェートおよびその誘導体を合成する方法。

Description

【発明の詳細な説明】スフィンゴシン−１−ホスフェートその誘導体および擬態物による細胞能動性の阻害方法、並びにスフィンゴシン−１−ホスフェートおよびその誘導体の合成方法技術分野本発明は、哺乳類の細胞能動性（ｃｅｌｌｍｏｔｉｌｉｔｙ）に深い効果を有する化合物、その化合物を使用する方法およびその化合物を化学的に合成する方法に関する。背景技術集合的にスフィンゴシン−１−ホスフェート（ＳＰＮ−１−Ｐ）と称せられる、スフィンゲニン−およびスフィンゴシン−１−ホスフェートは、スフィンゴシン（ＳＰＮ）キナーゼの生成物として多年にわたって知られてきた。{Stoffel W .,Hoppe-Seyler's Z.Physiol.Chem.,354:562,1973;354:1311(1973);Stoffel W., et al,ibid,355:61(1974);354:169(1973);Louie D.D.,et al,J.Biol.Chem.,251: 4557(1976）}。スフィンゴシン（ＳＰＮ）キナーゼにより接触される反応は、スフィンゴイド系崩壊の初期段階と考えられてピリドキサールホスフェート依存リアーゼ反応によりエタノールアミン−１−ホスフェートおよび長鎖アルデヒド（例えば、パルミタール）を生じる（図１参照）。ＳＰＮ−１−ＰはＳＰＮの初期の異化代謝生成物として認められてきたが、この化合物の実際の生理的機能はまだ知られていない。マウス３Ｔ３の細胞成長のＳＰＮ依存剌激は、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）経路に関係がないことが示されてきて{Zhang et al,J.Biol.Chem.,265:76(199 0)}ＳＰＮ −１−Ｐの生成に帰せられてきた{Zhang et al,J.Cell Biol.,114:1 55(1991)}。ＳＰＮ−１−ＰはＣａ²⁺移動に関するイノシトール−１，４，５− トリホスフェートの効果と類似して細胞質Ｃａ²⁺を高めることができる{Ghosh et al,Science,248:1653(1990)}。ＳＰＮ−１−Ｐは、特に上皮成長因子およびインシュリンの存在において、３Ｔ３細胞の細胞増殖性効果を引き起こすことがこれらの初期の研究において想定されたけれども{Zhang et al(1991) }、細胞の中のＳＰＮ−１−Ｐの生理学的な機能的役割に知られていなかった。他方、ＳＰＮ−１−Ｐは化学反応によって合成することが困難である。B.Weis s(J.Am.Chem.Soc.,79:5553(1957)}は、ジヒドロスフィンゴシン−１−Ｐ（スフィンガニン−１−Ｐ）を合成できたが、スフィンゲニン−１−Ｐを合成できなかった。ＳＰＮ−１−Ｐを化学的に合成するこの努力は不成功であったが、多分ＳＰＮ中の多官能性基の存在のためである。ＳＰＮ−１−Ｐ（主としてＤ−エリスロ異性体であるが、少量のＬ−スレオ異性体を含有する）の調製について唯一の報告された方法は、ストレプトマイセスクロモフスクス(Streptomyces Chromo fuscus)から単離された、ホスホリパーゼＤによるスフィンゴシルホスホコリンの処理による方法である{van Veldhoven P.P., Fogelsong R. J., Bell R.M., J . Lipid Res.,30:611(1989)}。発明の開示本発明者等は、ＳＰＮ−１−Ｐおよびその誘導体が細胞能動性に影響することを発見した。細胞能動性は、炎症、ｉ瘍侵入、および転移のようなさまざまな病理学上の過程を限定する重要なパラメーターである。したがって、本発明の目的は、悪性腫瘍細胞の転移性を阻害し、細胞能動性を抑制しそして異常細胞増殖が特徴であるさまざまな障害を治療するための化合物およびその誘導体を提供することである。本発明の別の目的は、好中球の能動性による炎症を阻害するための化合物およびその誘導体を提供することである。本発明の更に別の目的は、好中球の能動性による炎症および悪性腫瘍細胞の転移性を阻害する化合物およびその誘導体を製造する方法を提供することである。これらのおよび他の目的は、阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体およびスフィンゴシン−１−ホスフェートまたはその誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤と腫瘍細胞を接触させることからなる腫瘍細胞の走化能動性を阻害する方法を提供することにより達成された。本発明はまた、阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体およびスフィンゴシン−１−ホスフェートまたはその誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤と腫瘍細胞を接触させることからなる腫瘍細胞の化学的侵入を阻害する方法を提供する。本発明はまた、食運動性（Phagokinetic）阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体、およびスフィンゴシン−１−ホスフェートまたはその誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤と細胞を接触させることからなる好中球および腫瘍細胞の食運動性活性を阻害する方法を提供する。本発明はその上、転移を治療することが必要な宿主に阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体およびスフィンゴシン−１−ホスフェートまたはその誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤、並びにその薬剤の薬学的に許容しうる塩を投与することからなる腫瘍細胞転移を阻害する方法を提供する。本発明は更に、炎症を治療することを必要とする宿主に阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体およびスフィンゴシン−１−ホスフェートまたはその誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤、並びにその薬剤の薬学的に許容しうる塩を投与することからなる好中球の血管壁への能動性および侵入による炎症を阻害する方法を提供する。最後に、本発明はＮＭＰ分光法により検出されるＬ−スレオ異性体を本質に含まないスフィンゴシン−１−ホスフェートおよびその誘導体並びにこのスフィンゴシン−１−ホスフェートおよびその誘導体の製造方法を提供する。図面の簡単な説明図１は、スフィンゴリピドの合成および分解の代謝関係を描く。全てのグリコスフィンゴリピド（Galcerおよびその誘導体を除く）は、ＵＤＰ−Ｇｌｃを通してセラミド（Ｃｅｒ）から合成される、ＧｌｃＣｅｒを通して合成される。Ｃｅｒは脂肪酸およびＳＰＮに分解される（経路１）。ＳＰＮはリン酸化によってＳＰＮキナーゼによってＳＰＮ−１に分解され（経路２）、それはかわるがわるホスホエタノールアミンおよびパルミタールに分解される。ＳＰＮはメチル基転換によりジメチルスフィンゴシン（ＤＭＳ）に転換させることもできる（経路３）。Ｃｅｒはホスファチジルコリンからホスホリコリンの転移によりスフィンゴミエリンヘ転換される。図２は、ＳＰＮ−１−ＰおよびＳＰＮ−１−Ｐのさまざまな合成誘導体の構造を示す。図３Ａ〜３Ｃは、ＳＰＮ−１−Ｐおよびそのさまざまな誘導体の化学合成を描く。図４Ａおよび４Ｂは、ホスホリパーゼＤによってスフィンゴシルホスホコリンから作られたＳＰＮ−１−Ｐ（図４Ａ）および化学的に合成したＳＰＮ−１−Ｐ（図４Ｂ）の負イオンファブ質量分析スペクトル（マトリックスとしてＤＭＩＸ）である。図５Ａ〜Ｄは、ホスホリパーゼＤによってスフィンゴシルホスホコリンから製造したＳＰＮ−１−Ｐ（図５Ａおよび５Ｂ）および化学的に合成したＳＰＮ−１ −Ｐ（図５Ｃおよび５Ｄ）の¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）の一部である。スペクトルはメチル−¹²Ｃ−ｄ₃−アルコール−ｄ−酢−ｄ₃−酸−ｄ８：２（Ｖ／Ｖ）にて得た。図６は、走化性細胞能動性および化学侵入検定のための図式を描く。図７は、走化性細胞能動性または化学侵入を検出する検定のための細胞数とトルイジンブルー光学密度との間の直線関係を示すグラフである。図８は、トランスウエル（transwell）ポリカーボネート膜上に塗被されるＭＡＴＲＩ−ＧＥＬ量の選択のための理論的根拠を証明するデータを描くグラフである。縦座標は移動する細胞の数（トルイジンブルーの吸光度により定量された）を表わし、横座標は塗被したＭＡＴＲＩ−ＧＥＬの量を表わす。黒丸は２０時間後に定量された移動を表わし、白丸は７２時間後に定量された移動を表わす。２０時間の持続期間について、最大移動は１μｇのＭＡＴＲＩ−ＧＥＬをくぼみのフィルター当りに塗被したときに観察され、その結果この量を走化性能動性検定に使用した。７２時間の持続期間については、２０μｇＭＡＴＲＩ−ＧＥＬ／くぼみを塗被したとき移動は観測されなかったが、１０μｇ／くぼみでは若干の移動が生じた。それゆえ、１０μｇを化学的侵入検定に使用した。図９は、２０時間インキュベーション後１μｇ／くぼみのＭＡＴＲＩ−ＧＥＬを塗被したポリカーボネートトランスウエル膜を通り抜けたマウスＢ１６／Ｆ１細胞の走化性能動性を示すグラフである。縦座標は対照に対する移動した細胞数のパーセントを表わす。横座標は下部小室に添加した状態調節した媒体（ＣＭ）中のＳＰＮまたはＳＰＮ誘導体の濃度を表わす。ＳＰＮ−１−Ｐはスフィンゴシン−１−ホスフェートを表わし、ＴＭＳはＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシンを表わす。図１０は、７０時間インキュベーション後ＭＡＴＲＩ−ＧＥＬを１０μｇ／くぼみ塗被したポリカーボネートトランスウエル膜を通り抜けたＢ１６／Ｆ１細胞の化学侵入を示すグラフである。縦座標、横座標および略語は図９について記述したものと同じである。図１１Ａ〜Ｆは、食運動性（Phagokinetic）検定のためのＢ１６／Ｆ１細胞の金ゾルクリアランスパターンを描く。図１１Ｄ〜Ｆは、さまざまな濃度のＳＰＮ−１−Ｐの不在または存在においてきれいにされた領域を示す。図１１Ａ：ＳＰＮ−１−ＰなしのＣＭ中の対照細胞；図１１Ｂ：ＣＭプラス１．０μＭＳＰＮ−１−Ｐ；図１１Ｃ：ＣＭプラス０．１μＭＳＰＮ−１−Ｐ；図１１Ｄ：０μＭＳＰＮ−１−Ｐ；図１１Ｅ：０．１μＭＳＰＮ−１−Ｐ；図１１Ｆ：１．０μＭＳＰＮ−１−Ｐ。図１２Ａおよび１２Ｂは、Ｂ１６／Ｆ１細胞による³Ｈ−ＳＰＮ（図１２Ａ）および¹⁴Ｃ−ＴＭＳ（図１２Ｂ）の時間推移捕集を描く。縦座標はＢ１６／Ｆ１細胞により吸収された放射能％を表わし、横座標は時間表示の時間を表わす。図１３Ａ−１３Ｃは、Ｂ１６／Ｆ１細胞に³Ｈ−ＳＰＮを添加後のさまざまなＳＰＮ誘導体の標識の時間推移変化を描く。図１３Ａ：Ｆｏｌｃｈの低相から分離した脂質の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）；図１３Ｂ：Ｆｏｌｃｈの上相から分離し続いて¹⁴Ｃ−ＴＭＳと共にインキュベートし抽出した脂質のＴＬＣ図１３Ｃ：Ｆｏｌｃｈの上相から分離した脂質のＴＬＣレーン１，０分。レーン２，１０分。レーン３，３０分。レーン４，１時間。レーン５，２時間。レーン６，４時間。レーン７，２０時間。ＣＥＲはセラミドを表わし；ＣＭＨはセラミドモノヘキソシドを表わし；ＰＥはホスファチジルーエタノールアミンを表わし；ＳＭはスフィンゴミエリンを表わし；ＴＭＳはＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシンを表わし；ＳＰＮはスフィンゴシンを表わし；ＳＰＮ−１−Ｐはスフィンゴシン−１−ホスフェートを表わし；そしてＯＲＧは起源を表わす。発明の詳細な説明ここに、ＳＰＮ−１−Ｐが食運動性飛跡検定（金ゾル粒子塗被固相上の）および侵入検定（細胞外間質を塗被したトランスウエルチャンバーを通り抜ける）により測定される、好中球および腫瘍細胞の細胞能動性を阻害する明らかな証拠を提供する。ＳＰＮ−１−Ｐに関するこの阻害性効果は、ＳＰＮ、Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン（ＤＭＳ）、またはＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン（ＴＭＳ）よりもずっと強いことが示される。更に、ＤＭＳおよびＴＭＳとは著しく違って、ＳＰＮ−１−ＰはＰＫＣを阻害しない。それゆえ、細胞能動性に関するＳＰＮ−１−Ｐの効果は、ＰＫＣ信号送達経路と無関係である。本発明者等はまた化学合成によりＳＰＮ−１−Ｐおよびその誘導体を製造する方法を確定した。したがって、本発明は、一般的に細胞能動性の阻害剤としてのＳＰＮ−１−Ｐ、その誘導体、または擬態物の化学合成および使用、並びに両方とも細胞能動性に非常に依存する腫瘍細胞転移および炎症過程の抑圧におけるそれらの使用を取扱う。ＳＰＮ−１−ＰはＳＰＮ、ＤＭＳまたはＴＭＳよりも細胞毒性がはるかに小さく、それゆえＳＰＮ、ＤＭＳ、ＴＭＳまたは他のＳＰＮ誘導体よりも臨床的用途にずっと有用であると予想される。腫瘍細胞の走化性能動性および腫瘍細胞の化学侵入を阻害する方法本発明は、腫瘍細胞を阻害性量のＳＰＮ−１−Ｐ、ＳＰＮ−１−Ｐの誘導体およびＳＰＮ−１−Ｐのまたはその誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤と接触させることからなる腫瘍細胞走化性能動性を阻害する方法を提供する。その上、本発明は、腫瘍細胞を阻害性量のＳＰＮ−１−Ｐ、ＳＰＮ−１−Ｐの誘導体およびＳＰＮ−１−Ｐのまたはその誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤接触させることからなる腫瘍細胞の転移を阻害する方法を提供する。各方法に使用する薬剤の阻害性量は、以下に記載するトランスウエル板を使用する検定により容易に決定できる。一般的な指針として、腫瘍細胞の走化性能動性および化学侵入を阻害するために十分なＳＰＮ−１−Ｐの阻害性の量は、約１０^-8Ｍ〜約１０^-7Ｍである。走化性細胞能動性および化学侵入を測定するための検定は、ポリカーボネート膜フィルター（孔の寸法８μｍ）を有するトランスウエル板（Costar Scientifi c,Cambridge,MA）を使用して行うことができる。ＳＰＮ−１−Ｐまたは他の阻害剤（例えば走化性能動性検定のために２０μｇ／ｍｌ、または化学侵入検定のために２００μｇ／ｍｌ）を含有するＭＡＴＲＩ−ＧＥＬ（Collaborative Resear ch, Bedford,MA）の水溶液のアリコート、例えば５０μｌを各ウエルに添加して一夜乾燥させた。フィルターを次いで低部小室板上に装備した。低部小室は状態調節された媒質（ＣＭ）（すなわち、脾間質細胞の培養に使用される媒質、そしてこれらの細胞により分泌された能動性因子を含有する）、例えば０．６ｍｌを、ＳＰＮ−１−Ｐまたは他の阻害剤と共にまたはなしに含有することができる。上部小室に、例えば約１００μｌの細胞懸濁液（侵入検定のために５×１０⁴細胞／ｍｌ、能動性検定のために５×１０⁵細胞／ｍｌ）が添加され、そのものは次いで５％ＣＯ₂中で３７℃にて７０〜７２時間（侵入検定）または２０時間（能動性検定）インキュベートする。インキュベーション後、上部小室内に残留している細胞を消毒綿で拭い取り、フィルターの下部小室側へ移動した細胞をメタノール中で３０秒間固定し、０．０５％トルイジンブルーで着色した。フィルターを除去し、着色物を１０％酢酸（例えば、侵入検定のために０．１ｍｌ、能動性検定のために０．５ｍｌ）にて可溶化し、色強度（光学密度）を６３０ｎｍにおけるＥＬＩＳＡ読みにより定量化する。この手順の図式概要を図６に示す。ＳＰＮ−１−Ｐを使用すると、直線関係が細胞数とトルイジンブルー光学密度との間に観測された（図７）。腫瘍細胞および好中球の食運動性活性を阻害する方法本発明はまた、細胞と食運動性の阻害性量のＳＰＮ−１−Ｐ、ＳＰＮ−１−Ｐの誘導体およびＳＰＮ−１−Ｐのまたはその誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤とを接触させることからなる腫瘍細胞および好中球の食運動性活性を阻害する方法を提供する。薬剤の阻害性の量は、以下に記載する金ゾル塗被板検定のような、この技術分野において知られている検定により容易に決定できる。この検定を使用すると、腫瘍細胞に対するＳＰＮ−１−Ｐの食運動性阻害性の量は約０．１μＭ〜約１．０μＭの範囲に及び、好中球に対するＳＰＮ−１−Ｐの食運動性阻害性の量は約０．４５μＭ〜約４．５μＭの範囲に及ぶ。食運動性活性は、運動しながら異質の粒子を摂取する細胞の能力により評価される。細胞能動性は先に記載したように金ゾル粒子を塗被した板上の食運動性飛跡の面積として評価することができる{Albrecht-Buehler, Cell,11:395(1977)} 。金粒子の均一の塗被はウシ血清アルブミンをプレコートしたカバーグラス上に調製され、カバーグラスは繰返しすすぎ洗いして非接着またはゆるく接着した金子を除去する。培養物から引き離したできたての好中球または腫瘍細胞を金ゾル塗被板を入れたペトリ皿中に入れ、２時間（ヒト好中球に対し）または約１８時間（腫瘍細胞に対し）インキュベートした。カバーグラスをリン酸緩衝液入り生理食塩水（ＰＢＳ）中の４％ホルムアルデヒドにて１時間固定し、顕微鏡のスライドグラス上に据え付けた。食運動性飛跡は光学顕微鏡（ニコン、東京、日本）に接続したテレビジョンによって観測した。テレビジョン上の飛跡を半透明シート上に転写し、それを次いで写真複写した。食運動性活性は複写の掃引領域を切り取り秤量することにより定量化する。腫瘍細胞の転移を阻害する方法および炎症を阻害する方法上記の検定は、ＳＰＮ−１−Ｐが腫瘍細胞および好中球の能動性に逆に影響することを立証する。ＳＰＮ−１−Ｐは両方の型の細胞の能動性に強い阻害性の効果を有することを明らかに証明される。腫瘍細胞侵入および炎症の過程は、それぞれ腫瘍細胞および好中球の能動性に依存するから、ＳＰＮ−１−Ｐ、その誘導体およびＳＰＮ−１−Ｐまたはその誘導体の擬態体（ mimetope）は腫瘍のおよび炎症過程の抑圧に有用であると期待される。比較の目的のために、上記の検定に使用した同じ試験細胞を、以下の実施例２の表４に示すように走化性能動性および化学侵入の両方の意外に優れた阻害を証明された多数のスフィンゴリピドおよびＳＰＮ−１−Ｐにさらした。更に、マウスメラノーマＢ１６／Ｆ１およびＢ１６／Ｆ１０細胞、マウスバルブ／Ｃ３Ｔ３繊維芽細胞およびヒト腺維肉腫ＨＴ１０８０細胞のＭＡＴＲＩ−ＧＥＬ塗被ポリカーボネートフィルターを通り抜ける走化性能動性に対するＳＰＮ −１−Ｐの阻害性効果を比較した。以下の実施例２の表５に示すように、結果はスフィンゴシン−1−ホスフェートに対するＢ１６／Ｆ１およびＢ１６／Ｆ１０細胞の感受率が高く、しかるに一方ヒト腺維肉腫ＨＴ１０８０細胞のそれが低いことを立証する。また、比較の目的のために、Ｂ１６／Ｆ１０メラノーマ細胞を食運動性活性を測定する検定においてＳＰＮおよびＴＭＳにさらした。以下の実施例３の表６に示すように、培地に対するＳＰＮまたはＴＭＳの添加は腫瘍細胞によりきれいにされる面積を減少させる。しかしながら、特に平均清浄化面積は、ＳＰＮ−１− Ｐが１．０のまたはそれどころか０．１μＭの濃度で添加されたとき大いに減少した。比較の目的のために、ヒト好中球の食運動性活性もまたＳＰＮ、ＴＭＳ、ホスホエタノールアミン、およびセラミドを使用して定量した。以下の実施例３の表７に示すように、ヒト好中球の食運動性活性の減少はＳＰＮ−１−ＰおよびＴＭＳについて最も著しかった。タンパク質キナーゼＣ活性およびＢ１６／Ｆ１細胞の細胞成長に関するＳＰＮ誘導体の効果もまた研究した。ＳＰＮ−１−Ｐは７５ μＭでさえＢ１６／Ｆ１細胞のＰＫＳ活性に阻害性の効果を持っていなかったが、ＳＰＮとＴＭＳの両方ともこの濃度で強い阻害性の効果を示した（表１）。ＴＭＳおよびＳＰＮはそれぞれ１０μＭでＢ１６／Ｆ１細胞について強いおよび適度の成長阻害効果を示したが、一方ＳＰＮ−１−Ｐはこの濃度で成長阻害効果を全く示さなかった（表２）。Ｂ１６／Ｆ１細胞およびヒト好中球に対するこれらの化合物の毒性もまた、その化合物と共に１時間インキュベート後トリパンブルー排除検定を使用して試験したＳＰＮ−１−Ｐは４５〜５０μＭで両方の型の細胞に対して弱い毒性を示したが、一方ＳＰＮはこの濃度で非常に毒性であった（表３）。さらに、ＳＰＮ対ＴＭＳの代謝転換および捕集を研究した。³Ｈ−標識ＳＰＮおよび¹⁴Ｃ−標識ＴＭＳの両方ともＢ１６／Ｆ１細胞中へ迅速に合体した（図１２Ａおよび１２Ｂ）。しかしながら、ＳＰＮだけはＳＰＮ−１−Ｐおよびセラミド（Ｃｅｒ）へ迅速に転換した（図１３）。これは、細胞をＤ−ＰＤＭＰの存在下に³Ｈ−ＳＰＮと共にインキュベートするとき、それはＣｅｒのＧｌｃＣｅｒおよび他のグリコスフィンゴリピドへの転換を阻害することを明からに証明した。ＳＰＮのスフィンゴシン−１−ホスフェートへの迅速な転換は、Ｃｅｒへの転換に先立つＳＰＮ−１−Ｐに対応するバンドの発現により明瞭に示される。ＳＰＮ−１−Ｐピークは１０分のインキュベーション後に現れたが、一方Ｃｅｒピークは１時間インキュベーション後に現れた。対照的に、¹⁴Ｃ−ＴＭＳは細胞によって迅速に捕集されたが、ＴＭＳに対応するバンドはインキュベーション時間に関係なく不変であった（図１３）。これらの発見は、細胞の能動性および侵入に関する阻害性効果は、ＳＰＮのＳＰＮ−１−Ｐへの迅速な転換によることを示唆する。したがって、本発明は、治療の必要な宿主に転移阻害性量のＳＰＮ−１−Ｐ、ＳＰＮ−１−Ｐの誘導体およびＳＰＮ−１−Ｐのまたはその誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤、およびそれらの薬学的に許容しうる塩を投与することからなる腫瘍細胞の転移を阻害する方法を提供する。本発明はまた、治療の必要な宿主に炎症阻害性量のＳＰＮ−１−Ｐ、ＳＰＮ− １−Ｐの誘導体およびＳＰＮ−１−Ｐのまたはその誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤、およびそれらの薬学的に許容しうる塩を投与することからなる好中球の能動性による炎症を阻害する方法も提供する。腫瘍細胞の転移を阻害する方法の特殊用途としては悪性腫瘍の治療が挙げられる。炎症を阻害する方法は、好中球の血管壁への能動性および侵入によるいかなる炎症にも適用できる。ＳＰＮ−１−Ｐまたは他の阻害剤の阻害性の有効量は、適当な動物モデルの投薬量応答曲線を確立して人間に外挿法によって推定することによる；例えば、本明細書中に記載するように適当な試験管内データから外挿法によって推定することによる；または臨床的試験における有効性を決定することによるような、この技術分野で認められている方法を使用して決定することができる。本発明に係るＳＰＮ−１−Ｐまたは他の阻害剤の適当な投薬量は、疾病の厳しさ、個体の重量、個体の年齢、循環の半減期などのような、特定の医療の応用に依存し、熟練者により容易に決定することができる。投薬の回数、１日の投薬量および治療の進行は個人間で変えてもよい。ＳＰＮ−１−Ｐおよび他の阻害剤は、経口、非経口および局所的のようなさまざまな方法で投与できる。投与のためにＳＰＮ−１−Ｐおよび他の阻害剤と組合わせできる適当な薬学的に許容しうる担体、希釈剤また賦形剤は特定の医療的使用に依存し、熟練者により容易に決定することができる。担体付きまたは無しのＳＰＮ−１−Ｐまたは他の阻害剤は、錠剤、カプセル、ばらまたは単位投薬粉末または顆粒のようなさまざまな形を有することができ；リポソームを含有してもよく；または溶液、乳濁液、懸濁液、軟膏、ペースト、クリーム、ゲル、発泡物またはゼリーに処方してもよい。非経口的投薬の形は、溶液、懸濁液などを包含する。その上、さまざまなこの技術分野で認められている賦形剤、希釈剤、増量剤などが投薬の形に包含されることが適当である。そのような補助的成分としては錠剤分解物質、結合剤、潤滑剤、界面活性剤、乳化剤、緩衝液、湿潤化剤、可溶化剤および防腐剤が挙げられる。熟練者は、阻害剤および "Goodman & Gilman's, The Pharmaceutical Basis of Therapeutics"（6 Ed.,Goodman et al., MacMill an Publ. Co., NY 1980）のような多数の権威者および文献から捜し求める指針を含んでなる適当な処方箋を形成することができる。断続的な細胞成長が特徴であるまたは機能不全のために細胞の成長阻害を必要とするそして比較的に近づきにくい身体部位において、ＳＰＮ−１−Ｐおよび他の阻害剤は有効な局部的濃厚を確実にする適当な様式で投与することができる。例えば、阻害剤はある時間にわたって一定量の阻害剤をゆっくり放出する外科的に位置を定められた挿入管または容器中へ運ばれる蓄積質または補助薬中へ注入してもよく、または異常な細胞成長を示す位置に結合する能力を持つ認識分子と錯体形成してもよい。そのような熟考された筋書の例は、骨髄特異抗体がＳＰＮ −１−Ｐまたは他の阻害剤と錯体形成され、その錯体が白血病患者に投与される骨髄特異性抗原に対し結合特異性を持つ抗体である認識分子である。スフィンゴシン−１−ホスフェートおよびその誘導体の合成さまざまなスフィンゴシン（ＳＰＮ）誘導体が図２および図３Ａ、３Ｂ、および３Ｃに示すように化学的に合成することができる。これらはスフィンゴシン− １−ホスフェート（ＳＰＮ−１−Ｐ）：化合物１′，Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−ホスフェート｛ＤＭＳ−１−Ｐ（２）｝、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−ホスフェート｛ＴＭＳ−１−Ｐ（３）｝、Ｎ−アセチルおよびＮ−アシルスフィンゴシン−１−ホスフェート｛Ｎ−アセチルおよびＮ−アシル−ＳＰＮ−１−Ｐ（４）｝、スフィンゴシン−１，３−ジホスフェート｛ＳＰＮ−１，３−ジホスフェート（５）｝、スフィンゴシン−３−ホスフェート｛ＳＰＮ−３−Ｐ（６）｝、スフィンゴシン−１−チオホスフェート｛ＳＰＮ−１−Ｐ（７）｝、Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェート｛ＤＭＳ−１−Ｓ−Ｐ（８）｝、およびＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェート｛ＴＭＳ−１−Ｓ−Ｐ（９）｝を包含する。以下に記載する合成方法はこの技術分野において慣例的であって熟練者によって容易に実施できる。スフィンゴシン−１−ホスフェート（化合物１）の合成図３Ａは、前もって知られている方法によって合成した保護ＳＰＮ（１′）から出発するＳＰＮ−１−Ｐ（１）の合成のための新しい手順の概要図である；{G armer P., Park J.M., J. Org. Chem.,52:2361(1987);Herold P., Helvetica Ch imica Acta, 71:354(1988);1988:1103(1988)}。化合物１′において、ＸはＮ− ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔ−ＢＯＣ）のような保護基である。２− Ｎ−Ｘ−３−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−エリスロ−ＳＰＮ（３′）は、例えば乾燥ピリジン中で塩化ピバロイルによる化合物Ｉ′のＣ−３水酸基のエステル化により合成され、続いて例えばメタノール（ＭｅＯＨ）中でｐ−トルエンスルホン酸（ｐ−ＴｓＯＨ）による第一級水酸基の選択的脱保護により化合物２′を得る。例えば、トリエチルアミンおよびＣＨ₂Ｃｌ₂（ＣａＨ₂）から蒸留した）の存在下のオキシ塩化リンによる化合物３′の第１級水酸基のリン酸化、続いて例えばＣＨＣｌ₃中での１ＮＨＣｌによる加水分解は、２−Ｎ−Ｘ−３−Ｏ−ピバロイル −Ｄ−エリスロ−ＳＰＮ−１−Ｐ（化合物４′）を生じる。Ｃ−３水酸基（例えば、ｎＢｕｔＮ⁺ＯＨ−〔水性〕／ジオキサンによる）およびアミノ基（例えば、ＴＦＡ／ＣＨ₂Ｃｌ₂による）の脱保護は、それぞれ所望のＳＰＮ−１−Ｐ（化合物１）を得る。この合成生成物は、図４および５に示す、¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）およびマススペクトル（負ＦＡＢ、マトリックスとしてＤＭＩＸ）においてスフィンゴシンルホスホコリンから誘導したものと同一であることを証明できる。ＮＭＲスペクトルの小さな相違は、酵素合成したＳＰＮ−１−Ｐは少量のＬ−スレオ異性体を含有するが、一方化学合成したＳＰＮ−１−Ｐはいかなる検出可能な量のＬ−スレオ異性体も含有しないという事実を表わす。したがって、本発明に係る化学合成したＳＰＮ−１− Ｐは、ＮＭＲ分光法により検出されるようなＬ−スレオ異性体を本質的に含まない。Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−ホスフェート（化合物２）の合成化合物３′を例えばトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）およびＣＨＣｌ₂によって処理して保護部分Ｘを除去し、次いで例えば酢酸ナトリウム緩衝液中で３７％ＣＨ₂ ＯおよびＮａＣＮＢＨ₃の存在下に還元的メチル化を行い、化合物３^aを得る。化合物３^aを次いで例えばトリエチルアミン（Ｅｔ₃Ｎ）およびＣＨ₂Ｃｌ₂中でＰＯＣｌ₃でリン酸化し、そして塩素原子を例えばＣＨＣｌ₃中でＩＮＨＣｌにより処理して水酸基で置換して化合物３^bを得る。Ｃ−３ＯＨのピバロイル基を例えばジオキサン水中で水酸化テトラブチルアンモニウムにて処理して除去して化合物２を得る。Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−ホスフェート（化合物３）の合成化合物３^aをＣＨＣｌ₃中で例えばＣＨ₃ＩおよびＮａＨＣＯ₃で過メチル化し、続いてＤＯＷＥＸ１×２（Ｃｌ^-）処理して化合物３^bを得る。次に、Ｃ−１ＯＨを例えばＥｔ₃ＮおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中でＰＯＣｌ₃でリン酸化し、続いて例えば１ＮＨＣｌおよびＣＨＣｌ₃で処理してＯＨ基によりＣｌを置換する。次に、ピバロイル基を例えばジオキサン水中でｎＢｕ₄Ｎ^-ＯＨ^-の存在下に処理して除去して化合物３を得る。スフィンゴシン−１−チオホスフェート（化合物７）の合成化合物３′をＥｔ₃ＮおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中で塩化トシル（ＴｓＣｌ）で処理し、続いてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中でチオ酢酸カリウムで処理して化合物３^cを得る。アセチル基をエタノール（ＥｔＯＨ）およびＣＨ₂Ｃｌ₂ でＮａＢＨ₄で処理して除去する。次に、ＳＨ基を例えばＥｔ₃ＮおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中でＰＯＣｌ₃でリン酸化し、続いてＣＨＣｌ₃中で１ＮＨＣｌで処理して化合物３^dを得る。化合物３^dをジオキサン中でｎＢｕ₄Ｎ⁺ＯＨ^-で処理してＣ−３ＯＨのピバロイル基を除去する。次に、Ｘを例えばＣＨ₂Ｃｌ₂中でＴＦＡにより除去し化合物７を得る。Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェート（化合物８）の合成化合物３^cを例えばＣＨ₂Ｃｌ₂中でＴＦＡで処理して保護基Ｘ（例えば、ｔ− ＢＯＣ）を除去し、還元的メチル化を酢酸塩緩衝液中で３７％ＣＨ₂ＯおよびＮａＣＮＢＨ₃によって行ない、アミノ基をＮ−ジメチル基で置換して化合物３^eを得る。化合物３^eをＥｔＯＨおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中でＮａＢＨ₄によって処理し、続いて例えばＥｔ₃ＮおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中でＰＯＣｌ₃によってリン酸化し、ＣＨＣｌ₃中で１ＮＨＣｌによって処理して化合物３^fを得る。化合物３^fを例えばジオキサン水中でｎＢｕ₄Ｎ⁺ＯＨ^-によって処理してＣ−３ＯＨのピバロイル基を除去して化合物８を得る。Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェート（化合物９）の合成化合物３^eを例えばＣＨ₃Ｉ、ＮａＨＣＯ₃およびＣＨＣｌ₃を使用してプルジー過メチル化により処理し、続いてＳＯＷＥＸ１×２（Ｃｌ^-）による処理により化合物３^gを得る。化合物３^gを例えばＮａＢＨ₄、ＥｔＯＨおよびＣＨ₂Ｃｌ₂によって処理してスフィンゴシンの１位置にＳＨ基を作り出した。次に、ＳＨ基を例えばＥｔ₃ＮおよびＣＨ₂Ｃｌ₂ 中でＰＯＣｌ₃によってリン酸化し、続いて例えば１ＮＨＣｌおよびＣＨＣｌ₃ による処理によってＯＨ基でＣｌを書換し、続いて例えばジオキサン水中でｎＢｕ₄Ｎ⁺ＯＨ^-で処理してＣ−３ＯＨのピバロイル基を除去して化合物９を得る。Ｎ−アセチルスフィンゴシン−１−ホスフェート（化合物４）の合成化合物３′を例えばＣＨ₂Ｃｌ₂中でＴＦＡによって処理して保護基Ｘ（例えば、ｔ−ＢＯＣ）を除去し、次いで例えば５０％Ｋ₂ＣＯ₃｛テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）水中の｝中でＣＨ₃（ＣＨ₂）_nＣＯＣｌ（ｎ＝０〜２２）によって処理してアンモニウム基をアセチル化またはアシル化して化合物３ⁱを得る。化合物３ⁱをＥｔ₃ＮおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中でＰＯＣｌ₃によって次いでＣＨＣｌ₃中で１ＮＨＣｌによって処理してＣ−１ＯＨ基をリン酸化して化合物３^jを得る。化合物３^jを次いで、例えばジオキサン水中でｎＢｕ₄Ｎ⁺ＯＨ^-によって処理してＣ−３ＯＨのピバロイル基を除去して化合物４を得る。スフィンゴシン−１，３−ジホスフェート（化合物５）の合成化合物１′を例えばＣＨ₃ＯＨ中でＡＭＢＥＲＬＹＳＴ１５番によって処理して、化合物３^kを得るためにＣ−１水酸基を選択的に脱保護する。化合物３^kを次いでＣ−３ヒドロキシルおよびＣ−１ヒドロキシルにＰ（ＳＣ₂Ｈ₅）。基を生成するためにジメチルアニリンおよび酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）中で（Ｃ₂Ｈ₅Ｓ）₂ ＰＣｌによって処理して化合物３^lを得る。化合物３^lを次いでＣ−１ＯＨおよびＣ−３ＯＨをリン酸化しそしてアミノ基を脱保護するためにＣＨ₃ＯＨ中でＩ₂ によって次いでＣＨ₂Ｃｌ₂中でＴＦＡによって処理して化合物５を得る。スフィンゴシン−３−ホスフェート（化合物６）の合成化合物１′をジメチルアニリンおよびＥｔＯＡｃ中で（Ｃ₂Ｈ₅Ｓ）₂ＰＣｌによって処理してＣ−３ヒドロキシルにＰ（ＳＣ₂Ｈ₅）₂基を生成して化合物３^mを得る。化合物３^mを次いでＣ−３ヒドロキシルをリン酸化しそしてＣ−１ＯＨおよびアミノ基を脱保護するために、例えばジオキサン中でＨＣｌによって次いでＣＨ₃ＯＨ中でＩ₂によって処理して化合物６を得る。さて、本発明を限定されることを意味しない特定の実施例を参照して説明する。格別の指定がない限り、全てのパーセント、比率などは体積表示による。実施例実施例１スフィンゴシン−１−ホスフェートの調製スフィンゴシン−１−ホスフェート（ＳＰＮ−１−Ｐ）を酵素的および化学的の両方で合成した。酵素合成は以前に記載されているようにホスホリパーゼＤによるスフィンゴシルホスホコリンの分解によって達成した{Veldhoven等、J.Lipid Res.,30:611(19 89)}。図３Ａは、以前に知られている手順により調製した保護ＳＰＮ−１（１′）で開始するＳＰＮ−１−Ｐの化学合成の手順の概要を示す{Garmer P., Park J.M., J. Org. Chem., 52:2361(1987);Herold P., Helvetica Chimica Acta, 71:354( 1988);Radunz H.E., Devant R.M., Eiermann V., Liebigs Ann. Chem., 1988:11 03(1988)}。この実施例の目的のために、保護されるＳＰＮ−１はＮ−ｔｅｒｔ −ブチルオキシカルボニル（ｔ−ＢＯＣ）によって保護した。無色の油として、化合物２′、０．２２ｇ（９４％）の合成を２５°で４時間の乾燥ピリジン５ｍｌ中の塩化ピバロイル（１．０ｍｌ、８．１ミリモル）による保護スフィンゴシン１′（０．２０ｇ、０．４６ミリモル）のＣ−３水酸基のエステル化により達成し、それをシリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、（１：８Ｖ：Ｖ））により精製した。２５℃で５時間のメタノール１０ｍｌ中のｐ−トルエンスルホン酸（−１００ｍｇ）を使用する処理による２′（０．２１ｇ、０．４０ミリモル）のＣ−１水酸基の選択脱保護で無色の油として２−Ｎ−ｔ−ＢＯＣ −３−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−エリスロ−ＳＰＮ（３′）、０．１３５ｇを得た（シリカゲルクロマトグラフィー、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：４Ｖ：Ｖ））。２５℃で２時間のトリエチルアミン（４３μｌ、０．３ミリモル）およびＣＨ₂Ｃｌ₂（ＣａＨ₂から蒸留した）０．５ｍｌの存在下のオキシ塩化リン（２６μｌ、０．２７ミリモル）による化合物３（１４ｍｇ、０．０２９ミリモル）のＣ−１水酸基のリン酸化、続いて１ＮＨＣｌ１ｍｌおよびＣＨＣｌ₃１ｍｌによる加水分解（２５℃、１．５時間）で１２．９ｍｇ（８０％）の２−Ｎ−ｔ−ＢＯＣ− ３−Ｏ−ピバロイル−Ｄ−エリスロ−ＳＰＮ−１−Ｐ（化合物４′）を得た（ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＣＨ₃ＯＨ／ＡｃＯＨ、６：１：０．２、Ｖ：Ｖ：Ｖによるシリカゲルクロマトグラフィー）。最後に、化合物４′（１２．９ｍｇ、０．０２３ミリモル）のＣ−３水酸基の脱保護（（１）４０重量％のｎＢｕ₄Ｎ⁺ＯＨ^-（水性）３５滴／ジオキサン３ｍｌ、４時間、２５℃；（２）ＡＭＢＥＲＬＩＴＥＩＲ −１２０、水）続いてアミノ保護基の除去（５０％ＴＦＡ／ＣＨ₂Ｃｌ₂ ８ｍｌ、０．５時間、２５℃）で白色固体として所望のＳＰＮ−１−Ｐ（対イオンとしてＨＯＡｃ）、１０ｍｇ（７７％）を得て、それをシリカゲルクロマトグラフィー（ｎＢｕＯＨ／Ｈ₂Ｏ／ＡｃＯＨ、６：１：１、Ｖ：Ｖ：Ｖ）により精製した。この合成生成物は、図４および５に示す¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）およびマススペクトル（負ＦＡＢ、マトリックスとしてＤＭＩＸ）においてスフィンゴシルホスホコリンから誘導したものと同一であることが証明された。図４Ａおよび４Ｂは、ホスホリパーゼＤによってスフィンゴシルホスホコリンから製造したＳＰＮ−１−Ｐ（図４Ａ）および化学合成したＳＰＮ−１−Ｐ（図４Ｂ）の負イオンのファブ質量分析スペクトル（マトリックスとしてＤＭＩＸ）を示す。図５Ａ〜ＤはホスホリパーゼＤによってスフィンゴシルホスホコリンから製造したＳＰＮ−１−Ｐ（図５Ａおよび５Ｂ）および化学合成したＳＰＮ−１−Ｐ（図５Ｃおよび５Ｄ）の¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）の一部である。スペクトルはメチル−¹²Ｃ−ｄ₃−アルコール−ｄ−酢−ｄ₃−酢−ｄ８：２（Ｖ：Ｖ）中で得た。ＮＭＲスペクトルの小さな相違は、酵素合成したＳＰＮ−１−Ｐは少量のＬ− スレオ異性体を含有するが、一方化学合成したＳＰＮ−１−Ｐはいかなる検出できる量のＬ−スレオ異性体も含有しないことを示す。実施例２トランスウエル板を使用する走化性細胞能動性および化学侵入に対する検定ポリカーボネート膜フィルター（孔の寸法８μｍ）を有するトランスウエル板（Costar Scientific, Cambridge,MA）を使用して検定を行なった。２０μｇ／ｍｌ（走化性能動性検定のために）または２００μｇ／ｍｌ（化学侵入検定のために）含有するＭＡＴＲＩ−ＧＥＬ（Collaborative Research, Bedford,MA）の水溶液の５０μｌアリコートを各ウエルに添加し一夜乾燥した。フィルターを低部小室の板上に装着した。下部小室は嫌疑をかけた阻害剤付きまたは無しの状態調節した媒質（ＣＭ）（すなわち、脾臓間質細胞の培養のために使用した媒質で、これらの細胞により分泌される能動性因子を含有する）を０．６ｍｌ含有していた。上部小室に１００μｌの細胞懸濁液（侵入検定のために５×１０⁴細胞／ｍｌ、能動性検定のために５×１０⁵細胞／ｍｌ）を添加し、それらを次いで５％ＣＯ₂中で３７℃にて７０〜７２時間（侵入検定）または２０時間（能動性検定）インキュベートした。インキュベート後、上部小室中に残留する細胞を消毒綿で拭い取り、フィルターの下部小室側へ移動した細胞をメタノール中で３０秒間固定して０．５％トルイジンブルーで着色した。フィルターを除去し、着色物を１０％酢酸（侵入検定のために０．１ｍｌ、能動性検定のために０．５ｍｌ）にて可溶性化し、色強度（光学密度）を６３０ｎｍのＥＬＩＳＡ読みにより定量化した。この手順の図式的概要を図６に示す。直線関係が細胞数とトルイジンブルー光学密度との間に観測された（図７）。ＳＰＮ−１−Ｐによる走化性細胞能動性の阻害いろいろな量のＭＡＴＲＩ−ＧＥＬを使用する実験において、トランスウエルフィルターを通り抜ける細胞移動は、１μｇ／ウエルを適用し、ＣＭを使用するとき最大であった（図８）。それゆえ、さまざまなＳＰＮ誘導体により影響される走化性細胞能動性は、これらの条件下に検定した。マウスメラノーマＢ１６／Ｆ１細胞の走化性能動性に関する結果を図９に示す。図９において、縦座標は対照に対する移動した細胞数のパーセントを表わし、横座標は低部小室に添加したＣＭ中のＳＰＮまたはＳＰＮ誘導体の濃度を表わす。結果は、マウスメラノーマＢ１６／Ｆ１細胞に関する能動性はＳＰＮ−１−Ｐにより最も強く、続いてＳＰＮそしてＴＭＳにより阻害されることを立証した。能動性（すなわちＭＡＴＲＩ−ＧＥＬ塗被フイルターを通り抜ける貫通性）は１０^-7ＭＳＰＮ−１−Ｐにより１００％阻止され、１０^-8ＭＳＰＮ−１−Ｐにより９０％阻止された。酵素−および化学−合成したＳＰＮ−１−Ｐの両方とも細胞の能動性に対して同一投薬依存阻害性効果を示した。より高い濃度（１０^-5Ｍ）のＳＰＮが１００％阻止のために必要であった。１０^-5ＭＴＭＳは能動性のほんの弱い阻害を生じた。ＴＭＳに比べたＳＰＮのより高い有効性は、ＳＰＮはＳＰＮ−１−Ｐに転換できるが、一方ＴＭＳはリン酸化できないという事実による。化学侵入の阻害化学侵入を長期のインキュベーション（７０時間）の間にＭＡＴＲＩ−ＧＥＬの厚い層を通り抜けて移動するＣＭ（上記の）中の腫瘍細胞の能力により測定した。この性質は、ずっと短いインキュベーション期間（２０時間）および薄い層のＭＡＴＲＩ−ＧＥＬを含む走化性細胞能動性と異なる。化学侵入検定のために、１０μｇのＭＡＴＲＩ−ＧＥＬをポリカーボネートトランスウエルフィルターに塗布して移動を７０時間インキュベーション（図８に示す結果に基づいて）のあとで観測した。結果を図１０に示す。図１０において、縦座標は対照に対する移動した細胞数のパーセントを表わし、横座標は低部小室へ添加したＳＰＮまたはＳＰＮ誘導体（ＣＭ中の）の濃度を表わす。これらの結果は、これらの条件下で、Ｂ１６／Ｆ１細胞の侵入は１０^-6または１０^-7ＭＳＰＮ−１−Ｐにより強く阻害されたが、一方ＳＰＮおよびＴＭＳは効果が弱かったことを示す。ＳＰＮ−１−Ｐ対ＳＰＮまたはＴＭＳに関する効果の相違は、能動性に関しては言えるほどではなかった。Ｂ１６／Ｆ１細胞の走化性細胞能動性および化学侵入に関するさまざまなスフィンゴリピドの効果の比較を表４に概説する。さまざまな細胞の能動性に関するＳＰＮ−１−Ｐの効果を表５に示す。ＳＰＮ−１−Ｐに対するＢ１６／Ｆ１およびＢ１６／Ｆ１０の感受率は高かったが、一方ヒト腺維肉腫ＨＴ１０８０細胞の感受率は低かった。実施例３金ゾル塗被板を使用する食運動性検定細胞能動性を、前記{Albrecht-Buehler,Cell,11:395(1977)}のように、金ゾル粒子塗被板上の食運動性飛跡の面積として評価した。金粒子の均一なコーティングをウシ血清アルブミンをプレコートしたカバーグラス上に調製し、カバーグラスを繰返してすすぎ洗いして非接着性またはゆるく接着している金粒子を除去した。培地から分離した作り立ての好中球または腫瘍細胞を金ゾル塗被板が入っているペトリ皿中に入れ、２時間（ヒト好中球に対し）または１８時間（腫瘍細胞に対し）インキュベートした。カバーグラスをリン酸塩緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）中のホルムアルデヒド４％溶液にて１時間固着し、顕微鏡のスライドガラス上に据え付けた。食運動性飛跡を光学顕微鏡に接続したテレビジョンによって観測した（ニコン、東京、日本）。テレビジョン上の飛跡を半透明シートに転写し、次いでそれを写真複写した。食運動性活性は複写の掃引面積を切り取って秤量することにより定量化した。ＳＰＮ−１−Ｐによる腫瘍細胞の食運動性活性の阻害に関する結果を図１１Ａ〜Ｆに示す。図１１Ａ〜ＦはＢ１６／Ｆ１細胞の金ゾルクリアランスパターンを示す。図１１Ａ：ＳＰＮ−１−Ｐ無しのＣＭ中の対照細胞；図１１Ｂ：ＣＭプラス１．０μＭＳＰＮ−１−Ｐ；図１１Ｃ：ＣＭプラス０．１μＭＳＰＮ−１−Ｐ；図１１Ｄ〜Ｆは、さまざまな濃度のＳＰＮ−１−Ｐの不在または存在下に清浄化した面積を示す：図１１Ｄ、０μＭＳＰＮ−１−Ｐ；図１１Ｅ、０．１μＭＳＰＮ−１−Ｐ；図１１Ｆ、１．０μＭＳＰＮ−１−Ｐ。結果は、培地に対するＳＰＮまたはその誘導体の添加が腫瘍細胞により清浄にされる面積を減少することを示した。特に、ＳＰＮ−１−Ｐを１．０またはそれどころか０．１μＭの濃度で添加したとき、平均清浄化面積を大きく減少させた。Ｂ１６／Ｆ１０の食運動性活性に対するさまざまなＳＰＮ誘導体の効果の比較を表６に示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ルアン，フーギャンアメリカ合衆国ワシントン、シアトル、ウエスト、エリオット・アヴェニュー 201 ザ・バイオメンブレイン・インスティテュート (72)発明者サダヒラ，ヨシトアメリカ合衆国ワシントン、シアトル、ウエスト、エリオット・アヴェニュー 201 ザ・バイオメンブレイン・インスティテュート (72)発明者カワ，シゲユキアメリカ合衆国ワシントン、シアトル、ウエスト、エリオット・アヴェニュー 201 ザ・バイオメンブレイン・インスティテュート (72)発明者ハコモリ，セン−イチローアメリカ合衆国ワシントン、シアトル、ウエスト、エリオット・アヴェニュー 201 ザ・バイオメンブレイン・インスティテュート

Claims

【特許請求の範囲】１．腫瘍細胞と阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体および前記スフィンゴシン−１−ホスフェートのまたは前記誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤とを接触させることを特徴とする腫瘍細胞の走化性能動性を阻害する方法。２．薬剤がスフィンゴシン−１−ホスフェートである、請求の範囲第１項に記載の方法。３．スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体がＮ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−ホスフェート、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−ホスフェート、Ｎ−アセチルスフィンゴシン−１−ホスフェート、Ｎ−アシルスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１，３−ホスフェート、スフィンゴシン−３−ホスフェート、スフィンゴシン−１−チオホスフェート、Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェートおよびＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェートよりなる群から選ばれる、請求の範囲第１項に記載の方法。４．薬剤がスフィンゴシン−１−ホスフェートの擬態物である、請求の範囲第１項に記載の方法。５．腫瘍細胞と阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体、および前記スフィンゴシン−１−ホスフェートのまたは前記誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤とを接触させることを特徴とする腫瘍細胞の化学侵入を阻害する方法。６．薬剤がスフィンゴシン−１−ホスフェートである、請求の範囲第５項に記載の方法。７．スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体が、Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−ホスフェート、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１− ホスフェート、Ｎ−アセチルスフィンゴシン−１−ホスフェート、Ｎ−アシルスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１，３−ホスフェート、スフィンゴシン−３−ホスフェート、スフィンゴシン−１−チオホスフェート、Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェートおよびＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェートよりなる群から選ばれる、請求の範囲第５項に記載の方法。８．薬剤がスフィンゴシン−１−ホスフェートの擬態物である、請求の範囲第５項に記載の方法。９．細胞と食運動性阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体、および前記スフィンゴシン−１−ホスフェートのまたは前記誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤とを接触させることを特徴とする腫瘍細胞および好中球の食運動性活性を阻害する方法。 10．薬剤がスフィンゴシン−１−ホスフェートである、請求の範囲第９記載の方法。 11．スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体が、Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−ホスフェート、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１− ホスフェート、Ｎ−アセチルスフィンゴシン−１−ホスフェート、Ｎ−アシルスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１，３−ホスフェート、スフィンゴシン−３−ホスフェート、スフィンゴシン−１−チオホスフェート、Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェートおよびＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェートよりなる群から選ばれる、請求の範囲第９項に記載の方法。 12．薬剤がスフィンゴシン−１−ホスフェートの擬態物である、請求の範囲第９項に記載の方法。 13．転移の治療の必要な宿主に転移阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体、前記スフィンゴシン−１ −ホスフェートのまたは前記誘導体の擬態物よりなる群から選ばれた薬剤、および前記薬剤の薬学的に許容しうる塩を投与することを特徴とする腫瘍細胞の転移を阻害する方法。 14．薬剤がスフィンゴシン−１−ホスフェートの擬態物である、請求の範囲第１３項に記載の方法。 15．スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体が、Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−ホスフェート、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１− ホスフェート、Ｎ−アセチルスフィンゴシン−１−ホスフェート、Ｎ−アシルスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１，３−ホスフェート、スフィンゴシン−３−ホスフェート、スフィンゴシン−１−チオホスフェート、Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェートおよびＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェートよりなる群から選ばれる、請求の範囲第１３項に記載の方法。 16．薬剤がスフィンゴシン−１−ホスフェートの擬態物である、請求の範囲第１３項に記載の方法。 17．治療の必要な宿主に炎症阻害性量のスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体、および前記スフィンゴシン−１ −ホスフェートのまたは前記誘導体の擬態物よりなる群から選ばれる薬剤、および前記薬剤の薬学的に許容しうる塩を投与することを特徴とする好中球の血管壁中への能動性および侵入による炎症を阻害する方法。 18．薬剤がスフィンゴシン−１−ホスフェートである、請求の範囲第１７項に記載の方法。 19．スフィンゴシン−１−ホスフェートの誘導体が、Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−ホスフェート、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１− ホスフェート、Ｎ−アセチルスフィンゴシン−１−ホスフェート、Ｎ−アシルスフィンゴシン−１−ホスフェート、スフィンゴシン−１，３−ホスフェート、スフィンゴシン−３−ホスフェート、スフィンゴシン−１−チオホスフェート、Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェートおよびＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェートよりなる群から選ばれる、請求の範囲第１７項に記載の方法。 20．薬剤がスフィンゴシン−１−ホスフェートの擬態物である、請求の範囲第１７項に記載の方法。 21．Ｌ−スレオ異性体を本質的に含まないスフィンゴシン−１−ホスフェート。 22．スフィンゴシン−１−ホスフェートを化学合成することを特徴とするＬ −スレオ異性体を本質的に含まないスフィンゴシン−１−ホスフェートを調製する方法。 23．次の工程： (A) 化合物１′のＣ−３水酸基をエステル化して化合物２′を得る工程式中、Ｘは工程（Ｂ）において生成されるアミノ基を保護する基を表わす。 (B) 前記化合物２′のＣ−１水酸基を選択的に脱保護して化合物３′を得る工程 (C) 前記化合物３′のＣ−１水酸基をリン酸化し、続いて加水分解して化合物４ ′を得る工程 (D) 前記化合物４′のＣ−３水酸基およびアミノ基をそれぞれ脱保護して、前記スフィンゴシン−１−ホスフェートである化合物１を得る工程を含んでなることを特徴とするスフィンゴシン−１−ホスフェートを化学合成する方法。 24．前記の工程において、 (1) ＸがＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを表わし； (2) 前記エステル化工程(A)乾燥ピリジン中で塩化ピバロイルによって前記化合物１′を処理することからなり； (3) 前記脱保護工程(B)メタノール中でｐ−トルエンスルホン酸によって前記化合物２′を処理することからなり； (4) 前記リン酸化および加水分解工程(C)が： (a) トリエチルアミンおよびＣＨ₂Ｃｌ₂の存在下にオキシ塩化リン、次いで (b) ＣＨＣｌ₃中で１ＮＨＣｌによって前記化合物３′を処理することからなり；そして (5) 前記脱保護工程(D)が： (a) ジオキサン、ＡＭＢＥＲＬＩＴＥＩＲ−１２０、水の中で水酸化テトラブチルアンモニウム、次いで (b) トリフルオロ酢酸およびＣＨ₂Ｃｌ₂ によって前記化合物４′を処理することからなる、請求の範囲第２３項に記載の方法。 25．次の工程： (A) 化合物１′のＣ−３水酸基をエステル化して化合物２′を得る工程式中、Ｘは工程（Ｂ）において生成されたアミノ基を保護する基を表わす。 (B) 前記化合物２′のＣ−１水酸基を選択的に脱保護して化合物３′を得る工程 (C) 前記化合物３′から保護基Ｘを除去し、次いで生成物を還元的メチル化に付して化合物３^aを得る工程 (D) 前記化合物３^aのＣ−１水酸基をリン酸化し、続いて加水分解して化合物３^b を得る工程 (E) Ｃ−３水酸基を脱保護して、Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン１−ホスフェートである化合物２を得る工程を含んでなることを特徴とするＮ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−ホスフェートを化学合成する方法。 26．前記工程において、 (1) ＸがＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを表わし； (2) 前記エステル化工程(A)が乾燥ピリジン中で塩化ピバロイルによって前記化合物１′を処理することからなり； (3) 前記脱保護工程(B)がメタノール中でｐ−トルエンスルホン酸によって前記化合物２′を処理することからなり； (4) 前記除去および還元的メチル化工程(C)が： (a) ＣＨ₂Ｃｌ₂中でトリフルオロ酢酸、次いで (b) 酢酸ナトリウム緩衝液中で３７％ＣＨ₂ＯおよびＮａＣＮＢＨ₃によって前記化合物３′を処理することからなり； (5) 前記リン酸化および加水分解工程(D)が： (a) トリエタノールアミンおよびＣＨ₂Ｃｌ₂の存在下にオキシ塩化リン、次いで (b) ＣＨＣｌ₂中で１ＮＨＣｌで前記化合物３^aを処理することからなり；そして (6) 前記脱保護工程(E)がジオキサン水中で水酸化テトラブチルアンモニウムによって前記化合物３^bを処理することからなる、請求の範囲第２５項に記載の方法。 27．次の工程： (A) 化合物１′のＣ−３水酸基をエステル化して化合物２′を得る工程式中、Ｘは工程（Ｂ）において生成されたアミノ基を保護する基を表わし、 (B) 前記化合物のＣ−１水酸基を選択的に脱保護して化合物３′を得る工程 (C) 前記化合物３′から脱保護基Ｘを除去し、次いで生成物を還元的メチル化に付して化合物３^aを得る工程 (D) 前記化合物３^aを過メチル化し、続いて塩基性アニオン交換樹脂によって処理して化合物３^bを得る工程 (E) 前記化合物３^bの第一級水酸基をリン酸化し、次いでＣ−３ヒドロキシルを脱保護して、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−ホスフェートである化合物３を得る工程を含んでなることを特徴とするＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−ホスフェートを化学合成する方法。 28．前記工程において、 (1) ＸがＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを表わし； (2) 前記エステル化工程(A)が乾燥ピリジン中で塩化ピバロイルによって前記化合物１′を処理することからなり； (3) 前記脱保護工程(B)がメタノール中でｐ−トルエンスルホン酸によって前記化合物２′を処理することからなり； (4) 前記除去および還元的メチル化工程(C)が： (a) ＣＨ₂Ｃｌ₂中でトリフルオロ酢酸、次いで (b) 酢酸ナトリウム緩衝液中で３７％ＣＨ₂ＯおよびＮａＣＮＢＨ₃ によって化合物３′を処理することからなり； (5) 前記過メチル化工程(D)が： (a) ＮａＨＣＯ₃およびＣＨＣｌ₃中でＣＨ₃ Ｉ、次いで (b) ＤＯＷＥＸ１×２（Ｃｌ^-）によって前記化合物３^aを処理することからなり、そして (6) 前記リン酸化、加水分解、および脱保護工程(E)Gが： (a) トリエチルアミンおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中でＰＯＣｌ₃、次いで (b) １ＮＨＣｌおよびＣＨＣｌ₃、次いで (c) ジオキサン水中で水酸化テトラブチルアンモニウムによって前記化合物３^bを処理することからなる、請求の範囲第２７項に記載の方法。 29．次の工程： (A) 化合物１′のＣ−３水酸基をエステル化して化合物２′を得る工程式中、Ｘは工程（Ｂ）において生成されるアミノ基を保護する基を表わし、 (B) 前記化合物２′の第一級水酸基を選択的に脱保護して化合物３′を得る工程 (C) 前記化合物３′のＣ−１水酸基を−ＳＣＯ（ＣＨ₃）で置換して化合物３^c を得る工程 (D) 前記化合物３^cのチオール基をリン酸化して化合物３^dを得る工程 (E) 前記化合物３^dのＣ−３水酸基およびアミノ基をそれぞれ脱保護し、スフィンゴシン−１−チオホスフェートである化合物７を得る工程を含んでなることを特徴とするスフィンゴシン−１−チオホスフェートを化学合成する方法。 30．前記工程において、 (1) ＸがＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを表わし； (2) 前記エステル化工程(A)が乾燥ピリジン中で塩化ピバロイルによって前記化合物１′を処理することからなり； (3) 前記脱保護工程(B)がメタノール中でｐ−トルエンスルホン酸によって前記化合物２′を処理することからなり； (4) 前記置換工程(C)が： (a) トリエチルアミンおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中で塩化トシル、次いで (b) ジメチルホルムアミド中でチオ酢酸カリウムの添加によって前記化合物３′を処理することからなり； (5) 前記リン酸化工程(D)が： (a) エタノールおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中でＮａＢＨ₄、次いで (b) トリエチルアミンおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中でＰＯＣｌ₃、次いで (c) １ＮＨＣｌおよびＣＨＣｌによって前記化合物３^cを処理することからなり、および (6) 前記脱保護工程(E)が (a) ジオキサン中で水酸化テトラブチルアンモニウム、次いで (b) ＣＨ₂Ｃｌ₂中でトリフルオロ酢酸によって前記化合物３^dを処理することからなる、請求の範囲第２９項に記載の方法。 31．次の工程： (A) 化合物１′のＣ−３水酸基をエステル化して化合物２′を得る工程式中、Ｘは工程（Ｂ）において生成されたアミノ基を保護する基を表わす。 (B) 前記化合物２′のＣ−１水酸基を選択的に脱保護して化合物３′を得る工程 (C) 前記化合物３′のＣ−１水酸基を−ＳＣＯ（ＣＨ₃）によって置換して化合物３^cを得る工程 (D) 前記化合物３^cからなる保護基Ｘを除去し、次いで生成物を還元的メチル化に付して化合物３^eを得る工程 (E) 前記化合物３^eのチオール基をリン酸化して化合物３^fを得る工程 (F) Ｃ−３水酸基を脱保護して、Ｎ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェートである化合物８を得る工程を含んでなることを特徴とするＮ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェートを化学合成する方法。 32．前記工程において： (1) ＸがＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを表わし； (2) 前記エステル化工程(A)が乾燥ピリジン中で塩化ピバロイルによって前記化合物１′を処理することからなり； (3) 前記脱保護工程(B)がメタノール中でｐ−トルエンスルホン酸によって前記化合物２′を処理することからなり； (4) 前記置換工程(C)が： (a) トリエチルアミンおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中で塩化トシル、次いで (b) ジメチルホルムアミド中でチオ酢酸カリウムの添加によって前記化合物３′を処理することからなり； (5) 前記除去および還元的メチル化工程(D)が： (a) ＣＨ₂Ｃｌ₂中でトリフルオロ酢酸、次いで (b) 酢酸ナトリウム緩衝液中で３７％ＣＨ₂ＯおよびＮａＣＮＢＨ₃によって前記化合物３^cを処理することからなり； (6) 前記リン酸化工程(E)が： (a) エタノールおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中でＮａＢＨ₄、次いで (b) エタノールおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中でＰＯＣｌ₃、次いで (c) ＣＨＣｌ₃中でＨＣｌによって前記化合物３ｃを処理することからなり、および (7) 前記脱保護工程(F)がジオキサン水中で水酸化テトラブチルアンモニウムによって前記化合物３^fを処理することからなる、請求の範囲第３１項に記載の方法。 33．次の工程： (A) 化合物１′のＣ−３水酸基をエステル化して化合物２′を得る工程式中、Ｘは工程（Ｂ）において生成されたアミノ基を保護する基を表わし、 (B) 前記化合物２′のＣ−１水酸基を選択的に脱保護して化合物３′を得る工程 (C) 前記化合物３′のＣ−１水酸基を−ＳＣＯ（ＣＨ₃）によって置換して化合物３^cを得る工程 (D) 化合物３^cから保護基を除去し、次いで生成物を還元的メチル化に付して化合物３^cを得る工程 (E) 前記化合物３^eを過メチル化し、続いて塩基性アニオン交換樹脂によって処理して化合物３^gを得る工程 (F) 前記化合物３^gのチオール基をリン酸化し、次いでＣ−３水酸基を脱保護して、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェートである化合物９を得る工程を含んでなることを特徴とするＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１− チオホスフェートを化学合成する方法。 34．前記工程において： (1) ＸがＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを表わし； (2) 前記エステル化工程(A)が乾燥ピリジン中で塩化ピバロイルによって前記化合物１′を処理することからなり； (3) 前記脱保護工程(B)がメタノール中でｐ−トルエンスルホン酸によって前記化合物２′を処理することからなり； (4) 前記置換工程(C)が： (a) トリメチルアミンおよびＣＨ₂Ｃｌ₂中で塩化トシル、次いで (b) ジメチルホルムアミド中でチオ酢酸カリウムの添加によって前記化合物３′を処理することからなり； (5) 前記除去および還元的メチル化工程(D)が： (a) ＣＨ₂Ｃｌ₂中でトリフルオロ酢酸、次いで (b) 酢酸ナトリウム緩衝液中で３７％ＣＨ₂ＯおよびＮａＣＮＢＨ₃ によって前記化合物３^cを処理することからなり、 (6) 前記過メチル化および処理工程(E)が： (a) ＣＨ₃ Ｉ、ＮａＨＣＯ₃、およびＣＨＣｌ₃、次いで (b) ＤＯＷＥＸ１×２（Ｃｌ^-）で前記化合物３^eを処理することからなり；そして (7) 前記リン酸化および脱保護工程(F)が： (a) ＮａＢＨ₄、エタノールおよびＣＨ₂Ｃｌ₂、次いで (b) トリメチルアミンおよびＣＨ₂Ｃｌ₃中でＰＯＣｌ₃、次いで (c) １ＮＨＣｌおよびＣＨＣｌ₃、次いで (d) ジオキサン水中で水酸化テトラブチルアンモニウムによって前記化合物３^gを処理することからなる、請求の範囲第３３項に記載の方法。 35．次の工程： (A) 化合物１′のＣ−３水酸基をエステル化して化合物２′を得る工程式中、Ｘは工程（Ｂ）において生成されたアミノ基を保護する基を表わす、 (B) 前記化合物２′のＣ−１水酸基を選択的に脱保護して化合物３′を得る工程 (C) 保護基Ｘを除去し、次いで非保護アミノ基をアシル化またはアセチル化して化合物３ⁱを得る工程式中、Ａｃはアシルまたはアセチルを表わし、 (D) 前記化合物３ⁱのＣ−１水酸基をリン酸化し、続いて加水分解して化合物３ⁱ を得る工程 (E) Ｃ−３水酸基を脱保護して、Ｎ−アシルまたはＮ−アセチルスフィンゴシン−１−ホスフェートである化合物４を得る工程を含んでなることを特徴とするＮ−アシルおよびＮ−アセチルスフィンゴシン −１−ホスフェートを化学合成する方法。 36．前記工程において： (1) ＸがＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを表わし； (2) 前記エステル化工程(A)が乾燥ピリジン中で塩化ピバロイルによって前記化合物１′を処理することからなり； (3) 前記脱保護工程(B)がメタノール中でｐ−トルエンスルホン酸によって前記化合物２′を処理することからなり； (4) 前記除去およびアシル化またはアセチル化工程(C)が： (a) ＣＨ₂Ｃｌ₂中でトリフルオロ酢酸、次いで (b) ５５％Ｋ₂ＣＯ₃テトラヒドロフラン水中で、ｎが０〜２２を表わすＣＨ₃ （ＣＨ₂）_nＣＯＣｌによって前記化合物３′を処理することからなり； (5) 前記リン酸化および加水分解工程(D)が： (a) トリエチルアミンおよびＣＨ₂Ｃｌ₂の存在下にオキシ塩化リン、次いで (b) ＣＨＣｌ₃中で１ＮＨＣｌで前記化合物３ⁱを処理することからなり、そして (6) 前記脱保護工程(E)がジオキサン中で水酸化テトラブチルアンモニウムによって前記化合物３^jを処理することからなる、請求の範囲第３５記載の方法。 37．下記の工程： (A) 化合物１′のＣ−１水酸基を選択的に脱保護して化合物３^kを得る工程式中、Ｘはアミノ基を保護する基を表わし、 (B) 前記化合物２′のＣ−３水酸基およびＣ−１水酸基にジチオリン酸チオリン酸ジエチルを生成して化合物３^lを得る工程 (C) 前記化合物３^lを酸化し、続いてアミノ基を脱保護して、スフィンゴシン− １、３−ジホスフェートである化合物５を得る工程を含んでなることを特徴とするスフィンゴシン−１，３−ジホスフェートを化学合成する方法。 38．前記工程において： (1) ＸがＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを表わし； (2) 前記脱保護工程(A)がＣＨ₃ＯＨ中でＡＭＢＥＲＬＹＳＴ１５によって前記化合物１′を処理することからなり； (3) 前記工程(B)がジメチルアニリンおよび酢酸エチル中で（Ｃ₂Ｈ₅ Ｓ）₂ＰＣｌによって前記化合物３^kを処理することからなり；そして (4) 前記酸化および脱保護工程(C)が： (a) ＣＨ₃ＯＨ中でＩ、次いで (b) ＣＨ₃Ｃｌ₂中でトリフルオロアセテートによって前記化合物３′を処理することからなる、請求の範囲第３７記載の方法。 39．次の工程： (A) 化合物１′のＣ−３水酸基にジチオリン酸ジエチルを生成して化合物３^mを得る工程式中、Ｘは工程(B)において生成されたアミノ基を保護する基を表わし、および (B) 前記化合物３^mのＣ−３水酸基を酸化し、続いてアミノ基を脱保護して、スフィンゴシン−３−ホスフェートである化合物６を得る工程を含んでなることを特徴とするスフィンゴシン−３−ホスフェトを化学合成する方法。 40．前記工程において： (1) ＸがＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを表わし； (2) 前記工程(A)がジメチルアニリンおよび酢酸エチル中で（Ｃ₂Ｈ₅Ｓ）₂ＰＣｌによって前記化合物１′を処理することからなり；そして、 (3) 前記酸化および脱保護工程(B)が： (a) ＨＣｌおよびジオキサン、次いで (b) ＣＨ₃ＯＨ中でＩ₂ によって前記化合物３^mを処理することからなる、請求の範囲第３９記載の方法。 41．請求の範囲第２３項または第２４項に記載の方法により製造されたスフィンゴシン−１−ホスフェート。 42．請求の範囲第２５項または第２６項に記載の方法により製造されたＮ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−ホスフェート。 43．請求の範囲第２７項または第２８項に記載の方法により製造されたＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−ホスフェト。 44．請求の範囲第２９項または第３０項に記載の方法により製造されたスフィンゴシン−１−チオホスフェート。 45．請求の範囲第３１項または第３２項に記載の方法により製造されたＮ，Ｎ−ジメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェート。 46．請求の範囲第３３項または第３４項記載の方法により製造されたＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシン−１−チオホスフェート。 47．請求の範囲第３５項または第３６項に記載の方法により製造されたＮ− アシルおよびＮ−アセチルスフィンゴシン−１−チオホスフェート。 48．請求の範囲第３７項または第３８項に記載の方法により製造されたスフィンゴシン−１，３−ジホスフェート。 49．請求の範囲第３９項または第４０項に記載の方法により製造されたスフィンゴシン−３−ホスフェート。