JPH08248034A - タイプ特異的抗原を使用する血清学的タイプ分け方法 - Google Patents
タイプ特異的抗原を使用する血清学的タイプ分け方法Info
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- JPH08248034A JPH08248034A JP8023675A JP2367596A JPH08248034A JP H08248034 A JPH08248034 A JP H08248034A JP 8023675 A JP8023675 A JP 8023675A JP 2367596 A JP2367596 A JP 2367596A JP H08248034 A JPH08248034 A JP H08248034A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 複雑な装置を用いずに日常的に行うことがで
き、個々の抗体タイプの十分に正確な分類を可能とす
る、抗体をタイプ分けするための新規な方法を提供す
る。 【解決手段】 タイプ特異的抗原により試料液体中の抗
体をタイプ分けする方法、特にＣ型肝炎ウイルスに対す
る抗体をタイプ分けする方法とこれに適するペプチド抗
原。
き、個々の抗体タイプの十分に正確な分類を可能とす
る、抗体をタイプ分けするための新規な方法を提供す
る。 【解決手段】 タイプ特異的抗原により試料液体中の抗
体をタイプ分けする方法、特にＣ型肝炎ウイルスに対す
る抗体をタイプ分けする方法とこれに適するペプチド抗
原。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、タイプ特異的抗原
を用いて試料液体中の抗体をタイプ分けする方法、特に
Ｃ型肝炎ウイルスに対する抗体をタイプ分けする方法と
これに適するペプチド抗原に関するものである。
を用いて試料液体中の抗体をタイプ分けする方法、特に
Ｃ型肝炎ウイルスに対する抗体をタイプ分けする方法と
これに適するペプチド抗原に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】非Ａ−非Ｂ型肝炎と呼ばれている疾病
は、多くの場合Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により引き
起こされる。ＨＣＶは殼に覆われた一本鎖ＲＮＡウイル
スであり、そのゲノムは約9,000 から10,000塩基よりな
る。構造タンパク質（コアタンパク質及びエンベロープ
タンパク質）及び構造タンパク質以外のタンパク質はこ
のゲノムによりコードされている。
は、多くの場合Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により引き
起こされる。ＨＣＶは殼に覆われた一本鎖ＲＮＡウイル
スであり、そのゲノムは約9,000 から10,000塩基よりな
る。構造タンパク質（コアタンパク質及びエンベロープ
タンパク質）及び構造タンパク質以外のタンパク質はこ
のゲノムによりコードされている。
【０００３】ＨＣＶは、慢性の感染症および感染患者で
後期に生じる肝硬変や肝臓の原発性癌のような疾病に相
関関係があるため、特に臨床的に重要なウイルスであ
る。ＨＣＶは血液接触により伝播され得る。抗体の出現
に関する研究により、その高い伝染性が示されている。
EP-A-0 318 216はＨＣＶの部分的なヌクレオチド配列を
開示している。EP-A-0450 931はＨＣＶの完全なヌクレ
オチド配列及びアミノ酸配列を開示している。ウイルス
タンパク質またはペプチドを抗原として用いて体液中の
ウイルス抗体を測定することによるＨＣＶ感染の診断的
検出方法が知られている (例えば、Moriら, Jpn. J. C
ancer Res. 83(1992), 264-268; WO92/11370及びDE-A-4
4 28 705.4を参照)。
後期に生じる肝硬変や肝臓の原発性癌のような疾病に相
関関係があるため、特に臨床的に重要なウイルスであ
る。ＨＣＶは血液接触により伝播され得る。抗体の出現
に関する研究により、その高い伝染性が示されている。
EP-A-0 318 216はＨＣＶの部分的なヌクレオチド配列を
開示している。EP-A-0450 931はＨＣＶの完全なヌクレ
オチド配列及びアミノ酸配列を開示している。ウイルス
タンパク質またはペプチドを抗原として用いて体液中の
ウイルス抗体を測定することによるＨＣＶ感染の診断的
検出方法が知られている (例えば、Moriら, Jpn. J. C
ancer Res. 83(1992), 264-268; WO92/11370及びDE-A-4
4 28 705.4を参照)。
【０００４】ＨＣＶ感染に伴う問題は、それらに異なっ
たウイルス株が存在し、それらのゲノムは高い変異性を
有し、従ってこのゲノムによりコードされるポリペプチ
ドも高い変異性を有するということである (例えば、Mc
Omish ら, Bioforum 16 (1993), 414-420 を参照)。Ｈ
ＣＶの変異性のため、一方では感染を診断することは非
常に困難であり、また他方では感染の原因となるウイル
ス株をタイプ分けすることが困難である。種々のウイル
ス株の毒力や治療（例えばインターフェロンによる）に
対する反応に著しい差異があるため、このようなタイプ
分けは重要である。
たウイルス株が存在し、それらのゲノムは高い変異性を
有し、従ってこのゲノムによりコードされるポリペプチ
ドも高い変異性を有するということである (例えば、Mc
Omish ら, Bioforum 16 (1993), 414-420 を参照)。Ｈ
ＣＶの変異性のため、一方では感染を診断することは非
常に困難であり、また他方では感染の原因となるウイル
ス株をタイプ分けすることが困難である。種々のウイル
ス株の毒力や治療（例えばインターフェロンによる）に
対する反応に著しい差異があるため、このようなタイプ
分けは重要である。
【０００５】ウイルス株をタイプ分けする一つの方法
は、ＰＣＲによりウイルスのゲノムを増幅し、その後に
配列を決定することにより遺伝子型を決定することであ
る（例えば、Bukhら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90
(1993), 8234-8238）。しかしながらこの遺伝子型決定
の欠点は、増幅段階と配列決定段階とに大変時間がかか
り、またこれを行うために特別に用意した実験室の複雑
な装置を用いてしか行うことができないということであ
る。ＨＣＶ感染においては増幅され得るウイルスの遺伝
物質が極めて少量しかないことが多いので、このような
場合には上記のような状況がより切実である。
は、ＰＣＲによりウイルスのゲノムを増幅し、その後に
配列を決定することにより遺伝子型を決定することであ
る（例えば、Bukhら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90
(1993), 8234-8238）。しかしながらこの遺伝子型決定
の欠点は、増幅段階と配列決定段階とに大変時間がかか
り、またこれを行うために特別に用意した実験室の複雑
な装置を用いてしか行うことができないということであ
る。ＨＣＶ感染においては増幅され得るウイルスの遺伝
物質が極めて少量しかないことが多いので、このような
場合には上記のような状況がより切実である。
【０００６】タイプ決定の別の可能性は血清型で分ける
こと、即ち生物中で生成されたウイルスに対する抗体の
免疫学的特異的によるウイルスタイプの決定である。Si
mmondsらは(J. Clin. Microbiol. 31 (1993), 1493-150
3)、ＨＣＶタイプ１、２及び３による感染の血清学的識
別にタイプ特異的ペプチド抗原を使用することを記載し
ている。タイプ分けは、ＨＣＶのＮＳ４領域の1691−17
08及び1710−1728のアミノ酸領域のペプチド抗原を用い
間接ＥＬＩＳＡにより行なった。この目的のために、タ
イプ特異的ペプチド抗原をそのタイプに従ってマイクロ
タイタープレートの各ウェル中にそれぞれ別々に固定化
し、各々をＨＣＶ感染血液供与者からの血漿試料の別々
のアリコートに接触させた。タイプ分けは、血清試料と
個々のペプチド抗原との反応性に従って行なわれた。し
かしながら、この方法は比較的不正確で、その上個々の
ウイルスのサブタイプ、すなわち免疫原性がわずかに異
なっているにすぎない個々のウイルス株を決定できな
い。
こと、即ち生物中で生成されたウイルスに対する抗体の
免疫学的特異的によるウイルスタイプの決定である。Si
mmondsらは(J. Clin. Microbiol. 31 (1993), 1493-150
3)、ＨＣＶタイプ１、２及び３による感染の血清学的識
別にタイプ特異的ペプチド抗原を使用することを記載し
ている。タイプ分けは、ＨＣＶのＮＳ４領域の1691−17
08及び1710−1728のアミノ酸領域のペプチド抗原を用い
間接ＥＬＩＳＡにより行なった。この目的のために、タ
イプ特異的ペプチド抗原をそのタイプに従ってマイクロ
タイタープレートの各ウェル中にそれぞれ別々に固定化
し、各々をＨＣＶ感染血液供与者からの血漿試料の別々
のアリコートに接触させた。タイプ分けは、血清試料と
個々のペプチド抗原との反応性に従って行なわれた。し
かしながら、この方法は比較的不正確で、その上個々の
ウイルスのサブタイプ、すなわち免疫原性がわずかに異
なっているにすぎない個々のウイルス株を決定できな
い。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的
は、複雑な装置を用いずに日常的に行うことができ、ま
た十分に正確な個々の抗体タイプ間の分類を可能とす
る、抗体をタイプ分けするための新規な方法を提供する
ことである。さらに本発明の目的は、ＨＣＶ感染のタイ
プ分けに適するように高い免疫原性と多様性を同時に有
するＨＣＶゲノムの領域を同定することである。
は、複雑な装置を用いずに日常的に行うことができ、ま
た十分に正確な個々の抗体タイプ間の分類を可能とす
る、抗体をタイプ分けするための新規な方法を提供する
ことである。さらに本発明の目的は、ＨＣＶ感染のタイ
プ分けに適するように高い免疫原性と多様性を同時に有
するＨＣＶゲノムの領域を同定することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】この目的は、タイプ分け
される抗体を含む試料液体の第一アリコートを一連のタ
イプ特異的抗原または抗原混合物に連続的に接触させ、
分別的免疫吸着法(fractional immunosorption method)
により達成される。上記試料液体は任意に試料液体の第
二アリコートまたはそれ以外のアリコートを同様に種々
のタイプ特異的抗原または抗原混合物と接触させてもよ
いが、毎回別の並びで行う。さらに、現状で知られてい
る配列より良好なタイプ分けを可能とするＨＣＶゲノム
の新規な免疫原性ペプチド配列が提供される。
される抗体を含む試料液体の第一アリコートを一連のタ
イプ特異的抗原または抗原混合物に連続的に接触させ、
分別的免疫吸着法(fractional immunosorption method)
により達成される。上記試料液体は任意に試料液体の第
二アリコートまたはそれ以外のアリコートを同様に種々
のタイプ特異的抗原または抗原混合物と接触させてもよ
いが、毎回別の並びで行う。さらに、現状で知られてい
る配列より良好なタイプ分けを可能とするＨＣＶゲノム
の新規な免疫原性ペプチド配列が提供される。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明の第一の形態は、試験液体
中の抗体をタイプ分けする方法であって、(a) 試料液体
の第一のアリコートを、試験される抗体の第一のタイプ
に特異的である第一の固定化抗原またはそれぞれが試験
される抗体の第一のタイプに特異的である第一の固定化
抗原それぞれの混合物に、上記抗原または抗原混合物が
抗体と反応でき、かつ試料液体中の抗体の量が固定化抗
原または抗原混合物の容量を超えない条件下で接触さ
せ、(b) 段階(a) の試料液体を、段階(a) と同様の条件
下で、試験される抗体の第二のタイプに特異的である第
二の固定化抗原または試験される抗体の第二のタイプに
特異的である固定化抗原各々の混合物に接触させ、ここ
で前記第二の抗原または第二の抗原混合物は段階(a) で
使用した第一の抗原または第一の抗原混合物から空間的
に分離されており、(c) 段階(b) による処理を、試験さ
れる抗体の一またはいくつかの別のタイプに特異的な一
またはいくつかの別の抗原または抗原混合物を用いて任
意に繰り返し、ここで前記別の抗原または抗原混合物は
前の段階で使用した抗原または抗原混合物からそれぞれ
空間的に分離されているものであり、(d) 試料液体の第
二のアリコートを、段階(a) から(c) に従って、但し抗
原または抗原混合物の並びが異なるようにして、いくつ
かの固定化抗原または抗原混合物に任意に接触させ、
(e) 固定化抗原または抗原混合物の試料液体との免疫学
的反応性をそれぞれ定性的にまたは／及び定量的に測定
し、(f) 試料液体中に存在する抗体のタイプ分けを反応
性測定に基づいて行うことを特徴とする前記方法であ
る。
中の抗体をタイプ分けする方法であって、(a) 試料液体
の第一のアリコートを、試験される抗体の第一のタイプ
に特異的である第一の固定化抗原またはそれぞれが試験
される抗体の第一のタイプに特異的である第一の固定化
抗原それぞれの混合物に、上記抗原または抗原混合物が
抗体と反応でき、かつ試料液体中の抗体の量が固定化抗
原または抗原混合物の容量を超えない条件下で接触さ
せ、(b) 段階(a) の試料液体を、段階(a) と同様の条件
下で、試験される抗体の第二のタイプに特異的である第
二の固定化抗原または試験される抗体の第二のタイプに
特異的である固定化抗原各々の混合物に接触させ、ここ
で前記第二の抗原または第二の抗原混合物は段階(a) で
使用した第一の抗原または第一の抗原混合物から空間的
に分離されており、(c) 段階(b) による処理を、試験さ
れる抗体の一またはいくつかの別のタイプに特異的な一
またはいくつかの別の抗原または抗原混合物を用いて任
意に繰り返し、ここで前記別の抗原または抗原混合物は
前の段階で使用した抗原または抗原混合物からそれぞれ
空間的に分離されているものであり、(d) 試料液体の第
二のアリコートを、段階(a) から(c) に従って、但し抗
原または抗原混合物の並びが異なるようにして、いくつ
かの固定化抗原または抗原混合物に任意に接触させ、
(e) 固定化抗原または抗原混合物の試料液体との免疫学
的反応性をそれぞれ定性的にまたは／及び定量的に測定
し、(f) 試料液体中に存在する抗体のタイプ分けを反応
性測定に基づいて行うことを特徴とする前記方法であ
る。
【００１０】いかなる抗体、例えば病原体または自己免
疫抗原に対する抗体もタイプ分けの対象として試験する
ことができる。抗体のタイプ分けにより、生物が接触し
て抗体の生成を引き起こす抗原のタイプ分けが可能とな
る。一またはいくつかの病原体に対する抗体、特にウイ
ルス抗原に対する抗体をタイプ分けすることが好まし
い。ウイルス性抗原が得られるウイルスの例としては、
ＨＣＶ，ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）、Ｂ型肝炎ウイ
ルス（ＨＢＶ）及びＨＩＶがある。本方法は、共存する
いくつかのウイルスの感染、例えば、ＨＣＶとＨＩＶな
どの同時検出にも使用できる。
疫抗原に対する抗体もタイプ分けの対象として試験する
ことができる。抗体のタイプ分けにより、生物が接触し
て抗体の生成を引き起こす抗原のタイプ分けが可能とな
る。一またはいくつかの病原体に対する抗体、特にウイ
ルス抗原に対する抗体をタイプ分けすることが好まし
い。ウイルス性抗原が得られるウイルスの例としては、
ＨＣＶ，ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）、Ｂ型肝炎ウイ
ルス（ＨＢＶ）及びＨＩＶがある。本方法は、共存する
いくつかのウイルスの感染、例えば、ＨＣＶとＨＩＶな
どの同時検出にも使用できる。
【００１１】本発明の方法の応用は、毒力やインターフ
ェロン治療に対する反応が個々のウイルスタイプやサブ
タイプ間で異なるため、ＨＣＶ感染をタイプ分けするた
めに特に重要である。しかし本方法は、個々のウイルス
単離物の起源を決定するため、あるいはサブタイプ（例
えば、ＨＩＶの場合はサブタイプ０）を同定するため
に、ＨＩＶのような他のウイルスに対しても効果的に使
用できる。
ェロン治療に対する反応が個々のウイルスタイプやサブ
タイプ間で異なるため、ＨＣＶ感染をタイプ分けするた
めに特に重要である。しかし本方法は、個々のウイルス
単離物の起源を決定するため、あるいはサブタイプ（例
えば、ＨＩＶの場合はサブタイプ０）を同定するため
に、ＨＩＶのような他のウイルスに対しても効果的に使
用できる。
【００１２】本発明の方法では、例えば任意に希釈した
血液、血漿、血清または尿などの体液である試料液体の
アリコートを連続的にいくつかの固定化したタイプ特異
的抗原または抗原混合物と接触させ、それぞれの抗原ま
たは抗原混合物と反応できる抗体を段階的に吸着させ、
それにより試料液体からのそれらを段階的に除去できる
ようにする。好ましくは、試料液体の一またはいくつか
の別のアリコートを同時に、第一のアリコートとは異な
る並びで固定化した抗原または抗原混合物に接触させ
る。試料液体の２つのアリコートを使用する場合は、好
ましくは第二のアリコートを第一のアリコートとは逆の
順序で固定化抗原または抗原混合物と接触させる。
血液、血漿、血清または尿などの体液である試料液体の
アリコートを連続的にいくつかの固定化したタイプ特異
的抗原または抗原混合物と接触させ、それぞれの抗原ま
たは抗原混合物と反応できる抗体を段階的に吸着させ、
それにより試料液体からのそれらを段階的に除去できる
ようにする。好ましくは、試料液体の一またはいくつか
の別のアリコートを同時に、第一のアリコートとは異な
る並びで固定化した抗原または抗原混合物に接触させ
る。試料液体の２つのアリコートを使用する場合は、好
ましくは第二のアリコートを第一のアリコートとは逆の
順序で固定化抗原または抗原混合物と接触させる。
【００１３】それぞれの抗原に対して一つの抗体をでき
るだけ定量的に吸着させるために、試料液体中の抗体の
量は、固定化抗原の容量を超えてはならない。これは試
料液体を適当に希釈するという簡単な方法で達成でき
る。いくつかの異なったタイプ特異的固定化抗原または
抗原混合物を使用した連続的な吸着段階により、本発明
による方法は分別的免疫吸着となる。
るだけ定量的に吸着させるために、試料液体中の抗体の
量は、固定化抗原の容量を超えてはならない。これは試
料液体を適当に希釈するという簡単な方法で達成でき
る。いくつかの異なったタイプ特異的固定化抗原または
抗原混合物を使用した連続的な吸着段階により、本発明
による方法は分別的免疫吸着となる。
【００１４】好ましくは、タイプ特異的抗原混合物を本
発明による方法の個々の吸着段階で使用する。タイプ特
異的抗原混合物は、分類される一つの抗原のタイプ内の
個々の変種の同じ領域から得られ、かつ分類される他の
抗体タイプと比較して互いに僅かな差違のみを有する抗
原の混合物、または／及び同一抗原タイプの異なった領
域から得た抗原の混合物である。
発明による方法の個々の吸着段階で使用する。タイプ特
異的抗原混合物は、分類される一つの抗原のタイプ内の
個々の変種の同じ領域から得られ、かつ分類される他の
抗体タイプと比較して互いに僅かな差違のみを有する抗
原の混合物、または／及び同一抗原タイプの異なった領
域から得た抗原の混合物である。
【００１５】試料液体を接触させる固定化タイプ特異的
抗原は、それらと反応できる抗体のタイプ分けを可能に
するものである限り、いかなる抗原であってもよい。上
記抗原は、好ましくは少くとも６アミノ酸からなる免疫
学的に活性な領域を含んでいるペプチド配列である。免
疫学的に活性な領域は、好ましくは最長30アミノ酸を有
し、特に好ましくは９〜20アミノ酸を有する。
抗原は、それらと反応できる抗体のタイプ分けを可能に
するものである限り、いかなる抗原であってもよい。上
記抗原は、好ましくは少くとも６アミノ酸からなる免疫
学的に活性な領域を含んでいるペプチド配列である。免
疫学的に活性な領域は、好ましくは最長30アミノ酸を有
し、特に好ましくは９〜20アミノ酸を有する。
【００１６】免疫学的に活性な領域に加えて、前記ペプ
チドは好ましくはスペーサー領域も含むことができ、こ
れは、例えばそれを他の免疫学的に活性な領域に結合す
るため、もしくはキャリヤーに結合するため、及び／ま
たはマーカー基もしくは固相結合基に結合するために使
用することができる。スペーサー領域は、好ましくは１
〜10のアミノ酸長を有する免疫学的に不活性なペプチド
配列である。スペーサー領域のアミノ酸は、好ましくは
天然または合成のアミノ酸から選択され、特に、グリシ
ン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、ε−アミノカプロ
ン酸及びリシンからなる群から選択される。スペーサー
領域は、好ましくは免疫学的に活性なエピトープ領域の
アミノ末端及び／またはカルボキシ末端における連続し
たアミノ酸配列である。
チドは好ましくはスペーサー領域も含むことができ、こ
れは、例えばそれを他の免疫学的に活性な領域に結合す
るため、もしくはキャリヤーに結合するため、及び／ま
たはマーカー基もしくは固相結合基に結合するために使
用することができる。スペーサー領域は、好ましくは１
〜10のアミノ酸長を有する免疫学的に不活性なペプチド
配列である。スペーサー領域のアミノ酸は、好ましくは
天然または合成のアミノ酸から選択され、特に、グリシ
ン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、ε−アミノカプロ
ン酸及びリシンからなる群から選択される。スペーサー
領域は、好ましくは免疫学的に活性なエピトープ領域の
アミノ末端及び／またはカルボキシ末端における連続し
たアミノ酸配列である。
【００１７】固定化抗原は、いかなる固相、たとえば、
反応容器の壁または／および底、カラムあるいは微粒子
固相に結合させてもよい。マイクロタイタープレートの
上に固定された抗原が特に好ましく使用される。固相上
での抗原の固定化は、任意の方法により行うことができ
る。本発明の方法の好ましい態様においては、抗原は固
相結合基を有し、これを介して親和性相互作用により反
応性固相に結合される。固相結合基は、好ましくはビオ
チン、あるいはイミノビオチンもしくはデスチオビオチ
ンなどのビオチン誘導体から選択され、これらはストレ
プトアビジンもしくはアビジンで被覆された固相に結合
することができる。適当な固相結合基の他の例は、ジニ
トロフェノール、ジゴキシン、ジゴキシゲニン等のハプ
テンであり、これらはハプテン特異的抗体で被覆した固
相に結合することができる。
反応容器の壁または／および底、カラムあるいは微粒子
固相に結合させてもよい。マイクロタイタープレートの
上に固定された抗原が特に好ましく使用される。固相上
での抗原の固定化は、任意の方法により行うことができ
る。本発明の方法の好ましい態様においては、抗原は固
相結合基を有し、これを介して親和性相互作用により反
応性固相に結合される。固相結合基は、好ましくはビオ
チン、あるいはイミノビオチンもしくはデスチオビオチ
ンなどのビオチン誘導体から選択され、これらはストレ
プトアビジンもしくはアビジンで被覆された固相に結合
することができる。適当な固相結合基の他の例は、ジニ
トロフェノール、ジゴキシン、ジゴキシゲニン等のハプ
テンであり、これらはハプテン特異的抗体で被覆した固
相に結合することができる。
【００１８】上記抗原はまた、例えば二官能性スペーサ
ーを介して固相に共有結合により結合することができ
る。上記抗原はさらに、吸着により固相に結合されるキ
ャリヤーに接合されて存在してもよい。適当なキャリヤ
ーの例は、ウシ血清アルブミンなどのタンパク質分子で
ある。抗原、特に固相の上のペプチド抗原のための他の
固定化方法は、当業者に知られており、そのためより詳
細に記載する必要はないであろう。
ーを介して固相に共有結合により結合することができ
る。上記抗原はさらに、吸着により固相に結合されるキ
ャリヤーに接合されて存在してもよい。適当なキャリヤ
ーの例は、ウシ血清アルブミンなどのタンパク質分子で
ある。抗原、特に固相の上のペプチド抗原のための他の
固定化方法は、当業者に知られており、そのためより詳
細に記載する必要はないであろう。
【００１９】固定化抗原を含む試料中に存在する抗体の
反応性の定性的または／及び定量的な測定は、いかなる
公知の方法によっても行うことができ、例えば試料液体
からの抗体を種特異的に認識できる標識第二抗体（例え
ばヤギ抗ヒト抗体）とインキュベートすることにより行
うことができる。上記抗体は、反応性の測定に基づいて
タイプ分けされる。非常に類似した抗原（例えばウイル
スのサブタイプ）に対する抗体をタイプ分けしようとす
る場合は、試料液体の別のアリコートを第一のアリコー
トのものとは異なる順序で固定化抗原または抗原混合物
に接触させることが好ましい（本発明の方法の(d) 段
階) 。その後、両方の試験方向において同じサブタイプ
であるという結果が得られた場合、明確な区別が得られ
る。
反応性の定性的または／及び定量的な測定は、いかなる
公知の方法によっても行うことができ、例えば試料液体
からの抗体を種特異的に認識できる標識第二抗体（例え
ばヤギ抗ヒト抗体）とインキュベートすることにより行
うことができる。上記抗体は、反応性の測定に基づいて
タイプ分けされる。非常に類似した抗原（例えばウイル
スのサブタイプ）に対する抗体をタイプ分けしようとす
る場合は、試料液体の別のアリコートを第一のアリコー
トのものとは異なる順序で固定化抗原または抗原混合物
に接触させることが好ましい（本発明の方法の(d) 段
階) 。その後、両方の試験方向において同じサブタイプ
であるという結果が得られた場合、明確な区別が得られ
る。
【００２０】本発明の分別的免疫吸着方法は、ストレプ
トアビジンで被覆されていない別々のＥＬＩＳＡプレー
トで行われる異種タイプのペプチドと異なる血清をプレ
インキュベーションする現状の方法と比較して、大幅な
時間の節約、試料材料、反応容器、抗原及びインキュベ
ーション緩衝液の節約を可能とする。さらにこの新規な
方法は、この方法においてさらに追加の試料材料を使用
することなく試料材料のプレインキュベーションするこ
との利点とともに、二重検定の利点を併せ持つ。
トアビジンで被覆されていない別々のＥＬＩＳＡプレー
トで行われる異種タイプのペプチドと異なる血清をプレ
インキュベーションする現状の方法と比較して、大幅な
時間の節約、試料材料、反応容器、抗原及びインキュベ
ーション緩衝液の節約を可能とする。さらにこの新規な
方法は、この方法においてさらに追加の試料材料を使用
することなく試料材料のプレインキュベーションするこ
との利点とともに、二重検定の利点を併せ持つ。
【００２１】本発明の方法は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣ
Ｖ) に対する抗体をタイプ分けするために特に適してい
る。このタイプ分けには、２つの前提条件、即ち、免疫
原性作用、つまりこれらの配列に対する抗体の形成を生
じさせる能力と、それに加えて個々のウイルス単離物を
識別できるための基礎となる個々のウイルスタイプまた
はウイルスサブタイプにおける可変性とを満たす抗原が
必要とされる。
Ｖ) に対する抗体をタイプ分けするために特に適してい
る。このタイプ分けには、２つの前提条件、即ち、免疫
原性作用、つまりこれらの配列に対する抗体の形成を生
じさせる能力と、それに加えて個々のウイルス単離物を
識別できるための基礎となる個々のウイルスタイプまた
はウイルスサブタイプにおける可変性とを満たす抗原が
必要とされる。
【００２２】驚くべきことに、この２つの要件を極めて
うまく充足するペプチド配列がＨＣＶのゲノムから同定
された。これらのペプチド配列は、Ｃ型肝炎ウイルスに
対する抗体を決定する方法のためのペプチド抗原の製造
に適している。それゆえ、本発明のさらに別の主題は、
(a) アミノ酸384−414、(b) アミノ酸1738−1759、(c)
アミノ酸2217−2236、(d) アミノ酸2402−2419、(e) ア
ミノ酸2345−2357及び少くとも６アミノ酸長を有するそ
の部分的な配列から選択されるＣ型肝炎ウイルスからの
免疫学的に活性な領域を少なくとも一つ含むぺプチドで
ある。ここでアミノ酸残基の番号はEP-A-0 450 931の図
１に依る。
うまく充足するペプチド配列がＨＣＶのゲノムから同定
された。これらのペプチド配列は、Ｃ型肝炎ウイルスに
対する抗体を決定する方法のためのペプチド抗原の製造
に適している。それゆえ、本発明のさらに別の主題は、
(a) アミノ酸384−414、(b) アミノ酸1738−1759、(c)
アミノ酸2217−2236、(d) アミノ酸2402−2419、(e) ア
ミノ酸2345−2357及び少くとも６アミノ酸長を有するそ
の部分的な配列から選択されるＣ型肝炎ウイルスからの
免疫学的に活性な領域を少なくとも一つ含むぺプチドで
ある。ここでアミノ酸残基の番号はEP-A-0 450 931の図
１に依る。
【００２３】本発明のペプチドは、EP-A-0 450 931に記
載されるヌクレオチド配列を有するＨＣＶ単離物からの
ものなど、いかなるＨＣＶ単離物からのものであってよ
い。ペプチドが高頻度可変領域に位置するアミノ酸領域
384-414 に由来する場合は、免疫学的に活性な領域は好
ましくは、(a) 配列番号１〜10に示したアミノ酸配列、
（b) (a)の配列の１つに対して少なくとも90% の相同性
を有するアミノ酸配列、または(c) 少なくとも６アミノ
酸長を有する(a) もしくは(b) の部分配列から選択され
る。
載されるヌクレオチド配列を有するＨＣＶ単離物からの
ものなど、いかなるＨＣＶ単離物からのものであってよ
い。ペプチドが高頻度可変領域に位置するアミノ酸領域
384-414 に由来する場合は、免疫学的に活性な領域は好
ましくは、(a) 配列番号１〜10に示したアミノ酸配列、
（b) (a)の配列の１つに対して少なくとも90% の相同性
を有するアミノ酸配列、または(c) 少なくとも６アミノ
酸長を有する(a) もしくは(b) の部分配列から選択され
る。
【００２４】「相同性」の用語は、本出願の意味の範囲
内では、比較されるアミノ酸配列中の同一のアミノ酸の
数を、これら２つの配列の一方の全アミノ酸の数で割っ
たときに得られるパーセンテージの値として理解され
る。配列プロトコールの配列番号１〜３は、タイプ1aの
ウイルス単離物の高頻度可変領域からのＨＣＶ配列を示
す。配列番号４〜６は、タイプ1bのウイルス単離物の配
列を示す。配列番号７は、タイプ2aのウイルス単離物の
配列を示す。配列番号８及び９は、タイプ2bのウイルス
単離物の配列を示す。配列番号１〜10は、台湾から得ら
れたウイルス単離物の配列を示す。
内では、比較されるアミノ酸配列中の同一のアミノ酸の
数を、これら２つの配列の一方の全アミノ酸の数で割っ
たときに得られるパーセンテージの値として理解され
る。配列プロトコールの配列番号１〜３は、タイプ1aの
ウイルス単離物の高頻度可変領域からのＨＣＶ配列を示
す。配列番号４〜６は、タイプ1bのウイルス単離物の配
列を示す。配列番号７は、タイプ2aのウイルス単離物の
配列を示す。配列番号８及び９は、タイプ2bのウイルス
単離物の配列を示す。配列番号１〜10は、台湾から得ら
れたウイルス単離物の配列を示す。
【００２５】さらに、前記ペプチドの免疫学的に活性な
領域は、NS4 領域中のアミノ酸1738-1759 、特に配列番
号11〜16に示されるアミノ酸配列、（b) (a)の配列の１
つに対して少なくとも90% の相同性を有するアミノ酸配
列、または(c) 少なくとも６アミノ酸長を有する(a) も
しくは(b) の配列の部分配列から選択することができ
る。配列番号11と12は、タイプ1aのウイルス単離物の配
列を示す。配列番号13は、タイプ1bのウイルス単離物の
配列を示す。配列番号14は、タイプ2aのウイルス単離物
の配列を示す。配列番号15は、タイプ2bのウイルス単離
物の配列を示す。配列番号16は、台湾から得られたウイ
ルス単離物の配列を示す。
領域は、NS4 領域中のアミノ酸1738-1759 、特に配列番
号11〜16に示されるアミノ酸配列、（b) (a)の配列の１
つに対して少なくとも90% の相同性を有するアミノ酸配
列、または(c) 少なくとも６アミノ酸長を有する(a) も
しくは(b) の配列の部分配列から選択することができ
る。配列番号11と12は、タイプ1aのウイルス単離物の配
列を示す。配列番号13は、タイプ1bのウイルス単離物の
配列を示す。配列番号14は、タイプ2aのウイルス単離物
の配列を示す。配列番号15は、タイプ2bのウイルス単離
物の配列を示す。配列番号16は、台湾から得られたウイ
ルス単離物の配列を示す。
【００２６】ペプチドがNS5 領域中のアミノ酸2217-223
6 に由来する場合は、その免疫学的に活性な領域は好ま
しくは、(a) 配列番号17〜22に示されるアミノ酸配列、
(b)(a) の配列の１つに対して少なくとも90% の相同性
を有するアミノ酸配列、または(c) 少なくとも６アミノ
酸長を有する(a) もしくは(b) からの配列の部分配列か
ら選択される。配列番号17は、タイプ1aのウイルス単離
物の配列を示す。配列番号18及び19は、タイプ1bのウイ
ルス単離物の配列を示す。配列番号20は、タイプ2aのウ
イルス単離物の配列を示す。配列番号21は、タイプ2bの
ウイルス単離物の配列を示す。配列番号22は、台湾から
得られたウイルス単離物の配列を示す。
6 に由来する場合は、その免疫学的に活性な領域は好ま
しくは、(a) 配列番号17〜22に示されるアミノ酸配列、
(b)(a) の配列の１つに対して少なくとも90% の相同性
を有するアミノ酸配列、または(c) 少なくとも６アミノ
酸長を有する(a) もしくは(b) からの配列の部分配列か
ら選択される。配列番号17は、タイプ1aのウイルス単離
物の配列を示す。配列番号18及び19は、タイプ1bのウイ
ルス単離物の配列を示す。配列番号20は、タイプ2aのウ
イルス単離物の配列を示す。配列番号21は、タイプ2bの
ウイルス単離物の配列を示す。配列番号22は、台湾から
得られたウイルス単離物の配列を示す。
【００２７】ペプチドがNS5 領域中のアミノ酸2402-241
9 に由来する場合は、その免疫学的に活性な領域は、好
ましくは、(a) 配列番号23〜24に示されるアミノ酸配
列、（b) (a)の配列の１つに対して少なくとも90% の相
同性を有するアミノ酸配列、または(c) 少なくとも６ア
ミノ酸長を有する(a) または(b) の配列の部分配列から
選択される。配列番号23〜24は、タイプ2a及び2bのウイ
ルス単離物の配列を示す。
9 に由来する場合は、その免疫学的に活性な領域は、好
ましくは、(a) 配列番号23〜24に示されるアミノ酸配
列、（b) (a)の配列の１つに対して少なくとも90% の相
同性を有するアミノ酸配列、または(c) 少なくとも６ア
ミノ酸長を有する(a) または(b) の配列の部分配列から
選択される。配列番号23〜24は、タイプ2a及び2bのウイ
ルス単離物の配列を示す。
【００２８】ペプチドがNS5 領域の中のアミノ酸2345-2
357 に由来する場合は、その免疫学的に活性な領域は、
好ましくは、(a) 配列番号25〜30に示されるアミノ酸配
列、(b) (a) の配列の１つに対して少なくとも90% の相
同性を有するアミノ酸配列、または(c) 少なくとも６ア
ミノ酸長を有する(a) もしくは(b) の配列の部分配列か
ら選択される。配列番号25及び26は、タイプ1aのウイル
ス単離物の配列を示す。配列番号27は、タイプ1bのウイ
ルス単離物の配列を示す。配列番号28及び29は、タイプ
2a及び2bのウイルス単離物の配列を示す。配列番号30
は、台湾から得られたウイルス単離物の配列を示す。
357 に由来する場合は、その免疫学的に活性な領域は、
好ましくは、(a) 配列番号25〜30に示されるアミノ酸配
列、(b) (a) の配列の１つに対して少なくとも90% の相
同性を有するアミノ酸配列、または(c) 少なくとも６ア
ミノ酸長を有する(a) もしくは(b) の配列の部分配列か
ら選択される。配列番号25及び26は、タイプ1aのウイル
ス単離物の配列を示す。配列番号27は、タイプ1bのウイ
ルス単離物の配列を示す。配列番号28及び29は、タイプ
2a及び2bのウイルス単離物の配列を示す。配列番号30
は、台湾から得られたウイルス単離物の配列を示す。
【００２９】前記ペプチドの免疫学的に活性な領域は、
好ましくは最長で30アミノ酸、特に好ましくは９〜20ア
ミノ酸長を有する。前記ペプチドはまた、免疫学的に活
性なＨＣＶペプチド領域に加えて上記に定義した免疫学
的に不活性なスペーサー領域を含んでいてもよい。さら
に本発明のペプチドは、好ましくはビオチン及びビオチ
ン誘導体から選択される少なくとも１つの固相結合基を
有していてもよい。しかし、前記ペプチドはまた、マー
カー基を有していてもよい。マーカー基はいかなる放射
性または非放射性マーカー基であってもよい。好ましい
非放射性マーカー基は、直接または／及び間接的に検出
可能なものであってよい。直接検出可能な標識の場合、
検出可能な測定信号を生成する基は直接ペプチド抗原の
上に位置する。そのような直接の信号生成基の例は、ク
ロモゲン（螢光性または発光性基、染料）、酵素、NMR-
活性基または金属粒子であり、これらは公知の方法でペ
プチド抗原に結合される。直接検出可能なマーカー基
は、好ましくは電気化学発光により直接検出される金属
錯体であり、特に好ましくはルテニウム錯体である。適
当な金属錯体は、例えばEP-A-0 580 979、WO90/05301、
WO90/11511及びWO92/14138に記載されている。これによ
りこれらの文書を本明細書に引用したものとする。
好ましくは最長で30アミノ酸、特に好ましくは９〜20ア
ミノ酸長を有する。前記ペプチドはまた、免疫学的に活
性なＨＣＶペプチド領域に加えて上記に定義した免疫学
的に不活性なスペーサー領域を含んでいてもよい。さら
に本発明のペプチドは、好ましくはビオチン及びビオチ
ン誘導体から選択される少なくとも１つの固相結合基を
有していてもよい。しかし、前記ペプチドはまた、マー
カー基を有していてもよい。マーカー基はいかなる放射
性または非放射性マーカー基であってもよい。好ましい
非放射性マーカー基は、直接または／及び間接的に検出
可能なものであってよい。直接検出可能な標識の場合、
検出可能な測定信号を生成する基は直接ペプチド抗原の
上に位置する。そのような直接の信号生成基の例は、ク
ロモゲン（螢光性または発光性基、染料）、酵素、NMR-
活性基または金属粒子であり、これらは公知の方法でペ
プチド抗原に結合される。直接検出可能なマーカー基
は、好ましくは電気化学発光により直接検出される金属
錯体であり、特に好ましくはルテニウム錯体である。適
当な金属錯体は、例えばEP-A-0 580 979、WO90/05301、
WO90/11511及びWO92/14138に記載されている。これによ
りこれらの文書を本明細書に引用したものとする。
【００３０】もう一つの種類の標識は、間接的に検出可
能な標識である。このタイプの標識においては、ペプチ
ド抗原は、間接的に検出可能な基、例えば信号発生基を
有する適当な結合相手（例えば抗ハプテン抗体）との反
応により検出可能なハプテン基に結合される。上記の新
規ペプチドは、Ｃ型肝炎ウイルスに対する抗体を測定す
るための方法に使用することができる。一方これらは、
ＨＣＶ感染を検出する診断方法、例えば、ペプチドP1が
(a)固相に結合し、あるいは(b) 固相に結合できる形態
で存在し、ペプチドP2がマーカー基を有する、少なくと
も２つのペプチドP1及びP2と試料液体をインキュベート
する二重抗原ブリッジ試験において抗原として使用する
ことができる。試料液体中の抗体は、固相または／及び
液相中で、好ましくは固相中で、固定化免疫複合体によ
ってその標識を測定することにより検出される。ＨＣＶ
のいろいろなタイプまたはサブタイプのペプチド混合物
をＨＣＶ感染を検出するためのそのような方法に抗原と
して使用すると、ＨＣＶのタイプまたはサブタイプに関
係なくＨＣＶ感染を明確に検出することができる。
能な標識である。このタイプの標識においては、ペプチ
ド抗原は、間接的に検出可能な基、例えば信号発生基を
有する適当な結合相手（例えば抗ハプテン抗体）との反
応により検出可能なハプテン基に結合される。上記の新
規ペプチドは、Ｃ型肝炎ウイルスに対する抗体を測定す
るための方法に使用することができる。一方これらは、
ＨＣＶ感染を検出する診断方法、例えば、ペプチドP1が
(a)固相に結合し、あるいは(b) 固相に結合できる形態
で存在し、ペプチドP2がマーカー基を有する、少なくと
も２つのペプチドP1及びP2と試料液体をインキュベート
する二重抗原ブリッジ試験において抗原として使用する
ことができる。試料液体中の抗体は、固相または／及び
液相中で、好ましくは固相中で、固定化免疫複合体によ
ってその標識を測定することにより検出される。ＨＣＶ
のいろいろなタイプまたはサブタイプのペプチド混合物
をＨＣＶ感染を検出するためのそのような方法に抗原と
して使用すると、ＨＣＶのタイプまたはサブタイプに関
係なくＨＣＶ感染を明確に検出することができる。
【００３１】一方、本発明のペプチドは、タイプ分けを
好ましくは分別的な免疫吸着方法によって行う、ＨＣＶ
に対する抗体をタイプ分けするための方法にも使用する
ことができる。この場合、分別的な免疫吸着方法による
ＨＣＶ抗体のタイプ分けは、上記のペプチドを使用して
行うことができるだけでなく、ＨＣＶゲノムのその他の
配列領域からのペプチド、例えば実施例２で述べたペプ
チドまたは少なくとも６アミノ酸長を有するその部分的
配列もこの方法で使用するのに適している。
好ましくは分別的な免疫吸着方法によって行う、ＨＣＶ
に対する抗体をタイプ分けするための方法にも使用する
ことができる。この場合、分別的な免疫吸着方法による
ＨＣＶ抗体のタイプ分けは、上記のペプチドを使用して
行うことができるだけでなく、ＨＣＶゲノムのその他の
配列領域からのペプチド、例えば実施例２で述べたペプ
チドまたは少なくとも６アミノ酸長を有するその部分的
配列もこの方法で使用するのに適している。
【００３２】さらに以下の実施例、図面、及び配列表に
より本発明の方法を説明するものである。配列番号１〜
10は、アミノ酸384-414の領域におけるいろいろなＣ型
肝炎ウイルス単離物のアミノ酸配列を示す。配列番号11
〜16は、アミノ酸1738-1759の領域におけるいろいろな
Ｃ型肝炎ウイルス単離物のアミノ酸配列を示す。
より本発明の方法を説明するものである。配列番号１〜
10は、アミノ酸384-414の領域におけるいろいろなＣ型
肝炎ウイルス単離物のアミノ酸配列を示す。配列番号11
〜16は、アミノ酸1738-1759の領域におけるいろいろな
Ｃ型肝炎ウイルス単離物のアミノ酸配列を示す。
【００３３】配列番号17〜22は、アミノ酸配列2217-223
6の領域におけるいろいろなＣ型肝炎ウイルス単離物の
アミノ酸配列を示す。配列番号23〜24は、アミノ酸配列
2402-2419からのいろいろなＣ型肝炎ウイルス単離物の
アミノ酸配列を示す。配列番号25〜30は、アミノ酸2345
-2357の領域からのいろいろなＣ型肝炎ウイルス単離物
のアミノ酸配列を示す。
6の領域におけるいろいろなＣ型肝炎ウイルス単離物の
アミノ酸配列を示す。配列番号23〜24は、アミノ酸配列
2402-2419からのいろいろなＣ型肝炎ウイルス単離物の
アミノ酸配列を示す。配列番号25〜30は、アミノ酸2345
-2357の領域からのいろいろなＣ型肝炎ウイルス単離物
のアミノ酸配列を示す。
【００３４】
【実施例】実施例１ ＨＣＶポリタンパク質の５つの異なる領域からのビオチ
ンペプチドアミドの合成及びＨＣＶ血清をタイプ分けす
るためのそれらの使用合成された部分的な領域を、それ
らの各々の領域のタイプ1a、1b、2a、2b及び台湾(1b に
属する) の単離物の間のわずかな配列の相同性によって
区別でき、それにより合成ペプチドをそれぞれのＨＣＶ
タイプに対応する血清学的タイプ分けに使用することが
できるような方法で選択した。さらに、適当な領域のタ
イプオーバーラップ合成により、従来常に基準とされて
いたEP-A-0 450 931に従ってＨＣＶ- 1 単離物に属さな
いペプチドを試験することで、ＨＣＶ診断にある認識ギ
ャップを閉じることが可能となる。
ンペプチドアミドの合成及びＨＣＶ血清をタイプ分けす
るためのそれらの使用合成された部分的な領域を、それ
らの各々の領域のタイプ1a、1b、2a、2b及び台湾(1b に
属する) の単離物の間のわずかな配列の相同性によって
区別でき、それにより合成ペプチドをそれぞれのＨＣＶ
タイプに対応する血清学的タイプ分けに使用することが
できるような方法で選択した。さらに、適当な領域のタ
イプオーバーラップ合成により、従来常に基準とされて
いたEP-A-0 450 931に従ってＨＣＶ- 1 単離物に属さな
いペプチドを試験することで、ＨＣＶ診断にある認識ギ
ャップを閉じることが可能となる。
【００３５】一定のＨＣＶ単離物の配列において、他の
単離物と比較して挿入または欠失がある領域及び部分的
に高度なアミノ酸置換を有する高頻度可変領域並びにを
特別な領域として選択した。試験方法 24の血清を試験し、ＥＬＩＳＡ試験を以下のように行っ
た。 1.）ストレプトアビジンＥＬＩＳＡプレートを100μl
のペプチド溶液（濃度50ng/100 μl)で１時間被覆し、 2.) 0.05% トゥイーン20/PBSで３回洗浄し、 3.) 100 μl の血清 (1:100 に希釈) と１時間インキュ
ベートし、 4.) 0.05% トゥイーン20/PBSで３回洗浄し、 5.) 150 μl の標識第２抗体（ヤギ抗ヒト抗体−ペルオ
キシダーゼ接合体、1:10000希釈）と１時間インキュベ
ートし、 6.）ABTS（登録商標）呈色反応を１時間行い、 7.）ODを測定する（ＨＣＶの検出は200 mOD を越えたと
きに陽性）。ＨＣＶポリタンパク質の異なる領域からの
以下のビオチンペプチドアミドを、24の血清に対して試
験した。 1. E2/NS1領域（高頻度可変領域）[AA 384-414]: 配列
番号１〜10のペプチド。 2. NS4領域[AA 1738-1759]：配列番号11〜16のペプチ
ド。 3. NS5領域[AA 2217-2236 、欠失]:配列番号17〜22の
ペプチド。 4. NS5領域[AA 2402-2419 、挿入]:配列番号23〜24の
ペプチド。 5. NS5領域[AA 2345-2357 、欠失]:配列番号25〜30の
ペプチド。結果 ：試験したペプチド（配列番号１〜30）は、ＨＣＶ
−陽性血清をタイプ分けするのに適当であることが判明
した。前記高頻度可変領域からのペプチドは、技術の現
状から知られるペプチド(Simmonds ら, J. Clin. Micro
biol. 31 (1993), 1493-1503) よりも特に優れていた。実施例２ 分別的免疫吸着法を使用したＨＣＶ血清の血清学的タイ
プ分け 分別的免疫吸着に基づく、ＨＣＶ血清をタイプ分けする
ための新規な方法が開発された。
単離物と比較して挿入または欠失がある領域及び部分的
に高度なアミノ酸置換を有する高頻度可変領域並びにを
特別な領域として選択した。試験方法 24の血清を試験し、ＥＬＩＳＡ試験を以下のように行っ
た。 1.）ストレプトアビジンＥＬＩＳＡプレートを100μl
のペプチド溶液（濃度50ng/100 μl)で１時間被覆し、 2.) 0.05% トゥイーン20/PBSで３回洗浄し、 3.) 100 μl の血清 (1:100 に希釈) と１時間インキュ
ベートし、 4.) 0.05% トゥイーン20/PBSで３回洗浄し、 5.) 150 μl の標識第２抗体（ヤギ抗ヒト抗体−ペルオ
キシダーゼ接合体、1:10000希釈）と１時間インキュベ
ートし、 6.）ABTS（登録商標）呈色反応を１時間行い、 7.）ODを測定する（ＨＣＶの検出は200 mOD を越えたと
きに陽性）。ＨＣＶポリタンパク質の異なる領域からの
以下のビオチンペプチドアミドを、24の血清に対して試
験した。 1. E2/NS1領域（高頻度可変領域）[AA 384-414]: 配列
番号１〜10のペプチド。 2. NS4領域[AA 1738-1759]：配列番号11〜16のペプチ
ド。 3. NS5領域[AA 2217-2236 、欠失]:配列番号17〜22の
ペプチド。 4. NS5領域[AA 2402-2419 、挿入]:配列番号23〜24の
ペプチド。 5. NS5領域[AA 2345-2357 、欠失]:配列番号25〜30の
ペプチド。結果 ：試験したペプチド（配列番号１〜30）は、ＨＣＶ
−陽性血清をタイプ分けするのに適当であることが判明
した。前記高頻度可変領域からのペプチドは、技術の現
状から知られるペプチド(Simmonds ら, J. Clin. Micro
biol. 31 (1993), 1493-1503) よりも特に優れていた。実施例２ 分別的免疫吸着法を使用したＨＣＶ血清の血清学的タイ
プ分け 分別的免疫吸着に基づく、ＨＣＶ血清をタイプ分けする
ための新規な方法が開発された。
【００３６】タイプ分けは、サブタイプ特異的ビオチン
ペプチドアミドを含むだけのペプチド混合物 M-1a：タイプ1aのペプチドのみを含む M-1b：タイプ1bのペプチドのみを含む M-2a：タイプ2aのペプチドのみを含む M-2b：タイプ2bのペプチドのみを含む を使用して行った。試験手順は、図１に概略的に示す。 [1→4]方向における試験： 1.）ストレプトアビジンで被覆したマイクロタイタープ
レートの４つのウェルをサブタイプ特異的ペプチド混合
物M-1a（ウェル１）、M-1b（ウェル２）、M-2a（ウェル
３）及びM-2b（ウェル４）のそれぞれ100μl で被覆す
る（１時間）。 2.）0.05%トゥイーン20/PBSで３回洗浄する。 3.）1:100 に希釈された血清100 μl をウェル１に加
え、１時間インキュベートする。 4.) ウェル１からウェル２へ100 μl の血清を定量的に
移し、１時間インキュベートする。 5.) ウェル２からウェル３へ100 μl の血清を定量的に
移し、１時間インキュベートする。 6.) ウェル３からウェル４へ100 μl の血清を定量的に
移し、１時間インキュベートする。 7.）４つのウェル全てを0.05%トゥイーン20/PBSで３回
洗浄する。 8.) 150 μl の第二抗体（ヤギ抗ヒトＰＯＤ接合体、1:
10,000希釈）を４つのウェル全てに加え、１時間インキ
ュベートする。 9.）0.05%トゥイーン20/PBSで３回洗浄する。 10.) 呈色反応：150μl のABTS（登録商標）溶液を加
え、１時間インキュベートする。 11.) ODを測定する。 血清のプレインキュベーションに関しては、以下のよう
に行うことができる。
ペプチドアミドを含むだけのペプチド混合物 M-1a：タイプ1aのペプチドのみを含む M-1b：タイプ1bのペプチドのみを含む M-2a：タイプ2aのペプチドのみを含む M-2b：タイプ2bのペプチドのみを含む を使用して行った。試験手順は、図１に概略的に示す。 [1→4]方向における試験： 1.）ストレプトアビジンで被覆したマイクロタイタープ
レートの４つのウェルをサブタイプ特異的ペプチド混合
物M-1a（ウェル１）、M-1b（ウェル２）、M-2a（ウェル
３）及びM-2b（ウェル４）のそれぞれ100μl で被覆す
る（１時間）。 2.）0.05%トゥイーン20/PBSで３回洗浄する。 3.）1:100 に希釈された血清100 μl をウェル１に加
え、１時間インキュベートする。 4.) ウェル１からウェル２へ100 μl の血清を定量的に
移し、１時間インキュベートする。 5.) ウェル２からウェル３へ100 μl の血清を定量的に
移し、１時間インキュベートする。 6.) ウェル３からウェル４へ100 μl の血清を定量的に
移し、１時間インキュベートする。 7.）４つのウェル全てを0.05%トゥイーン20/PBSで３回
洗浄する。 8.) 150 μl の第二抗体（ヤギ抗ヒトＰＯＤ接合体、1:
10,000希釈）を４つのウェル全てに加え、１時間インキ
ュベートする。 9.）0.05%トゥイーン20/PBSで３回洗浄する。 10.) 呈色反応：150μl のABTS（登録商標）溶液を加
え、１時間インキュベートする。 11.) ODを測定する。 血清のプレインキュベーションに関しては、以下のよう
に行うことができる。
【００３７】その血清がウェル４（ペプチド混合物M-2
b）、即ちタイプ2bの血清の試験に到達したとき、それ
はタイプ1a（ウェル１）、1b（ウェル２）及び2a（ウェ
ル３）のペプチドにより最大限にプレインキュベートさ
れたものである。血清のプレインキュベーションは、タ
イプ2a（タイプ1a及び1bのペプチドによるプレインキュ
ベーション）及びタイプ1b（タイプ1aのペプチドによる
プレインキュベーション）について試験されると、それ
に対応してより少なくなる。こうして血清は、ウェル１
でODを測定する場合（タイプ1aについての血清の試
験)、異種タイププレインキュベーションに供されな
い。
b）、即ちタイプ2bの血清の試験に到達したとき、それ
はタイプ1a（ウェル１）、1b（ウェル２）及び2a（ウェ
ル３）のペプチドにより最大限にプレインキュベートさ
れたものである。血清のプレインキュベーションは、タ
イプ2a（タイプ1a及び1bのペプチドによるプレインキュ
ベーション）及びタイプ1b（タイプ1aのペプチドによる
プレインキュベーション）について試験されると、それ
に対応してより少なくなる。こうして血清は、ウェル１
でODを測定する場合（タイプ1aについての血清の試
験)、異種タイププレインキュベーションに供されな
い。
【００３８】血清移動の順序（ウェル１→２→３→
４）、即ちプレインキュベーションの程度によって試験
の結果に影響を及ぼすことを避けるために、逆の順序
（ウェル４→３→２→１）での血清移動をさらに行う。
試験[4→1]を、上記の試験[1→4]と平行して行う。この
手順は、血清試料を最初にウェル４に加えられ、次に
３、次に２、最後にウェル１に加えることを除いて配列
[1→4]と同様である。
４）、即ちプレインキュベーションの程度によって試験
の結果に影響を及ぼすことを避けるために、逆の順序
（ウェル４→３→２→１）での血清移動をさらに行う。
試験[4→1]を、上記の試験[1→4]と平行して行う。この
手順は、血清試料を最初にウェル４に加えられ、次に
３、次に２、最後にウェル１に加えることを除いて配列
[1→4]と同様である。
【００３９】血清のプレインキュベーションに関して
は、同様に以下のように行うことができる。その血清が
ウェル１（ペプチド混合物M-1a）、即ちタイプ1aの血清
の試験に到達したとき、それはタイプ2b（ウェル４）、
2a（ウェル３）及び1b（ウェル２）のペプチドにより最
大限にプレインキュベートされたものである。血清のプ
レインキュベーションは、タイプ1b（タイプ2b及び2aの
ペプチドによるプレインキュベーション）及びタイプ2a
（タイプ2bのペプチドによるプレインキュベーション）
について試験されると、対応してより少なくなる。こう
して血清は、ウェル４でODを測定する場合（タイプ2bに
ついての血清の試験)、異種タイププレインキュベーシ
ョンを受けない。 使用したビオチンペプチドアミドは： コア4 領域： A ( ＨＣＶ-1) ：ビオチン- PIPKA RRPEG RTWAQ PGY-NH2 タイプ1 (a+b) MW：2689.19 g/モル； B ( ＨＣＶ-J6)：ビオチン- PIPKD RRSTG KSWGK PGY-NH2 タイプ2 (a+b) MW：2639.13 g/モル； E1領域： C ( ＨＣＶ-1) ：ビオチン- ATRDGKLPATQLRRHIDLLKG-NH2 タイプ1a MW：2968.57 g/モル； D ( ＨＣＶ-J) ：ビオチン- AARNSSIPTTTIRRHVDLLVG-NH2 タイプ1b MW：2886.41 g/モル： E ( ＨＣＶ-J6)：ビオチン- AVQQPGALTQGLRTHIDMVVM-NH2 タイプ2a MW ：2874.49 g/モル； F ( ＨＣＶ-J7/J8) ：ビオチン- AVKHRGALTRSLRTHVDMIVM-NH2 タイプ2b MW：3001.71 g/モル； NS 4/1領域： G ( ＨＣＶ-1) ：ビオチン- S Q H L P Y I E Q - NH2 タイプ1a MW：1723.02 g/モル； H ( ＨＣＶ-J) ：ビオチン- A S H L P Y I E Q - NH2 タイプ1b MW：1664.86 g/モル； I ( ＨＣＶ-J6)：ビオチン- A S R A A L I E E - NH2 タイプ2a MW J ( ＨＣＶ-J8)：ビオチン- A S K A A L I E E - NH2 タイプ2b MW：1538.84 g/モル； NS 4/2領域： K ( ＨＣＶ-1) ：ビオチン- QKALGLLQT-NH2 タイプ1a MW：1578.92 g/モル； L ( ＨＣＶ-J) ：ビオチン- SKIQGLLQQ-NH2 タイプ1b MW：1621.93 g/モル； NS 5/1領域： M ( ＨＣＶ-1) ：ビオチン- SRRFAQALPVWARPD-NH2 タイプ1a MW：2378.83 g/モル； N ( ＨＣＶ-J) ：ビオチン- PRKFPPALPIWARPD-NH2 タイプ1b MW：2369.90 g/モル； O ( ＨＣＶ-J6)：ビオチン- KKRFPPALPAWARPD-NH2 タイプ2a MW：2358.89 g/モル； P ( ＨＣＶ-J8)：ビオチン- RRKFPPALPPWARPD-NH2 タイプ2b MW：2412.94 g/モル； ペプチド混合物： M-1a：ペプチドA 、C 、G ０K 及びM(濃度2.5 μg/ml、
即ち50 ng/20μl)のそれぞれ20μl を含む100 μl のM-
1a。 [上記の５つのペプチドの各々のペプチド溶液（濃
度：5μg/ml）の400μl を含むM-1a＋ 2 ml の緩衝液の
混合物 4 ml ] M-1b：ペプチドA 、D 、H 、L 及びN(濃度2.5 μg/ml、
即ち50 ng/20μl)のそれぞれ20μl を含む100 μl のM-
1b。 [上記の５つのペプチドの各々のペプチド溶液（濃
度：5μg/ml）の400μl を含むM-2b＋ 2 ml の緩衝液の
混合物 4 ml ] M-2a：ペプチドB 、E 、I 及びO(濃度2 μg/ml、即ち50
ng/25μl)のそれぞれ25μl を含む100 μl のM-2a。
[上記の４つのペプチドの各々のペプチド溶液（濃度：5
μg/ml）の400μl を含むM-2b＋ 2.4 ml 緩衝液の混合
物 4 ml ] M-2b：ペプチドB 、F 、J 及びP(濃度2 μg/ml、即ち50
ng/25μl)のそれぞれ25μl を含む。 [上記の４つのペ
プチドの各々のペプチド溶液（濃度：5μg/ml）の400μ
l を含む混合物M-2b＋ 2.4 ml 緩衝液の混合物 4 ml ]結果 ：12のＨＣＶ−陽性血清を、分別的免疫吸着法を使
用してタイプ分けした。
は、同様に以下のように行うことができる。その血清が
ウェル１（ペプチド混合物M-1a）、即ちタイプ1aの血清
の試験に到達したとき、それはタイプ2b（ウェル４）、
2a（ウェル３）及び1b（ウェル２）のペプチドにより最
大限にプレインキュベートされたものである。血清のプ
レインキュベーションは、タイプ1b（タイプ2b及び2aの
ペプチドによるプレインキュベーション）及びタイプ2a
（タイプ2bのペプチドによるプレインキュベーション）
について試験されると、対応してより少なくなる。こう
して血清は、ウェル４でODを測定する場合（タイプ2bに
ついての血清の試験)、異種タイププレインキュベーシ
ョンを受けない。 使用したビオチンペプチドアミドは： コア4 領域： A ( ＨＣＶ-1) ：ビオチン- PIPKA RRPEG RTWAQ PGY-NH2 タイプ1 (a+b) MW：2689.19 g/モル； B ( ＨＣＶ-J6)：ビオチン- PIPKD RRSTG KSWGK PGY-NH2 タイプ2 (a+b) MW：2639.13 g/モル； E1領域： C ( ＨＣＶ-1) ：ビオチン- ATRDGKLPATQLRRHIDLLKG-NH2 タイプ1a MW：2968.57 g/モル； D ( ＨＣＶ-J) ：ビオチン- AARNSSIPTTTIRRHVDLLVG-NH2 タイプ1b MW：2886.41 g/モル： E ( ＨＣＶ-J6)：ビオチン- AVQQPGALTQGLRTHIDMVVM-NH2 タイプ2a MW ：2874.49 g/モル； F ( ＨＣＶ-J7/J8) ：ビオチン- AVKHRGALTRSLRTHVDMIVM-NH2 タイプ2b MW：3001.71 g/モル； NS 4/1領域： G ( ＨＣＶ-1) ：ビオチン- S Q H L P Y I E Q - NH2 タイプ1a MW：1723.02 g/モル； H ( ＨＣＶ-J) ：ビオチン- A S H L P Y I E Q - NH2 タイプ1b MW：1664.86 g/モル； I ( ＨＣＶ-J6)：ビオチン- A S R A A L I E E - NH2 タイプ2a MW J ( ＨＣＶ-J8)：ビオチン- A S K A A L I E E - NH2 タイプ2b MW：1538.84 g/モル； NS 4/2領域： K ( ＨＣＶ-1) ：ビオチン- QKALGLLQT-NH2 タイプ1a MW：1578.92 g/モル； L ( ＨＣＶ-J) ：ビオチン- SKIQGLLQQ-NH2 タイプ1b MW：1621.93 g/モル； NS 5/1領域： M ( ＨＣＶ-1) ：ビオチン- SRRFAQALPVWARPD-NH2 タイプ1a MW：2378.83 g/モル； N ( ＨＣＶ-J) ：ビオチン- PRKFPPALPIWARPD-NH2 タイプ1b MW：2369.90 g/モル； O ( ＨＣＶ-J6)：ビオチン- KKRFPPALPAWARPD-NH2 タイプ2a MW：2358.89 g/モル； P ( ＨＣＶ-J8)：ビオチン- RRKFPPALPPWARPD-NH2 タイプ2b MW：2412.94 g/モル； ペプチド混合物： M-1a：ペプチドA 、C 、G ０K 及びM(濃度2.5 μg/ml、
即ち50 ng/20μl)のそれぞれ20μl を含む100 μl のM-
1a。 [上記の５つのペプチドの各々のペプチド溶液（濃
度：5μg/ml）の400μl を含むM-1a＋ 2 ml の緩衝液の
混合物 4 ml ] M-1b：ペプチドA 、D 、H 、L 及びN(濃度2.5 μg/ml、
即ち50 ng/20μl)のそれぞれ20μl を含む100 μl のM-
1b。 [上記の５つのペプチドの各々のペプチド溶液（濃
度：5μg/ml）の400μl を含むM-2b＋ 2 ml の緩衝液の
混合物 4 ml ] M-2a：ペプチドB 、E 、I 及びO(濃度2 μg/ml、即ち50
ng/25μl)のそれぞれ25μl を含む100 μl のM-2a。
[上記の４つのペプチドの各々のペプチド溶液（濃度：5
μg/ml）の400μl を含むM-2b＋ 2.4 ml 緩衝液の混合
物 4 ml ] M-2b：ペプチドB 、F 、J 及びP(濃度2 μg/ml、即ち50
ng/25μl)のそれぞれ25μl を含む。 [上記の４つのペ
プチドの各々のペプチド溶液（濃度：5μg/ml）の400μ
l を含む混合物M-2b＋ 2.4 ml 緩衝液の混合物 4 ml ]結果 ：12のＨＣＶ−陽性血清を、分別的免疫吸着法を使
用してタイプ分けした。
【００４０】ペプチドパネルを使用して、12の血清の11
までをタイプ分けすることが可能であったが、１つの血
清では反応性は見られず（即ち、全部のタイプについて
吸収＜200 mOD)、これは大きな傾向としてさえタイプ分
けできなかった。
までをタイプ分けすることが可能であったが、１つの血
清では反応性は見られず（即ち、全部のタイプについて
吸収＜200 mOD)、これは大きな傾向としてさえタイプ分
けできなかった。
【００４１】 表１：それぞれの場合における両方の試験方向でのペプチド 混合物による11のＨＣＶ血清のタイプ分け ────────────────────────────── タイプ分け 血清 試験[1→4] 試験[4→1] タイプ分けの結果 ───────────────────────────── 1 タイプ1a タイプ1a タイプ1a 2 傾向1a 傾向1b 傾1 3 タイプ1a タイプ1b タイプ1 4 タイプ1a 傾向1b タイプ1 5 タイプ1a 陰性 タイプ1 6 タイプ1a タイプ1b タイプ1 7 タイプ1a 傾向2 傾タイプ1 8 タイプ1a タイプ1b タイプ1 9 タイプ1a タイプ1a タイプ1a 10 タイプ1a タイプ1b タイプ1 11 タイプ1a 傾向1b タイプ1 ───────────────────────────── 反応性が＜200 mOD の場合は、１つのタイプが優勢であ
る場合は「傾向... 」と判断し、結果が明確でない場合
は「陰性」と判断した。
る場合は「傾向... 」と判断し、結果が明確でない場合
は「陰性」と判断した。
【００４２】上記のように行ったタイプ分け方法を使用
した血清のタイプ分類（即ち、１、２または３型）につ
いて述べることは置くとして、結果は特定の血清（血清
１及び９）はそのサブタイプ（1a、1b、2a、2b）につい
てもタイプ分けすることができることを示している。こ
れは両方の試験方向、即ち試験[1→4]及び試験[4→1]が
結果として同じサブタイプを与える場合である。
した血清のタイプ分類（即ち、１、２または３型）につ
いて述べることは置くとして、結果は特定の血清（血清
１及び９）はそのサブタイプ（1a、1b、2a、2b）につい
てもタイプ分けすることができることを示している。こ
れは両方の試験方向、即ち試験[1→4]及び試験[4→1]が
結果として同じサブタイプを与える場合である。
【００４３】
【配列表】 配列番号：１ 配列の長さ: 31 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００４４】
【化１】
【００４５】配列番号：２ 配列の長さ: 31 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００４６】
【化２】
【００４７】配列番号：３ 配列の長さ: 31 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００４８】
【化３】
【００４９】配列番号：４ 配列の長さ: 31 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００５０】
【化４】
【００５１】配列番号：５ 配列の長さ: 31 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００５２】
【化５】
【００５３】配列番号：６ 配列の長さ: 31 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００５４】
【化６】
【００５５】配列番号：７ 配列の長さ: 31 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００５６】
【化７】
【００５７】配列番号：８ 配列の長さ: 31 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００５８】
【化８】
【００５９】配列番号：９ 配列の長さ: 31 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００６０】
【化９】
【００６１】配列番号：10 配列の長さ: 31 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００６２】
【化１０】
【００６３】配列番号：11 配列の長さ: 22 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００６４】
【化１１】
【００６５】配列番号：12 配列の長さ: 22 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００６６】
【化１２】
【００６７】配列番号：13 配列の長さ: 22 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００６８】
【化１３】
【００６９】配列番号：14 配列の長さ: 22 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００７０】
【化１４】
【００７１】配列番号：15 配列の長さ: 22 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００７２】
【化１５】
【００７３】配列番号：16 配列の長さ: 22 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００７４】
【化１６】
【００７５】配列番号：17 配列の長さ: 20 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００７６】
【化１７】
【００７７】配列番号：18 配列の長さ: 20 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００７８】
【化１８】
【００７９】配列番号：19 配列の長さ: 20 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００８０】
【化１９】
【００８１】配列番号：20 配列の長さ: 16 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００８２】
【化２０】
【００８３】配列番号：21 配列の長さ: 16 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００８４】
【化２１】
【００８５】配列番号：22 配列の長さ: 20 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００８６】
【化２２】
【００８７】配列番号：23 配列の長さ: 18 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００８８】
【化２３】
【００８９】配列番号：24 配列の長さ: 18 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００９０】
【化２４】
【００９１】配列番号：25 配列の長さ: 9 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００９２】
【化２５】
【００９３】配列番号：26 配列の長さ: 9 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００９４】
【化２６】
【００９５】配列番号：27 配列の長さ: 9 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００９６】
【化２７】
【００９７】配列番号：28 配列の長さ: 13 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【００９８】
【化２８】
【００９９】配列番号：29 配列の長さ: 13 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【０１００】
【化２９】
【０１０１】配列番号：30 配列の長さ: 9 配列の型: アミノ酸 鎖の数: ストランド状態 トポロジー: 直鎖状 配列の種類: ペプチド 起源 生物名: Ｃ型肝炎ウイルス 配列
【０１０２】
【化３０】
【図１】 図１は、分別的な免疫吸着方法によるタイプ
分けの実施についての図である。
分けの実施についての図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ウルスラ−ヘンリケ ヴィーンフーズ−テ ーレン ドイツ連邦共和国 Ｄ−82152 クレイル リング ブルグフライデンシュトラーセ ８番地 (72)発明者 ウルバン シュミット ドイツ連邦共和国 Ｄ−82386 オーバー ハウゼン ヴァルトシュトラーセ 36番地
Claims (13)
- 【請求項１】 試験液体中の抗体をタイプ分けする方法
であって、(a) 試料液体の第一のアリコートを、抗原ま
たは抗原混合物が抗体と反応でき、かつ試料液体中の抗
体の量が固定化抗原または抗原混合物の容量を超えない
条件下で、試験される抗体の第一のタイプに特異的であ
る第一の固定化抗原または試験される抗体の第一のタイ
プに特異的である第一の固定化抗原それぞれの混合物に
接触させ、(b) 段階(a) の試料液体を、段階(a) と同様
の条件下で、試験される抗体の第二のタイプに特異的で
ある第二の固定化抗原または試験される抗体の第二のタ
イプに特異的である第二の固定化抗原それぞれの混合物
に接触させ、ここで前記第二の抗原または抗原混合物は
段階(a) で使用した第一の抗原または抗原混合物から空
間的に分離されているものであり、(c) 段階(b) の処理
判断を、試験される抗体の一またはいくつかの別のタイ
プに特異的である一またはいくつかの別の抗原または抗
原混合物を用いて任意に繰り返し、ここで前記別の抗原
または抗原混合物は前の段階で使用した抗原または抗原
混合物からそれぞれ空間的に分離されているものであ
り、(d) 試料液体の第二のアリコートを、段階(a) から
(c) に従って、但し抗原または抗原混合物の並びが異な
るようにして、いくつかの固定化抗原または抗原混合物
に任意に接触させ、(e) 固定化抗原または抗原混合物の
試料液体とのそれぞれの免疫学的反応性を定性的にまた
は／及び定量的に測定し、(f) 反応性測定に基づいて試
料液体中に存在する抗体のタイプ分けを行うことを特徴
とする前記方法。 - 【請求項２】 ペプチドを固定化抗原として使用する請
求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 抗原が固相結合基を有し、それを介して
親和性相互作用により反応性固相に結合されている請求
項１または２に記載の方法。 - 【請求項４】 抗原が固相に共有結合されている請求項
１または２に記載の方法。 - 【請求項５】 抗原が、固相に吸着により結合している
担体に接合されて存在する請求項１または２に記載の方
法。 - 【請求項６】 一またはいくつかの病原体に対する抗体
のタイプ分けを行う請求項１から５のいずれかに記載の
方法。 - 【請求項７】 (a) アミノ酸384 −414 、 (b) アミノ酸1738−1759、 (c) アミノ酸2217−2236、 (d) アミノ酸2402−2419、 (e) アミノ酸2345−2357、 及び少なくとも６アミノ酸長を有するこれらの部分配列
から選択されるＣ型肝炎ウイルスの少なくとも一つの免
疫学的に活性な領域を含むペプチド。 - 【請求項８】 免疫学的に活性な領域が、(a) 配列番号
１〜10で示されるアミノ酸配列、(b)(a)の配列の一つと
少なくとも90% の相同性を有するアミノ酸配列、または
(c) 少なくとも６アミノ酸長を有する(a) もしくは(b)
の配列の部分配列から選択される請求項７に記載のペプ
チド。 - 【請求項９】 免疫学的に活性な領域が、(a) 配列番号
11〜16で示されるアミノ酸配列、(b)(a)の配列の一つと
少なくとも90% の相同性を有するアミノ酸配列、または
(c) 少なくとも６アミノ酸長を有する(a) もしくは(b)
の配列の部分配列から選択される請求項７に記載のペプ
チド。 - 【請求項１０】 免疫学的に活性な領域が、(a) 配列番
号17〜22で示されるアミノ酸配列、(b)(a)の配列の一つ
と少なくとも90% の相同性を有するアミノ酸配列、また
は(c) 少なくとも６アミノ酸長を有する(a) もしくは
(b) の配列の部分配列から選択される請求項７に記載の
ペプチド。 - 【請求項１１】 免疫学的に活性な領域が、(a) 配列番
号23〜24で示されるアミノ酸配列、(b)(a)の配列の一つ
と少なくとも90% の相同性を有するアミノ酸配列、また
は(c) 少なくとも６アミノ酸長を有する(a) もしくは
(b) の配列の部分配列から選択される請求項７に記載の
ペプチド。 - 【請求項１２】 免疫学的に活性な領域が、(a) 配列番
号25〜30で示されるアミノ酸配列、(b)(a)の配列の一つ
と少なくとも90% の相同性を有するアミノ酸配列、また
は(c) 少なくとも６アミノ酸長を有する(a) もしくは
(b) の配列の部分配列から選択される請求項７に記載の
ペプチド。 - 【請求項１３】 Ｃ型肝炎ウイルスに対する抗体の測定
方法における請求項７〜12のいずれかに記載のペプチド
の使用。
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