JPH08208692A - 新規な細胞接着抑制ペプチド誘導体 - Google Patents
新規な細胞接着抑制ペプチド誘導体Info
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- JPH08208692A JPH08208692A JP7276418A JP27641895A JPH08208692A JP H08208692 A JPH08208692 A JP H08208692A JP 7276418 A JP7276418 A JP 7276418A JP 27641895 A JP27641895 A JP 27641895A JP H08208692 A JPH08208692 A JP H08208692A
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- peptide
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Abstract
(57)【要約】
【課題】新規な癌転移抑制剤、血小板凝集抑制剤、創傷
治癒剤、炎症治療剤、動脈疾患治療剤および糸球体腎炎
治療剤の提供。 【解決手段】本発明は、高分子キニノゲンＬ鎖中の部分
アミノ酸配列（例えば、GlyLysGluGlnGlyHisThrArgArgH
isAspTrpGlyHisGluLysGlnArgLys 等）を有する新規な細
胞接着抑制ペプチドに関する。
治癒剤、炎症治療剤、動脈疾患治療剤および糸球体腎炎
治療剤の提供。 【解決手段】本発明は、高分子キニノゲンＬ鎖中の部分
アミノ酸配列（例えば、GlyLysGluGlnGlyHisThrArgArgH
isAspTrpGlyHisGluLysGlnArgLys 等）を有する新規な細
胞接着抑制ペプチドに関する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、細胞接着抑制活性
を有し、癌転移抑制剤、血小板凝集抑制剤、創傷治癒
剤、炎症治癒剤、動脈硬化抑制剤または糸球体腎炎治療
剤として有用な新規なペプチド誘導体に関する。
を有し、癌転移抑制剤、血小板凝集抑制剤、創傷治癒
剤、炎症治癒剤、動脈硬化抑制剤または糸球体腎炎治療
剤として有用な新規なペプチド誘導体に関する。
【０００２】
【従来技術】細胞と間質結合組織との接着に関与し、動
物細胞の細胞機能に関連した多彩な生理活性を持つ蛋白
質は、細胞接着活性蛋白質と呼ばれており、このような
蛋白質としては、例えばフィブロネクチン、ラミニン及
びビトロネクチン等が知られている。フィブリノーゲン
は、血小板膜糖タンパク複合体IIｂ／III ａ（β3 イン
テグリン）と相互作用して、血小板の凝集を引き起こす
ことが知られている（実験医学、Vol.10 No.11 1382(19
92))。これらの、細胞接着活性蛋白質は、構造的に類似
したいくつかのファミリーを形成しており、これら細胞
接着活性蛋白質を阻害する物質も最近明らかにされつつ
ある。
物細胞の細胞機能に関連した多彩な生理活性を持つ蛋白
質は、細胞接着活性蛋白質と呼ばれており、このような
蛋白質としては、例えばフィブロネクチン、ラミニン及
びビトロネクチン等が知られている。フィブリノーゲン
は、血小板膜糖タンパク複合体IIｂ／III ａ（β3 イン
テグリン）と相互作用して、血小板の凝集を引き起こす
ことが知られている（実験医学、Vol.10 No.11 1382(19
92))。これらの、細胞接着活性蛋白質は、構造的に類似
したいくつかのファミリーを形成しており、これら細胞
接着活性蛋白質を阻害する物質も最近明らかにされつつ
ある。
【０００３】一般に、細胞接着活性蛋白質は、例えば前
述のような種々の生物活性を有することから、それを制
御する物質についての研究が近年盛んに行われており、
例えば、ビトロネクチンやフィブロネクチンの接着コア
であるトリペプチド Arg-Gly-Asp（以下、ＲＧＤとい
う）には、癌の転移を抑制することが確認されている
（Humphries, M. J.ら：Science, 233, 467(1986))。さ
らに、このような接着コアの繰り返し構造からなるポリ
マーペプチドは、そのモノマーペプチドに比べ強い血小
板凝集抑制活性および癌転移抑制活性を示すことが知ら
れている（東ら，特開平2-174798号公報）。しかしなが
ら、上記の様なＲＧＤ誘導体では、ビトロネクチンとフ
ィブロネクチンに共通する接着コアに対応するものであ
るため、この両者を選択、区別して細胞接着を抑制する
ことができない。ところが、２本鎖高分子キニノゲンで
は、細胞接着抑制に対する選択性が高く、フィブロネク
チンを介しての細胞接着を抑制せず、ビトロネクチンや
フィブリノーゲンを介しての細胞接着を抑制することが
知られている（ Asakura et al.,J.Cell.Biol.116:465-
472,1992 )。
述のような種々の生物活性を有することから、それを制
御する物質についての研究が近年盛んに行われており、
例えば、ビトロネクチンやフィブロネクチンの接着コア
であるトリペプチド Arg-Gly-Asp（以下、ＲＧＤとい
う）には、癌の転移を抑制することが確認されている
（Humphries, M. J.ら：Science, 233, 467(1986))。さ
らに、このような接着コアの繰り返し構造からなるポリ
マーペプチドは、そのモノマーペプチドに比べ強い血小
板凝集抑制活性および癌転移抑制活性を示すことが知ら
れている（東ら，特開平2-174798号公報）。しかしなが
ら、上記の様なＲＧＤ誘導体では、ビトロネクチンとフ
ィブロネクチンに共通する接着コアに対応するものであ
るため、この両者を選択、区別して細胞接着を抑制する
ことができない。ところが、２本鎖高分子キニノゲンで
は、細胞接着抑制に対する選択性が高く、フィブロネク
チンを介しての細胞接着を抑制せず、ビトロネクチンや
フィブリノーゲンを介しての細胞接着を抑制することが
知られている（ Asakura et al.,J.Cell.Biol.116:465-
472,1992 )。
【０００４】２本鎖高分子キニノゲンは、血漿から得ら
れる接触系凝固因子の一つであり、このように血液凝固
に関するだけでなく、細胞接着にも密接に関係している
との興味ある事実が示されている。すなわち、２本鎖高
分子キニノゲンがその活性を阻害する細胞接着活性蛋白
質のビトロネクチンは、被接着細胞のレセプターと結合
し、その情報を接着細胞に伝達する役割を果しており、
細胞と間質結合組織との接着、細胞の伸展、移動や接触
走性にも関与していることが知られている（藤本大三郎
編、「細胞外マトリックスのバイオサイエンスとバイオ
テクノロジー」、125 頁（平成２年４月１０日発
行））。また、Asakura et al.,J.Cell.Biol. 116:465-
472 (1992)によれば、２本鎖高分子キニノゲンは、ビト
ロネクチンやフィブリノーゲンを介しての細胞接着阻害
物質（アンチ−インテグリン）であり、そのＬ鎖のヒス
チジン−リッチ領域（ 372位〜 523位）が細胞接着阻害
活性に重要であるであろうことが示唆されている。
れる接触系凝固因子の一つであり、このように血液凝固
に関するだけでなく、細胞接着にも密接に関係している
との興味ある事実が示されている。すなわち、２本鎖高
分子キニノゲンがその活性を阻害する細胞接着活性蛋白
質のビトロネクチンは、被接着細胞のレセプターと結合
し、その情報を接着細胞に伝達する役割を果しており、
細胞と間質結合組織との接着、細胞の伸展、移動や接触
走性にも関与していることが知られている（藤本大三郎
編、「細胞外マトリックスのバイオサイエンスとバイオ
テクノロジー」、125 頁（平成２年４月１０日発
行））。また、Asakura et al.,J.Cell.Biol. 116:465-
472 (1992)によれば、２本鎖高分子キニノゲンは、ビト
ロネクチンやフィブリノーゲンを介しての細胞接着阻害
物質（アンチ−インテグリン）であり、そのＬ鎖のヒス
チジン−リッチ領域（ 372位〜 523位）が細胞接着阻害
活性に重要であるであろうことが示唆されている。
【０００５】「腎と透析」 1994 年 臨時増刊号 198-2
03頁には、以下の記載がある。メサンギウム細胞には種
々のインテグリンが発現しており、糸球体腎炎において
は、そのインテグリンの発現が増加する。その発現が増
加したインテグリンの役割としては、メサンギウム細胞
が増殖してメサンギウム領域が拡大していく際の細胞外
基質と結合する足場となる役割が推定されている。ＲＧ
Ｄぺプチドは、フィブロネクチンに反応して遊走するメ
サンギウム細胞の遊走を阻害する。また、その誘導体で
ある環状型ＲＧＤペプチドを馬杉腎炎ラットに投与した
ところ蛋白尿が抑制され、組織障害も軽減されたことか
ら、ＲＧＤペプチドは糸球体腎炎の治療に応用できる可
能性が示唆されている。
03頁には、以下の記載がある。メサンギウム細胞には種
々のインテグリンが発現しており、糸球体腎炎において
は、そのインテグリンの発現が増加する。その発現が増
加したインテグリンの役割としては、メサンギウム細胞
が増殖してメサンギウム領域が拡大していく際の細胞外
基質と結合する足場となる役割が推定されている。ＲＧ
Ｄぺプチドは、フィブロネクチンに反応して遊走するメ
サンギウム細胞の遊走を阻害する。また、その誘導体で
ある環状型ＲＧＤペプチドを馬杉腎炎ラットに投与した
ところ蛋白尿が抑制され、組織障害も軽減されたことか
ら、ＲＧＤペプチドは糸球体腎炎の治療に応用できる可
能性が示唆されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】上述のように、２本鎖
高分子キニノゲンはビトロネクチン等の細胞接着活性蛋
白質を選択的に抑制することから、そのものがどのよう
な接着コアを有するものであるのかの解明が求められて
いた。またそのような選択性のある接着コアのアミノ酸
配列の様子が明らかになれば、そのアミノ酸配列を含む
ペプチド誘導体を用いて、より選択性の高い細胞接着抑
制剤の開発が可能になると期待された。従って、本発明
の目的は、より選択性の高い細胞接着抑制活性を有する
新規なペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩
を提供すること、およびこの新規なペプチド誘導体また
はその薬学的に許容される塩を含有することを特徴とす
る癌転移抑制剤、血小板凝集抑制剤、創傷治癒剤、炎症
治癒剤、動脈硬化抑制剤および糸球体腎炎治療剤を提供
することにある。
高分子キニノゲンはビトロネクチン等の細胞接着活性蛋
白質を選択的に抑制することから、そのものがどのよう
な接着コアを有するものであるのかの解明が求められて
いた。またそのような選択性のある接着コアのアミノ酸
配列の様子が明らかになれば、そのアミノ酸配列を含む
ペプチド誘導体を用いて、より選択性の高い細胞接着抑
制剤の開発が可能になると期待された。従って、本発明
の目的は、より選択性の高い細胞接着抑制活性を有する
新規なペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩
を提供すること、およびこの新規なペプチド誘導体また
はその薬学的に許容される塩を含有することを特徴とす
る癌転移抑制剤、血小板凝集抑制剤、創傷治癒剤、炎症
治癒剤、動脈硬化抑制剤および糸球体腎炎治療剤を提供
することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために、２本鎖ヒト高分子キニノゲンの接着
コアが存在すると考えられるＬ鎖のヒスチジン−リッチ
領域（ 372位〜 523位）のアミノ酸配列断片を含む各種
のペプチド誘導体を合成し、細胞接着抑制活性に関し
て、鋭意検討を行った。その結果、接着コアに該当する
細胞接着抑制活性の高い箇所を見い出し、本発明を完成
するに至った。
を解決するために、２本鎖ヒト高分子キニノゲンの接着
コアが存在すると考えられるＬ鎖のヒスチジン−リッチ
領域（ 372位〜 523位）のアミノ酸配列断片を含む各種
のペプチド誘導体を合成し、細胞接着抑制活性に関し
て、鋭意検討を行った。その結果、接着コアに該当する
細胞接着抑制活性の高い箇所を見い出し、本発明を完成
するに至った。
【０００８】すなわち、本発明は、 (1) 、(2) または(3) のいずれかで表されるアミノ
酸配列を有するヒト高分子キニノゲンＬ鎖中の部分アミ
ノ酸配列からなるペプチド誘導体、またはその薬学的に
許容される塩、 (1) GlyLysGluGlnGlyHisThrArgArgHisAspTrp (2）HisAsnLeuGlyHisGlyHisLysHisGluArgAspGlnGlyHisG
lyHisGlnArg (3) HisLysHisGlyHisGlyHisGlyLysHisLysAsnLys (1) 、(2) または(3) のいずれかで表されるアミノ
酸配列を有するヒト高分子キニノゲンＬ鎖の 402位〜 4
98位のペプチド中の部分アミノ酸配列からなるペプチド
誘導体、またはその薬学的に許容される塩、 (1) GlyLysGluGlnGlyHisThrArgArgHisAspTrp (2）HisAsnLeuGlyHisGlyHisLysHisGluArgAspGlnGlyHisG
lyHisGlnArg (3) HisLysHisGlyHisGlyHisGlyLysHisLysAsnLys 部分アミノ酸配列が、(1) 、(2) または(3) で表さ
れるアミノ酸配列である記載のペプチド誘導体、また
はその薬学的に許容される塩、 (1) GlyLysGluGlnGlyHisThrArgArgHisAspTrpGlyHisGluL
ysGlnArgLys (2) HisLysHisGlyHisGlyHisGlyLysHisLysAsnLysGlyLysL
ysAsnGlyLysHis (3) HisAsnLeuGlyHisGlyHisLysHisGluArgAspGlnGlyHisG
lyHisGlnArgGly 、または記載のペプチド誘導体またはその薬
学的に許容される塩を有効成分として含有することを特
徴とする細胞接着抑制剤、 、または記載のペプチド誘導体またはその薬
学的に許容される塩を有効成分として含有することを特
徴とする癌転移抑制剤、血小板凝集抑制剤、創傷治癒
剤、炎症治癒剤、動脈硬化抑制剤または糸球体腎炎治療
剤、または (1) または(2) で表されるアミノ酸配列を有するヒ
ト高分子キニノゲンＬ鎖中の部分アミノ酸配列からなる
ペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効
成分として含有することを特徴とする細胞接着抑制剤、 (1) TrpGlyHisGluLysGlnArg (2）LysGlyLysLysAsnGlyLysHis に関する。
酸配列を有するヒト高分子キニノゲンＬ鎖中の部分アミ
ノ酸配列からなるペプチド誘導体、またはその薬学的に
許容される塩、 (1) GlyLysGluGlnGlyHisThrArgArgHisAspTrp (2）HisAsnLeuGlyHisGlyHisLysHisGluArgAspGlnGlyHisG
lyHisGlnArg (3) HisLysHisGlyHisGlyHisGlyLysHisLysAsnLys (1) 、(2) または(3) のいずれかで表されるアミノ
酸配列を有するヒト高分子キニノゲンＬ鎖の 402位〜 4
98位のペプチド中の部分アミノ酸配列からなるペプチド
誘導体、またはその薬学的に許容される塩、 (1) GlyLysGluGlnGlyHisThrArgArgHisAspTrp (2）HisAsnLeuGlyHisGlyHisLysHisGluArgAspGlnGlyHisG
lyHisGlnArg (3) HisLysHisGlyHisGlyHisGlyLysHisLysAsnLys 部分アミノ酸配列が、(1) 、(2) または(3) で表さ
れるアミノ酸配列である記載のペプチド誘導体、また
はその薬学的に許容される塩、 (1) GlyLysGluGlnGlyHisThrArgArgHisAspTrpGlyHisGluL
ysGlnArgLys (2) HisLysHisGlyHisGlyHisGlyLysHisLysAsnLysGlyLysL
ysAsnGlyLysHis (3) HisAsnLeuGlyHisGlyHisLysHisGluArgAspGlnGlyHisG
lyHisGlnArgGly 、または記載のペプチド誘導体またはその薬
学的に許容される塩を有効成分として含有することを特
徴とする細胞接着抑制剤、 、または記載のペプチド誘導体またはその薬
学的に許容される塩を有効成分として含有することを特
徴とする癌転移抑制剤、血小板凝集抑制剤、創傷治癒
剤、炎症治癒剤、動脈硬化抑制剤または糸球体腎炎治療
剤、または (1) または(2) で表されるアミノ酸配列を有するヒ
ト高分子キニノゲンＬ鎖中の部分アミノ酸配列からなる
ペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効
成分として含有することを特徴とする細胞接着抑制剤、 (1) TrpGlyHisGluLysGlnArg (2）LysGlyLysLysAsnGlyLysHis に関する。
【０００９】本発明において、ヒト高分子キニノゲン
（ＨＫ）のＬ鎖とは、ヒト高分子キニノゲンのアミノ酸
配列のＮ末端から 372位〜 626位（Ｃ末）のものをいう
（ J.Biol. Chem.,260, 8601(1985))。文献によって
は、このＬ鎖をヒト高分子キニノゲンのカルボキシ末端
領域（フラグメント１・２とＬ鎖）とも言う（「日本臨
床」47巻 4号 816-827 (1989))。また、２本鎖ヒト高分
子キニノゲン（ＨＫa ）とは、ヒト高分子キニノゲン
（ＨＫ）がカリクレインにより切断されてブラジキニン
を放出した後の２本鎖蛋白質をいう。２本鎖ヒト高分子
キニノゲン（ＨＫa ）の接着コアに該当する細胞接着抑
制活性の高い箇所は、つぎのようにして見出された。
（ＨＫ）のＬ鎖とは、ヒト高分子キニノゲンのアミノ酸
配列のＮ末端から 372位〜 626位（Ｃ末）のものをいう
（ J.Biol. Chem.,260, 8601(1985))。文献によって
は、このＬ鎖をヒト高分子キニノゲンのカルボキシ末端
領域（フラグメント１・２とＬ鎖）とも言う（「日本臨
床」47巻 4号 816-827 (1989))。また、２本鎖ヒト高分
子キニノゲン（ＨＫa ）とは、ヒト高分子キニノゲン
（ＨＫ）がカリクレインにより切断されてブラジキニン
を放出した後の２本鎖蛋白質をいう。２本鎖ヒト高分子
キニノゲン（ＨＫa ）の接着コアに該当する細胞接着抑
制活性の高い箇所は、つぎのようにして見出された。
【００１０】１）２本鎖ヒト高分子キニノゲン（ＨＫa
）接着コア部位の特定 Ｌ鎖のヒスチジン−リッチ領域（ 372位〜 523位）に存
在する接着コアを特定するため、表１の５種のペプチド
を合成した。この合成ペプチドを用いて、線維芽細胞に
対する細胞接着活性試験を行った。
）接着コア部位の特定 Ｌ鎖のヒスチジン−リッチ領域（ 372位〜 523位）に存
在する接着コアを特定するため、表１の５種のペプチド
を合成した。この合成ペプチドを用いて、線維芽細胞に
対する細胞接着活性試験を行った。
【００１１】
【表１】
【００１２】３種のペプチド（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５）が、
図１のように細胞接着活性を示したが、その他のペプチ
ドは細胞接着活性を示さなかった。また、図２に示され
るように、この３種のペプチド（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５）は
細胞に付着することによって特異的に細胞接着を抑制し
ていることが明らかとなった。また、図３で示されるよ
うに、この３種のペプチドの細胞接着活性は、ＨＫaに
よって抑制されるが、フィブロネクチンを用いた場合に
は抑制されなかった。これらのことより、この３種のペ
プチドの対応するアミノ酸配列部分がＨＫa の細胞接着
抑制活性をもたらす接着コアであることが確認された。
以上のことから、接着コアはＰ１、Ｐ２およびＰ５ペプ
チドに対応するアミノ酸配列部分に存在することが示さ
れた。さらに詳しくこの接着コアの部分を特定するた
め、表２に記載されたＰ１、Ｐ２およびＰ５ペプチドお
よびそのＮ末端を含む断片ペプチドを合成した。この合
成ペプチドを用いて、線維芽細胞に対する細胞接着活性
試験を行った。
図１のように細胞接着活性を示したが、その他のペプチ
ドは細胞接着活性を示さなかった。また、図２に示され
るように、この３種のペプチド（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５）は
細胞に付着することによって特異的に細胞接着を抑制し
ていることが明らかとなった。また、図３で示されるよ
うに、この３種のペプチドの細胞接着活性は、ＨＫaに
よって抑制されるが、フィブロネクチンを用いた場合に
は抑制されなかった。これらのことより、この３種のペ
プチドの対応するアミノ酸配列部分がＨＫa の細胞接着
抑制活性をもたらす接着コアであることが確認された。
以上のことから、接着コアはＰ１、Ｐ２およびＰ５ペプ
チドに対応するアミノ酸配列部分に存在することが示さ
れた。さらに詳しくこの接着コアの部分を特定するた
め、表２に記載されたＰ１、Ｐ２およびＰ５ペプチドお
よびそのＮ末端を含む断片ペプチドを合成した。この合
成ペプチドを用いて、線維芽細胞に対する細胞接着活性
試験を行った。
【００１３】
【表２】
【００１４】図４、図５および図６に示される細胞接着
活性試験の結果から、Ｐ１、Ｐ２およびＰ５ペプチドの
Ｎ末端を含む断片ペプチドの活性は、いずれもＰ１、Ｐ
２およびＰ５ペプチドの活性より減少傾向を示したが、
Ｐ１b 、Ｐ５a およびＰ５bでは、接着活性を十分保っ
ている。しかし、さらに短いペプチドであるＰ１a およ
びＰ２a では、接着活性は完全に消失した。以上のこと
から、ＨＫa の接着コアの部位は、Ｐ１b 、Ｐ２または
Ｐ５a ペプチドを中心とした部分と考えられる。従っ
て、Ｐ１b 、Ｐ２またはＰ５a ペプチドのアミノ酸配列
を少なくとも含むヒト高分子キニノゲンＬ鎖中の部分ア
ミノ酸配列からなるペプチド誘導体が細胞接着抑制活性
を有することが明らかとなった。特に高い細胞接着抑制
活性を有するペプチドとしては、Ｐ１b 、Ｐ２またはＰ
５a ペプチドのアミノ酸配列を少なくとも含むＬ鎖のヒ
スチジン−リッチ領域（372位〜 523位）中の部分アミ
ノ酸配列からなるペプチド誘導体が挙げられ、さらに高
い細胞接着抑制活性を有するペプチドとしては、Ｐ１b
、Ｐ２またはＰ５a ペプチドのアミノ酸配列を少なく
とも含むＬ鎖の 402位〜 498位のペプチド中の部分アミ
ノ酸配列からなるペプチド誘導体が挙げられる。さら
に、実験結果から、ＨＫa の接着コアの部位は、Ｐ１ま
たはＰ５ペプチドのＣ末部分（ 410位〜 420位、 492位
〜 498位）のあたりにも存在する。
活性試験の結果から、Ｐ１、Ｐ２およびＰ５ペプチドの
Ｎ末端を含む断片ペプチドの活性は、いずれもＰ１、Ｐ
２およびＰ５ペプチドの活性より減少傾向を示したが、
Ｐ１b 、Ｐ５a およびＰ５bでは、接着活性を十分保っ
ている。しかし、さらに短いペプチドであるＰ１a およ
びＰ２a では、接着活性は完全に消失した。以上のこと
から、ＨＫa の接着コアの部位は、Ｐ１b 、Ｐ２または
Ｐ５a ペプチドを中心とした部分と考えられる。従っ
て、Ｐ１b 、Ｐ２またはＰ５a ペプチドのアミノ酸配列
を少なくとも含むヒト高分子キニノゲンＬ鎖中の部分ア
ミノ酸配列からなるペプチド誘導体が細胞接着抑制活性
を有することが明らかとなった。特に高い細胞接着抑制
活性を有するペプチドとしては、Ｐ１b 、Ｐ２またはＰ
５a ペプチドのアミノ酸配列を少なくとも含むＬ鎖のヒ
スチジン−リッチ領域（372位〜 523位）中の部分アミ
ノ酸配列からなるペプチド誘導体が挙げられ、さらに高
い細胞接着抑制活性を有するペプチドとしては、Ｐ１b
、Ｐ２またはＰ５a ペプチドのアミノ酸配列を少なく
とも含むＬ鎖の 402位〜 498位のペプチド中の部分アミ
ノ酸配列からなるペプチド誘導体が挙げられる。さら
に、実験結果から、ＨＫa の接着コアの部位は、Ｐ１ま
たはＰ５ペプチドのＣ末部分（ 410位〜 420位、 492位
〜 498位）のあたりにも存在する。
【００１５】２）２本鎖ヒト高分子キニノゲン（ＨＫa
）接着コアの特性 ＨＫa の接着コアは、前述のようにＰ１、Ｐ２およびＰ
５ペプチドに対応する部分の三箇所にあることが明らか
となったが、この接着コアに該当するアミノ酸配列は今
まで報告されている細胞接着活性蛋白質の接着コアを形
成するアミノ酸配列のいずれとも類似していない。例え
ば、細胞接着活性蛋白質であるビトロネクチン、フィブ
ロネクチン、フィブリノーゲン、ラミニン、コラーゲ
ン、フォン−ブィレブラント（von Willebrand) 因子、
スロンボスポンディンの接着コアを形成するアミノ酸配
列と、Ｐ１、Ｐ２またはＰ５ペプチドのアミノ酸配列と
を比較しても、その間に類似性が見出せなかった。一
方、ＨＫa を用いた各種の細胞接着活性蛋白質に対する
抑制活性試験の結果から、ＨＫa がβ3 インテグリンの
働きを阻害するとされている（ Asakura etal.,前
掲）。従って、ＨＫa の三箇所ある接着コアは細胞表面
に存在するβ3 インテグリンのリセプターに結合すると
考えられる。図７に示されるように、Ｐ５ペプチドはＰ
１ペプチドの細胞接着活性を阻害している。このこと
は、Ｐ５ペプチドとＰ１ペプチドが同じ細胞表面上のリ
セプターに結合することを示している。しかし、Ｐ２ペ
プチドはＰ１ペプチドの細胞接着活性を阻害しなかっ
た。このことは、Ｐ２ペプチドがＰ１ペプチドとは異な
るリセプターに結合することを示している。以上のこと
から、ＨＫa の三箇所の接着コアの内、二箇所の接着コ
ア（Ｐ１およびＰ５ペプチドの対応部分）は、アミノ酸
配列に相違があるものの、細胞表面の同じリセプター
（β3 インテグリンのリセプター）と結合することが明
らかとなった。また、もう一箇所の接着コア（Ｐ２ペプ
チドの対応部分）は、それとは異なることが明らかにさ
れた。
）接着コアの特性 ＨＫa の接着コアは、前述のようにＰ１、Ｐ２およびＰ
５ペプチドに対応する部分の三箇所にあることが明らか
となったが、この接着コアに該当するアミノ酸配列は今
まで報告されている細胞接着活性蛋白質の接着コアを形
成するアミノ酸配列のいずれとも類似していない。例え
ば、細胞接着活性蛋白質であるビトロネクチン、フィブ
ロネクチン、フィブリノーゲン、ラミニン、コラーゲ
ン、フォン−ブィレブラント（von Willebrand) 因子、
スロンボスポンディンの接着コアを形成するアミノ酸配
列と、Ｐ１、Ｐ２またはＰ５ペプチドのアミノ酸配列と
を比較しても、その間に類似性が見出せなかった。一
方、ＨＫa を用いた各種の細胞接着活性蛋白質に対する
抑制活性試験の結果から、ＨＫa がβ3 インテグリンの
働きを阻害するとされている（ Asakura etal.,前
掲）。従って、ＨＫa の三箇所ある接着コアは細胞表面
に存在するβ3 インテグリンのリセプターに結合すると
考えられる。図７に示されるように、Ｐ５ペプチドはＰ
１ペプチドの細胞接着活性を阻害している。このこと
は、Ｐ５ペプチドとＰ１ペプチドが同じ細胞表面上のリ
セプターに結合することを示している。しかし、Ｐ２ペ
プチドはＰ１ペプチドの細胞接着活性を阻害しなかっ
た。このことは、Ｐ２ペプチドがＰ１ペプチドとは異な
るリセプターに結合することを示している。以上のこと
から、ＨＫa の三箇所の接着コアの内、二箇所の接着コ
ア（Ｐ１およびＰ５ペプチドの対応部分）は、アミノ酸
配列に相違があるものの、細胞表面の同じリセプター
（β3 インテグリンのリセプター）と結合することが明
らかとなった。また、もう一箇所の接着コア（Ｐ２ペプ
チドの対応部分）は、それとは異なることが明らかにさ
れた。
【００１６】メサンギウム細胞を用いた細胞接着活性試
験を、Ｐ２およびＰ５ペプチドを例として用いて行っ
た。その結果、図８および図９に示される様に、Ｐ２お
よびＰ５ペプチドはメサンギウム細胞を伸展させる作用
を有することから、メサンギウム細胞と接着することが
示された。この結果から、Ｐ２およびＰ５ペプチド等の
本願発明のペプチド誘導体は、メサンギウム細胞に接着
することで、ビトロネクチンやフィブリノーゲンを介す
るメサンギウム細胞の接着を抑制することができ、それ
によりメサンギウム細胞の増殖を抑えることで糸球体腎
炎を治療することができることがわかる。
験を、Ｐ２およびＰ５ペプチドを例として用いて行っ
た。その結果、図８および図９に示される様に、Ｐ２お
よびＰ５ペプチドはメサンギウム細胞を伸展させる作用
を有することから、メサンギウム細胞と接着することが
示された。この結果から、Ｐ２およびＰ５ペプチド等の
本願発明のペプチド誘導体は、メサンギウム細胞に接着
することで、ビトロネクチンやフィブリノーゲンを介す
るメサンギウム細胞の接着を抑制することができ、それ
によりメサンギウム細胞の増殖を抑えることで糸球体腎
炎を治療することができることがわかる。
【００１７】本明細書において、アミノ酸、アミノ酸誘
導体、ペプチド、その他に関して略号で表示する場合
は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの規定または当該分野における
慣用記号に従うものとする。またアミノ酸等に関して光
学異性体があり得る場合は、Ｄ−型、Ｌ−型のいずれの
場合も含むが、特に明記せずに略号、慣用記号を用いた
場合は、Ｌ−型を示すものとする。
導体、ペプチド、その他に関して略号で表示する場合
は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの規定または当該分野における
慣用記号に従うものとする。またアミノ酸等に関して光
学異性体があり得る場合は、Ｄ−型、Ｌ−型のいずれの
場合も含むが、特に明記せずに略号、慣用記号を用いた
場合は、Ｌ−型を示すものとする。
【００１８】アミノ酸の具体例を略号とともに以下に示
す。 略号（３文字、１文字） 名 称（構造） Ａｓｐ ，Ｄ アスパラギン酸 Ｇｌｙ ，Ｇ グリシン Ｉｌｅ ，Ｉ イソロイシン Ｌｅｕ ，Ｌ ロイシン Ｐｒｏ ，Ｐ プロリン Ａｒｇ ，Ｒ アルギニン Ｓｅｒ ，Ｓ セリン Ｔｙｒ ，Ｙ チロシン Ａｓｎ ，Ｎ アスパラギン Ｔｈｒ ，Ｔ スレオニン Ｈｉｓ ，Ｈ ヒスチジン Ｐｈｅ ，Ｆ フェニルアラニン Ｖａｌ ，Ｖ バリン Ｌｙｓ ，Ｋ リジン Ｇｌｎ ，Ｑ グルタミン Ｍｅｔ ，Ｍ メチオニン Ｔｒｐ ，Ｗ トリプトファン Ｇｌｕ ，Ｅ グルタミン酸 Ａｌａ ，Ａ アラニン Ｃｙｓ ，Ｃ システイン
す。 略号（３文字、１文字） 名 称（構造） Ａｓｐ ，Ｄ アスパラギン酸 Ｇｌｙ ，Ｇ グリシン Ｉｌｅ ，Ｉ イソロイシン Ｌｅｕ ，Ｌ ロイシン Ｐｒｏ ，Ｐ プロリン Ａｒｇ ，Ｒ アルギニン Ｓｅｒ ，Ｓ セリン Ｔｙｒ ，Ｙ チロシン Ａｓｎ ，Ｎ アスパラギン Ｔｈｒ ，Ｔ スレオニン Ｈｉｓ ，Ｈ ヒスチジン Ｐｈｅ ，Ｆ フェニルアラニン Ｖａｌ ，Ｖ バリン Ｌｙｓ ，Ｋ リジン Ｇｌｎ ，Ｑ グルタミン Ｍｅｔ ，Ｍ メチオニン Ｔｒｐ ，Ｗ トリプトファン Ｇｌｕ ，Ｅ グルタミン酸 Ａｌａ ，Ａ アラニン Ｃｙｓ ，Ｃ システイン
【００１９】本発明のペプチド誘導体は、化学的合成法
および遺伝子工学的手法を用いた合成法のいずれの方法
にても合成することができる。化学的合成法において
は、液相法、固相法が知られているが、いずれの方法に
ても合成可能である。また、目的とする１次配列をＮ末
端またはＣ末端より順次構築するステップワイズ延長
法、目的とする１次配列を適当なフラグメントに分け、
それらフラグメントを縮合させて目的物を構築するフラ
グメント縮合法が知られているが、いずれの方法または
それらを組み合わせることにより、合成することができ
る。また、必要に応じては、官能基（アミノ基、カルボ
キシル基、グアニジノ基、水酸基等）を保護してもよ
い。縮合法、活性化法、保護基及び反応条件等について
は、「ペプチド合成の基礎と実験」（丸善株式会社、19
85年）、「生化学実験講座・第一巻 蛋白質の化学IV」
（東京化学同人、1976年）などに記載の通常のペプチド
合成に用いられる方法、保護基、反応条件を用いて合成
することができる。以上のようにして合成された本発明
のペプチド誘導体は、必要に応じてさらに逆相ＨＰＬ
Ｃ、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマト
グラフィーなどの通常のペプチドの精製法に従って、精
製することができる。また、本発明の化合物は医薬品と
して用いるために、薬学的に許容さる塩、例えば塩酸
塩、硫酸塩等の無機酸との塩や、酢酸塩、トリフルオロ
酢酸塩、乳酸塩、酒石酸塩等の有機酸との塩にしてもよ
く、そのような塩への変換は、慣用手段で行うことがで
きる。
および遺伝子工学的手法を用いた合成法のいずれの方法
にても合成することができる。化学的合成法において
は、液相法、固相法が知られているが、いずれの方法に
ても合成可能である。また、目的とする１次配列をＮ末
端またはＣ末端より順次構築するステップワイズ延長
法、目的とする１次配列を適当なフラグメントに分け、
それらフラグメントを縮合させて目的物を構築するフラ
グメント縮合法が知られているが、いずれの方法または
それらを組み合わせることにより、合成することができ
る。また、必要に応じては、官能基（アミノ基、カルボ
キシル基、グアニジノ基、水酸基等）を保護してもよ
い。縮合法、活性化法、保護基及び反応条件等について
は、「ペプチド合成の基礎と実験」（丸善株式会社、19
85年）、「生化学実験講座・第一巻 蛋白質の化学IV」
（東京化学同人、1976年）などに記載の通常のペプチド
合成に用いられる方法、保護基、反応条件を用いて合成
することができる。以上のようにして合成された本発明
のペプチド誘導体は、必要に応じてさらに逆相ＨＰＬ
Ｃ、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマト
グラフィーなどの通常のペプチドの精製法に従って、精
製することができる。また、本発明の化合物は医薬品と
して用いるために、薬学的に許容さる塩、例えば塩酸
塩、硫酸塩等の無機酸との塩や、酢酸塩、トリフルオロ
酢酸塩、乳酸塩、酒石酸塩等の有機酸との塩にしてもよ
く、そのような塩への変換は、慣用手段で行うことがで
きる。
【００２０】本発明のペプチド誘導体は、細胞接着活性
蛋白質が有する接着コアのアミノ酸配列部分であるＲＧ
Ｄ配列を持たない新規な細胞接着抑制活性のペプチド誘
導体である。本発明のペプチド誘導体は、ＲＧＤ配列を
有する細胞接着活性ペプチドと同様の機序で細胞に接着
すると考えられる。そのために細胞接着活性蛋白質のア
ゴニストまたはアンタゴニストとして、種々の生物活性
例えば癌転移抑制作用などの生物活性および強力な血小
板凝集抑制作用を有する。また、２本鎖ヒト高分子キニ
ノゲン（ＨＫa ）は血小板の接着を抑制し、抗血栓作用
を示すと共に、癌細胞や血管内皮細胞の細胞接着を抑制
しているが、この機序もＨＫa の接着コアを介すると考
えられる。従って、本発明のペプチド誘導体はＨＫa の
アンタゴニストとして働くことから、癌転移抑制、血小
板凝集抑制にとどまらず、血栓や炎症の抑制、動脈硬化
抑制等の作用を有する。また、本願発明のペプチド誘導
体は、糸球体腎炎のよい治療剤でもある。糸球体腎炎の
中でも特に膜性増殖性糸球体腎炎の治療剤として好まし
い。ここで、膜性増殖性糸球体腎炎とは、メサンギウム
細胞の増生、増殖と糸球体基底膜の肥厚を特徴とする腎
炎である（「腎・泌尿器疾患」織田敏次、五島雄一郎編
集 朝倉書店刊 1983 99 頁) 。
蛋白質が有する接着コアのアミノ酸配列部分であるＲＧ
Ｄ配列を持たない新規な細胞接着抑制活性のペプチド誘
導体である。本発明のペプチド誘導体は、ＲＧＤ配列を
有する細胞接着活性ペプチドと同様の機序で細胞に接着
すると考えられる。そのために細胞接着活性蛋白質のア
ゴニストまたはアンタゴニストとして、種々の生物活性
例えば癌転移抑制作用などの生物活性および強力な血小
板凝集抑制作用を有する。また、２本鎖ヒト高分子キニ
ノゲン（ＨＫa ）は血小板の接着を抑制し、抗血栓作用
を示すと共に、癌細胞や血管内皮細胞の細胞接着を抑制
しているが、この機序もＨＫa の接着コアを介すると考
えられる。従って、本発明のペプチド誘導体はＨＫa の
アンタゴニストとして働くことから、癌転移抑制、血小
板凝集抑制にとどまらず、血栓や炎症の抑制、動脈硬化
抑制等の作用を有する。また、本願発明のペプチド誘導
体は、糸球体腎炎のよい治療剤でもある。糸球体腎炎の
中でも特に膜性増殖性糸球体腎炎の治療剤として好まし
い。ここで、膜性増殖性糸球体腎炎とは、メサンギウム
細胞の増生、増殖と糸球体基底膜の肥厚を特徴とする腎
炎である（「腎・泌尿器疾患」織田敏次、五島雄一郎編
集 朝倉書店刊 1983 99 頁) 。
【００２１】従って本発明の新規な細胞接着活性ペプチ
ド誘導体は、医薬品、動物薬として極めて有効である。
本発明のペプチド誘導体は、通常それ自体公知の担体、
希釈剤などを用い、適宜の医薬品組成物よりなる製剤
（例えば、カプセル剤、注射剤など）として経口的また
は非経口的に投与される。癌転移抑制剤または、血小板
凝集抑制剤として投与する場合には、本発明のペプチド
は、 0.2μｇ／kg〜10mg/kg の範囲で、症状、年齢、体
重等に基づいて決定され、１日１回から数回に分けて投
与することができる。
ド誘導体は、医薬品、動物薬として極めて有効である。
本発明のペプチド誘導体は、通常それ自体公知の担体、
希釈剤などを用い、適宜の医薬品組成物よりなる製剤
（例えば、カプセル剤、注射剤など）として経口的また
は非経口的に投与される。癌転移抑制剤または、血小板
凝集抑制剤として投与する場合には、本発明のペプチド
は、 0.2μｇ／kg〜10mg/kg の範囲で、症状、年齢、体
重等に基づいて決定され、１日１回から数回に分けて投
与することができる。
【００２２】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定
されるものではない。
説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定
されるものではない。
【００２３】実施例１Gly-Lys-Glu-Gln-Gly-His-Thr-Arg-Arg-His-Asp-Trp
（配列番号：１）の製造 Gly-Lys-Glu-Gln-Gly-His-Thr-Arg-Arg-His-Asp-Trp
（Ｐ１b ）の製造は、不溶性の樹脂上でペプチド鎖を C
末端から N末端方向にFmoc法により固相合成により実施
した。使用した樹脂として、粒径 100〜200 メッシュの
4-(2'-4'-Dimethoxy Phenylfluorenlaminomethyl)-Phe
noxy resin ( 渡辺化学) を用い、自動合成機 (System
990, Beckman)により行った。合成したペプチド樹脂約1
gにトリフルオロ酢酸中にフェノール5%、チオアニソー
ル5%、水5%、エタンジテオール2.5%を含む試薬20mlを加
えて室温にて 2.5時間攪拌した。10分間氷冷し、ジエチ
ルエーテル50mlを添加して室温にて30分間攪拌後、グラ
スフィルターにて濾過した。濾上物をジエチルエーテル
にて洗浄し (10ml×20回) 、 20%酢酸溶液にて目的とす
るペプチドを抽出した (20ml×3 回) 。この抽出液を濃
縮、凍結乾燥することにより粗ペプチドを得た。得られ
た粗ペプチドを5%酢酸溶液に溶解し、予め0.1%トリフル
オロ酢酸で平衡化した逆相系充填剤 YMC-ODS-120A-S15/
30カラム (50×500mm)に注入し、0.1%トリフルオロ酢酸
で洗浄した後、アセトニトリル濃度を 180分間で 15%ま
で増加させ、流速15ml/minで溶出した。溶出液を220nm
における吸光度によりモニターし、目的物を含む画分を
集めて凍結乾燥することで、Gly-Lys-Glu-Gln-Gly-His-
Thr-Arg-Arg-His-Asp-Trp （Ｐ１b ）を得た。
（配列番号：１）の製造 Gly-Lys-Glu-Gln-Gly-His-Thr-Arg-Arg-His-Asp-Trp
（Ｐ１b ）の製造は、不溶性の樹脂上でペプチド鎖を C
末端から N末端方向にFmoc法により固相合成により実施
した。使用した樹脂として、粒径 100〜200 メッシュの
4-(2'-4'-Dimethoxy Phenylfluorenlaminomethyl)-Phe
noxy resin ( 渡辺化学) を用い、自動合成機 (System
990, Beckman)により行った。合成したペプチド樹脂約1
gにトリフルオロ酢酸中にフェノール5%、チオアニソー
ル5%、水5%、エタンジテオール2.5%を含む試薬20mlを加
えて室温にて 2.5時間攪拌した。10分間氷冷し、ジエチ
ルエーテル50mlを添加して室温にて30分間攪拌後、グラ
スフィルターにて濾過した。濾上物をジエチルエーテル
にて洗浄し (10ml×20回) 、 20%酢酸溶液にて目的とす
るペプチドを抽出した (20ml×3 回) 。この抽出液を濃
縮、凍結乾燥することにより粗ペプチドを得た。得られ
た粗ペプチドを5%酢酸溶液に溶解し、予め0.1%トリフル
オロ酢酸で平衡化した逆相系充填剤 YMC-ODS-120A-S15/
30カラム (50×500mm)に注入し、0.1%トリフルオロ酢酸
で洗浄した後、アセトニトリル濃度を 180分間で 15%ま
で増加させ、流速15ml/minで溶出した。溶出液を220nm
における吸光度によりモニターし、目的物を含む画分を
集めて凍結乾燥することで、Gly-Lys-Glu-Gln-Gly-His-
Thr-Arg-Arg-His-Asp-Trp （Ｐ１b ）を得た。
【００２４】アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ ０．５９（１） Ｇｌｘ ２．０６（２） ＊Ｇｌｙ ２ Ｈｉｓ ２．０１（２） Ａｒｇ １．７６（２） Ｔｈｒ １．０１（１９ Ｌｙｓ ０．８０（１） ＨＰＬＣ保持時間：１５．５分 （カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ ５μｍ ４．６ｍｍΦ×２
５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎｍ、検出液：Ａ液 ０．
１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１％ＴＦＡ／ＣＨ3 ＣＮ、
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエント：Ｂ液濃度を
１０％から毎分０．５％上昇させた。）
５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎｍ、検出液：Ａ液 ０．
１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１％ＴＦＡ／ＣＨ3 ＣＮ、
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエント：Ｂ液濃度を
１０％から毎分０．５％上昇させた。）
【００２５】実施例２Gly-Lys-Glu-Gln-Gly-His-Thr-Arg-Arg-His-Asp-Trp-Gl
y-His-Glu-Lys-Gln-Arg-Lys （配列番号：２）の製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、Gly-Lys-Gl
u-Gln-Gly-His-Thr-Arg-Arg-His-Asp-Trp-Gly-His-Glu-
Lys-Gln-Arg-Lys （Ｐ１＝Ｐ１c ）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ ０．９（１） Ｇｌｘ ４．６（２） Ｇｌｙ ３．３（３） Ｈｉｓ ３．７（３） Ａｒｇ ３．２（３） ＊Ｔｈｒ １ Ｌｙｓ ３．５（３） ＨＰＬＣ保持時間：２２．３分 （カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ ５μｍ ４．６ｍｍΦ×２
５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎｍ、検出液：Ａ液 ０．
１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１％ＴＦＡ／ＣＨ3ＣＮ、
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエント：Ｂ液濃度を
５％から毎分１％上昇させた。）
y-His-Glu-Lys-Gln-Arg-Lys （配列番号：２）の製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、Gly-Lys-Gl
u-Gln-Gly-His-Thr-Arg-Arg-His-Asp-Trp-Gly-His-Glu-
Lys-Gln-Arg-Lys （Ｐ１＝Ｐ１c ）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ ０．９（１） Ｇｌｘ ４．６（２） Ｇｌｙ ３．３（３） Ｈｉｓ ３．７（３） Ａｒｇ ３．２（３） ＊Ｔｈｒ １ Ｌｙｓ ３．５（３） ＨＰＬＣ保持時間：２２．３分 （カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ ５μｍ ４．６ｍｍΦ×２
５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎｍ、検出液：Ａ液 ０．
１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１％ＴＦＡ／ＣＨ3ＣＮ、
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエント：Ｂ液濃度を
５％から毎分１％上昇させた。）
【００２６】実施例３His-Asn-Leu-Gly-His-Gly-His-Lys-His-Glu-Arg-Asp-Gl
n-Gly-His-Gly-His-Gln-Arg-Gly （配列番号：３）の製
造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、His-Asn-Le
u-Gly-His-Gly-His-Lys-His-Glu-Arg-Asp-Gln-Gly-His-
Gly-His-Gln-Arg-Gly （Ｐ２＝Ｐ２b ）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ ２．１（２） Ｇｌｘ ３．３（３） Ｇｌｙ ５．３（５） Ｈｉｓ ６．３（６） Ａｒｇ ２．１（２） ＊Ｌｅｕ １ Ｌｙｓ １．３（１） ＨＰＬＣ保持時間：１８．３分 （カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１１ ５μ
ｍ ４．６ｍｍΦ×２５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎ
ｍ、検出液：Ａ液 ０．１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１
％ＴＦＡ／ＣＨ3 ＣＮ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グ
ラジエント：Ｂ液濃度を２０％から毎分１％上昇させ
た。）
n-Gly-His-Gly-His-Gln-Arg-Gly （配列番号：３）の製
造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、His-Asn-Le
u-Gly-His-Gly-His-Lys-His-Glu-Arg-Asp-Gln-Gly-His-
Gly-His-Gln-Arg-Gly （Ｐ２＝Ｐ２b ）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ ２．１（２） Ｇｌｘ ３．３（３） Ｇｌｙ ５．３（５） Ｈｉｓ ６．３（６） Ａｒｇ ２．１（２） ＊Ｌｅｕ １ Ｌｙｓ １．３（１） ＨＰＬＣ保持時間：１８．３分 （カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１１ ５μ
ｍ ４．６ｍｍΦ×２５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎ
ｍ、検出液：Ａ液 ０．１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１
％ＴＦＡ／ＣＨ3 ＣＮ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グ
ラジエント：Ｂ液濃度を２０％から毎分１％上昇させ
た。）
【００２７】実施例４His-Lys-His-Gly-His-Gly-His-Gly-Lys-His-Lys-Asn-Ly
s （配列番号：４）の製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、His-Lys-Hi
s-Gly-His-Gly-His-Gly-Lys-His-Lys-Asn-Lys （Ｐ５a
）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ １．０７（１） Ｇｌｙ ３．２２（３） Ｈｉｓ ５．４４（５） ＊Ｌｙｓ ４ ＨＰＬＣ保持時間：１３．６分 （カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ ５μｍ ４．６ｍｍΦ×２
５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎｍ、検出液：Ａ液 ０．
１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１％ＴＦＡ／ＣＨ3ＣＮ、
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエント：Ｂ液濃度を
５％から毎分２％上昇させた。）
s （配列番号：４）の製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、His-Lys-Hi
s-Gly-His-Gly-His-Gly-Lys-His-Lys-Asn-Lys （Ｐ５a
）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ １．０７（１） Ｇｌｙ ３．２２（３） Ｈｉｓ ５．４４（５） ＊Ｌｙｓ ４ ＨＰＬＣ保持時間：１３．６分 （カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ ５μｍ ４．６ｍｍΦ×２
５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎｍ、検出液：Ａ液 ０．
１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１％ＴＦＡ／ＣＨ3ＣＮ、
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエント：Ｂ液濃度を
５％から毎分２％上昇させた。）
【００２８】実施例５His-Lys-His-Gly-His-Gly-His-Gly-Lys-His-Lys-Asn-Ly
s-Gly-Lys （配列番号：５）の製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、His-Lys-Hi
s-Gly-His-Gly-His-Gly-Lys-His-Lys-Asn-Lys-Gly-Lys
（Ｐ５b ）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ １．０６（１） Ｇｌｙ ４．２９（４） Ｈｉｓ ５．９７（５） ＊Ｌｙｓ ４ ＨＰＬＣ保持時間：１１．４分 （カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ ５μｍ ４．６ｍｍΦ×２
５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎｍ、検出液：Ａ液 ０．
１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１％ＴＦＡ／ＣＨ3ＣＮ、
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエント：Ｂ液濃度を
５％から毎分１％上昇させた。）
s-Gly-Lys （配列番号：５）の製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、His-Lys-Hi
s-Gly-His-Gly-His-Gly-Lys-His-Lys-Asn-Lys-Gly-Lys
（Ｐ５b ）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ １．０６（１） Ｇｌｙ ４．２９（４） Ｈｉｓ ５．９７（５） ＊Ｌｙｓ ４ ＨＰＬＣ保持時間：１１．４分 （カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ ５μｍ ４．６ｍｍΦ×２
５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎｍ、検出液：Ａ液 ０．
１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１％ＴＦＡ／ＣＨ3ＣＮ、
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエント：Ｂ液濃度を
５％から毎分１％上昇させた。）
【００２９】実施例６His-Lys-His-Gly-His-Gly-His-Gly-Lys-His-Lys-Asn-Ly
s-Gly-Lys-Lys-Asn-Gly-Lys-His （配列番号：６）の製
造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、His-Lys-Hi
s-Gly-His-Gly-His-Gly-Lys-His-Lys-Asn-Lys-Gly-Lys-
Lys-Asn-Gly-Lys-His （Ｐ５＝Ｐ５c ）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ ２．０（２） Ｇｌｙ ４．９（５） Ｈｉｓ ６．７（６） ＊Ｌｙｓ ７ ＨＰＬＣ保持時間：１７．３分 （カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ ５μｍ ４．６ｍｍΦ×２
５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎｍ、検出液：Ａ液 ０．
１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１％ＴＦＡ／ＣＨ3ＣＮ、
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエント：Ｂ液濃度を
５％から毎分１％上昇させた。）
s-Gly-Lys-Lys-Asn-Gly-Lys-His （配列番号：６）の製
造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、His-Lys-Hi
s-Gly-His-Gly-His-Gly-Lys-His-Lys-Asn-Lys-Gly-Lys-
Lys-Asn-Gly-Lys-His （Ｐ５＝Ｐ５c ）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ ２．０（２） Ｇｌｙ ４．９（５） Ｈｉｓ ６．７（６） ＊Ｌｙｓ ７ ＨＰＬＣ保持時間：１７．３分 （カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ ５μｍ ４．６ｍｍΦ×２
５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎｍ、検出液：Ａ液 ０．
１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１％ＴＦＡ／ＣＨ3ＣＮ、
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グラジエント：Ｂ液濃度を
５％から毎分１％上昇させた。）
【００３０】参考例１Gly-Lys-Glu-Gln-Gly-His-Thr-Arg （配列番号：７）の
製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、Gly-Lys-Gl
u-Gln-Gly-His-Thr-Arg （Ｐ１a ）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ｇｌｘ ２．０（２） ＊Ｇｌｙ ２ Ｈｉｓ １．２（１） Ａｒｇ ０．９（１） Ｔｈｒ １．０（１） Ｌｙｓ １．０（１） ＨＰＬＣ保持時間：１６．３分 （カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１１ ５μ
ｍ ４．６ｍｍΦ×２５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎ
ｍ、検出液：Ａ液 ０．１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１
％ＴＦＡ／ＣＨ3 ＣＮ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グ
ラジエント：Ｂ液濃度を０％から毎分１％上昇させ
た。）
製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、Gly-Lys-Gl
u-Gln-Gly-His-Thr-Arg （Ｐ１a ）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ｇｌｘ ２．０（２） ＊Ｇｌｙ ２ Ｈｉｓ １．２（１） Ａｒｇ ０．９（１） Ｔｈｒ １．０（１） Ｌｙｓ １．０（１） ＨＰＬＣ保持時間：１６．３分 （カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１１ ５μ
ｍ ４．６ｍｍΦ×２５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎ
ｍ、検出液：Ａ液 ０．１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１
％ＴＦＡ／ＣＨ3 ＣＮ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グ
ラジエント：Ｂ液濃度を０％から毎分１％上昇させ
た。）
【００３１】参考例２His-Asn-Leu-Gly-His-Gly-His-Lys-His-Glu-Arg-Asp
（配列番号：８）の製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、His-Asn-Le
u-Gly-His-Gly-His-Lys-His-Glu-Arg-Asp （Ｐ２a ）を
得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ ２．１（２） Ｇｌｘ １．１（１） Ｇｌｙ ２．１（２） Ｈｉｓ ４．５（４） Ａｒｇ １．０（２） ＊Ｌｅｕ １ Ｌｙｓ １．１（１） ＨＰＬＣ保持時間：１３．３分 （カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１１ ５μ
ｍ ４．６ｍｍΦ×２５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎ
ｍ、検出液：Ａ液 ０．１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１
％ＴＦＡ／ＣＨ3 ＣＮ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グ
ラジエント：Ｂ液濃度を５％から毎分１％上昇させ
た。）
（配列番号：８）の製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、His-Asn-Le
u-Gly-His-Gly-His-Lys-His-Glu-Arg-Asp （Ｐ２a ）を
得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ ２．１（２） Ｇｌｘ １．１（１） Ｇｌｙ ２．１（２） Ｈｉｓ ４．５（４） Ａｒｇ １．０（２） ＊Ｌｅｕ １ Ｌｙｓ １．１（１） ＨＰＬＣ保持時間：１３．３分 （カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１１ ５μ
ｍ ４．６ｍｍΦ×２５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎ
ｍ、検出液：Ａ液 ０．１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１
％ＴＦＡ／ＣＨ3 ＣＮ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グ
ラジエント：Ｂ液濃度を５％から毎分１％上昇させ
た。）
【００３２】参考例３Gly-Leu-Gly-His-Gly-His-Glu-Gln-Gln-His-Gly-Leu-Gl
y-His-Gly-His-Lys （配列番号：９）の製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、Gly-Leu-Gl
y-His-Gly-His-Glu-Gln-Gln-His-Gly-Leu-Gly-His-Gly-
His-Lys （Ｐ３）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ｇｌｘ ３．３（３） Ｇｌｙ ６．５（６） Ｈｉｓ ５．８（５） ＊Ｌｅｕ ２ Ｌｙｓ １．１（１） ＨＰＬＣ保持時間：１６．７分 （カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１１ ５μ
ｍ ４．６ｍｍΦ×２５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎ
ｍ、検出液：Ａ液 ０．１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１
％ＴＦＡ／ＣＨ3 ＣＮ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グ
ラジエント：Ｂ液濃度を５％から毎分１％上昇させ
た。）
y-His-Gly-His-Lys （配列番号：９）の製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、Gly-Leu-Gl
y-His-Gly-His-Glu-Gln-Gln-His-Gly-Leu-Gly-His-Gly-
His-Lys （Ｐ３）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ｇｌｘ ３．３（３） Ｇｌｙ ６．５（６） Ｈｉｓ ５．８（５） ＊Ｌｅｕ ２ Ｌｙｓ １．１（１） ＨＰＬＣ保持時間：１６．７分 （カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１１ ５μ
ｍ ４．６ｍｍΦ×２５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎ
ｍ、検出液：Ａ液 ０．１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１
％ＴＦＡ／ＣＨ3 ＣＮ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グ
ラジエント：Ｂ液濃度を５％から毎分１％上昇させ
た。）
【００３３】参考例４Phe-Lys-Leu-Asp-Asp-Asp-Leu-Glu-His-Gln-Gly-Gly-Hi
s-Val-Leu-Asp-His-Gly-His-Lys （配列番号：１０）の
製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、Phe-Lys-Le
u-Asp-Asp-Asp-Leu-Glu-His-Gln-Gly-Gly-His-Val-Leu-
Asp-His-Gly-His-Lys （Ｐ４）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ ４．３（４） Ｇｌｘ ２．２（２） Ｇｌｙ ３．３（３） Ｈｉｓ ４．５（４） Ｖａｌ ０．９（１） ＊Ｌｅｕ ３ Ｐｈｅ １．０（１） Ｌｙｓ ２．２（２） ＨＰＬＣ保持時間：１６．０分 （カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１１ ５μ
ｍ ４．６ｍｍΦ×２５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎ
ｍ、検出液：Ａ液 ０．１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１
％ＴＦＡ／ＣＨ3 ＣＮ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グ
ラジエント：Ｂ液濃度を１５％から毎分１％上昇させ
た。）
s-Val-Leu-Asp-His-Gly-His-Lys （配列番号：１０）の
製造 実施例１記載の方法と同様の方法によって、Phe-Lys-Le
u-Asp-Asp-Asp-Leu-Glu-His-Gln-Gly-Gly-His-Val-Leu-
Asp-His-Gly-His-Lys （Ｐ４）を得た。 アミノ酸分析 加水分解：６Ｎ塩酸、１１０°Ｃ、２４時間 分析方法：ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法 ＊基準アミノ酸 （ ）内理論値 Ａｓｘ ４．３（４） Ｇｌｘ ２．２（２） Ｇｌｙ ３．３（３） Ｈｉｓ ４．５（４） Ｖａｌ ０．９（１） ＊Ｌｅｕ ３ Ｐｈｅ １．０（１） Ｌｙｓ ２．２（２） ＨＰＬＣ保持時間：１６．０分 （カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１１ ５μ
ｍ ４．６ｍｍΦ×２５０ｍｍ、検出波長：２２０ｎ
ｍ、検出液：Ａ液 ０．１％ＴＦＡ／水、Ｂ液 ０．１
％ＴＦＡ／ＣＨ3 ＣＮ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、グ
ラジエント：Ｂ液濃度を１５％から毎分１％上昇させ
た。）
【００３４】試験例１Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３およびＰ５ペプチドの線維芽細胞の接
着および伸展作用 細胞液 マウス 3T3線維芽細胞は岩城硝子より提供されたものを
用いた。これらの細胞は 10%ウシ胎児血清を含むダルベ
ッコ改良イーグル基礎培地にて培養した。ほぼコンフル
エントとなった細胞を 0.25%トリプシン/5mM EDTA 液に
より培養皿より剥がし、0.2%牛血清アルブミン (BSA)を
含むダルベッコ改良イーグル基礎培地にて 2×104cells
/ml となるように調製した。
着および伸展作用 細胞液 マウス 3T3線維芽細胞は岩城硝子より提供されたものを
用いた。これらの細胞は 10%ウシ胎児血清を含むダルベ
ッコ改良イーグル基礎培地にて培養した。ほぼコンフル
エントとなった細胞を 0.25%トリプシン/5mM EDTA 液に
より培養皿より剥がし、0.2%牛血清アルブミン (BSA)を
含むダルベッコ改良イーグル基礎培地にて 2×104cells
/ml となるように調製した。
【００３５】細胞接着・伸展活性の測定方法 96穴ポリスチレンプレート (タイターテック社) に種々
濃度の（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３およびＰ５）ペプチド溶液(1
00μl/well) を添加して 4℃にて一晩放置することによ
りコーティングし、さらに1%牛血清アルブミン (BSA)を
250μl/well添加して37℃にて 1時間放置することによ
りブロッキングした。プレートを0.2% BSAを含むTBS (T
ris-buffered saline, 0.1M NaClを含む50mM Tris-HCl,
pH7.4)にて数回洗浄した後、 2×104cells/ml となる
ようにで調製したマウス 3T3線維芽細胞の細胞液を10
0ml/well添加して37℃にて 2時間放置した。 TBSにてプ
レートを洗浄することにより非接着細胞を除去した後、
プレートに接着したマウス 3T3線維芽細胞の細胞数及び
その伸展した細胞数を計測した。ここで伸展した細胞と
は顕微鏡下において多角形(polygonal) であり、球形を
呈する非接着細胞に比べ、その表面積が 2倍以上大きい
ものをいう。その結果を図１に示す。この結果によれ
ば、Ｐ１、Ｐ２またはＰ５ペプチドの場合、ペプチド濃
度に依存して接着細胞数が増加し、10μM の濃度で最大
の接着細胞数を示した。また、Ｐ１、Ｐ２およびＰ５以
外のペプチドは細胞接着活性を示さなかった。
濃度の（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３およびＰ５）ペプチド溶液(1
00μl/well) を添加して 4℃にて一晩放置することによ
りコーティングし、さらに1%牛血清アルブミン (BSA)を
250μl/well添加して37℃にて 1時間放置することによ
りブロッキングした。プレートを0.2% BSAを含むTBS (T
ris-buffered saline, 0.1M NaClを含む50mM Tris-HCl,
pH7.4)にて数回洗浄した後、 2×104cells/ml となる
ようにで調製したマウス 3T3線維芽細胞の細胞液を10
0ml/well添加して37℃にて 2時間放置した。 TBSにてプ
レートを洗浄することにより非接着細胞を除去した後、
プレートに接着したマウス 3T3線維芽細胞の細胞数及び
その伸展した細胞数を計測した。ここで伸展した細胞と
は顕微鏡下において多角形(polygonal) であり、球形を
呈する非接着細胞に比べ、その表面積が 2倍以上大きい
ものをいう。その結果を図１に示す。この結果によれ
ば、Ｐ１、Ｐ２またはＰ５ペプチドの場合、ペプチド濃
度に依存して接着細胞数が増加し、10μM の濃度で最大
の接着細胞数を示した。また、Ｐ１、Ｐ２およびＰ５以
外のペプチドは細胞接着活性を示さなかった。
【００３６】試験例２Ｐ１、Ｐ２およびＰ５ペプチドの線維芽細胞の接着抑制
作用 試験例１記載の方法と同様に行った。まず、96穴のマイ
クロタイタープレートをＰ１、Ｐ２またはＰ５ペプチド
でコートする。TBS で洗浄した後、各種の濃度のＰ１、
Ｐ２またはＰ５ペプチドと共に、線維芽細胞を加えて、
37℃で 120分間培養した。TBS にてプレートを洗浄し、
非接着細胞を除去した後、顕微鏡下でプレートに接着
し、伸展した細胞数を計測した。その結果を図２に示
す。この結果によれば、プレートに接着し、伸展する細
胞数は、同じペプチドを添加することによって阻害され
る。このことは、これらＰ１及びＰ５ペプチドが細胞表
面のリセプターに付着するため、細胞がプレートに接着
することができなくなったことを示している。
作用 試験例１記載の方法と同様に行った。まず、96穴のマイ
クロタイタープレートをＰ１、Ｐ２またはＰ５ペプチド
でコートする。TBS で洗浄した後、各種の濃度のＰ１、
Ｐ２またはＰ５ペプチドと共に、線維芽細胞を加えて、
37℃で 120分間培養した。TBS にてプレートを洗浄し、
非接着細胞を除去した後、顕微鏡下でプレートに接着
し、伸展した細胞数を計測した。その結果を図２に示
す。この結果によれば、プレートに接着し、伸展する細
胞数は、同じペプチドを添加することによって阻害され
る。このことは、これらＰ１及びＰ５ペプチドが細胞表
面のリセプターに付着するため、細胞がプレートに接着
することができなくなったことを示している。
【００３７】試験例３Ｐ１、Ｐ２およびＰ５ペプチドによるの線維芽細胞の細
胞接着作用に対する２本鎖高分子キニノゲン(HKa) の抑
制作用 Hka は、J.Cell.Biol.,116,465(1992)記載の方法によっ
て精製した。マイクロタイタープレートを10μg/mlのＰ
１、Ｐ２またはＰ５ペプチドでコーティングし、線維芽
細胞を種々の HKa存在下で37℃にて 2時間培養した。こ
の時の伸展した細胞数を計測した。その結果を図３に示
す。この結果によれば、HKa が濃度依存でＰ１、Ｐ２ま
たはＰ５ペプチドの細胞接着作用を阻害することを示し
ている。このことは、Ｐ１、Ｐ２およびＰ５ペプチドが
HKa の接着コアに対応する部分であることを明らかにし
ている。
胞接着作用に対する２本鎖高分子キニノゲン(HKa) の抑
制作用 Hka は、J.Cell.Biol.,116,465(1992)記載の方法によっ
て精製した。マイクロタイタープレートを10μg/mlのＰ
１、Ｐ２またはＰ５ペプチドでコーティングし、線維芽
細胞を種々の HKa存在下で37℃にて 2時間培養した。こ
の時の伸展した細胞数を計測した。その結果を図３に示
す。この結果によれば、HKa が濃度依存でＰ１、Ｐ２ま
たはＰ５ペプチドの細胞接着作用を阻害することを示し
ている。このことは、Ｐ１、Ｐ２およびＰ５ペプチドが
HKa の接着コアに対応する部分であることを明らかにし
ている。
【００３８】試験例４Ｐ１a 、Ｐ１b およびＰ１c ペプチドの線維芽細胞の伸
展作用 試験例１記載の方法と同様の方法によって、Ｐ１a 、Ｐ
１b およびＰ１c ペプチドの細胞接着作用を測定した。
まず、96穴のプレートに各種の濃度の３種のペプチドを
加えて、37℃で２時間保持してコートし、１％ BSA-TBS
で洗浄した後、3T3 線維芽細胞のDMEM-0.2％BSA 溶液を
加えた。37℃で２時間培養後、顕微鏡下でプレートに接
着し、伸展した細胞数を計測した。その結果を図４に示
す。この結果によれば、Ｐ１ペプチドのＣ末部分が欠落
するにつれて作用が弱くなり、Ｃ末が１１個欠落したＰ
１a には全く作用がないことが示された。
展作用 試験例１記載の方法と同様の方法によって、Ｐ１a 、Ｐ
１b およびＰ１c ペプチドの細胞接着作用を測定した。
まず、96穴のプレートに各種の濃度の３種のペプチドを
加えて、37℃で２時間保持してコートし、１％ BSA-TBS
で洗浄した後、3T3 線維芽細胞のDMEM-0.2％BSA 溶液を
加えた。37℃で２時間培養後、顕微鏡下でプレートに接
着し、伸展した細胞数を計測した。その結果を図４に示
す。この結果によれば、Ｐ１ペプチドのＣ末部分が欠落
するにつれて作用が弱くなり、Ｃ末が１１個欠落したＰ
１a には全く作用がないことが示された。
【００３９】試験例５Ｐ２a およびＰ２b ペプチドの線維芽細胞の伸展作用 試験例４記載の方法によって、Ｐ２a およびＰ２b ペプ
チドの細胞接着作用を測定した。その結果を図５に示
す。この結果によれば、Ｐ２ペプチドのＣ末部分が欠落
すると作用がなくなり、Ｃ末が９個欠落したＰ２a では
全く作用を示さないことが明らかとなった。
チドの細胞接着作用を測定した。その結果を図５に示
す。この結果によれば、Ｐ２ペプチドのＣ末部分が欠落
すると作用がなくなり、Ｃ末が９個欠落したＰ２a では
全く作用を示さないことが明らかとなった。
【００４０】試験例６Ｐ５a 、Ｐ５b およびＰ５c ペプチドの線維芽細胞の伸
展作用 試験例４記載の方法によって、Ｐ５a 、Ｐ５b およびＰ
５c ペプチドの細胞接着作用を測定した。その結果を図
６に示す。この結果によれば、Ｐ５ペプチドのＣ末部分
が欠落するにつれて作用が弱くなり、Ｃ末が７個欠落し
たＰ５a になるとＰ５c の約２５％の作用しか示さない
ことが明らかとなった。
展作用 試験例４記載の方法によって、Ｐ５a 、Ｐ５b およびＰ
５c ペプチドの細胞接着作用を測定した。その結果を図
６に示す。この結果によれば、Ｐ５ペプチドのＣ末部分
が欠落するにつれて作用が弱くなり、Ｃ末が７個欠落し
たＰ５a になるとＰ５c の約２５％の作用しか示さない
ことが明らかとなった。
【００４１】試験例７Ｐ１ペプチドによる線維芽細胞の細胞接着作用に対する
Ｐ２およびＰ５ペプチドの抑制作用 細胞液 線維芽細胞を用いて、試験例１の記載の方法により細
胞液を調製した。 細胞伸展阻害活性の測定方法 マイクロタイタープレートに10μＭのＰ１ペプチドを添
加し、 4℃にて一晩放置することによりコーティングし
た。種々の濃度のＰ２またはＰ５ペプチドと共に 3T3線
維芽細胞をプレートに加えて培養し、その後の接着、伸
展した細胞数を計測した。その結果を図７に示す。この
結果によれば、Ｐ５ペプチドはＰ１ペプチドを介した細
胞接着を阻害することが示されている。このことは、Ｐ
１およびＰ５ペプチドが細胞表面の同じリセプターに結
合することを示している。一方、Ｐ２ペプチドはＰ１ペ
プチドを介した細胞接着を阻害せず、Ｐ２が結合する細
胞表面のリセプターはＰ１およびＰ５ペプチドのリセプ
ターとは異なることを示している。
Ｐ２およびＰ５ペプチドの抑制作用 細胞液 線維芽細胞を用いて、試験例１の記載の方法により細
胞液を調製した。 細胞伸展阻害活性の測定方法 マイクロタイタープレートに10μＭのＰ１ペプチドを添
加し、 4℃にて一晩放置することによりコーティングし
た。種々の濃度のＰ２またはＰ５ペプチドと共に 3T3線
維芽細胞をプレートに加えて培養し、その後の接着、伸
展した細胞数を計測した。その結果を図７に示す。この
結果によれば、Ｐ５ペプチドはＰ１ペプチドを介した細
胞接着を阻害することが示されている。このことは、Ｐ
１およびＰ５ペプチドが細胞表面の同じリセプターに結
合することを示している。一方、Ｐ２ペプチドはＰ１ペ
プチドを介した細胞接着を阻害せず、Ｐ２が結合する細
胞表面のリセプターはＰ１およびＰ５ペプチドのリセプ
ターとは異なることを示している。
【００４２】試験例８Ｐ２およびＰ５ペプチドのメサンギウム細胞の伸展作用 細胞液 ラットメサンギウム細胞は、Virchows Arch Cell Patho
l., 49, 285 (1985)の方法により取得した。この細胞
は 10%ウシ胎児血清を含むダルベッコ改良イーグル基礎
培地にて培養した。 細胞接着・伸展活性の測定方法 2 cm2 ウエルのポリスチレンプレート (24穴Costarプレ
ート) を種々濃度のＰ２またはＰ５ペプチド溶液でコー
ティングし、さらに1%熱変性牛血清アルブミン(BSA)を
含むTBS でブロッキングした。プレートを0.2%熱変性 B
SAを含むTBS にて数回洗浄した後、で調製したメサン
ギウム細胞 ( 4×103 cells/ml) の細胞液 0.5mlを添加
して37℃にて 2時間放置した。TBS にてプレートを洗浄
することにより非接着細胞を除去した後、プレートに接
着したメサンギウム細胞の細胞数及びその伸展した細胞
数を、顕微鏡下で観察、写真撮影を行い、計測した。必
要に応じてコンピューターイメージプロセッサーを用い
て cell area および diameter の測定を行った。細胞
伸展活性はウエルの 15 mm2 における伸展細胞を測定す
ることにより行った。伸展細胞は以下の方法により同定
した。 (1) 顕微鏡下において多角形状を示しこと (2) コンピューターイメージプロセッサーにおける計
測において伸展細胞の表面面積は円形細胞（接着細胞）
より大きいこと その結果を図８に示す。この結果によれば、Ｐ２および
Ｐ５ペプチドの濃度に依存して接着細胞数が増加した。
なかでも、Ｐ２ペプチドはメサンギウム細胞の接着・伸
展活性が優れていた。
l., 49, 285 (1985)の方法により取得した。この細胞
は 10%ウシ胎児血清を含むダルベッコ改良イーグル基礎
培地にて培養した。 細胞接着・伸展活性の測定方法 2 cm2 ウエルのポリスチレンプレート (24穴Costarプレ
ート) を種々濃度のＰ２またはＰ５ペプチド溶液でコー
ティングし、さらに1%熱変性牛血清アルブミン(BSA)を
含むTBS でブロッキングした。プレートを0.2%熱変性 B
SAを含むTBS にて数回洗浄した後、で調製したメサン
ギウム細胞 ( 4×103 cells/ml) の細胞液 0.5mlを添加
して37℃にて 2時間放置した。TBS にてプレートを洗浄
することにより非接着細胞を除去した後、プレートに接
着したメサンギウム細胞の細胞数及びその伸展した細胞
数を、顕微鏡下で観察、写真撮影を行い、計測した。必
要に応じてコンピューターイメージプロセッサーを用い
て cell area および diameter の測定を行った。細胞
伸展活性はウエルの 15 mm2 における伸展細胞を測定す
ることにより行った。伸展細胞は以下の方法により同定
した。 (1) 顕微鏡下において多角形状を示しこと (2) コンピューターイメージプロセッサーにおける計
測において伸展細胞の表面面積は円形細胞（接着細胞）
より大きいこと その結果を図８に示す。この結果によれば、Ｐ２および
Ｐ５ペプチドの濃度に依存して接着細胞数が増加した。
なかでも、Ｐ２ペプチドはメサンギウム細胞の接着・伸
展活性が優れていた。
【００４３】試験例９Ｐ２またはＰ５ペプチドでコートされたプレートへのメ
サンギウム細胞の接着に対するＧＲＧＤＳＰ（ＲＧＤペ
プチド）による抑制作用 ＧＲＧＤＳＰは岩城硝子（東京）より購入した。本試験
は、試験例８記載の方法と同様に行った。10μＭのＰ２
またはＰ５ペプチドでコートする。TBS で洗浄した後、
各種の濃度のＧＲＧＤＳＰと共に、メサンギウム細胞を
加えて、37℃で120分間培養した。TBS にてプレートを
洗浄し、非接着細胞を除去した後、顕微鏡下でプレート
に接着し、伸展した細胞数を計測した。その結果を図９
に示す。この結果によれば、Ｐ２およびＰ５ペプチドに
よるメサンギウム細胞の接着はＧＲＧＤＳＰによって抑
制された。
サンギウム細胞の接着に対するＧＲＧＤＳＰ（ＲＧＤペ
プチド）による抑制作用 ＧＲＧＤＳＰは岩城硝子（東京）より購入した。本試験
は、試験例８記載の方法と同様に行った。10μＭのＰ２
またはＰ５ペプチドでコートする。TBS で洗浄した後、
各種の濃度のＧＲＧＤＳＰと共に、メサンギウム細胞を
加えて、37℃で120分間培養した。TBS にてプレートを
洗浄し、非接着細胞を除去した後、顕微鏡下でプレート
に接着し、伸展した細胞数を計測した。その結果を図９
に示す。この結果によれば、Ｐ２およびＰ５ペプチドに
よるメサンギウム細胞の接着はＧＲＧＤＳＰによって抑
制された。
【００４４】
配列番号：１ 配列の長さ：12 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト
【００４５】配列番号：２ 配列の長さ：19 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト 配列 Gly Lys Glu Gln Gly His Thr Arg Arg His Asp Trp Gly His Glu Lys 1 5 10 15 Gln Arg Lys
【００４６】配列番号：３ 配列の長さ：20 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト 配列 His Asn Leu Gly His Gly His Lys His Glu Arg Asp Gln Gly His 1 5 10 15 Gly His Gln Arg Gly
【００４７】配列番号：４ 配列の長さ：13 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト 配列 His Lys His Gly His Gly His Gly Lys His Lys Asn Lys 1 5 10
【００４８】配列番号：５ 配列の長さ：15 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト 配列 His Lys His Gly His Gly His Gly Lys His Lys Asn Lys Gly Lys 1 5 10 15
【００４９】配列番号：６ 配列の長さ：20 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト 配列 His Lys His Gly His Gly His Gly Lys His Lys Asn Lys Gly Lys 1 5 10 15 Lys Asn Gly Lys His 20
【００５０】配列番号：７ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト
【００５１】配列番号：８ 配列の長さ：12 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト
【００５２】配列番号：９ 配列の長さ：17 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト 配列 Gly Leu Gly His Gly His Glu Gln Gln His Gly Leu Gly His Gly 1 5 10 15 His Lys
【００５３】配列番号：１０ 配列の長さ：20 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト 配列 Phe Lys Leu Asp Asp Asp Leu Glu His Gln Gly Gly His Val Leu 1 5 10 15 Asp His Gly His Lys 20
【図１】Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３およびＰ５ペプチドの線維芽
細胞の接着および伸展作用 種々の濃度のＰ１、Ｐ２、Ｐ３またはＰ５ペプチドでコ
ーティングしたプレートに接着した線維芽細胞の細胞数
(A)及びその伸展した細胞数 (B)を示す。接着した細胞
数 (A)についてはＰ１（ 1μM ）ペプチドでコーティン
グした時に得られる接着細胞数を100%として表した。
細胞の接着および伸展作用 種々の濃度のＰ１、Ｐ２、Ｐ３またはＰ５ペプチドでコ
ーティングしたプレートに接着した線維芽細胞の細胞数
(A)及びその伸展した細胞数 (B)を示す。接着した細胞
数 (A)についてはＰ１（ 1μM ）ペプチドでコーティン
グした時に得られる接着細胞数を100%として表した。
【図２】Ｐ１、Ｐ２およびＰ５ペプチドの線維芽細胞の
接着抑制作用 Ｐ１、Ｐ２またはＰ５ペプチドでコートされたプレート
に、線維芽細胞と共に種々の濃度のＰ１、Ｐ２またはＰ
５ペプチドを添加、共存させて培養した後、このプレー
トに接着し、伸展する細胞数を測定した結果を表す。
接着抑制作用 Ｐ１、Ｐ２またはＰ５ペプチドでコートされたプレート
に、線維芽細胞と共に種々の濃度のＰ１、Ｐ２またはＰ
５ペプチドを添加、共存させて培養した後、このプレー
トに接着し、伸展する細胞数を測定した結果を表す。
【図３】ＨＫａの添加による線維芽細胞の接着抑制作用 Ｐ１、Ｐ２またはＰ５ペプチドでコートされたプレート
に、線維芽細胞と共に種々の濃度のＨＫａを添加、共存
させて培養した後、このプレートに接着し、伸展する細
胞数を表す。
に、線維芽細胞と共に種々の濃度のＨＫａを添加、共存
させて培養した後、このプレートに接着し、伸展する細
胞数を表す。
【図４】Ｐ１a 、Ｐ１b およびＰ１c ペプチドの線維芽
細胞の伸展作用 種々の濃度のＰ１a 、Ｐ１b およびＰ１c ペプチドでコ
ーティングしたプレートを用いて、これに接着し、伸展
する細胞数を示す。
細胞の伸展作用 種々の濃度のＰ１a 、Ｐ１b およびＰ１c ペプチドでコ
ーティングしたプレートを用いて、これに接着し、伸展
する細胞数を示す。
【図５】Ｐ２a およびＰ２b ペプチドの線維芽細胞の伸
展作用 種々の濃度のＰ２a およびＰ２b ペプチドでコーティン
グしたプレートを用いて、これに接着し、伸展する細胞
数を示す。
展作用 種々の濃度のＰ２a およびＰ２b ペプチドでコーティン
グしたプレートを用いて、これに接着し、伸展する細胞
数を示す。
【図６】Ｐ５a 、Ｐ５b およびＰ５c ペプチドの線維芽
細胞の伸展作用 種々の濃度のＰ５a 、Ｐ５b およびＰ５c ペプチドでコ
ーティングしたプレートを用いて、これに接着し、伸展
する細胞数を示す。
細胞の伸展作用 種々の濃度のＰ５a 、Ｐ５b およびＰ５c ペプチドでコ
ーティングしたプレートを用いて、これに接着し、伸展
する細胞数を示す。
【図７】Ｐ２およびＰ５ペプチドの線維芽細胞の接着抑
制作用 Ｐ１ペプチドでコートされたプレートに、線維芽細胞と
共に種々の濃度のＰ２ペプチド（○）あるいはＰ５ペプ
チド (▲) を添加し、共存させて培養した後、このプレ
ートに接着し、伸展する細胞数を示す。
制作用 Ｐ１ペプチドでコートされたプレートに、線維芽細胞と
共に種々の濃度のＰ２ペプチド（○）あるいはＰ５ペプ
チド (▲) を添加し、共存させて培養した後、このプレ
ートに接着し、伸展する細胞数を示す。
【図８】Ｐ２およびＰ５ペプチドのメサンギウム細胞の
伸展作用 種々の濃度のＰ２またはＰ５ペプチドでコーティングし
たプレートに接着し、伸展するメサンギウム細胞の細胞
数を示す。
伸展作用 種々の濃度のＰ２またはＰ５ペプチドでコーティングし
たプレートに接着し、伸展するメサンギウム細胞の細胞
数を示す。
【図９】Ｐ２またはＰ５ペプチドでコートされたプレー
トへのメサンギウム細胞の接着に対するＲＧＤペプチド
による抑制作用 Ｐ２またはＰ５ペプチドでコーティングしたプレート
に、メサンギウム細胞と共に種々の濃度のＧＲＧＤＳＰ
（ＲＧＤペプチド）を添加、共存させて培養した後、こ
のプレートに接着し、伸展する細胞数を測定した結果を
表す。
トへのメサンギウム細胞の接着に対するＲＧＤペプチド
による抑制作用 Ｐ２またはＰ５ペプチドでコーティングしたプレート
に、メサンギウム細胞と共に種々の濃度のＧＲＧＤＳＰ
（ＲＧＤペプチド）を添加、共存させて培養した後、こ
のプレートに接着し、伸展する細胞数を測定した結果を
表す。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＤＵ 38/17 ＡＣＢ ＡＤＳ Ｃ０７Ｋ 7/06 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＵ 37/42 ＡＣＢ ＡＤＳ
Claims (6)
- 【請求項１】 (1) 、(2) または(3) のいずれかで表さ
れるアミノ酸配列を有するヒト高分子キニノゲンＬ鎖中
の部分アミノ酸配列からなるペプチド誘導体、またはそ
の薬学的に許容される塩。 (1) GlyLysGluGlnGlyHisThrArgArgHisAspTrp (2）HisAsnLeuGlyHisGlyHisLysHisGluArgAspGlnGlyHisG
lyHisGlnArg (3) HisLysHisGlyHisGlyHisGlyLysHisLysAsnLys - 【請求項２】 (1) 、(2) または(3) のいずれかで表さ
れるアミノ酸配列を有するヒト高分子キニノゲンＬ鎖の
402位〜 498位のペプチド中の部分アミノ酸配列からな
るペプチド誘導体、またはその薬学的に許容される塩。 (1) GlyLysGluGlnGlyHisThrArgArgHisAspTrp (2）HisAsnLeuGlyHisGlyHisLysHisGluArgAspGlnGlyHisG
lyHisGlnArg (3) HisLysHisGlyHisGlyHisGlyLysHisLysAsnLys - 【請求項３】 部分アミノ酸配列が、(1) 、(2) または
(3) で表されるアミノ酸配列である請求項１記載のペプ
チド誘導体、またはその薬学的に許容される塩。 (1) GlyLysGluGlnGlyHisThrArgArgHisAspTrpGlyHisGluL
ysGlnArgLys (2) HisLysHisGlyHisGlyHisGlyLysHisLysAsnLysGlyLysL
ysAsnGlyLysHis (3) HisAsnLeuGlyHisGlyHisLysHisGluArgAspGlnGlyHisG
lyHisGlnArgGly - 【請求項４】 請求項１、２または３記載のペプチド誘
導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として
含有することを特徴とする細胞接着抑制剤。 - 【請求項５】 請求項１、２または３記載のペプチド誘
導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分として
含有することを特徴とする癌転移抑制剤、血小板凝集抑
制剤、創傷治癒剤、炎症治癒剤、動脈硬化抑制剤または
糸球体腎炎治療剤。 - 【請求項６】 (1) または(2) で表されるアミノ酸配列
を有するヒト高分子キニノゲンＬ鎖中の部分アミノ酸配
列からなるペプチド誘導体またはその薬学的に許容され
る塩を有効成分として含有することを特徴とする細胞接
着抑制剤。 (1) TrpGlyHisGluLysGlnArg (2）LysGlyLysLysAsnGlyLysHis
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7276418A JPH08208692A (ja) | 1994-09-28 | 1995-09-28 | 新規な細胞接着抑制ペプチド誘導体 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25945194 | 1994-09-28 | ||
| JP6-259451 | 1994-09-28 | ||
| JP7276418A JPH08208692A (ja) | 1994-09-28 | 1995-09-28 | 新規な細胞接着抑制ペプチド誘導体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08208692A true JPH08208692A (ja) | 1996-08-13 |
Family
ID=26544132
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7276418A Pending JPH08208692A (ja) | 1994-09-28 | 1995-09-28 | 新規な細胞接着抑制ペプチド誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08208692A (ja) |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000027866A1 (en) * | 1998-11-10 | 2000-05-18 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by high molecular weight kininogen and peptide analogs thereof |
| US6284726B1 (en) | 1998-11-10 | 2001-09-04 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by peptide analogs of high molecular weight kininogen domain 5 |
| EP1344531A1 (en) * | 2002-03-15 | 2003-09-17 | Aventis Behring GmbH | High molecular weight kininogen (HK) domain 5 derived peptides against thrombic diseases |
| EP1344532A1 (en) * | 2002-03-15 | 2003-09-17 | Aventis Behring GmbH | High molecular weight kininogen (HK) domain 5 derived peptides against thrombic diseases |
| KR100411828B1 (ko) * | 2001-04-21 | 2003-12-24 | 김수열 | 항 염증 효과가 있는 새로운 합성 펩타이드 |
| US6767889B1 (en) | 1998-11-10 | 2004-07-27 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by high molecular weight kininogen and peptide analogs thereof |
| US6869931B1 (en) | 1998-12-16 | 2005-03-22 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by high molecular weight kininogen domain 3 peptide analogs |
| WO2005061535A1 (en) * | 2003-05-19 | 2005-07-07 | Dermagen Ab | Novel antimicrobial peptides with heparin binding activity |
| US6994852B1 (en) | 1999-11-12 | 2006-02-07 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by antibodies against high molecular weight kininogen domain 5 |
| WO2010060636A1 (en) * | 2008-11-27 | 2010-06-03 | Hansa Medical Ab | Antimicrobial therapy |
| US11668718B2 (en) | 2015-12-15 | 2023-06-06 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Peptide quantitation assay for differentiating full-length high molecular weight kininogen (HMWK) and cleaved HMWK |
-
1995
- 1995-09-28 JP JP7276418A patent/JPH08208692A/ja active Pending
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| US7332161B2 (en) | 1999-11-12 | 2008-02-19 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Treatment of disease with antibodies against high molecular weight kininogen domain 5 |
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| JP2007531691A (ja) * | 2003-05-19 | 2007-11-08 | デルマゲン アクティエボラーグ | ヘパリン結合活性を有する新規な抗微生物ペプチド |
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