JPH08231401A

JPH08231401A - マラリアの予防または治療薬

Info

Publication number: JPH08231401A
Application number: JP8015294A
Authority: JP
Inventors: Constance Elizabeth Medlen; エリザベスメドレンコンスタンス; Ronald Anderson; アンダーソンロナルド
Original assignee: Adcock Ingram Ltd
Current assignee: Adcock Ingram Ltd
Priority date: 1995-01-31
Filing date: 1996-01-31
Publication date: 1996-09-10
Also published as: AP603A; AU4219096A; KR960028909A; CA2168139A1; ZA96588B; AU704048B2; AP9600778A0; US5763442A; EP0729757A1

Abstract

(57)【要約】【課題】【解決手段】本発明は、寄生虫感染治療のための医薬
品の製造におけるリミノフェナジンの使用を提供する。
クロロキンまたはメフロキンなどの公知の抗マラリア薬
も投与することができる。リミノフェナジンは下記一般
式（Ｉ）の化合物である。【化１】（式中、Ｒ¹は水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、
アルコキシ基およびトリフルオロメチル基から選択さ
れ；Ｒ²は水素原子またはハロゲン原子から選択され；
Ｒ³は水素原子、アルキル基、置換アルキル基、シクロ
アルキル基、シクロアルキルアルキル基、未置換複素環
基、置換複素環基、未置換複素環アルキル基および置換
複素環アルキル基から選択される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、駆虫活性；寄生虫
に対して使用される治療ならびに物質または組成物；な
らびに、寄生虫に対する予防または治療用の医薬品の製
造における物質または組成物の使用に関する。

【０００２】

【発明が解決しようとする課題】寄生虫によって起こる
治療上の問題は、寄生虫が患者治療に使用される医薬品
に対して耐性となることである。その耐性は生来のもの
であったり、あるいは後天的に獲得される場合もある。
マラリアが流行している諸国で生じている世界的問題
は、マラリアの予防または治療に使用されてきた医薬品
に対する抵抗性が強くなっているという点である。

【０００３】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、リミノフ
ェナジン（ｒｉｍｉｎｏｐｈｅｎａｚｉｎｅ）が、マラ
リアなどの寄生虫によって生じる疾病に対しての予防ま
たは治療活性を有することを見いだした。そこで、本発
明は、寄生虫によって生じる感染の治療に使用される物
質または組成物であって、リミノフェナジンまたはリミ
ノフェナジンを含有する組成物を提供する。その物質ま
たは組成物は、予防および／または治療に使用すること
ができる。

【０００４】本発明はさらに、蚊などの飛翔昆虫が媒介
するマラリア等の寄生虫によって生じる感染を治療する
ための医薬品の製造におけるリミノフェナジンの使用を
も提供する。

【０００５】本発明はさらに、寄生虫によって生じるヒ
トまたは動物の身体の感染の予防および／または治療の
方法であって、ヒトまたは動物の身体への有効量のリミ
ノフェナジン投与を有してなる方法をも提供するもので
ある。

【０００６】リミノフェナジンは、ベンゼン環の一つに
置換イミノ基を有するフェナジンである。そのイミノ基
が、２位（または命名法によっては３位）にあって、フ
ェナジンの窒素原子が５位および１０位にあるものを好
適なものとして挙げることができる。イミノ基を有する
ベンゼン環と同じベンゼン環にアミノ基をも有するもの
が好適であり、そのアミノ基が３位（または命名法によ
っては２位）にあるものが好ましい。好ましいリミノフ
ェナジンとしては、２−（置換イミノ）−３−（置換ア
ミノ）−１０−アリール基（使用する命名法によって
は、３−（置換イミノ）−２−（置換アミノ）−１０−
アリール基）を有し、適宜に７位または８位にさらに置
換基を有するものが挙げられる。それはすなわち、下記
（Ｉ）の一般式の化合物である。

【０００７】

【化２】ケミカルアブストラクツで使用されている命名法に従う
と、そのような化合物の名称は、７−（Ｒ²）−３−
（Ｒ⁴ _n−アニリノ）−１０−（Ｒ¹ _n−フェニル）−２，
１０−ジヒドロ−２−（Ｒ³−イミノ）−フェナジンと
なる。

【０００８】

【発明の実施の形態】リミノフェナジンは、酸付加塩な
どの医薬的に許容される塩の形で本発明に使用すること
ができる。

【０００９】一般式（Ｉ）において、Ｒ¹は水素原子、
ハロゲン原子、アルキル基、アルコキシ基またはトリフ
ルオロメチル基であり、Ｒ²は水素原子またはハロゲン
原子であり、Ｒ³は水素原子、アルキル基、置換アルキ
ル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、
あるいは置換または未置換の複素環基または複素環アル
キル基から選択され、Ｒ⁴は水素原子、ハロゲン原子、
アルキル基、アルコキシ基またはトリフルオロメチル基
であり、ｎは１、２または３である。

【００１０】例えば、Ｒ¹およびＲ⁴としては、水素原
子、塩素原子、メチル基、イソプロピル基、メトキシ基
またはトリフルオロメチル基を挙げることができる。Ｒ
¹およびＲ⁴の置換位置としては、３位および／または４
位が好ましい。ｎが２または３である場合、１つのフェ
ニル基に複数の置換基が置換されるが、同一フェニル基
上の複数の置換基は同一でも異なっていてもよい。例え
ば、ｎが２であり、２個のＲ¹が同一フェニル基のベン
ゼン環にあるとき、２つのＲ¹は同一でも、異なってい
てもよい。Ｒ²は、好ましくは水素原子または塩素原子
である。

【００１１】上記式（Ｉ）におけるＲ³としては、例え
ば水素原子、Ｃ₁〜Ｃ₄の低級アルキル基（例えば、メチ
ル基、エチル基、ｎ−プロピル基またはイソプロピル
基）、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペン
チル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、メチル
シクロヘキシル基、ヒドロキシシクロヘキシル基、シク
ロオクチル基、シクロドデシル基、Ｎ，Ｎ−ジアルキル
アミノアルキル基、シクロヘキシルメチル基、ピペリジ
ル基、アルキル置換ピペリジル基またはベンジル置換ピ
ペリジル基などを挙げることができる。

【００１２】上記式（Ｉ）中のＲ³としては、テトラメ
チルピペリジル（ＴＭＰ）基、例えば４−ＴＭＰ基（す
なわち４−（２，２，６，６−テトラメチルピペリジル
基）が好ましい。Ｒ³に関して他の好ましい基として
は、シクロヘキシル基およびＮ，Ｎ−ジエチルアミノプ
ロピル基がある。

【００１３】一般式（Ｉ）の化合物は、寄生虫によって
生じるヒトまたは動物の身体の感染、特にマラリアの治
療法に使用することができる。リミノフェナジンは、そ
のような感染の予防および治療に使用することができ
る。

【００１４】本発明は、特に、寄生虫によって生じる感
染、特にマラリア感染の治療のための医薬品の製造にお
ける式（Ｉ）の化合物の使用を提供するものである。リ
ミノフェナジンは単独でまたは駆虫活性を有する他の化
合物との併用で使用することができる。そのような治療
は、リミノフェナジンと別の駆虫性化合物とを含有する
単一の組成物によって、あるいは一方がリミノフェナジ
ンを含有する組成物で他方が別の駆虫性化合物を含有す
る組成物という別々の組成物によって行うことができ
る。

【００１５】従って本発明はさらに、（ａ）リミノフェ
ナジンおよび（ｂ）別の駆虫性化合物を含有してなる医
薬組成物をも提供する。キャリアや希釈剤があってもよ
い。

【００１６】駆虫性化合物の例としては、マラリアの治
療または予防に使用される化合物があり、例えば、クロ
ロキン（すなわち、７−クロロ−４−キノリニル−
Ｎ’，Ｎ’−ジエチル−１，４−ペンタンジアミン）お
よびメフロキン（すなわち、（Ｒ，Ｓ）（±）α−２−
ピペリジニル−２，８−ビス（トリフルオロメチル）−
４−キノリンメタノール塩酸塩）などである。

【００１７】従って本発明は特に、リミノフェナジンと
クロロキンまたはメフロキンの混合物とさらに医薬用キ
ャリアまたは希釈剤を含有する医薬組成物を含むもので
ある。

【００１８】その組成物は、例えば錠剤、カプセル、溶
液、無菌溶液などの適切な形のものであることができ
る。それの投与は、経口、静注、経皮その他の適切な方
法で行うことができる。代表的な組成物には、１以上の
不活性キャリアとともに、有効成分を約５０〜２０００
ｍｇ含有させることができ、通常は１００〜６００ｍ
ｇ、例えば１５０〜３００ｍｇ含有させることができ
る。当業界で知られている適切なキャリアを使用するこ
とができる。予防用には、平均的な成人の場合で、リミ
ノフェナジンは、１週間あたり約５〜３０ｍｇ／ｋｇと
なるような１日の用量で投与することができ、通常は１
週間あたり１０〜２０ｍｇ／ｋｇとなるような１日の用
量で投与することができる。治療の場合、用量をかなり
上昇させて、例えば１日当たり１００〜２００ｍｇの量
とすることができる。

【００１９】その組成物中のリミノフェナジンは、好ま
しくは前記式（Ｉ）のもので、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴およ
びｎは前記と同じ意味を持つものである。

【００２０】上記式（Ｉ）において好ましいＲ¹および
Ｒ⁴の例としては、水素原子、塩素原子、メチル基およ
びトリフルオロメチル基がある。好ましいＲ²の例とし
ては、水素原子および塩素原子がある。好ましいＲ³の
例としては、ＴＭＰ、ピペリジル基、水素原子、アルキ
ル基、シクロアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基
およびアルキルシクロアルキル基などである。

【００２１】上記一般式（Ｉ）のリミノフェナジンの多
くが公知の化合物であり、その合成については、例えば
南アフリカ特許第５７／１２４９号および第５７／３２
６６号などの文献に記述されている。それ以外にも、リ
ミノフェナジンの製造に関する文献に記述の他の一般的
製造方法に従って製造することができる。

【００２２】例えば、一般式（II）の１−アニリノ−２
−ニトロベンゼンを、例えばパラジウム炭素触媒の存在
下に水素によって、あるいは亜鉛と酢酸の系で還元し
て、一般式（III）の対応する１−アニリノ−２−アミ
ノベンゼン（すなわち、２−アミノ−ジフェニルアミ
ン）を生成することができる。なお、それらの式中、Ｒ
¹、Ｒ²およびｎは、上記で定義した意味を有する。４０
〜５５℃の温度での加熱が使用できる。

【００２３】

【化３】

【００２４】

【化４】式（III）のジフェニルアミンを、例えば塩化第二鉄と
濃塩酸または酢酸を用いて酸化的に縮合して、一般式
（IV）のリミノフェナジンすなわち式（Ｉ）の化合物で
Ｒ³が水素のものを生成することができる。溶媒として
はエチルアルコールを使用することができる。好ましく
は１５℃以下の室温で撹拌する。

【００２５】

【化５】一般式（Ｉ）の他のリミノフェナジンは、Ｒ³−ＮＨ₂で
表されるアミンとの反応によって一般式（IV）のリミノ
フェナジンから生成することができる。ジオキサン溶液
で、反応系を３〜５時間還流させる必要がある場合があ
る。

【００２６】原料である１−アニリノ−２−ニトロベン
ゼンは、５位にＲ²基を有する２−ハロ−ニトロベンゼ
ンを、フェニル基のベンゼン環にＲ¹置換基を有する置
換アニリンと反応させることによって得ることができ
る。その反応は、反応系のジメチルホルムアミド溶液を
沸騰させながら、無水炭酸カリウムの存在下に行うこと
ができる。

【００２７】一般式（Ｉ）の化合物の具体的な例を以下
の表１〜表３に示した。

【００２８】

【表１】

【００２９】

【表２】

【００３０】

【表３】以上の表において、Ｒ³が4'-TMPの場合、TMP基は4-(2,
2,6,6-テトラメチルピペリジン）基であり、Meはメチル
基の略称として使用されたものである。また、基名の前
の番号は置換位置を示す。

【００３１】表１〜３の化合物のいくつかの化学名を以
下に示す。Ｂ６６３Ｎ，５−ビス−（４−クロロフェニル）−３，５−ジヒ
ドロ−３−［（１−メチルエチル）イミノ］−２−フェ
ナジンアミン；Ｂ６６９Ｎ，５−ビス（フェニル）−３，５−ジヒドロ−３−
（シクロヘキシルイミノ）−２−フェナジンアミン；Ｂ７９６Ｎ，５−ビス−フェニル−３，５−ジヒドロ−３−（シ
クロペンチルイミノ）−２−フェナジンアミン；Ｂ３６７７Ｎ，５−ビス（４−メチルフェニル）−３，５−ジヒド
ロ−３−（シクロヘキシルイミノ）−２−フェナジンア
ミン；Ｂ３７６３Ｎ，５−ビス（フェニル）−３，５−ジヒドロ−３−
［（シクロヘキシルメチル）イミノ］−２−フェナジン
アミン；Ｂ３７７９Ｎ，５−ビス（４−クロロフェニル）−３，５−ジヒド
ロ−３−［（４−ジエチルアミノ−２−メチルブチル）
イミノ］−２−フェナジンアミン；Ｂ３９６２Ｎ，５−ビス（フェニル）−３，５−ジヒドロ−３−
［（２’，２’，６’，６’−テトラメチル−４−ピペ
リジル）イミノ］−２−フェナジンアミン；Ｂ４０７０Ｎ，５−ビス（４−メチルフェニル）−３，５−ジヒド
ロ−３−［（４−ピペリジル）イミノ］−２−フェナジ
ンアミン；Ｂ４１００Ｎ，５−ビス（３，４−ジクロロフェニル）−３，５−
ジヒドロ−３−［（２’，２’，６’，６’−テトラメ
チル−４−ピペリジル）イミノ］−２−フェナジンアミ
ン；Ｂ４１０３Ｎ，５−ビス（４−トリフルオロメチルフェニル）−
３，５−ジヒドロ−３−［（２’，２’，６’，６’−
テトラメチル−４−ピペリジル）イミノ］−２−フェナ
ジンアミン；Ｂ４１０４Ｎ，５−ビス（４−クロロフェニル）−８−クロロ−
３，５−ジヒドロ−３−（シクロヘキシルイミノ）−２
−フェナジンアミン；Ｂ４１１２Ｎ，５−ビス（３−クロロフェニル）−３，５−ジヒド
ロ−３−［（２’，２’，６’，６’−テトラメチル−
４−ピペリジル）イミノ］−２−フェナジンアミン；Ｂ４１２１Ｎ，５−ビス（３，５−ジクロロフェニル）−３，５−
ジヒドロ−３−［（２’，２’，６’，６’−テトラメ
チル−４−ピペリジル）イミノ］−２−フェナジンアミ
ン；Ｂ４１２３Ｎ，５−ビス（３−クロロフェニル）−８−クロロ−
３，５−ジヒドロ−３−［（２’，２’，６’，６’−
テトラメチル−４−ピペリジル）イミノ］−２−フェナ
ジンアミン；Ｂ４１２６Ｎ，５−ビス（３−トリフルオロメチル−４−フェニ
ル）−３，５−ジヒドロ−３−［（２’，２’，６’，
６’−テトラメチル−４−ピペリジル）イミノ］−２−
フェナジンアミン；Ｂ４１２７Ｎ，５−ビス（３−トリフルオロメチルフェニル）−８
−クロロ−３，５−ジヒドロ−３−［（２’，２’，
６’，６’−テトラメチル−４−ピペリジル）イミノ］
−２−フェナジンアミン；Ｂ４１５４Ｎ，５−ビス（３，４−ジクロロフェニル）−３，５−
ジヒドロ−３−［（３’−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）
−プロピルイミノ］−２−フェナジンアミン；Ｂ４１５８Ｎ，５−ビス（４−イソプロピルフェニル）−３，５−
ジヒドロ−３−［（２’，２’，６’，６’−テトラメ
チル−４−ピペリジル）イミノ］−２−フェナジンアミ
ン；Ｂ４１５９Ｎ，５−ビス（４−イソプロピルフェニル）−８−クロ
ロ−３，５−ジヒドロ−３−［（２’，２’，６’，
６’−テトラメチル−４−ピペリジル）イミノ］−２−
フェナジンアミン；Ｂ４１６３Ｎ，５−ビス［（３−トリフルオロメチル）−４−クロ
ロフェニル］−３，５−ジヒドロ−３−［（２’，
２’，６’，６’−テトラメチルピペリジル）イミノ］
−２−フェナジンアミン；Ｂ４１６６Ｎ，５−ビス（フェニル）−３，５−ジヒドロ−３−
（クロロオクチルイミノ）−２−フェナジンアミン；Ｂ４１６９Ｎ，５−ビス（３，４，５−トリクロロフェニル）−
３，５−ジヒドロ−３−［（２’，２’，６’，６’−
テトラメチル−４−ピペリジル）イミノ］−２−フェナ
ジンアミン；Ｂ４１７０Ｎ，５−ビス（フェニル）−３，５−ジヒドロ−３−
（シクロプロピルイミノ）−２−フェナジンアミン；Ｂ４１７１Ｎ，５−ビス（フェニル）−３，５−ジヒドロ−３−
（シクロドデシルイミノ）−２−フェナジンアミン；Ｂ４１７２Ｎ，５−ビス（フェニル）−３，５−ジヒドロ−３−
（シクロブチルイミノ）−２−フェナジンアミン；Ｂ４１７３Ｎ，５−ビス（フェニル）−３，５−ジヒドロ−３−
［４’−（Ｎ−ベンジルピペリジル）イミノ）−２−フ
ェナジンアミン；Ｂ４１７４Ｎ，５−ビス（４−メトキシフェニル）−３，５−ジヒ
ドロ−３−［（２’，２’，６’，６’−テトラメチル
−４−ピペリジル）イミノ］−２−フェナジンアミン；Ｂ４１７５Ｎ，５−ビス（３，４−ジクロロフェニル）−３，５−
ジヒドロ−３−（シクロヘキシルイミノ）−２−フェナ
ジンアミン寄生虫に感染したヒト赤血球を上記一般式（Ｉ）の化合
物で処理すると、寄生虫の駆虫性化合物に対する耐性の
反転（低下）、および／または駆虫活性、特に抗マラリ
ア活性を得るこができる。さらに、感染していないヒト
に上記一般式（Ｉ）の化合物を投与することによって、
寄生虫による感染に対する予防がなされる。

【００３２】理論にとらわれずに見ると、式（Ｉ）の化
合物の驚くべき活性について考えられる理由としては、
リミノフェナジン介在によるＰＬＡ₂（すなわち、ホス
ホリポーゼＡ₂）活性の増強とＰ−糖蛋白のＡＴＰａｓ
ｅの阻害との間に何らかの関係があるか、あるいはＮａ
⁺、Ｋ⁺、ＡＴＰａｓｅ活性の長期阻害後の細胞ＡＴＰ欠
乏の二次的結果としてＰ−糖蛋白の阻害が生じるという
ものがあり得る。そこで、主としてＰＬＡ₂の活性化と
それによるリソホスホ脂質介在によるＰ−糖蛋白のＡＴ
Ｐａｓｅ活性阻害を介して、駆虫薬に対する耐性獲得と
逆の現象が生じるものと考えられる。それらのいずれの
機序も作用している可能性がある。

【００３３】上記式（Ｉ）のリミノフェナジンは、イミ
ノ基を有している。それらの化合物は予想通り無毒性で
あり、in vitroで投与した場合に、強力な耐性変更活性
を有する。本発明者らは、それらの化合物が多剤耐性
（ｍｕｌｔｉ−ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）を獲
得した細胞系における薬剤ポンプ活性を不活化すること
を認めている。

【００３４】上記一般式（Ｉ）の化合物は、おおむね無
毒性であるとともに、発癌性も骨髄抑制性も持たない。
それらの化合物は、直接の抗腫瘍活性とともに、多剤耐
性変更力も有するものである。

【００３５】マラリア原虫Plasmodium falcipariumに対
して良好な予防または治療活性を示しているリミノフェ
ナジンの代表的な具体例としては、Ｂ４１１２、すなわ
ちＮ，５−ビス（３−クロロフェニル）−３，５−ジヒ
ドロ−３−（４’−ＴＭＰ−イミノ）−２−フェナジン
アミン；Ｂ４１５８、すなわちＮ，５−ビス（４−イソ
プロピルフェニル）−３，５−ジヒドロ−３−（４’−
ＴＭＰ−イミノ］−２−フェナジンアミン；Ｂ４１２
１、すなわちＮ，５−ビス（３，５−ジクロロフェニ
ル）−３，５−ジヒドロ−３−（４’−ＴＭＰ−イミ
ノ）−２−フェナジンアミン；Ｂ４１００、すなわち
Ｎ，５−ビス（３，４−ジクロロフェニル）−３，５−
ジヒドロ−３−（４’−ＴＭＰ−イミノ）−２−フェナ
ジンアミン；およびＢ６６９、すなわちＮ，５−ビス
（フェニル）−３，５−ジヒドロ−３−（シクロヘキシ
ルイミノ）−２−フェナジンアミンを挙げることができ
る。

【００３６】以下の実施例で得られている実験結果の一
部を、図面に示しているが、そのうちの図１は、実施例
３に記載の実験における、クロロキン濃度に対するPlas
modium falciparumの薬剤耐性の阻害率（パーセント）
を示すグラフである。

【００３７】さらに図２は、実施例４に記載の実験にお
けるリミノフェナジン濃度に対するPlasomdium falcipa
rumの薬剤耐性の阻害率（パーセント）を示すグラフで
ある。それは、その実施例で使用したリミノフェナジン
が直接的な抗マラリア活性を持つことを示している。

【００３８】

【実施例】以下、実施例によって本発明を説明するが、
本発明はそれら実施例に限定されるものではない。実施例１Ｂ６６９によるPlasmodium falciparumのクロロキン耐
性の低下Ｂ６６９は、Ｎ，５−ビス（フェニル）−３，５−ジヒ
ドロ−３−（シクロヘキシルイミノ）−２−フェナジン
アミンである。

【００３９】マラリア原虫によるクロロキンに対する耐
性には、末端がＰｇＨ1である一種のＰ−糖蛋白相同蛋
白が介在していると考えられ、それは哺乳類の薬剤流注
ポンプ（ｄｒｕｇａｆｆｌｕｘｐｕｍｐ：多剤耐性
癌細胞系に存在するＭＤＲ−Ｉ）と類似している。その
種の耐性は、カルシウムチャンネル遮断薬であるベラパ
ミルによって低下し得るものである。しかしながら、in
vitroでその種の耐性を低下させる上で必要な用量のそ
のカルシウムチャンネル遮断薬によって、in vivoでは
重大な副作用が生じる。

【００４０】Plasmodium falciparumにおけるクロロキ
ン耐性を低下させるリミノフェナジンの活性を、以下の
ようにして調べた。（方法）P.falciparumの２つの実験室株（ＲＢ−１およ
びＦａｂ−９）を用いて、一連の予備実験を実施した。
それらの菌株は、ダーバンのメディカル・リサーチ・カ
ウンシル（Medical Research Council）から入手したも
のであり、それらはそこでクロロキンに対して軽い耐性
ないし感受性（薬剤の作用が及ぶこと）を有すると特性
決定されている。それらの単離株は、公知の方法にて
（Freese JA, Markus MBおよびGolenser J, 1991; Bull
etin of the World Health Organization 69:707-712に
記載のように）懸濁培地で維持した。

【００４１】感染赤血球をヒトＯ陽性赤血球で希釈し
て、０．２〜０．９％の寄生虫血症とし、４４ｍｇ／Ｌ
のヒポキサンチンおよび１０％のヒトＯ型血清を含有す
るＲＰＭＩに３％で懸濁させた。その懸濁液の少量（１
００μｌ）ずつを９６ウエルのマイクロタイタープレー
トのウエルに分注した。それらの懸濁液に、クロロキン
またはＢ６６９のいずれかを単独で含有するかあるいは
それらを両方含有する培地１００μｌを加えた。最終薬
剤濃度は、クロロキンについては３１、６２、１２５、
２５０、５００および１０００ｎＭとし、Ｂ６６９につ
いては０．１２５、０．２５、０．５および１．０μｇ
／ｍｌとした。相当する溶媒対照を設けた。そのプレー
トを５％Ｏ₂、５％ＣＯ₂および９０％Ｎ₂の組成の気体
が充填されたデシケータ中で、３８℃にて２４時間イン
キュベートした。各ウエルからのサンプルを用いて薄層
血液標本を得て、ギームザ染色液で染色し、少なくとも
１つの寄生虫が感染した赤血球のパーセントを顕微鏡的
に求めた。（結果）溶媒系は、感染細胞のパーセントに影響しなか
った。Ｂ６６９単独の場合、１．０μｇ／ｍｌで、いず
れの菌株にも直接の効果があった。寄生虫血症のパーセ
ントは、未処理対照系の場合と差がなかったが、その濃
度では寄生虫の形態悪化が認められた（下記の表４に示
した通り）。しかしながら、その被験薬（Ｂ６６９）に
よって、クロロキンに対するクロロキン感受性株の感受
性上昇はなかった（表４）。それに対して、クロロキン
耐性株の場合、５００ｎＭのクロロキンに対する感受性
は０．２５μｇ／ｍｌのＢ６６９存在下に３倍まで上昇
し（下記の表５参照）、１２５ｎＭのクロロキンに対し
ては０．１２５μｇ／ｍｌのＢ６６９存在下に２倍まで
上昇した。それらの表において、ｎｄは測定しなかった
ことを表す。（結論）本試験の結果は、クロロキン耐性マラリアの治
療またはそれに対する予防において、リミノフェナジン
を使用できることを示していた。

【００４２】

【表４】 *：寄生虫の形態が異常。

【００４３】

【表５】 *：寄生虫の形態が異常。

【００４４】実施例２Ｂ６６９によるPlasmodium falciparumのクロロキン耐
性の低下顕微鏡観察で認められた実施例１に詳細に記載
した結果についての確認を、以下の実験により行った。（方法）この実験でもやはり、実施例１で使用したもの
と同じ２つのP.falciparum株（ＲＢ−１およびＦａｂ−
９）を用いた。感染赤血球をヒトＯ陽性赤血球で希釈し
て、０．２〜０．９％の寄生虫血症とし、４４ｍｇ／Ｌ
のヒポキサンチンおよび１０％のヒト型血清を含有する
ＲＰＭＩに３％で懸濁させた。その懸濁液の少量（１０
０μｌ）ずつを９６ウエルマイクロタイタープレートの
ウエルに分注した。それらの懸濁液に、クロロキンまた
はＢ６６９のいずれかを単独で含有するかあるいはクロ
ロキンとＢ６６９を両方含有する培地１００μｌを加え
た。相当する溶媒対照を設けた。プレートは非感染赤血
球を用いた陰性対照ウエルも含む。そのプレートを５％
Ｏ₂、５％ＣＯ₂および９０％Ｎ₂の組成の気体が充填さ
れたデシケータ中で、３８℃にてインキュベートした。
２４時間後、各ウエルの培地１００μｌを、１０％のヒ
ト血清および０．５μＣｉの³Ｈ−ヒポキサンチンを含
有しヒポキサンチンを含有しない培地１００μｌと入れ
換え、さらに１８時間インキュベートした。次に、ウエ
ルの内容物をガラスファイバーフィルターで濾取した。
そのフィルターを蒸留水で洗浄し、乾燥後、ヘモグロビ
ンを重炭酸ナトリウム溶液に溶かし、シンチレーション
液４ｍｌの入ったシンチレーションバイアルに入れて、
液体シンチレーションカウンターで５分間カウントし
た。（結果）阻害パーセントを、以下のように計算した。

【００４５】

【数１】阻害パーセント＝１００−［｛ＣＰＭ（薬剤処
理細胞）−ＣＰＭ（陰性対照）｝／｛ＣＰＭ（未処理細
胞）−ＣＰＭ（陰性対照）｝×１００この式中、ＣＰＭは、各処理についての１分当たりカウ
ント数の２回の測定値の平均である。阻害パーセントを
以下の表６および表７に示した。

【００４６】

【表６】

【００４７】

【表７】溶媒系は感染細胞のパーセントに影響しなかった。表６
からわかる通り、クロロキン感受性株（Ｆａｂ−９）だ
けがＢ６６９単独処理（０．１２５〜１．０μｇ／ｍ
ｌ）に対して感受性であって、被験薬（Ｂ６６９）はク
ロロキンに対するＲＢ−１株の感受性を上昇させなかっ
た。表７からわかる通り、クロロキン耐性株の場合、２
５０ｎＭのクロロキンに対する感受性は、０．１２５〜
０．５μｇ／ｍｌのＢ６６９存在下で３倍まで上昇し、
１２５ｎＭのクロロキンに対する感受性は、０．５およ
び１．０μｇ／ｍｌのＢ６６９存在下で１０倍まで上昇
した。被験薬の効果は、３１ｎＭおよび６２ｎＭという
低濃度のクロロキンの場合でも認められた。（考察）以上の結果は、実施例１の顕微鏡観察法で得ら
れた結果とともに、リミノフェナジンがマラリアにおけ
るクロロキン耐性を低下させる能力を有することを示し
ている。Ｂ６６９は、特にP.falciparumのクロロキン感
受性株の場合に、直接的な抗マラリア活性も有してい
た。実施例３Ｂ４１１２による、Plasmodium falciparumにおけるク
ロロキン耐性の低下Ｂ４１１２が持つPlasmodium falciparumのクロロキン
耐性の低下活性について調べるため、以下の実験を行っ
た。（方法）P.falciparumのクロロキン耐性株（ＦＡＣ８）
を、ケープタウン大学のP.Smith博士から入手した（元
々は、オーストラリアのビクトリアにあるRoyal Melbou
rne HospitalのA.F.Cowman博士からのもの）。

【００４８】マラリア感染赤血球（環状期）を、ヒトＯ
陽性赤血球と４４ｍｇ／Ｌのヒポキサンチンおよび１０
％のヒトＡ型血清を含有するＲＰＭＩとで希釈して、２
％の寄生虫血症とし、ヘマトクリット値を５％とした。
その懸濁液を９６ウエルマイクロタイター培養プレート
に入れ、５％Ｏ₂、５％ＣＯ₂および９０％Ｎ₂の組成の
気体が充填されたデシケータ中で、６１〜５００ｎＭの
クロロキンの濃度シリーズとともに、一定濃度のＢ４１
１２（１００ｎｇ／ｍｌ）の存在下またはＢ４１１２不
在下に４８時間インキュベートした。相当する溶媒対照
を設けた。

【００４９】インキュベート期間終了後、各ウエルから
培地１００μｌを抜き取り、それに代えて１０ｍＭのト
リス、１０ｍＭのナトリウムアジドおよび１５０ｍＭの
ＮａＣｌを含む固定液を加えた。そのプレートを４℃で
終夜保存してから、各ウエルから得た２５μｌずつを、
濃度０．２５μｇ／ｍｌのチアゾールオレンジのリン酸
緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）０．５ｍｌによって試験管中
で染色した。室温（暗所）で１時間インキュベートした
後、試験管を氷上に置き、Coulter Epics Profile II
（Coulter Electronics Ltd, Hialeah, PLA, USA）を用
いて、フローサイトメトリーによって、寄生虫血症のレ
ベルを求めた。（結果）溶媒系は感染細胞のパーセントに影響しなかっ
た。クロロキン自体は、濃度２５０ｎＭ以上で寄生虫の
成長を阻害したが（図１）、Ｂ４１１２自体は１００ｎ
ｇ／ｍｌで寄生虫成長を２７％まで阻害した。しかしな
がら、Ｂ４１１２（１００ｎｇ／ｍｌ）は、図１でわか
るように、このP.falciparum株の１２５ｎＭクロロキン
に対する感受性を３３〜１００％に上昇させた。（結論）この実験において、Ｂ４１１２およびクロロキ
ンが相乗的に相互作用することは明らかである。

【００５０】実施例４リミノフェナジンの直接的な抗マラリア活性以下の実験を行って、リミノフェナジンであるＢ６６
９、Ｂ４１００、Ｂ４１０３、Ｂ４１１２、Ｂ４１２
１、Ｂ４１５８およびＢ４１６９の実験用P.falciparum
株に対する直接的な抗マラリア活性について調べた。（方法）実験用P.falciparum株（ＲＢ−１；ダーバンの
ＭＲＣのNational Malaria Research ProgrammeのB.L.S
harp博士から入手したもの）を維持した。

【００５１】これらの実験においては、ヘマトクリット
値５．０％および初期寄生虫血症２．０％の培養マラリ
ア病原体を使用した。マラリア感染赤血球（環状期）
を、マイクロタイタープレートで、Ｂ６６９、Ｂ４１０
０、Ｂ４１０３、Ｂ４１１２、Ｂ４１２１、Ｂ４１５８
およびＢ４１６９の各々の濃度シリーズ（０．１２５〜
２μｇ／ｍｌ）とともに４８時間インキュベートし、処
理を施して、実施例３に記載のように、フローサイトメ
ーターで分析を行った。（結果）P.faliparumの増殖に対するＢ６６９、Ｂ４１
００、Ｂ４１０３、Ｂ４１１２、Ｂ４１２１、Ｂ４１５
８およびＢ４１６９の効果は、図２から知ることができ
る。Ｂ６６９、Ｂ４１０３、Ｂ４１１２およびＢ４１５
８は、濃度０．５μｇ／ｍｌで、そのマラリア原虫株の
増殖を５０％を超える率で阻害し、その濃度での活性順
位は、図２からわかる通り、Ｂ４１５８＞Ｂ４１１２＞
Ｂ４１０３＞Ｂ６６９であった。（結論）以上の結果もやはり、クロロキン耐性マラリア
の予防処置に、フィミノフェナジン、特にＢ４１５８お
よびＢ４１１２を使用できることを示している。

【００５２】実施例５本発明の組成物のいくつかは、以下のようにして調製さ
れる。

【００５３】

【表８】

【００５４】

【表９】

【００５５】

【表１０】

【００５６】

【表１１】

【００５７】

【発明の効果】本発明によって、寄生虫病原体における
薬剤耐性を低減化可能な薬剤、なかでも対マラリアの予
防または治療用の薬剤を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例３で得られた寄生虫血症のレベルについ
ての結果を示す図である。

【図２】実施例４で得られた寄生虫血症のレベルについ
ての結果を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ロナルドアンダーソン南アフリカ共和国 0041 プレトリアザウィロウズフュールクリップストリート 506

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】リミノフェナジンを有効成分として含有
するマラリア予防または治療薬。
【請求項２】リミノフェナジンが下記式（Ｉ）の化合
物である請求項１記載のマラリア予防または治療薬。【化１】（式中、Ｒ¹は水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、
アルコキシ基およびトリフルオロメチル基から選択さ
れ；Ｒ²は水素原子またはハロゲン原子から選択され；
Ｒ³は水素原子、アルキル基、置換アルキル基、シクロ
アルキル基、シクロアルキルアルキル基、未置換複素環
基、置換複素環基、未置換複素環アルキル基および置換
複素環アルキル基から選択され；Ｒ⁴は水素原子、ハロ
ゲン原子、アルキル基、アルコキシ基またはトリフルオ
ロメチル基であり；ｎは１、２または３である。）
【請求項３】リミノフェナジンが、Ｎ，５−ビス（フ
ェニル）−３，５−ジヒドロ−３−（シクロヘキシルイ
ミノ）−２−フェナジンアミンである請求項１記載のマ
ラリアの予防または治療薬。
【請求項４】予防または治療活性を有する他の抗マラ
リア性化合物を更に含有する請求項１〜３のいずれかに
記載のマラリアの予防または治療薬。