JPH07503975A

JPH07503975A - 誘引物質に応答するヒトｔ細胞中で用いるためのヒト乳頭腫ウイルスのペプチド

Info

Publication number: JPH07503975A
Application number: JP5519145A
Authority: JP
Inventors: カスト，ヴィベ　マルティン; メリーフ，コルネリス　ヨセフ　マリア; セッテ，アレスサンドロ　ディー．; シドニー，ジョン　シー．
Original assignee: リュクスウニヴェルシテート　レイデン
Priority date: 1992-05-05
Filing date: 1993-05-04
Publication date: 1995-04-27
Anticipated expiration: 2020-01-12
Also published as: DE69330988D1; AU4358693A; IL105554A0; DK0593754T3; DE69330988T2; ES2169043T3; AU675794B2; US7364741B1; WO1993022338A1; EP0593754A1; JP3609405B2; NO940043D0; IL105554A; PT593754E; EP0593754B1; FI940054A0; CA2112798A1; ATE207495T1; NZ253330A; AU7197096A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】発明の名称誘引物質に応答するヒトＴｉ１ｌ胞中で用いるためのヒト乳頭腫ウィルスのペプチド発明の分野本発明はヒト乳頭腫ウィルス（Ｈｕ寵ａｎ　ＰａｐｉｌｌｏｍａＶｉｒｕｓ：ＨＰＶ）の蛋白質から誘導される新しいペプチドと頚部癌のようなヒト乳頭腫ウィルスに関連する病気に対するヒト個人の予防と治療のための薬剤組成物にそれらを用いる方法に関する。

発明の背景ヒト乳頭腫ウィルス（ＨＰＶ）は、世界的にみて５番目に多い癌であり、婦人の癌による死亡の第２番目の原因である頚部癌の病因に関係している。また、他のＨＰＶ関連の癌を考慮に入れた場合、癌による世界的にみた死亡数の１０％までがＨＰＶに関係している。ＨＰＶは、約８キロベースの標準二重環状ＤＮＡウィルスである。現在まで６０以上の遺伝子型について述べられてきており、その内のいくつかは癌に関係がある。

ＨＰＶ−ＤＮＡは、頚部異形成障害および頚部癌腫に認められ、同障害が悪性に進展する場合、ＨＰＶの確率は７９％まで増大する。頚部癌腫に関連した最も重要なＨＰＶのタイプはＨＰＶ１６とＨＰＶ１８であり、この内、ＨＰＶ１６だけでＨＰＶが原因である可能性のある頚部癌腫の５０％以上の原因となっている。

いくつかのＨＰＶのＤＮＡが配列された。ＤＮＡオープンリーディングクレームは初期領域（Ｅ）と後期領域（Ｌ）に分割することができる。Ｅ領域は、ウィルスの複製とトランスフォーメーションに必要な蛋白質についてのコーディングである。

Ｌ領域は、ウィルスキャプシド蛋白質をコード化する。Ｅ６およびＥ７蛋白質は、ＨＰＶ−誘発異常細胞増殖の病因に関与しており、これらの遺伝子は、ＨＰＶ感染に関連した頚部癌から採取された組織または腫瘍細胞において発現される。

さらにＨＰＶ１６とＨＰＶ１８のＥ６とＥ７の遺伝子は、ＨＰＶ感染によって引き起こされた細胞の増殖の刺激の少なくとも一部がＥ６およびＥ７ウイルス蛋白質によるものであることを示している。他のＨＰＶ遺伝子の不存在下で、細胞培養において上皮細胞トランスフォーメーションを誘発することができる。

細胞障害性Ｔリンパ球（Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ＴＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　：　ＣＴ　Ｌ　）は、ウィルス感染に対する抵抗性およびウィルス誘発腫瘍に対する免疫監視において非常に重要である（考察：　Ｋａｓｔ　ａｎｄｌｌｅｌｉｅｆによる。　１９９１）　、最近になり、いくつかのウィルス系において、抗原特有のＣＴＬによって認識されるペプチドによるワクチン接種はラットにおいて致死ウィルス感染を防止し、腫瘍の成長を遅らせることが示されたく考察：　Ｋａｓｔ　ａｎｄｌｌｅｌｉｅｆ、１９９１およびＲｂｅｉｎｈｏｌｄｓｓｔｏｎ　Ｌｊｕｎｇｇｒｅｎ　ｅｔａｌ、、１９９２）　。

我々は、Ｐ、Ｃｒｅｓｓｗｅｌｌが発生させ、供給した抗原プロセシング欠陥細胞系１７４ＣＥＭ、Ｔ２を用いて、ＭＨＣクラスＩの分子の溝に結合するウィルスペプチドの固定に成功した（　５ａ１ｊｅｒ　ａｎｄＣｒｅｓｓｗｅｌｌ、１９８６参照）、この細胞系はヒトのＭＨＣクラスＩ　ＨＬＡ−Ａ２．１およびＨＬＡ−Ｂ５対立遺伝子を表しており、この内、ＨＬＡ−Ａ２．１分子だけが外性的に付加されたペプチドにより細胞表面上で安定化することができる部分的に中空で不安定な分子として発現される。ペプチドによる培養が、このＭＨＣ分子の細胞表面発現の増加につながるならば、このことは、このペプチドがＨＬＡ−Ａ２．１の溝に結合し、従って、ＣＴＬにより認識される候補である可能性があるということを示唆している。ＨＬＡ−Ａ２．１分子は西ヨーロッパコーカソイド人種に最も多く存在するＨＬＡ分子である。この人種の約５０％がこの対立遺伝子を発現する。ＨＰＶ１６およびＨＰ　Ｖ　１８　（Ｓｅｅｄｏｒｆ　ｅｔ　ａｌ、、１９ｇ５）のＥ６およびＥ７蛋白質のアミノ酸配列を用いて、全Ｅ６およびＥ７領域に及んでいる可能性のあるノナペプチド（すなわち、９アミノ酸長ペプチド）をすべて我々は発生させた。各アミノ酸をこれらの９量体ペプチドのための出発アミノ酸として用いた。各ペプチドに各々、上記の試験を行い、ＨＬＡ −Ａ２゜１分子に結合する能力を決定した。ＨＰＶ１６に関しては、上記の試験において、我々はＨＬＡ−Ａ２．１分子に結合したペプチドを全部でＨＰＶ１６　Ｅ６領域において１０ペプチド、ＨＰＶ　１６　Ｅ７領域において８ペプチドを同定した。ＨＰＶ１８に関しテハ、全部でＨＰＶ１８　Ｅ６領域で９ペプチドおよびＨＰＶ１８　Ｅ７領域で５ペプチドがＨＬＡ−Ａ２．１分子に結合すると上記の試験において同定した。これは、ＨＬＡ−Ａ２．１陽性のヒトにワクチンとしてＨＰＶ１６とＨＰＶ１８が重要な候補ペプチドであることが同定されたことを示唆している。

第２の方法を用いて、さらに少しＨＰＶペプチドを結合するＨＬＡ−Ａ２．１のリストの拡大と、他のＨＬＡ分子、すなわちＨＬＡ−ＡＩ、ＨＬＡ−Ａ３．２．ＨＬＡ−Ａｌ　１．２およびＨＬＡ−Ａ２４の分子に結合するＨＰＶ１６　Ｅ６およびＥ７ペプチドの決定に成功した。前記第２の方法は精製クラスＩの分子および放射性同位元素を使って識別された一致ペプチドを用いた競合免疫化学ペプチド−ＭＨＣ結合試験から成る。

発明の概要本発明の目的は、頚部癌および／または腫瘍と、他のＨＰＶに関連する病気、特にＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８に関連する病気の予防および治療に用いうる合成ペプチドを提供することである。

本発明の他の目的は、頚部癌および／または腺腫と他のＨＰＶに関連する病気、特にＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８に関連する病気の予防と治療の方法を提供することである。

さらに本発明の目的は、頚部癌および／または腺腫と、他のＨＰＶ関連の病気、特にＨＰＶ−１６および／またはＨＰＶ１８に関連の病気の予防と治療に用いられる薬剤組成物を提供することである。

この発明は、ヒト乳頭腫ウィルス（ＨＰＶ）の蛋白質から誘導されたアミノ酸配列を有するペプチドであり、前記アミノ酸配列がヒトの主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラス１分子に結合する能力を有するペプチドを提供する。

また本発明は、ＨＬＡ−Ａ２．１．ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ３．２　、ＨＬＡ −Ａ１１．２またはＨＬＡ−Ａ２４蛋白質のようなＨＬＡ分子に結合する能力があるために、ＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８に対して予防的または治療的Ｔ細胞応答を誘導することができるヒトワクチン中に含まれるべき候補ペプチドのＨＰＶ１６とＨＰＶ１８とのＥ６およびＥ７領域のアミノ酸配列から誘導される特別のペプチドも提供する。

本発明の新しいペプチドは、識別用具としての薬剤組成物およびＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８に起因する病気の予防と治療またはＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８の感染を抑制する効果のある他の条件に有用である。

本発明の好適な実施例の中で、前記アミノ酸配列はＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導される１本発明の他の好適な実施例では、前記アミノ酸配列は、ＨＰＶ１８の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導される。

好ましくは、前記アミノ酸配列は、ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２．１に結合する能力を有する。

さらに詳細には本発明は、ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導されるアミノ酸配列を有するペプチドであり、前記アミノ酸配列がヒトのＭＨＣクラス■ 対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２．１に結合する能力を有し、次のものから成るグループから忍ばれたものであるペプチドを提供する；八１１ＦＱＤＰＱＥＲ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基７〜１５）ＫＬＰＱＬＣ置　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基１８〜２６）ＱＬＣ置ＱＴＴ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基２１〜２９）ＬＣＴＲＬＱＴＴＩ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基２２〜３０）ＥＬＱＴＴＩＨＤＩ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基２５〜３３）ＬＱＴＴＩＨＤＩＩ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基２６〜３４）ＴＩＨＤＩＩＬＥＣ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基２９〜３７）ＩＨＤＩＩＬＥＣＶ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６（７）残基３０〜３８）ＣＶＹＣＫＱＱＬＬ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基３７〜４５）ＦＡＦＲＤＬＣＩＶ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基５２〜６０）ＫＩＳＥＹＲＩＩＹＣ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基７９〜８７）ＰＬＣＤＬＬＩＲＣ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基１０２〜１１０）ＴＬＨＥｎｌＬＤＬ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基７〜１５）ｎｌＬＤＬＱＰＦ、Ｔ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基１１〜１９）１１ＬＤＬＱＰＥＴＴ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基１２〜２０）ＲＬＣＶＱＳＴＨＶ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基６６〜７４）ＴＬＥＤＬＬＩＩＧＴ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基７８〜８６）ＬＬＭＧＴＬＧｎ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基８２〜９０）ＧＴＬＧＩＶＣＰＩ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基８５〜９３）ＴＬＧＩＶＣＰＩＣ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基８６〜９４）ヒトＭＨＣクラス■対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２゜１に結合しうるこれらのアミノ酸配列のいずれか１つのフラグメント、同質体、イソ体、誘導体、遺伝的変異体、または保存変異体。

さらに詳しくは本発明は、ＨＰＶ１８の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導されるアミノ酸配列を有するペプチドであり、前記アミノ酸配列がヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２．１に結合する能力を有し、次のものから成るグループから選ばれたものであるペプチドを提供する：ＫＬＰＤＬＣＴＲＬ　（ＨＰ　Ｖ　１８蛋白質Ｅ６の残基１３〜２１）ＳＬＱＤＩＥＩＴＣ（ＨＰ　Ｖ　１８蛋白質Ｅ６の残基２４〜３２）ＬＱＤＩＥＩＴＣＶ　（ＨＰ　Ｖ　１８蛋白質Ｅ６の残基２５〜３３）ＥＩＴＣＶＹＣＫＴ　（ＨＰ　Ｖ　１８蛋白質Ｅ６の残基２９〜３７）ＫＴＶＬＥＬＴＥＶ　（ＨＰ　Ｖ　１８蛋白質Ｅ６ｉ７）残基３６〜４４）ＥＬＴＥＶＰＥＦＡ　（ＨＰ　Ｖ　１８蛋白質Ｅ６の残基４０〜４８）ＦＡＦＫＤＬＦＶＶ　（ＨＰ　Ｖ　１８蛋白質Ｅ６の残基４７〜５５）ＤＴＬＥＫＬＴＮＴ　（ＨＰ　Ｖ　１８蛋白質Ｅ６の残基８６〜９６）ＬＴＮＴＧＬＹＮＬ　（ＨＰ　Ｖ　１８蛋白質Ｅ６の残基９３〜１０１）ＴＬＱＤＩＶＬＨＬ　（ＨＰ　Ｖ　１８蛋白質Ｅ７の残基７〜１５）ＦＱＱＬＦＬＮＴＬ　（ＨＰ　Ｖ　１８蛋白質Ｅ７の残基８６〜９４）ＱＬＦＬＮＴＬＳＦ　（ＨＰ　Ｖ　１８蛋白質Ｅ７の残基８８〜９６）ＬＦＬＮＴＬＳＦＶ　（ＨＰ　Ｖ　１８蛋白質Ｅ７の残基８９〜９７）ＬＳＦＶＣＰＷＣ＾（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ蛋白質基７４〜１０２）ヒトＭ）（Ｃクラスエ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２゜１に結合しうるこれらのアミノ酸配列のいずれか１つのフラグメント、同質体、イソ体、誘導体、遺伝的変異体、または保存変異体。

本発明の他の好適な実施例に従えば、前記アミノ酸配列は、ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ１に結合する能力を有する。

さらに詳細には本発明は、ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導されるアミノ酸配列を有するペプチドであり、前記アミノ酸配列がヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａｌに結合する能力を有し、次のものから成るグループ力）ら選ばれたものであるペプチドを提供する；ＹＩＩＤＧＮＰＹＡＶ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基６１〜６９）１１ＴＧＲＣ）Ｉｓｃｃ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基１３９〜１４７）１１ＳＣＣＲＳＳＲＴ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基１４４〜１５２）ＴＴＤＬＹＣＹＥＱ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基１９〜２７）ＥＩＤＧＰＡＧＱＡ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基３７〜４５）ＨＶＤＩＲＴＬ）、Ｄ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基７３〜８１）ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａｌに結合しうるこれらのアミノ酸配列のいずれか１つのフラグメント、同質体、イソ体、誘導体、遺伝的変異体、または保存変異体。

本発明の他の好適な実施例に従えば、前記アミノ酸配列は、ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ３．２に結合する能力を有する。

さらに詳細には本発明は、ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導されるアミノ酸配列を有するペプチドであり、前記アミノ酸配列がヒトのＭＨＣクラスｌ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ３．２に結合する能力を有し、次のものから成るグループから選ばれたものであるペプチドを提供する；ＡＩＩＩＦＱＤＰＱＥＲ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基７〜１５）１１ＬＥＣＶＹＣＫ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基３３〜４１）ＣＶＹＣＫＱＱＬＬ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基３７〜４５）ＶＹＣＫＱＱＬＬＲ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基３８〜４６）ＱＱＬＬＲＲＥＶＹ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基４２〜５０）ＩＶＹＲＤＧＮＰＹ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基５９〜６７）ＹＡＶＣＤＫＣＬＫ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基６７〜７５）ＡＶＣＤＫＣＬＫＦ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基６８〜７６）ＶＣＤＫＣＬＫＦＹ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基６９〜７７）ＫＦＹＳＫＩＳＥＹ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基７５〜８３）ＫＩＳＥＹＲＨＹＣ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基７９〜８７）ｌ５ＥＹＩＩＩＩＹＣＹ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基８０〜８８）ＲＩＩＹＣＹＳＬＹＧ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基８４〜９２）ＳＬＹＧＴＴＬＥＱ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基８９〜９７）ＴＴＬＥＱＱＹＮＫ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基９３〜１０１）ＱＱＹＮＫＰＬＣＩ）　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白賀Ｅ６の残基９７〜１０５）ＬＩＲＣＩＮＣＱに（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ蛋白質基６０７〜１１５））ＩＬＤＫＫＱＲＦＦＩ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基１２５〜１３３）Ｃ菖５ＣＣＲ３ＳＲ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基１４３〜１５１）ＳＣＣＲ３ＳＲＴＲ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基１４５〜１５３）ＣＣＲ３ＳＲＴＲＲ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基１４６〜１５４）ＨＹＮＩＶＴＦＣＣ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基５１〜５９）ＹＮＩＶＴＦＣＣに（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ蛋白質基７２〜６０）ＣＣＫＣＤＳＴＬＲ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基５８〜６６）ＫＣＤＳＴＬＲＬＣ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基６０〜６８〉ヒトＭ）ＩＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ３゜２に結合しうるこれらのアミノ酸配列のいずれか１つの７ラグメント、同質体、イソ体、誘導体、遺伝的変異体、または保存変異体。

本発明の他の好適な実施例に従えば、前記アミノ酸配列は、ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ１１．２に結合する能力を有する。

さらに詳細には本発明は、ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６まなはＲ７から誘導されるアミノ酸配列を有するペプチドであり、前記アミノ酸配列がヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａｌ　１．２に結合する能力を有し、次のものから成るグループから選ばれたものであるペプチドを提供する；八にＦＱＤＰＱＥＲ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基７〜１５）１１ＬＥＣＶＹＣＫ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基３３〜４１）ＣＶＹＣＫＱＱＬＬ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基３７〜４５）Ｖｔ’ＣＫＱＱｌ、ＬＲ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基３８〜４６ンＱＱＬＬＲＲＥＶＹ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基４２〜５ｏ）ＩＶＹＲＤＧＮＰＹ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基５９〜６７）ＹＡＶＣＤＫＣＩＪ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基６７〜７５）ＡＶＣＤＫＣＩＪＦ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基６８〜７６）ＶＣＤＫＣＩＪＦＹ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基６９〜７７）ＫＩＳＥＹＲＨＹＣ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基７９〜８７）ＩＳＥＹＲＨＹＣＹ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基８ｏ〜８８）ＬＩＲＣＩＮＣＱＫ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基１０７〜１１５）ＴＧＲＣＭＳＣＣＲ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６（１７）残基１４ｏ〜１４８）Ｃ菖５ＣＣＲ３ＳＲ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基１４３〜１５１）ＳＣＣＲ３ＳＲＴＲ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ６の残基１４５〜１５３）ＨＹＮＩＶＴＰＣＣ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基５１〜５９）ＹＮＩＶＴＦＣＣＫ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基５２〜６ｏ）ＣＣＫＣＤＳＴＬＲ（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基５８〜６６）ＶＣＰＩＣＳＱＫＰ　（ＨＰ　Ｖ　１６蛋白質Ｅ７の残基９ｏ〜９８）ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ　１１　。

２に結合しうるこれらのアミノ酸配列のいずれが１つのフラグメント、同質体、イソ体、誘導体、遺伝的変異体、または保存変異体。

本発明の他の好適な実施例に従えば、前記アミノ酸配列は、ヒトＭＨＣクラスエ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２４に結合する能力を有する。

さらに詳細には本発明は、ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＲ７から誘導されるアミノ酸配列を有するペプチドであり、前記アミノ酸配列がヒトのＭＨＣクラス■ 対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２４に結合する能力を有し、次の物質から成るグループから選ばれたものであるペプチドを提供する；１１ＨＱＫＲＴＬＭＰ　（ＨＰ　Ｖ蛋白質Ｅ６の残基１〜９）ＬＱＴＴＩＨＤＩ　Ｉ　（ＨＰ　Ｖ蛋白質Ｅ６の残基２６〜３４）ＶＹＣＫＱＱＬＬＲ（ＨＰ　Ｖ蛋白質Ｅ６の残基３８〜４６）ＬＬＲＲＥＶＹＤＦ　（ＨＰ　Ｖ蛋白質Ｅ６の残基４４〜５２）ＶＹＤＦＡＦＲＤＬ　（ＨＰ　Ｖ蛋白質Ｅ６の残基４９〜５７）ＰＹＡＶＣＤＫＣＬ　（ＨＰ　Ｖ！白質Ｅ６の残基６６〜７４）ＫＣｌ、ＫＦＹＳＫ［（ＨＰ　Ｖ蛋白質Ｅ６の残基７２〜８０）ＥＹＲＩＩＹＣＹＳＬ　（ＨＰ　Ｖ蛋白質Ｅ６の残基８２〜９０）ＨＹＣＹＳＬＹＧＴ　（ＨＰ　Ｖ蛋白質Ｅ６の残基８５〜９３）ＣＹＳＬＹＧＴＴＬ　（ＨＰ　Ｖ蛋白質Ｅ６の残基８７〜９５）ＲＦＨＮＩＲＧＲＷ　（ＨＰ　Ｖ蛋白質Ｅ６の残基１３１〜１３９）ＲＡＩＩＹＮＩＶＴＰ　（ＨＰ　Ｖ蛋白質Ｅ７の残基４９〜５７）ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２４に結合しうるこれらのアミノ酸配列のいずれが１つのフラグメント、同質体、イソ体、誘導体、遺伝的変異体、または保存変異体。

本発明はさらに、予防的、治療的に効果のある量の前記本発明に従うペプチドを含む薬剤組成物、薬理的に有効な担体、希釈剤、賦形剤およびアジュバントを提供する。好ましくは、前記薬剤組成物はＨＰＶに有効なＴ細胞応答、特にＨＬＡクラスＩ制限ＣＤ８”細胞毒Ｔ細胞応答を誘引しうる前記本発明に従うペプチドを含む。

加えて本発明は、頚部癌と他のＨＰＶ関連の病気を予防し、治療するのに効果的な量の本発明に従ったペプチド、さらに詳細には、ＨＰＶに対し有効なＴ細胞応答、特にＨＬＡクラスＩ制限ＣＤ８°細胞毒Ｔ細胞応答を誘引しうる免疫原的形状の本発明に従ったペプチドをヒト個人に投与することを有するヒトの頚部癌とＨＰＶ関連の病気の予防または治療の方法を提供する。

図面の簡単な説明図１は、１７４ＣＥＭ、Ｔ２細胞上に発現されたＨＬＡ−Ａ２．１と２４０ＨＰＶ１６　Ｒ６およびＲ７ノナペプチドの結合の分析結果である。

（ペプチドを加えない）バックグラウンド蛍光しベルは、７０の任意の平均蛍光レベルに設定された。ペプチドの結合は、バックグランド蛍光レベルの２倍に達したとき正であるとみなされた。１８の結合ペプチドは、１〜１８と番号を付され、この番号は表１中の番号に相当する。

図２は、１７４ＣＥＭ、Ｔ２細胞上に発現されたＨＬＡ−Ａ２．１と２４７ＨＰＶ１８　Ｅ６およびＥ７ノナペプチドの結合の分析結果である。

（ペプチドを加えない）バックグラウンド蛍光レベルは、７０の任意の平均蛍光レベルに設定された。ペプチドの結合は、バックグラウンド蛍光レベルの２倍に達したとき正であるとみなされた。

１４の結合ペプチドは、１〜１４と番号を付され、この番号は表■中の番号に相当する。

図３は、ＨＰＶ１６ベブチド（ペプチドはＭＬＤＬＱＰＥＴＴ、表１中のＮｏ、１３　配列同定番号１５）に対する、健康なドナーの血液のし１へのリンパ球の第１ＣＴＬ応答を示すクラ７である。

バルク−ＣＴＬの多量培養、クローン＝極限希釈からのＣＴＬクローン、ｉｒｒ、ペプチド＝関連性のないペプチド（対照）、Ｅ／Ｔ比−エフェクタとターゲットとの比発明の詳細な説明本発明は、ＨＰＶの蛋白質がら誘導される、ヒ）ＭＨＣクラスＩ分子に結合し得るアミノ酸配列を有するペプチドを示すものである。他のウィルスに対する我々自身の経験に顧みれば、ＨＬＡクラスＩ制限ＣＤ８°細胞ＩＴ細砲を誘導するための最良の候補者はペプチドと最も強く結合することである。

本発明の最も好ましい実施例は、ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＥ７がら誘導されるアミノ酸配列を有するペプチドであり、前記アミノ酸配列は、ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２．１に結合し得るペプチドに間するものである。

特にこのようなペプチドはＨＰＶ１６の記載の領域がら誘導される次のアミノ酸配列から成る（表Ｉ参照、アミノ酸は、アミノ酸の１文字コードによって識別される）。

表Ｉ　ＨＬＡ−Ａ２．１に結合するＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６とＥ７とから誘導されるベブチドベフチＦ番　アミノ　ｊ　蛋白　（領域）　同　番号−ＡＭＦＱＤＰＱＥＲＥ６　（残基７〜１５）　１１　ＫＬＰＱＬＣ置　Ｅ　６　（残基１８〜２６）　２２　ＱＬＣ置ＱＴＴ　Ｅ　６　（残基２１〜２９）　３３　ＬＣ置ＬＱＴＴｌ　Ｅ６　（残基２２〜３０）　４４　ＥＬＱＴＴＩＨＤＩ　Ｅ６　（残基２５〜３３　）　５５　ＬＱＴＴｌ）ＩＤ夏Ｉ　Ｅ６（残基２６〜３４）　６６　ＴＩＩＩＤＩＩｕＣＥ６　（残基２９〜３７）　７７　１）ＩＤＩＩＬＥＣＶ　Ｅ６　（残基３０〜３８）　８８　ＣＶＹＣＫＱＱＬＬ　Ｅ６　（残基３７〜４５）　９−　ＦＡＦＲＤＬＣＩＶ　Ｅ６　（残基５２〜６０）１０９　にｌ５ＥＹＲ［ｌＹＣＥ６　（残基７９〜８７）　１１１Ｑ　ＰＬＣＩ）ＬＬＩＲＣＥ６　（残基１０２〜１１０）　１２ＩＩ　ＴＬＨＥＹＭＬＯＬ　Ｅ７　（残基７〜１５）　１３１２　Ｙ賛ＬＤＬＱＰＥＴ　Ｅ７　（残基１１〜１９）　１４１３　ＭＬＤＬＱＰＥＴＴ　Ｅ７　（残基１２〜２０）　１５１４　ＲＬＣＶＱＳＴＨＶ　Ｅ７　（残基６６〜７４）　１６１５　ＴＬＥＤＬＩＪＧＴ　Ｅ　７　（残基７８〜８６）　１７１６　ＣＬ）ＩＧＴＬＧＩＶ　Ｅ　７　（残基８２〜９０）　１８１７　ＧＴＬＧＩＶＣＰＩ　Ｅ７　（残基８５〜９３）　１９１８　ＴＬＧＴＶＣＰＩＣＥ７　（残基８６〜９４）　２０本発明の最も好ましい実施例は、ＨＰＶ１８の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導されるアミノ酸配列を有するペプチドであり、前記アミノ酸配列は、ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２．１に結合し得るペプチドに関するものである。特にこのようなペプチドはＨＰＶ１８の記載の領域から誘導される次のアミノ酸配列から成る（表■参照。アミノ酸は、アミノ酸の１文字コードによって識別される）。

表ｎ　ＨＬＡ−Ａ２．１に結合するＨＰＶ１８蛋白質Ｅ６とＥ７とから誘導されるペプチドベブチＦ　アミノ　ヰ１　にＬＰＤＬＣ置　Ｅ　６　（残基１３〜２１）　２１２　ＳＬＱ口ＩＥＩＴＣＥ６（残基２４〜３２）　２２３　ＬＱＤＩＦ、ＩＴＣＶ　Ｅ６　（残基２５〜３３）　２３４　ＥＩＴＣＶＹＣＫＴ　Ｅ６　（残基２９〜３７）　２４５　ＫＴＶＬＥＬＴＥＶ　Ｅ　６　（残基３６〜４４）２５６　ＥＬＴＥＶＦＥＦＡ　Ｅ６　（残基４０〜４８）　２６７　ＰＡＦＫＤＬＦＶＶ　Ｅ６　（残基４７〜５５）　２７８　ＤＴＬＩ：ＫＬＴＮＴ　Ｅ　６　（残基８６〜９６）　２８９　ＬＴＮＴＧＬＹＮＬ　Ｅ６　（残基９３〜１０１）　２９１０　ＴＬＱＤｒＶＬＨＬ　Ｅ　７　（残基７〜１５）　３０ｎ　ＦＱＱＬＦＬＩＩＴＬ　Ｅ７　（残基８６〜９４）　３１１２　ＱＬＦＬＮＴＬＳＦ　Ｅ７　（残基８８〜９６）　３２＋３　ＬＦＬＮ１’ＬＳＦＶ　Ｅ　７　（残基８９〜９７）　３３１４　ＬＳＰＶＣＰＩＩＣＡ　Ｅ７　（残基９４〜１０２）　３４本発明の最も好ましい実施例は、ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導されるアミノ酸配列を有するペプチドであり、前記アミノ酸配列は、ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａｔに結合し得るペプチドに関するものである。特にこのようなペプチドはＨＰＶ１６の記載の領域から誘導される次のアミノ酸配列から成る（表ｍ参照。

アミノ酸は、アミノ酸の１文字コードによって識別される）。

表ＩＩＩ　ＨＬ’Ａ−ＡＩに結合するＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６とＥ７とから誘導されるペプチド”ｆ、ｇ／、＠＠列、、、、、、、、、、１．ｉＫ、、（、ｆ＠戚）、、、、、、、、、、、、、、、、、、、ｆｆ！’１．［ｍｔｌ；’！ＹＲＤＧＮＰＹＡＶ　Ｅ　６　（残基６１〜６９）　３５＋１ＴＧＲＣ）Ｉｓｃｃ　Ｅ６　（残基１３９〜１４７）　３６Ｍ５ＣＣＲＳＳＲＴ　Ｅ６　（残基１４４〜１５２）　３７ＴＴＤＬＹＣＹＥＱ　Ｅ７　（残基１９〜２７）　３８ＥＩＤＧＰＡＧＱＡ　Ｅ７　（残基３７〜４５）　３９）ＩＶＤＩＲＴＬＥ［ｌ　Ｅ７　（残基７３〜８１）　４０本発明の最も好ましい実施例は、ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導されるアミノ酸配列を有するペプチドであり、前記アミノ酸配列は、ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ３．２に結合し得るペプチドに関するものである。特にこのようなペプチドはＨＰＶ１６の記載の領域から誘導される次のアミノ酸配列から成る（表■参照、アミノ酸は、アミノ酸の１文字コードによって識別される）。

表Ｖ　ＨＬＡ−Ａ１１．２に結合するＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６とＥ７とから誘導されるペプチドχ互／、Ｍ配列１．７．１．１０１１．蛋ａ寅、、（、ｉｌ蕉λ１１３１０１９０７０９２１０９０９．、配烈回定蚤号＾ＭＰＱＤＰＱＥＩＩ　Ｅ６　（残基７〜１５）　１１１ＬＥＣＶＹＣＫ　Ｅ　６　（残基３３〜４１）４１ＣＶＹＣＩＱＱＬＬ　Ｅ６　（残基３７〜４５）　９ＶＹＣＫＱＱＬＬ’ＲＥ６　（残基３８〜４６）　４２ＱＱＬＬＲＲＥＶＹ　Ｅ６　（残基４２〜５０）　４３ＩＶＹＲＤＧＮＰＹ　Ｅ６　（残基５９〜６７）　４４ＹＡＶＣＤＫＣＬＫ　Ｅ　６　（残基６７〜７５）　４５ＡＶＣＤＫＣＬＫＦ　Ｅ６　（残基６８〜７６）　４６ＶＣｔｌＫＣＬＫＦＹ　Ｅ　６　（残基６９〜７７）　４７ＫＩＳＥＹＩＩＨＹＣＥ６　（残基７９〜８７）　１１１ＳＥＹＲＨＹＣＹ　Ｅ６　（残基８０〜８８）　４９ＬＩＲＣＩＮＣＱＫ　Ｅ　６　（残基１０７〜１１５）　５４ＴＧＲＣに５ＣＣＩＩ　Ｅ６（残基１４０〜１４８）　６３Ｃ）ＩｓｃｃＲ３ｓＲＥ　６　（残基１４３〜１５１）　５６ＳＣＣＲ３ＳＲＴＲＥ６　（残基１４５〜１５３）　５７）ＩＹＮＩＶＴＦＣＣＥ７　（残基５１〜５９）５９ＹＮＩＶＴＦＣＩＪ　Ｅ　７　（残基５２〜６０）　６０ＣＣＫＣＤＳＴＬＲＥ　７　（残基５８〜６６）　６１ＶＣＰＩＣＳＱＫＰ　Ｅ７　（残基９０〜９８）　６４本発明の最も好ましい実施例は　）ｌｐＶ１６（蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導されるアミノ酸配列を有するペプチドであり、前記アミノ酸配列は、ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２４に結合し得るペプチドに関するものである。特にこのようなペプチドはＨＰＶ１６の記載の領域から誘導される次のアミノ酸配列から成る（表■参照。

表ＶＩ　ＨＬＡ−Ａ２４に結合するＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６とＥ７とから誘導されるペプチド！；、／、Ｉｊ５ｉ、列、、、、、、、、、、、ｉＪ＃、りに、、（、ｆｉｉ＞、−、、、、、、、、、、、、、、、、、、配２ビジｒＲｔfｌ＆！！。

ＭＨＱＫＲＴＡＭＦ　Ｅ６　（残基１〜９）　６５ＬＱＴＴＩＩＩＤＩＩ　Ｅ６　（残基２６〜３４）　６ＶＹＣＸＱＱＬＬＩＩ　Ｅ６　（残基３８〜４６）　４２ＬＬＲＲＥＶＹＤＰ　Ｅ６　（残基４４〜５２）　６６ＶＹＤＦＡＰＲ［ｌＬ　Ｅ６　（残基４９〜５７）６７ＰＹＡＶＣＤＫＣＬ　Ｅ６　（残基６６〜７４）　６８にＣＬＫＦＹＳＫＩ　Ｅ６　（残基７２〜８０）　６９ＥＹＲＩＩＹＣＹＳＬ　Ｅ６　（残基８２〜９０）　７０１１ＹｃＹｓＬＹＧＴ　Ｅ６　（残基８５〜９３）　７１ＣＹＳＬＹＧＴＴＬ　Ｅ　６　（残基８７〜９５）　７２ＲＦＨＮＩＲＧＲＩＩ　Ｅ６　（残基１３１〜１３９）　７３１１Ａ）ＩＹＮＩＶＴＦ　Ｅ７　（残基４９〜５７）　７４のこれらのデータは、上で述べたペプチドが同定された配列の単純ポリペプチドであることを暗示している。しかし、これらのペプチドの相同体、イソ体または遺伝的変異体は、細胞内環境の内外に存在する。本発明は、該ＨＬＡ分子に結合する場合には、上記のペプチドの相同体、イソ体または遺伝的変異体のすべてを含む。

ペプチドの相同体であるポリペプチドは、表１〜■中に述べられたアミノ酸配列に関して、少なくとも４０％、好ましくは６０％、さらに好ましくは７５％保存されているアミノ酸配列を有するペプチドを含む。

上記ペプチドの他の変異体が本発明の範囲内に含まれるということは当業者に理解されるであろう、これは特に同類アミノ酸置換体によってのみ合成される、上記のペプチドとは異なるいかなる変異体をら含む、システィン含有ペプチドが、合成と処理の間に空気による酸化を受けやすいということはよく知られているので、持にＡ（アラニン）、Ｓ（セリン）、α−アミノブチル酸などによるＣ＜システィン）の置換体が含まれる。このような多くの同類アミノ酸置換体は、Ｔａｙｌｏｒによって述べられたものとして述べられている＜　１９８６）や二二において上で示されたペプチドまたはそのフラグメントには、ポリペプチドが該ＨＬＡ分子に結合するならば、同類アミノ酸置換によるものであれ、欠失または他の過程によるものであれ、アミノ酸配列におけるいかなる変異体も含まれる。

ペプチドのフラグメントは、前記ポリペプチドが該ＨＬＡ分子に結合している場合には、５またはそれ以上の程度のアミノ酸配列を有する小さいペプチドでもよく、前記配列は、前記ポリペプチドが該）ｆＬＡ分子に結合している場合の、表Ｉ〜■に開示されている配列である。

上述のペプチドより６大きなペプチドが適当な個体（たとえばＨＬＡ−Ａ２．１結合ペプチドの場合の、ＨＬＡ−Ａ２．１に陽性の個体）におけるＨＰＶ１６またはＨＰＶ１８種ＣＴＬ応答を誘導し、表Ｉ〜■中で述べたような（部分的）アミノ酸配列またはその同類置換体を含む場合には、それらのペプチドは、特に本発明の範囲に含まれる。このようなポリペプチドは、３０アミノ酸までの長さを有するものでよく、好ましくは、２７アミノ酸までの長さである。しかし、最も好ましい範囲は９〜１２、さらに好ましくは９〜１１または９〜１０であり、さらに厳密には９アミノ酸の長さを有するペプチドである。

本発明は、遺伝子工学であれ、固相技術によるペプチド合成等であれ、あらゆる手段によって作られるポリペプチドの使用を含む、前述のペプチドには、末端において種々な化学的変更がなされたものもあり得、これも本発明の範囲内である。

また他の化学的変更、特に環状や２量体から成る配列も可能である。「誘導体」という語は、このように変更されたペプチドすべてをカバーすることを意図している。

本発明のポリペプチドは、生殖器の睨贅、頚部の癌等のＨＰＶ１６もしくはＨＰＶ１８に関連する病気の治療や予防のために有効である。

どの用途の場合にも、これらのペプチドは、免疫原性の形で用いられる。これらのペプチドは比較的短いので、免疫原性を付与する脂質等の担体物質との接合が必要となることや、またはアジュバントの使用を必要とすることもある。

本発明のポリペプチドの予防的、または治療的服用量は勿論、患者群（年令、性別、体重など）、治療すべき状態の程度、本発明の個々のポリペプチド、投与のルートによって異なる０本発明により同定されたポリペプチドの効果的な投与を達成することができる。投与ルートは、薬学の分野で周知の投与形式は勿論、適切な投与ルートであればいかなるものも用いることができ、加えてこれらのポリペプチドは、制御された放出手段および／または吐出装置によって投与することも可能である。これらはまた他の有効な物質、特にインターロイキン−２などのようなＴ細胞を活性化する物質と組み合わせて投与することも可能である。

本発明のペプチドは、また診断用途のような他の目的のためにも用いられる。たとえば本発明に従うペプチドによる予防接種が成功したかどうかをチェックするために用いてもよい、これらは前記ペプチドが予防接種された個人のＴ細胞を活性化できるかどうかをテストすることによって、試験管内で行うことができる。

次の実施例は、本発明を説明したものであるが、これに限定されるものではない。

例１ ■ ペプチド合成剤：Ａｂｉｍｅｄ　ＡＭ　Ｓ　４２２　（Ａｂｉｍｅｄ　Ａｎａｌｙｓｅｎ−Ｔｅｃｈｎｉｋ　ＧｍｂＨ，Ｌａｎｇｅｎｆｅｌｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）合成ポリマー：Ｔｅｎｔａｇｅｌ　Ｓ　ＡＣ（０，Ｉ７Ｊ、２４　ｍｅｑ／ｇ、　ＲａｐｐＰｏｌｙｍｅｒｅ　、Ｔｔｉｂｉｎｇｅｎ　、Ｇｅｒｍａｎｙ　＞高性能液体クロマトグラフィー（）ＩＰＬｃ）装置：ペプチドの分析および精製に使用されたＨＰＬＣシステムは、以下のものより成る：オートサンプラー２１５７．ＨＰＬＣポンプ２２４８．可変波長モニターＶＷＭ２１４１．柱形炉２１５５゜低圧ミキサー、（これらはすべてＰｈａｒ＊ａｃｉａＮｅｄｅｒｌａｎｄ　Ｂ、Ｖ、Ｗｏｅｒｄｅｎ、Ｔｈｅ　Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ製　）　。

５ｔａｒ　Ｌ　Ｃ−２０ドツトマトリツクスプリンター（５ｔａｒ　Ｍｉｃｒｏｎｉｃｓ　Ｃｏ、　、Ｌｔｄ製）９部品はすべて、Ｔａｎｄｏｎ　ＰＣＡ　Ｓｌ／３８６ｓｘ　コンピュータ　（Ｔａｎｄｏｎ　Ｃｏｍｐｕｔｅｒ　Ｂｅｎｅｌｕｘ　Ｂ、Ｖ、、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ。

Ｔｈｅ　Ｎｅｔｈｅｔｌａｎｄｓ製）によって制御。

凍結乾燥装置。

Ｖｉｒｔｉｓ　Ｃｅｎｔｒｙ　（Ｔｈｅ　Ｖｉｒ目ｓ　Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｉｎｃ、。

Ｇａｒｄｉｎｅｒ（ＮＹ）、ＵＳＡ製）、　Ｃｈｒｉｓｔ　Ａｌｐｈａ　ＲＶＣｖａｃｕｏ−ｓｐｉｎ　（Ｍａｒｔｉｎ　Ｃｈｒｉｓｔ　ＧｅｆｒｉｅｒｔｒｏｃｋｎｕｎｇｓａｎｌａｇｅｎＧｍｂＨ，０ｓｔｅｒｕｄｅ　ａｍ　Ｈａｒｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ製）に接続されたＡｌｃａｔｅｌ　３５０　Ｃ真空ポンプ（Ａｌｃａｔｅｌ　ＣＩＴ。

Ｍａｌａｋｏｆｆ　、Ｆｒａｎｃｅ製）を装備。

遠心分離ｆｉ：Ｍ　Ｓ　Ｅ　１ｌｉｓｔｒａｌ　６　Ｌ　（Ｂｅｕｎ　ｄｅ　Ｒｏｎｄｅ、＾ｂｃｏｕｄｅ、Ｔｈｅ　Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ製）。

質量分析計二Ｂｉｏｉｏｎ　プラズマ脱離質量分析計（ＰＤＭＳ）（Ａｐｐ目ｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅａｍｓ、Ｉｎｃ、、Ｆｏｓｔｅｒ　Ｃ１ｔｙ　（Ｃ＾）。

ＵＳＡ製）。

アミノ酸分析：Ｈｐ　Ａｍ１ｎｏｑｕａｎＬ　（ｌｌｅｗｌｅｔｔ　Ｐａｃｋａｒｄ、Ａｍ５ｔｅｌｖｅｅｎ。

Ｔｈｅ　Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ製）化学薬品：化学薬品はすべて、別設の記載がない限り、更に精製を行うことなく使用した。

Ｆｍｏｃ　（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）アミノ酸はＬ構成のもので、以下の側鎖保護基を有している：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｔｙｒ。

ＳｅｒおよびＴｈｒの場合ｔ−Ｂｕ（テルト−ブチル）、Ｈｉｓ、ＡｓｎおよびＧｉｎの場合Ｔｒｔ（１−リチル）、Ａｒｇの場合Ｐｍｃ　（２，２゜５．７．８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル）、Ｌｙｓの場合Ｂｏｃ　（テルト−ブチルオキシカルボニル）、すべてＮｏｖａｓｙｎで、購入はＰｈａｒｍａｃｉａ　Ｎｅｄｅｒｌａｎｄ　Ｂ、Ｖ、、ｌ１ｏｅｒｄｅｎ、ＴｈｅＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓより行う。

ピペリジンは＾１ｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｅ　Ｂｅａｅｌｕｘ　ＮＪ、。

Ｂｒｕｓｓｅｌｓ、Ｂｅｌｇｉｕｍより購入した。

ＢＯＰ　（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリー（ジメチルアミノ） −ホスホニウムヘキサフルオロホスフェイト）はＲｉｃｈｅｌｉｅｕＢｊｏｔｅｃｈｍｏｌｏｇｉｅｓ　、５Ｌ−Ｈｙａｃｉｎｔｈｅ、Ｃａｎａｄａより入手した。

Ｎ−メチルモルフォリンＣｈｉｍｉｃａ，Ｔｉｌｂｕｒｇ，Ｔｈｅ　Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用の前に、大気圧にてＮａＯＨより蒸留した。

Ｎ−メチルピロリジン（ＮＭＰ，＾ＩｄｒｉｃｈＣｈｅ■ｉｅ）は、使用の前に窒素雰囲気下で真空蒸留された（ｂ．ｐ．７８−８０℃，　１　８ｍｍＨ　ｇ　）　＊アセトニトリル（ＨＰＬＣグレード）はＲａｔｈｂｕｒｎ　Ｃｈｅｓｉｃａｌｓ　Ｌｔｄ．、Ｗａｌｋｅｒｂｕｒｎ，Ｓｃｏｔｌａｎｄより購入した。

エーテル（　Ｂａｋｅｒ　Ａｎａｌｙｚｅｄ　グレード）、ペンタン（　Ｂａｋｅｒ　グレード）および酢酸（　ＢａｋｅｒＡｎａｌｙｚｅｄグレード）はＪ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ　Ｂ．Ｖ．、Ｄｅｖｅｎｔｅｒ。

ＴＮｅ　Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓより購入した。

エタンチオールはＦｌｕｋａ　Ｃｈｅｍｉｅ．Ｂｒｕｓｅｌｓ。

Ｂｅ１ｇｉｕ■より入手した。

ジクロロメタンおよびＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）はＪａｎｓｓｅｎ　Ｃｈｉｍｉｃａ，Ｔｉｌｂｕｒｇ。

Ｔｈｅ　Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓより購入した。

トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ，Ｚ．Ｓ．　グレード）はＭｅｒｃｋ−Ｓｃｈｕｃｈａｒｄｔ　、）Ｉｏｈｅｎｂｒｕｎｎ　、Ｇｅｒｍａｎｙより入手した。

使い捨てのもの：ＰＴＦＥフィルターを含むポリプロピレン反応容器は＾ｂｉｍｅｄ　Ａｎａｌｙｓｅｎ−Ｔｅｃｈｎｉｋ　ＧｍｂＨ。

Ｌａｎｇｅｎｆｅｌｄ，Ｇｅｒｍａｎｙより購入した。

使用されるその他の使い捨てのものはすべてポリプロピレン製でＳａｒｓｔｅｄＬ　Ｂ．Ｖ．、Ｅｔｔｅｎ−Ｌｅｕｒ，丁ｈｅＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓより入手した。

試験条件：別設の記載がない限り、試験はすべて室温にて実施された．すべてのＦｍｏｃ防御アミノ酸、合成ポリマー、ペプチド、およびＴＦＡを一２０℃にて保存した。

≦１−Ｌ上！とた或自動化マルチプルペプチド合成装ｆ（＾ｂｉ■ｅｄＡＭＳ　４２２）における固相法によって合成した（Ｇａｕｓｅｐｏｈｌ　ａｎｄ　Ｆｒａｎｋ，＋９９０；Ｇａｕｇｅｐｏｈｌ　ｅｔ　ａｌ。

、１９９０参照）。

ペプチドを種々のランで作り、各々のランにおいて４８の異なるペプチドが同時に合成された。

ポリスチレン基質上のポリエチレングリコールスペーサアームのグラフト重合体であるＴａｎｇｅｌＳ　ＡＣ　（Ｒａｐｐ　ｅｔ　ａｌ．、１９９０；Ｓｈｅｐｐａｒｄ　ａｎｄｌｌｉｌｌｉａｍｓ，＋９１１２）が樹脂として使用された（４０−６０ｍｇ／ペプチド、１０μｍｏｌ　Ｆｍｏｃアミノ酸ローディング）ＮＭＰにおいて９０μｌの０．６７Ｍ　ＢＯＰ（Ｇａｕｓｅｐｏｈｌ　ｅｔ　ａｌ．、１９８８；Ｃａｓｔｒｏ　ｅｔ．ａｌ，１９７５）と、ＮＭＰ２／１　（体積／体積）において２０μｌのＮＭＭ，およびＮＭＰ　（６倍以上）において適切なＦｍｏｃ　アミノ酸（　Ｆｉｅｌｄｓ　ａｎｄ　Ｎｏｂｌｅ。

＋９９０　＞の０．６０Ｍ溶液１００μ！との混合物を各反応容器に加えることによって反復カップリングを実施した．反応時間の７０％のところで約５０μｌのジクロロメタンを各反応容器に加えた。

Ｆｍｏｃ−説防護がピペリジン／ＤＭＡ　１／４（体積／体積＞０．８ｍｌを各反応容器に３回添加することによって行われた。

カップリングと脱防護の回数は合成の進行と共に増加させたが、各々３０分と３分３回でスタートした。

カップリングおよびＦｍｏｃ−説防護の後、１２ｍｌＤＭＡで６回洗浄を行った．必要な一連の順序を達成し終え、ＭＬ後のＦｍｏｃ防護が除去された後、このペプチジル樹脂をＤＭＡ，ジクロロメタン、ジクロロメタン／エーテル　１／１（体積／体積）およびエーテルの各々によって恋人りに洗浄し、乾燥した。

ペプ　ドの　および離各反応容器に５分間隔で２００μ７ＴＦＡ／水１９／１（体積／体積）を６回添加することにより該樹脂からのペプチドの開裂および側鎖防護基の除去を行い、このようにして、自由カルボキシルペプチドを生成した。Ｔｒｐ−含有ペプチドについては、ＴＦＡ／水／エタンチオール　１８／１／１（体積／体積／体ＶＷ）を使用した。

最初のＴＦＡ添加の２時間後に、ｌｏｍｉ０ｍミニ−チル／ペンタン１（体積／体積）の添加によって混合ろ液よりペンタンを沈殿させ、−２０℃に冷却した．該ペンタンを遠心分離により単離した（−２０℃．２５００ｇ．１０分）。

エーテル／ペンタン　１／１（体積／体積）と共にベレット処理を行い、同じ遠心分離装置による単離を行った後、該ペプチドを１５分間、４５℃で乾燥した。

該ペプチドの各々を２ｍｌ！の水（または２ｍｌｌの１０体積％酢酸）に溶解させ、該溶液を３分間液体窒素中にて凍結させ、遠心分離（１３００Ｐｒｍ，８− １６時間）を行い、凍結乾燥させた。

飢也庭圭ｕＩＩペプチドの純度は、逆相ＨＰＬＣによって決定した。約５０ｎｍｏｌのアリコートを１０ｔｔｉ３０体積％酢酸に溶解した。この溶液の内、３０μ！を３成分溶剤システムを備えたＲＰ−ＨＰＬＣシステムに適用しな、Ａ：水、Ｂニアセトニトリル、Ｃ：水中の２体積％ＴＦＡ。

傾斜溶出（１，０ｍ１１分）を９ｏ％Ａ、５％Ｂ、５％Ｃから２０％Ａ、７５％Ｂ、５％Ｃまで３０分実施した。検出は２１４ｎｍであった。

任意に採取された試料をＰＤＭＳにおける質量分析により分析した。３１の結合ペプチドをすべてＰＤＭＳにおける質量分析により、およびＨｐ＾■１ｎｏｑｕａｎｔにおける加水分解後定量アミノ酸分析によって分析した０分析された全試料の内、計算質量と測定質量の差は、使用した装置の製造者により明記された試験誤差（０，１％）の範囲内であった。アミノ酸の組成はすべて予測した通りであった。

例２ペプチド凍結乾燥された２４０のＨＰＶ１６ベブチドと２４７のＨＰＶ１８ペプチド全部の内より、５ｍｇを計量し、１ｍ／の蒸留水に溶解し、５ＮＮａＯＨによりｐＨ１２に調整した。容易に溶解しないペプチドを１５０μｌの氷状の１００％酢酸　（ＣＨｓＣＯＯＨ、１ｌｅｒｃｋ　Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ　：５６−１０００’）で処理し、その後、蒸留水にて希釈した５Ｎ　ＮａＯＨでｐＨを７に中和した。それでもまだ溶解していないペプチドをＬｏｏｍ／の５Ｎ　ＮａＯＨで処理し、ＰＨを１２とし、その後、蒸留水中にて、１０％の氷酢酸でｐＨ７に中和した。

緻１１７４ＣＥＭ、Ｔ２細胞をｌ５ｃｏｖｅの改良Ｄｕｌｂｅｃｃｏ培地（ＢｉｏｃｈｒｏｍにＧ　Ｓｅｒｏｍｅｄ　Ｂｅｒｌｉｎ。

Ｇｅｒｍａｎｙ　：　ＦＯ４６５）中で培養し、ｌ０Ｃ）ＩＵ／ｍ／ペニシリン（Ｂｉｏｃａｄｅｓ　Ｐｈａｒｍａ、Ｌｅｉｄｅｒｄｏｒｐ、丁ｈｅＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）　、　１００　ｕ　ｇ　／　ｍ　ｌ　カナマイシン（Ｓｉｇｍａ　Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ　ＵＳＡ：に−０２５４）　、　２　ｍ　Ｍグルタミン（ＩＣＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｉｎｃ、Ｃｏ５ｔａ　１ｌｅｓａ、ＣＡ、ＵＳＡ：１５−８０１−５５）および小ウシ胎児の１０％血清（ＦＣＳ。

Ｈｙｃｌｏｎｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｉｎｃ、Ｌｏｇａｎ、Ｕｔａｈ　ＵＳＡ：Ａ−１１１５−Ｌ）を追加した。細胞を、腐植化空気中５％ＣＯ□、３７℃の温度で、３日間２．５ｘｌＯ’／ｍ！の濃度で培養した。

ペプチド結合１７４ＣＥＭ、Ｔ２細胞をＦＣＳのない培地中にて２度洗浄し、２Ｘ１０’細胞／ｍｌの濃度までの血清を含まない培地に置いた。この懸濁液より４０ｔｔｌを ■底９６ウエルプレート（ＧｒｅｉｎｅｒＧｍｂＬＦｒｉｃｋｅｎｈａｕｓａｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ：６５１１０１　）中に、各ペプチドの希釈液（１ｍｇ／ｍＩり１０μ／と共に入れた。最終濃度は８Ｘ　１０’ｌ　７４ＣＥＭ。

Ｔ２細胞を有する２００μｇ　／　ｍ　！！ペプチドである。この溶液を静かに３分間撹拌し、そのあと腐植化空気中５％ＣＯ２，３７℃にて１６時間の培養が行われた。次いで細胞を１００μ！！０．９％ＮａＣ１，０，５％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ　Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ、ＵＳＡ：Ａ−７４０９）　、０　、　０　２　％　ＮａＮ　、　（Ｍｅｒｃｋ　Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ：８２２３３５）で１回洗浄した。１２０Ｏｒｐｍの遠心分離機回転に力１けた後、ベレットを４°Ｃで３０分間、ＨＬＡ−Ａ２．１固有マウスモノクローナル抗体ＢＢ７．２の飽和量５０μｌ中にて再懸濁した。次いで細胞を２度洗浄し、１：４０の希釈、および全２５０ｍ１の体積でフルオレセインイソシアネイト（Ｔａｇｏ　Ｉｎｃ　Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ、ＵＳＡ：４３５０）と接合させるヤギ抗−マウスＩｇＧにより３０分間培養させた。

最後の培養の後、細胞を２度洗浄し、フルオレセインをＦＡＣ３ｃａｎ　フローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ　Ｌａｋｅｓ、ＮＪ、ｔｌＳ＾）にて４８８ｎｍで測定した。結果は図１　（ＨＰＶＩ６ペプチド）および図２（ＨＰＶＩＢペプチド）に各々示した。

１７４ＣＥＭ、Ｔ２細胞系は“中空で”不安定なＨＬＡ−Ａ２．１分子を発現し、これらの分子はペプチドがこれらの分子のペプチドを示す溝に結合している場合には安定化することができる。

容易に減成しない安定化ＨＬＡ−Ａ２．１分子は分析されたペプチドの結合の結果である。これはＨＬＡ−Ａ２．１分子の細胞表面発現の増加を導く。

隨】１７４ＣＥＭ、Ｔ２細胞により発現されるＨＬＡ−Ａ２．１分子に結合できるＨＰＶ１６とＨＰＶ１８のＥ６およびＥ７領域ペプチドを同定するために、ＨＰＶ１６とＨＰＶ１８のＥ６およびＥ７のアミノ酸配列を試験した（４）、Ｅ６およびＥ７領域の各アミノ酸を、９アミノ酸長ペプチドの第１アミノ酸として使用した。この方法で、ＨＰＶ１６とＨＰＶ　１８のＥ６およびＥ７の全領域をカバーした。９アミノ酸長ペプチドは、ＨＬＡ−Ａ２１分子の溝に結合す６ペプチドの長さに関して現在知られているルールに適合しているので（Ｅａｓｔ　ａｎｄ　Ｍｅｌｉｅｆ、１９９１による考察）、これを選択した。実際上の理由のために、第１番目の一連の試験においては、アラニン残渣を、試験されたペプチドにおいて自然配列において発生するシスティン残渣の代わりに使用した。その後、第２番目の一連の試験は、自然配列のシスティン残渣を含むペプチドで実施された。

表ＩのＮｏ、１〜１８のへブチドおよび表ＨのＮｏ、１〜１４のペプチドだけが（システィン残渣の代わりにアラニン残渣を含むペプチドを含む）、例２に述べたようなＨＬＡ−Ａ２．１分子との結合を示している１７４ＣＥＭ、Ｔ２細胞の平均ＨＬＡ−Ａ２．１蛍光として測定されるＨＬＡ−Ａ２．１分子の発現を有意に調節することができた。２２２＋２３３の他のペプチドの中にはこれができるものはなかった。蛍光測定の結果は表■および■に挙げ、図１および図２に示した。これらのペプチドは、表１および表Ｈの番号に従って番号付けをした。

ＭＦ−平均蛍光蛍光指数レベル０に設定された（ペプチドを付加しない）バックグランド蛍光により、ペプチドの結合は、蛍光レベルが≧０．５であった場合には正とみなされた。

表■：　ＨＰ　Ｖ　１６　ペプチドペプチド　ＦＩ　ＭＦｌ　１．６　１６１１．６２　２．２　２１１．９３　０．７　１１３．６４　０．６　＋、１１．０５　１．６　１７０．４６　１．１１　１１１４．５７　１．３　１５０．７８　２．０　１９５．０９　２．２　２１１．７＋０　２．１　２０４．１１１１　１．２　１４４．５１２　３．３　２１１３．９１３　２１　２１７．６１４　２．８　２５０．０１５　１．８　１８２．８＋６　０．８　１１８．１１１７　２．３　２１６．１１１！　２．５　２２７．８表■：）ＩＰＶ１８　ペプチドこれらの試験は、限られた一部のペプチドだ（すが、ＨＬＡ−Ａ２．１分子に結合する能力を有しており、従って、ＣＴＬはＨＬＡ分子に結合される場合にのみ、ペプチドを認識するので、これらのペプチドがヒトＣＴＬによって認識されるべきＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８のＥ領域の唯一の候補であることを示している。

例３本例は、プロセシング欠陥細胞系１７４ｃＥＴ。

Ｔ２を用いて、ＨＰＶペプチドに対する一次免疫応答の生体誘発を示している。

１７４ＣＥＴ、Ｔ２細胞（Ｔ２）におけるＨＬＡ−Ａ２．１の発現は、該ペプチドを含む培地中でＴ２細胞をインキュベーションすることによって増加する。Ｔ２細胞は、多量のＨＬＡ−Ａ２゜１に結合する該ペプチドを表しており、従って優れた抗原提示細胞（ＡＰＣ）である、以下に述べた応答誘発法では、Ｔ２細胞系が、ＡＰＣとして使用され、応答個体細胞としてフィコール後単核細胞が用いられた６友羞１）Ｔ２上ＨＬＡ−Ａ２．１のペプチド負荷２Ｘ　１０＠細胞／　ｍ　ｆの濃度のＴ２細胞をＴ２５フラスコ（Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆａｌｃｏｎ、ＰｌｙｍｏｕｔｈＥｎｇｅｌａｎｄ　ｃａｔ、ｎｒｊｏ１３）により３７℃ で２時間、血清を含まないＩ　Ｍ　Ｄ　Ｍ　（＝　ｌ５ｃｏｖｅｓ　１ｌｌｏｄｉｆｉｅｄＤｕｌｂｅｃｃｏ′ｓ　Ｍｅｄｉｕｍ；　Ｂｉｏｃｈｅｍ　ＫＧ、Ｓｅｒｏｍｅｄ　Ｂｅｒｌｉｎ。

Ｇｅｒｍａｎｙ、ｃａｔ、ｎｒ、ＦＯ４６５）中にて、グルタミン（２ｍ　Ｍ　、　ＩＣＮ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ　Ｉｎｃ、、Ｃｏ５ｔａ　１ｌｅｉｓａ、ＵＳＡ。

ｃａｔ、ｎｒ、ｌ５−８０１−５５）　、抗生物質（１００Ｉ　Ｕ　／　ｍｌペニシリン（Ｂｒｏｃａｄｅｓ　Ｐｈａｒｍａ、Ｌｅｉｄｅｒｄｏｒｐ。

Ｔｈｅ　Ｎｅｔ、ｈｅｒｌａｎｄｓ）　、１００　ｉｔ　ｇ　／　ｍ　／カナマイシン（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ、ＵＳＡ、に−０２４５）　）および８０μｇ　／　ｍ　ｌ濃度の選択されたペプチドＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（＝ＪＷＫ３；ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：１５）と共にインキュベーションした。

２）Ｔ２　（ＡＰＣ）のミドマイシンＣ処理これらのインキュベーションされたＴ２細胞をスピンダウンさせ、続いて血清を含まないＲＰＭＩ　（Ｇｉｂｏ　Ｐａ１ｓｌａｎ、Ｓｃｏ口ａｎｄ　、ｃａｔ、ｎｒ、０４１−０２４０９　＞培地中で１時間、３７℃にてミドマイシンＣ（５０１１ｇ　／　ｍ　Ｉ　）により、２０Ｘ１０’細胞／　ｍ　ＩＩの濃度に処理した。

３）−次免疫応答誘発のための準備９６ウエルＵ底プレート（Ｃｏ５ｔａｒ、Ｃａｓｂｒｉｄｇｅ。

ＵＳＡ、ｃａｔ、ｎｒ、３７９９）の全ウェルを、”１ｏｔｔｉ！の血清を含まない完全ＲＰＭ　Ｉ培地（グルタミン（２ｍ　Ｍ　、　ＩＣＮ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ　Ｉｎｃ、、Ｃｏ５ｔａ、翼ｅｉｓａ、ＵＳＡ。

ｃａｔ、ｎｒ、ｌ５−８０１−５５）　、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍ　Ｉ　、　Ｂｒｏｃａｄｅｓ　Ｐｈａｒｍａ、Ｌｅｉｄｅｒｄｏｒｐ、ＴｈｅＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）　、カナマイシン（１００μｇ／ｍ１！、Ｓ　ｉ　ｇｍａ、　Ｓｔ、Ｌｏｕ　ｉ　ｓ　；　Ｋ−０２４５））および８０μｇ　／　ｍ　ｌ濃度のペプチドＭＬＤＬＱＰＥＴＴ中にて、１００，０００マイトマイシンＣ−処理Ｔ２細胞で満たした。

４）応答個体細胞応答個体細胞は、ＨＬＡ−Ａ２．１サブタイプドナー（＝Ｃ，Ｂ、　）の単核周辺血液リンパ球（ＰＢＬ）である。ＰＢＬは、Ｆｉｃｏｌｌ処置（Ｆｉｃｏｌｌ調製：　Ｎｙｃｏｗｅｄ−ｐｈａｒｇ＋ａ、０ｓｌｏ、Ｎｏｒｗａｙ、ｃａｔ、ｎｒ、１０５０３のリンパ球調整）による軟層より分離し、ＲＰＭＩ中にて２回洗浄した０分離および洗浄後、ＰＢＬを３０％ヒトのプールされた血清（ＨＰＳ）（ＨＰＳは混合リンパ球培養にて抑制機能について試験する）により、完全なＲＰＭＩ培地中にて再懸濁した。

５）−次免疫応答インキュベーション５０μ！培地における４００，０ＯＯＰＢＬ−Ｃ，Ｂ、を、Ｔ２細胞ですでに充填された９６ウエルＵ底プレートの各ウェルに添加し、５％ＣＯ２および９０％湿度のインキュベータ中にて３７℃で７日間培養した。

６）再刺激（７日）ＰＢＬインキュベーションｆ＆　７日日に、ペプチドＭＬＤＬＱＰＥＴＴおよびＴ２細胞（へ・ンダ１−５）、ＰＢＬ−Ｃ，Ｂ、をペプチドＭＬＤＬＱＰＥＴＴにより再刺激した。この目的のために、９６ウエルから全細胞と培地を収集した。生存している細胞をＦｉｃｏｌｌ処置により単離し、ＲＰＭＩ中で洗浄した。

新しい９６ウエルＵ底プレートにおいてこれらの生存細胞の内５０，０００細胞を、１５％ＨＰＳを有する５０μｌの完全ＲＰＭＩ培地と共に各ウェルに接種した。各ウェルごとに、２０．０００のオートロガス、照射（３ｏｏｏラド）ＰＢＬ、および５０，０００オートロガス、照射（１０，０００ラド）ＥＢＶ−形質転換Ｂ−リンパ球（＝ＥＢＶ−Ｃ，Ｂ、）を１５％ＨＰＳと８０μｇ／ｍ！！の濃度のペプチドＭＬＤＬＱＰＥＴＴを含む５０μ！完全ＲＰＭ　Ｉと共に添加した。これらの細胞を５％ＣＯ２，９０％湿度のインキュベーション中にて、３７ ℃で７日間培養した。

７）再刺激（１４日）ＰＢＬインキュベーション後１４日目日日ペプチドＭ　Ｌ　Ｄ　Ｌ　Ｑ　Ｐ　Ｅ　Ｔ　ＴおよびＴ２ＡＩ胞（へ・ンダ−１−５）、ＰＢＬ−Ｃ，Ｂ、をペプチドＭＬＤＬＱＰＥＴＴにより再刺激した。このようにするために、ヘッダー６における手順を繰り返す。

８）限界希釈によるクローニングＰＢＬインキュベーション後２後２１ロ目ペプチドＭＬＤＬＱＰＥＴＴおよびＴ２細胞、細胞および培地を９６のウェルより採取した。生存可能細胞をＦｉｃｏｌｌ処置により単離し、１５％ＨＰＳを含む完全なＲＰＭ　Ｉ中で洗浄した。この大量の生存可能細胞を、限界希釈によりクローン化した。

新しい９６ウエルＵ底プレート（Ｃｏｓ七ａｒ。

Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＳＡ、ｃａｔ、ｎｒｊ７９９）の各ウェルに、１５％ＨＰＳを含む５０μ！完全ＲＰＭ　Ｉ培地を１００の生存可能細胞（＝ＨＰＶ１６バルク抗ＭＬＤＬＱＰＥＴＴ）と共に添加した。他の新しい９６ウエルＵ底プレートに対しても、ウェルのための細胞の数以外は正確に繰り返した。続くプレートは各ウェルごとに１０．１．または０．３の細胞を含んでいた。すべてのウェルに対し、４つの異なるドナーの２０．０００のプールされた照射（３０００ラド）ＰＢＬと３つの異なるＨＬＡ−Ａ２．１ドナー（ＶＵ−４１５１８ＪＹ）の１０゜０００のプールされた照射（１０，０００ラド）ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞を１５％ＨＰＳと４０ｎｇ／　ｍ　／の濃度のペプチドＭＬＤＬＱＰＥＴＴ、２％の濃度のロイコアグルチニン（Ｐｈａｒ園ａｃｉａ。

Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ、ｃａｔ、ｎｒ、＋７−０６３−０１）　、　１２０１Ｕ　／　ｍ　ｆの濃度のヒト組ＪＩＬ、−２（εｕｒｏｃｅｔｕｓ　。

＾ｍｓｔｅｒｄａｍ、Ｔｈｅ　Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を含む５０μ！完全ＲＰＭ　Ｉ培地と共に添加した。

９）エキスバンド　クローン各ウェルに以下のものを添加し１００μｌの最終体積とする。

−２５，０００生存可能細胞 −２０，０００照射ＰＢＬ−プール（ヘッダー８の場合と同様） −１０，０００照射ＥＢＶ−プール（ヘッダー８の場合と同様）一２μｇペプチドＭＬＤＬＱＰＥＴＴ −６ＩＵ組換ＩＬ−２４９日目に細胞障害試験を、エフェクター細胞として６５クローンと１バルクおよび標的細胞としてＴ２（該ペプチドＭＬＤＬＱＰＥＴＴを含むまたは含まない）により実施した。バックグラウンド溶菌は、無関係な（しかしＨＬＡ−Ａ２．１結合）ペプチド、Ａ置ＱＴＴＩ　Ｈと共にインキュベートされたＴ２細胞の溶菌として定義されている。

ＨＰＶ１６バルク（Ｃ，Ｂ、）抗ＭＬＤＬＱＰＥＴＴは、溶菌ＭＬＤＬＱＰＥＴＴ増感Ｔ２細胞に固有のものであると思われた。クローンはすべて特異性のものではなかった。

新しい限界希釈をＨＰＶ１６バルク（Ｃ，Ｂ。

）抗ＭＬＤＬＱＰＥＴＴ４ｆｉ胞（ヘッダー８＋９の場合と同様）によって行った。

この新たな限界希釈より２８日後に、５つのクローン（ＩＤＩＯ，ＩＤ１２．ＩＤ１９．ＩＤ２６、ＩＤ９２）と１バルクにより、細胞障害試験を実施した１代表的クローンを図３に示した。

例４この例は、免疫化学ペプチド−ＭＨＣ結合試験を示すもので、この試験は、ＨＬＡ−ＡＩ、Ａ２゜１、Ａ３．２．Ａ４１．２およびＡ２４分子に結合するＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６およびＥ７ペプチドの決定に使用された。

この方法は、共通ペプチドに基づいて、精製クラス■の分子と同位体置換識別合成樹脂製プローブを利用している。クラスエの分子との結合のために試験された競合ペプチドは同位体置換共通ペプチドとのこの結合について競合している。ＨＬＡ−ＡＬ、Ａ２．１．Ａ、３．２．Ａｌ　１．２およびＡ２４分子を以下の細胞系から各々単離した：　Ｅ　Ｂ　Ｖ　（Ｅｐｐｓｔｅｉｎ　Ｂａｒｒ　Ｖｉｒｕｓ）形質転換細胞系５ｔｅｉｎｌｉｎ、　Ｅ　Ｂ　Ｖ形質転換細胞系ＪＹ、ＥＢＶ形質転換細胞系ＧＭ３１０７．細胞系ＢＶＲおよびＥＢＶ形質転換細胞系ＫＴ３．大量培養の後、細胞をＮ　Ｐ　４０　（Ｆｌｕｋａ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｋａ、Ｂｕｃｈｓ。

５ｗ１ｔｚｅｒｌａｎｄ　）中に溶解させ、このライゼートを不活化セファロースＣＬ４ＢおよびＰｒｏｔＡセファロースの２本のプレカラムに通した０次に、クラスエの分子を、Ｂ２．２３．２　（抗ＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ−Ｃ）と抗ヒトＨＬＡと接合するＰｒｏｔＡセファロ−スピードを用いて、新和性クロマトグラフにより、細胞ライゼートから精製した。このライゼートからますＢ２．２３．２カラムに繰り返し通して、ＢおよびＣ分子をとった１次いで残っているＨＬＡ−Ａ分子をＷ６／３２カラムにより捕獲し、１ｍＭ　Ｔｒｉｓ　ｐＨ６，８で中和したｐＨ１１，５ＤＥＡ／１％ＯＧで溶出し、Ａｍ１ｃｏｎ３０ｋｐカートリツジにおける限外ろかにより濃縮した。

結合試験のために、（通常１１０−５０ｎの範囲内）同位体１換識別合成プローブの１５％の結合に至った。Ｍ　ＨＣの量を、約５ｎＭの同位体置ｔｌ＆Ｖａ別ペプチドおよび１ＭＭ　β２Ｍおよび（最終濃度１ｍＭ　ＰＭＳＦ、１．３ｍＭ　１，１０−フェナントロリン、７３μＭペプスタチンＡ。

８ｍＭ　ＥＤＴＡ、２００μＭ　Ｎ−ａ−Ｐ−トシル−Ｌ−リシン　クロロメチルゲトンを有する）プロテアーゼ阻害剤の反応混液の存在下で、（通常１０ｍｇ〜ｌｎｇ／ｍｉの範囲内で）試験すべき同位体置換識別のされていない滴定量の競合ペプチドと共に０．０５％ＮＰ４０−ＰＢＳ中でインキュパートした。２日後に、２３°Ｃにて、ＭＨＣ結合放射能の割合を５ｅｔｔｅ　ｅｔ　ａｌ（１９９２）によって述べられているように、ＴＳＫ２０００ゲルろかにおいて、サイズ排除クロマトグラフィーにより測定した。

プローブペプチドを、Ｂｕｎｓ　ｅｔ　ａｌ（１９１１７）によって述べられたクロルアミンＴ法を用いてヨウ素化した。前述のＨＬＡ分子のため使用されたプローブペプチドの配列はＡ　ｌについてはＹＬＥＰＡＩＡＫＹ、Ａ２．１についてはＦＬＰＳＤＹＦＰＳＶ＝　Ａ３．２についてはＫＶＦＰＹＡＬ　Ｉ　ＮＫ。

Ａ１１．２についてはＡＶＤＬＹＨＦＬＫ、Ａ２４についてはＡＹ　Ｉ　ＤＮＹＮＫＦであった。

種々の試験で得られたデータの比較を可能とするために５同位体置換識別のされていないプローブペプチドの阻害に対する正の制限のための５０％阻害用量（Ｉ　Ｃ％。）を、試験された各ペプチドに対する５０％阻害用量で割ることにより、各ペプチドについての相対結合の程度を計算した。該プローブに対する５０％阻害用量値は、Ａ１では８１ｎＭ、Ａ、２．１では５ｎＭ、Ａ３．２では３０ｎＭ、Ａ１１．２では９ｎＭ、Ａ２４では２２ｎＭであった。

各競合ペプチドを２〜４の完全に独立した試験においてテストした。ペプチドを含むシスティンは合成および取り扱い時のく空気による）酸化を受けるので、これらのペプチドはシスティンの代わりにアラニンで合成された。任意に、競合ペプチドは、それらが以下の比：１．０−０．１，０．１−０．０１，０．０１−ｏ、ｏｏｉ、＜ｏ、ｏｏｉになる場合には、各々、優れた結合剤、中等結合剤、弱結合剤、負の結合剤として分類された。

結果は表■〜Ｘ■に示した。

表■　免疫化学試験におけるＨＬＡ−ＡＩに結合するＨＰＶ１６　Ｅ６およびＥ７ペプチドペプ　ド　、Ｉ″Ｉ　−に　Δ ＹＲＤＧＮＰＹＡＶ　Ｅ６　（残基６１〜６９）　３５　０．００８１１ＴＧＲＣＩＩＳＣＣＥ６　（残基１３９〜＋４７＞　３６　０．０２０Ｍ５ＣＣＲＳＳＲＴ　Ｅ６　（残基１４４〜＋５２）　３７　０．０１９ＴＴＤＬＹＣＹＥＱ　Ｅ７　（残基１９〜２７）　３８　０．０２３ＥＩＤＧＰＡＧＱＡ　Ｅ７　（残基３７〜４５）　３９　０．０２５ＨＶＤＩＲＴＬＥＤ　Ｅ７　（残基７３〜１ｌｌ）　４０　０．０１４＃　同表において考えられている、試験における標準の平均ＩＣ１゜値±ＳＥは８１±３゜ｎＭであった。

表Ｘ　免疫化学試験におけるＨＬＡ−Ａ２．１に結合する付加ＨＰＶ１６　Ｅ６およびＥ７ペプチド竺ゼーＪ岨（日　に　るムＡＭＦＱＤＰＱＥＲＥ６　（残基７〜＋５）　１　０．００３３ＦＡＦＲＤＬＣＩＶ　Ｅ６　（残基５２〜６０）　１０　０．３７００＃　同表において考えられている、試験における標準の平均ＩＣ，。値±ＳＥは６土１ｎＭであった。

表℃　免疫化学試験におけるＨＬＡ−Ａ３．２に結合するＨＰＶ１６　Ｅ６およびＥ７ベブチドペプチド　（ｌｉｉ　”　２に　る　４＾ＭＦＱＤＰＱＥＲＥ６　（残基７〜１５）　１　０．１０００１１ＬＥＣＶＹＣＫ　Ｅ６　（残基３３〜４１）　４１　１．５０００ＣＶＹＣＫＱＱＬＬ　Ｅ６　（残基３７〜４５）　９　０．０３２０ＶＹＣＫＱＱＬＬＲＥ６　（残基３ｇ　〜４６）　４２　０．００１２ＱＱＬＬＲＩＩＥＶＹ　Ｅ６　（残基４２〜５０）　４３　０．００５８ＩＶＹＲＤＧＮＰＹ　Ｅ６　（残基５９〜６７）　４４　３．００００ＹＡＶＣＤＫＣＬＫ　Ｅ６　（残基６７〜７５）　４５　０．００１２ＡＶＣＤＫＣＬＫＦ　Ｅ６　（残基６ｇ　〜７６）　４６　０．００５６ＶＣＤＫＣＬＫＦＹ　Ｅ６　（残基６９〜７７）　４７　０．００２５ＫＦＹＳにｌ５ＥＹＥ６（残基７５〜８３）　４８　０．０１００ＫＩＳＥＹＲＩＩＹＣＥ６　（残基７９〜８７）　１１　０．００４４ＩＳＥＹＲＩＩＹＣＹ　Ｅ６　（残基８０〜ｔｉｌｌ）　４９　０．００６４ＲＩＩＹＣＹＳＬＹＧ　Ｅ６　（残基８４〜９２＞　５０　０．００３６ＳＬＹＧＴＴＬＥＱ　Ｅ６　（残基８９〜９７）　５１　０．００８０ＴＴＬＥＱＱＹＮＫ　Ｅ６　（残基９３〜＋０１）　５２　０．０７８０ＱＱＹＮＫＰＬＣＤ　Ｅ６　（残基９７〜＋０５＞　５３　０．００４５ＬＩＲＣＩＮＣＱＫ　Ｅ６　（残基１０７〜＋１５＞　５４　３．７０００１（ＬＤＫＫＱＲＦＩＩ　Ｅ６　（残基１２５〜＋３３）　５５　０．４４００ＣＭＳＣＣＲ３ＳＲＥ６　（残基１４３〜１５１＞　５６　０．１８００ＳＣＣＲ３ＳＲＴＲＥ６　（残基１４５〜＋５３）　５７　０．０２００ＣＣＲ３ＳＲＴＲＲＥ６　（残基１４６〜＋５４＞　５８　０．００２０１１ＹＮＩＶＴＦＣＣＥ７　（残基５１〜５９）　５９　０．０２６０ＹＮＩＶＴＦＣＣＫ　Ｅ７　（残基５２〜６０）　６０　０．００６７ＣＣＫＣＤＳＴＬＲＥ７　（残基５８〜６６）　６１　０．００１６にＣＤ５ＴＬＲＬＣＥ７　（残基６０〜６８）　６２　０．００１２＃　同表において考えられている、試験における標準の平均Ｉ　Ｃｓ。値±ＳＥは３０土３ｎＭであった。

表■　免疫化学試験におけるＨＬＡ−Ａｌ　１．２に結合するＨＰＶ１６　Ｅ６およびＥ７ペプチドペプチド　（）ｑ　号　標準に対する結合比ＡＩＩＰＱＤＰＱＥＲＥ６　（残基７〜！５）　１　０．８４００１１ＬＥＣＶＹＣＫ　Ｅ６　（残基３３〜４１）　４１　６．７０００ＣＶＹＣＫＱＱＩ、ＬＥ６（残基３７〜４５）　９　０．０４５０ＶＹＣＩＱＱＬＬＲＥ６　（残基３ｇ　〜４６）　４２　０．００２２ＱＱＬＬＲＲＥＶＹ　Ｅ６　（残基４２〜５０）　４３　０．００８４ＩＶＹＲＤＧＮＰＹ　Ｅ６　（残基５９〜６７）　４４　０．４７００ＹＡＶＣＤＫＣＩＪ　Ｅ６　（残基６７〜７５）　４５　０．００７４ＡＶＣＤＫＣＬＫＦ　Ｅ６　（残基６ｇ　〜７６）　４６　０．００３７ＶＣＤＫＣＬＫＦＹ　Ｅ６　（残基６９〜７７）　４７　０．００３０ＫＩＳＥＹＲＩ（ＹＣＥ６　（残基７９〜＋１７＞　１１　０．００７６ＩＳＥＹＲＨＹＣＹ　Ｅ６　（残基８０〜８ｇ）　４９　０．４３００ＩＪＲｃＩＮｃＱＫ　Ｅ６　（残基１０７〜１１５）　５４　０．０１２０ＴＧＲＣＭＳＣＣＲＥ６　（残基１４０〜１４ｇ）　６３　０．００１２ＣＭＳＣＣＲ３ＳＲＥ６　（残基１４３〜！５１＞　５６　０．００８４ＳＣＣＲ３ＳＲＴＲＥ６　（残基１４５〜１５３）　５７　０．０３３０ＨＹＮＩＶＴＦＣＣＥ７　（残基５１〜５９）　５９　０．００１０ＹＮＩＶＴＦＣＣＫ　Ｅ７　（残基５２〜６０）　６０　０．００６０ＣＩＪＣＤＳＴＬＲＥ７　（残基５８〜６６）　６１　０．０１１０ＶＣＰＩＣ３ＱＫＰ　Ｅ７　（残基９０〜９８）　６４　０．００１２＃　同表において考えられている、試験における標準の平均ＩＣ，、値±ＳＥは１０±３ｎＭであった。

表Ｘｍ　免疫化学試験におけるＨＬＡ−Ａ２４に結合するＨＰＶｌ、６　Ｅ６およびＥ７ペプチドペプチド　蛋　イ　」【列回丈膚」５１問ｌ◎を虹４殖含比ＭＨＩＸＲＴＡＭＰ　Ｅ６　（残基ｌ〜９）　６５　０．００４９ＬＱＴＴＩＨＤＩＩ　Ｅ６　（残基２６〜３４）　６　０．０２００ＶＹＣＫＱＱＬＬＲＥ６　（残基３８〜４６）　４２　０．００１１ＬＬＩＩＲＥＶＹＤＦ　Ｅ６　（残基４４〜５２）　６６　０．００２３ＶＹＤＦＡＦＲＤＬ　Ｅ６　（残基４９〜５７）　６７　０．０６１０ＰＹＡＶＣＤＫＣＬ　Ｅ６　（残基６６〜７４）　６８　０．００５５にＣＩＪＦＹＳＫＩ　Ｅ６　（残基７２〜１１０）　６９　０．１１００Ｆ、ＹＲｌ（ＹＣＹＳＬ　Ｅ６　（残基８２〜９０）　７０　０．０４６０）ＩＹｃＹｓＬＹＧＴ　Ｅ６　（残基８５〜９３）　７１　０．００３７ＣＹＳＬＹＧＴＴＬ　Ｅ６　（残基８７〜９５）　７２　０．１２００ＲＦＩＩＮＩＲＧＲＩＩＩ　Ｅ６　（残基用〜１３９）　７３　０．１０００ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ　Ｅ７　（残基４９〜５７）　７４　０．０６７０＃　同表において考えられている、試験における標準の平均ＩＣ１゜値±ＳＥは２２±６ｎＭであった。

Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ１、１１．１ｇ、　Ｋａｓｔ　ａｎｄ　Ｃ，Ｊ、Ｍ、　Ｍｅｌｉｅｆ、　Ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｅｆｆｉｃａｃｙ　ｏｆ　ｖｉｒｕｓ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ａｎｄ　ｖｉｒｕｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ＴＩｙｓｐｈｏｃｙｔｅｓ、　Ｉａｍｕｎｏｌｏｇｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　３０：　２２９−２３２　（１９９１）２、　Ｇ、Ｒｅｉｎｈｏｌｄｓｓｏｎ−Ｌｊｕｎｇｇｒｅｎ、Ｔ、Ｒａｍｑｖｉｓｔ、Ｌ、Ｘｈｒｌｕｎｄ−Ｒｊｃｈｔｅｒ　ａｎｄ　Ｔ、　Ｄａｌｉａｎｉｓ、　Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ　５０：　１４２ −１４６３、　Ｒ，Ｄ、　５ａｌｔｅｒ　ａｎｄ　Ｐ、　Ｃｒｅｓｓｗｅｌｌ、　ｔｓｐａｉｒｅｄ　ａｓｓｅｉ＋ｂｌｙ　ａｎｄｔｒａｎｓｐｏｒｔ　ｏｆ　ＨＬＡ−＾ａｎｄ　−Ｂ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｉｎ　ａ　ｍｕＬａｎｔ　ＴＸＢ　ｃｅｌｌｈｙｂｒｉｄ、　ＥｌｌｌＢＯＪ、　５：　９４３−９４９　（１９０）４、に、　５ｅｅｄｏｒｆ、　Ｇ、にｒａａｗｅｒ、　Ｍ、　Ｄｉｊｒｓｔ、　Ｓ、　５ｕｈａｉ　ａｎｄ　Ｉｌ、Ｇ。

Ｒ６＋ｙｅｋａｍｐ、　Ｈｕｍａｎ　Ｐａｐｉｌｌｏｓａｖｉｒｕｓ　Ｔｙｐｅ　１６　ＤＮＡ　５ｅｑｕｅｎｃｅ。

Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　１４５：　１８１−１８５　（１９８５＞５、　Ｉｌ、Ｒ，Ｔａｙｌｏｒ、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　）ｌｏｍｏｌｏｇｙｂｙ　Ｃｏｎ５ｅｎｓｕｓ　Ｔｅｍｐｌａｔｅ　Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ、Ｊ、Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、ｌ１ｌ）ｌ：　２３３−６、　Ｈ，Ｇａｕｓｅｐｏｈｌ　ａｎｄ　Ｒ，Ｉｌ、　Ｆｒａｎｋ、＾ｕｔｏｍａｔｉｓｃｈｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｅＰｅｐｔｉｄｓｙｎｔｈｅｓｅ、　ＢｉｏＴｅｃ　（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　１９９０）７、　Ｈ，Ｇａｕｓｅｐｏｈｌ、　Ｍ、　Ｋｒａｆｔ、　Ｃ，Ｂｏｕｌｉｎ　ａｎｄ　Ｒ，Ｉｌ、　Ｆｒａｎｋ、　ｉｎ：　Ｅ。

Ｇｉｒａｌｔ　ａｎｄ　Ｄ、　Ａｎｄｒｅｕ　（ｅ＋ｊｓ）、　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　１９９０．２０６−２０７　（１９９０）８、　Ｉｌ、　Ｒａｐｐ、　Ｌ、　Ｚｈａｎｇ　ａｎｄ　Ｅ、　Ｂａｙｅｒ、　Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ　ｆｌｏｗ　ｐｅｐｔｉｄｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｎ　ＰＳＰＯＥ−Ｇｒａｆｔ−ｃｏｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｉｎ：　Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ　ａｎｄＰｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ　ｉｎ　５ｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　２０５−２１０９、　Ｒ，Ｃ，５ｈｅｐｐａｒｄ　ａｎｄ　Ｂ、Ｊ、　Ｗｉｌｌｉａｍｓ、＾ｃｉｄ−１ａｂｉｌｅ　ｒｅｓｉｎｌｉｎｋａｇｅ　ａｇｅｎｔ　ｆｏｒ　ｕｓｅ　ｉｎ　５ｏｌｉｄ　ｐｈａｓｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ。

ｌｏｔ、Ｊ、Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、２０．　４５１−４５４　（１９ｇ２）１０、　Ｈ，Ｇａｕｓｅｐｏｈｌ、　Ｍ、　Ｋｒａｆｔ　ａｎｄ　Ｒ，Ｆｒａｎｋ、　Ｉｎ　５ｉｔｕ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆ　ＦｉｌＯＣ−ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｂｙ　ＢＯＰ　ｉｎ　５ｏｌｉｄ　ｐｈａｓｅ　ｐｅｐｔｉｄｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　１９８１１．２４１ −２４３　（１９Ｈ）比Ｂ、Ｃａ５ｔｒｏ、Ｊ、Ｒ，Ｄｏｒｍｏｙ、Ｇ、Ｅｖｉｎ　ａｎｄ　Ｃ，５ｅｌｖｅ、Ｒｅａｃｔｉｆｓ　ｄｅｃｏｕｐｌａｇｅ　ｐｅｐｔｉｄｉｑｕｅ　ＩＶ　（１）−Ｌ’ｈｅｘａｆｌｕｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｄｅｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｙｌ　Ｎ−ｏｘｙｔｒｉｓｄｉｍｅＬｈｙｌａｍｉｎｏ　ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ　（Ｂ、０．Ｐ、）。

ＴｅＬｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　１４：　１２＋９−１２２２　（１９７５）１２、Ｇ、Ｂ、　Ｆｉｅｌｄｓ　ａｎｄ　Ｒ，Ｌ、　Ｎｏｂｌｅ、　５ｏｌｉｄ　ｐｈａｓｅ　ｐｅｐｔｉｄｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ　９−ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ　ａｓｉｎ。

ａｃｉｄｓ、Ｉｎｔ、Ｊ、Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、３５：　１６１−２１４　（１９９０）１３、　Ａ、５ｅｔｔｅ、Ｓ、Ｓｏｕｔｈｗｏｏｄ、Ｄ、Ｏ’５ｕｌｌｉｖａｎ、Ｆ、Ｃ，Ｇａｅｔａ、Ｊ。

５ｉｄｎｅｙ　ａｎｄ　）１．１１．　Ｇｒｅｙ、　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐＨｏｎ　ＭＨＣｃｌａｓｓ　＋１ｐｅｐｔｉｄｅ　１ｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４８：　１１４４　（１９９２）１４゜　Ｓ、　Ｂｕｕｓ、　Ａ、　５ｅｔｔｅ、　Ｓ、ｌ［、Ｃｏ１ｏｎ、　Ｃ，）ｆｉｌｅｓ　ａｎｄ　Ｈ，Ｍ、　Ｇｒｅｙ、Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｍａｊｏｒ　ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｃｏｍｐｌｅｘ（％ＨＣ）　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｏｆ　Ｉａ　ｔｏ　ｂｉｎｄｉｍ＋＊ｕｎｏｇｅｎｉｃ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ、　５ｃｉｅｎｃｅ　２３５：　１３５２　（１９８７）配　列　表配列同定番号：１配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号：２配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号＝３配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号：４配列形式二アミノ酸配列長さ＝９アミノ酸配列同定番号：５配列形式、アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号：６配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号・７配列形式二アミノ酸配列長さ＝９アミノ酸配列同定番号−８配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号：９配列形式二アミノ酸配列長さ＝９アミノ酸配列同定番号：１０配列形式二アミノ酸配列長さ；９アミノ酸配列同定番号＝１１配列形式二アミノ酸配列長さ＝９アミノ酸配列同定番号−１２配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号：１３配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号：１４配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号＝１５配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号：２６配列形式二アミノ酸配列長さ＝９アミノ酸ＧＩｕＬｅｕＴｈｒＧｌｕＶａｌＰｈｅＧｌｕＰｈｅＡｌａｌ　５　９配列同定番号＝２７配列形式二アミノ酸配列長さ・９アミノ酸配列同定番号：２８配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号：２９配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号＝３０配列形式二アミノ酸配列長さ　９アミノ酸配列同定番号＝３１配列形式二アミノ酸配列長さ＝９アミノ酸ＰｈｅＧ　１ｎＧ　１ｎＬｅｕＰｈｅＬｅｕＡｓｎＴｈｒＬｅｕ配列同定番号：３２配列形式二アミノ酸配列長さ＝９アミノ酸ＧＩｎＬｅｕＰｈｅＬｅｕＡｓｎＴｈｒＬｅｕＳｅｒＰｈｅｌ　５　９配列同定番号・３３配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸ＬｅｕＰｈｅＬｅｕＡｓｎＴｈｒＬｅｕＳｅｒＰｈｅＶａｌｌ　５　９配列同定番号＝３４配列形式二アミノ酸配列長さ＝９アミノ酸配列同定番号＝３５配列形式二アミノ酸配列長さ：：９アミノ酸配列同定番号・４６配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸＾１ａＶａｌＣＹｓＡｓｐＬｙｓＣｙｓＬｅｕＬｙｓＰｈｅ配列同定番号＝４７配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号：４８配列形式二アミノ酸配列長さ＝９アミノ酸配列同定番号：４９配列形式、アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号：５０配列形式二アミノ酸配列長さ＝９アミノ酸配列同定番号＝５１配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸５ｅｒＬｅｕＴ’ｙｒＧｌｙ丁ｈｒＴｈｒＬｅｕＧＩｕＧｌｎ配列同定番号＝５２配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号：５３配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号＝５４配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号：５５配列形式二アミノ酸配列長さ＝９アミノ酸配列同定番号：６６配列形式二アミノ酸配列長さ＝９アミノ酸配列同定番号：６７配列形式二アミノ酸配列長さ二９アミノ酸配列同定番号＝６８配列形式二アミノ酸配列長さ一９アミノ酸配列同定番号＝６９配列形式アミノ酸配列長さ二９アミノ酸配列同定番号＝７０配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号ニア１配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸ＩＩ　１ｓＴｙｒＣｙｓＴｙｒＳｅｒＬｅｕＴｙｒＧ　Ｉ　ｙＴｈｒｌ　５　９配列同定番号＝７２配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸配列同定番号ニア３配列形式二アミノ酸配列長さ＝９アミノ酸配列同定番号ニア４配列形式二アミノ酸配列長さ：９アミノ酸￥箒翰士￥箒断士（％）＊１専Ｍ、　＋＋ｌＡ　＝　ＰＣＴ／ＮＬ　９３１０００９３フロントページの続き（５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，ｂ　識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３９／１２　９２８４−４ＣＣＯ７Ｋ　１４１０２５／／　Ｃ０７Ｋ　９９：００（３１）優先権主張番号　９３２００２４３．９（３２）優先日　１９９３年２月１日（３３）優先権主張国　欧州特許機構（ＥＰ）（３１）優先権主張番号　９３２００６２１．６（３２）優先日　１９９３年３月５日（３３）優先権主張国　欧州特許機構（ＥＰ）ＦＩ（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ）、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、ＭＲ，ＮＥ、ＳＮ。

ＴＤ、ＴＧ）、ＡＴ、ＡＵ、ＢＢ、ＢＧ、ＢＲ，ＣＡ。

ＣＨ，ＣＺ、ＤＥ、ＤＫ、ＥＳ、ＦＩ、ＧＢ、ＨＵ、ＪＰ、ＫＰ、ＫＲ，ＬＫ、ＬＵ、ＭＧ、ＭＮ、ＭＷ、ＮＬ、Ｎｏ、ＮＺ、ＰＬ、ＰＴ、ＲＯ，ＲＵ、ＳＤ、ＳＥ。

ＳＫ、ＵＡ、ＵＳ、ＶＮ（７２）発明者　セッテ、アレスサンドロ　ディー。

アメリカ合衆国　カリフォルニア州９２０３７　ラ　ジョン　リンダ　ローザ　アベニュー　５５５１（７２）発明者　シトニー、ジョン　シー。

アメリカ合衆国　カリフォルニア州９２０３７　ラ　ジョン　ヴイラ　ラ　ジョンドライブ　８５４１　ディー

Claims

【特許請求の範囲】

１．ヒトの主要組織適合遺伝子複合体（ＭａｊｏｒＨｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉ−ｌｉｔｙＣｏｍｐｌｅｘ：ＭＨＣ）クラスＩ分子に結合する能力を有し、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨｕｍａｎＰａｐｉｌｊｏｍａＶｉｒｕｓ：ＨＰＶ）の蛋白質から誘導されるアミノ酸配列を有するペプチド。
２．前記アミノ酸配剤が、ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導される請求項１記載のペプチド。
３．前記アミノ酸配列が、ＨＰＶ１８の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導される請求項１記載のペプチド。
４．前記アミノ酸配列が、ヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２，１と結合する能力を有する請求項１〜請求項３のいずれか１項記載のペプチド。
５．ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導され、ヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２．１に結合する能力を有し、次の物質：ＡＭＦＱＤＱＥＲ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基７〜１５）ＫＬＰＱＬＣＴＥＬ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基１８〜２６）ＱＬＣＴＥＬＱＴＴ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基２１〜２９）ＬＣＴＥＬＱＴＴＩ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基２２〜３０）ＥＬＱＴＴＨＤＩ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基２５〜３３）ＬＱＴＴＩＨＤＩＩ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基２６〜３４）ＴＩＨＤＩＩＬＥＣ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基２９〜３７）ＩＨＤＩＩＬＥＣＶ（ＨＰＶ１６蛋白質６の残基３０〜３８）ＣＶＹＣＫＱＱＬＬ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基３７〜４５）ＦＡＦＲＤＬＣＩＶ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基５２〜６０）ＫＩＳＥＹＲＹＣ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基７９〜８７）ＰＬＣＤＬＬＲＣ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基１０２〜１１０）ＴＬＨＥＹＭＬＤＬ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基７〜１５）ＹＭＬＤＬＱＰＥＴ（ＨＰＶ１６蛋白費Ｅ７の残基１１〜１９）ＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基１２〜２０）ＲＬＣＶＱＳＴＨＶ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基６６〜７４）ＴＬＥＤＬＬＭＧＴ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基７８〜８６）ＬＬＭＧＴＬＧＩＶ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基８２〜９０）ＧＴＬＧＩＣＰＩ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基８５〜９３）ＴＬＧＩＶＣＰＩＣ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基８６〜９４）およびヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２．１に結合する能力を有する前記アミノ酸配列のいずれか１つのフラグメント、相同体、イソ体、誘導体、遺伝的変異体または保存変異体から成るグループから選ばれるアミノ酸配列を有する請求項１記載のペプチド。
６．ＨＰＶ１８の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導され、ヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２．１に結合する能力を有し、次の物質：ＫＬＰＤＬＣＴＥＬ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ６の残基１３〜２１）ＳＬＱＤＩＥＩＴＣ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ６の残基２４〜３２）ＬＱＤＩＥＩＴＣＶ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ６の残基２５〜３３）ＥＩＴＣＶＹＣＫＴ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ６の残基２９〜３７）ＫＴＶＬＥＬＴＥＶ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ６の残基３６〜４４）ＥＬＴＥＶＦＥＦＡ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ６の残基４０〜４８）ＦＡＦＫＤＬＦＶＶ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ６の残基４７〜５５）ＤＴＬＥＫＬＴＮＴ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ６の残基８６〜９６）ＬＴＮＴＧＬＹＮＬ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ６の残基９３〜１０１）ＴＬＱＤＩＶＬＩＩ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ７の残基７〜１５）ＦＱＱＬＦＬＮＴＬ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ７の残基８６〜９４）ＱＬＦＬＮＴＬＳＦ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ７の残基８８〜９６）ＬＦＬＮＬＳＦＶ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ７の残基８９〜９７）ＬＳＰＶＣＰＭＣＡ（ＨＰＶ１８蛋白質Ｅ７の残基９４〜１０２）およびヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２．１に結合する能力を有する前記アミノ酸配列のいずれか１つのフラグメント、相同体、イソ体、誘導体、遺伝的変異体または保存変異体から成るグループから選ばれるアミノ酸配列を有する請求項１記載のペプチド。
７．前記アミノ酸配列が、ヒトのＭＨＣクラスＩ。対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ１と結合する能力を有する請求項１記載のペプチド。
８．ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導され、ヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ１に結合する能力を有し、次の物質：ＹＲＤＧＨＰＹＡＶ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基６１〜６９）ＭＴＧＲＣＭＳＣＣ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基１３９〜１４７）ＭＳＣＣＲＳＳＲＴ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基１４４〜１５２）ＴＴＤＬＹＣＹＥＱ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基１９〜２７）ＥＩＤＧＰＡＧＱＡ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基３７〜４５）ＨＶＤＩＲＴＬＥＤ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基７３〜８１）およびヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ１に結合する能力を有する前記アミノ酸配列のいずれか１つのフラグメント、相同体、イソ体、誘導体、遺伝的変異体または保存変異体から成るグノレーブから選ばれるアミノ酸配列を有する請求項１記載のペプチド。
９．前記アミノ酸配列が、ヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ３．２と結合する可能性を有する請求項１記載のペプチド。
１０．ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導され、ヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ３．２に結合する能力を有し、次の物質：ＡＭＦＱＤＰＯＥＲ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基７〜１５）ＩＩＬＣＶＹＣＫ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基３３〜４１）ＣＶＹＣＫＱＱＬＬ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基３７〜４５）ＶＹＸＫＱＱＬＲ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残差３８〜４６）ＱＱＬＬＲＲＶＹ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基４２〜５０）ＩＶＹＲＤＧＮＰＹ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基５９〜６７）ＹＡＶＣＤＫＣＬＫ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基６７〜７５）ＡＶＣＤＫＣＬＫＦ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基６８〜７６）ＶＣＤＫＣＬＫＦＹ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基６９〜７７）ＫＦＹＳＫＩＳＥＹ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基７５〜８３）ＫＩＳＥＹＲＨＹＣ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基７９〜８７）ＩＳＥＹＲＨＹＣＹ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基８０〜８８）ＲＨＹＣＹＳＬＹＧ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基８４〜９２）ＳＬＹＧＴＴＴＬＥＱ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基８９〜９７）ＴＴＬＥＱＱＹＮＫ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基９３〜１０１）ＱＱＹＮＫＰＬＣＤ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基９７〜１０５）ＬＩＲＣＩＮＱＫ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基１０７〜１１５）ＨＬＤＫＫＱＲＦＨ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基１２５〜１３３）ＣＭＳＣＣＲＳＳＲ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基１４３〜１５１）ＳＣＣＲＳＳＲＴＲ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基１４５〜１５３）ＣＣＲＳＳＲＴＲＲ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基１４６〜１５４）ＨＹＮＩＶＴＦＣＣ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基５１〜５９）ＹＮＩＶＴＦＣＣＫ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基５２〜６０）ＣＣのＣＤＳＴＬＲ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基５８〜６６）ＫＣＤＳＴＬＲＬＣ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基６０〜６８）およびヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ３．２に結合する能力を有する前記アミノ酸配列のいずれか１つのフラグメント、相同体、イソ体、誘導体、遺伝的変異体または保存変異体から成るグループから選ばれるアミノ酸配列を有する請求項１記載のペプチド。
１１．前記アミノ酸配列が、ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ１１．２と結合する能力を有する請求項１記載のペプチド。
１２．ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導され、ヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ１１．２に結合する能力を有し、次の物質：ＡＭＦＱＤＰＱＥＲ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基７〜１５）ＩＩＬＥＣＶＹＣＫ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基３３〜４１）ＣＶＹＣＫＱＱＬＬ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基３７〜４５）ＶＹＣＫＱＱＥＶＹ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基３８〜４６）ＱＱＬＬＲＲＥＶＹ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基４２〜５０）ＩＶＹＲＤＮＰＹ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基５９〜６７）ＹＡＶＣＤＫＣＬＫ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基６７〜７５）ＡＶＣＤＫＣＬＫＦ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基６８〜７６）ＶＣＤＫＣＬＫＦＹ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基６９〜７７）ＫＩＳＥＹＲＨＹＣ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基７９〜８７）ＩＳＥＹＲＨＹＣＹ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基８０〜８８）ＬＩＲＣＩＮＣＱＫ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基１０７〜１１５）ＴＧＲＣＭＳＣＣＲ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基１４０〜１４８）ＣＭＡＣＣＲＳＳＲ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基１４３〜１５１）ＳＣＣＲＳＳＲＴＲ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ６の残基１４５〜１５３）ＨＹＮＩＶＴＦＣＣ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基５１〜５９）ＹＮＩＶＴＦＣＣＫ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基５２〜６０）ＣＣＫＣＤＳＴＬＲＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基５８〜６６）ＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（ＨＰＶ１６蛋白質Ｅ７の残基９０〜９８）およびヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ１１．２に結合する能力を有する前記アミノ酸配列のいずれか１つのフラグメント、相同体、イソ体、誘導体、遺伝的変異体または保存変異体から成るグループから選ばれるアミノ酸配列を有する請求項１記載のペプチド。
１３．前記アミノ酸配列が、ヒトＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２４と結合する能力を有する請求項１記載のペプチド。
１４．ＨＰＶ１６の蛋白質Ｅ６またはＥ７から誘導され、ヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２４に結合する能力を有し、次の物質：ＭＨＱＫＲＴＡＭＦ（ＨＰＶ蛋白質Ｅ６の残基１〜９）ＬＱＴＴＩＨＤＩＩ（ＨＰＶ蛋白質Ｅ６の残基２６〜３４）ＶＹＣＫＱＱＬＬＲ（ＨＰＶ蛋白質Ｅ６の残基３８〜４６）ＬＬＲＥＶＹＤＦ（ＨＰＶ蛋白質Ｅ６の残基４４〜５２）ＶＹＸＦＡＦＲＤＬ（ＨＰＶ蛋白質Ｅ６の残基４９〜５７）ＰＹＡＶＣＤＫＣＬ（ＨＰＶ蛋白質Ｅ６の残基６６〜７４）ＫＣＬＫＦＹＳＫＩ（ＨＰＶ蛋白質Ｅ６の残基７２〜８０）ＥＹＲＨＹＣＹＳＬ（ＨＰＶ蛋白質Ｅ６の残基８２〜９０）ＨＹＣＹＳＬＹＧＴ（ＨＰＶ蛋白質Ｅ６の残基８５〜９３）ＣＹＳＬＹＧＴＴＬ（ＨＰＶ蛋白質Ｅ６の残基８７〜９５）ＲＦＨＮＩＲＧＲＭ（ＨＰＶ蛋白質Ｅ６の残基１３１〜１３９）ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（ＨＰＶ蛋白質Ｅ７の残基４９〜５７）ヒトのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ２４に結合する能力を有する前記アミノ酸配列のいずれか１つのフラグメント、相同体、イソ体、誘導体、遺伝的変異体または保存変異体から成るグルーブから選ばれるアミノ酸配列を有する請求項１記載のペプチド。
１５．９〜１２のアミノ酸の長さを有する請求項１〜請求項１４のいずれか１項に記載のペプチド。
１６．予防または治療に有効な量の請求項１〜請求項１５のいずれか１項に記載のペプチド、および製薬に適した担体、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含む薬剤組成物。
１７．予防または治療に有効な量の、ＨＰＶに対し有効なＴ細胞応答を誘引し得る請求項１〜請求項１５のいずれか１項に記載のペプチド、および製薬に適した担体、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含む薬剤組成物。
１８．予防または治療に有効な量の、ＨＰＶに対し有効なＨＬＡクラスＩ制限ＣＤ８＋細胞毒Ｔ細胞応答を誘引し得る請求項１〜請求項１５のいずれか１項に記載のペプチド、および製薬に適した担体、希釈剤、賦形剤またはアジュバンドを含む薬剤組成物。
１９．予防または治療に有効な量の、請求項１〜請求項１５のいずれか１項に記載のペプチドをヒト個人に投与することを含む、ヒトの頸部癌および他のＨＶＰ関連の病気の予防または治療の方法。
２０．予防または治療に有効な量の、ＨＶＰに対し有効な丁細胞応答を誘引し得る請求項１〜請求項１５のいずれか１項に記載のペプチドの免疫原性形体をヒト個人に投与することを含む、ヒトの頸部癌および他のＨＶＰ関連の病気の予防または治療の方法。
２１．予防または治療に有効な量の、ＨＰＶに対し有効なＨＬＡクラスＩ制限ＣＤ８＋細胞毒Ｔ細胞応答を誘引し得る請求項１〜請求項１５のいずれか１項に記載のペプチドの免疫原性形体をヒト個人に投与することを含む、ヒトの頸部癌および也のＨＶＰ関連の病気の予防または治療の方法。
２２．ＨＰＶに対し有効な、ＨＬＡクラスＩ制限ＣＤ８＋細胞毒Ｔ細胞応答をヒト個人に予防的、治癒的に誘引するための請求項１〜請求項１５のいずれか１項に記載のペプチド。
２３．ＨＰＶに対し有効な、ＨＬＡクラスＩ制限ＣＤ８＋細胞毒Ｔ細胞応答をヒト個人に予防的、治癒的に誘引するための薬剤組成物を製造するために請求項１〜請求項１５のいずれか１項に記載のペプチドの使用。