KR0141684B1 - 2`,5`-올리고 아데닐레이트 유도체의 치료학적 이용 - Google Patents
2`,5`-올리고 아데닐레이트 유도체의 치료학적 이용Info
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Abstract
본 발명은 하기 일반식 (Ⅰ) 로 나타내어지는 나프토에산 유도체 및 그의 염에 관한 것이다.
[ 식중,
R1, R2및 R3는 각각 독립적으로 수소 원자, 할로겐 원자, 히드록실기, 저급 알킬기, 저급 알콕시기, 저급 알카노일옥시기, 히드록시저급알킬기, 저급 알콕시 - 저급 알킬기, 저급 알카노일옥시 - 저급 알킬기 또는 아랄킬옥시기를 나타내며 ;
R4는 수소 원자 또는 저급 알킬기를 나타내며 ;
R5는 치환 또는 무치환의 아릴기 또는 치환 또는 무치환의 헤테로아로마틱기를 나타내며 ;
X 는 기, 시클로알킬렌기, 2 가의 질소를 함유하는 복소환식기
또는 기, - R8- NH - 또는 - NH - R8- 을 나타내고, 여기에서, R6
및 R7은 각각 수소 원자 또느 저급 알킬기를 나타내고, R8은 시클로알킬렌기를 나타내든가 또는 R6및 R7은 R4와 함께, C1 ∼ 3 의 알킬겐기를 형성하여도 무방하며 ;
Y 는 - S(O)P- ,( CH2)n, - 0 - 또는 단일 결합을 나타내고 ;
Z 는 치환 또는 무치환의 알킬렌기 또는 단일 결합을 나타내고 ;
ℓ 은 0 ∼ 4 의 정수이며 ;
m 은 0 ∼ 8 의 정수이며 ;
n 은 0 또는 1 이며 ;
p 는 0 ∼ 2 의 정수이며 ;
q 는 0 또는 1 이다. ]
본 화합물은 항알레르기제로서 유용하다.
Description
[관련된 출원에 대한 참조]
본 출원은, 1984년 7월 11일에 출원되어 현재 포기된, 출원 번호 제 629,660호의 계속인, 1988년 1월 11일 출원되어 동시 계류중인 출원 번호 제 144,602호의 일부 계속 출원인, 1988년 6월 9일에 출원된 동시 계류중인 출원 번호 제 204,659호의 일부 계속 출원이다. 출원 번호 제 204,659호의 설명이 참고로 본원에 인용되어 있다.
[정부 허가에 대한 참조]
본원에 기술된 본 발명은 국민 보건연구소 허가 GM-2134 및 국민 과학제단 허가 PCM-8111752에 의해 지지되고 있다.
[발명의 영역]
본 발명은 2',5'-올리고아데닐레이트 동족체의 특정 치료적 사용 및 이러한 동족체의 제약학적 조성물에 관한 것이다.
[발명의 배경]
본 발명의 주요 물질의 완전한 명명법은 매우 긴 용어들을 포함하고 있다. 공지된 방식으로 이런 용어들을 단축하는 것은 당업자들에게는 통상적인 것이다. 이런 일반적이고 통상적인 약어들은 아래 기술되며 본 명세서의 본문에서 사용될 수 있다.
[약어들]
A, 아데노신 또는 아데닐레이트 또는 아데닐릴
코르디세핀 C 또는 3'-dA, 3'-데옥시아데노신(3-데옥시아데닐레이트)
아라 -A, 9-β-D-아라비노푸라노실아데닌
EHNA, 에르티로-9-(2-히드록시-3-노닐)아데닌
A-3'-아미노, 3'-아미노-3'-데옥시아데노신
투베르시딘, 4-아미노-7(β-D-리보푸라노실)피롤로-[2,3-d]피리미딘
3'-dATP, 3'-데옥시아데노신 트리포스페이트
ATP, 아데노신 트리포스페이트
Ⅰ, 이노신 또는 이노시네이트 또는 이노시닐릴
크실로-A 또는 크실로아데노신, 9-β-D-크실로푸라노실아데닌 dCF 또는 2'-데옥시코포르미신,
2-5A 또는 2',5'-올리고(A)또는 2',5'-올리고아데닐레이트, 5'-말단에서 트리포스페이트 및 2',5'-포스포디에스테르 결합과 아데닐 산의 올리고머
2',5'-코르디세핀 동족체 또는 2',5'-올리고코르디세핀, 5'-말단에서 트리포스페이트 및 2',5'-포스포디에스테르 결합과 3'-데옥시아데닐산의 올리고머
2',5'-An 또는 코어 올리고머, 아데닐산과 2',5'-포스포디에스테르 결합의 올리고머
2',5'-A3또는 2',5'-아데닐레이트 삼량체 코어, 아데닐릴(2',5')아데닐릴(2',5')아데노신
2',5'-A4또는 2',5'-아데닐레이트 사량체 코어, 아데닐릴(2',5')아데닐릴(2',5')아데닐릴(2',5')아데노신
2'5'-3'dA3또는 2',5'-C-C-C 또는 2',5'-코르디세핀 삼량체 코어, 3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데노신
2',5'-C-C-C-C 또는 2',5'-코르디세핀 사량체 코어, 3' 데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시 아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데노신
3'-5'-A3, 아데닐릴(3',5')아데닐릴(3',5')아데노신
2',5'-I3또는 2',5'-이노신 삼량체 코어, 이노시닐릴(2',5')이노시닐릴(2',5')이노신
EBV, 엡스테인-바르(Epstein-Barr)바이러스
EBNA, 초기 핵 항원에 연관된 엡스테인-바르 바이러스
HIV, HIV-1, HIV2 및 모든 다른 HIV 서브타입을 포함하는 인간 면역 결핍 바이러스
HBLV, 인간 B-세포 림포트로픽 바이러스
HTLV, HTLV-Ⅰ, HTLV-Ⅱ 및 HTLV-Ⅲ, 및 모든 다른 HTLV 서브-타입을 포함하는 인간 T-세포 백혈병 바이러스
IFNα: α-인터페론
rIFN-αA: 재조합 α-인터페론
dsRNA: 이본쇄 리보핵산
2',5'-A-A-Tu, 아데닐릴(2',5') 아데닐릴(2',5')투베르시딘
2',5'-Tu-Tu-Tu, 2',5'-투베르시딜릴(2',5') 투베르시딜릴(2',5')투베르시딘
2',5'-A-A 아라-A, 아데닐릴(2',5') 아데닐릴(2',5') 아라-A
2',5'-C-C-A, 3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5') 아데노신
2',5'-A-C-C, 아데닐릴 (2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데노신
2',5'-A-A-C, 아데닐릴(2',5') 아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데노신
2',5'-C-A-C, 3'-데옥시아데닐릴(2',5')아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데노신
2',5'-C-C-A, 3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5')아데노신
2',5'-A-C-A, 아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5')아데노신
2',5'-크실로-A3, 크실로아데닐릴(2',5')크실로아데닐릴(2',5') 크실로아데노신
2',5'-크실로-A4, 크실로아데닐릴(2',5')크실로아데닐릴(2',5')크실로아데닐릴(2',5')크실로아데노신
Ac, 아세틸
Bz, 벤질
MMTr, 5'-0-p-메톡시트리틸
2',5'-트리틸-C3, 5'-0-p-메톡시트리틸 -3'-데옥시-아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데노신
2',5'-트리틸-A3, 5'-0-p-메톡시트리틸 아데닐릴(2',5') 아데닐릴(2',5') 아데노신
2',5'-C-C-dCF, 3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5')2'-데옥시코포르미신
2',5'-A-A-A-3'-아미노, 아데닐릴 (2',5')아데닐릴 (2',5')3'-아미노-3'-데옥시아데노신
SiTBD, t-부틸디매틸실릴 또는 -Si(CH3)2C(CH3)3
2',5'-A(Si)-A(Si)-A, 3'-0-t-부틸디메틸실릴-아데닐릴 (2',5')3'-0-t-부틸디메틸실릴아데닐릴 (2',5')-아데노신
2',5'-A-A-A-3'-0-메틸, 아데닐릴 (2',5') 아데닐릴-(2',5')3'-0-메틸아데노신
2',5'-A-A-A-3'-0-펜틴, 아데닐릴 (2',5') 아데닐릴-(2',5')3'-0-펜틸아데노신
2',5'-A-A-A-3'-0-헥실, 아데닐릴 (2',5') 아데닐릴-(2',5')3'-0-헥실아데노신
2',5'-A-A-A-3'-0-헵틸, 아데닐릴 (2',5') 아데닐릴-(2',5')3'-0-헵틸아데노신
2',5'-EHNA-A, 에리트로-9-(2-히드록시-3-노닐)-아데닐릴 (2',5') 아데닐릴(2',5') 아데노신
아데닐릴(A) 및 3' 데옥시아데닐릴(C)부분으로 구성된 사량체 화합물에 대한 약어는 하기 예시된다:
2',5'-A-A-C-C, 아데닐릴(2',5') 아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데노신
인터페론에 의해 유도된 항바이러스 상태의 지식의 확장과 더불어, 항바이러스 반응의 조정제로서 2',5'-올리고아데닐레이트의 화학적 및 효소적 합성 및 생물학적 성질에 초점이 맞추어지고 있다. 2',5'-올리고(A)는 식물 및 동물에 있어 천연의 넓은-스펙트럼 항바이러스 방어메카니즘의 성분이다. 또한 2-5A/RNase L 경로 또는 항바이러스 시스템으로서 공지된 2-5A 경로는, 인터페론의 항바이러스 메카니즘에 포함되는 것으로 널리 인정되며, 또한 세포 성장 및 분화의 조절시 포함될 수 있다. 이 경로에 따라, 2-5A는 2',5'-올리고아데닐레이트 합성효소[ATP : (2',5')올리고 (A)-아데닐 전달효소(EC 2.7.7.19)], (이후, 2-5A 합성효소로 언급)에 의해 ATP로부터 합성된다. 이 효소는 dsRNA에 의해 활성화된다. 2-5A는 그 유일하게 공지된 표적효소인 2-5A 의존성 엔도리보뉴클레아제 RNase L에 결합되어 활성화됨으로써, 그 생물학적 효과를 나타낸다. 후자는 바이러스 및 세포의 mRNA 또는 rRNA를 절단시켜, 단백질 합성을 저해시킨다. [참조 문헌: 호바네시안 일동, Eur. J. Biochem. 93 : 515-526(1979); 케르 일동, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75 : 256-260(1978)] 그러나, 생물학적 시스템 내 2-5A 분자의 짧은 반감기는 바이러스 복제의 조절에 있어서 인식된 단점이다.
큰 분자량의 이본쇄 DNA 게놈을 특징으로 하는, 또한 인간 B-세포림포트로픽(lymphotropic)바이러스(HBLV)로도 공지된, 인간 B-림포트로픽 바이러스는 헤르페스(herpes) 바이러스 집단의 바이러스들과 형태학적으로 유사하지만, 숙주 범위, 시험관 내 생물학적 효과, 항원 특징 및 게놈에 의해 공지된 인간 및 비인간 영장류 헤르페스 바이러스들과 쉽게 구별할 수 있다. [참조문헌: 살라후딘 일동; 과학 234 : 596-601(1986); 조세프 일동, 과학 234 : 601-602(1986)] 바이러스는, 핵 및 세포질 봉입체를 갖는 큰 굴절성 단일 또는 이핵으로 된 세포로 전환되는 새롭게 분리된 인간 B-세포를 선택적으로 감염시키는 것으로 관찰되었다. HBLV는 일 년 이상 계속되는 만성 피로를 특징으로 하는 만성 단핵증과 같은 증후군의 원인으로 추측된다.
후천성 면역 결핍 증후군의 병인제인, 인간 T-세포 백혈병 바이러스Ⅲ(HTLV-Ⅲ)으로도 또한 공지된, 인간 면역 결핍바이러스(HIV)는 D형 레트로바이러스이다. 모든 레트로바이러스에 있어서와 마찬가지로, HIV 복제의 근본적인 특징은 DNA로의 플러스-스트랜드 RNA 게놈의 역전사로, 이 방법은 RNA 의존성 DNA 폴리머라제인 역전사효소를 필요로 한다. 이 효소는 바이러스를 암호화하여 성숙한 HIV 비리온 내 게놈 RNA와 관련있는 것으로 발견되었다. 짧은 역전사 단계를 요구하는 레트로바이러스 및 바이러스에 대한 역전사효소의 독점성은 역전사효소를 항바이러스, 특히 항 레트로바이러스의, 치료학적 중재에 대한 주요 표적으로 만든다.
2-5A 자체보다 더 신진대사적으로 안정하고 활성적인 화합물을 사용하여, 2-5A경로 결함을 특징으로 하는 HIV, HBLV에 의해 야기되는 만성 피로 및, 기타 질병상태를 조절하는 방법이 요구된다.
[발명의 요약]
본 발명에 따라, 2-5A경로 결함을 특징으로 하는 장해에 대하여 포유동물을 치료하는 방법이 제공된다. 이 방법은 하나 이상의 하기 일반식의 화합물 또는 제약학적으로 허용가능한 그 염을 상기 포유동물에 투여하는 것으로 구성된다:
상기식에서 n은 1 내지 8의 양의 정수이고, m은 0,1,2 또는 3이고, 같거나 다른 각각의 R은 수소, 히드록시, 아미노, C1-C10알콕시 및 -OSi(CH3)2C(CH3)3로부터 선택되고, 단 동일 화합물 내에서 모든 R기들이 히드록시일 수는 없다.
바람직하게는, n은 1 내지 3, 보다 바람직하게는 1 또는 2이다. 가장 바람직하게는 2'-말단 뉴클레오티드 상의 R기는 히드록시 이외의 것으로, 즉, 2'-말단 뉴클레오티드는 아데노신 이외의 것이다.
본 발명의 방법에서 사용하기 위한 화합물의 예로는 하기 코어 화합물, 그에 상응하는 5' 모노-, 디-, 및 트리포스페이트 및 이들 중 임의의 제약학적으로 허용가능한 염이 포함된다:
R이 수소 및 히드록시로부터 선택되는 화합물:
2',5'-C-C-C-C,
2',5'-A-A-A-C,
2',5'-A-A-C-C,
2',5'-A-A-C-A, 등을 포함하는 (여기에 제한되지는 않음), A 및 C의 다양한 사량체조합물 이외에,
2',5'-C-C-C,
2',5'-A-A-C,
2',5'-A-C-C,
2',5'-C-C-A,
2',5'-C-A-C,
2',5'-C-C-A 및
2',5'-A-C-A
R이 히드록시 및 C1-C10알콕시, 특히 C1-C7알콕시로부터 선택되는 화합물;
예컨대:
2',5'-A-A-A-3'-0-메틸
2',5'-A-A-A-3'-0-펜틸
2',5'-A-A-A-3'-0-헥실
2',5'-A-A-A-3'-0-헵틸
R이 히드록시 및 아미노로부터 선택되는 화합물, 예컨대:
2',5'-A-A-A-3'-아미노
R이 히드록시 및 OSi(CH3)2C(CH3)3로부터 선택되는 화합물, 예컨대 :
2',5'-A(Si)A(Si)A
본 발명에서, 2-5A 경로 결함을 특징으로 하는 장해에 대하여 포유동물을 치료하는 방법은,
2',5'-A-A-아라-A,
2',5'-A-A-Tu,
2',5'-Tu-Tu-Tu,
2',5'-I3,
2',5'-크실로-A3,
2',5'-크실로-A4,
2',5'-C-C-dCF,
2',5'-EHNA-A-A, 및
5,6-디클로 벤즈이미다질릴 (2',5')5,6-디클로로-벤즈이미다질릴(2',5')5,6-디클로로 벤즈이미다졸 리보사이드의 군으로부터 선택된 적어도 하나의 화합물 또는 그의 5' 모노-,디- 및 트리포스페이트, 또는 이들 중 임의의 제약학적으로 허용가능한 염을 상기 포유동물에 투여하는 것으로 구성된다.
본 발명은 또한 하나 이상의 상기 화합물 및 제약학적으로 허용가능한 담체로 구성되는, 2-5A 경로 결함을 특징으로 하는 임의의 장해에 대하여 포유동물의 치료를 위한 제약학적 조성물에 관한 것이다.
제 1 도는 하기 2',5'-올리고아데닐레이트 동족체 : p2C3(고체 서클) ; pC4(공동 서클) ; p3C3(고체 스퀘어) ; pC3(공동 스퀘어) ; 및 C3(고체 트라이앵글)에 의한 HIV-1 역전사효소 저해의 효과를 나타내고 있다. 역전사효소 반응은 주형-프라이머(template-primer)로서 폴리(A)-(dT)15, 효소로서 트리톤X-100 활성화 HTLV-ⅢB용해질을 포함하며, 실시예 9에 기술된 바와 같이 [3H]dTTP 함입에 의해 검사된다. 대조 표준 값은 평균 129,000cpm인 반면, 백그라운드 값은 평균 10,000cpm이다.
제 2A 도 내지 제 2F 도는 시험관 내 HIV-1 감염에 대한 하기 물질의 효과를 나타내고 있다: (2A)코르디세핀, (2B)2',5'-A3, (2C)2',5',-C3 및 (2D)2',5'-pC3, (2E)(2',5')-A-C-A 및 (2F)2',5'-pC4, MT-2 세포는 효과인자의 존재 및 부재하에 HTLV-ⅢB의 도전을 받는다. 세포병리 효과는 실시예 9에 기술된 생체 염료 흡수에 의해 정량된다. 각 자료 포인트는 세 값의 평균을 나타낸다. 표준 이탈은 평균 값의 10%보다 작다.
제 3 도는 rIFN-αA(3A) 또는 미스매치(mismatch) 된 dsRNA(3B) 중 하나와 2',5'-C3의 조합된 항-HIV-1 효과의 곡선이다. 조합 약물 지수는 투여-효과 곡선의 기울기로부터 계산되어 % 보호 값 또는 영향을 받은 부분에 대해 플롯팅된다. 농도는 2',5'-C3에 대해 3.1-100㎍/ml, rIFN-αA 에 대해 9, 8-312.5 I.U./ml 및 미스매치된 dsRNA에 대해 1.6-25㎍/ml 이다.
외생의, 신진대사적으로 안정한 2-5A 동족체의 투여는, 2-5A 결함을 특징으로 하는 장해에 대한 증가된 보호, 특히 동물 및 인간에 있어서의 레트로바이러스 감염에 대한 보호를 나타낼 것이다. 본원에 사용된 2-5A 결함이란 2-5A 생산의 감소, 및/또는 RNase L의 2-5A-의존성 활성화의 방해를 초래할 2-5A 경로의 임의 표현, 조건 또는 방해를 의미한다. 2-5A 결함을 특징으로 하는 질병은 예컨대, 레트로바이러스 감염, 특히 HTLV 감염, 가장 특히 HIV 감염, 만성 피로 및 피부의 T-세포 임파종 ; 골수성 백혈병 ; 급성 백혈병 ; 암 ; T-세포 백혈병 ; 알쯔하이머 증후군 ; 파킨슨 증후군 ; 다발성 경화증 ; 자기면역 질환 ; 및 수술- 및 다른 외상-유도 면역 기증장해를 포함한다.
결함은 만성 바이러스 감염, 면역 세포 결함 또는 이들 모두에 의해 야기되는 상기 장해들과 같은 질병에서 명백하다. 2-5A 경로 결함은 특히 만성 바이러스 감염 및 면역 세포 결함을 특징으로 하는 질병에서 특히 나타난다.
3'-히드록실기 및 다른 곳에서의 2-5A 분자의 구조적 변형은, RNase L을 활성화시키는 능력을 유지시키면서, 2'-포스포디에스터라아제 및 세포 뉴클레아제에 대한 현저히 증가된 신진대사 안정성을 갖는 2-5A 동족체를 제공한다. 말단 뉴클레오티드의 치환에 의한 천연 2-5A의 변형은 보다 안정한 분자를 초래한다. 신진대사적으로 안정한 2-5A 동족체의 지속적인 높은 세포 내 농도는 그 증가된 안정성의 결과이다.
2-5A 동족체의 보다 장기간 지속되는 약리학적 활성은 보다 유리한 치료학적 비율을 제공한다. 이는 신진대사적으로 불안정한 2-5A에 관한 감소된 투여 빈도수를 허용한다. 감소된 투여 빈도수는, 2-5A 경로 결함을 특징으로 하는 여러 질병들의 만성적 성질로 인하여 중요하다.
2-5A 동족체는 레트로바이러스에 의해 야기되는 감염 치료시 특히 유용하다. 레트로바이러스 감염과 연관된 2-5A 경로 결함은, dsRNA에 의한 2-5A 합성효소의 활성화에 대한 바이러스 간섭에 의해 야기되는 경로의 불화성화를 포함한다. 2-5A 합성효소 활성화의 부재 하에, 2-5A 생산, 따라서 RNase L의 활성화가 감소된다. 본 발명에 따라, 외생의 신진대사적으로 안정한 2-5A 동족체가 2-5A 경로 내에 상기 레트로바이러스에 의해 야기된 결함을 치료하기 위해 투여된다. 2-5A와 유사한, 2-5A 동족체는 바이러스 RNA를 절단하는, RNase L을 활성화시킬 수 있다.
2-5A 동족체는 피부의 T-세포 임파종을 야기시키는 HTLV-Ⅰ ; 세자니 임파종을 야기시키는 HTLV-Ⅱ ; HTLV-Ⅲ ; 및 다발성 경화증의 병인제로 현재 보고 있는, HTLV-Ⅳ와 같은, 다양한 인간 T-세포 백혈병 바이러스(집단적으로 HTLV)에 의한 감염에 대한 보호시 특히 유용하다. 각각의 HTLV 바이러스들은 레트로바이러스이다. HIV-1로도 또한 공지된, HTLV-Ⅲ은 후천성 면역 결핍 증후군 (AIDS)을 야기시키는데 책임이 있다.
상기 화합물들은 또한 두 번째 혈청학적으로 뚜렷한 HIV 서브 타입(subtype)인 HIV-2를 치료하는데 유용한 것으로 믿어진다. 이후에 HIV는 HIV-1 또는 HIV-2 중 하나 및, 현재 또는 이후에 공지되는 임의의 다른 HIV 서브타입을 의미한다.
HTLV-감염 환자, 특히 HIV-1-감염 환자들은, 혈액 단핵 세포 내 비정상적으로 저수준의 2-5A 및/또는 RNase L활성을 나타내는 것으로 보여져왔다. 건강한 사람들로부터의 혈액 단핵 세포는, 대조시, 평균적으로 보다 높은 2-5A 수준을 나타내며, RNase L 활성은 쉽게 감지할 수 있다. 이와 마찬가지로, 만성 피로 질병을 가지는 사람의 혈액 단핵 세포는 낮은 2-5A 수준을 나타내며, 정상인 사람으로부터의 혈액 단핵 세포에서 관찰된 특이적 절단 생성물과 구별되는 신규 RNA 절단 생성물의 외관을 명시한다.
본 발명의 실행은 일반적으로 원형의 레트로바이러스로서 여겨지는, HIV-1 감염의 치료에 대하에 본원에 예시되나, 본 발명의 방법은 병인제가 레트로바이러스로 구성되는 임의 질병의 치료에 적용된다. 인간을 감염시키는 부가적인 레트로바이러스는 예컨대, 상기의 다양한 비-HIV HTLV 바이러스를 포함한다.
2-5A 경로 결함, 특히 레트로바이러스 감염, 가장 특히 HIV 감염을 특징으로 하는 다양한 질병들은, 따라서 질병 상태와 관련된 2-5A 시스템 결함을 중화하기 위한 외생의, 신진 대사적으로 안정한 2-5A 동족체의 투여에 의해 처리될 수 있다.
제약학적 사용을 위해, 2',5'-올리고 아데닐레이트 동족체는 제약학적으로 허용가능한 담체에 넣을 수 있다. 본 발명의 제약학적 조성물의 제조를 위한 담체들은, 본래 유기 또는 무기, 고체 또는 액체 중 하나일 수 있다. 적합한 고형 담체들은 젤라틴, 미세 결정질 셀룰로오스, 락토오스, 전분, 및 마그네슘 스테아레이트를 포함한다. 적합한 액체 담체는 에탄올, 벤질 알콜 및 폴리(에틸렌 글리콜)과 같은 알콜 및 물을 포함한다. 주입가능한 제제를 위한 바람직한 액체 담체로는 물, 염수 용액, 덱스트로스 용액 및 수성 프로필렌 글리콜 또는 수성 폴리(에틸렌 글리콜)과 같은 글리콜 용액이 포함된다. 배합물의 성질은, 점도 증진제, 계면 활성제, pH변경제, 보존제, 감미제, 안정성 향상제, 착색제, 현탁제, 과립화제, 피복제, 분해 변경제, 포사약, 유화제 및 히멕턴트(hymectants)와 같은 성질을 함유하는 하나 이상의 보조약을 첨가시킴으로써 향상될 수 있다.
결과 형성된 조성물은 용액, 현탁액, 정제, 캡슐, 연고, 엘릭시트, 주입 가능한 조성물 등의 형태일 수 있다.
투여량은 감염 또는 질병의 심각성 및 대상의 크기 및 중량에 따라 달라진다. 투여량은 질병의 성질, 및 대상의 크기 및 중량에 따라 넓은 범위에 걸쳐 변화할 수 있다. 한 실시 양태에 의하면, 화합물은 물 내 0.1 내지 100mg/ml의 용액, 포스페이트 완충 식염 또는 다른 적절한 유체로서 제조되거나, 0.01 내지 1g 활성 화합물을 함유하는 정제로서 제조될 수 있다.
화합물은 수용성 염의 형태로 투여될 수 있다. 제약학적으로 허용가능한 수용성 염은 예컨대, 활성 화합물의 나트륨, 칼륨 및 암모늄 염을 포함한다. 이것들은 물 또는 식염 용액에 쉽게 용해된다. 배합물은 삼투압 균형을 유지하기 위해, 설탕 또는 단백질과 같은 첨가제들을 함유할 수 있다.
2',5'-올리고아데닐레이트 동족체는 2-5A 경로 결함을 특징으로 하는 임의의 다양한 조건에 의한 질병의 위험에 있거나, 상기 질병을 가지는 동물 또는 인간에게 약 0.1mg 내지 약 1g의 투여량으로 투여될 수 있다. 매일 총 투여량은 보다 낮거나 높은 양이 투여될 수 있을지라도, 예컨대 약 0.001g 내지 약 1g에서 변화할 수 있다. 바람직한 매일 투여량은 약 0.01g 내지 약 0.1g 의 활성 성분이다. 화합물은 정맥 내 주입, 복막 내 또는 근육 내 주입, 및 구강 투여를 비롯하여 임의의 여러 경로에 의해 투여될 수 있지만, 여기에 제한되지는 않는다. 상기 투여를 수행하는 기술은 통상적인 것으로, 의약분야에 공지되어 있다. 투여는 하루에 여러번 또는 매우 자주 행해질 수 있다. 정맥 내 투여의 경우, 특히 HIV의 치료를 위해, 활성 성분의 ml당 약 0.1 내지 약 1.0mg의 활성성분을 함유하는 용액이 바람직하다.
또한 2',5'-올리고아데닐레이트 동족체는 2-5A 경로 결함을 특징으로 하는 임의의 질병 상태와 관련된 피부 손상을 치료하기 위해 국부적으로 투여될 수 있다. 하나 이상의 2',5'-올리고아데닐레이트 동족체를 함유하는 제제의 충분한 양은 손상 또는 감염 지역을 커버하도록 적용될 수 있다. 활성제의 효과적인 농도는 약 10-3M 내지 약 10-5M 이고, 약 10-4M 이 바람직하다.
통상적인 담체와 함께 투여하는 것 이외에도, 2-5A 동족체는 단일 라멜러 리포즘 또는 재구성가능한 센다이(sendai) 바이러스 엔벨로프 내 캡슐화, 또는 폴리(L-리진)과 같은 담체 분자에의 결합과 같은 다양한 특정화된 올리고뉴클레오피드 또는 핵산 전달 기술에 의해 투여될 수 있다. 이러한 방법은 국제 특허 출원 WO 89/03863에 대응하는, 통상-양도된 등시계류중인 미국 특허 출원 제 112,591호에 공개되어 있으며, 그 전체 설명이 참고로 본원에 인용되어 있다.
2',5'-올리고아데닐레이트 동족체는 하기와 같이 화학적으로 합성될 수 있다. 블록킹된 아데노신-2'-포스포디에스테르는 6-아미노 위치를 벤조일로 블록킹시키고, 5' 위치를 p-메톡시트리틸로 블록킹시키고 임의로 3' 위치를 t-부틸디메틸실릴로 블록킹시킴으로써 제조된다. 블록킹된 뉴클레오시드는 2' 및 3' 위치를 아세틸, 벤조일 또는 t-부틸 디메틸실릴로 블록킹시킴으로써 제조된다. 적합하게 블록킹된 아데노신-2'-포스포디에스테르의 제조는 N6-벤조일-5'-0-(4-메톡시트리틸)아데노신의 3'-0-t-부틸디메틸실릴-이성체-3'-히드록실기에 t-부틸 디메틸실릴기를 첨가시키고, 피리딘 내 이미다졸을 사용하여 후자 화합물을 t-부틸 디메틸실리클로라이드와 축합시켜 3'-0-t-부틸 디메틸실릴 유도체를 생성시킴에 의해 수행된다. 유도체의 포스포릴화는 피리딘 내 2.5-디클로로페닐-포스포로트티아졸리드를 사용하여 수행되어, 적합하게 블록킹된 아데노신-2'-포스포디에스테르를 생성시킨다. 이 제제는 특히 본원에 참고로 인용되는, R. 카루바라, E. 울만, 및 W. 프레이데러, 리비히 Ann. Chem., 2392(1981) 및 R. 카루바라, W. 프레이데러, 테트라헤드론 Lett. 21, 4077(1980), 에 기술되어 있다. 블록킹된 아데노신-2'-포스포디에스테르는, 포스페이트 작용기의 블록킹을 일으켜 완전하게 보호된 디뉴클레오시드-모노포스포트리에스테르를 형성하는 축합제의 존재 하에 블록킹된 뉴클레오시드와 축합된다.
그 다음, 결과 형성된 완전하게 보호된 축합물은 말단 5' 위치에서 탈트리틸화제로 탈트리틸화되고, 또 다른 아데노신-2'-포스포디에스테르와 축합되고, 상기와 같이 블록킹되어, 완전하게 보호된, 2',5'-트리뉴클레오시드디포스포디트리에스테르, 또는 2',5' 삼량체 코어를 형성한다. 그 다음, 완전하게 보호된 삼량체 코어는 적절한 탈보호제로 처리되어, 완전히 탈보호되고 2',5' 삼량체 코어로 전환된다.
대안적으로, 2-5A 합성효소에 대한 기질인 뉴클레오티드로부터 형성되는 이들 2',5'-올리고아데닐레이트 동족체는 그 전체 설명이 본원에 참고로 인용되는 미합중국 특허 제 4,464,359호의 절차에 따라 효소적으로 제조될 수 있다.
삼량체 코어 2',5'-A-A-아라-A의 제조는 특히 본원에 참고로 인용되는 앵글스, J., 테트라헤드론 Lett. 21, 4339(1980)에 보고된다. 따라서, 뉴클레오시드 N6, 2'-0-,3'-0-트리벤조일아라비노-푸라노실아데닌은, 결합제로서 퀴놀린-8-설포닐-3-니트로-1,2,4-트리아졸리드를 사용하여, 완전하게 보호된 N, 3'-0-디벤조일-5'-0-트리틸아데닐릴(2'-0-트리브로모에틸-5')N63'-0-디벤조일아데노신-2'-(트리브로모에틸시아노에틸포스페이트)와 축합된다. 결과 형성된 삼량체 트리에스테르의 최종 탈보호는, 삼불화 붕소/메탄올로의 탈트리틸화 후 트리브로모에틸 부분의 전기 화학 적 탈블록킹 (양극액 내 CH3CN, Hg 푸울, NaHCO3)에 의해 수행된다. 디에스테르의 탈벤조일화는 부틸아민/메탄올을 사용하여 수행되어, 아데닐릴-(2',5')아데닐릴(2',5')9-β-D-아라비노푸라노실아데닌을 형성한다.
2',5'-I3의 제조는 특히 참고로 본원에 인용되는, 카루바라 일동의 테트라헤드론 Lett. 23, 4789(1982)에 기술된다.
삼량체 코어 2',5'-크실로-A3및 사량체 코어의 제조는 참고로 본원에 인용되는, 그로세린, G 및 임바크, J.L., 테트라헤드론 Lett. 22, 4699(1981)에 기록된다. 따라서, 삼량체 및 사량체 코어 크실로-A3및 크실로-A4는 N6-3'-0- 디벤조일화 크실로푸라노스를 t-부틸디메틸실릴-클로라이드로 처리함에 의하여 합성되어, 나트륨 메톡사이드로 탈벤조일화되어 2'-실릴 유도체를 형성하는 N6-3'-0- 디벤조일화된 크실로푸라노의 실리화된 유도체를 생성한다.
2'-실릴 유도체의 일차 히드록실은 모노메톡시트리틸기로 보호되고, 결과 형성된 5'-트리틸화-2'-실릴 유도체는 4-디메틸아미노피리딘의 존재 하에 피리딘 내에 용해된 동 당량의 벤조산 무수물과 반응하여, N6및 3-0-벤조일화-5'-트리틸화-2'-실릴화 유도체를 산출한다. 테트라부틸암모늄 플루오라이드를 사용한 t-부틸디메틸실릴기의 제거로 N6및 3-0-디벤조일화-5'-트리틸화 유도체를 산출하고, 이를 연속적으로 벤조일화시키고 탈트리틸화시켜 ,2',3'-0-트리벤조일크실로아데노신을 생성시킨다.
상기 N6및 3-0-디벤조일화-5'-트리틸화 유도체는 또한 아세토니트릴-피리딘 혼합물 내에서 과량의 0-클로로페닐-포스포로-디-(1,2,4-트리아졸리드)와 반응한 다음, 수성 트리에틸아민과 반응하여 2'-포스포트리에스테르를 형성한다. 포스포트리에스테르는 1-메시틸렌설포닐-3-니트로-1,2,4-트리아졸의 존재 하에 N6,2',3'-0-트리벤조일 크실로아데노신과 축합되어, 클로로포름 및 메탄올 (4 : 3)의 혼합물 내 p-톨루엔설폰산으로 처리하여 탈 트리틸화되는 완전하게 보호된 디뉴클레오시드포스포트리에스테르를 얻는다. 탈트리틸화 생성물 및 포스포트리에스테르 사이의 최종 축합 및 실리카 겔 크로마토그래피에 의한 정제는 완전하게 보호된 트리뉴클레오시드 디포스포트리에스테르(블록커 삼량체 코어)를 산출한다. 완전하게 탈블록킹된 삼량체 코어는, 블록킹된 삼량체 코어를 테트라메틸구아니다늄-신(syn)-4-니트로벤즈알콕시메이트, 수성 암모니아, 및 80% 아세트 산으로 처리하여 수득한다.
EHNA는 에반스 일동의 J. Am. Chem. Soc., 92 : 4751(1970)에 따라 제조된다. 그 다음, 본원에 기술된 보호, 축합 및 탈보호에 따라 적합하게 블록킹된 아데노신과 축합되어, 2',5'-EHNA-A-A를 형성할 수 있다. 같은 방식으로, 2',5'-C-C-dCF는 dCF 및 아데노신으로부터 제조된다. dCF의 제조 방법은 모두 본원에 참고로 인용되는, 미국 특허 제 3,923,785호 및 베이커 일동의 J. Am. Chem. Soc., 101 : 6127(1979)에 기술되어 있다. 이와 유사하게, 2-5A 동족체 5,6-디클로로 벤즈이미다질릴-(2',5')5,6-디클로로 벤즈이미다질릴-(2',5')5,6-디클로로벤즈이미다졸 리보사이드는 유사한 방법에 따라 상업적으로 구입가능한 5,6-디클로로벤즈이미다졸 리보사이드(시그마, Cat No. D5893)를 축합시켜 제조한다.
본 발명의 실행에 사용된 2',5'-올리고아데닐레이트 동족체의 제조는 하기 비-제한적 실시예에서 예시된다.
실시예 1
구조적으로 변형된 2',5'-아데닐레이트 삼량체 코어의 제조
일반적으로 하기와 같이 2',5'-아데닐레이트의 다양한 구조적으로 변형된 신규 삼량체 코어 동족체를 제조할 수 있다.
하기 일반식의 반응물질(Ⅰ)을 갖는 적합하게 블록킹된 아데노신-2'-포스포디에스테르 1 밀리몰을 카루바라, R.,울만, E., 및 프레이데러, W.,리비히 Ann. Chem., 2392(1981) 및 카루바라, R., 및 프레이데러, W., 테트라헤드론 Lett. 21, 4077(1980)의 방법에 따라 아데노신 또는 코르디세핀으로부터 제조했다. 적합하게 블록킹된 아데노신-2'-포스포디에스테르의 예들을 표 1에 기록된, 화합물 1 및 2에 의해 표시한다.
[표 1]
[표 2]
반응물질 (Ⅰ)을 하기 일반식의 반응물질 (Ⅱ)을 갖는 블록킹된 뉴클레오시드와 조합시켰다. 반응물질 (Ⅱ)을 표 2에 기록된 화합물 3 - 9 에 의해 예시한다.
N6-벤조일화아데노신을 피리딘 내 모노메톡시트리틸 클로라이드로 처리하여 화합물 3 및 9를 제조하여 5'-모노메톡시트리틸 유도체를 얻는다. 유도체를 피리딘 및 메틸이미다졸의 혼합물 내 t-부틸디메틸 실릴클로라이드로 처리하여 N6-벤조일-2',3'-디-0-t-부틸디메틸실릴-5'-모노메톡시트리틸아데노신을 형성한다. 아세트산에 의해 트리틸기를 제거하여 화합물 3을 생성시킨다. N6-벤조일화 투베르시딘으로 출발하여, 유사하게 화합물 9를 합성한다. 이 제조 방법은 카루바라 일동의 리비히 Ann. Chem. 2392(1981)에 기술된다.
N6-벤조일화-3'-데옥시아데노신을 모노메톡시 트리틸 클로라이드로 처리하여, N6-벤조일-5'-0-모노메톡시트리틸-3'-데옥시아데노신을 수득하고, 이를 벤조일 클로라이드를 사용한 2'-히드록실기의 벤조일화 후 30분 동안의 80% 아세트산을 사용한 탈트리틸화에 의해 N6-2'-0-디벤조일-3'-데옥시아데노신으로 전환시켜, 화합물 4를 제조한다. 이 제조 방법은 테트라 헤드론 Lett. 21, 4077(1980)에 기술된 바와 같다.
t-부틸디페닐 클로로실란을 이용하여 N6-벤조일 아데노신을 피리딘 내 5'-실릴화 뉴클레오시드로 전환시켜, 화합물 5를 제조한다. 5'-실릴화 뉴클레오시드를 트리에틸 오르토 아세테이트로 처리한 다음, CH3CN (0℃,1시간) 내 삼불화 붕소/디에틸 에트르 및 요오드화 나트륨으로 처리하여, 3'-요오도아세틸 유도체를 얻는다. 톨루엔(80℃,1시간) 내 트리부틸틴히드라이드로 처리하고, 테트라히드로푸란 내 암모늄 테트라부틸 플루오라이드로 탈실릴화시켜, 요오도 아세틸 유도체를 화합물 5로 전환시킨다. 이 제조 방법은 본원에 참고로 인용되는, 엥글, J. 의 테트라헤드론 Lett, 21, 4339(1980)에 기술된 바와 같다.
N6-벤조일 아데노신을 피리딘 내 트리틸 클로라이드로 처리하고, 2 시간 동안 환류시켜 화합물 6 및 7을 제조한다. 클로로포름으로 추출시켜 N6-벤조일-5'-트리틸아데노신을 분리시킨다. 황산 나트륨으로 건조시켜 클로로포름 상으로부터 물을 제거시킨다. 클로로포름/에탄올 내 예비 실리카 겔 박층 크로마토그래피에 의해 N6-벤조일-2',5'-디-0-트리틸아데노신 및 N6-벤조일-3',5'-디-0-트리틸아데노신을 분리시킨다. 벤젠 내 수산화 나트륨 현탁액 내에서 환류 하에, 각각 n-펜틸클로라이드 및 n-헵틸클로라이드로 분리된 화합물을 처리하여 화합물 6 및 7을 제조한다. 아세트산 내에서 환류시킨 다음 디에틸 에테르 및 물을 첨가시켜 용액을 중화시킨다. 반응 생성물을 실리카 겔 플레이트 상에서 클로로포름으로 추출시킨 다음, 클로로포름 : 메탄올 (4 : 1)로 박층 크로마토그래피에 의해 추출시킨다. 1 시간 동안 아세트산을 환류시키고, 냉각시키고, 디에틸 에테르로 추출시킨 다음, 농축 및 냉각시켜 트리틸 및 벤조일기를 제거시켜 결정질 화합물 6-7을 얻는다. 이 제조 방법은 본원에 참고로 인용되는, 블랭크, H, U., 프란, D., 마일스, A. 및 프레이데러, W., 저스러스 리비히 Ann. Chem. 742, 34(1970)에 따라 수행된다.
하기와 같이 화합물 8 을 제조했다. 1 밀리몰의 3'-아미노-3'-데옥시 아데노신을 디메틸 포름아미드 내 1.2 밀리몰의 1-메틸-3-니트로페닐에톡시카르복실이미다졸륨 클로라이드와 반응시킨 다음, 헥사메틸리 실라잔을 첨가시켜 2',5' 및 6-아미노 위치를 블록킹시켰다. 피리딘 내 1.1 밀리몰의 벤조일 클로라이드를 실온에 첨가시켜, 블록킹 시킨 N6-벤조일-2',5'-디실릴아데노신을 생성시켰다. 반응 혼합물을 메탄올-NH3에 쏟아부어 2' 및 5' 실릴기를 제거시켰다. 피리딘 내 MMTr 클로라이드와의 반응으로 5'-MMTr 유도체를 얻었다. 그 다음, 피리딘 및 1-메틸이미다졸의 혼합물 내 삼차-부틸디메틸실릴 클로라이드를 5'-MMTr 유도체에 첨가시키고, 실시예 1에서와 같이 5'-탈트리틸화시켜 화합물 8을 형성시켰다.
하기와 같이 일반식(Ⅲ)의 이량체를 갖는 중간물질을 생성시키기 위해 반응물질(Ⅰ) 및 (Ⅱ)를 조합시켰다. 0.95 밀리몰의 반응물질(Ⅱ) 및 축합 반응물질 2,4,6-트리이소프로필 벤젠설포닐 클로라이드(2 밀리몰) 및 1-메틸이미다졸(6밀리몰)을 조합시키고 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 30 ml의 수성 포스페이트 완충액 pH 7을 첨가시켜 반응을 중단시키고, 150 ml의 클로로포름으로 추출시켰다. 클로로포름층을 50 ml의 물로 두 번 세척하고, 약 1 내지 2시간 황산 나트륨에 걸쳐 건조시키고, 여과 시켰다. 클로로포름을 작은 부피로 증발시킨 다음, 정제를 위해 실리카 겔 컬럼(20 × 2.5cm)에 적용시켰다. 먼저 클로로포름으로, 그 다음 클로로포름/메탄올(99/1, v/v)로 크로마토그래피 시켜, 일반식(Ⅲ)의 이량체의 완전하게 보호된 디뉴클레오시드 모노포스포트리에스테르 생성물을 용출시켰다. 증발로 화합물 10 - 17 (표 3)에 의해 예시된 이량체(Ⅲ)의 고형 포말을 얻었다.
[표 3]
1밀리몰의 완전하게 보호된 이량체(Ⅲ)를 탈트리틸화를 위해 디클로로메탄/메탄올(4/1, v/v) 내 20ml의 2% p-톨루엔설폰산 내에서 30분 동안 실온에서 교반시켰다. 20ml 의 포스페이트 완충액 pH 7을 첨가시킨 다음, 200ml의 디클로로메탄으로 여러번 추출시켰다. 유기상을 물로 세척하고, 황산 나트륨상에서 건조시키고, 작은 부피로 증발시킨 다음, 정제를 위해 실리카겔 컬럼(20 × 2.5cm)에 적용시켰다. 클로로포름(400ml)에 뒤이어 클로로포룸/메탄올(98/2, v/v)로 용출시켰다. 주요 분류물을 증발시켜 화합물 18 - 25 (표 3)에 의해 예시된, 탈트리틸화 디뉴클레오시드모노포스포 트리에스테르(이량체(Ⅲ))의 80 내지 90% 수율을 얻었다.
일반식 26 - 34(표 4, 하기)에 의해 예시된 일반식(Ⅳ)의 삼량체를 갖는, 완전하게 보호된 2',5'-트리뉴클레오시드디포스포디트리에스테르를 하기와 같이 5'-탈트리틸화 이량체(Ⅲ)로부터 제조했다.
[표 4]
축합체로서 3 밀리몰의 2, 4, 6-트리이소프로필벤젠설포닐 클로라이드 및 9 밀리몰의 1-메틸이미다졸을 사용하여, 1.05 밀리몰의 출발 물질 아데노신-2'-포스포디에스테르(반응물질(Ⅰ))를 10ml의 무수 피리딘 내 1 밀리몰의 5'-탈트리틸화 이량체(Ⅲ)(화합물 18 - 25)과 축합시켰다. 상기와 같은 방식으로 2 시간 후에 실험을 수행했다. 포스페이트 완충액으로 켄칭시킨 다음, 디클로로메탄으로 추출시키고, 클로로포름 및 클로로포름/메탄올(99/1 내지 98/2, v/v) 내에서 실리카겔 크로마토그래피시켜, 크로마토그래피적으로 순수한 비정질분말로서, 70 내지 90%의 완전하게 보호된 삼량체(Ⅳ)(화합물 26 - 34)를 얻었다.
완전하게 보호된 2',5'-트리뉴클레오시드디포스포디트리에스테르, 삼량체(Ⅳ)를 하기와 같이 삼량체 코어(Ⅴ)로 탈보호시켰다.
0.01 밀리몰의 삼량체(Ⅴ)를 실온에서 16 시간 동안 2 ml의 디옥산 물(1/1, v/v) 내 0.73g의 p-니트로벤즈 알독심 및 0.07g의 테트라메틸구아니딘용액으로 처리하여 0-클로로페닐기를 탈블록킹시켰다. 건조상태로 증발시키고 물로 4번 동시증발시킨 후에, 20 ml의 농축시킨 수산화 암모늄을 첨가하고, 2 일 동안 실온에서 용액을 교반시켜, 아실기를 탈보호시켰다. 그 다음, 용액을 다시 증발시키고, 잔류물을 25 ml의 물 내에 용해시키고, 매번 10 ml의 클로로포름으로 4번 세척했다. 수충을 건조 상태로 증발시키고, 매번 10 ml의 무수피린딘으로 10 번 동시 증발시켰다. 그 다음, 잔류물을 16 시간 동안 무수 피리딘 내 2 ml의 무수 테트라부틸암모늄 플루오라이드 0.5M 용액으로 처리하여 t-부틸디메틸실릴기를 제거시켰다. 증발시킨 후에, 실온에서 6 시간동안 5 ml의 80% 아세트산으로 잔류물을 처리하여 p-메톡시트리틸기를 분리시켰다. 다시 용액을 증발시키고, 잔류물을 15 ml의 물에 용해시키고 매번 15 ml의 클로로포름으로 4번 추출시켰다. 수성층을 증발시킨 다음 아세트산의 냄새가 사라질 때까지 물로 여러 번 동시증발시켰다. 잔류물을 10 ml의 물 내에 용해시켜 0.001 내지 0.5M 변화정도의 중탄산 트리에틸암모늄으로 이온-교환 크로마토그래피를 위해 DEAE-세파덱스-A-25 컬럼(60 × 1cm)에 적용시켰다. 주요 분류물을 증발시킨 다음, 물로 여러번 동시증발시켰다. 삼량체 코어(Ⅴ), 완전하게 탈보호된 2',5'-트리뉴클레오시드디포스페이트를 수성 용액의 냉동건조로 분리시켜 70 내지 90%의 비정질 고형물을 얻었다. 화합물 35 - 45(표 5)에 의해 삼량체 코어(Ⅴ)를 예시하고 있다.
[표 5]
실시예 2
3'-0-t-부틸디메틸실릴 아데닐릴(2',5')3'-0-t-부틸 디메틸실릴아데닐릴(2',5')아데노신의 제조
2,5-A(Si)-A(Si)-A(화합물 40, 표 5)를 생산하기 위해, 테트라부틸암모늄 플루오라이드를 사용한 탈보호 처리단계를 생략하는 것을 제외하고, 실시예 1의 절차에 따라 0.01 밀리몰의 N6-벤조일-3'-0-t-부틸디메틸실릴(-5'-0-p-메톡시트리틸아데날릴(2'-0-클로로페닐-5') N6-벤조일-3'-0-t-부틸디메틸실릴)아데닐릴(2'-0-클로로페닐-5')N 6, 2'-0, 3'-0-트리벤조일아데노신(화합물 31, 표 4)을 처리했다.
실시예 3
아데닐릴 (2',5') 아데닐릴 (2',5')3'-아미노-3'-데옥시아데노신의 제조
p-니트로페닐에톡시카르보닐기를 β-제거방법에 있어서 테트라부틸 암모늄 플루오라이드에 의해 실릴기를 동시에 절단시키는 실시예 1의 탈보호 절차에 따라 0.01 밀리몰의 N6-벤조일-3'-0-t-부틸디메틸실릴-5'-0-p-메톡시트리틸아데닐릴(2'-0-클로로페닐-5')N6-벤조일-3'-0-t-부틸디메틸실릴아데닐릴(2'-0-클로로페닐-5)N6벤조일-2'-0-클로로페닐-5)N6-벤조일-2'-0-t-부틸디메틸실릴-3'-p-니트로페닐에톡시 카르보닐아미노-3'-데옥시아데노신(화합물 34, 표4)을 처리했다. 계속적인 탈카르복실화로 2',5'-A-A--3'-아미노(화합물 43, 표 5)를 얻는다.
실시예 4
5' 0-p-메톡시트리탈아데닐릴(2',5')아데닐릴(2',5')아데노신의 제조
카루바라, R., 울만, E. 및 프레이데러, W., 리비히 Ann. Chem., 2392(1981)의 방법에 따라 제조된 0.01 밀리몰의 N6-벤조일-3'-0-t-부틸디메틸실릴-5'-0-p-메톡시트리틸아데닐릴(2'-0-클로로페닐-5')N6-벤조일-3'-0-t-부틸디메틸실릴아데닐릴(2'-0-클로로페닐-5)N6,N6-2'-0, 3'-0-테트라벤조일아데노신을 아세트산 처리의 마지막 단계를 생략하는 것을 제외하고 실시예 1의 탈보호 절차에 따라 처리했다. 생성물, 2',5'-트리틸-A3(화합물 44, 표 5)를 분리시키고, DEAE-세파덱스 A-25 크로마토그래피에 의해 정제시키고, 냉동건조시켜 85% 수율로 분말로서 비정질의 순수 화합물 44를 형성시켰다.
실시예 5
제조
카루바라, R., 및 프레이데러, W., 테트라헤드론 Lett. 21, 4077(1980)의 방법에 따라 제조된 0.01 밀리몰의 N6, 2'-0-트리벤조일-3'-데옥시아데노신을 테트라부틸암모늄 플루오라이드 및 아세트산으로의 처리단계를 생략하는 것을 제외하고 실시예 1의 탈보호 절차에 따라 처리한다. 생성물, 2',5'-트리틸-C3(화합물 45, 표 5)을 분리시키고, DEAE-세파덱스 A-25 크로마토그래피에 의해 정제시키고, 냉동건조시켜 비정질의 순수한 화합물을 형성시켰다.
실시예 1에서와 같이 탈트리틸화시킨 다음, 디-p-니트로페닐-에틸포스포릴 클로라이드와 반응시켜 완전하게 블록킹시킨 2',5'-트리뉴클레오시드디포스포디트리에스테르로부터 본 발명의 삼량체 코어 분자의 5'-모노포스페이트를 제조할 수 있다. 실시예 1에 따라 추출, 크로마토그래피 및 탈블록킹시켜 5'-모노포스페이트 삼량체를 분리시킨다. 실시예 6의 방법으로 제조를 예시하고 있다.
실시예 6
5'-0-포스포틸-3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데노신의 제조
트리이소프로필벤젠설포닐-니트로-1, 2, 4-트리아졸리드로 반응생성물 N6-벤조일(2-트리에틸암모늄-0-클로로페닐포스포틸-5)-5'-토실-3'-데옥시아데노신 및 2'-시아노 에틸포스포틸-0-클로로페닐-3'-데옥시아데노신을 처리함에 의한, 디뉴클레오시드 포스포트리에스테르, N6-벤조일(2-0-클로로페닐포스포릴-5)3'-데옥시아데노신의 형성과 함께, 벤조일화, 5'-토실화, 및 2'-포스포릴화에 의해 3'-데옥시아데노신으로부터 0.1 밀리몰의N6-벤조일-3'-0-t-부틸디메틸실릴-5'-0-p-메톡시트리틸아데닐릴(2'-0-클로로페닐-5')N6-벤조일-3'-0-t-부틸디메틸실릴아데닐릴(2'-0-클로로페닐-5)N6, N6, 2'-0-트리벤조일-3'-데옥시아데노신을 제조한다. 이렇게 형성된 완전하게 블록킹시킨 이량체를 N6, 2'-0-디벤조일-3'-데옥시아데노신과 축합시켜 삼량체를 형성한다. 카루바라, R., 및 프레이데러, W., 테트라헤드론 Lett. 21, 4077(1980)의 방법에 따라 제조된 0.01 밀리몰의 상기 삼량체를 실온에서 30 분 동안 디클로로메탄/메탄올(7/3, v/v) 내 2% p-틀루엔설폰 산의 2 ml 용액으로 처리하여 p-메톡시트리틸기를 제거시켰다. 예비 플레이트 상에서 클로로포름/메탄올(95/5, v/v)을 사용하여 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜, 90% 수율의 5'-탈보호된 동족체를 얻었다.
상기 생성물을 1 ml 의 무수 피리딘 내에 용해시키고 실온에서 1 시간 동안 힘멜스바크, F., 및 프레이대러, W., 테트라헤드론 Lett. 23, 4973(1982)에 기술된 0.27 밀리몰의 디-p-니트로페닐에틸-포스포릴 클로라이드로 처리했다. 15 ml 의 클로로포름으로 희석시킨 후에, 반응 혼합물을 포스페이트 완충액 pH 7 로 3번 추출시켰다. 유기층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 증발시키고, 매번 10 ml 의 톨루엔으로 3 번 동시증류시켰다.
클로로포름/메탄올(9/1, v/v) 내 예비 플레이트 상의 실리카겔 크로마토 그래피에 의해 잔류물을 정제시켜, 비정질 고형물의 형태로 81%의 5'-0-디-p-니트로페닐에틸포스포릴-N6-벤조일-3'-데옥시아데닐릴-(2'-0-클로로페닐-5') N6-벤조일-3'-데옥시아데닐 (2'-0-클로로페닐-5') N6, N6, 2'-0-트리벤조일-3'-데옥시아데노신을 얻었다.
실시예 1의 탈보호 절차에 따라 0.01 밀리몰의 후자 물질을 0-니트로벤즈알독시메이트로 처리하여 0-클로로페닐 블록킹기를 제거시켰다. 건조상태로 증발시키고, 무수 피리딘으로 여러번 동시증발시킨 후에, 탈보호된 생성물을 무수 피리딘 내 디아자비시클로 [4.3.0 ]운데센의 0.5 M 용액 10 ml 내에 용해시키고 실온에서 36 시간 동안 교반시켜, β-제거에 의해 p-니트로페닐메틸기를 절단시켰다. 다시 용액을 증발시킨 다음, 실온에서 24 시간 동안 20 ml의 농축시킨 수산화 암모늄으로 처리했다. 주요 분류물의 DEAE-세파덱스 크로마토그래피 및 냉동건조에 의해 삼량체 코어 5'-모노포스페이트(화합물 46, 표 5) 의 정제 및 분리를 수행했다.
실시예 7 또는 8의 방법에 따라 본 발명의 사량체 코어분자를 제조할 수 있다.
실시예 7
아데닐릴 (2',5') 아데닐릴 (2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데노신의 제조
5 ml 의 무수 피리딘 내에 0.5 밀리몰의 하기 일반식 (Ⅵ)의 완전하게 보호된 화합물 47 및 0.4 밀리몰의 N6-벤조일-3'-데옥시아데닐릴 (2'-0-클로로페닐-5') N6, 2'-0-디벤조일-3'-데옥시아데노신 (화합물 24, 표3)을 용해시켰다.
1 밀리몰의 2,4,6-트리이소프로필 벤젠설포닐 클로라이드 및 3 밀리몰의 1-메틸이미다졸을 첨가시킨 다음, 실온에서 2 시간 동안 혼합물을 교반시켰다. 용액을 400 ml의 클로로포름으로 희석시키고, 400 ml 물로 두 번 세척한 다음, 유기층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 건조상태로 증발시켰다. 잔류물을 50 ml 의 톨루엔으로 두 번 동시증류 시켰다.
첫 번째는 클로로포름으로, 그 다음엔 99/1 내지 98/2 (v/v)의 변화도의 클로로포름/ 메탄올로 실리카 겔 컬럼 (20 × 2.5cm)상에서 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 증발시킴에 따라, 주요 분류물에서 80% 수율로 고형 포말로서 화합물 48 ( 표 6 ) 을 얻었다. 화합물 48은 하기 일반식 (Ⅶ)의 사량체 코어에 따른 완전하게 블록킹된 2',5'-테트라뉴클레오시드트리포스포트리트리에스테르이다.
실시예 1의 절차에 의해 블록킹기들의 탈보호를 수행하여 2',5'-A-A-C-C(화합물 49, 표 6)를 얻었다. DEAE-세파덱스 크로마토그래피, 증발 및 냉동 건조로 80% 수율로 비정질 고형물을 생성시켰다.
[표 6]
실시예 8
3'-데옥시아데닐릴 (2',5') 3'-데옥시아데닐린(2',5')
3'-데옥시아데닐릴 (2',5') 3'-데옥시아데노신의 제조
하기 일반식 (Ⅷ)의 반응물질에 따른 완전하게 블록킹된 2',5'-트리뉴클레오시드디포스포디트리에스테르, 0.1 밀리몰의 N6-벤조일-5'-0-p-메톡시트리틸-3'-데옥시아데닐릴 (2'-0-클로로페닐-5') N6-벤조일-3'-데옥시아데닐릴-(2'-0-클로로페닐-5') N6, N6, 2'-0-트리벤조일-3'-데옥시아데노신(화합물 50, 표 7),를 실온에서 30분 동안 디클로로 메탄 / 메탄올(4/1, v/v) 내 2 ml 의 p-틀루엔설폰 산의 2% 용액으로 처리했다.
20 ml의 포스페이트 완충액 pH 7을 첨가시켜, 반응을 중단시켰다. 용액을 200 ml의 클로로포름으로 여러번 추출시켰다. 유기층을 물로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 클로로포름/ 메탄올 (95/5, v/v) 내 예비 실리카 겔 플레이트 상에서 정제시키기 위해 작은 부피로 증발시켰다.
클로로포름/ 메탄올 (4/1, v/v)에 의해 주요 밴드를 용출시켜 증발시킴에 따라, 80% 수율로 5'-탈트리틸화 화합물 51 (표 7)을 얻었다.
그 다음, 0.05 밀리몰의 화합물 51(표 7)을 실온에서 2 시간 동안 0.2 밀리몰의 2,4,6-트리이소프로필벤젠-설포닐 클로라이드 및 0.6 밀리몰의 1-메틸이미다졸의 존재 하에 0.6 ml 의 무수피리딘 내 0.1 밀리몰의 피리디늄 N6-벤조일-5'-0-p-메톡시트리릴-3'-데옥시아데노신-2'-(2-0-클로로페닐)-포스페이트 ( 화합물 2, 표1 )와 축합시켰다. 용액을 100 ml의 클로로포름으로 희석시키고, 물로 두 번 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 클로로포름/ 메탄올 (95/5, v/v) 내 예비 실리카 겔 플레이트 상에서 분리시키기 위해 작은 부피로 증발시켰다. 클로로포름으로 주요 밴드를 용출시켜 84% 수율로 증발시킴에 따라, 비정질 고형물로서 완전하게 보호된, 2',5'-테트라뉴클레오시드 트리포스포 트리트리에스테르 화합물 52 ( 표 8, 하기)를 얻었다.
실시예 1 의 절차에 따라, DEAE-세파덱스 크로마토그래피 및 냉동건조에 의해 화합물 52의 블록킹기를 제거시켰다.
사량체 코어 2',5'-C-C-C-C (화합물 53, 표 8)을 70% 수율로 비정질 고형물로서 생성시켰다. 화합물 53의 구조는 일반식(Ⅸ)의 사량체 코어에 따른 것이다.
실시예 1에서 처럼, 디-p-니트로페닐에틸포스포릴 클로라이드와의 반응에 의해, 5'-탈트리틸화에 의해 완전히 블록킹된 2',5'-테트라뉴클레오시드 트리포스포트리에스테르로부터 본 발명의 사량체 코어 분자의 5'-0-모노포스페이트를 제조할 수 있다. 실시예 1 에 따른 추출, 크로마토그래피 및 탈블록킹으로 5'-0-모노포스페이트 사량체를 분리시킨다.
이 제조는 상기 실시예 6에 예시하고 있다.
[표 8]
1 ml의 디메틸포름아미드 및 0.5 mM의 1,1'- 카르보닐디이미다졸 내 무수 트리부틸암모늄 염으로서 0.1 mM의 모노포스포릴화 코어에 5 ml의 디메틸포름아미드 내에 용해된 0.5 mM의 트리부틸암모늄 피로포스페이트를 첨가시켜, 본 발명의 삼량체 및 사량체 코어 분자의 5'-디포스페이트 및 5'-트리포스페이트를 제조할 수 있다. 실온에서 20 시간 후에, 반응물질을 5 ml의 메탄올로 처리하고, 건조상태로 증발시키고, 2×20 cm DEAE 셀룰로우스 컬럼 상에서 크로마토그래피시켰다. 중탄산 트리에틸암모늄의 선상 변화도 ( pH 7.5에서 3.1 내 0 내지 0.4 M )에 따라 분리시킨다. 이는 본원에 참고로 인용되는, 호아드, D.E., 및 오트, D.G., J. Amer. Chem. Soc. 87' 1785-1788 (1965) 의 방법이다. 그 다음, DEAE-세파덱스 A25 및 세파덱스 G-10 크로마토그래피에 의해 5'-디포스페이트 및 5'-트리포스페이트를 정제시킬 수 있다.
2'-말단 뉴클레오시드에서의 2',5'-올리고아데닐테이트 분자, 아글리콘 및/ 또는 리보실 부분의 구조적 변형은, 바이러스 복제, 특히 HIV와 같은 레트로바이러스의 복제의 유력한 저해제인 분자를 제공했다. 이런 합성 분자는 자연적으로 생겨나는 2',5'-올리고아데닐레이트 분자보다 생물학적으로 활성적이며 신진대사적으로 안정하다.
본 발명의 화합물의 항레트로바이러스 활성은, 본 발명의 임의의 코어 화합물들 또는 그 5' 모노, - 디 -, 또는 트리포스페이트 대응물을 본 명세서 내 상기 화합물에 대해 공개된 효력을 갖는 하기 실험에 있어서 임의 동족체로 치환할 수 있는 하기 실험적 방법에 의해 나타낸다.
하기 실험에 따라, 2',5'-올리고아데닐레이트 동족체가 HIV-1 역전사 효소 활성을 저해하고, 시험관 내 HIV-1 감염으로부터 표적 세포를 보호하는 것으로 관찰된다.
실시예 9
시험관 내 HIV -1 역전사효소 활성의 저해
세포 및 바이러스 H 9 세포 ( 포포빅 일동, 과학 224:497-500(1984)) 내에 생성된 HIV-1 ( HILV-ⅢB )와 함께, 감염에 대한 표적세포로서 매우 HIV-1 투과성인 T-세포계 MT 2의 세포 (미요시 일동, 네이쳐 294:770-771(1981))를 사용했다.
균주 배양물을 성장시켜, 12% 가열 불활성화된 송아지 배아 혈청 및 50㎍의 겐타마이신/ ml을 함유하는 RPMI-1640 내에서 유지시키고 37℃에서 항온처리시켰다. 본 연구에서 감염 중복도(즉, 감염성 바이러스 입자/세포)로서 주어지는 바이러스 적정량을 몬터피오리 일동의 J. Clin. Microbiol. 26:231-235 (1987) 에 기술된 바에 따라 MT - 2 세포 상의 말단점 마이크로적정에 의해 얻은 50% 조직 배양 감염량 값으로부터 계산했다.
[역전사 효소 분석]
벡크만 JA-20 회전자 내에 20℃에서 4 시간 동안 18,000 r.p.m.으로 원심분리에 의해, 세포가 없는 (0.45 마이크로몰-여과된) 컨디셔닝된 H9/HTLV - ⅢB배양 상등액으로부터 바이러스를 농축시켰다. 50 ml의 컨디셔닝된 배양액으로부터 얻은 바이러스 펠릿을 17 mM의 트리스 - HCl (pH 7.8), 3 mM의 디티오트레이톨 ( DTT ), 55 mM의 KCl, 0.32%의 w/v 트리톤 X - 100, 및 33%의 글리세롤을 함유하는 0.5 mL의 용액 내에 용해시켰다.
이 바이러스 용해질을 -20℃에서 저장하여, HIV-1 역전사효소의 급원으로서 사용했다. 10㎕의 효소를 첨가시킨 후에, 40 mM의 트리스-HCl (pH 7.8), 4 mM의 DTT, 50 mM의 KCl, 10 mM의 MgCl2, 0.0325%의 w/v 트리톤 X - 100, 3 μM의 [33H] dTTP (80Ci / 밀리몰, NEN )- 및 폴리(A)(dT)15(2.5㎍/mL )주형- 프라이머를 함유하는 100 ㎕의 반응물 부피 내에서 역전사효소 반응을 수행했다.
반응물 부피가 일정하게 남아 있도록 하기 위해 물 부피로 조정한 후, 다양한 농도로 저해제를 첨가시켰다. 반응물을 습식 환경에서 1 시간 동안 37℃에서 항온 처리하고, 2 mL의 10% 무수 트리클로로아세트산을 첨가시켜 반응을 종결시켰다.
침전물을 0.45μ의 셀롤로우스-아세테이트 밀리포어( Millipore )여과기 상에 수집한 다음, 10 mL 의 3a 70B 수성 신틸런트( scintillant ) 내에 용해시켜, 백크만 LS 6800 액체 섬광 분석기를 사용하여 분 당 카운트를 정량했다.
감염분석 상기 몬테피오리에 의해 기술된 시험관 내 마이크로적정기 감염 분석에 의해 다양한 화합물의 항-HIV-1 활성을 감지하고 정량하였다. 간단히 요약하면, MT-2 세포를 삼중으로 효과인자의 2 배의 일련의 희석을 함유하는 96-웰 미세희석 플레이트에 첨가시켰다. 바이러스를 감염 중복도 1로 첨가시키고, 플레이트를 4 일 동안 습식 5% CO2/ 공기 환경 하에 37℃에서 항온 처리했다. 그 다음, 생존가능한 세포를 세포병리 효과의 측정으로 폴리-L-리진 부착성 세포의 필수 염료 (천연 적색) 흡수에 의해 정량시켰다. 이 때, 바이러스 대조 표준 웰 (효과인자 부재 하의 세포 및 바이러스)은 90%를 초과하는 세포 분해를 나타냈다. 보호 %는 세포 대조 표준 웰( 바이러스 및 효과인자 부재 하의 세포)과 바이러스 조절 웰 사이에 생기는 A540리딩 ( readings )의 범위에 의해 정의했다.
세포 독성 분석 바이러스를 빼고 비어있는 ( 블랭크 ) 웰로 바이러스 대조 표준 웰을 대치시키는 것을 제외하고, 상기와 같이 미세희석 플레이트 내에서 MT-2 세포를 사용하여 세포 독성을 정량했다.
3 일 향온처리시킨 후, 세포 대조표준 웰과 블랭크 웰 사이에 생기는 A540리딩의 범위를 사용하여, 시험 웰에서 생존할수 있는 세포%를 계산했다.
HIV-1 역전사효소 활성에 대한 2-5 A 동족체의 효과를 표 9 및 제 1 도에 나타낸다. 효소활성의 농도 의존성 저해도를 2',5'-A-C-A 이외에, 예컨대, 2',5'-코르디세핀 삼량체 코어( C3), 삼량체 5'-모노-, 디- 및 트리포스페이트 ( pC3,p2C3, p3C3), 2',5'-코르디세핀 사량체 5'-모노포스페이트(pC4)를 이용하여 관찰했다. ( 제 1 도 )
5,6 -디클로로벤즈이미다질 리보사이드 2',5'-삼량체가 가장 효과적인 저해제 ( 200 μM에서 73% 저해 )였으며, 그 다음엔 2',5'-코르디세핀 사량체 모노포스페이트 ( pC4) ( 200 μM에서 64% 저해 ) 였으며, 그 다음엔 2',5'-코르디세핀 삼량체 트리포스페이트 ( p3C3) ( 200 μM에서 62% 저해 ), 2',5'-A-C-A ( 200 μM에서 58% 저해 ) 및 2',5'-A-A-아라-A ( 200 μM에서 53% 저해 ) ( 표 9 ) 였다.
[표 9]
특정 2-5A 동족체를 사용한 감염 분석 결과를 제 2도에 나타낸다.
제 2도에 의하면, 8 내지 250 μM의 외생 농도에서의 2',5'-코르디세핀 삼량체 코어(Ⅰ) 및 5'-모토포스페이트(Ⅳ) 및 1 내지 8μM에서의 2'-5'-A-C-A (Ⅴ)에 대해 농도 의존성 항-HIV-1 활성을 관찰했다.
이 활성은 각각 미스매치된 dsRNA에 의해 제공된 최적 항-HIV-1 활성의 84%, 80% 및 81%이었다 ( 나타내지 않은 자료 ). 이는 미스매치된 dsRNA가 시험관 내 강력한 항-HIV 약품인 것을 고려할 때, 상당한 항-HIV 활성이다. [참조 문헌: 몬테피오티 일동, Proc. Natl. Acad. Sci. 미합중국 84: 2985-2989 (1987)] 12.5 내지 50 μM에서, 2',5'-pC4 ( Ⅵ )에 대해 덜 강력한 농도-의존성 항 HIV-1 활성이 관측되었다.
가장 효과적인 농도에서 C3및 A-C-A에 대해 어떠한 세포 독성도 관찰되지 않은 반면, 상기 몇몇 최적의 항 바이러스 농도에서 pC3및 pC4에 대해 약한 독성이 관측되었다.
이와 대조적으로, 코르디세핀 (Ⅰ) ( 0.31 내지 10μM ) 및 2',5'-올리고아데닐레이트 삼량체 코어(Ⅱ) (8 내지 250μM )는 어떠한 항 바이러스 활성도 나타내지 않았다. 2.5μM를 초과하는 외생 농도에서 코르디세핀에 대해 세포 독성이 관측된 반면, 시험된 2',5'-올리고아데닐레이트 삼량체 코어의 임의 농도에서도 어떠한 독성도 관찰되지 않았다. 2',5'-코르디세핀 사량체 5'-모노포스 페이트 (Ⅵ)가 시험관 내에 약한 항-HIV-1 활성을 나타낸 반면 ( 12.5 내지 50μM 의 외생 농도의 30 내지 38% 보호), 50μM를 초과하는 농도는 세포에 대해 독소적이었다. (자료는 나타나지 않음)
같은 감염 분석에서, 2',5'-크실로-A4는 150 μM 농도에서 100% 저해도 ( 75 μM 에서는 91% )를 제공하는 반면, 2',5'-A-A-A-3'-아미노는 75 μM에서 100% 저해도를 제공했다. 상기 투여량에서는 어떤 독성도 관찰되지 않았다.
다른 약품들과 조합되는 경우, 2-5 A 동족체는 하기 실험에 나타난 바와 같이, 항-HIV 활성에 대해 상승효과를 나타낼수 있다.
실시예 10
인터페론이 미스매치된 dsRNA 유도체 및 재조합 α-인터페론( rIFN-αA )의 시험과 내 항바이러스 활성을 강화하거나 없애는 2',5'- C3의 능력을 시험했다.
각 약품 단독 및 조합의 8 비독성 농도에서, 표준 체커판( checkerboard ) 분석을 수행했다.
초우 및 탈레이의 Adv. 효소 Regul. 22: 27-55(1984) 의 방법에 의해 자료를 분석했다. 간단히 말해 보호 % 값으로부터 조합된 약품 효과를 계산했다. 조합 지수 ( CI )를 투여-효과 곡선이 기울기로부터 계산하여 % 보호값, 또는 영향받은 부분에 대해 플롯팅시켰다. 1 미만의 CI 값은 상승 작용을 지시 하고 있다. 1을 초과하는 값은 길항 작용을 나타낸다. 1은 첨가를 나타낸다. 결과는 표 3에 나타난다. 2',5'-코르디세핀 삼량체 코어는 시험된 각 약품의 가장 효과적인 투여량에서 rIFN-αA 및 미스매치된 dsRMA 모두를 이용하여 상승작용을 나타냈다. 상승작용은 미스매치된 dsRNA에 대해서 보다 rIFN-αA에 대해 더 강하였다.
합성적 또는 분석적 절차에 대한 상기 참고 사항들이 본원에 인용되어 있다.
본 발명은 그 본질적인 취지 또는 사상으로부터 벗어나지 않고 다른 특정한 형태로 구체화될 수 있으며, 따라서, 본 발명의 범위를 나타내는 것으로서 상기 명세서 보다는 첨부된 청구범위를 참조하여야 할 것이다.
Claims (38)
- 하나 이상의 하기 일반식의 화합물 또는 제약학적으로 허용가능한 그 염 및 제약학적으로 허용가능한 담체로 구성되는, 만성 피로 증후군 또는 레트로바이러스성 복제를 가지는 바이러스의 감염에 대하여 포유동물을 치료하기 위한 제약학적 조성물:상기식에서 n 은 1 내지 8 의 정수이고,m 은 0, 1, 2 또는 3 이고,같거나 다른 R은 수소, 히드록시, 아미노, C1-C10알콕시 및 -OSi(CH3)2C(CH3)3로부터 선택되고, 단, 동일 화합물 내에서 모든 R기들이 히드록시일 수는 없다.
- 제 1항에 있어서, n 이 1 내지 3 인 조성물.
- 제 1항에 있어서, 2'-말단 뉴클레오티드의 R기가 히드록시 이외의 것인 조성물.
- 제 1항에 있어서, 레트로바이러스에 의한 감염 치료용 조성물.
- 제 4항에 있어서, HIV 감염 치료용 조성물.
- 제 2항에 있어서, 같거나 다른 각각의 R이 수소 및 히드록시로부터 선택되는 조성물.
- 제 6항에 있어서, 화합물이 3'-대옥시아데닐릴-(2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데노신, 그의 5' 모노-, 디- 및 트리포스페이트 및 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염의 군으로부터 선택되는 조성물.
- 제 7항에 있어서, 화합물이 5'-트리포스페이트 또는 제약학적으로 허용가능한 그 염으로 구성되는 조성물.
- 제 6항에 있어서, 화합물이 그의 5' -모노-, 디- 및 트리포스페이트, 및 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염의 군으로부터 선택되는 조성물.
- 제 6항에 있어서, 화합물이 아데닐릴 (2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데노신, 그의 5' -모노-, 디- 및 트리포스페이트, 및 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염의 군으로부터 선택되는 조성물.
- 제 6항에 있어서, 화합물이 아데닐릴(2',5')-아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데노신, 그의 5' -모노-, 디- 및 트리포스페이트, 및 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염의 군으로부터 선택되는 조성물.
- 제 6항에 있어서, 화합물이 3'-데옥시아데닐릴-(2',5') 아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데노신, 그의 5' -모노-, 디- 및 트리포스페이트, 및 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염의 군으로부터 선택되는 조성물.
- 제 6항에 있어서, 화합물이 아데닐릴 (2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5') 아데노신, 그의 5' -모노-, 디- 및 트리포스페이트, 및 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염의 군으로부터 선택되는 조성물.
- 제 13항에 있어서, 화합물이 아데닐릴 (2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5') 아데노신 또는 제약학적으로 허용가능한 그 염으로 구성되는 조성물.
- 제 6항에 있어서, 화합물이 아데닐릴 (2',5')아데닐릴 (2',5')3'-데옥시아데닐릴 (2',5')3'-데옥시아데노신, 그의 5' -모노-, 디- 및 트리포스페이트, 및 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염의 군으로부터 선택되는 조성물.
- 제 6항에 있어서, 화합물이 아데닐릴(2',5')아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데닐릴(2',5')아데노신, 그의 5' -모노-, 디- 및 트리포스페이트, 및 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염의 군으로부터 선택되는 조성물.
- 제 5항에 있어서, 같거나 다른 각각의 R이 히드록시 및 아미노로부터 선택되는 조성물.
- 제 17항에 있어서, 화합물이 아데닐릴 (2',5') 아데닐릴 (2',5')3'-아미노-3'-데옥시아데노신, 그의 5' -모노-, 디- 및 트리포스페이트, 및 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염의 군으로부터 선택되는 조성물.
- 제 18항에 있어서, 화합물이 아데닐릴 (2',5')아데닐릴(2',5')3'-아미노-3'-데옥시아데노신 또는 제약학적으로 허용가능한 그 염으로 구성되는 조성물.
- 하기 화합물들, 또는 그의 5' -모노-, 디- 및 트리포스페이트, 및 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염의 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물 및 제약학적으로 허용가능한 담체로 구성되는, 만성 피로 증후군 또는 레트로바이러스성 복제를 가지는 바이러스 감염에 대하여 포유동물을 치료하기 위한 제약학적 조성물:3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데닐릴-(2',5')-(R)-3-(2-데옥시-β-D-에리트로펜토푸라노실)-3,6,7,8-테트라히드로이미다조 [4,5-d] [1,3] 디아제핀-8-올,아데닐릴 (2',5') 아데닐릴 (2',5') 투베르시딘,투베르시딜릴 (2',5') 투베르시딜릴 (2',5')투베르시딘,아데닐릴(2',5')아데닐릴 (2',5') 9-β-D-아라비노푸라노실아데닌,이노시닐릴 (2',5')이노시닐릴(2',5')이노신,크실로아데닐릴 (2',5')크실로아데닐릴(2',5')크실로아데노신,크실로아데닐릴 (2',5')크실로아데닐릴 (2',5')크실로아데닐릴(2',5')크실로아데노신,에리트로-9 (2-히드록시-3-노닐)아데닐릴-(2',5')-아데닐릴-(2' 5')-아데닐릴(2',5') 아데노신,5,6-디클로로벤즈이미다질릴(2',5')5,6-디클로로벤즈이미다질릴(2',5') 5,6-디클로로벤즈이미다졸
- 제 20항에 있어서, 레트로바이러스에 의한 감염 치료용 조성물.
- 제 21항에 있어서, HIV 감염 치료용 조성물.
- 제 21항에 있어서, 화합물이 3'-데옥시아데닐릴 3'-데옥시아데닐릴(2',5')3'-데옥시아데닐릴-(2',5')-(R)-3-(2-데옥시-β-D-에리트로펜토푸라노실)-3,6,7,8-테트라히드로이미다조 [4,5-d] [1,3] 디아제핀-8-올, 그의 5' 모노-, 디- 또는 트리포스페이트 또는 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염으로 구성되는 조성물.
- 제 21항에 있어서, 화합물이 아데닐릴 (2',5')아데닐릴 (2',5')투베르시딘, 그의 5' 모노-, 디-, 또는 트리포스페이트, 또는 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염으로 구성되는 조성물.
- 제 21항에 있어서, 화합물이 아데닐릴(2',5')아데닐릴(2',5')9-β-D-아라비노푸라노실아데닌, 그의 5' 모노-, 디-, 또는 트리포스페이트, 또는 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염으로 구성되는 조성물.
- 제 21항에 있어서, 화합물이 이노시닐릴 (2',5')이노시닐릴 (2',5')이노신, 그의 5' 모노-, 디-, 또는 트리포스페이트, 또는 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염으로 구성되는 조성물.
- 제 21항에 있어서, 화합물이 크실로아데닐릴 (2',5')크실로아데닐릴 (2',5') 크실로아데노신, 그의 5' 모노-, 디-, 또는 트리포스페이트, 또는 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염으로 구성되는 조성물.
- 제 21항에 있어서, 화합물이 크실로아데닐릴 (2',5')크실로 아데닐릴(2',5')크실로아데닐릴(2',5')크실로아데노신, 그의 5' 모노-, 디-, 또는 트리포스페이트, 또는 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기물질들의 염으로 구성되는 조성물.
- 제 21항에 있어서, 화합물이 투베르시딜릴 (2',5') 투베르시딜릴 (2',5')투베르시딘, 그의 5' 모노-, 디-, 또는 트리포스페이트, 또는 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염으로 구성되는 조성물.
- 제 21항에 있어서, 화합물이 에리트로-9(2-히드록시-3-노닐)아데닐릴 (2',5')아데닐릴 (2' 5')아데닐릴 (2',5')아데노신, 그의 5' 모노-, 디-, 또는 트리포스페이트, 또는 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염으로 구성되는 조성물.
- 제 21항에 있어서, 화합물이 5,6-디클로로벤즈이미다질릴 (2',5')5,6-디클로로벤즈이미다질릴(2',5')5,6-디클로로벤즈이미다졸 리보사이드, 그의 5' 모노-, 디-, 또는 트리포스페이트, 또는 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염으로 구성되는 조성물.
- 제 6항에 있어서, 화합물의 3'-데옥시아데닐릴 (2',5')3'-데옥시아데닐릴 (2',5')아데노신, 그의 5' 모노-, 디- 및 트리포스페이트, 또는 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염의 군으로부터 선택되는 조성물.
- 에리트로-9(2-히드록시-3-노닐)아데닐릴(2',5')-아데닐릴 (2' 5') 아데노신, 그의 5' 모노-, 디-, 또는 트리포스페이트 또는 제약학적으로 허용가능한 임의의 상기 물질들의 염.
- 5,6-디클로로벤즈이미다질릴 (2',5') 5,6-디클로로벤즈이미다질릴(2',5') 5,6-디클로로벤즈이미다졸 리보사이드, 그의 5' 모노-, 디-, 또는 트리포스페이트, 또는 제약학적으로 허용가능한 상기 물질들의 염.
- 제 1항에 있어서, 만성 바이러스 감염 치료용 조성물.
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- 제 1항에 있어서, 만성 피로 증후군 치료용 조성물.
- 제 21항에 있어서, 만성 피로 증후군 치료용 조성물.
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