JPH0812699A - Ｐｅｇ修飾アビジン及びそれを用いた抗原又は抗体の分離方法 - Google Patents
Ｐｅｇ修飾アビジン及びそれを用いた抗原又は抗体の分離方法Info
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- JPH0812699A JPH0812699A JP14457094A JP14457094A JPH0812699A JP H0812699 A JPH0812699 A JP H0812699A JP 14457094 A JP14457094 A JP 14457094A JP 14457094 A JP14457094 A JP 14457094A JP H0812699 A JPH0812699 A JP H0812699A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 ＰＥＧ修飾アビジンを利用して、水性２相分
配系において抗原又は抗体を特異的に分離又は定量す
る。 【構成】 抗原（又は抗体）の一方に予めビオチンが結
合し、これに、ＰＥＧ修飾アビジンが結合した複合体を
用いて、試料中の抗体（又は抗原）をＰＥＧ水溶液中に
選択的に分離する。
配系において抗原又は抗体を特異的に分離又は定量す
る。 【構成】 抗原（又は抗体）の一方に予めビオチンが結
合し、これに、ＰＥＧ修飾アビジンが結合した複合体を
用いて、試料中の抗体（又は抗原）をＰＥＧ水溶液中に
選択的に分離する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗原又は抗体を固相に
固定化することなく分離し、あるいは定量する方法に関
する。
固定化することなく分離し、あるいは定量する方法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】抗原又は抗体を分離又は定量しようとす
る場合、従来のイムノアッセイでは、デキストランゲル
又はポリスチレンなどの固相化担体の表面に抗原又は抗
体の一方を結合させて行うのが通例である。この場合、
固相化した抗原又は抗体と、それと結合する結合相手
（リガンド）との反応がいかに効率よく進むか、その反
応の特異性が保たれるか、固相化担体との非特異的な吸
着が避けられるかといった問題を解決しなければならな
い。一般に抗原と抗体が結合する反応速度は、その一方
が固相化されている場合、反応速度が著しく低くなり、
感度の低下は避けられない。また、いったん固相化担体
に抗原と抗体が非特異的に吸着する可能性がある。また
この問題は液相−固相の分配系を用いてアフィニティ・
クロマトグラフィーを行う場合にも常に生じる根本的な
問題である。
る場合、従来のイムノアッセイでは、デキストランゲル
又はポリスチレンなどの固相化担体の表面に抗原又は抗
体の一方を結合させて行うのが通例である。この場合、
固相化した抗原又は抗体と、それと結合する結合相手
（リガンド）との反応がいかに効率よく進むか、その反
応の特異性が保たれるか、固相化担体との非特異的な吸
着が避けられるかといった問題を解決しなければならな
い。一般に抗原と抗体が結合する反応速度は、その一方
が固相化されている場合、反応速度が著しく低くなり、
感度の低下は避けられない。また、いったん固相化担体
に抗原と抗体が非特異的に吸着する可能性がある。また
この問題は液相−固相の分配系を用いてアフィニティ・
クロマトグラフィーを行う場合にも常に生じる根本的な
問題である。
【０００３】一方、イムノアッセイにおいて抗原（抗
体）を用いて抗体（抗原）を検出する際に、ビオチン−
アビジンの特異的な結合が利用されている。たとえば組
織切片上の抗原の存在を抗体で調べる場合、予めビオチ
ンを結合させておいた抗体を反応させ、つぎに蛍光色素
標識又はペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼな
どの酵素標識を結合させたアビジンを反応させると、抗
原の存在は蛍光、あるいは酵素の発色性基質を用いた着
色により同定することができる。またこのようにビオチ
ン−アビジンの強固で特異的な複合体の形成は、抗原及
び／又は抗体に特別な機能をあたえるのに適しているの
で現在広く用いられている。
体）を用いて抗体（抗原）を検出する際に、ビオチン−
アビジンの特異的な結合が利用されている。たとえば組
織切片上の抗原の存在を抗体で調べる場合、予めビオチ
ンを結合させておいた抗体を反応させ、つぎに蛍光色素
標識又はペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼな
どの酵素標識を結合させたアビジンを反応させると、抗
原の存在は蛍光、あるいは酵素の発色性基質を用いた着
色により同定することができる。またこのようにビオチ
ン−アビジンの強固で特異的な複合体の形成は、抗原及
び／又は抗体に特別な機能をあたえるのに適しているの
で現在広く用いられている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、抗原又は抗
体を分離又は定量する場合に、いずれかを固相に担持す
ることなく、液相−液相の２相分配系で反応させること
ができれば、このような問題は根本的に解決されると考
え、化学修飾したアビジンを利用して、抗原−ビオチン
化抗体−ＰＥＧ修飾アビジン複合体を液相−液相の２相
分配系において、選択的に分配させるようにする方法を
提供するものである。
体を分離又は定量する場合に、いずれかを固相に担持す
ることなく、液相−液相の２相分配系で反応させること
ができれば、このような問題は根本的に解決されると考
え、化学修飾したアビジンを利用して、抗原−ビオチン
化抗体−ＰＥＧ修飾アビジン複合体を液相−液相の２相
分配系において、選択的に分配させるようにする方法を
提供するものである。
【０００５】本発明者は、先に酵素タンパク質をポリエ
チレングリコール（ＰＥＧ）で化学修飾することによ
り、酵素活性を保持したままで溶媒に対する溶解性を変
えることができることを報告した（特開昭６０−１５６
３９５）。本発明においては、これと同様の技術をアビ
ジンに応用してＰＥＧ修飾アビジンを得た。未修飾アビ
ジンはＰＥＧに不溶であるが、ＰＥＧ修飾アビジンはＰ
ＥＧに可溶であり、例えば互いに混じり合わないデキス
トラン水溶液とＰＥＧ水溶液の水性２相分配系におい
て、ＰＥＧ修飾アビジンはＰＥＧ水溶液相に選択的に移
行するようになることを見いだした。本発明はこの発見
に基づき、ビオチンを結合させた抗原又は抗体にＰＥＧ
修飾アビジンを反応させて生成した複合体を、ＰＥＧ水
溶液相に選択的に移行させることにより、目的物を分離
する方法である。
チレングリコール（ＰＥＧ）で化学修飾することによ
り、酵素活性を保持したままで溶媒に対する溶解性を変
えることができることを報告した（特開昭６０−１５６
３９５）。本発明においては、これと同様の技術をアビ
ジンに応用してＰＥＧ修飾アビジンを得た。未修飾アビ
ジンはＰＥＧに不溶であるが、ＰＥＧ修飾アビジンはＰ
ＥＧに可溶であり、例えば互いに混じり合わないデキス
トラン水溶液とＰＥＧ水溶液の水性２相分配系におい
て、ＰＥＧ修飾アビジンはＰＥＧ水溶液相に選択的に移
行するようになることを見いだした。本発明はこの発見
に基づき、ビオチンを結合させた抗原又は抗体にＰＥＧ
修飾アビジンを反応させて生成した複合体を、ＰＥＧ水
溶液相に選択的に移行させることにより、目的物を分離
する方法である。
【０００６】ＰＥＧ修飾アビジンを製造するには、アビ
ジンにＰＥＧの反応性誘導体、例えば２，４−ビス−
（Ｏ−メトキシポリエチレングリコール）−６−クロル
−Ｓ−トリアジン（以下、活性化ＰＥＧ２と略称する）
を緩衝液中で反応させる。ＰＥＧ鎖はアビジン分子のリ
ジンの側鎖やＮ末端のアミノ基に反応してＰＥＧ修飾ア
ビジンが得られる。このＰＥＧ修飾アビジンはビオチン
との結合活性を保持している。互いに混じり合いにくい
デキストラン水溶液とＰＥＧ水溶液によって形成される
水性２相分配系において、通常の塩強度では一般にタン
パク質はデキストラン相に溶解し、未修飾アビジンも同
様にデキストラン相に溶解し、ＰＥＧ相には移行しない
が、ＰＥＧ修飾アビジンでは、結合したＰＥＧ鎖はＰＥ
Ｇとの親和性があるので、ＰＥＧ相に移行するようにな
る。そこで、ビオチンが結合したタンパク質にＰＥＧ修
飾アビジンを加えると、タンパク質表面のビオチンにＰ
ＥＧ修飾アビジンが結合する。タンパク質表面に多数の
ビオチンが結合していると、複数のＰＥＧ修飾アビジン
がタンパク質分子に結合することになり、タンパク質は
ビオチンとアビジンの結合を介して、多数のＰＥＧ鎖を
持つことになる。その結果、このようにビオチンを介し
てＰＥＧ修飾アビジンが結合した抗原又は抗体はＰＥＧ
修飾アビジンと同様に水性２相分配系においてＰＥＧ相
に選択的に移行する性質を得ることになる。
ジンにＰＥＧの反応性誘導体、例えば２，４−ビス−
（Ｏ−メトキシポリエチレングリコール）−６−クロル
−Ｓ−トリアジン（以下、活性化ＰＥＧ２と略称する）
を緩衝液中で反応させる。ＰＥＧ鎖はアビジン分子のリ
ジンの側鎖やＮ末端のアミノ基に反応してＰＥＧ修飾ア
ビジンが得られる。このＰＥＧ修飾アビジンはビオチン
との結合活性を保持している。互いに混じり合いにくい
デキストラン水溶液とＰＥＧ水溶液によって形成される
水性２相分配系において、通常の塩強度では一般にタン
パク質はデキストラン相に溶解し、未修飾アビジンも同
様にデキストラン相に溶解し、ＰＥＧ相には移行しない
が、ＰＥＧ修飾アビジンでは、結合したＰＥＧ鎖はＰＥ
Ｇとの親和性があるので、ＰＥＧ相に移行するようにな
る。そこで、ビオチンが結合したタンパク質にＰＥＧ修
飾アビジンを加えると、タンパク質表面のビオチンにＰ
ＥＧ修飾アビジンが結合する。タンパク質表面に多数の
ビオチンが結合していると、複数のＰＥＧ修飾アビジン
がタンパク質分子に結合することになり、タンパク質は
ビオチンとアビジンの結合を介して、多数のＰＥＧ鎖を
持つことになる。その結果、このようにビオチンを介し
てＰＥＧ修飾アビジンが結合した抗原又は抗体はＰＥＧ
修飾アビジンと同様に水性２相分配系においてＰＥＧ相
に選択的に移行する性質を得ることになる。
【０００７】
【実施例】０．３M ほう酸緩衝液（pH８．０）に卵白由
来のアビジンを１mg/ml の濃度で溶解し、これに活性化
ＰＥＧ２を一定量加え、一規定ＮａＯＨでpH＝１０に調
整し、４０℃で１．５時間攪拌下反応させた。反応終了
後ＸＭ５０（ＡＭＩＣＯ）限外濾過膜を用いて限外濾過
し、さらに１０，０００rpm 、４℃で１０分間遠心分離
し、沈殿物を除去してＰＥＧ修飾アビジンを得た。アビ
ジンのタンパク質濃度はビユレット法により定量した。
アビジンのアミノ基の量はトリニトロベンゼンスルホン
酸を用いて定量した。ＰＥＧ修飾アビジンのビオチン結
合活性はＨＡＢＡ〔２−（４−ヒドロキシフェニルア
ゾ）−安息香酸〕を用いて測定した。
来のアビジンを１mg/ml の濃度で溶解し、これに活性化
ＰＥＧ２を一定量加え、一規定ＮａＯＨでpH＝１０に調
整し、４０℃で１．５時間攪拌下反応させた。反応終了
後ＸＭ５０（ＡＭＩＣＯ）限外濾過膜を用いて限外濾過
し、さらに１０，０００rpm 、４℃で１０分間遠心分離
し、沈殿物を除去してＰＥＧ修飾アビジンを得た。アビ
ジンのタンパク質濃度はビユレット法により定量した。
アビジンのアミノ基の量はトリニトロベンゼンスルホン
酸を用いて定量した。ＰＥＧ修飾アビジンのビオチン結
合活性はＨＡＢＡ〔２−（４−ヒドロキシフェニルア
ゾ）−安息香酸〕を用いて測定した。
【０００８】図１に、上記ＰＥＧ修飾アビジンの調製に
おける、反応溶液中の活性化ＰＥＧ２の濃度を増加させ
た場合、アビジンのアミノ基のＰＥＧ修飾率（○印）が
増加し、またそれに伴ないビオチン結合能（●印）の若
干の低下が見られたが、アビジン分子上の合計４０個の
アミノ基のうち約８０％がＰＥＧで修飾されたにもかか
わらず、ＰＥＧ修飾アビジンはビオチンとの結合能を約
５０％維持した。このことは約３０個のアミノ基が修飾
されたことに伴って、１分子当り４個のビオチン結合部
位のうち平均２個の結合活性は失われたが、残りの２個
は結合活性を維持していたことを示唆した。
おける、反応溶液中の活性化ＰＥＧ２の濃度を増加させ
た場合、アビジンのアミノ基のＰＥＧ修飾率（○印）が
増加し、またそれに伴ないビオチン結合能（●印）の若
干の低下が見られたが、アビジン分子上の合計４０個の
アミノ基のうち約８０％がＰＥＧで修飾されたにもかか
わらず、ＰＥＧ修飾アビジンはビオチンとの結合能を約
５０％維持した。このことは約３０個のアミノ基が修飾
されたことに伴って、１分子当り４個のビオチン結合部
位のうち平均２個の結合活性は失われたが、残りの２個
は結合活性を維持していたことを示唆した。
【０００９】ＰＥＧ修飾アビジンが、ビオチン化した酵
素に対して高い親和性を保持しているかどうかを調べる
目的で、ビオチン化ペルオキシダーゼにＰＥＧ修飾アビ
ジンを１：１のモル比で結合させ、その親和性をSephad
ex G-50 によるゲルクロマトグラフィーにより検討し
た。その結果、ＰＥＧ修飾アビジンはビオチン化ペルオ
キシダーゼに定量的に反応し、その複合体の解離はゲル
クロマトグラフィーによって検出されなかった。従っ
て、ＰＥＧ修飾アビジンがビオチン化ペルオキシダーゼ
に対して高い親和性を保持していることを示した。
素に対して高い親和性を保持しているかどうかを調べる
目的で、ビオチン化ペルオキシダーゼにＰＥＧ修飾アビ
ジンを１：１のモル比で結合させ、その親和性をSephad
ex G-50 によるゲルクロマトグラフィーにより検討し
た。その結果、ＰＥＧ修飾アビジンはビオチン化ペルオ
キシダーゼに定量的に反応し、その複合体の解離はゲル
クロマトグラフィーによって検出されなかった。従っ
て、ＰＥＧ修飾アビジンがビオチン化ペルオキシダーゼ
に対して高い親和性を保持していることを示した。
【００１０】ＰＥＧ修飾アビジンと未修飾アビジンがデ
キストラン水溶液／ＰＥＧ水溶液によって形成される水
性２相分配系において、どのような挙動を示すかを検討
した。試験結果を表１に示す。ＰＥＧ修飾アビジンと未
修飾アビジンでは、この水性２相分配系において顕著に
異なる挙動を示した。ＰＥＧ比率の高いデキストラン水
溶液／ＰＥＧ水溶液の２相分配系において、未修飾アビ
ジンはＰＥＧ相には全く分配しないのに対し、ＰＥＧ修
飾アビジンはほぼ定量的にＰＥＧ相に移行することを示
した。
キストラン水溶液／ＰＥＧ水溶液によって形成される水
性２相分配系において、どのような挙動を示すかを検討
した。試験結果を表１に示す。ＰＥＧ修飾アビジンと未
修飾アビジンでは、この水性２相分配系において顕著に
異なる挙動を示した。ＰＥＧ比率の高いデキストラン水
溶液／ＰＥＧ水溶液の２相分配系において、未修飾アビ
ジンはＰＥＧ相には全く分配しないのに対し、ＰＥＧ修
飾アビジンはほぼ定量的にＰＥＧ相に移行することを示
した。
【００１１】
【表１】
【００１２】このよううなＰＥＧ修飾アビジンの水性２
相分配系における特有の挙動を利用し、ビオチン化抗体
を用いて抗原タンパク質をＰＥＧ相に選択的に抽出でき
るか否かを検討した。蛍光標識した抗原としてフルオレ
セインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）標識マウスＩｇ
Ｇ（３pmole)を、ビオチン化抗体としてビオチン化抗マ
ウスＩｇＧ抗体（ウサギＩｇＧ）（１０pmole ）を用い
て燐酸緩衝液中で反応させ、この免疫複合体溶液にＰＥ
Ｇ修飾アビジン１５０μl （１００pmole ）を加えた。
さらにこれにＰＥＧ溶液２００μl 及びデキストラン溶
液を加えて６００μl とし、全体としてＰＥＧとデキス
トランがそれぞれ１１．５ w/w％と５．０ w/w％濃度と
なるように調整し、水性２相分配系を形成させた。これ
をポリエチレン試験管中で転倒をくりかえしながら１０
分間、１２０rpm でゆっくり攪拌したのち、１０，００
０rpm で１０分間遠心し、上層のＰＥＧ水溶液相を回収
し、ＰＥＧ層にＦＩＴＣ結合抗原が抽出されているかど
うかを蛍光分光光度計を用いて検討した。
相分配系における特有の挙動を利用し、ビオチン化抗体
を用いて抗原タンパク質をＰＥＧ相に選択的に抽出でき
るか否かを検討した。蛍光標識した抗原としてフルオレ
セインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）標識マウスＩｇ
Ｇ（３pmole)を、ビオチン化抗体としてビオチン化抗マ
ウスＩｇＧ抗体（ウサギＩｇＧ）（１０pmole ）を用い
て燐酸緩衝液中で反応させ、この免疫複合体溶液にＰＥ
Ｇ修飾アビジン１５０μl （１００pmole ）を加えた。
さらにこれにＰＥＧ溶液２００μl 及びデキストラン溶
液を加えて６００μl とし、全体としてＰＥＧとデキス
トランがそれぞれ１１．５ w/w％と５．０ w/w％濃度と
なるように調整し、水性２相分配系を形成させた。これ
をポリエチレン試験管中で転倒をくりかえしながら１０
分間、１２０rpm でゆっくり攪拌したのち、１０，００
０rpm で１０分間遠心し、上層のＰＥＧ水溶液相を回収
し、ＰＥＧ層にＦＩＴＣ結合抗原が抽出されているかど
うかを蛍光分光光度計を用いて検討した。
【００１３】図２の曲線１はＦＩＴＣ結合抗原、ビオチ
ン化抗体及びＰＥＧ修飾アビジンの複合体の蛍光スペク
トルであり、５２０nmを極大とするＦＩＴＣの蛍光スペ
クトルが観察され、その蛍光強度により定量的にＦＩＴ
Ｃ結合抗原がＰＥＧ相に移行したことを示した。曲線２
は同様の系でＰＥＧ修飾アビジンを欠く系であり、ＦＩ
ＴＣ結合抗原とビオチン化抗体だけの複合体はＰＥＧ相
に移行していないことを示した。曲線３はＦＩＴＣ結合
抗原を含まないビオチン化抗体とＰＥＧ修飾アビジンの
複合体、すなわちバックグラウンドの蛍光スペクトルを
示す。このようにしてビオチン化抗体とＰＥＧ修飾アビ
ジンを介して抗原タンパク質をＰＥＧ相に抽出すること
が可能であることがわかった。
ン化抗体及びＰＥＧ修飾アビジンの複合体の蛍光スペク
トルであり、５２０nmを極大とするＦＩＴＣの蛍光スペ
クトルが観察され、その蛍光強度により定量的にＦＩＴ
Ｃ結合抗原がＰＥＧ相に移行したことを示した。曲線２
は同様の系でＰＥＧ修飾アビジンを欠く系であり、ＦＩ
ＴＣ結合抗原とビオチン化抗体だけの複合体はＰＥＧ相
に移行していないことを示した。曲線３はＦＩＴＣ結合
抗原を含まないビオチン化抗体とＰＥＧ修飾アビジンの
複合体、すなわちバックグラウンドの蛍光スペクトルを
示す。このようにしてビオチン化抗体とＰＥＧ修飾アビ
ジンを介して抗原タンパク質をＰＥＧ相に抽出すること
が可能であることがわかった。
【００１４】
【発明の効果】本発明のＰＥＧ修飾アビジンとビオチン
化抗体との複合体は、ＰＥＧ可溶性であり、これを抗原
タンパク質と複合体を形成した場合もＰＥＧ可溶性であ
るので、容易に、その分離あるいは検出することができ
る。
化抗体との複合体は、ＰＥＧ可溶性であり、これを抗原
タンパク質と複合体を形成した場合もＰＥＧ可溶性であ
るので、容易に、その分離あるいは検出することができ
る。
【００１５】抗原にビオチン化抗体を反応させ、これに
ＰＥＧ修飾アビジンを反応させると、この複合体はＰＥ
Ｇ水溶液相に対して親和性を持つようになる。予めビオ
チン化抗体にＰＥＧ修飾アビジンを反応させてから、抗
原と反応させても同様の効果が得られる。抗原−ビオチ
ン化抗体−ＰＥＧ修飾アビジンの複合体は、デキストラ
ン／ＰＥＧ水性２相分配系においてＰＥＧ相に移行す
る。このような性質を利用して試料溶液から固相化担体
を用いることなく抗原を分離できる。
ＰＥＧ修飾アビジンを反応させると、この複合体はＰＥ
Ｇ水溶液相に対して親和性を持つようになる。予めビオ
チン化抗体にＰＥＧ修飾アビジンを反応させてから、抗
原と反応させても同様の効果が得られる。抗原−ビオチ
ン化抗体−ＰＥＧ修飾アビジンの複合体は、デキストラ
ン／ＰＥＧ水性２相分配系においてＰＥＧ相に移行す
る。このような性質を利用して試料溶液から固相化担体
を用いることなく抗原を分離できる。
【００１６】抗原をあらかじめ放射性同位元素、蛍光物
質あるいはアルカリホスファターゼやパーオキシダーゼ
などの酵素で標識しておくと、ＰＥＧ相に移行した抗原
を測定することができる。この系に様々な既知濃度の非
標識の抗原を加えると、その濃度に応じて標識抗原がＰ
ＥＧ相へ移行するのが阻害され、阻害の程度と非標識抗
原の濃度に関して検量線を得ることができるので、この
検量線を利用して、未知試料の抗原濃度を定量すること
ができる。本発明による方法を利用すれば、従来の抗原
又は抗体のどちらかを固相化し、数回の洗浄操作を含む
煩雑な手順を必要としたＥＬＩＳＡ法などの免疫化学的
方法が非常に簡略化され、きわめて短時間に抗原を定量
することができるようになる。
質あるいはアルカリホスファターゼやパーオキシダーゼ
などの酵素で標識しておくと、ＰＥＧ相に移行した抗原
を測定することができる。この系に様々な既知濃度の非
標識の抗原を加えると、その濃度に応じて標識抗原がＰ
ＥＧ相へ移行するのが阻害され、阻害の程度と非標識抗
原の濃度に関して検量線を得ることができるので、この
検量線を利用して、未知試料の抗原濃度を定量すること
ができる。本発明による方法を利用すれば、従来の抗原
又は抗体のどちらかを固相化し、数回の洗浄操作を含む
煩雑な手順を必要としたＥＬＩＳＡ法などの免疫化学的
方法が非常に簡略化され、きわめて短時間に抗原を定量
することができるようになる。
【００１７】本発明による方法は、抗原又は抗体の分
離、測定に汎用的に用いることができる。複合体を一回
の操作でＰＥＧ相に移行させるほど十分な分配係数をＰ
ＥＧ修飾アビジンが与えることができない場合でも、補
助的にアフィニティ・クロマトグラフィーを行えば複合
体を夾雑物から定量的に分離できる。またこの方法は液
相／固相を用いる従来の方法に比べて、スケールが非常
に小さくても大きくても自由に行うことができることが
特徴的である。
離、測定に汎用的に用いることができる。複合体を一回
の操作でＰＥＧ相に移行させるほど十分な分配係数をＰ
ＥＧ修飾アビジンが与えることができない場合でも、補
助的にアフィニティ・クロマトグラフィーを行えば複合
体を夾雑物から定量的に分離できる。またこの方法は液
相／固相を用いる従来の方法に比べて、スケールが非常
に小さくても大きくても自由に行うことができることが
特徴的である。
【図１】ＰＥＧ修飾アビジンの調製において反応系に加
えられた活性化ＰＥＧ２の濃度と、得られたＰＥＧ修飾
アビジンのアミノ基の修飾の程度及びビオチン結合能の
関係を示すグラフである。
えられた活性化ＰＥＧ２の濃度と、得られたＰＥＧ修飾
アビジンのアミノ基の修飾の程度及びビオチン結合能の
関係を示すグラフである。
【図２】デキストラン水溶液／ＰＥＧ水溶液の２相分配
系において、ＰＥＧ相に移行したビオチン化抗体がＦＩ
ＴＣ結合抗原およびＰＥＧ修飾アビジンと結合して形成
された複合体の蛍光スペクトルである。
系において、ＰＥＧ相に移行したビオチン化抗体がＦＩ
ＴＣ結合抗原およびＰＥＧ修飾アビジンと結合して形成
された複合体の蛍光スペクトルである。
１ ＦＩＴＣ結合抗原−ビオチン化抗体−ＰＥＧ修飾ア
ビジンの複合体 ２ ＦＩＴＣ結合抗原−ビオチン化抗体の複合体 ３ ビオチン化抗体−ＰＥＧ修飾アビジンの複合体
ビジンの複合体 ２ ＦＩＴＣ結合抗原−ビオチン化抗体の複合体 ３ ビオチン化抗体−ＰＥＧ修飾アビジンの複合体
Claims (2)
- 【請求項１】 ポリエチレングリコールで修飾されたア
ビジン。 - 【請求項２】 抗原又は抗体にビオチンが結合し、これ
にポリエチレングリコールで修飾されたアビジンが結合
した複合体を用いて、試料中の抗体又は抗原を分離又は
定量する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14457094A JPH0812699A (ja) | 1994-06-27 | 1994-06-27 | Ｐｅｇ修飾アビジン及びそれを用いた抗原又は抗体の分離方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14457094A JPH0812699A (ja) | 1994-06-27 | 1994-06-27 | Ｐｅｇ修飾アビジン及びそれを用いた抗原又は抗体の分離方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0812699A true JPH0812699A (ja) | 1996-01-16 |
Family
ID=15365285
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14457094A Pending JPH0812699A (ja) | 1994-06-27 | 1994-06-27 | Ｐｅｇ修飾アビジン及びそれを用いた抗原又は抗体の分離方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0812699A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000027814A1 (en) * | 1998-11-10 | 2000-05-18 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Avidin derivatives and uses thereof |
| WO2000027813A1 (en) * | 1998-11-10 | 2000-05-18 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Azobenzene derivatives as labeling agents and intermediates thereof |
| WO2003019187A1 (fr) * | 2001-08-22 | 2003-03-06 | Institute For Antibodies Co., Ltd | Procede de selection d'une molecule de liaison |
| EP0913690A3 (de) * | 1997-11-03 | 2003-03-26 | Roche Diagnostics GmbH | Polyethylenglykol-derivatisierte Biomoleküle und deren Verwendung in heterogenen Nachweisverfahren |
| US7067194B2 (en) * | 2001-06-26 | 2006-06-27 | Accelr8 Technology Corporation | Functional surface coating |
| KR100705438B1 (ko) * | 2006-06-01 | 2007-04-09 | 주식회사 케이티프리텔 | 안테나 |
| KR100859791B1 (ko) * | 2007-05-23 | 2008-09-23 | 인하대학교 산학협력단 | 상 형성 물질과 결합된 분자인식 리간드를 이용하여 상형성과 분자특이적 분리를 동시에 수행하는 방법 |
| US7501157B2 (en) | 2001-06-26 | 2009-03-10 | Accelr8 Technology Corporation | Hydroxyl functional surface coating |
-
1994
- 1994-06-27 JP JP14457094A patent/JPH0812699A/ja active Pending
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0913690A3 (de) * | 1997-11-03 | 2003-03-26 | Roche Diagnostics GmbH | Polyethylenglykol-derivatisierte Biomoleküle und deren Verwendung in heterogenen Nachweisverfahren |
| WO2000027814A1 (en) * | 1998-11-10 | 2000-05-18 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Avidin derivatives and uses thereof |
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| US7067194B2 (en) * | 2001-06-26 | 2006-06-27 | Accelr8 Technology Corporation | Functional surface coating |
| US7501157B2 (en) | 2001-06-26 | 2009-03-10 | Accelr8 Technology Corporation | Hydroxyl functional surface coating |
| US7629029B2 (en) | 2001-06-26 | 2009-12-08 | Accelr8 Technology Corporation | Functional surface coating |
| US8178602B2 (en) | 2001-06-26 | 2012-05-15 | Accelr8 Technology Corporation | Functional surface coating |
| WO2003019187A1 (fr) * | 2001-08-22 | 2003-03-06 | Institute For Antibodies Co., Ltd | Procede de selection d'une molecule de liaison |
| KR100705438B1 (ko) * | 2006-06-01 | 2007-04-09 | 주식회사 케이티프리텔 | 안테나 |
| KR100859791B1 (ko) * | 2007-05-23 | 2008-09-23 | 인하대학교 산학협력단 | 상 형성 물질과 결합된 분자인식 리간드를 이용하여 상형성과 분자특이적 분리를 동시에 수행하는 방법 |
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