JPH07505859A - Ｃｎｓミエリンに対する白血球接着阻害組成物及び方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＣＮＳ　ミニリンに対する白血球接着阻害組成物及び方法本発明は、国立衛生研 究所により授与されたグランド番号ＧＭ２３５４７及びＡＲＯ６８４により支援 されて行われた。合衆国政府が本発明における所定の権利を有する。

発明の背景 本発明は、脱臼疾患の処置のための医薬組成物及び方法に関する。特に、本発明 は、リンパ球ホーミングリセブタ−（ＬＨＲ）により仲介される白血球接着を阻 害する薬剤を用いた治療に関する。

最近の研究は、内皮細胞及び種々の循環細胞における特別な細胞表面リセブタ− （本文中、セレクチン又はＬＥＣ−ＣＡＭｓと称する）が、多くの細胞間相互作 用に関連していることを証明した。ＬＨＲ（又はｇｐ　９０ＭＥ’、　ｇｐｌ　 ００”’、ｇｌ）　Ｉ　Ｉ　Ｏ”’　、　Ｍｅ　Ｉ−］　４抗原、Ｌｅｕ８抗原 、ＴＱＩ抗原、ＤＲＥＧ抗原、ＬＡＭ−１、セレクチン１、ＬＥＣＡＭ−１及び ＬＥＣ−ＣＡＭ−１としても知られている）は、白血球の表面におけるセレクチ ンリセブターであり、血管の内皮内層と白血球の接着相互作用に関連することか 知られている。この接着相互作用は、白血球が血液から免疫反応及び炎症反応か 起こる組織部位へ移動するだめの前提条件である。また、ＬＨＲは血液から二次 リンパ組織へのリンパ球ホーミングにおいても重要である。

全てのセレクチンは、所定の構造的特徴を共有し、特異的な糖質含存リガントを ＬＰｍするレクチン様領域を含んでいる。セレクチンリセプターについては、ス プリシガ−（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ’）、オ■■岱３４６：４２５　（１９８９）を 参照のこと。これを援用して本文の記載の一部とする。他のでレクチンリセプタ ーは、内皮細胞及び血小板において発見されている。内皮性白血球接着分子−１ （ＥＬＡＭ−１）は、内皮細胞上に存在し、内皮による種々の循環細胞の認識に 関連している。顆粒膜タンパク質−１４０（ＧＭＰ−１４０）は、血小板−白血 球及び内皮−白血球の各相互作用を仲介する血小板及び内皮細胞の表面に存在し ている。

近年、セしクチン仲介細胞接着の高特異的競合阻害剤を開発することに関心が持 たれている。このような阻害剤は、種々のセレクチン仲介疾患反応を処置するた めの治療生活規制において有用である。特に、炎症及びリンパ球ホーミング以外 の反応でセレクチンか果たすてあろう役割については、殆と知られていない。

セレクチンリセブターに関連する他の相互作用を同定することは、他の疾患プロ セスのための治療に新しい道を切り開くであろう。

発明の概要 本発明は、脱臼疾患の処置及び診断において有用な医薬組成物及び方法に関する 。請求の範囲に記載された医薬組成物は、医薬的に許容可能なキャリアとミニリ ンに対する白血球のＬＨＲ仲介結合を阻害する阻止剤とを含む。請求の範囲に記 載された方法は、それらの組成物を多発性硬化症のような脱臼疾患の処置及び診 断に用いる。

本発明の阻止剤は、ＬＨＲ又はミニリン上の認識決定基に選択的に結合すること によってｖ１能する。ＬＨＲに選択的に結合する該阻止剤は、典型的には、糖質 又はＬＨＲに選択的に結合する糖質部分を含む化合物である。本発明の糖質は、 マンノース−６−リン酸、フラクト−ス−１−リン酸又はフコイジン若しくはハ ンセニュウラ・ホスティイ（歴旺卯吐１１１ＪＩＦ山りのホスホマンナンモノエ ステルコア（ＰＰＭＥ）のフラグメントを含む。ＬＨＲ結合部分を含む化合物は 、サルファチトのような糖脂質及び内皮細胞表面積タンパク質のような糖タンパ ク質を含む。該糖タンパク質は、好ましくは３　ｇ　ｐ　Ｓ　Ｏ又はＳｇ　ｐ　 Ｉ　Ｏの細胞外領域である。

阻止剤は、またＴＱＩ及びＬＡＭｌ、４のような、ＬＨＲと反応する免疫グロブ リンてあり得る。

ミニリン上の認識決定基に選択的に結合する阻止剤は、典型的には、単離ＬＨＲ であり、可溶型又は脂質膜中に埋まり得るものてあり得る。ＬＨＲの可溶型は、 好ましくはＬＨＲ成分及び免疫グロブリン成分を含む。

好適実施例の説明 上述したように、ＬＨＲは多くの生理反応に関連していることが知られている。

例えは、血液からリンパ節及び腸間バイエル板のような二次リンパ器官への１ル パ球の輸送は、高内皮細静脈（ＨＥＶ）の特殊な内皮細胞とリンパ球上のＬＨＲ ｓとの間の接着相互作用によって開始されることが知られている。バーブ（Ｂｅ ｒｇ）ら、１ｍｍＩＩｎｏＩＲｅｖ、　、　１０８：５−１８　（１９８９’） 　；デュイヴエスティン（Ｄｕｉｊｖｅｓｔｉｊｎ）とハマン（Ｈａｍａｎｎ） 、釦胆匝−囮捜１０：２３−２８（１９８９）　；ウッドラフら、加Ｌｂ」ｕｍ ｕｎｍ、　、　５２０１−２２２　（＋９８７）　；イエトナツク（Ｙｅｄｎｏ ｃｋ）とローセン（Ｒｏｓｅｎ）、１ｍ山ｒｍｕｍ、　、　５４３１３−３７８ 　（＋９８９）　ニストールマン（Ｓｔｏｏｌｍａｎ）、Ｃｅ１ｌ　５６：９０ ７−９１０　（＋９８９）　；ガラチン（Ｇａｌ　Ｉａｔ　ｉｎ）ら、Ｃｅ１ｌ 　４４：６７３−６８０　（１９８６）　：　ｏ−セン、Ｃｕｒｒ、　Ｏｉｎ、 　Ｃｅｌ　１．　Ｂ遠■A、ｌ：９ １３−９１９　（＋９８９）を参照のこと。これらを全て援用して本文の記載の 一部とする。

更に、好中球、単球及び好酸球上のＬＨＲは、炎症部位における血管の内皮とこ れらの細胞との初期の相互作用を仲介している（ガラチンら、Ｎａユ■旦、　３ ０３：３０（１９８３）及びレウィンソーン（Ｌｅｗｉｎｓｏｈｎ）ら、Ｊ、　 Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、　１３８：４３１３（１９８７）。これらを援用して本文 の記載の一部とする）。

ヒト及びマウスのリンパ節におけるＬＨＲのレクチンドメインは、最初に、マン ノース−６−リン酸（Ｍ６Ｐ）のような特定のリン酸化した単糖類及び特定の多 糖類か有する、りンバ球をＨＥＶに付着させない能力に基づいて推論された（ス トールマンとローセン１．１．Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、、９６：７２２−７２９　 （１９８３）　ニストールマンら、上Ｃｅ１ｌ　Ｂ１０１．．９９：１５３５− １５４０　（１９８４）　；　イエトナツクら、ヨ動１ＬＩｄ、１０４ニア１３ −７２３　（１９８７）　；　ストールマンら、」ｙ匠７０：１８４２−１８５ ０　（１９８７）　；　ストールマンとニブリング（Ｅｂｌｉｎｇ’）１．１． Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　、　８４：ｌｌ９６−１２０５　（１９８９）、 これらを全て援用して本文の記載の一部とする）。活性多糖類の中でも、ＰＰＭ Ｅ　（リン酸富裕マンナンコア）及Ｏフコイノン（硫酸化したフコース富裕高分 子化合物）が特に注目される。この糖質結合活性は、ＨＥＶに対するリンパ球の 付着にも必要なカルシウムの存在に依存している。

ＬＨＲのレクチン特性により、リンパ節ＨＥＶ上のリガンドは、糖質を基とする 認識決定基を有することか仮定される。初期の研究は、末梢リンパ節ＨＥＶ上の 接着部位か、糖質の必要条件を示す過ヨウ素酸塩感受性であることを示した（ロ ーセンら、５ｃｉｅｎｃｅ　２２８：１００５−１００７　（１９８５）、この 文献を援用して本文の記載の一部とする）。その後、ｉｎ　ｖｉｌｒｏ又は■コ 易立において、ＨＥＶのシアリダーゼ処理は、リンパ球か末梢リンパ節ＲＥＶに 付着することを選択的に低減するが、バイエル板ＲＥＶへの結合には何ら効果か ないことが実証された（ローセンら、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１４２：１８ ９５−１９０２　（１９８９）、これを援用して本文の記載の一部とする）。

更に、末梢リンパ節組織切片を、シアル酸特異的レクチンであるリマックス・フ ラハス（Ｌｉｍａｘ　ｆｌａｖｕｓ）凝集素に曝すことは、ＲＥＶに対するリン パ球の付着を妨害する（トウルー（Ｔｒｕｅ）ら、Ｊ、　Ｃｅｌ　１．　Ｂｉｏ ｌ、　、　Ｉｌ！　＋２７５７−２７６４　（１９９０）　、これを援用して本 文の記載の一部とする）。

セレクチンリセブターの構造及び機能は、上記リセブターの各々をコードする全 長ｃＤＮＡのクローニング及び発現によって明らかにされた（例えば、ベヴイラ ックｙ　（Ｂｅｖ　ｉ　１ａｃｑｕａ）ら、５ｃｉｅｎｃｅ、　２４３＋１１６ ０（＋９８９）、（ＥＬＡＭ−１）；チン（Ｇｅｎｇ）ら、地旦脛、　３４３ニ ア５７−７６０　（＋９９０）、（ＧＭＰ−１４０）；及びラスキー化ａｓｋｙ ’）ら、ｊ旦５６：１０４５−１０５５　（１９８９）　（ＬＨＲ）を参照のこ と。これらを援用して本文の記載の一部とする）。セレクチンの細胞外部分は、 既述のタンパク質に対する相同性に基づいて３つのセグメントに分けられ得る。

Ｎ末端領域（約１２０アミノ酸）は、低親和性１ｇＥリセブターＣＤ２３を倉む 、トリツカマー（Ｄｒ　ｉｃｋａｍｅｒ）、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、２６３ ：９５５７−９５６０（１９８８）　（援用して本文の記載の一部とする）によ り記述されたＣ型哺乳類しクチンタンパク質ファミリーに関連している。

その後には上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）モチーフを含むタンパク質に関連した配 列を有するポリペプチドセグメントが続いている。最後に、ＥＧＦドメインの後 には、補体調節タンパク質のファミリーに見出されるものに関連した各々約６０ アミノ酸の１以上のタンデム繰り返しモチーフがある。

本発明は、中枢神経系（ＣＮＳ）のミニリン鞘領域と白血球との結合にＬＨＲか 仲介の役割を果たしているという発見に基づいている。ミニリン鞘は、主として 脂質及びタンパク質を含む層であり、該層は中枢及び末梢神経系におけるニュー ロンの軸索を囲む。この鞘はニューロン膜を横切るイオンの輸送を妨害すること によって、電気絶縁体として働（。ＣＮＳては、ミニリン鞘は、軸索を包む稀突 起神経膠細胞の形質膜によって形成されている。

多くの神経障害は、ＣＮＳにおける軸索の脱臼によるものである。脱臼疾患は、 典型的には、ミニリン鞘がバッチ的に破壊してプラークと呼ばれる軸索の消失領 域を形成することに関連している。典型的には、該疾患は、その上、炎症反応を （↑６う。脱臼疾専、は、多発性硬化症（ＭＳ）、急性播種性脳を髄炎、急性壊 死出血性を髄炎及びＨ１■ｆ；Ｉ随ミニロバシーを包む。ＭＳは最も一般的な脱 臼疾患であり、一般に自己免疫に関連すると考えられ、おそらくはウィルス感染 により誘発される。ＭＳ及び他の脱臼疾患についての概観のために、アンチル（ Ａｎｔｅｌ）ら、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ　Ｐｒ１ｎｃｉ　Ｉｅｓ　ｏｆ　Ｉｎｔ ｅｒｎａｌλＩｅｄｉｃｉｎｅ、第１２版、ウィルソン（Ｗｉ　１ｓｏｎ）ら編 、（マグロ−ヒル、ニューヨーク州）を参照のこと。これを援用して本文の記載 の一部とする。

ここで、Ｌ　ＨＲかＭＳのような脱臼疾患の病因に働いているという証拠か示さ れる。Ｌ）ＩＲはＣＮＳニューロンのミニリン鞘の選択的破壊に関連する標的分 子である。抗原特異性にも拘らずＬＨＲが殆とのリンパ球に発現されているので 、非免疫原的反応が、これらの疾患の病因及びを髄に対する外傷のような他の障 害に関連しているに違いない。従って、ＬＨＲはミニリン化鞘に対する例えば単 球、好中球、好塩基球及び好酸球のような他の白血球の会合（ａｓｓｏｃｉａｔ 　１ｏｎ）を仲介する。これらの細胞は、例えはを髄に対する外傷を通して、脳 若しくはＣＮＳの他の部分（通常、白血球かない特別の部位）への浸入してゆく 。次いて、選択的損傷は、細胞仲介細胞障害のような多くの機構によって又はサ イトカイン、プロテアーゼ若しくはフリーラジカルの局部放出によって生じる。

この新しいＬＨＲの役割の発見により、ＬＨＲ仲介接着を阻止（ブロック）する ことか知られている薬剤か、脱臼疾患の処置に用いられ得る。本発明の阻止剤は 、ＬＨＲに選択的に結合する（即ち、ミニリンにおける認識決定基と入れ替わる ）ことによって又はミニリンにおける認識決定基に選択的に結合する（即ち、白 血球におけるＬ　ＨＲと入れ替わる）二とによって機能する。ＬＨＲ仲介結合を 阻止する二とか可能な化合物を同定するアッセイは、不発明において有用な広範 囲の化合物を同定することに用いることができる。同時係属出願Ｕ、Ｓ、Ｓ、Ｎ 、　０７／　６９５．８０５号は、そのような化合物を同定することに有用な多 くのアッセイを開示している。これを援用して本文の記載の一部とする。

本発明の阻止剤は、ＬＨＲ又はミニリンにおける認識決定基に選択的に結合する 。ここで用いられる選択的結合は、ある分子（典型的にはりセブターという）に よって他の分子（輿望的にはりガントという）が、該層の分子上の認識決定基の 空間的又は極性的な機構に基ついて特異的に認識されることを言う。選択的結合 は、分子間の結合親和力か十分に高い場合に起こると言われている。結合親和力 は、典型的には、会合及び解離した配座の平衡濃度における親和定数（Ｋ、）に よって表され、即ち、Ｋ、＝　（Ｒ−Ｌ）／　（Ｒ）（Ｌ）　、ここで（Ｒ）、 （Ｌ）及び（Ｒ−Ｌ）は、各々、リセブタ−（Ｒ）、リガンド（Ｌ）及びリセブ ターーリガント複合体（Ｒ−Ｌ）の平衡時の濃度である。生理条件下では、本発 明の阻止剤の親和定数は、典型的には約１０’〜約１０’　ｉ！　／ｍｏｌであ り、好ましくは約１０’ｆｚｍｏ１以上である。しかし、当業者ならば、２分子 間の結合親和力が、温度、ｐＨ１イオン強度等のような多くのファクターによっ て影響され得ることは、認識されよう。

選択的にＬＨＲに結合する多（の化合物は、本発明において阻止剤として有効で ある。従って、これらの化合物は、ミニリン認識決定基に対するアンタゴニスト （拮抗物質）として動く。ここで用いられている様に、この認識決定基はＬＨＲ に選択的に結合するミニリンにおける最低限の構造である。アンタゴニストは、 リガントの生理学的効果を逆転させる又は該リセプターに対する該リガンドの結 合を排除する化合物である。アンタゴニストは、リセブター結合部位に向かって 、該リガントと直接的に又は間接的に競合し、従って、リセブターに結合するり ガント分子の割合を減少させる。典型的には、アンタゴニストは、天然リガンド のトポグラフィカルな等刷物であり、セレンチン上の結合部位に向かって、該リ ガンドと直接的に競合する。このような化合物は、本文中「模擬物（ｍｉｍｅｔ ｉｃ）Ｊと称する。リガント模擬物は、セレクチンリセブターによって認識され る天然リガ〉１・に対する置換物として、立体構造的に及び機能的に働く分子で ある。或いは、該リガント及び前記阻止剤か同時に該リセブターに結合できる場 合、該化合物は、非競合的に作用し得る。非競合的阻害剤は、リセブターに結合 したりガント分子の特性を縮小化させることによるよりも、むしろリセブターー リガンド相互作用のその後の生理学的効果を減少又は阻害することによって作用 する。

選択的にＬＨＲに結合する本発明の阻止剤は、典型的には、糖質（例えばオリゴ 糖）又はＬ　ＨＲにより特異的に認識される構造を含む糖結合物のような、合成 若しくは天然産生生体分子である。ここで規定される生体分子は、生物学的に重 要な分子、例えばアミノ酸（及びそれらの模擬物）、オリゴペプチド、タンパク 質（例えば糖タンパク質及びタンパク質ホルモン）、脂肪酸、脂質（例えば糖脂 質、リン脂質、スフィンゴ脂質及びガングリオシド、例えばＧＭ、、ＧＭ、等） 、ステロイ１〜ホルモン、オリゴ糖、多糖類並びに核酸（例えばデオキシリボ核 酸及びリボ核酸）を含むか、それらに限定されない。阻止剤は、好ましくは約１ ０ｋＤよりも小さい分子量を有する比較的小さい分子であり、好ましくは約５ｋ Ｄよりも小さい分子量の分子である。

ＬＨＲに選択的に結合する多（の糖質含有化合物は、本発明において、阻止剤ど して簡便に用いられる。例えば、リン酸化した単糖類、例えばマンノース−６− リン酸及びフラクトース−１−リン酸は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ細胞アッセイにおい てＨＥＶに対するリンパ球の付着を阻害する。多糖類及び糖脂質はまた、これら の細胞のｉｎ　ｖｉｔｒｏ結合を阻害することが示されている（ストールマンら 、Ｂｌｏｏｄ　７０：１８４２−１８５０（１９８７）；イエトナツクら１．１ ．Ｃｅ１１．Ｂｉｏｌ、、１０４ニア１３−７２３（＋９８７）　：及びイ本発 明の糖質含有化合物は、典型的にはリン酸化、硫酸化、シリル化及び／又はフコ シル化される。標準的な技術（例えば酵素的又は化学的合成）を用いて、ＬＨＲ に選択的に結合可能なオリゴ糖か調製され得ることを、当業者は、容易に認識す るだろう。次いて、これらの化合物は標準的な方法（例えば後述する実施例部に 記載した技術）を用いて糖質のミニリン化鞘に対する結合阻害能を決定するよう にスクリーニングさね得る。

本発明のリン酸化した多糖類は、ハンセニューラ・ホスティイのホスホマンナン モノエステルコア（ＰＰＭＥ）を含む。硫酸化した多糖類は、フコイジン、タマ ゴ・セリ−・フカン及び硫酸デキストランを含む。本発明の硫酸化した糖脂質は 、サルファチトを含む。シリル化した糖脂質（例えばガングリオシド）は、Ｇｈ Ｌ、ＧＭ＋、ＧＤ、、等を含む。典型的にはＬＨＲ結合能を保持しているフラグ メン１−か、本発明において用いられる。これらの化合物の適切なフラグメント を調製する及びアッセイする方法を当業者は容易に認識するであろう。該フラグ メントは典型的には約１０ｋＤ未満、好ましくは５ｋＤ未溝の分子量を有する。

ＬＨＲにより特異的に認識されるオリゴ糖生体リガンドを含むリンパ節内皮細胞 表面シリル化、硫酸化した糖タンパク質は、また、本発明において用いることが できる。同時係属出願Ｕ、　Ｓ、　Ｓ、Ｎ、　０７／６９５．８０５号で証明さ れているように、２つのこのような糖タンパク質である３　ｇ　ｐ　ｈ　６及び Ｓｇｐ”０が同定された（また、イマイら、Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、、１１３ ：１２１３−１２２１（１９９１）を参照のこと。これを援用して本文の記載の 一部とする）。リガンド所有糖タンパク質を同定することにより、当業者は、Ｌ ＨＲ結合活性をあまり変更しない糖タンパク質の多くの改変が可能であることを 認識するであろう。このような改変には、該タンパク質の酵素的又は化学的に処 理してＬＨＲにより認識される糖質リガンドを含むフラグメントを生成すること か含まれる。例えば、該タンパク質のフラグメントは、トリプシン、ブロナーセ 、パパイン、ペプシン等のような適当なプロテアーゼを用いた処理によって得ら れ得る。

本発明のフラグメントは、典型的には、糖タンパク質細胞外領域（即ち、ＬＨＲ により認識される糖質リガンドを含む部分及び、膜通過及び細胞内領域以外の部 分）の少なくとも一部を含む。細胞外領域が実質的に疎水性膜通過領域を欠くの で、典型的には水溶性である。しかし、細胞外領域は、また、溶解度が実質的に 影響されない限り、膜通過領域（約ＩＯアミノ酸未満）の配列を含み得る。

ユニで用いられる様に、前記細胞外領域を含む化合物は、少なくとも該細胞外領 域の一部が第２の部分に結合されている全ての化合物を含む。この用語は、また 、単離細胞外領域及び単離全長機タンパク質又はこれらのフラグメントをも包含 する。該細胞外領域を含む単離化合物は、天然状態以外即ち内皮細胞と会合して いないような化合物（例えば全長機タンパク質）を含む。例えば、該化合物は、 組み換え的に合成され、適当な細胞から可溶化され、又は例えばリポソームのよ うな合成脂質膜と会合され得る。リポソームの調製方法は、当業においてよく知 られており、例えばスジツカ（Ｓｚｏｋａ）ら、Ｍ皿医立町皿瓜鉦亘匹皿、’、 　９：４６７（１９８０）、米国特許第４．２３５．８７１号、同第４．５０１ ．７２８号及び同第４．８３７．０２８号を参照のこと。

これらを援用して本文の記載の一部とする。

本発明の硫酸化した糖タンパク質による分析によって、ＬＨＲにより認識される 該オリゴ糖類部分か〇一連結であるということがわかった。従って、それらは標 準的な手法（例えはフラグ、止江しシ坏戸ｏ　ｌ工、　１７９：１７−２９　（ １９８９）、これを援用して本文の記載の一部とする）に従って、ヘータ位除去 及びボロハイドライド還元により、タンパク質骨格から開裂され得る。一度開裂 すると、オリゴ糖は他の多くの他の化合物と結合し得る。例えば、それらは標準 手法を用いて生体分子と結合しｊｑる。ネオ糖タンパク質、ネオ糖脂質又はグリ コシドのクラスターが、この分野でよく知られた方法を用いて、糖タンパク質の 糖鎖を基にして調製され得る（例えばストウェル（Ｓｔｏｗｅｌｌ）ら、Ａｄｖ 、　Ｃａｒｂ、　Ｃｈｅｍ、　ａｎｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　、　３７：２２５− ２８１（P９８ ０）、チャイルズ（Ｃｈｉｌｄｓ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、　、　２６２： １３１−１３８　（＋９８９）及びり−（Ｌｅｅ）ら、Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇ ａｊｅ　Ｊ、、４：３１７−３２８（１９８７）を参照のこと。これらを援用し て本文の記載の一部とする）。

硫酸化した糖タンパク質は多くの手法を用いて単離され得る。例えば、可溶性Ｌ ＨＲは、内皮細胞から単離されるタンパク質の調製において、糖タンパク質を同 定するために用いられ得る。該糖タンパク質は、単離された形で用いることがで き又は二の分野でよく知られた手法に従って改変することができる。例えば細胞 外領域は種々の化合物（例えば、免疫グロブリンの定常域）と結合して多くの所 望の特性例えば改良された可溶性、血清半減期等を与え得る。免疫グロブリン定 常域を含む細胞表面タンパク質の新規な誘導体の製造方法についての説明は、欧 州特許出願下８８３０９１９４．４号を参照のこと。これを援用して本文の記載 の一部とする。

Ｌ　ＨＲに選択的に結合する阻止剤は、一般に入手可能な開始物質より容易に調 製さオ］（’ｆる。生体分子は、標準的な手法に従って、動物、植物、真菌類又 は原核細胞のような全ての天然源から単離することかできる。例えば、ＰＰＭＥ は、スロソギ（Ｓｌｏｄｋｉ）ら、Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏ　ｈｖｓ、Ａｃ４ａ 、、３０４：４４９−４５６　（＋９７３）の方法によって、相酵母マンナンか ら精製される。この文献を援用して本文の記載の一部とする。

簡単にいえば、このホスホマンナンは酸加水分解される。中和後、該ホスホマン ナンコアは沈殿され、水中において再水和される。夾雑タンパク質は、水　クロ ロホルム　ブタノール抽出によって除去される。或いは、多くの多糖類（例えば フコイジン）及び糖脂質は、例えばシグマ・ケミカル社（セントルイス、ミズー リ州）及びアルドリノヒ・ケミカル社（ミルウォーキー、ライスコンシン州）の ような化学品供給会社から購入することかできる。

多くの阻止剤は、標準手法を用いて合成的に製造される。例えば、糖質の合成に ついては、援用して本文の記載の一部としているカーデム（Ｋｈａｄｅｍ）、遵 圧堕捜生ｒａｔｅ　Ｃｈｅｍ＋５ｔｒｖ　（アカデミツクブレス社、サン・ディ エゴ、カリフォルニア州、＋９８８）を参照のこと。規定された化合物のポリペ プチドの合成方法は、この分野でよく知られている（アサ−トン（Ａｔｈｅｒｔ ｏｎ）ら、５ｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅ　ｔｉｄｅ　Ｓ　ｎｔｈｅｓｉｓ（ｌ 　ＲＬブレス、オノクスフオード、１．９８９）を参照のこと。これを援用して 本文の記載の一部とする）。

本発明の阻止剤は、また、ミニリン鞘における認識決定基に選択的に結合する薬 剤とし得る。例えば、単離ＬＨＲは接着を阻止するために用いられ得る。本文中 で用いられる「単離ＬＨＲＪという用語は、天然状態以外の、例えばＬＨＲ分子 を正常に発現している細胞と会合していないＬＨＲ分子又はそのフラグメントを いう。上述したようにヒトＬＨＲをコードするｃＤＮＡが単離されている。

従って、ＬＨＲ又はそのフラグメントは当業者によく知られている標準方法を用 いて、組み換え的に生成され得る。標準的な分子生物学的技術の総説については 、サムブロック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら、＆Ｉｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃ１ｏｎｉｎ 　：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　Ｍａｎｕａｌ、第２版（コールド・スプリング・ バーバー・プレス、ニューヨーク、＋９８９）を参照のこと。

これを援用して本文の記載の一部とする。更に、標準的なりコンビナンドＤＮＡ 技術を用いて突然変異を誘発して、変更されたアミノ酸配列を有するタンパク質 を得ることかできる。典型的には、所望の特性を提供する置換物、欠損物又は付 加物か導入される。例えば、増進された可溶性は、該タンパク質の疎水性膜通過 領域を除去することによって達成することかできる。更に、ここでＬＨＲ−１ｇ Ｇと称される、免疫グロブリン分子の定常域を含む可溶性キメラリセブターも、 また生成され得る（ワトソン（Ｗａｔｓｏｎ）ら、二１．１１０：２２２１−２ ２２９（１９９０）及びワトノンら、■ａｔｕｒｅ、３４９：１６４−１６７　 （＋９９１）。これらを援用して本文の記載の一部とする）。ＬＨＲ又はそのフ ラグメントは、また、上述した糖タンパク質において説明したように合成脂質膜 と会合し得る。

脱臼疾患の治療に加えて、単離ＬＨＲ（例えばＬＨＲ−１ｇＧ）は、該疾患の状 態の診断又はモニタリングにおいて用いられ得る。例えば、脱臼されたプラーク の数の増減を測定することによって、該疾患を回復することを特徴とする特定の 治療的生活規制か効果的が否かを決定することが可能である。

ｉｎ　ｖｉｖｏ診断イメージングのために、典型的には、放射性同位元素が、よ く知られている手法に従って用いられる。この放射性同位元素は、当業者にとっ てよく知られている中間官能基を直接的に又は間接的に用いて、ＬＨＲに結合さ れ得る。例えば、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）及びエチレンジ アミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）並びに同様な分子のようなキレート剤が、金属イ オン放射性同位元素にタンパク質を結合するために用いられている。

ＬＨＲは、また磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）又は電子スピン共鳴（ＥＳＲ） におけるように、ｉｎ　ｖｉｖｏ診断を目的として、常磁性同位元素により標識 化され得る。一般に、映像化診断イメージングの慣用方法が用いられ得る。通常 、ガンマ及び陽電子放出放射性同位元素がカメラ・イメージングに用いられ、常 磁性同位元素がＭＲＩに用いられる。

また、ＬＨＲ又はそのリガントを認識する免疫グロブリンもＬＨＲ−ミニリン相 互作用を阻止するために用いられ得る。例えはＴＱＩ及びＬＡＭｌ、４は、ヒｈ 　Ｌ　ＨＲと反応し、ＲＥＶに対するリンパ球付着と効果的に相互作用するモノ クローナル抗体である（テダー（Ｔｅｄｄｅｒ）ら、Ｊ、　［ｍｍｕｎｏｌ、　 、　＋４４：５３２（＋９９０）、これを援用して本文の記載の一部とする）。

ヒトＬＨＲに結合することが知られている他のモノクローナル抗体は、Ｌｅｕ− ８（カメリアイ（Ｃａｍｅｒｉａｉ）ら、嵐和匡、３４２ニア８−８２（１９８ ９）、これを援用して本文の記載の一部とする）及びＤＲＥＧ抗体（岸本ら、Ｐ ｒｏｃ、　Ｎａ　ｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ　ｉ　、　、　ＵＳＡ、　、　８７ 　：２２４４−２２４８（１９９０）、これを援用■■{文の 記載の一部とする）を含む。Ｌｅｕ−８は、ヘクトン・ディッキンソンから市販 されている。

それゆえ、種々の免疫グロブリン分子の生成及び操作のために当業者に利用可能 な多数の技術は、ミニリンＷイに対する白血球の接着を阻害するために、容易に 適用され得る。本文中で用いられている様に、「免疫グロブリンＪという用語は 、免疫グロブリン遺伝子により実質的にコートされている１以上のポリペプチド からなるタンパク質をいう。認識される免疫グロブリン遺伝子は、に、λ、α、 γ、δ、ε及びμ定常域遺伝子、同様に無数の免疫グロブリン可変域遺伝子を含 む。

免疫グロブリンは抗体の他に種々の形態で存在し得、例えばＦｖ、Ｆａｂ及びＦ （ａｂ）、を含み、同様に、単一鎖において存在し得る（例えば、ヒユーストン （Ｈｕｓｔｏｎ）ら、Ｐｒｏｃ、　Ｎａ　ｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　、　 ＵＳＡ、　、　８５　：５８７９−５８８３（＋９８８）及びバ[ド（Ｂｉｒｄ ）ら、 ５ｃｉｅｎｃｅ、　２４２：４２３−４２６（１９８８）、並びにバンカピラー （Ｈｕｎｋａｐｉ　１ｌｅｒ）及びフッド（Ｈｏｏｄ）、施血匡、　３２３：１ ５−１６（１９８６）。これらを援用して本文の記載の一部とする）。

免疫グロブリン構造及び機能についての一般的な概説については、Ｆｕｎｄａｍ ｅｎｔａｌ加■匹（ロ）社、第２版、ＷＥ、ボール（Ｐａｕｌ）ら編、レイバン ス・プレス、ニューヨーク州、（＋９８９）。これを援用して本文の記載の一部 とする。

ＬＨＲ又はそのリガンドに結合する抗体は、種々の手段によって製造され得る。

非ヒト例えばネズミ科、ウサギ目、ウマ目等のモノクローナル抗体の製造は、よ く知られており、例えばＬＨＲ又は適当なリガンドを含む調製物で動物を免疫す ることによって、達成され得る。免疫化動物から得られた抗体産生細胞は、不死 化してスクリーニングされるか、又はＬＨＲとミニリン鞘との相互作用を阻害す る抗体の製造について、まずスクリーニングし、それから不死化される。モノク ローナル抗体製造の一般的方法の解説は、バーロウ（Ｈａｒｌｏｗ）及びレーン （Ｌａｎｅ）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｖ　Ｍａｎｕａ ｌ、コールド・スプリング−／’ｔ−バー出版、ニューヨーク州、（１９８８） 、を参照のこと。これを援用して本文の記載の一部とする。

ヒ）・抗原（ヒト組織から単離されたＬＨＲの場合）に対するヒトモノクローナ ル抗体の生成は、慣用の技術では困難であろう。従って、ヒト分子を実質的に製 造するためのりコンヒナシトＤＮＡ技術によって、ヒト定常域（Ｆｃ）又はフレ ームワーク領域へ、非ヒ１−抗体の抗原結合領域例えばＦ（ａ　ｂ’）ｚ又は超 可変域を転移することが所望され得る。このような方法は、この分野で一般に知 られており、例えば米国特許第４．８１６．３９７号、欧州特許公開１７３．４ ９４号及び同２３９．４００号に記載されており、これらを援用して本文の記載 の一部とする。或いは、ここで援用して本文の記載の一部としているヒユーズ（ Ｈｕｓｅ）ら、５ｃｉｅｎｃｅ、　２４６：１２７５−１２８１（１９８９）に よって概説されている一般的プロトコールに従って、ヒトＢ細胞からのＤＮＡラ イブラリをスクリーニングし、それからクローニングし、所望の特異性の抗体（ 又は結合フラグメンｌ−）をコートする配列を増幅することによって、ヒｌ−Ｌ 　ＨＲに特異的に結合するヒトモノクローナル抗体又はその部分をコードするＤ ＮＡ配列を単離し１ｑる。

ミニリンに対するＬ　ＨＲの結合を阻害する免疫グロブリンは、また、抗イデイ オタイプ免疫グロブリンの生成に有用になり得る。抗イデイオタイプ免疫グロブ リンは、例えは、動物を一次免疫グロブリンで動物を免疫することによって製造 され得る。ＬＨＲに対する免疫グロブリンの場合、−次免疫グロブリンに対する 結合性かＬＨＲによって阻害される抗イデイオタイプ免疫グロブリンが選択され る。抗イデイオタイプ免疫グロブリン及びリセブターが共に一次免疫グロブリン に結合するので、該抗イデイオタイプ免疫グロブリンは、エピトープの「内部画 像」を表し得、従って、そのリセブターと置換し得、例えば免疫試薬として用い られ得る。

本発明は、上述した脱臼疾患を処置する又は診断することに有用な医薬組成物を 特に提供する。該医薬組成物は、阻止剤を医薬的に許容可能なキャリアと共に含 む。該医薬組成物は、け準的な方法（Ｒｅｍｉｎ　ｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃ ｅＵｔｉｃａ　ｃ’ｅ　ｃｅ、マノク・パブリンソング（ｌｌａｃｋ　Ｐｕｂｌ ｉｓｈｉｎｇ）社、フィラデルフィア、ペンシルベニアラ［（、第１９版、（＋ ９８５）を参照のこと。これを援用して本文の記載の一部とする）に従って調製 され得る。該医薬組成物は、種々のトラック・デリバリ・システムにおける（受 用に好適である。現在のドラック・デリバリ方法における簡単な総説は、ランガ ー（Ｌａｎｇｅｒ）、５ｃｉｅｎｃｅ、２４９：１５２７−１５３３　（１９９ ０）を参照のこと。これを援用して本文の記載の一部とする。

本発明の阻止剤を含む医薬組成物については、例えば特定の薬剤、投与方法、処 置される特定疾患及びぞの重度、患者の総合的な健康及び状態、並びに主治医の 判定に従って、その投与量は変化し得る。全投与量は、典型的には、約１〜約１ ０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約２〜約７ｍｇ／ｋｇの範囲である。本発明が脱臼疾 患における機構の証拠を提供するので、ＬＨＲ仲介接着の阻害用の投与レベルの 最大限度は、当業者によって、ユニで達成され得る。本発明の目的とする結合の 「実質的な■害ｊは、好ましくは少なくとも約７０％の阻害であり、８０〜９０ ％か好ましく、９５９６以上か最も好ましい。

医薬組成物は、予防及び／又は治療のために、非経口、局所的に、経口又は、例 えはエアロゾル又は経皮的による局部投与に意図されている。該医薬組成物は、 投与方法に依存して、種々の単位投与量として施され得る。例えば経口投与に好 適な単位投与量の形として、粉末、タブレット、ピル及びカプセルを含む。

好ましくは、前記医薬組成物は、鞘′内注入によってＣＮＳの脳を髄液へ直接投 与される。従って、本発明は、許容可能なギヤリア、好ましくは水性キャリアに 溶角７又は懸濁された複合体の溶液を含む組成物を提供する。種々の水性キャリ アは、例えば水、緩衝水、リン酸緩衝液、０．４％生理塩水等が用いられる。こ れらの組成物は、よく知られている慣用の滅菌技術によって滅菌され得る。得ら れた水溶液は、そのままで使用のために包装されるか、凍結乾燥され得る。凍結 乾燥調製は、投与前に滅菌水溶液と合わされる。該組成物は、ｐＨ調製及び緩衝 剤、浸透圧調製剤、湿潤剤のような生理状態に近付けるために必要な医薬的に許 容可能な補助物質、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム 、塩化カリウム、塩化カルシウム、ツルビタンモノラウレート、オレイン酸トリ エタノールアミン等を含み得る。

前記複合体の濃度は広く変えることかでき、即ち、約０．０５重量％未満、通常 、約１重量％又は少なくとも約１重量％から、１０〜３０重量％であり、そして 選択された投与の特定モートに従って、主として、液体量、粘度等によって選択 される。

固体組成物には、慣用の非毒性固体キャリアか用いられ得、これは、例えば医薬 品グレートのマンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム 、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、シュークロース、 炭酸マグネシウム等を含む。経口投与には、医薬的に許容可能な非毒性組成物が 、通常用いられている全ての賦形剤例えは既に挙げられたキャリアを組み込むこ とによって形成され、これは一般に活性成分の１０〜９５％である。

エアロプル投与には、前記複合体か好ましくは界面活性剤及び噴射剤と共に、細 かく分離した形態で提供される。もちろん、該界面活性剤は、非毒性でなけれは ならず、好ましくは噴射剤中に可溶性である。このような薬剤は、例えばエチレ ングリコール、グリセロール、エリスリトール、アラビトール、マンニトール、 ノルビトール、フルビトールから誘導されたヘキシトール無水物のような脂肪族 の多価アルコール若しくはその環状無水物と、例えばカプロン酸、オクタン酸、 ラウリン酸、バルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リルン酸、オレステリ ン酸及びオレイン酸のような炭素原子６〜２２を含む脂肪酸とのエステル若しく は部分エステル並びにこれらのエステルのポリオキシエチレン及びポリオキシプ ロピレン誘導体で代表される。混合エステル例えば混合又は天然グリセライドか 用いられ得る。前記界面活性剤は、組成物の０．１〜２０重量％、好ましくは０ ．２５〜５重量％を構成する。組成物の残部は普通は噴射剤である。液化噴射剤 は、典型的には周囲状懸において気体のものであり、圧力下で濃縮されている。

とりわけ好適な液化噴射剤は、炭素数５までの低級アルカン例えばブタン及びプ ロパンてあり；好ましくは、フッ化又は塩化フッ素化アルカンである。上記の混 合物もまた用いられ得る。エアロゾルの製造では、好適なバルブを備えた容器に 細かく分散された化合物及び界面活性剤を含む適当な噴射剤が充填される。従っ て、上記成分は該バルブの作動により放出されるまで高圧力で維持される。

阻止剤を含む組成物は、治療的、予防的又は診断的な適用に施され得る。治療用 には、前記薬剤若しくはそのカクテルを含む組成物が、既に上述したような疾■ 、に■、っている患者に対して、該疾患及びその合併症の症状を回復若しくは少 なくとも部分的に進行を阻止するために十分な量で投与される。これを達成する ために好適な量は「治療有効ＭＪと定義される。この用途に有効な量は、前記疾 患の重度並ひに患者の体重及び平常状態に依存する。

予防的適用には、前記阻止剤若しくはそのカクテルを含む組成物は、特定疾患の 疑いがある又は、他の危険な状態にある患者に投与される。このような量は、「 予防有効全」と定義される。この場合、この正確な量は、また患者の健康状聾及 び体重に依存している。

診断的適用には、前記阻止剤若しくはそのカクテルを含む組成物は、膜様疾患状 態にある疑いを有する患者に対して、該疾患に伴うプラークの存在を測定するた めに投与される。或いは、特定治療の効能かモニターされ得る。これを達成する ために十分な量は「診断有効量」と定義される。この使用において、正確な量は μ者の健康状態等に依存している。

治療的又は診断的使用のために、キットも提供される。従って、本発明の対象組 成物は、通常、容器に凍結乾燥形懸て提供され得る。標識と結合又は非結合され 得る前記薬剤は、トリス、リン酸、炭酸等のような緩衝剤、安定剤、殺生物剤、 不活性タンパク質例えば血ｌＮアルブミン等、並びに使用説明書一式と共にキッ トに含まれる。一般に、これらの物質は阻止剤の量を基準として、約５重量％未 満て存在し、通常、タンパク質濃度を基準としても、少なくとも約ｏ、ｏｏｉ％ の全量て存在する。しばしば、活性成分を稀釈するために不活性の増量剤又は賦 形剤を含むことが所望され、この場合は、増量剤又は賦形剤は、全組成物の約１ 〜９９重量％て存在し得る。抗体か用いられる場合には、これは別のバイアルに 通常存在される。この抗体は、典型的には標識に結合され、この分野でよく知ら れている技術に従って作られる。

以下の実施例は、例示のために記載されたもので、それらに限定されるもので本 実施例は、ＬＨＲ−１ｇＧを用いたＣＮＳの免疫組織化学的染色を示したもので ある。この方法は、ワトソンら、↓伽旦、Ｂｉｏ！、、前述、の方法を改変した ものである。簡単に言えば、クリオスタット切断組織切片（１０μｍ）が、氷上 で２０分間、０．１Ｍカコジル酸ナトリウム（ｐＨ７，３）中０．５％バラホル ムアルデヒドで固定され、氷上で２０分間、０．３％Ｈ２Ｏ２と１００％メタノ ールに液浸した。この切片は、ダルベツコＰＢＳ　（ＰＢＳ）中で洗浄され、５ ％正常ウマ血清と５％正常ラット血清と共に、ＰＢＳ中３０μｇ／ｍｌのＬＨＲ −１ｇＧと、氷上で８０分間インキュベートされた。次いて洗浄され、室温にお いて３０分間、５％正常マウス血清を含むＰＢＳ中でビオチン化ヤギ抗ヒトＩｇ Ｇ（ザイメッド・ラボラトリーズ（Ｚｙｍｅｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、 サウス・サンフランシスコ、カリフォルニア化）とインキュベートされ、ＡＢＣ エリート試薬（ベクター・ラボ、バーリンガム、カリフォルニア化）と、それか らＡＢＣペルオキシダーゼ基質（パイオメーダ、フォスターシティ、カリフォル ニア化）とインキュベートされた。最終的に、該切片は水性へマドキシリン（ハ イオメーダ）によって後染色された。５％正常ウマ血清及び５％正常ラット血清 は、ミニリンに対するＬＨＲ−１ｇＧの非特異的結合を（Ｊト除するためにゼ・ 要であった。

上述の方法は、脳及びを髄の両方のミニリン富裕白色体路の特異的染色を示した 。こイ１に対して、脳の顆粒及び分子層とを髄の灰色体のようなミニリン化ファ イバーか少ない又はない領域は、陰性であった。ＥＧＴＡの添加は、特異的染色 を大幅に減少させ、これは既知のＬＨＲのカルシウム依存性結合と一致する（イ エトナツクら、Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、、］０４ニア１３、前述、を参照のこ と）、ＬＨＲ−１ｇＧによるミニリンの染色は、ＣＮＳ　ミニリンに拘束されて いた。末梢神経系のミニリンは、染色されなかった。この結果は、ＣＮＳに拘束 される仲介脱髄疾患におけるＬＨＲの役割を更に支持する。

この実施例は、ＬＨＲに対する抗体及びＥＧＴＡが、共に、脳ミニリンに対する リンパ球結合を阻害することを示している。インテグリン即ち、ＶＬＡ−４（α ４β１）、ＬＰＡＭ−１（α４β、）及びＬＦＡ−１（α、β２）は、種々のリ ンパ球接着相互作用に関連することか知られている。従って、β４、β１及びβ ２に対する限能阻止抗体も、また、ミニリンに対する接着におけるこれらのりセ ブターの役割を試験するアッセイに用いられる。

マウス脳及びを髄の連続切片におけるリンパ球結合アッセイは、スタンパ−（Ｓ ｔａｍｐｅｒ）及びウッドラフ（Ｗｏｏｄｒｕｆｆ）、Ｌ匹１位肌、１４４：８ ２Ｂ　（１９７６）の方法を基にした。この文献を援用して本文の記載の一部と する。簡単に言えば、マウス腸間膜りンパ節リンパ球（５％のＦＢＳと１２．５ ｍＭのＨｅｐｅｓとを添加したＲＰＭ１１６４０．１００μｍ中１０’個細胞） が、ジャイレートリー振どう器において、８０ｒｐｍで３０分間、水上において パラホルムアルデヒド固定組織切片上でインキュベ−１−された。該切片は、そ れから、２．５％グルタルアルデヒドて固定され、トルインンブルーで染色され た。適当な抗体が３０分間のインキュベーション期間の間に添力０された。単一 エリア（ＵＡ）に対する結合細胞の数は、それから顕微鏡的に計測された。この 単一エリアは、接眼レンズのレチクルの補助で決定され、又は脳の一連の連続切 片におけるミニリン細片の存在の決められた範囲とされた。

これらの実験の結果は、表２に示されている。ＵＡ当たりに結合した細胞の数（ ±ＳＥＭ）は、３〜５複数切片からめた。用いられた細胞は、以下の通りである 　マウス腸間膜リンパ節リンパ球（ＭＮＬ）、Ｊｕｒｋａｔ　ＪＳ９−７８（Ｌ ＨＲ高発現のクローンＴ細胞株）及びモノ・ポリ・リソルビング・メディウム（ フロー・ラボラトリーズ・インク、マクリーン、ヴアージニア州）を用いて健常 ボランティアの末梢血から単離したヒト末梢血単核白血球（ＰＢＬ）。

抗体は、以下の濃度で用いられた：ＭＥＬ−１４．５μｇ／ｍｌ；ポリＭＥＬ血 清（精製マウスＬＨＲで免疫化されたラビッドからのもの）１　：　１０．ＬＡ Ｍｌ　４、Ｉ：１００：抗β２１１！水（テリオス・ファーマシューテイカルズ ・インク、サンティエゴ、カリフォルニア化）、］：５０＋抗ＶＬＡ４　（ＨＰ ２／ｌ、ＡＭＡＣインク、ウェストブロック、メイン化）、４μｇ／ｍｌ（この 抗体は、ｉｎ　ｖｉｌｒｏ結合アッセイにおいて７０％以上、バイエル板に結合 するラットリンパ球を阻害した）；及びＴＱＩ（コルター・ラボ、ヒアリー、フ ロリダ州）、ｌＯμｇ／ｍ１．ＥＧＴＡは］ＯｍＭて使用した。

ＥＧＴＡ　１２．０（±４．０）　−９５，５種々の糖質ら、上述のアッセイに おいて、ミニリン化領域に対するヒトリンパ球結合の阻害について試験された。

試験された糖質は、ＰＰＭＥ、マンノース−〇−リン酸及びフラクト−ス−１− リン酸であった。結合の完全な阻害は、ｌｏｕｇ／ｍｌのＰＰＭＥ及びｌｏｍＭ の単糖類によって認められた。上述の結果は、ヒトＬ　ＨＲと反応するモノクロ ーナル抗体及び糖質が、ＥＧＴＡの場合と同じ程度まで、Ｔ細胞及びヒトＰＢＬ の結合を共に阻止することを示している。更に、インテグリンリセブターの機能 領域と反応する抗体は、影響しなかった。

この実施例は、フォルボールエステル（ＰＭＡ）が脳ミニリンに対するＪｕｒｋ ａｔ細胞の結合を阻害することを示す。ヒトリンパ球のＰＭＡ処理は、細胞表面 からのＬＨＲの簡便で殆と完全な脱落を引き起こすことが知られている（テダー ら、前述）　ｏ　Ｊ　ｕ　ｒ　ｋ　ａ　を細胞は、３７°Ｃて３ｏ分間、ｌｏａ ｎｇ／ｍ１のＰＭＡでインキュへ−１・され、又は同一条件下で未処理で放置さ れた。洗浄後、それらは上述された結合アッセイで試験された。数は、単一エリ ア当たりの結合細胞数及び％阻害（±ＳＥＭ）を示す。ＥＧＴＡはｌｏｍＭで用 いた。結果は下記の表２に示し、これは、ＬＨＲのＰＭＡ誘導脱落は、ヒト及び マウスのミニリン鞘に対するＴ細胞の結合を、共に阻害したことを示している。

ＦＡＣＳ解析は、ＰＭＡ処理か、未処理細胞に対して８７％までＬＨＲ発現を減 少させたことを確認した。

表２ 脳起源　細胞の処理　ＥＧＴＡ　結合細胞／ＵＡ　％阻害これらの結果は、ＬＨ Ｒがミニリンに対する白血球の接着に関連している証拠を更に提供する。ＰＭＡ 処理によるＬＨＲの脱落は、ミニリンに対する結合を殆と完全に阻害した。

上記の実施例は、ミニリンに対するＬ　ＨＲ仲介白血球接着を効果的に阻止する 本発明の薬剤の能力を示している。明確及び理解の為に、本発明は、これらの実 施例及び上述の記載において、いくらか詳細に説明されてきた。しかし、特定の 変更及び改変か添Ｃ寸された請求の範囲の中において実施され得ることは明らが であろう。

国際調査報告　四ｔｎｓ□＋ｕｎｈ・ｌｌ’ｐＨＮｍ＋１・＋ｆｉ　％フロント ページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，６識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３９／３９５ 　Ｙ　９２８４−４Ｃ（７２）発明者　ファング、クン アメリカ合衆国　カリフォルニア州 ９４１１６　サンフランシスコ　セブンティーンス　アベニュー　２１３７ Ｉ （７２）発明者　シンガー、マーク アメリカ合衆国　カリフォルニア州 ９４７０３　バークレイ　グランド　ストリート　１９１５ （７２）発明者　シェフロイ、ジョイスアメリカ合衆国　イリノイ州　６０６３ ３　バーンハム　サウス　ホクシー　アベニュー

Claims (29)

【特許請求の範囲】
1. １．患者における脱髄疾患の処置方法であって、医薬的に許容可能なキャリアと ミエリンに対する白血球のＬＨＲ仲介結合を阻害する阻止剤とを含み且つ該阻止 剤がＬＨＲ仲介接着を実質的に阻害する量で存在する医薬組成物を治療的に効果 的な量で該患者に投与することを含む上記処置方法。
2. ２．前記阻止剤がＬＨＲに選択的に結合する請求項１に記載の方法。
3. ３．前記阻止剤が糖質である請求項２に記載の方法。
4. ４．前記糖質がマンノース−６−リン酸、フラクトース−１−リン酸である請求 項３に記載の方法。
5. ５．前記糖質がフコイジン又はＰＰＭＥのフラグメントである請求項３に記載の 方法。
6. ６．前記阻止剤が、ＬＨＲに選択的に結合する糖質部分を含み、該糖質が、シア ル酸残基、フコース残基又はスルフェート基の少なくとも１つを有する請求項２ に記載の方法。
7. ７．前記阻止剤が、オリゴ糖類である請求項２に記載の方法。
8. ８．前記阻止剤が、糖タンパク質又は糖脂質である請求項２に記載の方法。
9. ９．前記阻止剤が、内皮細胞表面糖タンパク質の細胞外領域を含む請求項２に記 載の方法。
10. １０．前記内皮細胞表面糖タンパク質がＳｇｐ５０又はＳｇｐ９０である請求項 ９に記載の方法。
11. １１．前記阻止剤が、免疫グロブリンである請求項２に記載の方法。
12. １２．前記阻止剤が、ミエリンにおける認識決定基に選択的に結合する請求項１ に記載の方法。
13. １３．前記阻止剤が、単離ＬＨＲである請求項１２に記載の方法。
14. １４．前記阻止剤が、ＬＨＲ成分及び免疫グロブリン成分を含む請求項１３に記 載の方法。
15. １５．前記単離ＬＨＲが、脂質膜に埋め込まれている請求項１３に記載の方法。
16. １６．前記脱髄疾患が、多発性硬化症である請求項１に記載の方法。
17. １７．脱髄疾患の処置のための医薬組成物であって、医薬的に許容可能なキャリ アとミエリンに対する白血球のＬＨＲ仲介結合を阻害する阻止剤とを含み、該阻 止剤が脱髄疾患を有効的に処置するために十分な量で存在する、当該医薬組成物 。
18. １８．前記阻止剤が、ＬＨＲに選択的に結合する請求項１７に記載の組成物。
19. １９．前記阻止剤が、マンノース−６−リン酸、フラクトース−１−リン酸であ る請求項１８に記載の組成物。
20. ２０．前記糖質が、フコイジン又はＰＰＭＥのフラグメントである請求項１８に 記載の組成物。
21. ２１．前記阻止剤が、内皮細胞表面糖タンパク質の細胞外領域を含む請求項１８ に記載の組成物。
22. ２２．前記内皮細胞表面糖タンパク質が、Ｓｇｐ５０又はＳｇｐ９０である請求 項１８に記載の組成物。
23. ２３．前記脱髄疾患が、多発性硬化症である請求項１７に記載の組成物。
24. ２４．患者におけるミエリンに対する白血球のＬＨＲ仲介接着の阻止方法であっ て、医薬的に許容可能なキャリアとＬＨＲ仲介結合を阻害する阻止剤とを含む医 薬組成物を、治療的に有効的な量で該患者に投与することを含む当該方法。
25. ２５．前記阻止剤が、ＬＨＲに選択的に結合する請求項２４に記載の方法。
26. ２６．前記阻止剤が、ＬＨＲに選択的に結合する糖質部分を含み、該糖質が、シ アル酸残基、フコース残基又はスルフェート基の少なくとも１つを有する請求項 ２５に記載の方法。
27. ２７．前記阻止剤が、免疫グロブリンである請求項２５に記載の方法。
28. ２８．前記阻止剤が、ミエリンにおける認識決定基に選択的に結合する請求項２ ４に記載の方法。
29. ２９．前記阻止剤が、単離ＬＨＲである請求項２８に記載の方法。