JPH08242884A - ペニシリン及びセファロスポリンの酵素製造法 - Google Patents
ペニシリン及びセファロスポリンの酵素製造法Info
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- JPH08242884A JPH08242884A JP8030699A JP3069996A JPH08242884A JP H08242884 A JPH08242884 A JP H08242884A JP 8030699 A JP8030699 A JP 8030699A JP 3069996 A JP3069996 A JP 3069996A JP H08242884 A JPH08242884 A JP H08242884A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 アミド及び最終生成物の加水分解率を減少さ
せる、ペニシリン及びセファロスポリンの改良型酵素製
造法を提供すること。 【解決手段】 アズラクトンポリマー上に固定化された
ペニシリンアシラーゼ酵素の存在下に、水性媒体中、６
−アミノペニシラン酸又は７−アミノセファロスポラン
酸とアミドとを反応させる。
せる、ペニシリン及びセファロスポリンの改良型酵素製
造法を提供すること。 【解決手段】 アズラクトンポリマー上に固定化された
ペニシリンアシラーゼ酵素の存在下に、水性媒体中、６
−アミノペニシラン酸又は７−アミノセファロスポラン
酸とアミドとを反応させる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、式（Ｉ）及び式
（II）：
（II）：
【０００２】
【化４】
【０００３】〔式中、ＸはＳ又はＣＨ2であり、Ｒは任
意に置換された炭化水素６員環であり、Ｒ1は、酸素原
子、硫黄原子若しくは窒素原子を介して有機基に結合し
たメチレン基、水素原子、ハロゲン原子、メチル基、メ
トキシ基又はアルケニルＣ1−Ｃ4基である〕のペニシリ
ン又はセファロスポリンの改良型酵素製造法に関する。
意に置換された炭化水素６員環であり、Ｒ1は、酸素原
子、硫黄原子若しくは窒素原子を介して有機基に結合し
たメチレン基、水素原子、ハロゲン原子、メチル基、メ
トキシ基又はアルケニルＣ1−Ｃ4基である〕のペニシリ
ン又はセファロスポリンの改良型酵素製造法に関する。
【０００４】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】ＵＳ−
Ａ−３８１６２５３号明細書は、活性微生物又は酵素の
存在下に、水性媒体中、＋５℃〜＋５０℃の範囲、特に
＋２０℃〜＋４０℃の範囲の温度で、α−置換されたα
−アミノ酸と７−アミノセファロスポラン酸又は７−ア
ミノデアセトキシセファロスポラン酸から誘導された化
合物とを反応させることにより、ペニシリン又はセファ
ロスポリンを製造する方法を開示している。該米国特許
明細書に示唆されているように操作すると、同時に生ず
る類似反応により反応混合物からの分離が特に困難な副
生成物が形成され、よって所望の最終生成物の収率が著
しく低減することが見い出された。
Ａ−３８１６２５３号明細書は、活性微生物又は酵素の
存在下に、水性媒体中、＋５℃〜＋５０℃の範囲、特に
＋２０℃〜＋４０℃の範囲の温度で、α−置換されたα
−アミノ酸と７−アミノセファロスポラン酸又は７−ア
ミノデアセトキシセファロスポラン酸から誘導された化
合物とを反応させることにより、ペニシリン又はセファ
ロスポリンを製造する方法を開示している。該米国特許
明細書に示唆されているように操作すると、同時に生ず
る類似反応により反応混合物からの分離が特に困難な副
生成物が形成され、よって所望の最終生成物の収率が著
しく低減することが見い出された。
【０００５】上記の欠点を克服又は減少させるために、
ＥＰ−Ａ−０４７３００８号明細書は、固定化ペニシリ
ンアシラーゼの存在下に、６−アミノペニシラン酸又は
７−アミノセファロスポラン酸と式Ｒ−ＣＨ（ＮＨ2）
−ＣＯＯＨのα−置換α−アミノ酸又はその反応性誘導
体とを水性媒体中、−５℃〜＋２０℃の範囲、好ましく
は約＋４℃の温度で反応させることにより、式（Ｉ）又
は（II）のペニシリン又はセファロスポリンを製造する
方法を提案した。
ＥＰ−Ａ−０４７３００８号明細書は、固定化ペニシリ
ンアシラーゼの存在下に、６−アミノペニシラン酸又は
７−アミノセファロスポラン酸と式Ｒ−ＣＨ（ＮＨ2）
−ＣＯＯＨのα−置換α−アミノ酸又はその反応性誘導
体とを水性媒体中、−５℃〜＋２０℃の範囲、好ましく
は約＋４℃の温度で反応させることにより、式（Ｉ）又
は（II）のペニシリン又はセファロスポリンを製造する
方法を提案した。
【０００６】ＥＰ−Ａ−０４７３００８号明細書には全
ての反応条件が明確に記載されており、所望の最終生成
物が極めて良好な収率（９０％以上に達する）で得られ
た２５個の実施例も記載されている。
ての反応条件が明確に記載されており、所望の最終生成
物が極めて良好な収率（９０％以上に達する）で得られ
た２５個の実施例も記載されている。
【０００７】収率が十分に高く（約９０％）且つ最終生
成物が容易に精製され得る方法が工業的に実施可能なも
のであることに留意されたい。
成物が容易に精製され得る方法が工業的に実施可能なも
のであることに留意されたい。
【０００８】ＥＰ−Ａ−０４７３００８号明細書は、反
応物質として用い得る式Ｒ−ＣＨ（ＮＨ2）−ＣＯＯＨ
のα−置換α−アミノ酸及びその反応性誘導体を概念的
に記載しているが、具体的に示されているアミノ酸はＤ
−フェニルグリシンメチルエステルのみである。
応物質として用い得る式Ｒ−ＣＨ（ＮＨ2）−ＣＯＯＨ
のα−置換α−アミノ酸及びその反応性誘導体を概念的
に記載しているが、具体的に示されているアミノ酸はＤ
−フェニルグリシンメチルエステルのみである。
【０００９】本出願人は、ＥＰ−Ａ−０４７３００８号
明細書の実施例に開示されている手順に従って極めて正
確に繰り返しテストを実施したが、所望の結果は得られ
なかった。実際、反応媒体中のアミノ酸の量が、６−ア
ミノペニシラン酸又は７−アミノセファロスポラン酸１
モル当たり４モル未満の場合には、所望の最終生成物の
収率は極めて低くなり（約６０％以下）、そのような収
率は工業的に許容し得ないものであることが見い出され
た。
明細書の実施例に開示されている手順に従って極めて正
確に繰り返しテストを実施したが、所望の結果は得られ
なかった。実際、反応媒体中のアミノ酸の量が、６−ア
ミノペニシラン酸又は７−アミノセファロスポラン酸１
モル当たり４モル未満の場合には、所望の最終生成物の
収率は極めて低くなり（約６０％以下）、そのような収
率は工業的に許容し得ないものであることが見い出され
た。
【００１０】Ｄ−フェニルグリシンメチルエステルのモ
ル数が６−アミノペニシラン酸又は７−アミノセファロ
スポラン酸１モル当たり４〜６モルの範囲である場合に
のみ良好且つ許容し得る収率（約９０％）を得ることが
できる。しかし、この場合、コストが許容し得ない程増
加する（Ｄ−フェニルグリシンメチルエステルは高価で
ある）ばかりか、所望の最終生成物であるペニシリン又
はセファロスポリンからの分離が困難であるか又は不可
能である副生成物が形成される。
ル数が６−アミノペニシラン酸又は７−アミノセファロ
スポラン酸１モル当たり４〜６モルの範囲である場合に
のみ良好且つ許容し得る収率（約９０％）を得ることが
できる。しかし、この場合、コストが許容し得ない程増
加する（Ｄ−フェニルグリシンメチルエステルは高価で
ある）ばかりか、所望の最終生成物であるペニシリン又
はセファロスポリンからの分離が困難であるか又は不可
能である副生成物が形成される。
【００１１】他の種類のＤ−フェニルグリシン又は他の
アミノ酸のエステルを用いることも試みられたが、全て
の努力は不成功に終わった。他の多くのアミノ酸反応性
誘導体を用いた場合も同じく思わしくない結果に終わっ
た。
アミノ酸のエステルを用いることも試みられたが、全て
の努力は不成功に終わった。他の多くのアミノ酸反応性
誘導体を用いた場合も同じく思わしくない結果に終わっ
た。
【００１２】独国特許出願ＤＯＳ２２１４４４４号明細
書は、ペニシリンアシラーゼ酵素の存在下に、７−ＡＤ
ＣＡとフェニルグリシンアミドとを反応させることによ
るセファロスポリン（特にセファレキシン）の酵素合成
を記載しているが、得られた収率は非常に低い。
書は、ペニシリンアシラーゼ酵素の存在下に、７−ＡＤ
ＣＡとフェニルグリシンアミドとを反応させることによ
るセファロスポリン（特にセファレキシン）の酵素合成
を記載しているが、得られた収率は非常に低い。
【００１３】ＰＣＴ／ＤＫ９１／００１８８（ＷＯ９２
／０１０６１）号及びＰＣＴ／ＤＫ９２／００３８８
（ＷＯ９３／１２２５０）号の各明細書は、固定化ペニ
シリンアシラーゼ酵素の存在下に、式（III）
／０１０６１）号及びＰＣＴ／ＤＫ９２／００３８８
（ＷＯ９３／１２２５０）号の各明細書は、固定化ペニ
シリンアシラーゼ酵素の存在下に、式（III）
【００１４】
【化５】
【００１５】のアミドと６−アミノペニシラン酸又は７
−アミノセファロスポラン酸とを反応させる酵素アシル
化によるβ−ラクタム抗生物質の製造法を開示してい
る。そのような方法は、工業的に実施可能であることが
立証されたが、かなりの量のアミド（III）が同酵素に
より加水分解され、それによって、所望の最終生成物中
の不純物量が増大し、さらに、最終生成物の一部が同酵
素により加水分解されることが見い出された。
−アミノセファロスポラン酸とを反応させる酵素アシル
化によるβ−ラクタム抗生物質の製造法を開示してい
る。そのような方法は、工業的に実施可能であることが
立証されたが、かなりの量のアミド（III）が同酵素に
より加水分解され、それによって、所望の最終生成物中
の不純物量が増大し、さらに、最終生成物の一部が同酵
素により加水分解されることが見い出された。
【００１６】本出願人は、上記した２つのＰＣＴ出願明
細書の教示に従い、但し、アシル化剤として異なるアミ
ドを、細菌源として異なる酵素を且つ酵素の固定化に異
なる固体マトリックスを用いて各種実験を実施した。
細書の教示に従い、但し、アシル化剤として異なるアミ
ドを、細菌源として異なる酵素を且つ酵素の固定化に異
なる固体マトリックスを用いて各種実験を実施した。
【００１７】得られた結果は、互いに同等であったが、
いずれの実験においても、アミド及び最終生成物の両方
がかなりの加水分解を受けることが認められた。
いずれの実験においても、アミド及び最終生成物の両方
がかなりの加水分解を受けることが認められた。
【００１８】
【課題を解決するための手段】驚くべきことには、前記
ＷＯ９２／０１０６１号及びＷＯ９３／１２２５０号に
開示されている手順に従い、但し、アズラクトンポリマ
ー（アフィニティークロマトグラフィー用バイオサポー
トとして慣用されており、ＭｉｎｎｅｓｏｔａＭｉｎｉ
ｎｇ ａｎｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｃｏ．か
ら商標名ＥＭＰＨＡＺＥで市販されているそれ自体公知
のポリマー）である特定の担体上に酵素を固定化する
と、アミド（III）及び最終生成物の加水分解が実質的
に減少することが見い出された。加水分解の減少率は、
約３０％のオーダーであり得、それは、方法の経済性の
点でも、特に最終生成物が高純度で得られ、且つ加水分
解生成物（フェニルグリシン及びその誘導体）が結晶化
されるリスクが回避されるという点でも重要である。テ
ストした他の固定化マトリックスを用いた場合には必ず
加水分解生成物の結晶化が容易に発生したことに留意さ
れたい。
ＷＯ９２／０１０６１号及びＷＯ９３／１２２５０号に
開示されている手順に従い、但し、アズラクトンポリマ
ー（アフィニティークロマトグラフィー用バイオサポー
トとして慣用されており、ＭｉｎｎｅｓｏｔａＭｉｎｉ
ｎｇ ａｎｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｃｏ．か
ら商標名ＥＭＰＨＡＺＥで市販されているそれ自体公知
のポリマー）である特定の担体上に酵素を固定化する
と、アミド（III）及び最終生成物の加水分解が実質的
に減少することが見い出された。加水分解の減少率は、
約３０％のオーダーであり得、それは、方法の経済性の
点でも、特に最終生成物が高純度で得られ、且つ加水分
解生成物（フェニルグリシン及びその誘導体）が結晶化
されるリスクが回避されるという点でも重要である。テ
ストした他の固定化マトリックスを用いた場合には必ず
加水分解生成物の結晶化が容易に発生したことに留意さ
れたい。
【００１９】
【発明の実施の形態】上記の結果から、本発明は、上記
に特定した式（Ｉ）及び（II）のペニシリン及びセファ
ロスポリンの改良型酵素製造法に関し、該方法は、水性
媒体中、−５℃〜＋３５℃の温度で、固定化ペニシリン
アシラーゼ酵素の存在下に、式（IV）又は式（V）
に特定した式（Ｉ）及び（II）のペニシリン及びセファ
ロスポリンの改良型酵素製造法に関し、該方法は、水性
媒体中、−５℃〜＋３５℃の温度で、固定化ペニシリン
アシラーゼ酵素の存在下に、式（IV）又は式（V）
【００２０】
【化６】
【００２１】〔式中、Ｘ及びＲ1は、上記と同義であ
る〕の６−アミノペニシラン酸又は７−アミノセファロ
スポラン酸と、式（III）
る〕の６−アミノペニシラン酸又は７−アミノセファロ
スポラン酸と、式（III）
【００２２】
【化７】
【００２３】〔式中、Ｒは上記と同義であり、Ｒ2及び
Ｒ3はそれぞれ独立に、水素又は１〜３個の炭素原子を
有する線状若しくは分枝アルキル基である〕のアミド又
はその塩とを、前記酸（IV）又は（V）１モル当たり前
記アミド（III）１．５〜３モルのモル比で反応させる
ことからなり、前記酵素がアズラクトンポリマー上に固
定化されていることを特徴とする。
Ｒ3はそれぞれ独立に、水素又は１〜３個の炭素原子を
有する線状若しくは分枝アルキル基である〕のアミド又
はその塩とを、前記酸（IV）又は（V）１モル当たり前
記アミド（III）１．５〜３モルのモル比で反応させる
ことからなり、前記酵素がアズラクトンポリマー上に固
定化されていることを特徴とする。
【００２４】特に前記アミド（III）は、Ｄ−フェニル
グリシンアミド又はその有機若しくは無機酸との塩であ
る。
グリシンアミド又はその有機若しくは無機酸との塩であ
る。
【００２５】本発明はさらに、本発明の方法により製造
されたペニシリン又はセファロスポリン並びに医薬上許
容し得る担体又は希釈剤を含む医薬組成物にも関する。
されたペニシリン又はセファロスポリン並びに医薬上許
容し得る担体又は希釈剤を含む医薬組成物にも関する。
【００２６】ペニシリン又はセファロスポリンを含む医
薬組成物は、通常、常法に従って製造され、医薬上適当
な形態で投与される。
薬組成物は、通常、常法に従って製造され、医薬上適当
な形態で投与される。
【００２７】式（Ｉ）及び（II）に関して、Ｒは、例え
ば、非置換又は１個以上のヒドロキシル、ハロゲン、ア
ルキル、アルコキシ、カルボキシル、ニトロ若しくはア
ミノで置換された、フェニル、シクロヘキサジエニル、
シクロヘキセニル又はシクロヘキシルであってよい。
ば、非置換又は１個以上のヒドロキシル、ハロゲン、ア
ルキル、アルコキシ、カルボキシル、ニトロ若しくはア
ミノで置換された、フェニル、シクロヘキサジエニル、
シクロヘキセニル又はシクロヘキシルであってよい。
【００２８】Ｒ1は、Ｏ、Ｓ若しくはＮ原子を介してメ
チレン基に結合し、任意に、置換基として、ヒドロキ
シ、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、カルボニル、カ
ルボキシ、シアノ及びアミノなどから選択された１個以
上の基を有する有機基、特に、アルコキシ、アルコキシ
カルボニル又はＯ、Ｓ及びＮから選択された１〜４個の
ヘテロ原子を含む５若しくは６員複素環式基に結合した
メチレン基、水素原子、ハロゲン原子、メチル基であっ
てよい。
チレン基に結合し、任意に、置換基として、ヒドロキ
シ、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、カルボニル、カ
ルボキシ、シアノ及びアミノなどから選択された１個以
上の基を有する有機基、特に、アルコキシ、アルコキシ
カルボニル又はＯ、Ｓ及びＮから選択された１〜４個の
ヘテロ原子を含む５若しくは６員複素環式基に結合した
メチレン基、水素原子、ハロゲン原子、メチル基であっ
てよい。
【００２９】本明細書に用いられている「アルキル」及
び「アルコキシ」という用語は、１〜６個、好ましくは
１〜４個の炭素原子を有する基を指す。
び「アルコキシ」という用語は、１〜６個、好ましくは
１〜４個の炭素原子を有する基を指す。
【００３０】そのアミドが式（III）を有するα−アミ
ノ酸の例としては、Ｄ−フェニルグリシン、Ｄ−ｐ−ヒ
ドロキシフェニルグリシン、及びＤ−１，４−シクロヘ
キサジエン−１−イル−グリシンを挙げることができ
る。
ノ酸の例としては、Ｄ−フェニルグリシン、Ｄ−ｐ−ヒ
ドロキシフェニルグリシン、及びＤ−１，４−シクロヘ
キサジエン−１−イル−グリシンを挙げることができ
る。
【００３１】アミドの適当な塩は、塩酸、フッ化水素
酸、臭化水素酸、硫酸若しくは硝酸のような無機酸との
塩、又は酢酸、ギ酸若しくはマレイン酸のような有機酸
との塩である。
酸、臭化水素酸、硫酸若しくは硝酸のような無機酸との
塩、又は酢酸、ギ酸若しくはマレイン酸のような有機酸
との塩である。
【００３２】以下の酸は、式（IV）及び（Ｖ）の化合物
のなかで特に重要なものである：６−アミノペニシラン
酸、７−アミノセファロスポラン酸、７−アミノ−３−
デアセトキシセファロスポラン酸、７−アミノ−３−ク
ロロセファロスポラン酸。
のなかで特に重要なものである：６−アミノペニシラン
酸、７−アミノセファロスポラン酸、７−アミノ−３−
デアセトキシセファロスポラン酸、７−アミノ−３−ク
ロロセファロスポラン酸。
【００３３】本発明の方法に用いられる酵素は、ペニシ
リンアシラーゼ酵素又はペニシリンアミダーゼ酵素であ
ってよい。ペニシリンアシラーゼ又はアミダーゼ酵素
は、任意の公知微生物源から誘導され得る。中でも特
に、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）、シュ
ードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、アエロモナス
（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒ
ｉｃｈｉａ）、アースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃ
ｔｅｒ）、アセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅ
ｒ）、マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｔｏ
ｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ）、Ｋｌｕｙｖｅｒａ、コリ
ネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｂａｃｔｅｒｉｕｍ）及び
バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属の微生物が挙げられ
る。 大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から誘導された酵素は、遊
離又は固定化形態で容易に且つ安価に入手し得るために
特に好ましい。
リンアシラーゼ酵素又はペニシリンアミダーゼ酵素であ
ってよい。ペニシリンアシラーゼ又はアミダーゼ酵素
は、任意の公知微生物源から誘導され得る。中でも特
に、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）、シュ
ードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、アエロモナス
（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒ
ｉｃｈｉａ）、アースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃ
ｔｅｒ）、アセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅ
ｒ）、マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｔｏ
ｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ）、Ｋｌｕｙｖｅｒａ、コリ
ネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｂａｃｔｅｒｉｕｍ）及び
バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属の微生物が挙げられ
る。 大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から誘導された酵素は、遊
離又は固定化形態で容易に且つ安価に入手し得るために
特に好ましい。
【００３４】特に、ＥＣ ３．５．１．１１に分類され
るペニシリンアシラーゼ又はアミダーゼ酵素が使用可能
である。
るペニシリンアシラーゼ又はアミダーゼ酵素が使用可能
である。
【００３５】
【実施例】以下の実施例により本発明を示す。
【００３６】実施例１ アザラクトン機能性担体上へのペニシリンＧアシラーゼ
の固定化 ｐＨ７．５の０．１Ｍリン酸塩溶液２ｍｌ中１３８．８
ｍｇのペニシリンアシラーゼと、１．１Ｍの硫酸ナトリ
ウム及び０．１Ｍのリン酸ナトリウムを含むｐＨ７．４
のカップリング緩衝液２８ｍｌとを混合した。５０ｍｌ
の遠心管に、１ｇのアザラクトン機能性担体〔ＥＭＰＨ
ＡＺＥ（商標）〕を加えた。カップリング緩衝液中の酵
素を乾燥ビーズに加え、ロッカープラットフォーム上、
室温で３時間、回転させながら混合した。過剰なカップ
リング緩衝溶液を排出し、ビーズをＰＢＳ〔２０ｍＭの
リン酸塩、０．９％の塩化ナトリウム（ｐＨ７．４）〕
の１０ｍｌアリコートで５回洗浄した。これにより、該
担体上に固定化された後の酵素活性は＞９０％となっ
た。
の固定化 ｐＨ７．５の０．１Ｍリン酸塩溶液２ｍｌ中１３８．８
ｍｇのペニシリンアシラーゼと、１．１Ｍの硫酸ナトリ
ウム及び０．１Ｍのリン酸ナトリウムを含むｐＨ７．４
のカップリング緩衝液２８ｍｌとを混合した。５０ｍｌ
の遠心管に、１ｇのアザラクトン機能性担体〔ＥＭＰＨ
ＡＺＥ（商標）〕を加えた。カップリング緩衝液中の酵
素を乾燥ビーズに加え、ロッカープラットフォーム上、
室温で３時間、回転させながら混合した。過剰なカップ
リング緩衝溶液を排出し、ビーズをＰＢＳ〔２０ｍＭの
リン酸塩、０．９％の塩化ナトリウム（ｐＨ７．４）〕
の１０ｍｌアリコートで５回洗浄した。これにより、該
担体上に固定化された後の酵素活性は＞９０％となっ
た。
【００３７】実施例２ 酵素反応器中に存在するβ−ナフトールを含むセファク
ロル １１．６９ｇ（４９．８２ｍｍｏｌ）の３−クロロ−７
−アミノデスアセトキシセファロスポラン酸（３Ｃｌ／
Ｎｕ）及び１５．２２ｇ（１０１．４７ｍｍｏｌ）のＤ
−フェニルグリシンアミド（ＦＧＡ）を、総量が１９６
ｍｌになるようにＨ2Ｏに溶解した。次いで、同じ反応
容器中の該溶液に８ｇ（５５．４４ｍｍｏｌ）の微粉砕
β−ナフトールを加えた。以下の条件下に、実施例１で
調製したペニシリンＧアミダーゼ（ＰＧＡ）２１．２ｇ
（３７００Ｉ．Ｕ．）を用いてアシル化を行った：温度
１０℃で４Ｎの硫酸を用いてｐＨを６．８に一定に維持
した。約２時間後、３Ｃｌ／Ｎｕの９８％が、β−ナフ
トールとの複合体であるセファクロル［７−（Ｄ−２−
アミノ−２−フェニルアセトアミド）−３−クロロ−３
−セフェム−４−カルボン酸］に変換された。３Ｃｌ／
Ｎｕが９８％変換された後、加水分解によるＤ−フェニ
ルグリシン生産に対するセファクロルの合成生産の選択
性（モル比）は４．１２で、ポリアクリル酸オキシラン
ビーズ上に担持されたＰＧＡの場合３．５６であった。
ロル １１．６９ｇ（４９．８２ｍｍｏｌ）の３−クロロ−７
−アミノデスアセトキシセファロスポラン酸（３Ｃｌ／
Ｎｕ）及び１５．２２ｇ（１０１．４７ｍｍｏｌ）のＤ
−フェニルグリシンアミド（ＦＧＡ）を、総量が１９６
ｍｌになるようにＨ2Ｏに溶解した。次いで、同じ反応
容器中の該溶液に８ｇ（５５．４４ｍｍｏｌ）の微粉砕
β−ナフトールを加えた。以下の条件下に、実施例１で
調製したペニシリンＧアミダーゼ（ＰＧＡ）２１．２ｇ
（３７００Ｉ．Ｕ．）を用いてアシル化を行った：温度
１０℃で４Ｎの硫酸を用いてｐＨを６．８に一定に維持
した。約２時間後、３Ｃｌ／Ｎｕの９８％が、β−ナフ
トールとの複合体であるセファクロル［７−（Ｄ−２−
アミノ−２−フェニルアセトアミド）−３−クロロ−３
−セフェム−４−カルボン酸］に変換された。３Ｃｌ／
Ｎｕが９８％変換された後、加水分解によるＤ−フェニ
ルグリシン生産に対するセファクロルの合成生産の選択
性（モル比）は４．１２で、ポリアクリル酸オキシラン
ビーズ上に担持されたＰＧＡの場合３．５６であった。
【００３８】実施例３ 別の結晶化反応器中で連続的にβ−ナフトールと複合体
を形成したセファクロル ４７．７１ｇ（２０３．３７ｍｍｏｌ）の３Ｃｌ／Ｎｕ
及び８７．３ｇ（５８２．５３ｍｍｏｌ）のＦＧＡを、
総量が１０７０ｍｌになるようにＨ2Ｏに溶解した。次
いで、結晶化反応器に３０ｇ（２０７．９０ｍｍｏｌ）
の微粉砕β−ナフトールを加えた。溶液を、２５ｇ（４
５００Ｉ．Ｕ．）のＰＧＡを用いてアシル化を実施した
酵素化反応器を介して、結晶化反応器に再循環させた。
複合体を濾別し、母液を酵素化反応器に戻して変換を完
了した。該プロセスは以下の条件下に実施した：温度１
０℃で４Ｎの硫酸を用いてｐＨを６．８に一定に維持し
た。約３時間再循環させた後、３Ｃｌ／Ｎｕの９４％
が、結晶化反応器中のβ−ナフトールと複合させたセフ
ァクロルに変換された。３Ｃｌ／Ｎｕの９４％が変換さ
れた後、加水分解によるＤ−フェニルグリシン生産に対
するセファクロルの合成生産の選択性（モル比）は３．
０５で、ポリアクリル酸オキシランビーズ上に担持され
たＰＧＡの場合２．３７であった。
を形成したセファクロル ４７．７１ｇ（２０３．３７ｍｍｏｌ）の３Ｃｌ／Ｎｕ
及び８７．３ｇ（５８２．５３ｍｍｏｌ）のＦＧＡを、
総量が１０７０ｍｌになるようにＨ2Ｏに溶解した。次
いで、結晶化反応器に３０ｇ（２０７．９０ｍｍｏｌ）
の微粉砕β−ナフトールを加えた。溶液を、２５ｇ（４
５００Ｉ．Ｕ．）のＰＧＡを用いてアシル化を実施した
酵素化反応器を介して、結晶化反応器に再循環させた。
複合体を濾別し、母液を酵素化反応器に戻して変換を完
了した。該プロセスは以下の条件下に実施した：温度１
０℃で４Ｎの硫酸を用いてｐＨを６．８に一定に維持し
た。約３時間再循環させた後、３Ｃｌ／Ｎｕの９４％
が、結晶化反応器中のβ−ナフトールと複合させたセフ
ァクロルに変換された。３Ｃｌ／Ｎｕの９４％が変換さ
れた後、加水分解によるＤ−フェニルグリシン生産に対
するセファクロルの合成生産の選択性（モル比）は３．
０５で、ポリアクリル酸オキシランビーズ上に担持され
たＰＧＡの場合２．３７であった。
【００３９】実施例４ 別の反応器中で連続的に結晶化したセファクロル二水和
物 実施例３と同じ出発溶液を、２５ｇ（４５００Ｉ．
Ｕ．）のＰＧＡを用いてアシル化を実施した酵素化反応
器を介して、セファクロル・２Ｈ2Ｏの沈殿を促進する
ためにｐＨを６．４に下げた結晶化反応器に再循環させ
た。結晶化した生成物を濾別し、母液を酵素化反応器に
戻して変換を完了した。該プロセスは以下の条件下に実
施した：どちらの反応器の場合も、結晶化反応器中温度
２℃で４Ｎの硫酸を用いてｐＨを６．４に一定に維持し
た。約３時間再循環させた後、３Ｃｌ／Ｎｕの９３％が
結晶化反応器中でセファクロル・２Ｈ2Ｏに変換され
た。３Ｃｌ／Ｎｕの９３％が変換された後、加水分解に
よるＤ−フェニルグリシンの生産に対するセファクロル
の合成生産の選択性（モル比）は２．６１で、ポリアク
リル性オキシランビーズ上に担持されたＰＧＡの場合
２．０２であった。
物 実施例３と同じ出発溶液を、２５ｇ（４５００Ｉ．
Ｕ．）のＰＧＡを用いてアシル化を実施した酵素化反応
器を介して、セファクロル・２Ｈ2Ｏの沈殿を促進する
ためにｐＨを６．４に下げた結晶化反応器に再循環させ
た。結晶化した生成物を濾別し、母液を酵素化反応器に
戻して変換を完了した。該プロセスは以下の条件下に実
施した：どちらの反応器の場合も、結晶化反応器中温度
２℃で４Ｎの硫酸を用いてｐＨを６．４に一定に維持し
た。約３時間再循環させた後、３Ｃｌ／Ｎｕの９３％が
結晶化反応器中でセファクロル・２Ｈ2Ｏに変換され
た。３Ｃｌ／Ｎｕの９３％が変換された後、加水分解に
よるＤ−フェニルグリシンの生産に対するセファクロル
の合成生産の選択性（モル比）は２．６１で、ポリアク
リル性オキシランビーズ上に担持されたＰＧＡの場合
２．０２であった。
【００４０】実施例５ 二段階の酵素化及び結晶化におけるＦＧＡを用いた７−
ＡＤＣＡのセファレキシンへのアシル化 ２５．０５ｇ（１１７．０５ｍｍｏｌ）の７−アミノデ
スアセトキシセファロスポラン酸（７−ＡＤＣＡ）、３
０．０５ｇ（１９８．９９ｍｍｏｌ）のＦＧＡを、総量
が４９８ｍｌになるようにＨ2Ｏに溶解した。以下の条
件下に、２１．０ｇ（３７５０Ｉ．Ｕ．）のＰＧＡを用
いてアシル化を実施した：第１段階の初期ｐＨは６．５
７、温度３℃であった。約１時間後、７−ＡＤＣＡの６
１．９％がセファレキシン［７−（Ｄ−２−アミノ−２
−フェニルアセトアミド）−３−メチル−３−セフェム
−４−カルボン酸］のに変換された。セファレキシンの
大部分を濃厚母液から分離し、１１．５０ｇ（７９．７
０ｍｍｏｌ）のβ−ナフトールとの複合体を形成した。
次いで、母液を上記と同じＰＧＡで処理して反応の第２
段階が完了した。約２時間後、完全に両段階が完了した
後で７−ＡＤＣＡの９４．５％がセファレキシンに変換
された。セファレキシンの大部分を第２段階の濃厚液か
ら分離し、７．５０ｇ（５１．９８ｍｍｏｌ）のβ−ナ
フトールとの複合体を形成した。７−ＡＤＣＡの９４．
５％が変換された後、加水分解によるＤ−フェニルグリ
シン生産に対するセファレキシンの合成生産の選択性
（モル比）は２．２７で、ポリアクリル酸オキシランビ
ーズ上に担持されたＰＧＡの場合１．５３であった。
ＡＤＣＡのセファレキシンへのアシル化 ２５．０５ｇ（１１７．０５ｍｍｏｌ）の７−アミノデ
スアセトキシセファロスポラン酸（７−ＡＤＣＡ）、３
０．０５ｇ（１９８．９９ｍｍｏｌ）のＦＧＡを、総量
が４９８ｍｌになるようにＨ2Ｏに溶解した。以下の条
件下に、２１．０ｇ（３７５０Ｉ．Ｕ．）のＰＧＡを用
いてアシル化を実施した：第１段階の初期ｐＨは６．５
７、温度３℃であった。約１時間後、７−ＡＤＣＡの６
１．９％がセファレキシン［７−（Ｄ−２−アミノ−２
−フェニルアセトアミド）−３−メチル−３−セフェム
−４−カルボン酸］のに変換された。セファレキシンの
大部分を濃厚母液から分離し、１１．５０ｇ（７９．７
０ｍｍｏｌ）のβ−ナフトールとの複合体を形成した。
次いで、母液を上記と同じＰＧＡで処理して反応の第２
段階が完了した。約２時間後、完全に両段階が完了した
後で７−ＡＤＣＡの９４．５％がセファレキシンに変換
された。セファレキシンの大部分を第２段階の濃厚液か
ら分離し、７．５０ｇ（５１．９８ｍｍｏｌ）のβ−ナ
フトールとの複合体を形成した。７−ＡＤＣＡの９４．
５％が変換された後、加水分解によるＤ−フェニルグリ
シン生産に対するセファレキシンの合成生産の選択性
（モル比）は２．２７で、ポリアクリル酸オキシランビ
ーズ上に担持されたＰＧＡの場合１．５３であった。
【００４１】実施例６ ＦＧＡを用いた７−アミノ−３−クロロ−カルバセフェ
ム酸のロラカルベフへのアシル化 ３．３２ｇ（１５．３１ｍｍｏｌ）の３−クロロ−７−
アミノカルバセフェム酸（３Ｃｌ／ＣＮｕ）及び８．６
５ｇ（５７．７０ｍｍｏｌ）のＦＧＡを、総量が１９０
ｍｌになるようにＨ2Ｏに溶解した。５ｇ（８９５Ｉ．
Ｕ．）のＰＧＡを用いて以下の条件下にアシル化を実施
した：温度３℃で１Ｎの塩酸を用いてｐＨを６．２に一
定に維持した。約２時間後、３Ｃｌ／ＣＮｕの８９．５
％がロラカルベフ（loracarbef）［７−（Ｄ−２−アミ
ノ−２−フェニルアセトアミド）−３−クロロ−３−カ
ルバセフェム−４−カルボン酸］に変換された。３Ｃｌ
／ＣＮｕの８９．５％が変換された後、加水分解による
Ｄ−フェニルグリシン生産に対するロラカルベフの合成
生産の選択性（モル比）は２．７６で、ポリアクリル酸
オキシランビーズ上に担持されたＰＧＡの場合２．１５
であった。
ム酸のロラカルベフへのアシル化 ３．３２ｇ（１５．３１ｍｍｏｌ）の３−クロロ−７−
アミノカルバセフェム酸（３Ｃｌ／ＣＮｕ）及び８．６
５ｇ（５７．７０ｍｍｏｌ）のＦＧＡを、総量が１９０
ｍｌになるようにＨ2Ｏに溶解した。５ｇ（８９５Ｉ．
Ｕ．）のＰＧＡを用いて以下の条件下にアシル化を実施
した：温度３℃で１Ｎの塩酸を用いてｐＨを６．２に一
定に維持した。約２時間後、３Ｃｌ／ＣＮｕの８９．５
％がロラカルベフ（loracarbef）［７−（Ｄ−２−アミ
ノ−２−フェニルアセトアミド）−３−クロロ−３−カ
ルバセフェム−４−カルボン酸］に変換された。３Ｃｌ
／ＣＮｕの８９．５％が変換された後、加水分解による
Ｄ−フェニルグリシン生産に対するロラカルベフの合成
生産の選択性（モル比）は２．７６で、ポリアクリル酸
オキシランビーズ上に担持されたＰＧＡの場合２．１５
であった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 37/00 Ａ６１Ｋ 31/435 // Ａ６１Ｋ 31/43 31/545 31/435 Ｃ０７Ｄ 471/04 １２２ 31/545 499/02
Claims (4)
- 【請求項１】 式（Ｉ）又は（II） 【化１】 〔式中、ＸはＳ又はＣＨ2であり、Ｒは任意に置換され
た炭化水素６員環であり、Ｒ1は、水素原子、ハロゲン
原子、メチル基、メトキシ基、アルケニルＣ1−Ｃ4基又
は酸素原子、硫黄原子若しくは窒素原子を介して有機基
に結合したメチレン基である〕のペニシリン又はセファ
ロスポリンを製造する方法であって、該方法は、水性媒
体中、−５℃〜＋３５℃の温度で、固定化ペニシリンア
シラーゼ酵素の存在下に、式（IV）又は（V） 【化２】 〔式中、Ｘ及びＲ1は、上記と同義である〕の６−アミ
ノペニシラン酸又は７−アミノセファロスポラン酸と、
式（III） 【化３】 〔式中、Ｒは上記と同義であり、Ｒ2及びＲ3はそれぞれ
独立に、水素又は１〜３個の炭素原子を有する線状若し
くは分枝アルキル基である〕のアミド又はその塩とを、
前記酸（IV）又は（V）１モル当たり前記アミド１．５
〜３モルのモル比で反応させることからなり、前記酵素
がアズラクトンポリマー上に固定化されていることを特
徴とする方法。 - 【請求項２】 前記アミド(III）がＤ−フェニルグリシ
ンアミド又はその有機若しくは無機酸との塩であること
を特徴とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 請求項１又は２の方法により製造された
ペニシリン又はセファロスポリン及び医薬上許容し得る
担体又は希釈剤を含む医薬組成物。 - 【請求項４】 アズラクトンポリマー上に固定化された
ペニシリンアシラーゼ酵素。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT95A000383 | 1995-02-28 | ||
| ITMI950383A IT1274658B (it) | 1995-02-28 | 1995-02-28 | Procedimento enzimatico migliorato per la produzione di penicilline e cefalosporine |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08242884A true JPH08242884A (ja) | 1996-09-24 |
Family
ID=11370726
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8030699A Pending JPH08242884A (ja) | 1995-02-28 | 1996-02-19 | ペニシリン及びセファロスポリンの酵素製造法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0730035A1 (ja) |
| JP (1) | JPH08242884A (ja) |
| KR (1) | KR960031621A (ja) |
| CN (1) | CN1144274A (ja) |
| AU (1) | AU4579896A (ja) |
| BR (1) | BR9600830A (ja) |
| CA (1) | CA2167118A1 (ja) |
| IT (1) | IT1274658B (ja) |
| ZA (2) | ZA961015B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11359224B2 (en) * | 2015-10-07 | 2022-06-14 | Gwangju Institute Of Science And Technology | Enzyme-immobilized porous membrane and preparation method of antibiotics using the same |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2163997B2 (es) * | 1999-10-22 | 2004-07-01 | Universidad Complutense De Madrid | Procedimiento para la inmovilizacion de una nueva penicilina v acilasa de "streptomyces lavendulae" para la obtencion de acido 6-aminopenicilanico. |
| ITMI20030042A1 (it) * | 2003-01-14 | 2004-07-15 | Univ Degli Studi Trieste | Processo di sintesi enzimatica di antibiotici b lattamici. |
| MX2007007937A (es) * | 2004-12-27 | 2007-08-21 | Dsm Ip Assets Bv | Procedimiento para la sintesis de cefaclor. |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2150380B1 (ja) * | 1971-08-20 | 1974-10-04 | Toyo Jozo Kk | |
| IT1045797B (it) * | 1973-12-20 | 1980-06-10 | Snam Progetti | Procedimento per la sintesi enzimatica di penicilline e cefalosporine semisintetiche mediante una acilasi insolubile |
| EP0537255B1 (en) * | 1990-07-04 | 2006-02-15 | DSM IP Assets B.V. | Process for preparation of beta-lactams |
| IT1243800B (it) * | 1990-08-28 | 1994-06-28 | Sclavo Spa | Procedimento migliorato per la preparazione di cefalosporine |
| DE618979T1 (de) * | 1991-12-19 | 1995-05-18 | Novo Nordisk As | Verbesserte methode zur herstellung von bestimmten -g(b)-lactam-antibiotika. |
| EP0565978B1 (de) * | 1992-04-16 | 1997-06-18 | MERCK PATENT GmbH | Aktivierte Trägermaterialien, ihre Herstellung und Verwendung |
| DE4333213A1 (de) * | 1993-09-29 | 1995-03-30 | Merck Patent Gmbh | Immobilisierte Proteinase K |
-
1995
- 1995-02-28 IT ITMI950383A patent/IT1274658B/it active IP Right Grant
- 1995-12-22 EP EP95120490A patent/EP0730035A1/en not_active Ceased
-
1996
- 1996-01-12 CA CA002167118A patent/CA2167118A1/en not_active Abandoned
- 1996-02-08 ZA ZA961015A patent/ZA961015B/xx unknown
- 1996-02-08 ZA ZA961014A patent/ZA961014B/xx unknown
- 1996-02-19 JP JP8030699A patent/JPH08242884A/ja active Pending
- 1996-02-26 CN CN96102535A patent/CN1144274A/zh active Pending
- 1996-02-27 KR KR1019960004719A patent/KR960031621A/ko not_active Application Discontinuation
- 1996-02-27 BR BR9600830A patent/BR9600830A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-02-28 AU AU45798/96A patent/AU4579896A/en not_active Abandoned
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11359224B2 (en) * | 2015-10-07 | 2022-06-14 | Gwangju Institute Of Science And Technology | Enzyme-immobilized porous membrane and preparation method of antibiotics using the same |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0730035A1 (en) | 1996-09-04 |
| IT1274658B (it) | 1997-07-18 |
| ZA961014B (en) | 1996-08-29 |
| BR9600830A (pt) | 1997-12-30 |
| KR960031621A (ko) | 1996-09-17 |
| ITMI950383A1 (it) | 1996-08-28 |
| AU4579896A (en) | 1996-09-05 |
| ITMI950383A0 (it) | 1995-02-28 |
| CA2167118A1 (en) | 1996-08-29 |
| ZA961015B (en) | 1996-08-20 |
| CN1144274A (zh) | 1997-03-05 |
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