JPH07504900A - 二重作用の２′，５′−オリゴアデニレート抗ウィルス誘導体およびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 二重作用の２’、５’　−オリゴアデニレート抗ウイルス誘導体およびその使用 発明の技術分野 本発明は、成る種の治療的２’　、５’　−オリゴアデニレート同族体、これら 同族体の医薬配合体および組成物、並びにその使用に関するものである。

発明の背景 本発明による主題の全名称は極めて長い用語を含む。

これら用語を当業者に周知されたように簡略することが当業者には一般的である 。これらの一般的かつ慣用の略語を下記に示し、本明細書で用いることができる 。

略語： ＲＴ：逆転写酵素； Ａ：アデノシンまたはアデニレートもしくはアデニリル： コルジセピンまたはＣもしくは３’　−ｄ八：３′−デオキシアデノシン−（３ ′−デオキシアデニレート）；ａｒａ−Ａ＝９−β−Ｄ−アラビノフラノシルア デニン： ＥＨＮＡ　：エリスロー９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）アデニン： Ａ−３′−アミノ：３′−アミノ−３′−デオキシアデノシン； ッペルシジン：４−アミノ−７−（β−Ｄ−リボフラノシル）−ピロロ−［２， ３−ｄｌ　ピリミジン；３’　−ｄＡＴＰ　：　３’　−デオキシアデノシン三 燐酸：ＡＴＰ　：アデノシン三燐酸； ｌ：イノシンまたはイノシネートもしくはイノシニリル； キシロ−Ａもしくはキシロアデノシン：９−β−Ｄ−キシロフラノシルーアデニ ン； ｄＣＦもしくは２′−デオキシコホルマイシン：　（Ｒ）−３−（２−デオキシ −β−Ｄ−エリスロベントフラノシル）−３，６，７，８−テトラヒドロイミダ ゾ［４゜５−ｄｌ　［１，３］　ジアゼピン−８−オール：２−５Ａまたは２’ 、５’−オリゴ（Ａ）もしくは２′、５′−オリゴアデニレート：２’、５’　 −ホスホジエステル結合および５′末端におけるトリホスフェートを有するアデ ニル酸のオリゴマー： Ｃニコルデシピン； ２’、５’−コルジセピン同族体もしくは２’、５’−オリゴコルジセピン：２ ’、５’　−ホスホジエステル結合および５′　−末端におけるトリホスフェー トを有する３′　−デオキシアデニル酸のオリゴマー：２’　、５’　−Ａ　も しくはコアオリゴマー：２’、５′　−ホスホジエステル結合を有するアデニル 酸のオリゴマー： ２’　、５’−Ａ３もしくは２’、５’　−アデニレート３量体コア：アデニリ ル（２’　、５’　）アデニリル（２・、５′）アデノシン； ２’　、５’−Ａ４もしくは２’、５’　−アデニレート４量体コア：アデニリ ル（２’　、５’　）アデニリル（２’、５’）アデニリル（２’　、５’　） アデノシン：２’　、５’　−３’　ｄＡ３もしくは２’　、５’　−Ｃ−Ｃ− Ｃまたは２’、５’−コルジセピン３量体コア：３′−デオキシアデニリル（２ ’　、５”）３’　−デオキシアデノシンー（２’　、５’　）３’　−デオキ シアデノシン；２’　、５’　−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｃもしくは２′、５−コルジセピ ン４量体コア：３′−デオキシアデニリル（２′、５′）３′−デオキシアデニ リル（２’　、５’　＞３′−デオキシアデニリル（２’　、５’　）３’　− デオキシアデノシン； ３’　、５’　−Ａ　・アデニリル（３’　、５’　）アデニリル（３’　、５ ’　）アデノシン； ２’　、５’−１３もしくは２’、５’　−イノシン３量体コア；イノシン３量 （２’　、５）イノシニリルー（２’、５’）イノシン： ｄｄベンズ：ベンズイミダシリル（２’　、５’　）５゜６−シクロルベンズイ ミダゾールリボシド；ＥＢＶ：エプスタイン・バールウィルス：ＥＢＮＡ：エプ スタイン・バールウィルス関連の早期核抗原； ＨＢＶ：Ｂ型肝炎ウィルス； ＨＩＶ：ヒト免疫不全症ウィルス（ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２および他の全てのＨ ＩＶサブタイプを含む）；ＨＢＬＶ：ヒトＢ−細胞リンパ趨向性ウィルス；ＨＴ ＬＶ　：ヒトＴ−細胞白血病ウィルス（ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−１［およびＩ ＩＴＬＶ−１１１，並びに他の全てのＨＴＬＶサブタイプを含む）；ＩＦＮα・ α−インターフェロン ｒｌＦＮ−αへ：組換α−インタフェーフエロン；ｄｓＲＮＡ；二本鎖リボ核酸 ： ２’　、５’　−Ａ−Δ−Ｔｕ、アデニリル（２’　、５”）アデニリル（２’ 　、５’　）ツベルクリン：２’　、５’　−Ｔｕ−Ｔｕ−Ｔｕ　：　２”　＋ 　５′−ツベルシジリル（２’　、５”）ツベルシジリル（２’　、５’　）ツ ベルクリン； ２’　、５’−Ａ−Ａ−ａｒａ−Ａ：アデニリル（２′。

５′）アデニリル（２’　、５’　）ａｒａ−八；２’　、５’　−Ｃ−Ｃ−Ａ 　：　３’　−デオキシアデニリル（２’　、５’　）３’　−デオキシアデニ リル（２’　、５’　）アデノシン； ２’　、５’　−Ａ−Ｃ−Ｃ：アデニリル（２’　、５’　＞３′−デオキシア デニリル−（２’　、５’　＞３’　−デオキシアデノシン； ２’　、５’　−Ａ−Ａ−Ｃ：アデニリル（２’　、５”）アデニリル（２’　 、５’　）３’　−デオキシアデノシン；２’　、５’−Ｃ−Δ−Ｃ１３′−デ オキシアデニリル（２’　、５”）アデニリル（２’　、５’　）３’　−デオ キシアデノシン； ２’　、５’　−Ｃ−Ｃ−八：３′　−デオキシアデニリＪしく２’　、５’　 ）３’　−デオキシアデニリル（２’　、５”）アデノシン； ２’　、５’　−へ−Ｃ−へ：アデニリル（２’　、５’　）３′−デオキシア デニリル（２’　、５’　）アデノシン；２’、５’　−キシロ−Ａ　：キシル アデノシン（２′。

５′）キシロアデニリル（２’　、５”）キシロアデノシン； ２’、５’　−キシロ−Ａ　：キシロアデノシン（２′。

５′）キシロアデニリル（２’　、５”）キシロアデニリル（２’　、５”）キ シロアデノシン；ＡＣニアセチル； Ｂｚ：ベンジル； ＭＭＴ　ｒ　＋　５’　−０−ｐ−メトキシトリチル；２’、５’　−トリチル −Ｃ：５’−０−ｐ−メトキシトリチル−３′　−デオキシアデニリル（２’　 、５’　）３′　−デオキシアデニリル（２’　、５”）３’　−デオキシアデ ノシン； ２’、５’−）リチルーＡ３　：５’　−０−ｐ−メトキシトリチルアデニリル ー（２’　、５’　）アデニリル（２’、５’）アデノシン： ２’　、５’　−Ｃ−Ｃ−ｄＣＦ・３′−デオキシアデニリル（２’　、５’　 ）３’−デオキシアデニリル（２′。

５’　）２’　−デオキシコホルマイシン；２’、５’　−Δ−Ａ−Ａ−３’　 −アミノニアデニリル（２’　、５’　）アデニリル（２’　、５’　）３’　 −アミノ−３′−デオキシアデノシン； ５ｉＴＢＤ：ｔ−ブチルジメチルシリルまたは−５ｔ（ＣＨ３）　２　Ｃ（ＣＨ ３）　３　；−Ａ　−八：３’−ｏ−ｔ−ブ ２′・　５′−Ａ（Ｓｉ）　（ＳＮ チルジメチルシリルアデニリル（２’　、５’　）３’　−０−１−ブチルジメ チルシリルアデニリル（２’　、５’　）−アデノシン； ２’、５’　−ＡｍＡ−Ａ−３’　−０−メチル：アデニリル（２’　、５’　 ”）アデニリル（２’　、５”）３’　−０−メチルアデノシン； ２’　、５’　−Ａ−Ａ−Ａ−３’　−０−ペンチル：アデニリル（２’　、５ ’　）アデニリル（２’　、５’　＞３’　−０−ペンチルアデノシン： ２’　、５’　−Ａ−Ａ−Ａ−３’　−０−ヘキシル：アデニリル（２’　、５ ’　）アデニリル（２’　、５”）３’　−０−へキシルアデノシン； ２’　、５’　−Ａ−へ一へ−３′−〇−ヘプチル：アデニリル（２’　、５’ 　）アデニリル（２’　、５’　）３’　−０−へブチルアデノシン； ２’　、５’　−ＥＨＮＡ−Ａ−Ａ　＋エリスロー９−（２−ヒドロキシ−３− ノニル）−アデニリル（２’　、５’　）アデニリル（２’　、５’　”）アデ ノシン。

アデニル（Ａ）成分と３′−デオキシアデニリル（Ｃ）成分とからなる「４量体 」化合物０略・語を以下に示す：２’　、５’　−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｃ：アデニリル （２’　、５′）アデニリル（２’　、５’　）−３’　−デオキシアデニリル （２’　、５’　）−３’　−デオキシアデノシン。

上記化合物は２’、５’の添字とハイフンと３′の添字とを用いずに簡略され、 したがって２’　、５’　−Ｃ−Ｃ−Ｃ−３’　はＣＣＣとも略記される。

インターフェロンにより誘発される抗ウイルス状態の知識を拡大して、抗レトロ ウイルス反応の媒体としての２’、５’　−オリゴアデニレートの化学的および 酵素的合成、並びに生物学的性質に注目が集められている。２′、５′−オリゴ （Ａ）は、植物および動物における天然の広スペクトル抗ウイルス防御メカニズ ムの成分である。２−５　Ａ／ＲＮアーゼし経路もしくは抗ウイルス系としても 知られる２−５Ａ経路は、インターフェロンの抗ウイルスメカニズムに関与する ことが広く認められ、細胞生長および分化の調整にも関与する。

この経路は潜伏的エンドリボヌクレアーゼ、すなわちＲＮＮアーゼ　（ＥＣ３， １，２７）の２−５八による活性化を含む。第１図に示した経路によれば、２− ５Ａは２’、５’−オリゴアデニレート・シンセターゼ［ＡＴＰ　：　（２’− ５’）−オリゴ（Ａ）−アデニル転移酸素（ＥＣ２，７，７，１９）］、以下［ ２−５Δシンセターゼと称する］によりＡＴＰから合成される。ｄｓＲＮＡによ り活性化されると、２−５ＡシンセターゼはＡＴＰを２−５　Ａ、すなわち５′ −末端トリホスフェ車−トを特徴とする一連の２’、５’　−結合オリゴアデニ レートまで変換する。２−５Ａシンセターゼは種々異なるイソ酵素型で存在し、 インターフェロンにより誘発されるが、低レベルでインターフェロンの不存在下 でも検出することができる。２−５Ａは、その唯一の知られた標的酵素、すなわ ち独特の２−５Ａ依存性エンドリボヌクレアーゼＲＮアーゼＬに結合すると共に 活性化することにより、その生物学的作用を発揮する。これはウィルスおよび細 胞のｍＲＮＡもしくはＲＮＡを切断することにょ第７５巻、第２５６〜２６０頁 （１９７８）］。生物系における真正２−５Ａ分子の短い半減期は、ウィルス複 製の調節において公知の欠点となる。さらに生物活性の２−５Ａは３種の酵素： すなわち比較的非特異性の２′−ホスホジェステラーゼ、５′−ホスファターゼ および比較的特異性の２’、３’　−エキソヌクレアーゼによって失活される。

成る種のサイトキン（たとえばＩＬ−６）は、生物不活性型の２−５八を酵素ま たは特定型の酵素が産生ずるように２−５Ａシンセターゼを活性化させる［Ｍ、 ピッケル、Ｇ、ドベクスラー、Ｃ，Ｗ、ディーフェンバッハ、Ｓ、ルール、Ｓ、 Ｂ、ミズラおよびり、Ｈ。

プルズニク、サイドキン、第２巻、第２３８〜２４６頁（１９９０）、並びにＢ 、コーヘン、Ｙ、ゴセルフ、Ｄ。

バイマン、Ｍ、レーベルおよびＪ、チェバス、サイドキン、第３巻、第８３〜９ １頁（１９９１）］。

］２−５Δシンセターゼ／ＲＮアーし経路は、ＨＩ　Ｖ−１を含め多くのウィル スによるウィルス感染の後に活性化される［Ｈ，Ｃ，シュレーダー、Ｒ，ウエン ガー、Ｙ、クチノおよびＷ、Ｅ、Ｇ、ミュラー、ジャーナル・バイオロジカル・ ケミストリー、第２６４巻、第５６６９頁（１９８９）　：　Ｈ，Ｃ，シュレー ダー、Ｒ，ウエンガー、Ｍ、ロットマンおよびＷ、Ｅ、Ｇ、ミュラー、づイオロ ジカル・ケミストリー−ホ・ソペ・セイラー、第３６９巻、第９８５頁（１９８ ８）］。この経路の活性化はＨＩＶ感染過程を遅延させる。ＲＮＮアーゼを活性 化させるには、天然産の２−５Ａ分子は不安定な５′−トリホスフェートを必要 とする。５′−モノホスフェートを有し或いは５′−ホスフェート（コア）を持 たない２−５Ａ分子は生理学的濃度にてＲＮＮアーゼを活性化しない。

「ヒトＢ−細胞リンパ趨向性ウィルスＪ　（ＨＢ　Ｌ　Ｖ）としても知られ、現 在ではＨＨＶ−６と呼ばれる「ヒトＢ−リンパ趨向性ウィルス」は、大分子量の 二本鎖ＤＮＡゲノムを特徴とし、ヘルペスウィルス属のウィルスに形態学上類似 するが既知のヒトおよび非ヒト霊長類ヘルペスウィルスとは宿主範囲、インビト ロの生物学的作用、抗原の特徴およびゲノムにより容易に区別することかで第２ ３４、第６０１〜６０２頁（１９８６）］。このウィルスは、新たに分離された ヒトＢ−細胞に選択的に感染して、これらＢ細胞を大きい屈折性の単核もしくは 三核細胞（核および細胞質の包合体を含む）に変換させる。

ＨＢＬＶは、−年以上にわたり持続する慢性疲労を特徴ヒトＴ−細胞白血病ウィ ルスｌ　Ｉ　Ｉ　（ｒＨＴＬＶ−１１１Ｊ）としても知られるヒト免疫不全症ウ ィルス（ｒＨＩＶＪ）、すなわち後天的免疫不全症候群の病原体はタイプＤ型レ トロウィルスである。全てのレトロウィルスにおけるように、ＨＩ　Ｖ複製の主 たる特徴はプラス・ストランドＲＮＡゲノムからＤＮＡへの逆転写であり、すな わちＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼ（すなわち逆転写酵素）を必要とする過程 である。この酵素はウィルスコードされ、成熟ＨＩＶウィルスにおけるゲノムＲ ＮＡに関連することが判明した。短い逆転写過程を必要とするレトロウィルスお よびウィルスに逆転写酵素を限定することは、逆転写酵素を抗ウイルス性、特に 抗レトロウイルス性の治療的介入の主たる標的にする。

抗ウイルス細胞防御メカニズムとしての２−５八シンセターゼ／ＲＮアーゼし系 は、特にたとえばｏｉｖ−ｔＲＮＡゲノムのようなウィルスゲノムもしくは転写 物における二本鎖セグメントとの相互作用により、抗ウイルス化学療法の有望な 標的となることが示されている［Ｐ。

レンギエ、アニュアル・レビュー・バイオケミストリー、第５１巻、第２５１頁 （１９８：ｌ　；ｓ、ベスト力編、メソッズ・エンチモロジー、第１１８巻、第 １１９頁（１９８６）：Ｐ、レンギエル、ジャーナル・インターフェロン・リサ ーチ、第７巻、第５１１頁（１９８７）；第１０５頁（１９８２）］。しかしな がら、必要とされるものは、真正２−５Ａを失活させる酵素による分解を克服す るるような２−５への誘導体である。さらに必要とすることは、ＨＩＶと、ＨＢ ＬＶにより引起される慢性疲労と、並びに他のウィルス性もしくはサイドキン誘 発の病気状態（これら病気状態は２−５Ａ経路の欠点を特徴とする）を抑制する 方法であり、この抑制には真正２−５八よりも代謝上安定かつ活性である化合物 を使用する。必要されることは、広スペクトルの二重作用を有する化合物、すな わち２−５Ａ経路を活性させると共にウィルスＤＮＡポリメラーゼの活性を抑制 する化合物を用いるウィルス感染の処置方法である。

発明の要点 １具体例によれば、本発明は式■ ［式中、ｎは１〜８の正の整数であり、ｍは０、■、２もしくは３であり、 Ｒは独立して水素もしくはヒドロキシルであり、ＸはＣ−Ｃアルキルおよび０１ 〜Ｃ６アルコキシよりなる群から選択される］ の新規な化合物、またはその医薬上許容しうる塩の抗ウイルス的使用である。

好ましくはｎは１〜３、特に好ましくはｌもしくは２である。Ｘは好ましくは０ １〜Ｃ３アルキルおよびＣ１〜Ｃ３アルコキシから選択される。

他の具体例によれば本発明は、哺乳動物に有効量の１種もしくはそれ以上の式！ 　（式中、ｎ、、ｍ、ＲおよびＸは上記の意味を有する）または式ＩＩ ［式中、Ａは であり、 ＸはＮＨ２もしくはＣＨ２であり； ｍは０．１．２もしくは３であり； ｎは１〜８の整数である； 各Ｒ１は独立して酸素、硫黄、サルフェート、セレン、０１〜Ｃ８アルキルおよ びＣ＋　””　Ｃｓアルコキシよりなる群から選択され； 各Ｒ２は独立して酸素、硫黄、サルフェート、セレン、０１〜Ｃ８アルキルおよ び０１〜ｃ８アルコキシよりなる群から選択され； 各Ｒ３は独立して水素、ヒドロキシル、アミノおよび−Ｏｓ　（Ｃ１３）　２− Ｃ（ＣＨ３）　３から選択され；ＲおよびＲ５は独立して水素；ヒドロキシル； アミノ；Ｃ−Ｃ８’ｙルキル；Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ；０１〜ｃ８アルキルアミ ノ、アルキルカルボニル、アルキルカルボキシルおよびアルキルハライド；並び にＣｌ””’　０ｇアルコキシアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカル ボキシルおよびアルコキシハライドよりなる群から選択される］ による化合物またはその医薬上許容しうる塩（真正２′。

５′　−オリゴアデニレートおよびその塩を除く）を投与して前記哺乳動物の２ −５Ａシンセターゼ／ＲＮアーゼＬ抗ウイルス経路の活性とウィルスＤＮＡポリ メラーゼの抑制とを同時に生ぜしめることからなる抗ウイルス処置の方法である 。

好ましくはｎは１〜３、特に好ましくはｌもしくは２である。さらに他の具体例 によればアルキル、アルコキシ、置換アルキルもしくは置換アルコキシ基は１〜 ８個の炭素原子を有することができ、好ましくは１〜４個の炭素原子、特に好ま しくは１〜３個の炭素原子を有する。

ハロゲン置換アルキルおよびアルコキシ基につき、ハロゲン原子は好ましくは塩 素、臭素もしくは弗素であり、塩素が特に好適である。

本発明の好適具体例によれば、基Ａは式［式中、ｍは上記の意味を有し、より好 ましくはＲ１の少なくとも１個は硫黄であり、他の各Ｒ１は酸素である］である 。他の好適具体例は、Ｒ３もしくはＲ４の少なくとも一方が水素であり、他方が ヒドロキシルであるものを提供する。

他の具体例によれば本発明は、式１１による化合物を完全細胞中への浸透を向上 させるアダクトに共有結合させてなる配合体である。

アダクトは特にｈ利には、２′　−末端ヌクレオチドの２′もしくはし３′位置 （好ましくは２′位置）におけるヒドロキシル酸素を介しオリゴマーに結合する 。

このアダクトは１具体例において、ビタミンのリセブタ媒介エンドサイトシスの ための標的哺乳動物細胞に対応の細胞リセプタを有するようなビタミンから選択 されるビタミンで構成することができる。本発明によるアダクトとして有用なビ タミン類はたとえばビタミンＢ１２、ビオチン、リボフラビンおよび葉酸を包含 する。

或いは、アダクトはたとえば式 ％式％） ［式中、Ｘは１〜２０、好ましくは２〜１４の整数である］ のアシル基のような親油性分子もしくは基を含むこともできる。他の好適な親油 性基はコレステリルである。

１つの好適種類の配合体において、アダクトが共役結合する化合物は式ＩＩの構 造を有する化合物であるか、ここでＡは ｍは０．１．２もしくは３であり、 ｎは１〜８、好ましくは１．２もしくは３の整数であり、各ＲおよびＲ４は独立 して水素およびヒドロキシルから選択され、 各Ｒ２は独立して硫黄および酸素から選択され、Ｒ５はヒドキシであり； またはその医薬上許容しつる塩であり、２′　−末端ヌクレオチドの２′−位置 を介しアダクトに共有結合する。

図面の説明 第１図は２−５Ａシンセターゼ／ＲＮアーゼし細胞内酵素経路を示す図面であり 、 第２Ａ図はフオレート不足培地にてフオレート（２５μｇ　／　ｍ　！　）に共 有結合したフルオレスセインー牛血清アルブミン（ＢＳＡ）と共に５時間にわた り培養したＨ９細胞の位相差顕微鏡図であり、 第２Ｂ図は第２Δ図に示したと同じＨ９細胞の蛍光顕微鏡写真図であり、 第２Ｃ図はフオレートに結合してないフルオレスセインーＢＳＡと共に５時間に わたり培養したＨ９細胞の位相差顕微鏡写真図であり、 第２Ｄ図は第２Ｃ図に示したと同じＨ９細胞の蛍光顕微鏡写真図である。

発明の詳細な説明 ２−５Ａシンセターゼ／ＲＮアーゼＬ抗ウイルス防御経路を活性化させると共に ウィルス由来のＤＮＡポリメラーゼ（特に逆転写酵素）の活性を抑制する治療剤 はウィルス病状態の処置に使用される。「処置」という用語は、予防をも包含す ることを意味する。この種の二重作用の治療剤は、ウィルス感染の際に産生され るウィルスＤＮＡポリメラーゼの選択的かつ広スペクトルの抑制剤である。ポリ メラーゼはウィルス複製につき重要である。

本発明の実施に使用される化合物は、５′−末端ホスフェート基、リボシル部分 および／またはヌクレオチド間の結合における改変を伴なう真正２−５Ａの誘導 体として特性化することができる。これら誘導体は代謝的に安定かつ無毒性であ って二重の抗ウィルス作用を有し、たとえばこれらは２−５八シンセターゼ／Ｒ ＮアーゼＬ抗ウイルス経路を活性化させると共にウィルス由来のＤＮＡポリラー ゼを抑制する。かくして、哺乳動物細胞に存在する固有の抗ウイルスメカニズム を活性化すると共にウィルス情報伝達に重要な酵素を抑制する二重の作用により 抗ウイルス療法に到達した。

本発明の実施に有用な１種類の化合物においては、３′−ヒドロキシル基の１個 もしくはそれ以上をコア２′。

５′−コルジセピン誘導体を形成すべく水素原子により置換した。この改変の結 果、ホスホジェステラーゼによる分解に対し向上した耐性を有する誘導体が得ら れた。

この種の化合物の作成は米国特許第４．４（３４，３５９号公報に開示され（２ ’　、５’−オリゴコルジセピン）、さらに米国特許第４．８５９．７６８号公 報に開示されている（２’　、５’　−オリゴコルジセピンおよび混合２′、５ ′−オリゴ（コルジセピン／アデノシン））。コア２’、５’　−コルジセピン 誘導体は無毒性でもあって、広スペクトルの抗レトロウイルス活性を感染細胞に て示す［Ｄ、Ｃ，モンテフィオリ、ＲｏＷ、ソボール、Ｓ。

Ｗ、リー、Ｎ、Ｌ、ライヒエンバッハ、Ｒ，Ｊ、スハドルニク、Ｒ，チャルバラ 、Ｗ、プノアイデラー、Ａ、モドリスゼウスキ、Ｗ、Ｅ、ロビンソン・ジュニア および１頁（１９８９）；Ｒ，Ｊ、スハドルニク、Ｂ、レブロー、Ｗ、プフフイ デラー、Ｒ，チャルバラ、Ｄ、Ｃ，モンテフィオリ、Ｗ、Ｍ、ミッチェル、Ｒ， Ｗ、ソボール、Ｓ、Ｗ、　、クー１Ｋ、カリコおよびＮ、Ｌ、ライヒエンバッハ 、ヌクレオシド・アンド・ヌクレオチド、第８巻、第９８７頁（１９８９）；ｗ 、Ｅ、Ｇ、ミュラー、Ｂ。

Ｅ、ワイラー、Ｒ，チャルバラ、Ｗ、ブノアイデラー、し、レーザーマン、Ｒ， Ｗ、ソボール、Ｒ，Ｊ、　スハド５Ａ誘導体は、米国特許第４．８５９；　７６ ８号に記載されたように、アミノおよびＯ３ｉ　（ＣＥ−１３）２−Ｃ（ＣＨ３ ）３の置換のような３′　−ヒドロキシル基の他の改変により合成されている。

他の２−５Ａ誘導体は、１個もしくはそれ以上のヌクレオチドにおける３′−ヒ ドロキシル改変に加え或いはその代りに、５′　−末端ホスフェート基における 改変を有する。これら２−５Ａ誘導体はウィルスＤＮＡポリメラーゼを抑制する 能力を保持すると共に代謝安定性を保持するが、さらにＲＮアーゼＬを活性化す ることもできる。既に合成されたものに加え各種の２’、５’　−オリゴアデニ レート誘導体は向上した抗ウィルス活性を示す。

さらに他の具体例によれば、ヌクレオチド間ホスホジエステル結合も改変される 。好適具体例によれば、酸素原子の代りに硫黄を用いて２’　、５’　−ホスホ ロチオエートオリゴアデニレートを生成させる。光学異性体を含むこれら化合物 の製造は米国特許第４．９２４，６２４号公報に記載されている。２’、５’　 −ホスホジエステル骨格における酸素と硫黄との置換は、分子中にキラル性を導 入すると共に骨格にも新規な化学特性を導入する。

コア２’、５’　−ホスホロチオエートはホスホジェステラーゼおよびホスファ ターゼに対する増大した耐性と新たな生物学的活性とを真正２−５Ａコアと比べ ると示す。

これら立体化学改変された分子は、ＲＮアーゼＬを活性化しうる最初の２’、５ ’　−結合のコア分子である。２′、５′−ホスホロチオエートは２−５Ａシン セターゼ／ＲＮアーゼＬ抗ウイルス系の活性化とウィルスＤＮＡポリメラーゼの 抑制との両者を介して作用する。２′。

５′−ホスホロチオエート３量体５′−モノホスフェートはＲＮアーゼＬを天然 産ｐ３　Ａ３と同様にナノモル濃度にて活性化させる。ここで示すヌクレオチド 間結合の他の分子改変はサルフェート、セレン、Ｃ〜Ｃ８アルキルおよびＣ−Ｃ ８アルコキシによる酸素原子の置換を包含する。

さらに他の具体例において、完全細胞中への浸透増加を示す二重作用の抗ウィル ス２−５Ａ誘導体は、オリゴマーをアダクトに共役結合させて作成される。１つ の好適なアダクトの群は水溶性ビタミン類（限定はしないがビオチン、葉酸、ビ タミン１２もしくはりボフラビンを包含する）を含む。他の好適アダクトは親油 性分子および化学基、たとえばアシルもしくはコレステリル基を包含する。この 種の配合体は、リセプタ媒介エンドサイトシスを行なうことにより、完全細胞に よって内部化される。

外生の代謝上安定な二重作用の２−５Ａ同族体を投与すれば、２−５Ａ欠陥を特 徴とする障害に対する保護、特に動物およびヒトにおけるウィルス感染に対する 保護が増大される。ここで用いるｒ２−５Ａ欠陥」という用語は、真正２−５Ａ の産生および／またはＲＮアーゼＬの２−５Ａ依存性の活性化阻害における生理 学的に連続した変化をもたらす２−５Ａ経路の任意の徴候、状態または阻止を意 味する。２−５Ａ欠陥を特徴とする障害はたとえばウィルス感染、特にＦ（ＴＬ Ｖ感染、より詳細にはＨＩ　Ｖ感染、慢性疲労および池のＨＨＶ−６関連障害、 Ｂ型肝炎および肝炎ウィルス群の他の感染、皮膚Ｔ−細胞リンパ腫および他のＨ ＴＬＶ−１関連障害などを包含する。該当する他の病気は慢性骨髄白血病：急性 白血病；癌；Ｔ−細胞白血病：アルツハイマー氏病：パーキンソン氏病：多発性 硬化症；自己免疫病；並びに手術および伯の外傷誘発の免疫機能不全症を包含す る。２−５Ａ経路の欠陥は、特に慢性ウィルス感染および免疫細胞の欠陥の両者 を特徴とする病気で出現する。

３′　−ヒドロキシル基などにおける２−５Ａ分子の構造的改変は２′−ホスホ ジェステラーゼおよび細胞核に対し顕著に向上した代謝安定性を有する２−５Ａ 同族体を与えると共に、ＲＮアーゼＬを活性化しかつレトロウィルス逆転写酵素 を阻止する能力を維持する。３′−末端ヌクレオチドの置換による天然２−５へ の同様な改変は一層安定な分子をもたらす。代謝上安定な２−５Ａ同族体の持続 する高い細胞内濃度は、その向上した安定性の結果である。さらに５′−末端の 改変は、ＲＮアーゼＬを活性化させる２−５Ａ分子の能力を増大させる。

２−５Ａ同族体の長持続性の薬理学的活性は一層好適な治療率を与える。これは 、代謝上不安定である２−５Ａに比べ投与の頻度を減少させる。投与の頻度を減 少させることは、２−５Ａ経路の欠陥を特徴とする多くの障害における慢性の性 質に鑑み重要である。さらに、細胞中への浸透を容易化させる２−５Ａ誘導体の 成る種の改変は、治療効果を得るよう投与せねばならない誘導体の量を減少させ ることによる治療率をさらに増大させる。

２−５Ａ同族体は、ウィルスにより引起される感染の処置に特に有用である。ウ ィルス感染に伴なう２−５Ａ経路の欠陥は、ｄｓＲＮＡによる２−５Ａシンセタ ーゼの活性化に対するウィルス干渉で引き起されるＩ！路の失活ヲ含む、２−５ Ａシンセターゼ活性化の不存在下に、２−５への産生（したがってＲＮＮアーゼ の活性化）は減少する。本発明によれば、外生の代謝上安定な２−５Ａ同族体を 投与して２−５Ａ経路におけるウィルス由来の欠陥に対処する。真正２−５への ように、２−５へ同族体はウィルスＲＮＡを切断するＲＮＮアーゼを活性化する ことができる。

２−５Ａ同族体は、皮膚Ｔ−細胞リンパ腫を引起すＨＴＬＶ−１；セザニーリン パ腫を引起すＨＴＬＶ−Ｉ　Ｔ　。

ＨＴＬＶ−１１１、および現在では多発性硬化症の病因源であると思われるＨＴ ＬＶ−Ｉ　Ｖのような各種のヒトＴ−細胞白血病ウィルス（総称してｒ）ＩＴＬ ＶＪ）による感染を保護するのに特に有用である。ＨＴＬＶウィルスはそれぞれ レトロウィルスである。ｒＨＩＶ−ＩＪとしても知られるが、ＩＩＴＬＶ−１１ １は後天的免疫不全症候群（「エイズ」）を引起す原因である。これら化合物は さらにＨＩＶ−２、すなわち第２の血清学的に異なるＨＩＶサブタイプを処置す るにも有用であると思われる。以下、ＨＩＶはＨＩＶ−１もしくはＨＩｖ−２の いずれかを意味し、さらに現在または将来知られる他の任意のＨＩＶサブ種類を も意味する。

さらに２−５へ同族体は、ウィルス肝炎を引起す各種の肝炎ウィルスによる感染 の保護にも特に有用である。

Ｂ型肝炎ウィルスは特に、ＤＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼによりＤＮＡゲノム の複製を行なうレトロウィルスおよびウィルスの複合体であると思われる。２− ５Ａ同族体はさらに、たとえばヘルペスウィルスのようなりＮＡゲノムを有する ウィルスによる感染の保護においても特に有用である。

ＨＴＬＶ感染患者、特にＨＩＶ−１感染患者は、血液単核細胞にて異常に低レベ ルの２−５Ａおよび／またはＲＮＮアーゼ活性を示すことが示されている。これ に対し、健康な個人からの血液単核細胞は平均して高い２−５Ａレベルを示し、 ＲＮアーゼし活性も容易に検出することができる。同様に、慢性疲労に悩む個人 の血液単核細胞は低レベルの２−５八を示し、通常の個人から得られた血液単核 細胞で観察される特異的切断生成物とは異なって新規なＲＮアーゼし切断生成物 を出現させる。

一般に原型のレトロウィルスおよびＨｂＶ感染と見なされ、レトロウィルスとＤ ＮＡゲノムウィルスとの両者の性質を有するＨＩＶ−１感染の処置に関し本発明 をここに例示するが、本発明の方法は病因がウィルスである任意の病気の処置に も適用される。

さらに、慢性ウィルス感染はサイトキン不均衡を一般に伴なって、生物不活性の ２−５への蓄積を含む他の発病作用をもたらす。本発明は、生物活性の２−５八 を供給することにより、この不均衡の作用を修正するよう作用する。

本発明の実施に用いられる成る種の化合物の製造については米国特許第４，８５ ９，７６８号および第４，９２４．６２４号各公報に記載されている。本発明の 実施に使用される他の化合物は、これら米国特許公報に記載された一般的な合成 技術にしたがって作成することができる。

本発明の方法に使用する化合物の例は次のコア化合物、その対応する５′モノ− 、ジーおよびトリーホスフェート、並びにこれらの任意の医薬上許容しうる塩を 包含する： ２’　、５’　−Ｃ−Ｃ−Ａおよび ２’　、　５’　−Ａ−Ｃ−Ａ。

さらにＡとＣとの各種の「４量体」組合せ物、限定はしないが次のものを包含す る： ２’　、５’　−Ａ−Ａ−Ｃ−Ａなど。

アルコキシ化合物： ２’　、５’　−Ａ−Ａ−Ａ−３’　−０−メチル・２’　、５’　−Ａ−Ａ− Ａ−３’　−０−ペンチル、２’　、５’　−Ａ−Ａ−Ａ−３’　−０−ヘキシ ル、２’、５’　−Δ−Ａ−Ａ−３’　−〇−ヘプチル。

２’　、５’−Ｅｌ（ＮＡ−Ａ−八、並びに５．６−シクロルベンズイミダジリ ル（２’、５’）５．６−シクロルベンズイミダジリル（２’　、５’　）５． ６−シクロルベンズイミダゾールリボシド、３′−デオキシアデニリルー（２’ 　、５’　）−３′−デオキシアデニリルー（２’　、４’　）−９−（４’− ヒドロキシブチル）アデニン、および３′−デオキシアデニリルー（２’　、５ ’　）−３′−デオキシアデニリル−（２’　、４”）−９−（４’−ヒドロキ シエトキシ）アデニン。

最後に挙げた２種の化合物はコルディセビンヌクレオチドとアデニンとの間のエ ーテル結合を特徴とし、総合してｒｃ−ｃ−エーテル−Ａ」と称する群から得ら ｉする。

相応にコルディセビン残基がアデノシンにより置換される場合、化合物は総合し てｒＡ−Ａ−エーテル−Ａ」と称する。

２−５Ａ誘導体によるＨＢＶ複製の抑制Ｂ型肝炎ウィルスに対する数種の２−５ Ａ誘導体の抗ウィルス活性を試験した。慢性的にＨＢＶを生ずるヒト肝臓細胞「 アクス等、プロシーディンゲス・オブ・ザ・ナショナル・アカデーミー・オブ・ サイエンス、ＵＳＡ。

第８４巻、第４６４１〜４６４５頁（１９８７）］を２４穴組織培養プレートに シーディングし、融合するまで生長させた。次いで２−５Ａ誘導体を連続して９ 日間にわたり２０μＭにて添加した。培地を毎日交換した。消費した培地を０１ ．３日、６１ＥＴおよび９日間の後に細胞外）（ＢＶ　ＤＮＡにつき分析した。

処理した細胞を９日間の処理の後に２４時間溶解させ、細胞内ゲノムＤＮＡ型に つき分析した。この手法についてはコルバおよびミルマンにより記されている［ アンチウィラル・リサーチ、第２１７巻、第２１７頁（１９９１）］。以下、分 析パラメータを一層詳細に説明する。

細胞内および細胞外の両）ＩＢＶ　ＤＮＡを当業界で日常的である手順により分 析して、（１）化合物の効能を証明すると共に、（２）ウィルス複製型のパター ンの検査から化合物のＨＢＶ複製経路における標的部位の可能なデータを与えた 。処理期間に際し培地を毎日交換して、積を防止すると共に、（２）個々に２４ 時間間隔にて１４ＢＶピリオン産生につき分析してピリオン産生に対する作用を 定量的に比較した。

プロットバイブリド化技術（サウザンおよびスロットプロット）および（ｐ　３ ２］−標識１−ＩＢＶ特異性プローブを用いてＨＢＶ　ＤＮＡの分析を行なった 。ＨＢＶ　ＤＮＡレベルを、ニトロセルロース膜に施された既知量のＨＢＶ　Ｄ ＮＡ標準と比較して測定した（ゲルもしくはスロットプロット）。ニトロセルロ ース膜から直接に得られたバイブリド化プローブの放射能減衰を測定するＡＭＢ ＩＳ　βスキャナーを定量分析に用いた。多重分析により得られた標準曲線を用 いて、βスキャナーにより得られたｃｐｍ測定値を標的ＤＮＡの相対レベルと相 関させた。培地中に放出されたＨＢＶピリオンＤＮＡのレベルをスロットプロッ トハイブリッド化法により分析した。次いでＨＢＶ　ＤＮＡレベルを０８目にお けるレベルと比較して、薬剤処置の効果を決定した。

？Ｊｊ　型中間体とエビソームモノマーとのレベルをＨＢＶ複製の相対レベルの 指針として使用した。積算したＨＢＶ　ＤＮＡを用いて、各レインにおけるＤＮ Ａの相対量を基準化した。何故なら、この種のＨＢＶ　ＤＮＡのレベルは細胞基 準にて一定に留まるからである。ＨＢ　ＶＤＮＡ複製の抑制は、積算ＨＢＶ　Ｄ ＮＡのレベルの変化なしに複製中間体の損失により示される。この分析において 、次の２−５へ誘導体は抗−〇　Ｂ　Ｖ活性を示した：キシロＡ　５Ａ−Ａ−エ ーテル−Δ、ＥＨＮＡ−ＡＡ。

ＣＡＣ１ＡＣＣΔおよびｄｄ　ベンズ。

これら抑制をさらに検討するため、２−５Ａ誘導体のうち５種を希釈して２０μ Ｍの仲に２μＭおよび６μＭにて試験した。５種の２−５Ａ誘導体は２０μＭに て顕著な抗ＨＢＶ抑制力を示し、５種のうち３種（Ａ−Ａ−エーテル−八、ｄｄ −ベンズおよびＣΔＣ）も２μＭで極めて活性であった。これらの結果は、各種 の２−５Ａ誘導体がＨＢＶに対し活性であることを示す。本発明により、これら および他の２−５Ａ誘導体の抗ＨＢＶはＲＮアーゼＬを活性化させる２−５Ａ誘 導体の能力を増大させる５′　−末端改変を加えて増大されると結論しつる。

さらに本発明によれば、抗ＨＢＶ活性は前記５′改変および５′未改変の２−５ Ａ誘導体をたとえばコレステロール、パルミテート、フオレートなどの親油性ア ダクトと共役結合させてさらに増大されると結論しうる。

抗−〇ＢＶ活性につき測定した５種の２−５Ａ誘導体の治療率を決定するため、 その毒性を慣用のニュートラルレッド分析で測定した。培養におけるこれら化合 物の毒性を決定する手法は当業界にて日常的であり、次のように要約することが できる。２．２．１５細胞を９６穴平底面組織培養プレートにて融合するまで成 長させ、穴１個当り０．２ＥＴの培地にて化合物で処理した。各化合物の４種の 濃度を、それぞれ３反復の培養物で分析した。未処理の比較培養物を各９６穴プ レートに維持した。

各９６穴プレートにて細胞を含まない穴を用いて光散乱につき補正した。毒性を ニュートラルレッド染料の吸収抑制により測定し、これは未処理細胞と対比して ５１０ナノメータにおける吸光度により処置の９０後の２４時間にて測定した［ フィンター等、ジャーナル番メジカル・ケミストリー、第５巻、第４１９頁（１ ９６９）］。

抗ウつルス活性につき試験した最高濃度（２０μＭ）にて上記２−５Ａ誘導体に は毒性が観察されなかった。

試験した５種の２−５Ａ誘導体のうち４種は有効な抗ウィルス投与量の９倍（１ ８０ｕＭ）にて毒性を示さなかった。第５の誘導体ｄｄベンズは１８０μＭにて 低い毒性を示した。

さらに前記２−５Δ誘導体によるＨ　Ｂ　Ｖ抑制の特異性につき検討するため、 その分解生成物を可能な抗ＨＢＶ活性につき試験した。ベンズイミダゾール、ジ ベンズイミダゾール　、アデノシン、コルジセピンもしくは９−β−Ｄ−キシロ −フラノシルアデニンについては抗ＨＢＶ活性が見られなかった。これらの結果 は、２−５Ａ誘導体が未感染細胞に対し毒性でない濃度にてＨＢ　Ｖの複製を特 異的に抑制すると共に、この抑制が２−５Ａ誘導体に基づくものであってその代 謝物に起因しないことをＲＮアーゼＬは、２−５Ａシンセターゼ／ＲＮアーゼＬ 抗ウイルス防御経路の重要な機能的酵素である。この独特な２−５Ａ依存性エン ドリボヌクレアーゼの２−５Ａ誘導体による活性化およびその後のウィルスＲＮ Ａの加水分解は、ウィルス複製の抑制および細胞成長の調整に重要である。イン ターフェロンの抗レトロウイルス特性の幾つかは２−５Ａシンセターゼ／ＲＮア ーゼし経路の活性化により媒介される。２−５Ａ誘導体によるＲＮＮアーゼの直 接的な活性化は、抗レトロウイルス状態を確立するインターフェロンの要求を回 避する。３′−ヒドロキシ基および２’、５’　−ヌクレオチド間結合における ２−５Ａ分子の改変は、代謝的に安定（したがってホスホジェステラーゼおよび ホスファターゼによる分解に対し耐性）かつ生物学上活性（ＲＮＮアーゼを活性 化させうる）である２−５Ａ誘導体をもたらした。合成手順の操作は、（ｉ）ヌ クレオ分解に対する増大した代謝安定性を示し、（ｉ　ｉ）ホスファターゼ耐性 であり、（ｉ　ｉ　１）ＲＮＮアーゼを活性化するための５′　−ホスホリル化 を必要とせず、かつ（ｉｖ）完全細胞中に移行させうる２−５Ａ誘導体の設計お よび合成を可能にする。

キラル性を２−５Ａ分子の２’、５’　−ホスホジエステル結合に、ＲＮアーゼ し活性化と分子レベルにおける抑制とを区別する手段として導入した。２−５Ａ のジアステレオマーホスホロチオエート誘導体の純粋な２量体および３量体を先 ず最初に酵素的に合成した。極く最近、２種の２量体、４種の３量体および８種 の４量体ジアステレオマーにつき化学的合成、精製および同定がホスホトリエス テルおよびホスホルアミダイト法により達成されている。これらキラル分子は顕 著な生物学的活性を示し、ＲＮＮアーゼを活性化させるには３個のアデニレート 残基と２個の５′−末端ホスフェートとが必要とされるという定説を変化させた 。ＲＮＮアーゼを活性化しえない真正２−５Ａココア子と対比し、４種の２’、 ５’−ホスホロチオエート３量体コアのうち３種（ＲｐＲｐ。

５ｐＲｐおよびＲ，ｐＳｐ）は、２’、５’　−ホスホロチオエート５′　−モ ノホスフェート（ｐＲｐＲｐＳｐＲｐＳｐおよびｐＳｐＲｐ）（ｉｏ’Ｍ）と同 様にＲＮアーゼしに結合すると共に活性化させる（］０’Ｍ）。

これらインビトロの検討をウィルス感染した細胞でのインビボモデルに拡張しつ るかどうかを決定するため、２’、５’　−ホスホロチオエート４量体５′−モ ノホスフェートをヘラ細胞の細胞質に微小注入し、次いで細胞に■Ｓｖを侵蝕さ せた。２’、５’　−ホスホロチオエート４量体５′−モノホスフェート（ｐＲ ｐＲｐＲｐ、ｐＳｐＲｐＲｐおよびｐＲｐＳｐＳｐ）は全てＲＮＮアーゼを活性 化させた。しかしながら、ｐＳｌ）Ｓｔ）Ｓｐ異性体（１０’Ｍ程度に高い濃度 ）は活性化させなかった。

２−５八と同時にｐｓｐｓｐｓｐ抑制剤を微小注入すると、ＶＳＶｔＩ製に対す る保護が除かれた。Ｒ１−およびホスホロチオエートは、ＨＩＶ−Ｉ　ＲＴの抑 制によりＨＩＶ−１感染から標的細胞を保護する（Ｈ９／ＨＴＬＶ−１１１Ｂ培 養上澄液からのＨＩＶ−１ピリオンのトリトンＸ−１００活性化溶解物で測定） 。ＨＩ　Ｖ　−１μＭにて抑制されなかった。２−５八と対照的に、２′。

５′−ホスホロチオエート４量体５′−モノホスフェート誘導体はＨＩＶ−Ｉ　 ＲＴ活性の極めて有効な抑制剤である。ＨＩＶ−１感染細胞溶解物におけるＨ　 Ｉ　Ｖ　−１ＲＴの最も効果的な抑制剤はｒ”３Ａ３αＳであって、５０％抑制 が０．５μＭにて観察された。ＡＭＰＳは２００μＭまでＨＩＶ−Ｉ　ＲＴを抑 制せず、このことは分解生成物が２’　、５’　−ホスホロチオエートで観察さ れる抑制の原因でないことを示゛唆する。

１！８・３は、ＵＶ架橋試験に ｄ　（Ｔ）、６およびｔ　ＲＮＡ て示されるように、均質的に純粋な組換ｐ６６　ＨＩＶ−Ｉ　ＲＴの速度論的に 重要なプライマー結合部位に対し特異的に結合する。ｐ６Ｇ　ＲＴに対するオリ ゴｄ（Ｔ）　の結合はｄＮＴＰにより影響を受けない。競合ｐ３Ａ３αＳは、− 次指数的にオリゴｄ　（Ｔ）　、　−ｐ６６／ＲＴ複合体の形成を抑制する。２ −５念Ａおよび２−５Ａ誘導体によるＨＩＶ−Ｉ　ＲＴの抑制はプライマー結合 部位にて生ずる。平衡結合条件下において、２′。

５’−ｐ３Ａ、は−次結合速度を゛示し、その１量２競合は５５μＭに有する（ １（、＝３１　Ｘ　１０’Ｍ）。２′。

２’　、５’　−Ａ　コア、２’、５’　−ｐＡ　、３’。

５′　−八　コア、３’、５’　−ｐＡ　、３’、５’　−ｐ３Ａ３およびＡＴ Ｐは、ｄ（Ｔ）Ｈに対するＨＩＶ−ＩＲＴの結合を抑制しない。

２’、５’　−コルジセピン３量体コアおよび５′　−モノホスフェート（１μ Ｍ）（Ｔ細飽すセプタ分子ＣＤ３に対し特異性の抗体標的リポソームに混入した 場合）はＨＩＶ−１１製の９０％を抑制した［　Ｗ、Ｅ、Ｇ、ミ！ラー、Ｂ、Ｆ ：、ワイラー、Ｒ，チャルバラ、Ｗ、プノアイデラー、Ｌ、レーザーマン、Ｒ， Ｗ、ソボール、Ｒ０照］。トッド−プロットおよびゲル阻止分析は、２′。

５′−コルジセピン３量体コアおよび５′−モノホスフＬマｓ、３ エートがＨＩＶ−Ｉ　ＲＴに対するｔ　ＲＮＡ　の結合を妨げることを示した［ ミュラー等の第３図参照］。

上記刊行物を参考のため、ここに引用する。ｐ　ＣａはＲＮＮアーゼ活性を刺激 せず、細胞ＲＮＡもしくは蛋白の量に影響を示さなかった。１０μＭの濃度にて 、細胞ＤＮＡポリメラーゼα、βおよびγは殆どＣ３もしくはｐＣ３（Ｃ＝コル ジセピン）に対し非感受性であった。

今回初めて、ＨＩＶ−１−感染細胞に対し二重の作用を有する抗レトロウイルス 分子（２−５Δ誘導体）が得られた：　（ｉ）これらは２−５Ａシンセターゼ／ ＲＮアーゼＬ抗レトロウイルス系を活性化させると共に、（＋ｉ）Ｈ［Ｖ−ＩＲ Ｔを抑制する。２’、５’　−ホスホロチオエートコアおよびその５′−モノホ スフェートを用いて、急性感染を予防することができ（ＨＩ　Ｖ−ＩＲＴの抑制 による）、同時にＲＮアーゼＬの活性化によりＨＩＶ−１ｍＲＮＡを分解するこ とができる。

増大した細胞吸収を有する２’、５’　−オリゴアデニレート誘導体の配合体 完全細胞中への２−５Ａ誘導体の内部化を容易化するため、生物活性２−５Ａ誘 導体を水溶性ビタミン（葉酸、ビオチン、リボフラビンもしくはビタミンＢ１２ ）に対し或いは親油性の化学基に対し共役結合させる。この技術を用いることに より、２−５Ａ誘導体を膜損傷なしに完全細胞へ供給することができる。この手 段は、（ｉ）生物活性の代謝上安定な誘導体、たとえば２’　、５’　−Ｃ１， ２’　、５’−ホスホロチオエート（米国特許第４゜９２４．６２４号による） および他の代謝上安定な誘導体（たとえば米国特許第４．８５９．７６８号に開 示）の合成を含む。上記米国特許の開示に従う２−５Ａ誘導体が設計され、合成 され、ＲＮアーゼＬのレベルにおけるその抗レトロウイルス作用およびＲＴの抑 制につき試験された。２’、５’　−オリゴヌクレオチドはホスホトリエステル 法およびホスホルアミダイト法によりそれぞれｍｇ量およびｇｉｆｔにて多工程 の化学合成により酵素的に作成することができる。糖、塩基およびホスフェート の保護に適する封鎖基の正確な選択は収率、精製の容易さ、およびクロマトグラ フ特性を決定する。

生物学上活性かつ代謝上安定な２−５Ａ誘導体の有利な促進された供給は、ＨＩ Ｖ−１？ｊｊ製の抑制および効果的な薬物供給のメカニズム研究を続行する鍵で ある。完全細胞中への２−５Ａ誘導体の供給促進につき幾つかの対策を用いるこ とができる。

２’、５’　−オリゴアデニし一ト親油性配合体供給促進に関する第１の方法は 、分子の２’　、３’　−末端に対する親油性基（たとえばアシル基もしくはコ レステリル基）の共有結合を含む。たとえば、２’、５’−コルジセピン３量体 コアをバルミトイル（式１１１）もしくはコレステリルホルミル（式ＩＶ）エス テル結合を２′−末端ヒドロキシル基に位置せしめて合成すると共に精製するこ とができる。

これらエステル化された化合物＋ｉ、培養１こ際しＨＩ　Ｖ−１感染Ｈ９細胞に おける）ｌ　Ｉ　Ｖ　−１？Ｊｊ製を抑制１するこ［式中、ｍは０、■、２もし くは３であり、ｎは１〜８の整数であり、 Ｒは独立して水素およびヒドロキシルよりなる群から選択され、 ＲはＣ０ＯＨもしくはＮ　Ｈ２であり、Ｒ２は独立して硫黄もしくは酸素であり 、Ｒ３は独立して硫黄もしくは酸素であり、又は１〜１７の整数である］ の共役性化合物をジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）およびジクロルメタンの 存在下にコレステリルクロロホルメートと反応させて合成することができる。精 製はカラムクロマトグラフィーにより行なわれる。

好ましくは、必ずしも全てのＲ基をヒドロキシルとせず、すなわち少なくとも１ 個のＲは水素である。好ましくはｎは１〜３、特に好ましくは１もしくは２であ る。

５′−末端ホスホニル基のＲ２は好ましくは硫黄である。

最後に、Ｘの数値は好ましくは１〜８、特に好ましくは１〜４である。式Ｖによ る共役結合する２−５Ａ誘導体は、適する５′−ホスホリル化２’、５’　−オ リゴアデニレート、２’、５’　−オリゴコルジセピンもしくは混合２’、５’ 　−オリゴ（アデニレート／コルジセピン）オリゴマーを官能化させて作成する ことができ、たとえば米国特許第４．４６４．３５９号もしくは第４，８５９． ７６８号のいずれかにしたがって作成することができる。このオリゴマーは、そ の２′−末端ヌクレオチドをアルキルリンカ−（ＣＨ２）、−Ｒ，（ここでＸお よびＲ１は上記の意味を有する）に結合させて官能化される。

ホスホジエステルヌクレオチド間結合を有するオリゴマーの他に、式Ｖの共役結 合性２−５Ａ誘導体もアルキルリンカ−を２’、５’　−ホスホロチオエートオ リゴヌクレオチドの２′−末端ヌクレオチドに結合させて作成しうることを了解 すべきである。完全に分割されたエナンチオマーを含め２’、５’−ホスホロチ オエート（ホスホロチオエートは光学活性である）の製造については米国特許第 ４．９２４．６２４号公報に開示されている。

米国特許第４．９２４，６２６号および第４．８５９゜７６８号の合成技術を組 合せることにより、混合２′。

５′−（ホスホジエステル／ホスホロチオエート）−オリゴアデニレートを製造 しうろことが了解されよう。

分子における全ヌクレオチド間結合のＲ２基が酸素を含む場合、すなわち結合が ホスホジエステル結合からなる場合は、対応の非ホスホリル化コア化合物をｒ’ ｏｃ　ｔ３と反応させることにより５′−モノホスフェートが容易に作成される 。少なくとも１個のヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合からなる場合 （すなわちＲ２＝硫黄）、この種の処理はホスホロチオエートヌクレオチド間結 合からの硫黄の除去をもたらして２’　、５’　−オリゴアデニレートを生成さ せる。すなわち、ホスホロチオエート結合を有するコアオリゴマーの５′−モノ ホスフェートは、５′−末端ヌクレオチドにおけるモノメトキシトリチル封鎖基 が除去されている対応の完全保護されたコアオリゴマーから作成せねばならない 。この手順は米国特許第４．９２４．６２４号、第２６〜３１欄に詳細に記載さ れている。

２−５Ａ誘導体／アシル配合体は、共役結合性化合物を標準技術により塩化アシ ルと反応させて合成することができる。或いは、２’　、５’　−オリゴマーは ２′　−末端ヒドロキシル基に自エステル化されるアシル基もしくはコレステリ ルホルミル基を用いて直接に合成することもできる。この種の１つの方法を限定 はしないが反応式１の化合物１２および上ユからなるコレステロール共役および アシル化コルジセピン３量体化合物の製造にっき反応式１ 反応式１（続き） 反応式１（続き） 反応式１（続き） 反応式１によれば、多工程の化学合成は５′　−〇−ジメトキシトリチル＝Ｎ６ −ｐ−ニトロフェニルエトキシトリチル基を切断すると共に、ＤＢＵにより処理 してｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニル基を同時に切断し、遊離のコルジセ ピン３量体配合物１↓を得る。この方法の利点は、コレステロールとスクシネー トスペーサとの間のエステル機能が全ての化学処理の際に生き残るという事実か ら見ることができる。

完全に類似した方法で、コレステリルカーボネート４を同し順序の工程に従い反 応させてコルジセピン３量体さらに完全に同様な方法で、オリゴヌクレオチドの ２′−末端にアシル残基を有するコルジセピン３徹体配合物１３も作成される。

本発明による親油性配合体は、その親油性のため拡散により細胞に入り込む能力 を有する。これらは、真正２５Ａと実質的に同じ生物学的活性を以て完全細胞中 に導入することができる。細胞内に入ると、配合体は加水分解されて２−５Ａ誘 導体を放出する。

２’、５’　−オリゴアデニレート・ビタミン配合体オリゴヌクレオチド供給促 進の第２の方法は水溶性ビタミン（たとえばビオチン、葉酸、リボフラビンもし くはビタミンＢ１２）に対する２−５Δ誘導体の共有結合を含む。水溶性ビタミ ンに対する２−５Δ誘導体の共有結合は、実質的に完全な生物学的活性を保持し ながらリセプタ媒体のエンドサイトシスを行なうことにより、完全細胞中へ活性 分子を同時供給する方法を与える。

この原理を示す手段として、培養時のＨ９細胞におけるフオレート（Ｉｏｌｌｌ ｅ）に共有結合したフルオレスセインー牛血清アルブミン（ＢＳＡ）の内部化を 行なった（第２Ａ図および第２Ｂ図）。比較実験として、フルオレスセイン−Ｂ ＳＡと共に５時間培養したがフオレートに結合しなかったＨ９細胞は採取されな かった（第２Ｃ図および第２Ｄ図）。これらの結果はＨ９細胞におけるフォレー トリセプタの存在を示し、これらリセプタを２−５Ａ誘導体の標的供給に使用す ることができる。フォレートリセプタはフオレート結合分子に結合して５時間で 細胞の８０％中へ吸収することができる。

２−５Ａ誘導体を水溶性ビタミンに共有結合させて、膜の損傷なしに完全細胞中 への掘性２−５八分子の供給を促進することができる。水溶性ビタミンを２−５ Ａ分子の２’、３’　−末端に共有結合させて、完全細胞中へ吸収させるための リセブタ媒介エンドサイトシスを行なわせる。ビオチン、葉酸、リボフラビンお よびビタミンＢ１２に共有結合した極性分子を細胞質中に非破壊的に供給し、次 いでリセプタ媒介エンドサイトシスを介し効率的に吸収させることが充分示され ている。このようにして、他の確立された方法（たとえば微小注入、エレクトロ ポレーション、音波処理、洗剤透過処理など）から生ずる膜損傷を、天然ビタミ ン・エンドサイトシス経路を用いて吸収を行なうことにより回避することができ る。

ビタミン吸収は合理的速度にて全分裂細胞で生ずる。ビタミン配合体の既知の吸 収効率に基づき、約１０’Ｍの２−５　Ａ／葉葉酸会合体細胞内濃度が得られる と思われる。これら濃度は、ＲＮアーゼＬを活性化すると共にＨＩＶ−Ｉ　ＲＴ を抑制するのに充分である。同様な細胞内濃度が、同様な個数のフオレート、ビ オチンおよびビタミンＢ１２リセプタに基づいて２−５　Ａ／ビオチンおよび２ −５Ａ／ビタミンＢ１２配合体につき予測される。

２−５Ａビタ辷４湛１□（−釦俸 ２−５Ａもしくは生物活性２−５Ａ誘導体のビタミンＢ１２共有結合は、先ず最 初にビタミンＢ１２を緩和な酸加水分解（０，４Ｍ　ＨＣＩ、室温にて７２時間 ）によりモノ酸誘導体まで変換させることにより作成される。たとえば式Ｖ　（ Ｒ＝ＮＨ２）による化合物のような２−５Ａ共役性化合物を、たとえば１−エチ ル−３−（ジメチルアミノ−プロピル）−カルボジイミドＨＣＩ　（ＥＤＡＣ） のような適するカップリン剤を用いてビタミンＢ１２のカルボキシル基と反応さ せる。２−５Ａ／ビタミンＢ１２配合体をセファデックスＧ−２５におけるクロ マトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣのいずれかにより精製する。

特性化は、２−５ＡおよびビタミンＢ１２に関し報告されたモル吸光係数に基づ く。

２−５　Ａ／葉葉酸会合 体　−５Ａ／葉葉酸会合体、たとえば式Ｖ　（Ｒ，＝ＮＨ２）による化合物のよ うな共役性化合物をたとえばＥＤＡＣのような適するカップリング剤と反応させ 、次いでカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーもしくはＨＰＬＣ により精製して合成される。

２−５　Ａ／ビオチン配会合 体オチニル化２−５Ａ配合体は、市販のＮ−ヒドロキシスフシミジルビオチンを 式Ｖの化合物（Ｒ＝ＮＨ２）と反応させ、次いで２−５Ａ／葉酸配合体につき説 明したように精製して合成することができる。

３′　−末端非環式ヌクレオシドを有する２’、５’　−コルジセピン同族体の 作成式Ｉによる３量体「コア」コルジセピン同族体、すなわちｍが０であり、ｎ が１である化合物は反応式２にしたがって作成することができ、この反応式にお いて「ｂ２」はベンゾイルであり、ｒＭｅＯＴｒＪはモノメトキシトリチルであ り、ｒｎｐｅＪは２−（４−ニトロフェニル）エチルであり、ｒｎｐｅｏｃＪは ［２−（４−二トロフェニル）−エトキシ］カルボニルである。例示の目的で、 これら化合物をアンモニウム塩として作成するが、本発明はこれのみに限定され ないと了解すべきである。４種の化合物１−Ｅｊ、　ｉ−９、？−９，および影 １の製造に反応式２ ｂｚ＝ベンゾイル ＭｅＯＴｒ＝モノメトキシトリチキ シｐｅ＝２−（４−ニトロフェニル）エチルｎｐｅｏｃ＝　［２−（４−ニトロ フェニル）エトキシ］カルボニル ジヌクレオチドモノホスホジエステル９をチャルバラ等［エルベチ力・ヒミヵ・ アクタ、第７０巻、第２０２８頁（１９８７）］の方法に従い３′−デオキシ− ５′−〇−（モノメトキシトリチル）−Ｎ’　−［２−（４−ニトロフェニル） エトキンカルボニル］アデノシン（４）から作成した。チャルバラ等に従って作 成しうる化合物」を採取すると共に、前記チャルバラ等の方法に従いホスフェー ト基位置に２．５−ジクロルフェニルおよび２−（４−ニトロフェニル）エチル 基を持っ２・−ホスホトリエステル旦まで変換させた（反応式ｌ）。化合物旦か ら２．５−ジクロルフェニル基を４−二トロベンズアルデヒドオキシムで切断し て、ジエステル６を得た。

他方、５′−〇−モノメトキシトリチル基を酸により除すイソプロビルベンゼン スルホニルおよび１−メチル−ＬＨ−イミダゾールの存在下に縮合させて、精製 および乾燥の後に収率８８％にて２阻体ホスホトリエステル８を得た。再び、こ の２石体ブロックから２．５−ジクロルフェニル基をオキシメート法により切断 して、対応のジヌクレオチドモノホスホジエステル９を得た。

３量体１４−１７を合成するため、上記の２量体ホスホジエステル９を塩化２． ４．６−ドリイソプロピルベンゼンスルホニルおよび１−メチル−ＩＨ−イミダ ゾールの存在下に適当に封鎖された非環式ヌクレオシド１０〜Ｕと縮合させて７ ０〜７５％の収率を得た。非環式ヌクレオシド−し」−〜−Ｖ」−はチチンス力 カヤ等の方法にしたがッテ作成することができる［　Ｂｉｏｏｒｑ、　Ｋｈｉｍ （ＵＳＳＰＩ　、第５巻、第１０５９頁（１９７９）およびミカイロフ等［ｌｘ ｖ、　Ａｋｉｄ、　Ｎ＊ｕｋ、　Ｓｅｒ、にｈｉｍ、第２５８２頁（１９７４） ］乾燥ピリジン（５Ｘ１０ｍｌ）と共に蒸発させ、最後にピリジン（１０ｍｌ） に溶解させた。次いで０．４６ｍ１　（６ミリモル）の１−メチル−ＩＨ−イミ ダゾールと０．６０６ｇ　（２ミリモル）の塩化２．４．６−トリイソプロビル ベンゼンスルホニルとを順次に添加した。この混合物を室温にて２０時間撹拌し 、次いでＣＨＣＩ３（１００ｍｌ）で希釈し、Ｈ２０（２×５０　ｍ　ｌ　）で 洗浄した。有機相を脱水すると共に蒸発させ、トルエン（３ｘ２０ｍｌ）と共に 蒸発させた後、残留物をＣＣ（シリカゲル、１．ＯＸ２．５　ｃｍ％ＣＨＣ１３ ／ＭｅＯ色フオームとして８５〜９０％収率で得た。これに応じ保護された３量 体１５−１８　（０，０２８ｇ、１５μモル）の溶液に乾燥ピリジン（５ｍｌ） における０、５ＭのＤＢＵを添加した。この混合物を室温にて２０時間撹拌し、 ピリジン（２，５ｍ１）中でＩＭＡｃＯＨにより中和し、次いで蒸発させた。残 留物を濃ＮＨ３（１５ｍｌ）と共に撹拌し、４８時間にわたり撹拌した後に溶剤 を減圧除去し、残留物を８０％Δｃ　ＯＥ（／　Ｈ２０（４ｍ１）で室温にて２ ４時間にわたり処理することにより脱トリチル化した。蒸発の後、残留物を１１ ．、Ｏと共に数回蒸発させ、Ｈ２Ｏ中に溶解し、次いでＤＥΔＥ　Ａ−２５セフ アデツクス（登録商標）ツノラム（６０Ｘ１ｃｍ）に施すと共に、線状濃度勾配 ０．００１〜０．３Ｍ（Ｅ【　ＮＨ）およびＨＣＯ３（ＴＢＫ）ｖＩ衝液（ｐＨ ７、５）で溶出させた。生成物フラクションを蒸発させ、■１２０と共に数回に わたり蒸発させ、さらにペーパークロマトグラフ４−　（ｉ−ＰｒＯＨ／濃ＮＨ ３／Ｈ２０；　６　：１；３）により精製した。生成物バンドを切除し、Ｈ２Ｏ で溶出させ、さらに凍結乾燥して３′−デオキシアデニリルー（２’　、５’　 ）−３’　−デオキシアデニリルー（２’　、２”）−９−（２’−ヒドロキシ エチル）アデニン（ジアンモニウム塩；１８）、３’　−デオキシアデニリルー （２’　、５”）−３’　−デオキシアデニリルー（２’　、３’　）−９−（ ３’−ヒドロキシプロピル）アデニン（ジアンモニウム塩；１９）、３’　−デ オキシアデニリルー（２’　、５’　”）−３’　−デオキシアデニリル−（２ ’　、４”）−９−（４’−ヒドロキシブチル）アデニン（ジアンモニウム塩： ２０）および３′　−デオキシアデニリルー（２’　、５’　）−３−デオキシ アデニリルー（２’　、２”）−９−［（２’　−ヒドロキシエトキシ）メチル ］アデニン（ジアンモニウム塩；２１）をそれぞれ７５〜８５％収率て無色粉末 として得た。全生成物の純度をＴＬＣ，ＵＶおよびＨ’　−ＮＭＲスペクトルに より検査した。

３量体を全て順次に乾燥ピリジンにおける０、５ＭＤＢＵ　（１，８−ジアザビ シクロ［５，４，０１ウンデセ−７−エン）を室温で２０時間にわたり用いるこ とにより封鎖解除して２−（４−ニトロフェニル）エチル基を離脱させ、ＮＨ３ によりジオキサン中で処理してベンゾイル基を除去し、最後に酸処理にかけて５ ’　−０−モノメトキシトリチル基を封鎖解除することにより対応の完全封鎖解 除された３量体１８〜２１を得、これらをＤＥＡＥセファデックスカラムクロマ トグラフィーおよびペーパークロマトグラフィーにより精製した。これら３ｉｔ 体をＴＬＣ，ＵＶ、　Ｈｐｔ、ｃおよびトｒ’　ＮＭＲスペクトルにより特性化 した（データ示さず）。

て４量体（Ｃ−Ｃ−Ｃ−エーテル−Ａ）を作成することができ、トリヌクレオチ ドは適当に封鎖した適する非ｆｆ１式ヌクレオチドと上記の如く縮合させたもの である。同様に、この３′−非環式コルジセピンオリゴマーの高級オリゴマーを 、適当な高級オリゴヌクレオチドを選択して非環式ヌクレオシドと縮合させるこ とにより作成しうることも明らかである。

非ホスホリル化コア分子の５′−モノホスフェートは、完全封鎖された３　！Ｒ 体（たとえば化合物１４〜１７）から酸処理での脱トリチル化に続く塩化ジ−ｐ −ニトロフェニルエチルホスホリルとの反応により作成することができる。さら に封鎖解除およびクロマトグラフィーにより５′−モノホスフェートオリゴマー が単離される。５′−モノホスホリル化法は米国特許第４，８５９．７６８号の 実施例６の方法にしたがって行なうことができる。

コア分子の５′　−ジホスフェートおよび５′　−トリホスフェートは上記米国 特許の方法に従い作成することができる。要するに、これらは５ｍｌのジメチル ホルムアミドに溶解された０、５ｍＭのトリブチルアンモニウムピロホスフェー トを１ｍｌのジメチルホルムアミドにおける無水トリブチルアンモニウム塩とし ての０．１ｍＭのモノホスホリル化コアおよび０．５ｍＭの１．１’　−カルボ ニルジイミダゾールに添加して作成することができる。室温にて２０時間の後、 各反応体を５ｍｌのメタノールで処理し、蒸発乾固させ、次いで２Ｘ２０ｃｍの ＤＥＡＥセルロースカラムにてクロマトグラフにかける。

５′−ジーおよびトリーホスフェートが線状濃度勾配（３リツトルにおける０〜 ０．４Ｍ％ｐＨ７，５）のトリエチルアンモニウムビカーボネートによりホード 等、ジャーナル・アメリカン・ケミカル・ソサエティ、第８７巻、第１７８５〜 １７８８頁（１９６５）の方法で単離される。次いで５′　−ジホスフェートお よび５′−トリホスフェートをＤＥＡＥ−セファデックス（登録商標）Ａ２５お よびセファデックス（登録商標）により精製することができる。

２−５Ａ同族体および配合体は米国特許第４，９２４゜６２４号、第４．８５９ ．７６８号および国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ８５１０３６３４号（国際特許公開 Ｗ０８９１０３６８３号）に記載された方法に従ってこれらに推奨された投与量 で投与することができる。すなわち、医薬用途には２’　、５’　−オリゴアデ ニレート同族体を医薬上許容しうるキャリヤに混入することができる。医薬組成 物を作成するためのこの種のキャリヤは有機もしくは無機の固体もしくは液体と することができる。適する液体キャリヤは水、並びにたとえばエタノール、ベン ジルアルコールおよびポリ（エチレングリコール）のようなアルコールを包含す る。注射製剤のための好適な液体キャリヤは水、塩水溶液、デキストロース溶液 およびグリコール溶液、たとえばプロピレングリコール水溶液もしくはポリ（エ チレングリコール）水溶液を包含する。

組成物の性質は粘度向上剤、表面活性剤、ｐｔ−を改変剤、保存料、甘味料、安 定性向上剤、着色料、懸濁剤、顆粒化剤、被覆剤、崩壊改質剤、噴射剤、乳化剤 および保湿剤のような種々の性質を有する１種もしくはそれ以上のアジュバント を添加して向上させることができる。得られる組成物は溶液、懸濁液、錠剤、カ プセル、軟膏、エリキシル、注射用組成物などの形態とすることができる。

投与量は感染もしくは病気の程度、並びに患者の体格および体重に依存する。投 与量は病気の性質、並びに患者の体格および体重に応じて広範囲に変化すること ができる。■具体例によれば、化合物は水、燐酸塩緩衝塩水もしくは他の適する 液体１ｍｌ当り０，１〜１００ｍｇの溶液として作成され、或いは０．０１〜１ ｇの活性化合物を含有する錠剤として作成することもできる。

・　これら化合物は水溶性の塩として投与することもできる。医薬上許容しうる 水溶性塩はたとえば活性化合物のナトリウム塩、カリウム塩およびアンモニウム 塩を包含する。これらは水もしくは塩水溶液に容易に溶解される。

組成物は、たとえば糖もしくは蛋白質のような他の材料を含有して浸透圧バラン スを維持することができる。

２’、５’−オリゴアデニレート同族体は、２−５Ａ経路の欠陥を特徴とする各 種の症状を有する或いはその病気が疑わしい或いは病気の危険を有する動物もし くは人間に対し約０．１ｍｇ〜約１ｇの投与量にて投与することができる。１日 の全投与量はたとえば約ｏ、ｏｏｔ〜約１ｇの範囲で変化しうるが、それより少 いまたは多い量も投与することができる。好適な１１：１投与量は約０゜０１〜 約０．１ｇの活性成分である。これら化合物は、限定はしないが静脈注射、腹腔 内もしくは筋肉内注射および経口投与を包含する任意各種のルートにより投与す ることができる。この種の投与を行なう技術は日常的であり、医療業界にて公知 である。投与は１日数回の頻度で或いは１週間ごとの少頻度で行なうことができ る。特にＨＩＶを処置するための静脈注射の場合、１ｍｌ当り約０．１〜約１． ０ｍｇの活性成分を含有する溶液が好適である。

さらに２’、５’　−オリゴアデニレート同族体を局部的に投与して、２−５Ａ 経路の欠陥を特徴とする任意の１種もしくはそれ以上の２’、５’　−オリゴア デニレート同族体を含有する製剤を、病巣もしくは罹患領域を覆うのに充分な量 で施すことができる。活性物質の有効濃度は約１０−３〜約１０　’Ｍであり、 約１０−’Ｍが好適である。

２−５Ａ同族体および細胞浸透向上性アダクトの配合体については、投与量は２ −５Ａ同族体成分の重量に依存する。慣用のキャリヤと共に投与する他、２−５ Ａ同族体は各種の特殊なオリゴヌクレオチドまたは核酸供給技術により、たとえ ばユニラメラリポソームもしくは再編成センダイウィルスエンベロブにおけるカ プセル化またはたとえばポリ（し−リジン）のようなキャリヤ分子への結合によ って投与することもできる。この種の方法は国際特許出願ＰＣＴ／・ＵＳ　８５ １０３６３４号（参考のため、その全開示をここに引用する）に開示されている 。

さらに、２−５Ａ誘導体および配合体は微視的ナノメータ寸法のポリスチレンキ ャリヤを介して投与することもでき、血流中に溶解して活性薬物を放出する。他 の適するキャリヤは上記国際特許出願明細書に記載され、その全開示を参考のた めここに引用する。

合成、製造および分析の各方法に関する引例も全て参考のためここに引用する。

本発明は、その思想および本質的な特徴を逸脱することなく他の特定構成でも実 施することができ、したがって本発明の範囲は上記説明のみでなく以下の請求の 範囲を参照すべきである。

（ｄｓＲＮＡ活性化） ＮＡ 特異的切断生成物 フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ） 、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、　ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　ＭＬ、 　ＭＲ，ＳＮ、　ＴＤ。

ＴＧ）、　ＡＴ、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　ＣＨ。

ＣＺ、ＤＥ、ＤＫ、ＥＳ、ＦＩ、ＧＢ、ＨＵ、ＪＰ、ＫＰ、　ＫＲ，ＬＫ、　Ｌ Ｕ、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　ＮＬ、　ＮＯ、ＮＺ、　ＰＬ、　ＰＴ、　ＲＯ ，ＲＵ、　ＳＤ、　ＳＥ、　ＳＫ。

Ａ （７２）発明者　フライプラー、ボルフガングドイツ国　ディー７７５０　コン スタンツ　リンダウアー　ストラッセ　４７

Claims (38)

【特許請求の範囲】
1. １．式 ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ ［式中、ｎは１〜８の正の整数であり、ｍは０、１、２もしくは３であり、 Ｒは水素であり、 ＸはＣ１〜Ｃ６アルキルおよびＣ１〜Ｃ６アルコキシよりなる群から選択される ］ の化合物またはその医薬上許容しうる塩。
2. ２．ＸがＣ１〜Ｃ３アルキルおよびＣ１〜Ｃ３アルコキシよりなる群から選択さ れる請求の範囲第１項に記載の化合物。
3. ３．化合物が３′−デオキシアデニリルー（２′−５′）−３′−デオキシアデ ニリル（２′−２′）−９−（２′−ヒドロキシエチル）アデニン、その５′モ ノ−、ジ−およびトリ−ホスフェート、並びにそれ、らの任意の医薬上許容しう る塩よりなる群から選択される請求の範囲第１項に記載の化合物。
4. ４．化合物が３′−デオキシアデニリルー（２′，５′）−３′−デオキシアデ ニリルー（２′，３′）−９−（３′−ヒドロキシプロピル）アデニン、その５ ′モノー、ジ−およびトリ−ホスフェート、並びにその任意の医薬上許容しうる 塩よりなる群から選択される請求の範囲第１項に記載の化合物。
5. ５．化合物が３′−デオキシアデニリルー（２′，５′）−３′−デオキシアデ ニリルー（２′，４′）−９−（４′−ヒドロキシブチル）アデニン、その５′ モノー、ジ−およびトリ−ホスフェート、並びにその任意の医薬上許容しうる塩 よりなる群から選択される請求の範囲第１項に記載の化合物。
6. ６．化合物が３′−デオキシアデニリルー（２′，５′）−３′−デオキシアデ ニリルー（２′，２′）−９−［（２′′−ヒドロキシエトキシ）メチル］アデ ニン、その５′モノ−、ジ−およびトリ−ホスフェート、並びにその任意の医薬 上許容しうる塩よりなる群から選択される請求の範囲第１項に記載の化合物。
7. ７．請求の範囲第１項に記載の化合物と医薬キャリヤとからなる医薬組成物。
8. ８．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ａは ▲数式、化学式、表等があります▼もしくは▲数式、化学式、表等があります▼ であり、 ＸはＮＨ２もしくはＣＨ２であり； ｍは０、１、２もしくは３であり； ｎは１〜８の整数であり； 各Ｒ１は独立して酸素、硫黄、サルフェート、セレン、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよ びＣ１〜Ｃ８アルコキシよりなる群から選択され； 各Ｒ２は独立して酸素、硫黄、サルフェート、セレン、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよ びＣ１〜Ｃ８アルコキシよりなる群から選択され； 各Ｒ３は独立して水素、ヒドロキシル、アミノおよび−ＯＳ；（ＣＨ３）２Ｃ（ ＣＨ３）２から選択され；Ｒ４およびＲ５は独立して水素；ヒドロキシル；アミ ノ；Ｃ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ；Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ、 アルキルカルボニル、アルキルカルボキシルおよびアルキルハライド；並びにＣ １〜Ｃ８アルコキシアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボキシルお よびアルコキシハライドよりなる群から選択される］ の化合物またはその医薬上許容しうる塩（ただし真正２′，５′−オリゴアデニ レートおよびその塩を除く）からなる配合体であって、前記化合物が完全細胞中 への浸透増大をもたらすアダクトに共有結合した配合体。
9. ９．アダクトが、ビタミンのリセプタ媒介エンドサイトシスのための対応する細 胞表面リセプタを有するビタミン類よりなる群から選択されるビタミンからなる 請求の範囲第８項に記載の配合体。
10. １０．アダクトがビタミンＢ１２である請求の範囲第９項に記載の配合体。
11. １１．アダクトがビオチンである請求の範囲第９項に記載の配合体。
12. １２．アダクトが葉酸である請求の範囲第９項に記載の配合体。
13. １３．アダクトが親油性である請求め範囲第９項に記載の配合体。
14. １４．アダクトが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、ｘは１〜２０の整数である］ のアシル基である請求の範囲第１３項に記載の配合体。
15. １５．アダクトがコレステリル基からなる請求の範囲第１３項に記載の配合体。
16. １６．Ａが ▲数式、化学式、表等があります▼ であり、 ｍが０、１、２もしくは３であり、 ｎが１〜８の整数であり、 各Ｒ３およびＲ４が独立して水素およびヒドロキシルから選択され、 各Ｒ２が独立して硫黄および酸素から選択され、Ｒ５がヒドロキシである、 化合物またはその医薬上許容しうる塩（ただし、この化合物はその２′−末端ヌ クレオチドの２′−位置を介して前記アダクトに共有結合する）からなる請求の 範囲第８項に記載の配合体。
17. １７．アダクトがビタミンである請求の範囲第１６項に記載の配合体。
18. １８．ビクミンがＢ１２、葉酸およびビオチンよりなる群から選択される請求の 範囲第１７項に記載の配合体。
19. １９．アダクトが親油性である請求の範囲第１６項に記載の配合体。
20. ２０．アダクトがコレステリルである請求の範囲第１６項に記載の配合体。
21. ２１．アダクトが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、ｘは１〜２０の整数である］ のアシル基である請求の範囲第１９項に記載の配合体。
22. ２２．アダクトがパルミトイルである請求の範囲第２１項に記載の配合体。
23. ２３．処置を必要とする哺乳動物に、有効量の請求の範囲第１項に記載の化合物 を投与することを特徴とするウィルス感染の抑制方法。
24. ２４．処置を必要とする哺乳動物に、有効量の請求の範囲第２項に記載の化合物 を投与することを特徴とするウィルス感染の抑制方法。
25. ２５．処置を必要とする哺乳動物に、有効量の請求の範囲第８項に記載の配合体 を投与することを特徴とするウィルス感染の抑制方法。
26. ２６．処置を必要とする哺乳動物に、有効量の請求の範囲第９項に記載の配合体 を投与することを特徴とするウィルス感染の抑制方法。
27. ２７．哺乳動物に、有効量の式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ａは ▲数式、化学式、表等があります▼もしくは▲数式、化学式、表等があります▼ であり、 ＸはＮＨ２もしくはＣＨ２であり； ｍは０、１、２もしくは３であり； ｎは１〜８の整数であり； 各Ｒ１は独立して酸素、硫黄、サルフェート、セレン、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよ びＣ１〜Ｃ８アルコキシよりなる群から選択され； 各Ｒ２は独立して酸素、硫黄、サルフェート、セレン、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよ びＣ１〜Ｃ８アルコキシよりなる群から選択され； 各Ｒ３は独立して水素、ヒドロキシル、アミノおよび−ＯＳ；（ＣＨ３）２Ｃ（ ＣＨ３）２から選択され；Ｒ４およびＲ５は独立して水素；ヒドロキシル；アミ ノ；Ｃ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ；Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ、 アルキルカルボニル、アルキルカルボキシルおよびアルキルハライド；並びにＣ １〜Ｃ８アルコキシァミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボキシルお よびアルコキシハライドよりなる群から選択される］ の１種もしくはそれ以上の化合物またはその医薬上許容しうる塩（ただし真正２ ′，５′−オリゴアデニレートおよびその塩を除く）を投与して、前記哺乳動物 における２−５Ａシンセクーゼ／ＲＮアーゼＬ抗ウィルス経路の活性化とウィル スＤＮＡポリメラーゼの抑制とを同時に生ぜしめることを特徴とする抗ウィルス 処置の方法。
28. ２８．Ｒ４または少なくとも１個のＲ３が水素である請求の範囲第２７項に記載 の方法。
29. ２９．Ａが ▲数式、化学式、表等があります▼ であり、 ｍが０、１、２もしくは３である 請求の範囲第２７項に記載の方法。
30. ３０．Ｒ１の少なくとも１個が硫黄である請求の範囲第２９項に記載の方法。
31. ３１．Ｒ１の少なくとも２個が硫黄である請求の範囲第３０項に記載の方法。
32. ３２．各Ｒ１が酸素である請求の範囲第３０項に記載の方法。
33. ３３．Ｒ４および各Ｒ３が水素である請求の範囲第２７項に記載の方法。
34. ３４．Ｒ２の少なくとも１個が硫黄である請求の範囲第２７項に記載の方法。
35. ３５．ｎが１もしくは２であり、Ｒ１が独立して酸素および硫黄から選択され、 さらにＲ２が独立して酸素および硫黄から選択される請求の範囲第２９項に記載 の方法。
36. ３６．各Ｒ３およびＲ４が独立して水素およびヒドロキシルから選択される請求 の範囲第３５項に記載の方法。
37. ３７．Ｒ５がヒドロキシルである請求の範囲第３６項に記載の方法。
38. ３８．各Ｒ３が水素である請求の範囲第３７項に記載の方法。