JPH0797398A - Ｃ型肝炎用検査薬およびｃ型肝炎ウイルス抗原ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 従来の検査薬では陽性と判定できない検体を
正確に判定するためのＣ型肝炎ウイルス用検査薬の構築
およびＣ型肝炎ウイルス抗原ペプチドの取得。 【構成】 複数の非Ａ非Ｂ型慢性肝炎患者の血清からＲ
ＮＡを調整し、調整したＲＮＡを鋳型にしてｃＤＮＡを
合成し、合成したｃＤＮＡをファージベクターに組み込
みｃＤＮＡライブラリーを調整し、該ライブラリーから
非Ａ非Ｂ型慢性肝炎患者由来の血清に特異な抗原をコー
ドするｃＤＮＡをスクリーニングし、ｃＤＮＡの配列を
決定する。決定した塩基配列からＣ型肝炎ウイルスのコ
ア蛋白質領域のアミノ酸配列を基にして種々の長さやサ
ブタイプの配列を有するペプチドを作成し、これらの抗
原を単独により又は組合わせることにより、より高感度
の免疫学的検査が可能なＣ型肝炎ウイルス用検査薬を構
築し、そして併せてＣ型肝炎ウイルス抗原ペプチドを取
得する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、Ｃ型肝炎ウイルスに対
する抗体検査薬およびＣ型肝炎ウイルス関連抗原ペプチ
ドに関する。

【０００２】

【従来の技術】非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスとは既知の肝炎
を引き起こすウイルス、例えばデルタ肝炎ウイルス、サ
イトメガロウイルス、ＥＢウイルス、経口感染により流
行を起こすＡ型肝炎ウイルス、主として血液を介して感
染するＢ型肝炎ウイルス等のいずれにも属さない肝炎ウ
イルスの総称である。非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスは大別す
ると２つのタイプに分けることができる。すなわち水伝
播性（経口感染）型と血液伝播性（輸血後感染）であ
る。前者はＥ型肝炎ウイルスとして既に同定されており
感染後も慢性化しないことが特徴であるが、後者の血液
伝播性（輸血後感染）ウイルスはＣ型肝炎ウイルス（Ｈ
ＣＶ）とよばれ慢性化しやすく時間が経過すると肝硬
変、肝癌に進行する場合が多く問題である。

【０００３】１９８９年、アメリカのカイロン社の研究
者がＨＣＶのｃＤＮＡのクローニングに成功して以来
（Ｃｈｏｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８９、２４４、
Ｐ．３５９）多くのＨＣＶクローンがイムノスクリーニ
ング法（Ｍａｅｎｏら、１９９０、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１８、Ｐ．２６８５、Ｔａ
ｋａｍｉｚａｗａら１９９１、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ、６５、
Ｐ．１１０５、Ｓａｔｏら、１９９３、Ａｃｔａ Ｖｉ
ｒｏｌ．３７、Ｐ１３２）やＰＣＲ法（Ｏｋａｍｏｔｏ
ら、１９９２、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１８８、Ｐ３３１）
にて単離され種々の遺伝子型（サブタイプ）が提唱され
ている。日本では大別すると４つのサブタイプのＨＣＶ
（Ｉ〜ＩＶ型）が存在し、ＩＩ型に感染している例が最
も多いことが報告されている（Ｏｋａｍｏｔｏら、１９
９２、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７３、Ｐ．６７３）。

【０００４】一方、ＨＣＶの感染を調べるための抗ＨＣ
Ｖ抗体検査薬も種々開発されており、最近では構造蛋白
質（コア蛋白質）と非構造蛋白質を抗原として組み合わ
せた第２世代検査薬が主流で多くの成果をあげている
（Ｆｒｏｓｔら、１９９３、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｒｏｂ
ｉｏｌ、３１、Ｐ．１６３）。使用抗原としては構造蛋
白質（コア蛋白質）が免疫原性が強くＣ型慢性肝炎患者
の９０％以上が陽性を示すこと、また感染初期において
コア抗体が検出される例が多いことから重要であると考
えられる（Ｃｈｉｂａら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８８、Ｐ．４６
４１）。特にコアタンパク領域のＮ末端側に免疫原性の
強い領域が存在していることが知られており（Ｎａｓｏ
ｆｆら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ、８８、Ｐ．５４６２）、この領域の
アミノ酸配列を基にして合成ペプチドを作製し患者血清
と反応させると高率で反応することが確認されている
（Ｓａｔｏら、１９９３、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．３７、Ｐ．２９５）。しかしながらＳｕｇｉ
ｔａｎｉらはＰＣＲ法にてＨＣＶ−ＲＮＡが検出される
にもかかわらず抗体が従来の検査薬では検出されない検
体がいまだ存在していることを報告している（ｓｕｇｉ
ｔａｎｉら、Ｌａｎｃｅｔ、１９９２、３３９、Ｐ．１
０１８）。したがってこのような検体を陽性と判定でき
る抗体検査薬の開発が必要である。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】現在市販されている抗
体検査薬は１種類の遺伝子型ウイルス由来の抗原を使用
しており、異なる遺伝子型のＨＣＶに感染している検体
に対しては反応しない可能性が考えられる。例えば感染
検体がＨＣＶのコア蛋白に対する抗体を保有していて
も、抗体検査薬で使用されているコア抗原の遺伝子型と
検体の感染しているウイルスの遺伝子型とが一致しなけ
れば、検体の保有する抗体が抗原と交差反応を起こさず
陰性と判定される場合がある。また抗原の調製次第では
（例えば他の異種蛋白との融合蛋白を使用したり、不必
要に長い配列を抗原として使用すること）、抗原に存在
する抗原決定部位が物理的にブロックされ、反応しない
ことも考えられる。このようなことが原因でＰＣＲ法に
てＨＣＶ−ＲＮＡが検出されるにもかかわらず抗体が従
来の検査薬では検出されない検体がいまだ存在している
と考えられる。

【０００６】したがって本発明は上述したことが原因で
陽性と判定できない検体を正確に判定する検査薬を構築
することを目的とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】そこで本発明者らはＨＣ
Ｖのコア蛋白質領域のアミノ酸配列を基にして種々の長
さや種々のサブタイプの配列を有するペプチドを作製
し、感染者血清との反応性を検討した結果、抗原の配列
の長さを変えたりサブタイプの異なる配列を使用すると
異なった反応が認められ、これら抗原を組合わせるとさ
らに高感度な検査薬が構築できることを見出だした。

【０００８】本発明の抗原をコードするｃＤＮＡの配列
は以下のようにして入手した。まず、複数の非Ａ非Ｂ型
慢性肝炎患者由来の血清から、例えば、Ｃｈｏｍｅｚｙ
ｎｓｋｉらによって示されるポリエチレングリコール沈
殿法によってファージ粒子を回収し、フェノール抽出、
イソプロパノール沈殿法でＲＮＡを調製する（Ｃｈｏｍ
ｅｚｙｎｓｋｉら、１９８７、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．１６２、Ｐ．１５６）。

【０００９】調製したＲＮＡからｃＤＮＡの合成は、市
販品のｃＤＮＡ合成キット（例えば、ＢＲＬ社）とラン
ダム・プライマー（宝酒造社）を用いて行うことができ
る。

【００１０】次に、合成したｃＤＮＡを市販品のλｇｔ
１１クローニング・キット（ＢＲＬ社）を用いて、λｇ
ｔ１１ファージ・ベクターのＥｃｏＲＩ部位に導入後、
市販品のパッケージング・キット（アマシャム社）を用
いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏパッケージングを行ってｃＤＮ
Ａライブラリーを調製することが可能である。

【００１１】かかるλｇｔ１１ファージ内に組み込まれ
たｃＤＮＡはλｇｔ１１ファージ上のβ−ｇａ１遣伝子
の中に組込まれるので、ファージの大腸菌への感染後、
ＩＰＴＧ（イソプロピル−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ド）などの誘導物質による該ファージ上のラクトースオ
ペロンのプロモーターの誘導によりβ−ガラクトシダー
ゼとの融合蛋白質として容易に発現が確認される。

【００１２】この様にして、ｃＤＮＡを組込んだλｇｔ
１１ファージｃＤＮＡライブラリーから目的とする非Ａ
非Ｂ型慢性肝炎患者の血清特異的に反応する抗原をコー
ドするｃＤＮＡをスクリーニングするには、ヤングら、
（Ｙｏｕｎｇら１９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８０、Ｐ．１１９４）に示
された方法に従って行うことができる。つまり、λｇｔ
１１ファージを大腸菌に感染させ、ＩＰＴＧを含む培地
で培養する。形成されたプラークを発現されたβ−ガラ
クトシダーゼとの融合蛋白質と共にニトロセルロースメ
ンプレンに写しとり、非Ａ非Ｂ型慢性肝炎患者由来の血
清に含まれる抗体と反応させ、さらにＨＲＰ（西洋ワサ
ビパーオキシダーゼ）で標識した抗ヒトＩｇＧ抗体と反
応させた後に発色させることによって、非Ａ非Ｂ型慢性
肝炎患者由来の血清に含まれる抗体と反応性のある融合
蛋白質を発現しているプラークを選択することができ
る。

【００１３】次に２次スクリーニングとして、こうして
選択されたプラークの中から同様な方法で、非Ａ非Ｂ型
慢性肝炎患者由来の血清に含まれる抗体とは反応する
が、Ｂ型肝炎患者由来の血清および正常人の血清とは反
応しないプラークを選択する。

【００１４】さらに、２次スクリーニングにパスしたλ
ｇｔ１１組換えファージの持つｃＤＮＡの塩基配列を決
定することになるが、その方法は以下のようにする。ま
ず、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（Ｍａｎｉａ
ｔｉｓらＣｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ ｈａｒｂｏｒ ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ １９８９）の方法にし
たがって少量のファージＤＮＡを調製し、このファージ
ＤＮＡを制限酵素ＥｃｏＲＩで完全にあるいは部分分解
して得られるｃＤＮＡをｐＵＣ系統のプラスミド・ベク
ターヘサブクローニングする。そしてこのプラスミドＤ
ＮＡを調製して、例えば、デュポン社製のＤＮＡシーク
エンサーを用いて塩基配列を決定することができる。こ
の方法により得られたクローンの配列は本発明者らによ
り既に特許出願されている（国際公開番号ＷＯ９２／０
９６３４）。

【００１５】得られたクローンのうちコア蛋白領域由来
であるクローンＳ２９の配列（国際公開番号ＷＯ９２／
０９６３４）に基づき、長さの異なる４種類のペプチド
を合成した。すなわちアミノ酸７から３０までの２４ア
ミノ酸（以下２４ｍｅｒ 配列番号１）、アミノ酸１か
ら３０までの３０アミノ酸（以下３０ｍｅｒあるいはＳ
２９−１、配列番号６）、アミノ酸２から４１までの４
０アミノ酸（以下４０ｍｅｒ、配列番号２）、アミノ酸
２から５１までの５０アミノ酸（以下５０ｍｅｒ、配列
番号３）である。またクローンＳ２９はアミノ酸１から
３０までの３０アミノ酸の領域では遺伝子型でＩＩＩ、
ＩＶに属するが（アミノ酸配列はＩＩＩ、ＩＶ型どちら
も同一）他の遺伝子型（ＩＩ型）に属するクローンＳ５
６（国際公開番号ＷＯ９２／０９６３４）の配列に基づ
いてアミノ酸１から３０までの３０アミノ酸のペプチド
を合成した（以下Ｔ１０９、配列番号５）。さらに残り
の遺伝子型（Ｉ型）に関してもチョーらの配列（Ｃｈｏ
ｏら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ、８８、Ｐ．２４５１）に基づいてアミ
ノ酸１から３０までの３０アミノ酸のペプチドを合成し
た（Ｔ１０８、配列番号４）。これらペプチドの合成は
公知の固相ペプチド合成法により行われる。さらに得ら
れたペプチドは逆層液体クロマトグラフィー等で精製す
ることが可能である。得られたペプチドは単独で、ある
いは複数組み合わせて使用することができる。本発明の
検査薬において複数組み合わせて使用する方法としては
例えば長さの異なるＳ２９−１と４０ｍｅｒのペプチ
ド、あるいはサブタイプの異なるＴ１０９と４０ｍｅｒ
のペプチドを組み合わせることが望ましい。もちろん抗
原性が失われないのなら３種類以上のペプチドを組み合
わせることも可能である。例えばＳ２９−１とＴ１０８
と４０ｍｅｒを組み合わせることが望ましい。

【００１６】本発明の抗原あるいはその一部を主要な構
成成分として含有する血清診断法の診断薬について述る
が、採用する免疫学的検出方法に応じて種々の診断薬を
設計することができる。例えば、検出方法としてオクタ
ロニー法（ＭＯ）、免疫電気泳動法（ＩＥＳ、ＩＥ
Ｐ）、補体結合反応法（ＣＦ）、免疫粘着血球凝集反応
法（ＩＡＨＡ）、一元平板免疫拡散法（ＳＲＩＤ）を利
用する場合には、本発明の抗原をそのまま使用して適当
な形態に調製すればよい。一例として一元平板免疫拡散
法を利用する場合を示せば、支持体として寒天、アガロ
ース、デンプン、ポリアクリルアミドなどの中から適当
なものを選び、これを緩衝液に溶解し、次に本発明の物
質を添加混合し、得られる溶液をガラス板上あるいはプ
ラスチック容器内に流して固化し、固化ゲル平板に被検
血清注入用の孔を開ければよい。この孔に披検血清を注
入して拡散する抗体と抗原の反応を観察することによっ
て診断が可能である。

【００１７】しかるに、検出方法として血球凝集反応法
（ＰＨＡ）を利用する場合には本発明の抗原あるいはそ
の一部、人工的の合成したエピトープ部分を含む物質を
微粒子に結合させる必要がある。微粒子としては哺乳類
および鳥類の血球が通常用いられるが、その他、ポリス
チレンラテックス、ポリエステルラテックス、塩化ビニ
ル、ベントナイト、ガラスビーズなどの約１−１０μの
粒子も使用することができる。本発明抗原と微粒子を結
合させるには、例えば、グルタールアルデヒド、ホルム
アルデヒド、タンニン酸、ビスジアドダイズベンチジ
ン、塩化クロム、カルボジイミドなどを使用すればよ
く、本発明の抗原が結合した微粒子と披検血清を混ぜた
後、凝集反応を起こすか否かで診断を行うことができ
る。

【００１８】また、本発明の抗原を放射性免疫測定法
（ＲＩＡ）や酵素抗体法（ＥＬＩＳＡ）などに利用する
場合には、本発明の抗原あるいはその一部、人工的に合
成したエピトープ部分を含む物質を適当な固相に結合さ
せ、さらに血清中のヒト抗体と結合する２次抗体（抗ヒ
ト抗体）を放射能標識または酵素標識する必要がある。
固相としてはマイクロプレート、チューブ、ビーズ、磁
性ビーズなどが使用でき、固相に結合した抗原と披検血
清を反応させＢ／Ｆ分離を行なった後、抗原と結合した
抗体を抗ヒト抗体（２次抗体）で検出することによって
血清中の抗体量を検出することができる。２次抗体の放
射能標識としてはヨウ素１２５やヨウ素１３１が利用で
き、クロラミンＴ法などで結合させることができる。ま
た、２次抗体の標識酵素としては、例えば、グルコース
オキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダ
ーゼ、ベータガラクトシダーゼなどを使用することがで
き、酵素と抗体との結合法としては有機化学的方法、免
疫学的標識法、アビジン／ビオチン反応を介する方法、
組合わせ架橋法などが知られている。詳細は、例えば、
生化学実験法１１、エンザイムイムノアッセイ（東京化
学同人 １９８９）を参照されたい。さらに、特殊な酵
素抗体法（ＥＬＩＳＡ）として、本発明の抗原を結合さ
せた固相に披検血清中の抗体を捕捉し、さらに抗体と酵
素標識した抗原を反応させることによって抗体を検出す
ることも可能である。

【００１９】

【実施例】以下実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説
明する。

【００２０】実施例１ 合成ペプチドの作製 得られたクローンのうちコア蛋白領域由来であるクロー
ンＳ２９の配列（国際公開番号ＷＯ９２／０９６３４）
に基づき、長さの異なる４種類のペプチドを合成した。
すなわちアミノ酸７から３０までの２４アミノ酸（以下
２４ｍｅｒ 配列番号１）、アミノ酸１から３０までの
３０アミノ酸（以下３０ｍｅｒ、配列番号６）、アミノ
酸２から４１までの４０アミノ酸（以下４０ｍｅｒ、配
列番号２）、アミノ酸２から５１までの５０アミノ酸
（以下５０ｍｅｒ、配列番号３）である。またクローン
Ｓ２９はアミノ酸１から３０までの３０アミノ酸の領域
では遺伝子型でＩＩＩ、ＩＶに属するが（アミノ酸配列
はＩＩＩ、ＩＶ型どちらも同一）他の遺伝子型（ＩＩ
型）に属するクローンＳ５６（国際公開番号ＷＯ９２／
０９６３４）の配列に基づいてアミノ酸１から３０まで
の３０アミノ酸のペプチドを合成した（以下Ｔ１０９、
配列番号５）。さらに残りの遺伝子型（Ｉ型）に関して
もチョーらの配列（Ｃｈｏｏら、１９９１、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ、８８、Ｐ．
２４５１）に基づいてアミノ酸１から３０までの３０ア
ミノ酸のペプチドを合成した（Ｔ１０８、配列番号
４）。これらペプチドはペプチド自動合成装置（アメリ
カ アプライド バイオシステムズ社製モデル４３１
Ａ）を用いて固相合成法で合成し、得られたペプチドを
逆層クロマトグラフィーで精製した。得られたペプチド
は常法に従い組成分析を行い目的とするペプチドである
ことを確認した。

【００２１】実施例２ マイクロプレートＥＩＡの作
製および献血検体との反応 実施例１記載の６種類の合成ペプチドを抗原とするマイ
クロプレートＥＩＡを作製した。合成した各ペプチドを
０．５μｇ／ｍｌの濃度になるようにＰＢＳ溶液（０．
１Ｍ燐酸緩衝液）に溶解し、マイクロプレートの各ウエ
ルに１００μｌずつ加え４℃で一晩反応させた。抗原溶
液を吸引除去しさらに０．５％のＢＳＡを含むＰＢＳを
４℃で一晩反応させブロッキングした。このブロッキン
グ液を吸引除去し、洗浄液（０．０２５％のＴｗｅｅｎ
２０を含む１／２ＰＢＳ溶液）で洗浄した。洗浄後、緩
衝液（０．２５％ＢＳＡ及び０．０５％のＴｗｅｅｎ２
０を含むＰＢＳ）２００μｌに血清２０μｌ加え３７℃
で６０分反応させた。プレートを洗浄液で３回洗浄後、
ペルオキシダーゼ標識マウス抗ヒトＩｇＧモノクローナ
ル抗体（カッペル社製）と３７℃で１５分反応させた。
さらにプレートを３回洗浄後、基質液を加え３７℃で１
５分反応させ１Ｎ硫酸を加えて反応を停止した後４５０
ｎｍの吸光度を測定した。その結果を表１および表２に
示す。なお測定検体としてはウイルス肝炎研究財団より
供与された献血検体パネル血清９９例、および献血検体
９４１４例を東レ社製ＨＣＶ抗体キットとアボットラボ
ラトリー社製ＰＨＡ法 さらに ＨＣＶ ＥＩＡ アボ
ット ＩＩで測定したときの乖離例３４例について各ペ
プチドを用いたＥＬＩＳＡ法にて測定した。また陽性を
示した検体はオーソ社製イムノブロットアッセイ（ＲＩ
ＢＡ ＩＩ）にての測定と必要に応じてＰＣＲ法を用い
たＨＣＶ−ＲＮＡの測定を行った。なお各ペプチドのＥ
ＬＩＳＡのカットオフ値は陰性コントロール＋０．３と
した。各ＥＬＩＳＡのカットオフ値は以下の通りであ
る。

【００２２】２４ｍｅｒ ０．３４８， ３０ｍｅｒ
（Ｓ２９−１） ０．３８６， ４０ｍｅｒ ０．３５
４， ５０ｍｅｒ ０．３６９， Ｔ１０８ ０．３８
０，Ｔ１０９ ０．３７６。

【００２３】なお表中でＨＣＶ−ＲＮＡはＰＣＲ法を用
いたＨＣＶ−ＲＮＡの測定結果、ＲＩＢＡ ＩＩはオー
ソ社製イムノブロットアッセイ（ＲＩＢＡ ＩＩ）にて
の測定結果でありＣ２２−３＋とはコア蛋白に反応して
いることを示している。Ｎとは陰性の意味である。下線
を引いたサンプルは陽性であることを示している。

【００２４】表１に示されるように長さを変えたペプチ
ドでは４０ｍｅｒのペプチドの反応性が最も高くさらに
配列を長くした５０ｍｅｒより反応性が高かった（サン
プルＮｏ．２５、Ｎｏ．Ｋ−６７）。またＮｏ．５０−
４７のサンプルでは２４ｍｅｒ、３０ｍｅｒでは陽性を
示したが配列を長くした４０ｍｅｒのペプチドでは反応
しなくなった。このサンプルはＰＣＲ法でＨＣＶ−ＲＮ
Ａが陽性を示しているが、市販の検査薬（アボットＩ
Ｉ）では陰性である。このように異なる長さを有するコ
アペプチドを用いることにより、異なった反応を示す検
体が見出された。これらの検体を正確に判定するために
は異なる長さを有するコアペプチド、望ましくは３０ｍ
ｅｒと４０ｍｅｒのペプチドを組み合わせて使用するこ
とが有用である。表２では異なる遺伝子型の配列を有す
るコアペプチドの反応性を示した。４サンプルで乖離す
る結果が得られ、１つの遺伝子型のコアペプチドでは完
全に判定できないことを示している。これらの検体を正
確に判定するためには異なる遺伝子型の配列を有するコ
アペプチドを組み合わせて使用することが有用である。

【００２５】

【発明の効果】本発明によって、Ｃ型肝炎ウイルスに感
染した血清と反応性のある抗原を入手することができ、
これら抗原を複数組み合わせることにより、より高感度
の免疫学的検査が可能である。

【００２６】

【表１】

【００２７】

【表２】

【００２８】

【配列表】配列番号１はＣ型肝炎ウイルスのコア蛋白質
領域由来のクローンＳ２９の遺伝子配列（国際公開番号
ＷＯ９２／０９６３４）に基づいて合成されたペプチド
のアミノ酸７〜３０までの２４アミノ酸配列を示す。配
列番号２はＣ型肝炎ウイルスのコア蛋白質領域由来のク
ローンＳ２９の遺伝子配列に基づいて合成されたペプチ
ドのアミノ酸２〜４１までの４０アミノ酸配列を示す。
配列番号３はＣ型肝炎ウイルスのコア蛋白質領域由来の
クローンＳ２９の遺伝子配列に基づいて合成されたペプ
チドのアミノ酸２〜５１までの５０アミノ酸配列を示
す。配列番号４はＣ型肝炎ウイルスのコア蛋白質領域由
来の遺伝子Ｉ型（Ｃｈｏｏｅｔａｌ １９９１，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８
８，Ｐ．２４５１）の遺伝子配列に基づいて合成された
ペプチドのアミノ酸１〜３０までの３０アミノ酸配列を
示す。配列番号５はＣ型肝炎ウイルスのコア蛋白質領域
由来のクローンＳ２９の遺伝子配列（国際公開番号ＷＯ
９２／０９６３４）に基づいて合成されたペプチドのア
ミノ酸１〜３０までの３０アミノ酸配列を示す。配列番
号６はＣ型肝炎ウイルスのコア蛋白質領域由来のクロー
ンＳ２９の遺伝子配列に基づいて合成されたペプチドの
アミノ酸１〜３０までの３０アミノ酸配列を示す。

【配列表】

【００２９】

【００３０】

【００３１】

【００３２】

【００３３】

【００３４】

フロントページの続き (72)発明者 有馬 暉勝 鹿児島県鹿児島市平之町５−１−403号

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 Ｃ型肝炎ウイルスのコア蛋白領域由来ペ
   プチドを少なくとも２種類以上組み合わせて使用するこ
   とを特徴とするＣ型肝炎用検査薬。
2. 【請求項２】 Ｃ型肝炎ウイルスのコア蛋白領域由来ペ
   プチドが異なるサブタイプのものである請求項１記載の
   Ｃ型肝炎用検査薬。
3. 【請求項３】 Ｃ型肝炎ウイルスのコア蛋白領域由来ペ
   プチドが配列表１から５に記載のアミノ酸配列のいずれ
   かからなるペプチドである請求項１または２記載のＣ型
   肝炎用検査薬。
4. 【請求項４】 Ｃ型肝炎ウイルスに対する抗体に反応性
   を有し、配列表１から５に記載のアミノ酸配列のいずれ
   かからなるＣ型肝炎ウイルスのコア蛋白領域由来ペプチ
   ド。