JPH08105895A - 被検試料中成分の測定方法 - Google Patents
被検試料中成分の測定方法Info
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- JPH08105895A JPH08105895A JP21371094A JP21371094A JPH08105895A JP H08105895 A JPH08105895 A JP H08105895A JP 21371094 A JP21371094 A JP 21371094A JP 21371094 A JP21371094 A JP 21371094A JP H08105895 A JPH08105895 A JP H08105895A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】再現性、すなわち測定値のばらつきを抑制し得
る、光学的に試料溶液中の成分を測定する方法を提供す
ること。 【構成】被検試料に界面活性作用を有する物質を添加し
た後、当該被検試料中の微量成分を光学的に測定するこ
とからなる被検試料中成分の測定方法、又は、被検試料
中に存在する、水不溶性担体に結合した酵素を測定する
方法であり、界面活性作用を有する物質の存在下で測定
されるべき酵素と該酵素の基質を反応させ、該反応と同
時に又は該反応の後、当該被検試料中の微量成分を光学
的に測定することからなる被検試料中成分の測定方法に
より前記目的を達成する。
る、光学的に試料溶液中の成分を測定する方法を提供す
ること。 【構成】被検試料に界面活性作用を有する物質を添加し
た後、当該被検試料中の微量成分を光学的に測定するこ
とからなる被検試料中成分の測定方法、又は、被検試料
中に存在する、水不溶性担体に結合した酵素を測定する
方法であり、界面活性作用を有する物質の存在下で測定
されるべき酵素と該酵素の基質を反応させ、該反応と同
時に又は該反応の後、当該被検試料中の微量成分を光学
的に測定することからなる被検試料中成分の測定方法に
より前記目的を達成する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、被検試料中の成分を光
学的に測定するための方法に関し、特に臨床検査の領域
における免疫測定等において、最終的に試料溶液中に形
成された免疫複合体中の標識物質を光学的に測定するの
に好適な方法に関するものである。
学的に測定するための方法に関し、特に臨床検査の領域
における免疫測定等において、最終的に試料溶液中に形
成された免疫複合体中の標識物質を光学的に測定するの
に好適な方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】試料溶液中の成分を測定するために、従
来、その成分量に相関する例えば吸光、蛍光、発光等を
光学的に測定することが行われている。具体的に例え
ば、一般的にサンドイッチ法と呼ばれる免疫測定におい
ては、まず測定対象物質に対する抗体を固定化した水不
溶性の担体を血清等の試料と混合し、前記物質を担体に
間接的に結合させ、次に、前記抗体とは異なる部位で測
定対象物質と結合する標識された抗体を担体と混合し、
（担体−抗体−測定対象物質−抗体−標識）という免疫
複合体を形成させる。そして、前記複合体を形成しなか
った標識された抗体を分離、除去し、最終的に担体に間
接的に結合した標識（言い換えれば、前記免疫複合体に
含まれる標識）又は分離、除去された標識量を測定す
る。そして、測定された標識量を、予め作成された検量
線と比較する等により測定対象物質量を求める。
来、その成分量に相関する例えば吸光、蛍光、発光等を
光学的に測定することが行われている。具体的に例え
ば、一般的にサンドイッチ法と呼ばれる免疫測定におい
ては、まず測定対象物質に対する抗体を固定化した水不
溶性の担体を血清等の試料と混合し、前記物質を担体に
間接的に結合させ、次に、前記抗体とは異なる部位で測
定対象物質と結合する標識された抗体を担体と混合し、
（担体−抗体−測定対象物質−抗体−標識）という免疫
複合体を形成させる。そして、前記複合体を形成しなか
った標識された抗体を分離、除去し、最終的に担体に間
接的に結合した標識（言い換えれば、前記免疫複合体に
含まれる標識）又は分離、除去された標識量を測定す
る。そして、測定された標識量を、予め作成された検量
線と比較する等により測定対象物質量を求める。
【０００３】このような免疫測定においては、標識とし
てそれ自体が光学的に測定可能な信号を発する蛍光物
質、発光物質、着色物質等や、適当な基質を光学的に測
定可能な蛍光物質、発光物質、着色物質等に転換する酵
素等を使用し、前記測定に際しては光学的手法を用いる
のが一般的である。
てそれ自体が光学的に測定可能な信号を発する蛍光物
質、発光物質、着色物質等や、適当な基質を光学的に測
定可能な蛍光物質、発光物質、着色物質等に転換する酵
素等を使用し、前記測定に際しては光学的手法を用いる
のが一般的である。
【０００４】また、通常の生化学的測定においても、例
えば試料中の酵素等の特定物質を測定するに際しては、
当該酵素と特異的に反応して蛍光物質、発光物質、着色
物質等に転換される基質を添加し、後に光学的な測定を
行うこと等が広く行われている。
えば試料中の酵素等の特定物質を測定するに際しては、
当該酵素と特異的に反応して蛍光物質、発光物質、着色
物質等に転換される基質を添加し、後に光学的な測定を
行うこと等が広く行われている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】前述のような、光学的
に試料溶液中の成分を測定する場合、吸光度、蛍光量、
発光量等を再現性良く測定することが信頼性の高い測定
を実施するうえで重要である。にもかかわらず、同一の
試料に対して測定を行ったとしても、測定値にばらつき
が生じやすいことは経験的に知られている。このような
ばらつきは、測定対象物質が微量にしか存在しない場合
に顕著であり、このため高感度測定の障害となってい
る。
に試料溶液中の成分を測定する場合、吸光度、蛍光量、
発光量等を再現性良く測定することが信頼性の高い測定
を実施するうえで重要である。にもかかわらず、同一の
試料に対して測定を行ったとしても、測定値にばらつき
が生じやすいことは経験的に知られている。このような
ばらつきは、測定対象物質が微量にしか存在しない場合
に顕著であり、このため高感度測定の障害となってい
る。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らの知見によれ
ば、前述のような測定値のばらつきは種々の原因により
生じるものと思われる。例えば光学的な測定が、試料溶
液を保持する透明又は半透明の容器の側面や底面方向に
放出された測定光に対して実施される場合、容器の内側
表面と試料溶液との界面における表面張力によって物理
的に形成された気泡が測定値にばらつきを生じさせると
予想される。また、試料溶液を容器に移し変えたり、免
疫測定等のように余分な標識の分離、除去というような
操作で生じ、容器の内側表面に残留した気泡についても
同様である。
ば、前述のような測定値のばらつきは種々の原因により
生じるものと思われる。例えば光学的な測定が、試料溶
液を保持する透明又は半透明の容器の側面や底面方向に
放出された測定光に対して実施される場合、容器の内側
表面と試料溶液との界面における表面張力によって物理
的に形成された気泡が測定値にばらつきを生じさせると
予想される。また、試料溶液を容器に移し変えたり、免
疫測定等のように余分な標識の分離、除去というような
操作で生じ、容器の内側表面に残留した気泡についても
同様である。
【０００７】一方、光学的な測定が試料溶液を保持する
容器の上部、すなわち試料溶液の上面方向へ放出された
測定光に対して実施される場合で、試料溶液が空気等の
気体と接触している場合には、試料溶液の表面張力によ
りその液面が不安定となってゆれる等することが測定値
にばらつきを生じさせると予想される。中でも、試料溶
液を攪拌しつつ光学的な測定を行う場合、試料溶液の液
面のゆれは特に顕著となる。
容器の上部、すなわち試料溶液の上面方向へ放出された
測定光に対して実施される場合で、試料溶液が空気等の
気体と接触している場合には、試料溶液の表面張力によ
りその液面が不安定となってゆれる等することが測定値
にばらつきを生じさせると予想される。中でも、試料溶
液を攪拌しつつ光学的な測定を行う場合、試料溶液の液
面のゆれは特に顕著となる。
【０００８】特に、前述の、水不溶性担体及び標識とし
て酵素を使用する免疫測定法等において、担体と間接的
に結合した酵素を測定する場合、該担体を含む試料溶液
と担体との界面における表面張力により、酵素と試料溶
液に添加された該酵素により光学的に測定可能な蛍光物
質、発光物質、着色物質等に転換される基質との接触が
制限され、その結果、酵素反応による生成物、すなわち
光学的に測定されるべき物質、の生成量にばらつきが生
じることも予想される。
て酵素を使用する免疫測定法等において、担体と間接的
に結合した酵素を測定する場合、該担体を含む試料溶液
と担体との界面における表面張力により、酵素と試料溶
液に添加された該酵素により光学的に測定可能な蛍光物
質、発光物質、着色物質等に転換される基質との接触が
制限され、その結果、酵素反応による生成物、すなわち
光学的に測定されるべき物質、の生成量にばらつきが生
じることも予想される。
【０００９】本発明者らは、以上のような知見に基づ
き、被検試料中の成分の光学的測定において生じやすい
測定値のばらつきを抑制することについて検討を行った
結果、本発明を完成した。すなわち本発明は、被検試料
に界面活性作用を有する物質を添加した後、当該被検試
料中の微量成分を光学的に測定することからなる被検試
料中微量成分の測定方法である。また本発明は、被検試
料中に存在する、水不溶性担体に結合した酵素を測定す
る方法であり、界面活性作用を有する物質の存在下で測
定されるべき酵素と該酵素の基質を反応させ、該反応と
同時に又は該反応の後、当該被検試料中の微量成分を光
学的に測定することからなる被検試料中成分の測定方法
である。以下本発明を詳細に説明する。
き、被検試料中の成分の光学的測定において生じやすい
測定値のばらつきを抑制することについて検討を行った
結果、本発明を完成した。すなわち本発明は、被検試料
に界面活性作用を有する物質を添加した後、当該被検試
料中の微量成分を光学的に測定することからなる被検試
料中微量成分の測定方法である。また本発明は、被検試
料中に存在する、水不溶性担体に結合した酵素を測定す
る方法であり、界面活性作用を有する物質の存在下で測
定されるべき酵素と該酵素の基質を反応させ、該反応と
同時に又は該反応の後、当該被検試料中の微量成分を光
学的に測定することからなる被検試料中成分の測定方法
である。以下本発明を詳細に説明する。
【００１０】本発明における被検試料とは、光学的に直
接測定される物質を含む溶液を意味する。例えば生化学
的測定において、血液、血清、唾液、尿等の体液や、動
物や植物等の細胞や組織の抽出液を試料溶液として該試
料溶液に含まれる酵素等を前述の通り基質を添加して測
定する場合、該酵素により光学的に測定な蛍光物質、発
光物質又は着色物質等に転換された基質を含む溶液が被
検試料である。従って、体液等に基質を添加した場合に
はそれが本発明の被検試料であり、体液等から測定され
るべき酵素等を分離した後に基質を添加した場合にはこ
の分離液が本発明の被検試料であり、体液や該分離液等
に基質を添加した後、光学的に測定可能な蛍光物質、発
光物質又は着色物質等に転換された基質を分離した場合
にはこの転換された基質を含む溶液が本発明の被検試料
である。一方、生化学的測定における測定対象物質自体
が光学的に測定可能な物質である場合、当該物質を含む
試料溶液が本発明の被検試料である。
接測定される物質を含む溶液を意味する。例えば生化学
的測定において、血液、血清、唾液、尿等の体液や、動
物や植物等の細胞や組織の抽出液を試料溶液として該試
料溶液に含まれる酵素等を前述の通り基質を添加して測
定する場合、該酵素により光学的に測定な蛍光物質、発
光物質又は着色物質等に転換された基質を含む溶液が被
検試料である。従って、体液等に基質を添加した場合に
はそれが本発明の被検試料であり、体液等から測定され
るべき酵素等を分離した後に基質を添加した場合にはこ
の分離液が本発明の被検試料であり、体液や該分離液等
に基質を添加した後、光学的に測定可能な蛍光物質、発
光物質又は着色物質等に転換された基質を分離した場合
にはこの転換された基質を含む溶液が本発明の被検試料
である。一方、生化学的測定における測定対象物質自体
が光学的に測定可能な物質である場合、当該物質を含む
試料溶液が本発明の被検試料である。
【００１１】本発明における光学的な測定としては、例
えば吸光度測定、蛍光強度測定、発光強度測定、濁度測
定等を例示できる。より具体的には、被検試料を保持す
る容器の側面、底面又は上方から光を照射し、容器の側
面、底面又は上方に放出される光について吸光度測定、
蛍光強度測定、発光強度測定又は濁度測定を行う光学的
測定が例示できる。本発明は、中でも被検試料の上面方
向へ放出される光について測定を行う光学測定に対し、
特に測定値のばらつきを抑制するのに好適である。
えば吸光度測定、蛍光強度測定、発光強度測定、濁度測
定等を例示できる。より具体的には、被検試料を保持す
る容器の側面、底面又は上方から光を照射し、容器の側
面、底面又は上方に放出される光について吸光度測定、
蛍光強度測定、発光強度測定又は濁度測定を行う光学的
測定が例示できる。本発明は、中でも被検試料の上面方
向へ放出される光について測定を行う光学測定に対し、
特に測定値のばらつきを抑制するのに好適である。
【００１２】被検試料の上面方向に測定される光が放出
される例としては、例えば被検試料を保持する容器の底
面から光を照射し、上面方向に放出された（被検試料を
通過した）光について吸光度を測定する場合等や、例え
ばダイクロックミラ−を用いて被検試料の上面方向から
光を照射し、かつ被検試料の上面方向へ放出された蛍光
を測定する場合等を例示できる（特公平４−４０８１８
号公報を参照）。
される例としては、例えば被検試料を保持する容器の底
面から光を照射し、上面方向に放出された（被検試料を
通過した）光について吸光度を測定する場合等や、例え
ばダイクロックミラ−を用いて被検試料の上面方向から
光を照射し、かつ被検試料の上面方向へ放出された蛍光
を測定する場合等を例示できる（特公平４−４０８１８
号公報を参照）。
【００１３】本発明に使用する、界面活性作用を有する
物質としては、例えば界面活性剤が例示できる。なかで
も光学的に測定可能な物質に対する影響が少なく、か
つ、被検試料中で酵素反応等を生じさせて測定可能な物
質を生成させる場合にこれら反応に対する影響の少な
い、非イオン性界面活性剤が好ましい。なかでも実施例
に記載したＴｒｉｔｏｎＸ−１００は、特に好ましい非
イオン性界面活性剤として例示できる。このような界面
活性作用を有する物質は、適宜予備的な実験を行って決
定できるが、本発明者らの知見によれば、被検試料に対
して０．００１〜１％（重量／重量）の濃度範囲とする
ことが好ましく、特に０．０１〜０．１％（重量／重
量）の濃度範囲とすることが好ましい。
物質としては、例えば界面活性剤が例示できる。なかで
も光学的に測定可能な物質に対する影響が少なく、か
つ、被検試料中で酵素反応等を生じさせて測定可能な物
質を生成させる場合にこれら反応に対する影響の少な
い、非イオン性界面活性剤が好ましい。なかでも実施例
に記載したＴｒｉｔｏｎＸ−１００は、特に好ましい非
イオン性界面活性剤として例示できる。このような界面
活性作用を有する物質は、適宜予備的な実験を行って決
定できるが、本発明者らの知見によれば、被検試料に対
して０．００１〜１％（重量／重量）の濃度範囲とする
ことが好ましく、特に０．０１〜０．１％（重量／重
量）の濃度範囲とすることが好ましい。
【００１４】本発明を、例えば前述の不溶性の担体と酵
素を標識として使用する、いわゆるサンドイッチ法や競
合法等の免疫測定に適用する場合には、担体を含む試料
溶液と担体との界面における表面張力により、酵素と試
料溶液に添加された該酵素により光学的に測定可能な蛍
光物質、発光物質、着色物質等に転換される基質との接
触が制限されることが予想される。従ってこのような場
合には、担体に間接的に結合した酵素と基質の反応をも
界面活性作用を有する物質の存在下で行わせることが特
に好ましい。
素を標識として使用する、いわゆるサンドイッチ法や競
合法等の免疫測定に適用する場合には、担体を含む試料
溶液と担体との界面における表面張力により、酵素と試
料溶液に添加された該酵素により光学的に測定可能な蛍
光物質、発光物質、着色物質等に転換される基質との接
触が制限されることが予想される。従ってこのような場
合には、担体に間接的に結合した酵素と基質の反応をも
界面活性作用を有する物質の存在下で行わせることが特
に好ましい。
【００１５】酵素を標識として使用する免疫測定等にお
いては、光学的に測定可能な蛍光物質、発光物質、着色
物質等に転換された基質濃度の増加速度（言い換えれば
酵素反応速度）を測定する方法（いわゆるレ−ト法）
や、酵素と基質を接触させて酵素反応を生じさせ、一定
時間経過後、生成した光学的に測定可能な蛍光物質、発
光物質、着色物質等に転換された基質濃度を測定する方
法が知られているが、前者の場合は酵素と基質の反応と
同時に光学的な測定を実施し、後者の場合は酵素と基質
の反応後、界面活性作用を有する物質の存在下で光学的
な測定を実施することで、測定値にばらつきの少ない、
より正確な測定が実施可能となる。
いては、光学的に測定可能な蛍光物質、発光物質、着色
物質等に転換された基質濃度の増加速度（言い換えれば
酵素反応速度）を測定する方法（いわゆるレ−ト法）
や、酵素と基質を接触させて酵素反応を生じさせ、一定
時間経過後、生成した光学的に測定可能な蛍光物質、発
光物質、着色物質等に転換された基質濃度を測定する方
法が知られているが、前者の場合は酵素と基質の反応と
同時に光学的な測定を実施し、後者の場合は酵素と基質
の反応後、界面活性作用を有する物質の存在下で光学的
な測定を実施することで、測定値にばらつきの少ない、
より正確な測定が実施可能となる。
【００１６】
【実施例】以下、本発明を更に詳細に説明するために実
施例を記載するが、本発明はこれら実施例に限定される
ものではない。
施例を記載するが、本発明はこれら実施例に限定される
ものではない。
【００１７】実施例１ 以下の試薬を使用して、水不溶性担体と酵素を標識とす
るサンドイッチ免疫測定により甲状腺刺激ホルモン（Ｔ
ＳＨ）を測定した。
るサンドイッチ免疫測定により甲状腺刺激ホルモン（Ｔ
ＳＨ）を測定した。
【００１８】（１）反応試薬 担体：ＴＳＨに対するモノクロ−ナル抗体１を結合し
た、平均粒径１．２ｍｍの、フェライトを含むエチレン
−ビニルアセテ−ト（ＥＶＡ）製ビ−ズ 標識抗体：アルカリ性フォスファタ−ゼ（ＡＬＰ）と結
合した、前記抗体１とはＴＳＨの異なる部位に結合する
モノクロ−ナル抗体２ 基質溶液Ａ：４−メチルウンベリフェリルりん酸を含む
基質溶液 基質溶液Ｂ：４−メチルウンベリフェリルりん酸及び
０．０１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含む基質溶液 ＊４−メチルウンベリフェリルりん酸は、ＡＬＰの酵素
作用により蛍光物質４−メチルウンベリフェロンに変換
される （２）試料 試料溶液１：ＴＳＨを含まないヒト血清試料溶液 試料溶液２：０．００５μＩＵ／ｍｌのＴＳＨを含むヒ
ト血清試料溶液 試料溶液３：０．０１０μＩＵ／ｍｌのＴＳＨを含むヒ
ト血清試料溶液 試料溶液４：０．０２５μＩＵ／ｍｌのＴＳＨを含むヒ
ト血清試料溶液 試料溶液５：０．０５０μＩＵ／ｍｌのＴＳＨを含むヒ
ト血清試料溶液 試料溶液６：０．０７５μＩＵ／ｍｌのＴＳＨを含むヒ
ト血清試料溶液 試料溶液７：０．１００μＩＵ／ｍｌのＴＳＨを含むヒ
ト血清試料溶液 まず、乾燥状態の担体（１２個）及び標識抗体を含む反
応容器に５０μｌの純粋と１００μｌの試料溶液を同時
に分注し、反応容器の底部から磁力を作用させて担体を
振動させつつ、３７℃で４０分間インキュベ−トした。
反応容器から溶液を除去した後、０．０１％のＴｒｉｔ
ｏｎＸ−１００を含む洗浄液を分注、除去する操作を８
回行い、担体に結合しなかった標識抗体を除去した（い
わゆるＢ／Ｆ分離操作。なお洗浄液中にＴｒｉｔｏｎＸ
−１００を添加しているのは、洗浄効率を高めるためで
ある）。
た、平均粒径１．２ｍｍの、フェライトを含むエチレン
−ビニルアセテ−ト（ＥＶＡ）製ビ−ズ 標識抗体：アルカリ性フォスファタ−ゼ（ＡＬＰ）と結
合した、前記抗体１とはＴＳＨの異なる部位に結合する
モノクロ−ナル抗体２ 基質溶液Ａ：４−メチルウンベリフェリルりん酸を含む
基質溶液 基質溶液Ｂ：４−メチルウンベリフェリルりん酸及び
０．０１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含む基質溶液 ＊４−メチルウンベリフェリルりん酸は、ＡＬＰの酵素
作用により蛍光物質４−メチルウンベリフェロンに変換
される （２）試料 試料溶液１：ＴＳＨを含まないヒト血清試料溶液 試料溶液２：０．００５μＩＵ／ｍｌのＴＳＨを含むヒ
ト血清試料溶液 試料溶液３：０．０１０μＩＵ／ｍｌのＴＳＨを含むヒ
ト血清試料溶液 試料溶液４：０．０２５μＩＵ／ｍｌのＴＳＨを含むヒ
ト血清試料溶液 試料溶液５：０．０５０μＩＵ／ｍｌのＴＳＨを含むヒ
ト血清試料溶液 試料溶液６：０．０７５μＩＵ／ｍｌのＴＳＨを含むヒ
ト血清試料溶液 試料溶液７：０．１００μＩＵ／ｍｌのＴＳＨを含むヒ
ト血清試料溶液 まず、乾燥状態の担体（１２個）及び標識抗体を含む反
応容器に５０μｌの純粋と１００μｌの試料溶液を同時
に分注し、反応容器の底部から磁力を作用させて担体を
振動させつつ、３７℃で４０分間インキュベ−トした。
反応容器から溶液を除去した後、０．０１％のＴｒｉｔ
ｏｎＸ−１００を含む洗浄液を分注、除去する操作を８
回行い、担体に結合しなかった標識抗体を除去した（い
わゆるＢ／Ｆ分離操作。なお洗浄液中にＴｒｉｔｏｎＸ
−１００を添加しているのは、洗浄効率を高めるためで
ある）。
【００１９】前記操作により担体のみが残った反応容器
に対し、２００μｌの基質溶液Ａ又は基質溶液Ｂを添加
して酵素反応を生じさせ、同時に１分間光学的測定を実
施して、ＡＬＰの酵素反応による４−メチルウンベリフ
ェロンの増加速度（生成速度、以下レ−ト値という）を
測定した。
に対し、２００μｌの基質溶液Ａ又は基質溶液Ｂを添加
して酵素反応を生じさせ、同時に１分間光学的測定を実
施して、ＡＬＰの酵素反応による４−メチルウンベリフ
ェロンの増加速度（生成速度、以下レ−ト値という）を
測定した。
【００２０】光学的測定は、反応容器の上部開口から被
検試料の上面に対して３５０〜３８０ｎｍの励起光を照
射することで被検試料中の４−メチルウンベリフェロン
から被検試料の上面方向に放出された４４０〜５００ｎ
ｍの蛍光を測定した。
検試料の上面に対して３５０〜３８０ｎｍの励起光を照
射することで被検試料中の４−メチルウンベリフェロン
から被検試料の上面方向に放出された４４０〜５００ｎ
ｍの蛍光を測定した。
【００２１】基質溶液Ａについて得られた結果を表１及
び図１に、基質溶液Ｂについて得られた結果を表２及び
図２に示す。本実施例の結果から、ＴｒｉｔｏｎＸ−１
００を添加した基質溶液Ｂを使用した場合、各ＴＳＨ濃
度についての測定結果の再現性が向上し（言い換えれば
測定値のばらつきが抑制され）、測定結果の直線性も向
上していることが分かる。また各ＴＳＨ濃度の表示濃度
値をＸ軸、レ−トの値をＹ軸とした最小二乗法による回
帰式を検量線として、試料溶液１の（レ−ト値＋２Ｓ
Ｄ）の値の濃度換算値を求め、これを最小検出感度（Ｍ
ＤＣ）とすると、基質溶液Ａを使用した場合のＭＤＣは
０．０９３μＩＵ／ｍｌであるのに対し、基質溶液Ｂを
使用した場合のＭＤＣは０．０３３μＩＵ／ｍｌとな
り、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を添加した基質溶液Ｂを使
用した場合には測定感度が向上することも分かる。
び図１に、基質溶液Ｂについて得られた結果を表２及び
図２に示す。本実施例の結果から、ＴｒｉｔｏｎＸ−１
００を添加した基質溶液Ｂを使用した場合、各ＴＳＨ濃
度についての測定結果の再現性が向上し（言い換えれば
測定値のばらつきが抑制され）、測定結果の直線性も向
上していることが分かる。また各ＴＳＨ濃度の表示濃度
値をＸ軸、レ−トの値をＹ軸とした最小二乗法による回
帰式を検量線として、試料溶液１の（レ−ト値＋２Ｓ
Ｄ）の値の濃度換算値を求め、これを最小検出感度（Ｍ
ＤＣ）とすると、基質溶液Ａを使用した場合のＭＤＣは
０．０９３μＩＵ／ｍｌであるのに対し、基質溶液Ｂを
使用した場合のＭＤＣは０．０３３μＩＵ／ｍｌとな
り、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を添加した基質溶液Ｂを使
用した場合には測定感度が向上することも分かる。
【００２２】
【表１】
【００２３】
【表２】
【００２４】実施例２ 以下の試薬を用いて、実施例１と同様の方法で各基質溶
液を使用した場合のブランク値を測定し、再現性を比較
した。
液を使用した場合のブランク値を測定し、再現性を比較
した。
【００２５】（１）反応試薬 担体：実施例１と同様 標識抗体：実施例１と同様 基質溶液ａ：４−メチルウンベリフェリルりん酸を含む
基質溶液 基質溶液ｂ：４−メチルウンベリフェリルりん酸及び
０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０を含む基質溶液 基質溶液ｃ：４−メチルウンベリフェリルりん酸及び
０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含む基質溶液 基質溶液ｄ：４−メチルウンベリフェリルりん酸及び
０．０１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含む基質溶液 基質溶液ｅ：４−メチルウンベリフェリルりん酸及び
０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含む基質溶液 ＊４−メチルウンベリフェリルりん酸は前記同様であ
り、Ｔｗｅｅｎ２０はモノラウリン酸ポリオキシエチレ
ンソルビタンである。
基質溶液 基質溶液ｂ：４−メチルウンベリフェリルりん酸及び
０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０を含む基質溶液 基質溶液ｃ：４−メチルウンベリフェリルりん酸及び
０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含む基質溶液 基質溶液ｄ：４−メチルウンベリフェリルりん酸及び
０．０１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含む基質溶液 基質溶液ｅ：４−メチルウンベリフェリルりん酸及び
０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含む基質溶液 ＊４−メチルウンベリフェリルりん酸は前記同様であ
り、Ｔｗｅｅｎ２０はモノラウリン酸ポリオキシエチレ
ンソルビタンである。
【００２６】（２）試料：ＴＳＨを含まないヒト血清標
準試料溶液 各基質溶液について測定を５回行ったときの結果を表３
に示す。本実施例の結果から、界面活性作用を有するＴ
ｒｉｔｏｎＸ−１００やＴｗｅｅｎ２０等の物質を含ま
ない基質溶液ａと比較して、それら物質を含む基質溶液
ｂ〜ｅでは、標準偏差が小さく、バラツキが少なくなっ
ていることが分かる。また、本実施例の結果からは、界
面活性作用を有する物質として、特にＴｒｉｔｏｎＸ−
１００が好ましいことが分かる。
準試料溶液 各基質溶液について測定を５回行ったときの結果を表３
に示す。本実施例の結果から、界面活性作用を有するＴ
ｒｉｔｏｎＸ−１００やＴｗｅｅｎ２０等の物質を含ま
ない基質溶液ａと比較して、それら物質を含む基質溶液
ｂ〜ｅでは、標準偏差が小さく、バラツキが少なくなっ
ていることが分かる。また、本実施例の結果からは、界
面活性作用を有する物質として、特にＴｒｉｔｏｎＸ−
１００が好ましいことが分かる。
【００２７】
【表３】
【００２８】
【発明の効果】本発明によれば、被検試料中の成分、特
に微量成分を光学的に測定する場合、測定値のばらつき
が抑制された、再現性の高い測定を実施することが可能
となる。また実施例に示したように、本発明によれば測
定感度を向上することも可能となる。従って本発明によ
れば、例えば免疫測定等において、従来の測定と比較し
て再現性の高く、測定感度の向上した、より信頼性の高
い測定が可能となる。
に微量成分を光学的に測定する場合、測定値のばらつき
が抑制された、再現性の高い測定を実施することが可能
となる。また実施例に示したように、本発明によれば測
定感度を向上することも可能となる。従って本発明によ
れば、例えば免疫測定等において、従来の測定と比較し
て再現性の高く、測定感度の向上した、より信頼性の高
い測定が可能となる。
【図１】図１は、Ｘ軸にＴＳＨ濃度を、Ｙ軸にレ−ト値
（Ｒａｔｅ値）をとり、実施例１における基質溶液Ａを
使用した場合の、各試料についての測定結果の平均値を
四角でプロットした図であり、各点のバラツキの状態を
四角から上下に伸びる線で示している。この上下に伸び
る線の幅は、（平均値±２×標準偏差（ＳＤ））の範囲
を示している。また、図中の直線は、各点を最小二乗法
によって直線回帰して得られた、回帰直線を示すもので
ある。
（Ｒａｔｅ値）をとり、実施例１における基質溶液Ａを
使用した場合の、各試料についての測定結果の平均値を
四角でプロットした図であり、各点のバラツキの状態を
四角から上下に伸びる線で示している。この上下に伸び
る線の幅は、（平均値±２×標準偏差（ＳＤ））の範囲
を示している。また、図中の直線は、各点を最小二乗法
によって直線回帰して得られた、回帰直線を示すもので
ある。
【図２】図２は、実施例１における基質溶液Ｂを使用し
た場合の、各試料についての測定結果を示すものであ
り、その意味は図１と同様である。
た場合の、各試料についての測定結果を示すものであ
り、その意味は図１と同様である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｑ 1/42 6807−4Ｂ
Claims (7)
- 【請求項１】被検試料に界面活性作用を有する物質を添
加した後、当該被検試料中の微量成分を光学的に測定す
ることからなる被検試料中成分の測定方法。 - 【請求項２】被検試料中に存在する、水不溶性担体に結
合した酵素を測定する方法であり、界面活性作用を有す
る物質の存在下で測定されるべき酵素と該酵素の基質を
反応させ、該反応と同時に又は該反応の後、界面活性作
用を有する物質の存在下で当該被検試料中の微量成分を
光学的に測定することからなる被検試料中成分の測定方
法。 - 【請求項３】光学的な測定が、前記被検試料の上面方向
へ放出される光を測定するものである請求項１又は２の
方法。 - 【請求項４】光学的な測定が、前記被検試料の上面から
光を照射しかつ前記試料の上面方向へ放出される光を測
定するものである請求項１又は２の方法。 - 【請求項５】界面活性作用を有する物質が非イオン性界
面活性剤であることを特徴とする請求項１又は２の方
法。 - 【請求項６】被検試料に対して非イオン性界面活性剤を
０．００１〜１％（重量／重量）となるように添加する
請求項１又は２の方法。 - 【請求項７】非イオン性界面活性剤がＴｒｉｔｏｎＸ−
１００であることを特徴とする請求項５又は６の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21371094A JPH08105895A (ja) | 1994-08-09 | 1994-09-07 | 被検試料中成分の測定方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18736294 | 1994-08-09 | ||
| JP6-187362 | 1994-08-09 | ||
| JP21371094A JPH08105895A (ja) | 1994-08-09 | 1994-09-07 | 被検試料中成分の測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08105895A true JPH08105895A (ja) | 1996-04-23 |
Family
ID=26504311
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21371094A Pending JPH08105895A (ja) | 1994-08-09 | 1994-09-07 | 被検試料中成分の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08105895A (ja) |
-
1994
- 1994-09-07 JP JP21371094A patent/JPH08105895A/ja active Pending
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