JPH08333273A - 血小板減少治療用医薬組成物 - Google Patents
血小板減少治療用医薬組成物Info
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- JPH08333273A JPH08333273A JP8102063A JP10206396A JPH08333273A JP H08333273 A JPH08333273 A JP H08333273A JP 8102063 A JP8102063 A JP 8102063A JP 10206396 A JP10206396 A JP 10206396A JP H08333273 A JPH08333273 A JP H08333273A
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- hil
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- megakaryocyte
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 ヒトインターロイキン−１５（ｈＩＬ−１
５）が巨核球−血小板系に作用し、その分化、成熟及び
／又は増殖を促進し、血小板の生成を促進する活性を有
することを明らかにした。 【効果】 血小板減少に伴う疾患や、血小板の機能異常
を伴う疾患の治療あるいは予防等に有効な医薬組成物が
提供された。
５）が巨核球−血小板系に作用し、その分化、成熟及び
／又は増殖を促進し、血小板の生成を促進する活性を有
することを明らかにした。 【効果】 血小板減少に伴う疾患や、血小板の機能異常
を伴う疾患の治療あるいは予防等に有効な医薬組成物が
提供された。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、巨核球系細胞に作
用し、その分化、成熟及び／又は増殖を促進し、血小板
の生成を促進する活性を有するヒトインターロイキン−
１５（以後「ｈＩＬ−１５」と記載することがある）を
有効成分とする血小板減少治療用医薬組成物に関するも
のである。本発明のｈＩＬ−１５は、巨核球−血小板系
に作用し、その分化、成熟及び／又は増殖を促進し、血
小板の生成を促進する活性を有するので、化学療法や骨
髄移植に伴う血小板減少症及び血小板減少性紫班病、血
小板減少が原因と考えられる出血傾向を示す各種の疾患
の治療薬、予防薬の有効成分等として、特に医療の分野
において有用なものである。
用し、その分化、成熟及び／又は増殖を促進し、血小板
の生成を促進する活性を有するヒトインターロイキン−
１５（以後「ｈＩＬ−１５」と記載することがある）を
有効成分とする血小板減少治療用医薬組成物に関するも
のである。本発明のｈＩＬ−１５は、巨核球−血小板系
に作用し、その分化、成熟及び／又は増殖を促進し、血
小板の生成を促進する活性を有するので、化学療法や骨
髄移植に伴う血小板減少症及び血小板減少性紫班病、血
小板減少が原因と考えられる出血傾向を示す各種の疾患
の治療薬、予防薬の有効成分等として、特に医療の分野
において有用なものである。
【０００２】
【従来の技術】生体を構成する体細胞に不可欠な媒質で
ある血液中には、有形成分としての、赤血球、白血球、
リンパ球、血小板等の血液細胞が存在し、当該血液細胞
は、それぞれ固有の機能を分担して、生体を恒常に保つ
役割を担っている。ところで、当該血液細胞の生体内に
おける分化、成熟、及び増殖等の実体を解明すること
は、血液学分野における長年の研究課題とされてきた
が、近年になって、各種の血液細胞は、骨髄中の１種類
の多機能性造血幹細胞より分化、成熟すること、及び、
その分化、成熟の課程において各種の生体内液性因子が
関与していること等の事実が明らかとなった。
ある血液中には、有形成分としての、赤血球、白血球、
リンパ球、血小板等の血液細胞が存在し、当該血液細胞
は、それぞれ固有の機能を分担して、生体を恒常に保つ
役割を担っている。ところで、当該血液細胞の生体内に
おける分化、成熟、及び増殖等の実体を解明すること
は、血液学分野における長年の研究課題とされてきた
が、近年になって、各種の血液細胞は、骨髄中の１種類
の多機能性造血幹細胞より分化、成熟すること、及び、
その分化、成熟の課程において各種の生体内液性因子が
関与していること等の事実が明らかとなった。
【０００３】これらの事実から、当該生体内液性因子
は、血球系細胞の減少を伴う疾患の治療薬等の医薬品へ
の応用が期待されており、これまでに、例えば、エリス
ロポエチン（ＥＰＯ）、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ
−ＣＳＦ、インターロイキン（ＩＬ）等の各種の液性因
子が見い出され、その一部は、赤血球系、白血球系、リ
ンパ球系等の血液細胞に対する分化、成熟を促進する作
用を有する医薬品として実際に応用されるに至ってい
る。
は、血球系細胞の減少を伴う疾患の治療薬等の医薬品へ
の応用が期待されており、これまでに、例えば、エリス
ロポエチン（ＥＰＯ）、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ
−ＣＳＦ、インターロイキン（ＩＬ）等の各種の液性因
子が見い出され、その一部は、赤血球系、白血球系、リ
ンパ球系等の血液細胞に対する分化、成熟を促進する作
用を有する医薬品として実際に応用されるに至ってい
る。
【０００４】ところで、血小板は、血液中に存在する直
径２〜３μｍの無核の細胞であり、生体における止血や
血栓の形成に重要な役割を有する血液中の有形成分の一
種であるが、当該血小板は、骨髄中の多機能性造血幹細
胞から巨核球系前駆細胞を経て巨核芽球となり、更に成
熟した巨核球の細胞質が断片化して生成され、血液中に
放出されることが明らかとなっている。
径２〜３μｍの無核の細胞であり、生体における止血や
血栓の形成に重要な役割を有する血液中の有形成分の一
種であるが、当該血小板は、骨髄中の多機能性造血幹細
胞から巨核球系前駆細胞を経て巨核芽球となり、更に成
熟した巨核球の細胞質が断片化して生成され、血液中に
放出されることが明らかとなっている。
【０００５】そして、最近になって、巨核球−血小板系
についての研究成果も種々報告されており、例えば、Ｉ
Ｌ−６が、血小板の前駆細胞である巨核球の成熟を促進
する作用を有することが報告されている〔Ishibashi T.
et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,86,5953-5957(1989)、
Ishibashi T.et al.,Blood,74,1241-1244(1989)〕。
についての研究成果も種々報告されており、例えば、Ｉ
Ｌ−６が、血小板の前駆細胞である巨核球の成熟を促進
する作用を有することが報告されている〔Ishibashi T.
et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,86,5953-5957(1989)、
Ishibashi T.et al.,Blood,74,1241-1244(1989)〕。
【０００６】更に、これまでの研究によると、骨髄細胞
から巨核球コロニーを形成させるには、２種類の異なっ
た作用を有する因子があると考えられている〔Williams
N.et al.,J.Cell Physiol.,110,101(1982)〕。すなわ
ち、当該因子としては、単独で巨核球コロニーを形成す
る巨核球コロニー刺激因子Ｍｅｇ−ＣＳＦと、それだけ
では巨核球コロニーを形成させる活性はないが、当該Ｍ
ｅｇ−ＣＳＦの存在下に巨核球コロニー数を増加させた
り、その成熟を促進する活性を有する巨核球増幅因子Ｍ
ｅｇ−ＰＯＴの存在が報告されている。
から巨核球コロニーを形成させるには、２種類の異なっ
た作用を有する因子があると考えられている〔Williams
N.et al.,J.Cell Physiol.,110,101(1982)〕。すなわ
ち、当該因子としては、単独で巨核球コロニーを形成す
る巨核球コロニー刺激因子Ｍｅｇ−ＣＳＦと、それだけ
では巨核球コロニーを形成させる活性はないが、当該Ｍ
ｅｇ−ＣＳＦの存在下に巨核球コロニー数を増加させた
り、その成熟を促進する活性を有する巨核球増幅因子Ｍ
ｅｇ−ＰＯＴの存在が報告されている。
【０００７】そして、例えば、ヒトでＭｅｇ−ＣＳＦ活
性を有するものとしては、ＩＬ−３〔Teramura M.et a
l.,Exp.Hematol.,16,843(1988)〕や、顆粒球・マクロフ
ァージコロニー刺激因子〔Teramura M.et al.,Exp.Hema
tol.,17,1011 (1989)〕等が報告されている。また、ヒ
トでＭｅｇ−ＰＯＴ活性を有するものとしては、ＩＬ−
６〔Teramura M.and Mizoguthi H.,Int.J.Cell Clonin
g,8,245(1990)〕、ＩＬ−１１〔Teramura M.et al.,Blo
od,79,327(1992)〕、及びエリスロポエチン〔Bruno E.e
t al.,Blood,73,671(1989)〕等が報告されている。
性を有するものとしては、ＩＬ−３〔Teramura M.et a
l.,Exp.Hematol.,16,843(1988)〕や、顆粒球・マクロフ
ァージコロニー刺激因子〔Teramura M.et al.,Exp.Hema
tol.,17,1011 (1989)〕等が報告されている。また、ヒ
トでＭｅｇ−ＰＯＴ活性を有するものとしては、ＩＬ−
６〔Teramura M.and Mizoguthi H.,Int.J.Cell Clonin
g,8,245(1990)〕、ＩＬ−１１〔Teramura M.et al.,Blo
od,79,327(1992)〕、及びエリスロポエチン〔Bruno E.e
t al.,Blood,73,671(1989)〕等が報告されている。
【０００８】しかしながら、これらのものの多くは巨核
球−血小板系に特異的に作用する因子ではなく、むしろ
他の血球系や血球系以外の細胞に対しても作用してその
活性を発現することが知られている。従って、仮に、こ
れらのものを医薬品として巨核球−血小板系への作用を
期待して投与した場合、当該活性とは別の活性をも発現
してしまうことが危惧される。すなわち、例えば、前記
ＩＬ−６は、前記作用以外にも多岐に亘る作用を有して
おり、その一例として、生体内での急性期反応蛋白質と
して、炎症の惹起に深く関与していること等が知られて
いることから示唆されるように、当該ＩＬ−６をそのま
ま医薬品として使用した場合には、強力な副作用を伴う
ことが危惧される。最近、ｃ−Ｍｐｌリガンドが、弱い
Ｍｅｇ−ＣＳＦ活性と強力なＭｅｇ−ＰＯＴ活性とを併
有することが報告されている〔dc Sauvage F.J.et al.,
Nature,369,533(1994)、Kaushansky K.et al.,Nature,36
9,568(1994)〕。しかし、ｃ−Ｍｐｌリガンドの作用に
ついての知見は乏しく、医薬品としての実用性は未知で
ある。
球−血小板系に特異的に作用する因子ではなく、むしろ
他の血球系や血球系以外の細胞に対しても作用してその
活性を発現することが知られている。従って、仮に、こ
れらのものを医薬品として巨核球−血小板系への作用を
期待して投与した場合、当該活性とは別の活性をも発現
してしまうことが危惧される。すなわち、例えば、前記
ＩＬ−６は、前記作用以外にも多岐に亘る作用を有して
おり、その一例として、生体内での急性期反応蛋白質と
して、炎症の惹起に深く関与していること等が知られて
いることから示唆されるように、当該ＩＬ−６をそのま
ま医薬品として使用した場合には、強力な副作用を伴う
ことが危惧される。最近、ｃ−Ｍｐｌリガンドが、弱い
Ｍｅｇ−ＣＳＦ活性と強力なＭｅｇ−ＰＯＴ活性とを併
有することが報告されている〔dc Sauvage F.J.et al.,
Nature,369,533(1994)、Kaushansky K.et al.,Nature,36
9,568(1994)〕。しかし、ｃ−Ｍｐｌリガンドの作用に
ついての知見は乏しく、医薬品としての実用性は未知で
ある。
【０００９】このようなことから、巨核球−血小板系に
作用する因子については、当該巨核球−血小板系に特に
強く作用するものであって、かつ、その分化、成熟及び
／又は増殖を促進する高い活性を有する生理活性物質を
見い出すことが重要であり、当業界において、このよう
な生理活性物質を開発することが強く要請されている状
況にあった。
作用する因子については、当該巨核球−血小板系に特に
強く作用するものであって、かつ、その分化、成熟及び
／又は増殖を促進する高い活性を有する生理活性物質を
見い出すことが重要であり、当業界において、このよう
な生理活性物質を開発することが強く要請されている状
況にあった。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】このような状況を踏ま
えて、本発明者等は、巨核球−血小板系に作用し、その
分化、成熟及び／又は増殖を促進し、血小板の生成を促
進する活性を有する新しい生理活性物質を見い出すこと
を目標として鋭意研究を積み重ねた結果、ｈＩＬ−１５
が当該活性を有することを見い出し、本発明を完成する
に至った。
えて、本発明者等は、巨核球−血小板系に作用し、その
分化、成熟及び／又は増殖を促進し、血小板の生成を促
進する活性を有する新しい生理活性物質を見い出すこと
を目標として鋭意研究を積み重ねた結果、ｈＩＬ−１５
が当該活性を有することを見い出し、本発明を完成する
に至った。
【００１１】ＩＬ−１５は、グラブシュタイン（Grabst
ein）ら［Science, 264,965,(1994)］によってアフリカ
ミドリザル腎由来上皮細胞株ＣＶ−１／ＥＢＮＡの培養
上清よりマウスＴ細胞株ＣＴＬＬ−２の増殖支持能を指
標に精製された分子量１万４千程度の蛋白質である。遺
伝子の単離により、１６２アミノ酸残基よりなる前駆体
が切断されることによって、１１４アミノ酸残基の成熟
蛋白が生成することが明らかになった。胎盤、末梢血単
球核および骨格筋によく発現しており、心臓、肺、肝
臓、腎臓などにも弱いながら発現が認められている。Ｉ
Ｌ−１５生物活性については、これまで、Ｔ細胞および
Ｂ細胞の分化、増殖を支持し、ＮＫ細胞の活性化や、Ｃ
ＴＬ活性およびＬＡＫ活性の誘導などの作用が報告され
ており、主にリンパ球の増殖、分化、活性化などの免疫
化にかかわるサイトカインであると考えられている。
ein）ら［Science, 264,965,(1994)］によってアフリカ
ミドリザル腎由来上皮細胞株ＣＶ−１／ＥＢＮＡの培養
上清よりマウスＴ細胞株ＣＴＬＬ−２の増殖支持能を指
標に精製された分子量１万４千程度の蛋白質である。遺
伝子の単離により、１６２アミノ酸残基よりなる前駆体
が切断されることによって、１１４アミノ酸残基の成熟
蛋白が生成することが明らかになった。胎盤、末梢血単
球核および骨格筋によく発現しており、心臓、肺、肝
臓、腎臓などにも弱いながら発現が認められている。Ｉ
Ｌ−１５生物活性については、これまで、Ｔ細胞および
Ｂ細胞の分化、増殖を支持し、ＮＫ細胞の活性化や、Ｃ
ＴＬ活性およびＬＡＫ活性の誘導などの作用が報告され
ており、主にリンパ球の増殖、分化、活性化などの免疫
化にかかわるサイトカインであると考えられている。
【００１２】本発明は、ｈＩＬ−１５を有効成分として
含有することを特徴とする血小板減少治療用医薬組成物
を提供することを目的とするものである。
含有することを特徴とする血小板減少治療用医薬組成物
を提供することを目的とするものである。
【００１３】更に、本発明は、ｈＩＬ−１５を有効成分
とすることを特徴とする医薬組成物であって、血小板減
少に伴う疾患や、血小板の機能異常を伴う疾患の治療あ
るいは予防等に有効な医薬組成物を提供することを目的
とするものである。
とすることを特徴とする医薬組成物であって、血小板減
少に伴う疾患や、血小板の機能異常を伴う疾患の治療あ
るいは予防等に有効な医薬組成物を提供することを目的
とするものである。
【００１４】
【課題を解決するための手段】このような課題を達成す
る本発明は、ｈＩＬ−１５を有効成分として含有するこ
とを特徴とする血小板減少治療用医薬組成物である。
る本発明は、ｈＩＬ−１５を有効成分として含有するこ
とを特徴とする血小板減少治療用医薬組成物である。
【００１５】
【発明の実施の形態】以下に本発明の内容を詳細に説明
する。
する。
【００１６】本発明において、ｈＩＬ−１５は、げっ歯
類の巨核球−血小板系に作用し、アセチルコリンエステ
ラーゼ（以後「ＡｃｈＥ」と記載することがある）の産
生を促進する活性を有することが見いだされた。アセチ
ルコリンエステラーゼは、げっ歯類の巨核球系細胞の分
化及び／又は成熟に伴い産生される酵素であることから
［Acta.Haematol.JPN.,49,1688-1695(1986)］、前記Ａ
ｃｈＥ産生を促進する活性は、ｈＩＬ−１５が、巨核球
−血小板系に対して作用することを示すものである。
類の巨核球−血小板系に作用し、アセチルコリンエステ
ラーゼ（以後「ＡｃｈＥ」と記載することがある）の産
生を促進する活性を有することが見いだされた。アセチ
ルコリンエステラーゼは、げっ歯類の巨核球系細胞の分
化及び／又は成熟に伴い産生される酵素であることから
［Acta.Haematol.JPN.,49,1688-1695(1986)］、前記Ａ
ｃｈＥ産生を促進する活性は、ｈＩＬ−１５が、巨核球
−血小板系に対して作用することを示すものである。
【００１７】即ち、本発明において、ｈＩＬ−１５は巨
核球−血小板系に対する活性を有することが見いだされ
たが、ここで言う巨核球−血小板系に対する活性とは、
巨核球もしくはその前駆細胞の分化、成熟を促進する、
あるいは、巨核球から血小板が生成される課程における
血小板の生成を促進する活性を有することを意味する。
核球−血小板系に対する活性を有することが見いだされ
たが、ここで言う巨核球−血小板系に対する活性とは、
巨核球もしくはその前駆細胞の分化、成熟を促進する、
あるいは、巨核球から血小板が生成される課程における
血小板の生成を促進する活性を有することを意味する。
【００１８】本発明のｈＩＬ−１５の巨核球−血小板系
に対する前記活性を測定するには、例えば、骨髄細胞や
巨核球系細胞を使用し、被実験物質をこれらの細胞に作
用させて、巨核球や血小板に特異的な蛋白質や酵素の出
現を測定する方法が好適なものとして使用される。
に対する前記活性を測定するには、例えば、骨髄細胞や
巨核球系細胞を使用し、被実験物質をこれらの細胞に作
用させて、巨核球や血小板に特異的な蛋白質や酵素の出
現を測定する方法が好適なものとして使用される。
【００１９】げっ歯類の巨核球系細胞は、その分化、成
熟に伴い、ＡＣｈＥを産生するので、例えば、細胞を染
色してＡｃｈＥを産生する細胞数を測定するか、もしく
は産生されるＡｃｈＥ活性を分光光度計で測定すること
〔Toshiro Nagasawa等、日本血液学会雑誌、４９巻、１
６８８−１６９５頁（１９８６年）〕等により、生理活
性物質の巨核球−血小板系に対する前記活性を測定する
ことができる。
熟に伴い、ＡＣｈＥを産生するので、例えば、細胞を染
色してＡｃｈＥを産生する細胞数を測定するか、もしく
は産生されるＡｃｈＥ活性を分光光度計で測定すること
〔Toshiro Nagasawa等、日本血液学会雑誌、４９巻、１
６８８−１６９５頁（１９８６年）〕等により、生理活
性物質の巨核球−血小板系に対する前記活性を測定する
ことができる。
【００２０】尚、後述するように、本発明のｈＩＬ−１
５は、当該測定方法によりその活性を測定した結果、巨
核球系細胞に作用し、アセチルコリンエステラーゼ産生
を促進する活性を有するものであり、その分化、成熟を
促進し、血小板の生成を促進する活性を有するものであ
ることが判明した。
５は、当該測定方法によりその活性を測定した結果、巨
核球系細胞に作用し、アセチルコリンエステラーゼ産生
を促進する活性を有するものであり、その分化、成熟を
促進し、血小板の生成を促進する活性を有するものであ
ることが判明した。
【００２１】また、本発明者らは、巨核球コロニーアッ
セイ（Metcalf D.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,7
2,1744(1975)）によって、ｈＩＬ−１５が単独で巨核球
コロニーを形成する活性（Ｍｅｇ−ＣＳＦ活性）を有す
ることを見いだした。
セイ（Metcalf D.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,7
2,1744(1975)）によって、ｈＩＬ−１５が単独で巨核球
コロニーを形成する活性（Ｍｅｇ−ＣＳＦ活性）を有す
ることを見いだした。
【００２２】次に、本発明の血小板減少治療用医薬組成
物について説明する。
物について説明する。
【００２３】本発明の医薬組成物は、本発明のｈＩＬ−
１５を有効成分として含有することを特徴とするもので
ある。ｈＩＬ−１５としては、天然型のアミノ酸配列の
全長または一部をその分子中の適当な部位に有するもの
を適宜使用することができる。本発明の医薬組成物は、
ｈＩＬ−１５を、凍結乾燥、除菌瀘過等の製剤学的に必
要な工程で処理しただけのものでも充分にその効果を奏
することができるものであるが、ｈＩＬ−１５に、製剤
学的に許容されうる補助成分を適宜添加し、常法により
製剤化し得ることは言うまでもない。また、本発明に用
いられるｈＩＬ−１５は、天然型のみならず、組換えｈ
ＩＬ−１５も含む。組換えｈＩＬ−１５を産生する宿主
としては、原核、真核を問わず様々なものが用いられる
が、例えば大腸菌、哺乳動物細胞が好適に用いられる。
１５を有効成分として含有することを特徴とするもので
ある。ｈＩＬ−１５としては、天然型のアミノ酸配列の
全長または一部をその分子中の適当な部位に有するもの
を適宜使用することができる。本発明の医薬組成物は、
ｈＩＬ−１５を、凍結乾燥、除菌瀘過等の製剤学的に必
要な工程で処理しただけのものでも充分にその効果を奏
することができるものであるが、ｈＩＬ−１５に、製剤
学的に許容されうる補助成分を適宜添加し、常法により
製剤化し得ることは言うまでもない。また、本発明に用
いられるｈＩＬ−１５は、天然型のみならず、組換えｈ
ＩＬ−１５も含む。組換えｈＩＬ−１５を産生する宿主
としては、原核、真核を問わず様々なものが用いられる
が、例えば大腸菌、哺乳動物細胞が好適に用いられる。
【００２４】この補助成分としては、基剤、安定剤、防
腐剤、保存剤、乳化剤、懸濁化剤、溶解剤、溶解補助
剤、滑沢剤、矯味剤、着色剤、芳香剤、無痛化剤、賦形
剤、結合剤、粘稠剤、緩衝剤等があげられるが、具体的
には、例えば、炭酸カルシウム、乳糖、庶糖、ソルビッ
ト、マンニトール、デンプン、アミロペクチン、セルロ
ース誘導体、ゼラチン、カカオ脂、注射用蒸留水、塩化
ナトリウム水溶液、リンゲル液、グルコース溶液、ヒト
血清アルブミン（ＨＳＡ）等があげられる。
腐剤、保存剤、乳化剤、懸濁化剤、溶解剤、溶解補助
剤、滑沢剤、矯味剤、着色剤、芳香剤、無痛化剤、賦形
剤、結合剤、粘稠剤、緩衝剤等があげられるが、具体的
には、例えば、炭酸カルシウム、乳糖、庶糖、ソルビッ
ト、マンニトール、デンプン、アミロペクチン、セルロ
ース誘導体、ゼラチン、カカオ脂、注射用蒸留水、塩化
ナトリウム水溶液、リンゲル液、グルコース溶液、ヒト
血清アルブミン（ＨＳＡ）等があげられる。
【００２５】これらの補助成分を利用して、本発明の医
薬組成物を調製するに際しては、例えば、医薬品添加物
一覧表（財団法人東京医薬品工業協会医事法規委員会及
び大阪医薬品工業協会医事法規研究委員会発行）にある
如く、当該補助成分を適宜選択し、使用すればよい。ま
た、補助成分の使用量は、製剤学的に許容され得る範囲
内において、医薬組成物の薬剤形態等に応じて適宜選択
すればよい。
薬組成物を調製するに際しては、例えば、医薬品添加物
一覧表（財団法人東京医薬品工業協会医事法規委員会及
び大阪医薬品工業協会医事法規研究委員会発行）にある
如く、当該補助成分を適宜選択し、使用すればよい。ま
た、補助成分の使用量は、製剤学的に許容され得る範囲
内において、医薬組成物の薬剤形態等に応じて適宜選択
すればよい。
【００２６】本発明の医薬組成物の投与量は、患者の状
態、年齢、性別、体重等に応じて適宜決定される。ま
た、その投与方法は、患者の状態に応じ、経口投与、筋
肉内投与、腹腔内投与、皮内投与、皮下投与、静脈内投
与、動脈内投与、直腸投与等の種々の投与方法から適宜
選択される。
態、年齢、性別、体重等に応じて適宜決定される。ま
た、その投与方法は、患者の状態に応じ、経口投与、筋
肉内投与、腹腔内投与、皮内投与、皮下投与、静脈内投
与、動脈内投与、直腸投与等の種々の投与方法から適宜
選択される。
【００２７】当該医薬組成物は、化学療法や骨髄移植に
伴う血小板減少症及び血小板減少性紫斑病、血小板減少
が原因と考えられる出血傾向を示す各種の疾患や、巨核
球及び／又は血小板の機能異常を伴う患者の治療薬や予
防薬等として有用なものである。
伴う血小板減少症及び血小板減少性紫斑病、血小板減少
が原因と考えられる出血傾向を示す各種の疾患や、巨核
球及び／又は血小板の機能異常を伴う患者の治療薬や予
防薬等として有用なものである。
【００２８】
【実施例】以下に、実施例に基づいて本発明を具体的に
説明するが、本発明はこれらにより限定されるものでは
ない。尚、以下の記載においては、一部、当該分野にお
ける慣用の略号を使用して記載した。 ［実施例１］ アセチルコリンエステラーゼ活性の測定
（ＩＬ−３非存在下） 「１％「Nutridoma・SR」（ベーリンガー・マンハイム
(Boehringer Mannheim)社製）を添加した「RPMI 1640」
（ギブコ(Gibco)社製）」（以後「培地Ａ」という）に
よって、１×１０6細胞／ｍｌに希釈したマウス（C57BL
/6N系、１１〜１５週令）骨髄細胞１００μｌに、試料
［ｈＩＬ−１５（Pepro Tech社製／カタログ番号200-1
5）を培地Ａに溶解し所定の濃度としたもの／ネガティ
ブコントロールとしてヒトＩＬ−１１（Pepro Tech社
製）を培地Ａに溶解し所定の濃度としたもの／ポジティ
ブコントロールとしてマウスＩＬ−３（ベーリンガー・
マンハイム社製）を培地Ａに溶解し所定の濃度としたも
の］５０μｌを加えた。全量１５０μｌを、９６穴培養
プレート（コーニング(Corning)社製）にて、３７℃、
５％ＣＯ2／９５％空気、湿度１００％の条件で培養を
行った。
説明するが、本発明はこれらにより限定されるものでは
ない。尚、以下の記載においては、一部、当該分野にお
ける慣用の略号を使用して記載した。 ［実施例１］ アセチルコリンエステラーゼ活性の測定
（ＩＬ−３非存在下） 「１％「Nutridoma・SR」（ベーリンガー・マンハイム
(Boehringer Mannheim)社製）を添加した「RPMI 1640」
（ギブコ(Gibco)社製）」（以後「培地Ａ」という）に
よって、１×１０6細胞／ｍｌに希釈したマウス（C57BL
/6N系、１１〜１５週令）骨髄細胞１００μｌに、試料
［ｈＩＬ−１５（Pepro Tech社製／カタログ番号200-1
5）を培地Ａに溶解し所定の濃度としたもの／ネガティ
ブコントロールとしてヒトＩＬ−１１（Pepro Tech社
製）を培地Ａに溶解し所定の濃度としたもの／ポジティ
ブコントロールとしてマウスＩＬ−３（ベーリンガー・
マンハイム社製）を培地Ａに溶解し所定の濃度としたも
の］５０μｌを加えた。全量１５０μｌを、９６穴培養
プレート（コーニング(Corning)社製）にて、３７℃、
５％ＣＯ2／９５％空気、湿度１００％の条件で培養を
行った。
【００２９】培養６日目に、「０．２６５ｍＭＤＴＮＢ
（シグマ(sigma)社製）、１％トライトン(Triton)Ｘ−
１００、１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．２）」溶液
５０μｌを加え、この溶液の４１５ｎｍの吸光度を測定
した。（この吸光度を「吸光度Ａ」と称する。）更に、
３ｍＭ アセチルチオコリンヨウ化物を５０μｌ加え、
３０分室温に静置したのち、この溶液の４１５ｎｍの吸
光度を測定した。（この吸光度を「吸光度Ｂ」と称す
る。）「吸光度Ｂ」−「吸光度Ａ」で求められた値をＡ
ＣｈＥ活性とした。
（シグマ(sigma)社製）、１％トライトン(Triton)Ｘ−
１００、１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．２）」溶液
５０μｌを加え、この溶液の４１５ｎｍの吸光度を測定
した。（この吸光度を「吸光度Ａ」と称する。）更に、
３ｍＭ アセチルチオコリンヨウ化物を５０μｌ加え、
３０分室温に静置したのち、この溶液の４１５ｎｍの吸
光度を測定した。（この吸光度を「吸光度Ｂ」と称す
る。）「吸光度Ｂ」−「吸光度Ａ」で求められた値をＡ
ＣｈＥ活性とした。
【００３０】結果を図１〜図４に示す。横軸は９６穴培
養プレートで培養する際の各ＩＬの濃度を、縦軸は、前
記ＡＣｈＥ活性（「吸光度Ｂ」−「吸光度Ａ」）を表
す。図１においては黒丸はＩＬ−１５のデータを、黒三
角はネガティブコントロールとしてのＩＬ−１１のデー
タを示す。図２は、図１の実験とはサンプルの濃度を変
えたＩＬ−１５のデータを、図３は図１の実験とはサン
プルの濃度を変えたネガティブコントロールとしてのＩ
Ｌ−１１のデータを、図４はポジティブコントロールと
してのＩＬ−３のみを加えたデータを示す。ＩＬ−３非
存在下では、ＩＬ−１５は、ＩＬ−３と同等もしくはそ
れ以上の、マウス骨髄細胞にＡＣｈＥを誘導する活性を
示した。即ち、ＩＬ−３非存在下では、ＩＬ−１５が、
マウス骨髄細胞中の巨核球系細胞を、分化、成熟させる
ことが判明した。 ［実施例２］ アセチルコリンエステラーゼ活性の測定
（ＩＬ−３存在下） １％「Nutridoma・SR」を添加した「RPMI 1640」によっ
て、１×１０6細胞／ｍｌに希釈したマウス骨髄細胞１
００μｌに、組換えマウスＩＬ−３（ベーリンガー・マ
ンハイム社製）を０．７５ｎｇ／ｍｌの濃度（培養時の
濃度０．５ｎｇ／ｍｌ）になるように加えたことを除い
ては、実施例１と同じ実験を行った。なお、前述のよう
に、ＩＬ−１１はＭｅｇ−ＣＳＦであるＩＬ−３存在下
でＭｅｇ−Ｐｏｔ活性を示すことが知られているので、
実施例１と異なり、ＩＬ−１１はポジティブコントロー
ルとなる。
養プレートで培養する際の各ＩＬの濃度を、縦軸は、前
記ＡＣｈＥ活性（「吸光度Ｂ」−「吸光度Ａ」）を表
す。図１においては黒丸はＩＬ−１５のデータを、黒三
角はネガティブコントロールとしてのＩＬ−１１のデー
タを示す。図２は、図１の実験とはサンプルの濃度を変
えたＩＬ−１５のデータを、図３は図１の実験とはサン
プルの濃度を変えたネガティブコントロールとしてのＩ
Ｌ−１１のデータを、図４はポジティブコントロールと
してのＩＬ−３のみを加えたデータを示す。ＩＬ−３非
存在下では、ＩＬ−１５は、ＩＬ−３と同等もしくはそ
れ以上の、マウス骨髄細胞にＡＣｈＥを誘導する活性を
示した。即ち、ＩＬ−３非存在下では、ＩＬ−１５が、
マウス骨髄細胞中の巨核球系細胞を、分化、成熟させる
ことが判明した。 ［実施例２］ アセチルコリンエステラーゼ活性の測定
（ＩＬ−３存在下） １％「Nutridoma・SR」を添加した「RPMI 1640」によっ
て、１×１０6細胞／ｍｌに希釈したマウス骨髄細胞１
００μｌに、組換えマウスＩＬ−３（ベーリンガー・マ
ンハイム社製）を０．７５ｎｇ／ｍｌの濃度（培養時の
濃度０．５ｎｇ／ｍｌ）になるように加えたことを除い
ては、実施例１と同じ実験を行った。なお、前述のよう
に、ＩＬ−１１はＭｅｇ−ＣＳＦであるＩＬ−３存在下
でＭｅｇ−Ｐｏｔ活性を示すことが知られているので、
実施例１と異なり、ＩＬ−１１はポジティブコントロー
ルとなる。
【００３１】結果を図５に示す。横軸は９６穴培養プレ
ートで培養する際の各ＩＬの濃度を、縦軸は、前記ＡＣ
ｈＥ活性（「吸光度Ｂ」−「吸光度Ａ」）を表す。図５
においては黒丸はＩＬ−１５のデータを、黒三角はポジ
ティブコントロールとしてのＩＬ−１１のデータを示
す。ＩＬ−３存在下でも、ＩＬ−１５は、マウス骨髄細
胞にＡＣｈＥを誘導する活性を示した。即ち、ＩＬ−３
非存在下でも、ＩＬ−１５は、マウス骨髄細胞中の巨核
球系細胞を、分化、成熟させることが判明した。 ［実施例３］ 巨核球コロニーアッセイ マウス骨随細胞を用い、単層軟寒天培養法によって行っ
た。即ち、ウマ血清（５６℃３０分処理したもの、バイ
オセル(Biocell)社製）０．２ｍｌ、マウス（C57BL/6N
系雄性、６〜１２週令）大腿骨骨髄細胞０．１ｍｌ（２
×１０6／有核細胞）、「Iscove's Modified Dulbecco'
s 培養液」（ＩＭＤＭ）０．２ｍｌ、寒天を０．７５％
含む「改変McCoy's5A培養液」０．４ｍｌ、及びＩＬ−
１５溶液（ＩＬ−１５（Pepro Tech社製／カタログ番号
200-15）をＩＭＤＭに溶解し１００ｎｇ／ｍｌとしたも
の）０．１ｍｌを混合して、直径３５ｍｍの組織培養プ
ラスティックディッシュに入れて固まらせたのち、３７
℃、５％ＣＯ2／９５％空気、湿度１００％の条件で培
養を行った。
ートで培養する際の各ＩＬの濃度を、縦軸は、前記ＡＣ
ｈＥ活性（「吸光度Ｂ」−「吸光度Ａ」）を表す。図５
においては黒丸はＩＬ−１５のデータを、黒三角はポジ
ティブコントロールとしてのＩＬ−１１のデータを示
す。ＩＬ−３存在下でも、ＩＬ−１５は、マウス骨髄細
胞にＡＣｈＥを誘導する活性を示した。即ち、ＩＬ−３
非存在下でも、ＩＬ−１５は、マウス骨髄細胞中の巨核
球系細胞を、分化、成熟させることが判明した。 ［実施例３］ 巨核球コロニーアッセイ マウス骨随細胞を用い、単層軟寒天培養法によって行っ
た。即ち、ウマ血清（５６℃３０分処理したもの、バイ
オセル(Biocell)社製）０．２ｍｌ、マウス（C57BL/6N
系雄性、６〜１２週令）大腿骨骨髄細胞０．１ｍｌ（２
×１０6／有核細胞）、「Iscove's Modified Dulbecco'
s 培養液」（ＩＭＤＭ）０．２ｍｌ、寒天を０．７５％
含む「改変McCoy's5A培養液」０．４ｍｌ、及びＩＬ−
１５溶液（ＩＬ−１５（Pepro Tech社製／カタログ番号
200-15）をＩＭＤＭに溶解し１００ｎｇ／ｍｌとしたも
の）０．１ｍｌを混合して、直径３５ｍｍの組織培養プ
ラスティックディッシュに入れて固まらせたのち、３７
℃、５％ＣＯ2／９５％空気、湿度１００％の条件で培
養を行った。
【００３２】培養６日目に寒天層ごとスライドガラス上
に取り出し乾燥させ、フィルム状標本としたものを５％
グルタルアルデヒドで固定し、Nakeffらの方法［Proc.S
co.Exp.Biol.Med.,151,587(1976)］により、ＡＣｈＥ染
色および巨核球コロニー数の算定を行った。この際、Ａ
ＣｈＥ染色陽性細胞を４個以上含む集塊を巨核球コロニ
ーとした。検鏡の倍率は２００倍に設定した。その結
果、培養液中最終濃度１０ｎｇ／ｍｌのｈＩＬ−１５の
添加により、３０個の巨核球コロニーが観察された。な
お、ｈＩＬ−１５を添加しない以外は同じ実験を行った
結果、２個の巨核球コロニーしか観察されなかった。こ
のことから、ｈＩＬ−１５は、単独で巨核球系細胞を増
殖させる活性を有することが判明した。
に取り出し乾燥させ、フィルム状標本としたものを５％
グルタルアルデヒドで固定し、Nakeffらの方法［Proc.S
co.Exp.Biol.Med.,151,587(1976)］により、ＡＣｈＥ染
色および巨核球コロニー数の算定を行った。この際、Ａ
ＣｈＥ染色陽性細胞を４個以上含む集塊を巨核球コロニ
ーとした。検鏡の倍率は２００倍に設定した。その結
果、培養液中最終濃度１０ｎｇ／ｍｌのｈＩＬ−１５の
添加により、３０個の巨核球コロニーが観察された。な
お、ｈＩＬ−１５を添加しない以外は同じ実験を行った
結果、２個の巨核球コロニーしか観察されなかった。こ
のことから、ｈＩＬ−１５は、単独で巨核球系細胞を増
殖させる活性を有することが判明した。
【００３３】
【発明の効果】本発明によって、ｈＩＬ−１５が巨核球
−血小板系に作用し、その分化、成熟及び／又は増殖を
促進し、血小板の生成を促進する活性を有することが明
らかになり、血小板減少に伴う疾患や、血小板の機能異
常を伴う疾患の治療あるいは予防等に有効な、ｈＩＬ−
１５を有効成分として含有する医薬組成物が提供され
た。
−血小板系に作用し、その分化、成熟及び／又は増殖を
促進し、血小板の生成を促進する活性を有することが明
らかになり、血小板減少に伴う疾患や、血小板の機能異
常を伴う疾患の治療あるいは予防等に有効な、ｈＩＬ−
１５を有効成分として含有する医薬組成物が提供され
た。
【図１】ｈＩＬ−１５のＡＣｈＥ誘導活性を示す図であ
る。
る。
【図２】ｈＩＬ−１５のＡＣｈＥ誘導活性を示す図であ
る。
る。
【図３】ＩＬ−３のＡＣｈＥ誘導活性を示す図である。
【図４】ＩＬ−１１のＡＣｈＥ誘導活性を示す図であ
る。
る。
【図５】ＩＬ−３存在下におけるｈＩＬ−１５のＡＣｈ
Ｅ誘導活性を示す図である。
Ｅ誘導活性を示す図である。
Claims (1)
- 【請求項１】 ヒトインターロイキン−１５を有効成分
として含有することを特徴とする血小板減少治療用医薬
組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10206396A JP3847833B2 (ja) | 1995-04-02 | 1996-04-02 | 血小板減少治療用医薬組成物 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7-112218 | 1995-04-02 | ||
| JP11221895 | 1995-04-02 | ||
| JP10206396A JP3847833B2 (ja) | 1995-04-02 | 1996-04-02 | 血小板減少治療用医薬組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08333273A true JPH08333273A (ja) | 1996-12-17 |
| JP3847833B2 JP3847833B2 (ja) | 2006-11-22 |
Family
ID=26442805
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10206396A Expired - Fee Related JP3847833B2 (ja) | 1995-04-02 | 1996-04-02 | 血小板減少治療用医薬組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3847833B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115414354A (zh) * | 2022-08-29 | 2022-12-02 | 西南医科大学 | 花椒毒素在制备治疗血小板减少症药物中的应用 |
-
1996
- 1996-04-02 JP JP10206396A patent/JP3847833B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115414354A (zh) * | 2022-08-29 | 2022-12-02 | 西南医科大学 | 花椒毒素在制备治疗血小板减少症药物中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3847833B2 (ja) | 2006-11-22 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20060726 |
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20060824 |
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| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
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