JPH0829692A - 蛍光顕微鏡 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 複数の蛍光色素により標識された試料を、励
起光及び蛍光を有効に利用し、高い時間分解能で、試料
に振動を与えず観察する。 【構成】 第１の励起光Ｌ３と第２の励起光Ｌ４とは、
光路切換手段１９により高速に相互に切換えられて標本
５へ向かう同一光路に導かれ、交代に発生する蛍光Ｆ
３、Ｆ４は逆進して、光路切換手段１９により個別の光
路に導かれ、個別に検出される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は蛍光顕微鏡に関するもの
である。更に詳しくは複数の蛍光色素を観察するレーザ
走査型コンフォーカル顕微鏡を含む蛍光顕微鏡に関する
ものである。

【０００２】

【従来の技術】蛍光顕微鏡は、蛍光色素がその色素固有
の吸収波長（励起波長）を持ち、励起波長の光、即ち励
起光を吸収して（励起）、その色素固有の波長（蛍光波
長：励起波長よりも波長が長い）の蛍光を発すると言う
性質を用いて蛍光色素の蛍光を観察する顕微鏡である。
従来の蛍光顕微鏡における励起光と蛍光との分離に関す
るシステムについて、図６及び図７を用いて説明する。
光源１から励起光Ｌ１を含む光が励起フィルター２に入
射し、励起光Ｌ１が透過し、ダイクロイックミラー３で
反射し、対物レンズ４を通して蛍光色素で標識された試
料５を照射する。蛍光色素は励起され、蛍光色素から発
する蛍光Ｆ１は対物レンズ４で集光され、ダイクロイッ
クミラー３を透過する。蛍光フィルター６は蛍光波長の
光を透過するもので、励起光の戻り光を遮断する。蛍光
フィルター６を透過した蛍光Ｆ１は検出装置７によって
観察することができる。

【０００３】この従来例で使用するダイクロイックミラ
ー３は図７に示すような分光特性を有し、所定波長８を
境にして短波長側に反射領域９、長波長側に透過領域１
０をそれぞれ有しており、励起光Ｌ１の波長は反射領域
９に、蛍光Ｆ１の波長は透過領域１０に来るように所定
波長が設定されている。

【０００４】しかし、前述のダイクロイックミラー３を
使用するシステムでは、二つ以上の異なる蛍光色素によ
る蛍光を観察をすることができなかった。二つ以上の異
なる蛍光色素はそれぞれ異なる波長の励起光により励起
され、異なる波長の蛍光を発光する。この場合使用する
ダイクロイックミラーは、図８に示すような分光特性を
有し、実線で示すような複数の反射領域９と複数の透過
領域１０を有するものである。尚点線は励起光、鎖線は
蛍光の分光特性を示す。

【０００５】又は、図９に示すような、複数のダイクロ
イックミラー、励起フィルター、及び蛍光フィルターを
セットにした、複数のいわゆるダイクロセット１０を設
けて、これを相互に切換えて光源１からの光を試料５に
照射し、蛍光を検出装置７によって観察することができ
る。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】しかし、図８に示すよ
うな、複数の反射領域９と複数の透過領域１０を有する
分光特性を有するダイクロイックミラーを使用して、複
数の蛍光色素を観察するシステムでは、ある励起光の励
起波長が他の励起光による蛍光の蛍光波長と互いに重な
り合う複数の蛍光色素からの蛍光を観察することができ
ないから、複数蛍光色素の選択の余地が狭く限定されて
いた。

【０００７】蛍光と励起光が接近している場合には、非
常に狭い波長範囲を反射する領域を有する図１０に実線
で示すような分光特性を有するダイクロイックミラーを
用いて、反射領域９でそれぞれの蛍光色素用の点線で示
す励起光を反射し、透過領域１０でそれぞれの鎖線で示
す蛍光を透過させていた。しかしこの方法では、蛍光は
かなりの部分が透過しないので、光量の損失が大きく、
ただでさえ微弱な蛍光の検出感度が悪くなっていた。ま
た、特殊なダイクロイックミラーを用いているため、製
造が困難で高価になってしまうと言う問題があった。

【０００８】また、図９に示すような、ダイクロイック
ミラー、励起、蛍光フィルターの複数のセットを切換え
て観察するシステムを用い、複数の蛍光色素により試料
を観察する方法は、ダイクロセットを顕微鏡の観察光学
系の光路に順次挿入するように移動するためは、切換え
のために少なくとも数百ミリ秒の時間が必要である。そ
のため切換え時間より短い時間に変化する、速い蛍光の
変化を観察することができず、その上、ダイクロセット
の移動に伴う振動に起因して試料が動き、試料の同じ位
置を反復して観察することが困難であると言う問題があ
った。

【０００９】本発明は上記の課題に鑑み、複数の蛍光色
素により標識された試料を、励起光及び蛍光を有効に利
用し、高い時間分解能で、試料に振動を与えず観察する
ことができる蛍光顕微鏡を提供することを目的とする。

【００１０】

【課題を解決するための手段】請求項１の発明は、第１
の励起光を発生し、標本を照射することにより第１の蛍
光を発生させる第１の光源と、第２の励起光を発生し、
前記標本を照射することにより第２の蛍光を発生させる
第２の光源と、前記第１の励起光と前記第１の蛍光とを
分離する分光特性を有する第１の光分離手段と、前記第
２の励起光と前記第２の蛍光とを分離する分光特性を有
する第２の光分離手段と、前記第１の光源からの前記第
１の励起光の光路と前記第２の光源からの前記第２の励
起光の光路とを、高速に相互に切換えて前記標本へ向か
う同一光路に導くと共に、前記標本から発生した第１の
蛍光と第２の蛍光とを、それぞれ前記第１の励起光の光
路と前記第２の励起光の光路とに導く光路切換手段と、
前記第１の光分離手段で前記第１の励起光から分離され
た第１の蛍光を検出する第１の光検出手段と、前記第２
の光分離手段で前記第２の励起光から分離された第２の
蛍光を検出する第２の光検出手段とを具備することを特
徴とするものである。

【００１１】前記第１の光分離手段及び前記第２の光分
離手段は、所定波長より短い波長領域の光をほぼ全て反
射し、前記所定波長を超える長い波長領域の光をほぼ全
て透過することが好ましい。

【００１２】前記光路切換手段はガルバノミラーである
ことが好ましい。

【００１３】前記光路切換手段と前記対物レンズとの間
に設けらた二次元走査手段と、前記第１の光分離手段と
前記第１の光検出手段との間、及び前記第２の光分離手
段と前記第２の光検出手段との間の前記標本の像が結像
する位置にそれぞれ設けらたピンホールを具備すること
が好ましい。

【００１４】請求項５の発明は、第１の励起光を発生
し、標本を照射することにより第１の蛍光を発生させる
第１の光源と、第２の励起光を発生し、前記標本を照射
することにより第２の蛍光を発生させる第２の光源と、
前記第１の励起光と前記第１の蛍光とを分離する分光特
性を有する第１の光分離手段と、前記第２の励起光と前
記第２の蛍光とを分離する分光特性を有する第２の光分
離手段と、前記第１の光源からの前記第１の励起光の光
路と前記第２の光源からの前記第２の励起光の光路と
を、高速に相互に切換えて、前記標本へ向かう同一光路
に導くと共に、前記標本から発生した第１の蛍光と第２
の蛍光とを、それぞれ前記第１の励起光の光路と前記第
２の励起光の光路とに導く光路切換手段と、前記第１の
光分離手段で前記第１の励起光から分離された第１の蛍
光、及び前記第２の光分離手段で前記第２の励起光から
分離された第２の蛍光とを検出する第３の光検出手段
と、前記第１の蛍光の光路と第２の蛍光の光路とを、高
速に相互に前記光路切換手段と同期して切換えて、前記
第３の光検出手段向かう同一光路に導く第２の光路切換
手段とを具備することを特徴とするものである。

【００１５】前記第１の光分離手段及び前記第２の光分
離手段は、所定波長より短い波長領域の光をほぼ全て反
射し、前記所定波長を超える長い波長領域の光をほぼ全
て透過することが好ましい。

【００１６】前記光路切換手段及び前記第２の光路切換
手段はガルバノミラーであることが好ましい。

【００１７】前記光路切換手段と前記対物レンズとの間
に設けらた二次元走査手段と、前記第１の光分離手段と
前記第１の光検出手段との間、及び前記第２の光分離手
段と前記第２の光検出手段との間の前記標本の像が結像
する位置にそれぞれ設けらたピンホールを具備すること
が好ましい。

【００１８】

【作用】請求項１の発明では、第１の励起光と第２の励
起光とは、光路切換手段により高速に相互に切換えられ
て標本へ向かう同一光路に導かれ、交代に発生する蛍光
は逆進してから、光路切換手段により個別の光路に導か
れ、個別に検出される。

【００１９】請求項５の発明では、第１の励起光と第２
の励起光とは、光路切換手段により高速に相互に切換え
られて標本へ向かう同一光路に導かれ、交代に発生する
蛍光は逆進してから、光路切換手段により個別の光路に
導かれた後、再び第２の光路切換手段により共通の検出
装置に導かれ、検出される。

【００２０】

【実施例】本発明の一実施例を図１により説明する。図
１は本実施例の励起光及び蛍光の光路を中心とした光路
図である。光源１１は励起光Ｌ３を含む光を出射する光
源で、出射した光の光路に配置されたフィルタ１２は励
起光Ｌ３を選択的に透過するフィルタである。ダイクロ
イックミラー１３は励起光Ｌ３の波長を含むそれより短
波長側の光を反射し、その波長を超える長波長側の光を
透過する分光特性を有し、励起光Ｌ３と蛍光Ｆ３とを分
離する波長分離器である。フィルタ１４は蛍光Ｆ３の光
路に配置され、蛍光Ｆ３を透過し、励起光Ｌ３を遮断す
るフィルタである。

【００２１】光源１５は励起光Ｌ３の波長と異なる波長
を有する励起光Ｌ４を含む光を出射する光源で、フィル
タ１６は励起光Ｌ４を選択的に透過するフィルタであ
る。ダイクロイックミラー１７は励起光Ｌ４の波長を含
むそれより短波長側の光を反射し、その波長を超える長
波長側の光を透過する分光特性を有し、励起光Ｌ４と蛍
光Ｆ４とを分離する波長分離器である。フィルタ１８は
蛍光Ｆ４の光路に配置され、蛍光Ｆ４を透過し、励起光
Ｌ４を遮断するフィルタである。

【００２２】ガルバノメータミラー１９は励起光Ｌ３の
光路と励起光Ｌ４の光路を対物レンズ４に向かう同一の
光路に相互に切換える反射鏡であり、励起光Ｌ３の光路
から対物レンズ４に向かう光路に偏向する角度位置２０
と、励起光Ｌ４の光路から対物レンズ４に向かう光路に
偏向する角度位置２１との間を数ミリ秒で切換えること
ができる。

【００２３】対物レンズ４は励起光Ｌ３及び励起光Ｌ４
を収束して複数の蛍光色素で標識された試料５を照射す
るレンズである。検出装置２２及び検出装置２３はそれ
ぞれ試料５から発光した蛍光Ｆ３及びＦ４を検出するＣ
ＣＤであって、ミリ秒程度の高い時間分解能を有してい
る。検出装置２２、２３には、ＣＣＤの他、画像増幅器
（Ｉｍａｇｅ Ｉｎｔｅｎｓｉｆｉｅｒ）、ＳＩＴカメ
ラ等の撮像装置や光電子増倍管を用いることができる
し、蛍光像を接眼レンズを介して直接目で観察すること
も可能である。

【００２４】次に、光の進行について説明する。光源１
１からの光は、フィルタ１２に入射し励起光Ｌ３が透過
する。励起光Ｌ３はダイクロイックミラー１３で反射す
る。ガルバノメータミラー１９が角度位置２０にある
と、励起光Ｌ３はガルバノメータミラー１９で反射して
対物レンズ４に入射し、収束されて、試料５を照射する
と、試料５から蛍光Ｆ３が発光する。尚ガルバノメータ
ミラー１９が角度位置２０になく、他の角度位置、例え
ば角度位置２１にあるときは励起光Ｌ３は、対物レンズ
４に入射せず、従って蛍光Ｆ３は発光しない。

【００２５】試料５から発光した蛍光Ｆ３は、ダイクロ
イックミラー１３まで逆進する。即ち、蛍光Ｆ３は対物
レンズ４で集光された後、ガルバノメータミラー１９で
反射される。この時のガルバノメータミラー１９は角度
位置２０にあり、変わらないから、ダイクロイックミラ
ー１３まで進む。蛍光Ｆ３はダイクロイックミラー１３
を透過し、フィルタ１４を透過した後、検出装置２２に
入射する。試料５から反射した励起光Ｌ３はフィルタ１
４を透過しないから微弱な蛍光Ｆ３の検出を阻害するこ
とはない。

【００２６】同様にして、光源１５からの光は、フィル
タ１６に入射し励起光Ｌ４が透過する。励起光Ｌ４はダ
イクロイックミラー１７で反射する。ガルバノメータミ
ラー１９が角度位置２１にあると、励起光Ｌ４はガルバ
ノメータミラー１９で反射して対物レンズ４に入射し、
収束されて、試料５を照射すると、試料５から蛍光Ｆ４
が発光する。尚ガルバノメータミラー１９が角度位置２
１になく、他の角度位置、例えば角度位置２０にあると
きは励起光Ｌ４は、対物レンズ４に入射せず、従って蛍
光Ｆ４は発光しない。

【００２７】試料５から発光した蛍光Ｆ４は、ダイクロ
イックミラー１７まで逆進する。即ち、蛍光Ｆ４は対物
レンズ４で集光された後、ガルバノメータミラー１９で
反射される。この時のガルバノメータミラー１９は角度
位置２１にあり、ダイクロイックミラー１７まで進む。
蛍光Ｆ４はダイクロイックミラー１７を透過し、フィル
タ１８を透過した後、検出装置２３に入射する。試料５
から反射した励起光Ｌ４はフィルタ１８を透過しないか
ら微弱な蛍光Ｆ４の検出を阻害することはない。

【００２８】ガルバノメータミラー１９は角度位置２０
と角度位置２１の間を、数ミリ秒で振動を発生すること
なく高速に切換えるから、蛍光Ｆ３及び蛍光Ｆ４は数ミ
リ秒ごとに交代にそれぞれ検出装置２２及び検出装置２
３で検出される。このようにして、異なる２波長の蛍光
がミリ秒程度の高い時間分解能で検出することができ
る。

【００２９】本実施例では、蛍光色素の励起波長が他の
蛍光色素の蛍光波長と互いに重なり合う場合でも、互い
に分離して観察することができるから、蛍光色素の組合
せの自由度が増大し、且つ励起光はほぼ完全に試料の照
射に利用され、蛍光はほぼ完全に検出装置に入射し、有
効に利用される。。フィルタ１２、１６は励起光をほぼ
完全に透過し、ダイクロイックミラー１３、１７は励起
光をほぼ完全に反射するから、励起光Ｌ３、Ｌ４はほぼ
完全に試料５の照射に利用される。ダイクロイックミラ
ー１３、１７及びフィルタ１４、１８は蛍光をほぼ完全
に透過し、試料５からの蛍光Ｆ３、Ｆ４はそれぞれほぼ
完全に検出装置２２、２３に入射し、有効に利用され
る。そして、フィルタ１２、１６、ダイクロイックミラ
ー１３、１７及びフィルタ１４、１８は何れも単純な分
光特性を有すれば良く、廉価に製造可能である。

【００３０】次に第２の実施例について図２により説明
する。本実施例は３個の光源を使用したものである。上
述した一実施例と同一又は類似の点の説明の詳述は省略
する。光源１１、１５、２４、励起光を透過するフィル
タ１２、１６、２５、励起光を反射し、励起光より長波
長側の光を透過するダイクロイックミラー１３、１７、
２６、蛍光を透過し励起光を反射するフィルタ１４、１
８、２７が設けられている。ガルバノメータミラー１９
は励起光の光路に対する角度位置２０、２１、２８の間
を数ミリ秒で切換えることができる反射鏡である。励起
光は対物レンズ４で収束され、蛍光色素で標識された試
料５を照射し、試料５から発光した蛍光は検出装置２
２、２３、２８で検出される。

【００３１】次に、光の進行について説明する。光源１
１から出射した励起光は、フィルタ１２、ダイクロイッ
クミラー１３、ガルバノメータミラー１９、対物レンズ
４を介して試料５を照射する。この時のガルバノメータ
ミラー１９は角度位置２０にある。試料５から発光した
蛍光は、ダイクロイックミラー１３まで逆行した後、ダ
イクロイックミラー１３、フィルタ１４を介して検出装
置２２に入射する。

【００３２】同様にして、光源１５、２４から出射した
励起光は、角度位置２１、２８のガルバノメータミラー
１９で反射し、試料５から発光した蛍光は、同様に角度
位置２１、２８のガルバノメータミラー１９で反射し、
検出装置２３、２９に入射し検出される。

【００３３】上述したように、本実施例により３種の蛍
光は、例え波長域が重複していても分離して観察するこ
とができる。

【００３４】次に第３の実施例について図３により説明
する。本実施例はレーザ走査型コンフォーカル顕微鏡で
ある。上述した一実施例と同一又は類似の点の説明の詳
述は省略する。レーザ光源３１、３２、励起光のみを透
過するフィルタ１２、１６、励起光の波長を含みそれよ
り短波長側の光を反射し、励起光の波長を超える長波長
側の光を透過するダイクロイックミラー１３、１７、蛍
光を透過し励起光を反射するフィルタ１４、１８が設け
られている。ガルバノメータミラー１９は励起光の光路
に対する角度位置２０、２１の間を数ミリ秒で切換える
反射鏡である。対物レンズ４は励起光を収束して試料５
を照射し、検出装置２２、２３で試料５から発光した蛍
光を検出する。ガルバノメータミラー１９と対物レンズ
４との間に、Ｘ−Ｙスキャナ３３が設けられ、及びフィ
ルタ１４、１８と検出装置２２、２３との間の、試料５
からの蛍光が焦点を結ぶ位置にピンホール３４、３５が
それぞれ設けられている。

【００３５】次に、光の進行について説明する。光源３
１から出射した励起光は、フィルタ１２、ダイクロイッ
クミラー１３、ガルバノメータミラー１９を介してＸ−
Ｙスキャナ３３に入射し、二次元走査されてから、対物
レンズ４に入射して試料５を照射する。この時のガルバ
ノメータミラー１９は角度位置２０にある。試料５から
発光した蛍光は、Ｘ−Ｙスキャナ３３まで逆行して二次
元走査され、ガルバノメータミラー１９、ダイクロイッ
クミラー１３、フィルタ１４を介して、ピンホール３４
に焦点を結んだ後、検出装置２２に入射する。

【００３６】同様にして、光源３２から出射した励起光
は、角度位置２１のガルバノメータミラー１９で反射
し、Ｘ−Ｙスキャナ３３で二次元走査されてから、試料
５を照射する。試料５から発光した蛍光は、Ｘ−Ｙスキ
ャナ３３で二次元走査されてから、角度位置２１のガル
バノメータミラー１９で反射し、ピンホール３５に焦点
を結んだ後、検出装置２３に入射する。

【００３７】本実施例では、各光源からの光路でそれぞ
れコンフォーカル顕微鏡光学系が存在し、ガルバノメー
タミラーでこれらの光路を切換えることで、二つの蛍光
色素の蛍光を、ミリ秒の時間分解能で切換え、蛍光を損
失することなく二次元画像として観察することができ
る。尚光源、フィルタ、ダイクロイックミラー、ピンホ
ール、検出器を増設し、より多くの蛍光の観察が可能と
なる。

【００３８】次に、第４の実施例を図４により説明す
る。光源１１、１５から出射した励起光がガルバノメー
タミラー１９により交代で偏向され、励起されて発生し
た蛍光がガルバノメータミラー１９を介して逆進し、そ
れぞれの光路で蛍光を透過し励起光を反射するフィルタ
１４、１８を透過するまでの構成及び動作は上述した一
実施例と同一であるので説明の詳述は省略する。

【００３９】２本の蛍光の光路を偏向するミラー４１、
４２が設けられ、２本の蛍光の光路は偏向後１本の光路
に結合している。その結合位置に設けられたガルバノメ
ータミラー４３が高速に角度位置４４、４５に切り替わ
り、２種の蛍光は交代で１個の検出装置４６へ向かう光
路に導かれる。ガルバノメータミラー４３は、ガルバノ
メータミラー１９と同期しているから、２波長の蛍光に
よる観察が、１個の検出装置４６で廉価に行える。又光
源、フィルタ、ミラー、ダイクロイックミラー、検出器
を増加し、より多くの蛍光の観察が可能となる。

【００４０】また、検出器として撮像装置や光電子像倍
管を用いるとき、両ガルバノメータミラーと同期をとっ
て、光路切換えの間検出を行わないようにすると、より
正確な観察が可能となる。具体的には、ＣＣＤやＳＩＴ
カメラを用いたときは、カメラの垂直同期信号とガルバ
ノメータミラーの切換えを同期させる。また、画像増幅
装置や光電子像倍管を用いたときは、ガルバノメータミ
ラーの切換え時間の間、ゲートをかけ、増幅用の電圧を
印加しない。

【００４１】次に、第５の実施例を図５により説明す
る。光源３１、３２から出射した励起光がガルバノメー
タミラー１９により交代で偏向され、Ｘ−Ｙスキャナ３
３で二次元走査されてから、試料５を照射し、励起され
て発生した蛍光がガルバノメータミラー１９を介して逆
進し、それぞれの光路で蛍光を透過し励起光を反射する
フィルタ１４、１８を透過し、ピンホール３４、３５に
焦点を結ぶまでの構成及び動作は上述した第３の実施例
と同一であり、それ以降の、２本の蛍光の光路を偏向す
るミラー４１、４２が設けられて２本の蛍光の光路が交
代で１個の検出装置４６へ向かう光路に導かれ、蛍光が
検出される構成及び動作は上述した第４の実施例と同一
である。本実施例では、ピンホールをミラー４１、４２
による偏向の後に、ガルバノメータミラー４３と検出装
置４６との間に１個配置する構成にしても良い。

【００４２】本実施例では、各光源からの光路でそれぞ
れコンフォーカル顕微鏡光学系が存在し、２個の互いに
同期したガルバノメータミラーでこれらの光路を切換え
ることで、１個の検出装置により２種の蛍光を、ミリ秒
の時間分解能で、蛍光を損失することなく廉価にコンフ
ォーカル観察することができる。又光源、フィルタ、ミ
ラー、ダイクロイックミラー、検出器を増加し、より多
くの蛍光の観察が可能となる。

【００４３】

【発明の効果】請求項１の発明では、第１の励起光と第
２の励起光とは、光路切換手段により高速に相互に切換
えて標本へ向かう同一光路に導かれ、交代に発生する蛍
光は逆進してから、光路切換手段により個別の光路に導
かれ、個別に検出されるから、複数の蛍光色素により標
識された試料をその蛍光の光量を有効に利用し、高い時
間分解能で、試料に振動を与えず観察することができ
る。

【００４４】請求項５の発明では、第１の励起光と第２
の励起光とは、光路切換手段により高速に相互に切換え
て標本へ向かう同一光路に導かれ、交代に発生する蛍光
は逆進してから、光路切換手段により個別の光路に導か
れ、再び第２の光路切換手段により共通の検出装置に導
かれ、検出されるから、複数の蛍光色素により標識され
た試料をその蛍光の光量を有効に利用し、高い時間分解
能で、試料に振動を与えず廉価な装置で観察することが
できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の一実施例の光学構成図。

【図２】本発明の第２の実施例の光学構成図。

【図３】本発明の第３の実施例の光学構成図。

【図４】本発明の第４の実施例の光学構成図。

【図５】本発明の第５の実施例の光学構成図。

【図６】従来例の光学構成図。

【図７】従来例にかかるダイクロイックミラーの分光特
性図。

【図８】従来例にかかるダイクロイックミラーの分光特
性図。

【図９】従来例にかかるダイクロセルの斜視図。

【図１０】従来例にかかるダイクロイックミラーの分光
特性図。

【符号の説明】

１、１１、１５、２４・・・・光源 ４・・・・対物レンズ ５・・・・試料 １２、１６、２５・・・・フィルタ １３、１７、２６・・・・ダイクロイックミラー １４、１８、２７・・・・フィルタ ２０、２１、２８、４４、４５・・・・角度位置 ２２、２３、２８・・・・検出装置 １９、４３・・・・ガルバノメータミラー ３１、３２・・・・レーザ光源 ３３・・・・Ｘ−Ｙスキャナ ３４、３５・・・・ピンホール ４１、４２・・・・ミラー ４６・・・・検出装置

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】第１の励起光を発生し、標本を照射するこ
   とにより第１の蛍光を発生させる第１の光源と、第２の
   励起光を発生し、前記標本を照射することにより第２の
   蛍光を発生させる第２の光源と、前記第１の励起光と前
   記第１の蛍光とを分離する分光特性を有する第１の光分
   離手段と、前記第２の励起光と前記第２の蛍光とを分離
   する分光特性を有する第２の光分離手段と、前記第１の
   光源からの前記第１の励起光の光路と前記第２の光源か
   らの前記第２の励起光の光路とを、高速に相互に切換え
   て前記標本へ向かう同一光路に導くと共に、前記標本か
   ら発生した第１の蛍光と第２の蛍光とを、それぞれ前記
   第１の励起光の光路と前記第２の励起光の光路とに導く
   光路切換手段と、前記第１の光分離手段で前記第１の励
   起光から分離された第１の蛍光を検出する第１の光検出
   手段と、前記第２の光分離手段で前記第２の励起光から
   分離された第２の蛍光を検出する第２の光検出手段とを
   具備することを特徴とする蛍光顕微鏡。
2. 【請求項２】 前記第１の光分離手段及び前記第２の光
   分離手段は、所定波長より短い波長領域の光をほぼ全て
   反射し、前記所定波長を超える長い波長領域の光をほぼ
   全て透過することを特徴とする請求項１に記載の蛍光顕
   微鏡。
3. 【請求項３】 前記光路切換手段はガルバノミラーであ
   ることを特徴とする請求項１又は２に記載の蛍光顕微
   鏡。
4. 【請求項４】 前記光路切換手段と前記対物レンズとの
   間に設けらた二次元走査手段と、前記第１の光分離手段
   と前記第１の光検出手段との間、及び前記第２の光分離
   手段と前記第２の光検出手段との間の前記標本の像が結
   像する位置にそれぞれ設けらたピンホールを具備するこ
   とを特徴とする請求項１、２又は３に記載の蛍光顕微
   鏡。
5. 【請求項５】第１の励起光を発生し、標本を照射するこ
   とにより第１の蛍光を発生させる第１の光源と、第２の
   励起光を発生し、前記標本を照射することにより第２の
   蛍光を発生させる第２の光源と、前記第１の励起光と前
   記第１の蛍光とを分離する分光特性を有する第１の光分
   離手段と、前記第２の励起光と前記第２の蛍光とを分離
   する分光特性を有する第２の光分離手段と、前記第１の
   光源からの前記第１の励起光の光路と前記第２の光源か
   らの前記第２の励起光の光路とを、高速に相互に切換え
   て、前記標本へ向かう同一光路に導くと共に、前記標本
   から発生した第１の蛍光と第２の蛍光とを、それぞれ前
   記第１の励起光の光路と前記第２の励起光の光路とに導
   く光路切換手段と、前記第１の光分離手段で前記第１の
   励起光から分離された第１の蛍光、及び前記第２の光分
   離手段で前記第２の励起光から分離された第２の蛍光と
   を検出する第３の光検出手段と、前記第１の蛍光の光路
   と第２の蛍光の光路とを、高速に相互に前記光路切換手
   段と同期して切換えて、前記第３の光検出手段向かう同
   一光路に導く第２の光路切換手段とを具備することを特
   徴とする蛍光顕微鏡。
6. 【請求項６】 前記第１の光分離手段及び前記第２の光
   分離手段は、所定波長より短い波長領域の光をほぼ全て
   反射し、前記所定波長を超える長い波長領域の光をほぼ
   全て透過することを特徴とする請求項５に記載の蛍光顕
   微鏡。
7. 【請求項７】 前記光路切換手段及び前記第２の光路切
   換手段はガルバノミラーであることを特徴とする請求項
   ５又は６に記載の蛍光顕微鏡。
8. 【請求項８】 前記光路切換手段と前記対物レンズとの
   間に設けらた二次元走査手段と、前記第１の光分離手段
   と前記第１の光検出手段との間、及び前記第２の光分離
   手段と前記第２の光検出手段との間の前記標本の像が結
   像する位置にそれぞれ設けらたピンホールを具備するこ
   とを特徴とする請求項５、６又は７に記載の蛍光顕微
   鏡。