JPH0749436B2 - ３β―ベンゾイルオキシ―コレスタ―５．７―ジエンのユニークなジエン異性化方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ある種の15−酸素化ステロール化合物を製造
するための改良方法、並びに該ステロール化合物を製造
する時に形成される中間体および副生成物に関する。前
記15−酸素化ステロール化合物は、メバロン酸の生合成
を阻害するのに有用であり、メバロン酸の生合成の阻害
から誘導される全ての作用を包含する。メバロン酸の生
合成の阻害から誘導される作用は、結果として動物にお
けるコレステロールレベルの低下を伴うステロールの生
合成の抑制、並びに微生物および細胞の増殖の阻害を包
含する。15−酸素化ステロールはまた、食欲を抑制する
のにも有効であり、この作用はメバロン酸およびそれか
ら誘導される生成物、特にコレステロールの生合成にお
けるそれらの阻害活性に関連すると思われる。

〔従来の技術〕

多くの場合、ステロールの生合成の抑制が望まれる。例
えば、人間を含む動物においてコレステロールの形成を
抑制することがしばしば望まれ、これにより動物中の血
清のコレステロールレベルが低下するであろう。

血清中のコレステロールの濃度は、多数の病気、特にア
テローム性動脈硬化症と関連がある。アテローム性動脈
硬化症は、動脈系中のプラークの形成により特徴づけら
れる状態である。コレステロールおよびコレステロール
エステルがこれらプラークの主要成分である。この病気
の病因は完全には解明されていないが、上昇した血清の
コレステロールレベルが、アテローム性動脈硬化症をま
ねくと思われる。

動物中のコレステロールは２つの源から誘導され、その
１つは食事のコレステロールの摂取および吸収であり、
２つめは体の種々の器官、例えば肝臓、腸および皮膚の
細胞によるアセテートからのコレステロールの生合成で
ある。体内でのアセテートからのコルステロールおよび
他のステロールの生合成は複雑な反応の連鎖を含み、そ
の１つは３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素
Ａのメバロン酸への変換である。この反応が細胞でのコ
レステロールの正常な生合成の主な調節点であると考え
られている。もしメバロン酸の生合成が生体内で阻害さ
れ得るならば、ステロールの生産が減少し、そしてこれ
により血清のコレステロールレベルを下げることができ
る。

英国特許第860,303号において、ある種のアリールオキ
シカルボン酸エステル、例えば２−（４′−クロロ−フ
ェノキシ）−イソ酪酸のメチルエステルが血清のコレス
テロールレベルを抑制する利用のために提案されてい
る。この化合物は人間の臨床的処置に意義深い重要性を
得たが、様々な理由で所望するほどには効果的でない。
従って、血清のコレステロールレベルを抑制するのによ
り有効な化合物に大きな関心と重要性がある。

肥満もまた深刻な健康問題である。体重過剰と多くの病
気、特に心血管の病気との間の相関性はよく知られてい
る。多くの人々は、心理的または他の理由で、体重のコ
ントロールまたは体重低下のダイエットを実行すること
が困難であるかまたは不可能である。このため、食欲を
安全に且つ効果的に抑制する方法が非常に必要とされ
る。

米国特許第4,202,891号（この特許は本明細書中に組み
込まれる）から、ある種の15−酸素化ステロール類がメ
バロン酸およびステロールの生合成を抑制するのに有効
であることが知られている。動物中でコレステロールの
形式を抑制することを包含する、多数の望ましい作用が
メバロン酸の生合成の阻害から誘導され得、これにより
血清のコレステロールレベルが低下され得るだろう。

加えて、高等生物およびある種の微生物、例えば酵母お
よび真菌の細胞の成長および増殖はステロールの形成を
含む。従って、メバロン酸の生合成の阻害、およびそれ
によるステロール形成の減少は、正常のものと腫瘍のも
のと両方の細胞の成長を阻害するのに有効である。さら
にステロールの生合成の阻害は、ある種の微生物の増殖
を阻害し、それにより真菌および酵母感染と戦う作用を
有する。

ステロール生合成における役割に加えて、メバロン酸は
細胞の多数の他の重要な構成要素の前駆体である。故
に、バクテリアは一般にステロールを含有または要求し
ないと思われるが、それらの成長および増殖はメバロン
酸およびそれから誘導される生成物の合成を必要とす
る。従って、メバロン酸の生合成の阻害がバクテリアの
増殖を阻害するであろう。

さらに15−酸素化ステロール類およびそれらの誘導体が
肥満を抑制するのに有効である。15−酸素化ステロール
が肥満を抑制するのに働く機構は知られていないが、こ
の作用は15−酸素化ステロールのメバロン酸またはステ
ロール生合成阻害活性に何らかの関連性があると思われ
る。

〔発明が解決しようとする課題〕

米国特許第4,202,891号の15−酸素化ステロールは、高
度な活性を表わす望ましい化合物と示されている。しか
しながら、15−酸素化ステロールを製造するための今ま
でに既知の方法は費用と時間がかかるものであった。し
ばしば、ごく少ない収量の所望の生成物しか得られなか
ったり、または種々の理由、例えば高価なクロマトグラ
フィーの必要性のために大スケールでこの方法を行なう
ことが困難であったりした。加えて、７−デヒドロコレ
ステロールからの15−酸素化ステロールの製造における
重要な中間体である、３β−ベンゾイルオキシ−５−コ
レスタ−7,14−ジエンの製造のための既知の方法は、非
常に可変的であるために不十分であった。時折、所望の
生成物を適度な純度で適度な収率で得たけれども、しば
しば所望したよりも収率および純度が低く、そして未知
の副生成物が観察された。

〔課題を解決するための手段〕

本発明は、大スケールにおいて、一貫して高収率で高品
質の15−酸素化ステロールを製造する方法を提供する。
そのような方法は、もちろん、相当する有効性および効
率を提供する。

〔発明の要約〕

本発明によれば、デヒドロコレステロールからの15−酸
素化ステロールの合成のために、新しい４段階法が提供
される。この方法は、７−デヒドロコレステロールの３
β−ベンゾイルオキシコレスタ−5,7−ジエンへの変換
（段階１）、３β−ベンゾイルオキシコレスタ−5,7−
ジエンの３β−ベンゾイルオキシ−５（αまたはβ）−
コレスタ−7,14−ジエンへの変換（段階２）、３β−ベ
ンゾイルオキシ−５（αまたはβ）−コレスタ−7,14−
ジエンの３β−ベンゾイルオキシ−14α,15α−エポキ
シ−５（αまたはβ）−コレスタ−７−エンへの変換
（段階３）、そし最後に、３β−ベンゾイルオキシ−14
α,15α−エポキシ−５（αまたはβ）−コレスタ−７
−エンの15−酸素化ステロールへの変換（段階４）を包
含する。

より詳しくは、本発明は、３β−ベンゾイルオキシ−コ
レスタ−5,7−ジエンを３β−ベンゾイルオキシ−５
（αまたはβ）−コレスタ−7,14−ジエンへ変換する階
段２）非常に望ましい方法を提供し、この方法は（ｉ）
高くとも約−55℃の温度の溶媒中、３β−ベンゾイルオ
キシ−コレスタ−5,7−ジエンを３β−ベンゾイルオキ
シ−５−コレスタ−7,14−ジエンに変換するのに十分な
時間の間、３β−ベンゾイルオキシコレスタ−5,7−ジ
エンを前記溶媒中少なくとも約2.0Mの濃度のHClと接触
せしめることにより第一反応混合物を形成せしめ；（i
i）有意な量の３β−ベンゾイルオキシ−５−コレスタ
−8,14−ジエンの形成を防ぐために、前記反応混合物を
塩基で中和し；そして（iii）３β−ベンゾイルオキシ
−５−コレスタ−7,14をジエンを回収する、ことを含ん
で成る。

〔好ましい実施態様〕

本明細書中で検討する化合物は、それぞれ参照番号が当
てられており、その参照番号は第１図および第３図中の
対応する構造式と互いに関係がある。

本発明は、７−デヒドロコレステロール（２）から３β
−ヒドロキシ−５α−コレスタ−８（14）−エン−15−
オン（1a）のような15−酸素化化合物を調製するための
改良された合成方法に関する。そのような方法は、一般
にParishら、Chemistry and Physics of Lipids,18,233
−239,1977;Schroepferら、Journal of Biological Che
mistry,252,8975−8980,1977において開示されている。
しかしながら、本発明の改良方法は、大スケールでの利
用により適し、そして高収率の比較的純粋な生成物を一
貫して製造することのできるものである。本発明の方法
の開発は、特に、種々の段階における中間体および副生
成物の単離および同定並びにそれら包含物の評価を包含
している。

本発明は、広い態様として、７−デヒドロコレステロー
ル（２）の３β−ベンゾイルオキシコレスタ−5,7−ジ
エン（３）への変換、３β−ベンゾイルオキシコレスタ
−5,4−ジエンの３β−ベンゾイルオキシ−５−コレス
タ−7,14−ジエン（４）への変換、３β−ベンゾイルオ
キシ−５−コレスタ−7,14−ジエンの３β−ベンゾイル
オキシ−14α,15α−エポキシ−５−コレスタ−７−エ
ン（５）への変換、そして最後に前記３β−ベンゾイル
オキシ−14α,15α−エポキシ−５−コレスタ−７−エ
ンの15−酸素化ステロール、好ましくは３β−ヒドロキ
シ−５α−コレスタ−８（14）−エン−15−オン（1a）
への変換を包含する。

本発明の好ましい態様によれば、（ｉ）３β−ベンゾイ
ルオキシコレスタ−5,7−ジエンを３β−ベンゾイルオ
キシ−５−コレスタ−7,14−ジエンに変換せしめるのに
十分な時間の間、高くとも約−55℃の温度の溶媒中で、
３β−ベンゾイルオキシコレスタ−5,7−ジエンを少な
くとも約2.0MのHClと接触せしめ；（ii）有意な量の３
β−ベンゾイルオキシ−５−コレスタ−8,14−ジエン
（9aおよび9b）の形成を防ぐために、生じた反応混合物
を塩基で中和し；そして（iii）３β−ベンゾイルオキ
シ−５−コレスタ−7,14−ジエンを回収する；ことを含
んで成る方法により、３β−ベンゾイルオキシコレスタ
−5,7−ジエンを３β−ベンゾイルオキシ−５−コレス
タ−7,14−ジエンに変換する。

ベンゾエートの調製（段階１）。７−デヒドロコレステ
ロール（２）のΔ^5,7ベンゾエート（３）への変換は、
既知の方法、例えば（２）を塩化ベンゾイルと反応させ
ることにより達成され得る。その反応体を溶媒、例えば
ピリジン中で還流し、そして反応混合物を冷却後、濾過
により生成物を回収することができる。洗浄（例えば、
水および希炭酸塩で）および再結晶（例えば、熱CHCl₃
中で）により、高収率において高純度生成物を得ること
ができる。

ジエンの異性化（段階２）。前記Δ^5,7ジエン（３）を
５α−Δ^7,14異性体（4a）に変換するための従来技術は
非常に可変的な結果を生むことがわかった。収率は30％
（またはそれより少ない）から70％まで変化した。さら
に、一定の反応条件を維持するための試みにもかかわら
ず、所望の生成物4aはしばしば様々な量の幾つかの異な
る化合物で汚染された。生成物の組成に関してかなりの
複雑性が、最初の再結晶からの生成物の二次収穫物を得
るための試み中に観察された。反応温度、出発物質およ
び溶媒の純度、反応の時間、並びに反応のクエンチング
温度といったファクターの適度な変化が、生成物の組成
に識別可能な効果を全く又はほとんど与えなかった。

反応における主要な中間体および副生成物の単離および
同定は、最適な反応条件を見出すための試みの中で行わ
れた。低温にて前記Δ^5,7ジエンをHClと接触させること
による５α−Δ^7,14異性体を調製する時に、理論上の中
間体は少量の種8aおよび9aとともに３β−ベンゾイルオ
キシ−６α−クロロ−５α−コレスタ−７−エン（７）
であることがわかった。理論上の副生成物は５β−Δ
^8,14異性体9bであることがわかった。３β−ベンゾイル
オキシ−５β−コレスタ−7,14−ジエン異性体4bも少量
の副生成物として単離された。これらの構造は当業者に
とってよく知られている常用の分析方法、例えばNMRお
よびＸ−線結晶学により決定された。

ステロールのジエン異性化におけるクロロ中間体はD.H.
R.Barton,Journal Chemical Society,512−522（1946）
により40年以上も前に提唱されたけれども、そのような
中間体は未だ単離または同定されていない。さらに、５
β−異性体はステロールのジエン異性化において以前に
報告されている〔例えば、D.H.R.Barton,Journal Chemi
cal Society,1116−1123（1946）を参照のこと〕一方、
Δ^5,7系へのHClの低温添加による５β−ジエンの生成は
未だ報告されていない。

第１図中に記載されたジエンの異性化について提唱され
る経路（３→４）は、理論上の中間体および副生成物を
指示しながら第２図に示される。５β−ジエンの異性化
は５α−ジエンについてのものと同様な経路に従うと思
われる。しかしながら、下記に論じられるように、その
反応素度は５α系と５β系では異なるようであり、そし
て７に相当するクロロ中間体が５β−ステロール経路で
は認められなかった。全体の反応生成物の分析は、Δ
^5,7ジエン系の最初のプロトン化の約20％が５β−ステ
ロールを与えるように起こることを示した。５β−ジエ
ンは異性化反応において嵩のある不純物を構成するの
で、所望の生成物4aの収率をさらに増加させるためのあ
らゆる試みは、該ステロールのα表面へのHClの最初の
付加により有利であるような条件の変更を常に必要とし
ている。

５α−ステロールを製造するためには、理論上の副生成
物を4bを減少せしめることが有利である。しかしなが
ら、15−酸素化５β−ステロールもステロール生合成の
有力なインヒビターである。従って、重要な中間体4aと
副生成物4bの両者の製造が有利である。故に、両者は本
発明の範囲内にある。

さらに、検討は５α−ステロールの製造に焦中するが、
副生成物4bからの５β−ステロールの製造方法は4aから
の５α−ステロールの製造方法と同じであることは明ら
かであろう。従って、５α−ステロールに関して本明細
書中に開示される方法は、同様に５β−ステロールにも
適用され、そして4aまたは4b中間体のどちらの使用も本
発明の範囲内にある。

ジエン異性化におる様々な種は常法、例えば¹H−および
¹³C−NMR,TLC並びにHPLCにより一度同定され特徴づけら
れれば、反応の経路は反応液のアリコートを定期的に分
析することによりたどることができる。この分析の結果
は、Δ^5,7異性体が非常に速く反応して７を形成するこ
とを示す。Δ^5,7系へのHClのこの1,2−付加はBarton,J.
Chem.Soc.1946,512−522により提唱された1,4−付加お
よび優先されるΔ^５ステロイドへのHClのマルコニコフ
付加とは対照的である。例えば、Barton,Experientia.S
uppl.II,1955,121−136を参照のこと。この遅い反応の
段階は、７の脱ハロゲン化水素であると思われ、これは
シュード−エカトリアル塩素を生成する。低温では、こ
の脱離はかなり高濃度のHClを必要とすることがわか
り、このことは７のシュード−アキシャル６β−エピマ
ーの介在を示唆する。低いレベルの５α−Δ^6,8（14）
異性体が反応が進行するにつれて観察され、このことは
５α−Δ^7,14ジエン4aへの8aの変換が７の脱ハロゲン化
水素よりもかなり速いことを示唆する。５α−Δ^8,14異
性体9aへの4aの異性化は、７の脱ハロゲン化水素よりも
幾らか遅いと思われる。何故なら、７は完全に反応した
が少量の9a異性体だけが形成した適当な時にその反応を
クエンチングできることが発見されたからである。

これらの知見に基づき、該異性化反応において良好な収
率および高い生成物純度を一貫して得るための方法、即
ち4aの調製方法を開発した。一般に、その反応は低温
（約−55℃よりも低く、そして好ましくは−65℃〜−75
℃）で行った。低い温度は溶媒中のHClの溶解度を高め
そして５α−Δ^8,14異性体9aの形成を遅くするため、反
応の最適なクエンチングの時間が短かすぎない。CHCl₃
溶媒へのCH₂Cl₂の添加によって、Δ^5,7異性体３の溶解
度に不利に影響することなく、凝固点を低くすることが
可能である。重量比で約3:1のCHCl₃とCH₂Cl₂との溶媒混
合物が満足であることが示され、もちろん、低い凝固点
並びにHClおよびΔ^5,7異性体に対して良好な溶解度を有
する他の溶媒または溶媒混合物を使用してもよい。

出発物質が低温において晶出する傾向を阻止するため
に、好ましくは約2.0−2.5Mの濃度が得られるまでHClガ
スを迅速に導入する。HClの流れを止めた後に、７の4a
への変換が可能になり−55℃以下、好ましくは−65℃〜
−70℃において進行する。その反応を定期的に反応混合
物のアリコートについてクロマトグラフィー（例えばTL
C）によってモニターして最適なクエンチング時間を決
定することができる。

Δ^5,7ジエン（３）がΔ^7,14中間体（4a）に異性化した
後、ただし幾らか有意な量のΔ^8,14副生成物（9a）の生
成前に、その反応液をNH₄OHのような塩基でクエンチン
グ（中和）する。クエンチングおよび生成物の抽出に続
いて、ピリジンのようなさらなる塩基を、CHCl₃溶液に
添加して７の脱ハロゲン化水素から遊離される追加のHC
lを中和し、こうして５α−Δ^8,14異性体9aへの５α−
Δ^7,14異性体4aのHCl−触媒される異性化を防ぐことが
できる。

CHCl₃抽出液の部分的蒸発に続くアセトンのような極性
溶媒の添加は、約90％の4a並びに約10％の9aおよび9b
（合わせて）から成る沈澱物を生ぜしめる。この方法を
使うと、12回の逐次的な反応（700−1000gのスケール）
が83−91％（平均88％）の純度の4aの77−84％（平均82
％）の収率を与えた。

５α−異性体と一緒に製造される５β−異性体は、CHCl
₃−アセトン（1:2）からの再結晶により５α−異性体か
ら容易に分離され得るが、５α−異性体間、特に５α−
Δ^7,14と５α−Δ^8,14の異性体（4aおよび9a）とは、分
取スケールで再結晶またはクロマトグラフィーにより容
易に分割されない。¹³ C−NMRは、全ての既知成分が分解することなく解析で
きるので、HClでのΔ^5,7ジエン３の処理から導かれる反
応混合物の組成分析に最も有用なアプローチを提供す
る。ほとんどのジエン種は¹H−NMR、キャピラリーGCお
よび逆相HPLCにより解析できた；しかし、クロロ中間体
７はクロマトグラフィーにおいて不安定であった。ジエ
ンのあらゆるペアの混合物（７を包含する）の組成分析
は、３α−Ｈ、ビニルまたはメチルのいずれかの¹H−NM
R共鳴の考察により¹H−NMRによって行うことができた
が、より複雑な混合物ではそれらのピークの重なりが定
量を妨害した。ステロールベンゾエートの分解がキャピ
ラリーGCによる定量にとって主要な妨害であった。この
問題は非常にきれいなカラムを使うことにより解決でき
る。しかしながら、これらの条件下でさえも、５α−Δ
^7,14と５α−Δ^8,14のピーク（4aと9aに相当）はほとん
ど分離しない。逆相HPLCは4aおよび9aを除く全てのジエ
ンのかなり良好な分離を与えた。ステロールベンゾエー
トの順相HPLCは、過剰なピークテーリングのために不満
足である。

５β−ジエンの単離は低温でのΔ^5,7ジエンの異性化に
ついて未だ報告されていない。５β−Δ^6,8（14）アセ
テートの異性化から、Windausら、Justus Liebigs Ann.
Chemistry,536,204−216（1938）が新しいジエンを単離
し、これは後にD.H.R.Barton,Journal Chemical Societ
y,1946,1116−1123により５β−Δ^8,14ジエンアセテー
ト9fとして同定された。５β−Δ^8,14種9bのけん化およ
びアセチル化は、融点、UVスペクトルおよび旋光度がWi
ndausのジエンと事実上全く等しいジエンアセテート9f
をえた。

５β−ジエンのより最近の例は、５β−Δ^6,8（14）ジ
エンのエルゴステロール類の単離に関する報告であり、
これは水性HCl/エタノールを用いた還流下で他のジエン
への酸異性化に対し以外にも耐性であった。J.Andrieu
x,D.H.R.Barton,H.Patin,Journal of the Chemical Soc
iety,Perkin Transactions 1,359−363（1977）を参照
のこと。驚くべきことに、エルゴステロールをフィーザ
ーの条件〔Fieserら、Journal American Chemical Soci
ety,74,5397−5403（1952）を参照のこと〕にさらした
時に、５β−Δ^8,14種が全く観察されなかった。

CHCl₃中でのジエン３の異性化の主な副生成物は9bであ
るが、CH₂Cl₂中でのこの反応の主な副生成物は５β−Δ
^7,14種4bであった。明らかに4bはCHCl₃/CH₂Cl₂（4:1）
中よりもCH₂Cl₂中でより遅く５β−Δ^8,14種に変換され
た。CH₂Cl₂中でのこの反応の主な副生成物は３β−ベン
ゾイルオキシ−５α−コレスタ−８（14）−エン−７α
−オール（10a）であることがわかった。10aの構造は、
既知のジオール10bへの加水分解により立証された。化
合物10aは、おそらく５α−Δ^6,8（14）または５α−Δ
^7,14種のどちらか（8aまたは4a）のプロトン化または水
の付加により形成されるカチオン性中間体またはクロロ
中間体からの作成の間に生じた。

クロロ中間体７の５β−エピマーは全く検出されなかっ
た。もしシン方式においてHClの1,2−付加が起こったな
らば、生じる６β−クロロ置換体はシュード−アキシャ
ルであって、そして５β−Δ^6,8（14）種8bへの脱離を
促進することのできる７ではなかったろう。ジエン8bは
中間体であると思われ、不純な形で単離される。

酢酸エチルまたはベンゼン中の希（１％）溶液におい
て、７は12日間の間安定であることが証明された。メタ
ノールもしくはエタノールまたは濃CHCl₃溶液において
は、７はジエン３，8aおよびおそらく３β−ベンゾイル
オキシ−５α−コレスタ−6,8−ジエン（11）で表わさ
れる成分の混合物に５時間以内に分解した。CHCl₃中ま
たは10％トリエチルアミンまたはピリジンを含むCHCl₃
中の７の２％溶液について、３時間後にわずかな脱ハロ
ゲン化水素が観察された。キャピラリーチューブ中での
ゆっくりした加熱（10分）を行うと、７は135℃くらい
低温で融解した。融点測定のための通常の加熱速度で
は、７は154−155℃で融解した。これらを合わせた観察
は、HClが７の分解を促進し；次いで遊離されたHClがさ
らにその分解を加速させることを示唆している。アルコ
ール中での７の迅速な分解は、アルコールによる求核的
置換によるHClの触媒的脱離から生ずる。

ケトン１へのエポキシ化および加水分解（段階３および
４）。Δ^7,14ジエン4aは、Parishら、Chem.Phys.Lipid
s,18,233−239（1977）により示された既知の改良法、
即ちｍ−クロロ過安息香酸（MCPBA）での4aの処理に従
って5aにエポキシ化され得る。この既知の方法は、エー
テル中での4aの限られた溶解度のために簡単にはスケー
ルアップすることができなかった。

この既知のエポキシ化法は、反応混合物中に固体のNaHC
O₃を添加して３−クロロ安息香酸（ｍ−クロロ過安息香
酸中の不純物としておよびエポキシ化反応の生成物とし
ての両方で存在する）を中和し、そしてエポキシ化生成
物の酸触媒−分解を防ぐことにより改善され得る。加え
て、出発物質の沈澱形式を防ぐために、Parish（前掲）
により示されたものよりも高い温度で反応混合物にMCPB
Aを添加するのが望ましいことがわかった。

164のエポキシ化反応を140gスケールで行い、57−68％
（平均63％）の収率が得られ、または出発のジエン4aに
ついて88％の純度と仮定すると65−81％（平均72％）の
収率が得られた。このエポキシド５の純度は融点（mp）
により判定した。というのは、¹H−NMR,TLCおよびHPLC
のような方法では、211℃の標準mpより12℃下で融解す
る５の試料について全く不純物を示さなかったからであ
る。５の低−融点試料は、次なる１への変換において有
意に低い収率（65％に対して50％）を与えた。

エポキシド５は、5gスケールでちょうど５分で６に加水
分解され得、82％の収率を与えた。しかしながら、200g
スケールでは中間体６の精製が多くの時間および溶媒の
量を消耗し、そして典型的な収率はわずか約50％であっ
た。６を１に変換する現存の方法をスケールアップする
ことも、加水分解溶媒中への６の限られた溶解度により
妨げられる;5のフラスコを使った時、この反応は30−
40gスケールでしか実施できなかった。

既知の方法によれば、中間体６はその後１に加水分解さ
れる。しかしながら、２つの階段のための試薬は有機溶
媒中の無機酸であり（初めの段階ではより穏和な条件を
用いる）、そしてその２つの段階が組み合わされ得るこ
とがわかった。特に、６を１に変換する条件が５を１に
変換するのにも十分であることがわかった。５のフラ
スコ中で120gスケールの反応を行うために、反応を大量
の溶解されていない５を使って開始し、これは反応が進
行するにつれて溶液となった。２段階反応では、第１段
階は一般的に６よりも極性の低い副生成物を与え、そし
て第２段階は１よりも極性の大きい副生成物を与えた。
ワンポット反応では、１は極性の大きい副生成物からも
小さい副生成物からも分離されなければならなかった。
この分離は、ヘキサン／メタノール／水からの二相の再
結晶を使うことにより達せられた：極性の不純物はメタ
ノール／水の相に残り、非極性の不純物はヘキサン相に
残り、そしてどちらの相にも難溶である１は、長い大き
な針状晶において界面のところに晶出した。

２回のこのような再結晶の後、１の試料は１％未満の非
極性不純物および約５％の極性不純物を含有した。比較
的非極性の溶媒（CH₂Cl₂またはCHCl₃）を使ったシリカ
ゲルを通す濾過が、99％より高い純度の１を与えた。本
発明の方法を使って、120−140スケールので５の101回
の加水分解が57−71％（平均65％）の収率で99％より高
い純度の１を与えた。

ワンポットでの５から１への変換の主要な副生成物は、
ベンゾエートエステル６および芳香族環Ｃのステロール
12であった。12のＣ−17の位置の立体配置は、12および
それのＣ−17でのエピマーについて報告されたものとの
NMR化学シフト（17−Ｈおよび21−H₃）の比較により、1
7α（Ｈ）であると確定された。３つの少量の副生成物
も単離され、１および６の９α−ヒドロキシ誘導体（13
aおよび13b）並びにケト−ジオールであった。１ および６を、５を１に変換する加水分解条件にかけた
時、回収された１は幾つかの不純物を含むことがわかっ
た。この反応をアルゴン下で行うと、空気中での反応と
比べていくらか不純物の量が減少した。これらの不純物
の中に12が無いことは、１も６も12の形成における中間
体ではないことを示す。α，β−不飽和ステロールエポ
キシドからの12の形成は、既に研究されており、そして
7,9（11）,14−トリエン中間体を包むらしい。

要約すれば、適度に短い時間に大スケールで反応を行う
ことができるように、７−デヒドロコレステロール２か
らのケトン１の合成について意味深い改良法を記載して
きた。この合成は４段階に短縮され、このため各段階の
平均収率は97％,82％（純度88％）,63％および65％であ
った。７−デヒドロコレステロールの１への変換の平均
の全収率は33％であった。各段階で最高の収率は97％,8
4％,68％および71％であり、最高の全収率39％を与え、
これは１の合成について報告されたものよりも少なくと
も40％高い。本発明は、１の合成だけでなく多数の他の
15−酸素化ステロールの合成における重要な中間体であ
るエポキシド５の非常に改良された大スケールの合成の
ための方法も提供する。

この合成スキームの各段階での条件を最適化する過程
で、これらの反応の主な副生成物を単離しそして同定し
た。加えて、ジエンの異性化反応において新しい中間体
および副生成物を発見し、この反応のメカニズムおよび
利用に関して重要なかかわり合いを有することを見出し
た。例えば、低温でのジエンの異性化に高いHCl濃度が
要求される故は、３から4aへの変換の中で遅い段階であ
る、クロロ中間体７の脱ハロゲン化水素を促進するため
である。さらに、本明細書中で開示された条件下では、
５α−Δ^7,14ジエン4aは、ごく少量の５α−Δ^8,14異性
体9aだけを伴って得ることができる；観察される５−15
％のΔ^8,14混入物は主として５β−Δ^8,14異性体9bであ
り、これは再結晶により除去され得る。

次の例において、本発明はより詳細に記載されるだろ
う。下記の例は例示を目的としたものであり、決して本
発明の精神および範囲を限定する意図ものではない。

例１ ３β−ベンゾイルオキシコレスタ−5,7−ジエン
（３）。

５の丸底フラスコに、1000,0g（2.60モル）の７−デ
ヒドロコレステロール（Chemical Dynamics,3.3％メタ
ノール含有）、2.4の乾燥ピリジン（Aldrich Gold La
bel,0.05％水）、および500ml（4.74モル）の塩化ベン
ゾイル（Aldrich,99％）を入れる。この内容物を簡単に
混合し、迅速に（15min）加熱して沸騰させ、そして５
分間還流させる。少量（約200ml）の下層の塩化ピリジ
ン（¹H−および¹³C−NMRによる組成分析）が通常生成
し、そして反応混合物を冷却すると凝固する。空気中で
30分冷却後、暗色の反応混合物を氷上に注ぎ、撹拌し、
そして20℃で１−２時間放置しておく。形成する沈澱物
を吸引濾過により集める。その濾過ケークを７の水、
４の希炭酸ナトリウム、７の水、および500mlのア
セトンで４回十分に洗浄する。その濾過ケークを微粉砕
し、そして空気中で一晩乾燥させておく。粗生成物（収
率97−105％）は、TLC（シリカゲルをトルエン／ヘキサ
ン1:1で溶出、R_f0.58）により単一スポットを示し、そ
して140−144℃で融解し191℃で透明になった。微量
（１モル％未満）の安息香酸メチルを除いて¹H−および
¹³C−NMRにより純粋であるように思われる。幾つかの試
料の過剰な質量（８％まで）は明らかに水である。

この粗生成物は、次のジエン異性化に満足できる結果を
与えるが、この物質は通常、２の熱CHCl₃中にそれを
溶解せしめ（形成する少量の水相は無視する）そして５
のアセトンの添加によって該ステロールを沈澱せしめ
ることにより再結晶される。冷却およびそれに続く−20
℃での一晩の保存の後、結晶を濾過し、300mlの冷アセ
トンで２回洗い、そして一定の質量まで乾燥する。白色
結晶の収量は1193g（収率97％）であった。この操作
で、¹H−または¹³C−NMRにより１％レベルで不純物が全
く検出されず、そしてTLCでR_f0.58（溶媒、トルエン／
ヘキサン1:1）に単一スポットが観察された。

熱アセトン/CHCl₃からのこの物質5.00gの２回の再結晶
は、分析試料（2.7gの無色針状晶）を与えた。標準的な
分析方法により得られた値は、以前に報告された値とよ
く一致する。

700gスケールで行った４回の逐次反応は、836,838,836
および827gの収量（平均834g;収率97％、出発の７−デ
ヒドロコレステロール中の3.3％メタノールを基にし
て）および実質上等しい物理定数を伴う結果を与えた。

この反応について達成されたステロール物質の均衡はア
セトン洗浄液がピリジンおよび安息香酸メチルだけを含
有しそして再結晶からの瀘液がステロールの混合物（全
ステロール質量の1.9％）を含有することを示した。

例２ ３β−ベンゾイルオキシ−５α−コレスタ−7,14−ジエ
ン（４α）、大スケールでの調製。

CHCl₃（3000ml）およびCH₂Cl₂（800ml）の混合物中1000
gの３の溶液を、温度計、ガス分散用チューブ、流出口
および機械的攪拌機を備えた５の丸底フラスコ中で調
製する。このフラスコを素早く−55℃に冷却し、そして
部分的に晶出している反応混合物にGilmontのサイズ２
の流量計（Gilmont Instruments,Great Neck,NY）で50
の流速においてHClガスをバブリングさせる。その反応
混合物をできるだけ迅速に−65℃〜−70℃に次の30−60
分に渡ってさらに冷却し、そしてHCl流を前記流量計で1
00の流速まで増加させる。HCl濃度が2.0−2.5Mに達する
まで（標準塩基で反応液のアリコートを滴定して測定す
る）、この流速と温度条件を維持する。次いでHCl流を
止め、そして反応を15−30分ごとにTLCでモニターする
（中和し洗浄した反応混合物のアリコートをシリカゲル
にスポットしそしてトルエン／ヘキサン1:1で展開す
る）。R_f0.50,0.55および0.60の３つの重なったスポッ
トの代わりにR_f0.55に単一のスポットが観察された時、
反応が完全であるとみなす。次にHClの大部分を、水流
アスピレーターを使って水酸化ナトリウムのトラップを
通してHCl蒸気を引くことにより、次の40−60分間で真
空蒸発させる。

冷却した暗色の反応混合物の600ml部分を、500gの氷お
よび150mlの濃縮NH₄OHを含む２のアーレンマイヤーフ
ラスコの中に注ぎ入れることにより中和する。中和され
た混合物を６の分液漏斗中に一緒にし、水相を捨て、
有機相を2.5の水で洗浄し、そしてすぐに下の相を120
mlのピリジン中に流し出す。濁った有機相を数分後に透
明になり、そしてこの溶液をロータリーエバポレーター
の連続供給チューブの中に流し込み、典型的に少量の水
相を残す。（しばしば濁った）溶液は、約５から３
に濃縮され、そしてこれを２つの部分に分ける。次いで
アセトン（全量3.0）を攪拌しながら添加する。数分
間結晶化を進行させておき、さらに３のアセトンを添
加し、そしてその混合物を４℃で一晩保存する。吸引濾
過により結晶を集め、100mlのアセトンで２回洗い、押
しつぶして乾燥させ、微粉砕し、そして一定の質量まで
乾燥させる。

83−88％の純度でΔ^7,14ジエン4aを含む白色粉末（815
−841g）が得られた。不純物はステロールベンゾエート
（理論上9aおよび9b）の混合物である。前者（後者は不
可）の不純物は前述のようなアセトン/CHCl₃（2:1）か
らの再結晶により除去され得る。上記に示された収率お
よび純度は、６回の1000gのスケールの反応に基づく。
最良の反応は88％の純度で分析された物質836g（粗収率
84％）を与えた。（瀘液の濃縮から得られた二次収穫物
は1:4の比で4aおよび4bから成る。） この88％純度の生成物を¹H−NMR（δ5.76およびδ5.52
でのΔ^7,14ビニルピークの強度をδ5.4での５α−Δ
^8,14/5β−Δ^8,14ピークの高さと比較）、HPLC（4a／9a
のピークの強度を9bのピークのものと比較）、キャピラ
リーGC（一部分離した4a／9aのピークの強度を9bのピー
クのものと比較）、TLC（トルエン／ヘキサン1:1で展開
したシリカゲル上でR_f＝0.53に単一スポット、およびト
ルエンヘキサン1:1で展開したAgNO₃でコーティングされ
たシリカゲル上でR_f＝0.35に単一スポット）、およびmp
（151−153℃;98％純度の4aは154.4−156℃で融解す
る、下記参照）により分析した。

例３ ３β−ベンゾイルオキシ−５α−コレスタ−7,14−ジエ
ン（4a）、分析試料。

前述の方法を使って450gスケールでジエンの異性化を行
った。白色固体の269g（収率60％）の一次収穫物（¹H−
NMRにより94％の4aと分析され、主に9bで汚染されてい
た）を、1mlのピリジンを含む熱CHCl₃ 700ml中に溶解し
そして1.0の熱アセトンを加えて再結晶した。生成物
を24時間後に回収すると、純度95％（¹H−NMR）の4aの
無色結晶220gを与えた。２回のさらなる再結晶は181g
（98％純度）および127.8g（98％純度）を与えた。構造
と純度は標準的な分析方法により確認された。HPLC分析
によっては全く不純物が検出できなかったので、¹H−NM
Rスペクトルで観察された２％のΔ^8,14不純物は9aであ
ると判断された。

反応が進行する時のジエン中間体の濃度。

120mのCHCl₃/CH₂Cl₂（4:1）中20gの4aを使うことを除い
て前記と同じようにジエンの異性化を行った。反応液を
−55℃に冷却し、CHCl₃中のHCl飽和溶液（30ml,−55
℃）を添加し、そして反応混合物にHClを20分間バブリ
ングしておいた。次いでHClを止め、そして反応液を−6
5℃に維持した。様々な時間（2,6,17,26,55,75,115,16
0,220および300分）で約10mlのアリコートを反応液から
取り出し、そして冷却した濃NH₄OHに注いだ。生じた有
機相を水で洗浄し、オイルまたは固体まで回転蒸発さ
せ、そして¹H−および¹³C−NMR分析の直前にCDCl₃（重
水素化クロロホルム、C²HCl₃）に溶解した。NMR分析の
結果を第１表に示す。200gスケールで行った類似実験は
同様な結果を与えた。

ａ ¹H−および¹³C−NMRの組合せによりクエンチングさ
れた反応液のアリコートに関して決定された濃度（10
％の値については±５％の誤差、＜10％の値については
±２％の誤差）。

ｂ 作業中試料が部分的に分解した。７，8a，4a，9a，
4bおよび9bの測定値は16,10,43,11,0および13％であっ
た。表示された値は、分解中に７，4aおよび4bが部分的
に8a，9aおよび9bに変換されたと仮定することにより評
価された。

ｃ 最後の時間の間は反応液を15℃に温めておいた。生
成物は一部のみCDCl₃に溶解性であり、そして幾つかの
少量の不純物を含有した；従って、組成率は9bが16％の
値を与えるように標準化した。

ｄ δ0.74に¹H−NMRのシングレットのピークを有する
未知の物質。

ｅ δ0.69に¹H−NMRのシングレットのピークを有する
未知の物質。

例４ ３β−ベンゾイルオキシ−６α−クロロ−５α−コレス
タ−７−エン（７）。

−65℃のCHCl₃ 100ml（エタノール不含有）中の1.6MHCl
溶液に、撹拌しながら−58℃のCHCl₃（エタノール不含
有）100ml中10.0gの３の溶液を添加する。生じたこはく
色の溶液を−62℃で72秒間撹拌し、そして濃NH₄OH50ml
および氷50gの混合物に注ぎ入れる。この中和溶液を激
しく攪拌し、分液漏斗中に入れる。冷却した有機相を5m
lのピリジンの中に流し出し、そして２×150mlの水で洗
う。さらに5mlのピリジンの添加後、湿った固体になる
まで回転蒸発させ、そして真空中で一晩乾燥させる。

上記の方法で得られた生じた固体（10.74g）の試料を¹H
−NMRで分析した。すると７を50％、4aを25％、３を５
％、そして５β−Δ^6,8（14）異性体8bであると思われ
る物質を20％含むことがわかった。粗試料（10.74g）を
30mlのCHCl₃に溶解した後、60mlのアセトンを添加する
とゆっくりした沈澱形成が起こり、これを30分後に吸引
濾過により集める。この生成物（3.38g）の５回のさら
なる再結晶を行い、135℃（遅い加熱）または155℃（速
い加熱）の２゜−３゜範囲にわたって融解する７の分析
試料（0.37g）を得た。融解時にはガスが発生しそして
生成物は主として8aに分解した（¹H−NMRによる融解物
質の分析）。７の構造は、種々の分析方法により確認さ
れた。

例５ 様々な条件下での７の安定性７ の溶液をEtOAc（１％ w/v）、無水エーテル（１
％）、ベンゼン（１％）およびアセトン（0.5％）中に
調製した。これら溶液のアリコートを0.5時間後、24時
間後および12日後に取り出し、窒素流中で蒸発乾固し、
CDCl₃中に溶解し、そしてすぐに¹H−NMRで分析した。Δ
^5,7およびΔ^6,8（14）不純物（３，8a，8b）のいずれも
５％レベルで検出でき、そしてΔ^7,14およびΔ^8,14不純
物（4a，4b，9a，9b）が２％レベルで検出できる。どの
溶液においても0.5時間後または24時間後には不純物は
全く検出されなかった。12日後、EtOAcまたはベンゼン
溶液については全く分解が観察されなかった。しかし、
７はエーテル溶液においては完全に8aに、そしてアセト
ン溶液においては部分的に8aおよび３を含む混合物に分
解していた。

別の実験において、20℃にて６週間保存したシクロヘキ
サン中の７の0.13％溶液は、8aまたは他のいかなるステ
ロールにも分解していないことを示した（２％検出限
界）。20℃にて30時間保存したヘキサン中の７の0.06％
溶液（BurdickおよびJackson）は、8aへの分解を示した
（11および７各５−10％と混合）。共に0.1mlピリミジ
ンを含む6mlのCHCl₃/メタノール（1:1）またはCHCl₃/エ
タノール（1:1）中50mgの７の溶液は20℃で１時間後
３，8aおよび11の混合物に完全に分解した。

CDCl₃中の７の20％溶液は迅速に分解し（１時間後５％
の8aを含み、５時間後には9aと未同定のステロールに完
全に分解した）、一方CDCl₃中の希（２％）溶液はより
ゆっくりと分解した（11時間後8aおよび11それぞれ約10
％）。−20℃では、CDCl₃中の７の２％溶液は１ヶ月間
安定であった。塩基の非存在下のCHCl₃溶液において
は、７は9aと少量の未同定物質に分解した。固体のNa₂C
O₃またはピリジンを含むCHCl₃化の７の攪拌溶液は、48
時間後、主として11並びに各々20％より少ない8aおよび
３から成ることがわかった。10％ピリジンまたはトリエ
チルアミンを含むCDCl₃中の７の２％溶液は、20℃にて
３時間後には検出可能な分解生成物（＜10％）を全く示
さなかった。固体のAgNO₃を含むテトラヒドロフラン中
の７の溶液を攪拌すると、３，8aおよび11の混合物を生
成する。未封管の試験管中80−120℃で10分間７を加熱
することは、検出可能な（10％より多い）分解を導かな
かった（¹H−NMR）。

例６ ３β−ベンゾイルオキシ−14α,15α−エポキシ−５α
−コレスタ−７−エン（５）。

5.3リットルのジエチルエーテル中140g（0.29mol、純度
90％）の4aの溶液を、蒸気沿上での穏やかな加熱により
調製する。この溶液を氷沿中に置き、24℃まで冷却した
時に118g（0.69mol、純度80−85％,Aldrich）のMCPBA、
60g（0.60mol）のNaHCO₃および400mlのジエチルエーテ
ルの混合物を激しく攪拌しながら３分間で100mlの割合
で添加する。この攪拌混合物を氷沿中５℃に１時間保持
し、結晶化を促進せしめる。針状晶の５および固体のNa
HCO₃を吸引濾過により一緒に集め、そして濾過ケークを
１の熱THF中に溶解させる。その溶液を注意深くNaHCO
₃からデカンテーションし、ヘキサン２を添加し、そ
してその溶液を一晩−15℃で結晶化させる。濾過により
105.0gの無色結晶が得られる（収率81％）。５の構造
は、種々の分析法（mp,IRおよびNMR）により確認され
た。

上記の反応と同様であるが、ただし1.0gのスケール（2.
0mmol）においてそして50mlの溶媒（100mlのジエチルエ
ーテルを除く）を使って次の溶媒において反応を行い、
単離された収率をカッコ内に示す：ジブチルエーテル
（88％）、tert−ブチルエチルエーテル（83％）、ジイ
ソプロピルエーテル（86％）、tert−ブチルメチルエー
テル（80％）、ジエチルエーテル（76％）、CH₂Cl₂（77
％）およびCHCl₃（75％）。

100mlのジエチルエーテルおよび25mlの0.5M NaHCO₃を使
った同様な反応は75％の収率を与えた。80−85％の純度
のNCPBAの代わりに99％の純度のMCPBAを使っても５の収
率に影響を及ぼさなかった。1.0gの4a,40mlのtert−ブ
チルメチルエーテル、0.8gのMCPBAおよび0.37gのNaHCO₃
を使う一連の反応を、該ジエン溶液が28゜,24゜および2
0℃に冷却された時にMCPBA溶液を添加することにより実
施した；それぞれ83％,80％および80％の収率が得られ
た。

例７ ３β−ヒドロキシ−５α−コレスタ−８（14）−エン−
15−オン（１）。

５の丸底フラスコ中の120g（0.238mol）の５,3.0の
95％エタノールおよび350mlの水の混合物を氷沿中５℃
に30分間冷却する。濃H₂SO₄（650ml）を10分間にわたて
50mlずつこの混合物に添加する。懸濁した物質のあらゆ
る大きなチャンクを機械的に破壊する。この混合物を還
流下20−24時間加熱する。茶色がかった反応混合物を氷
沿を使って20℃に冷却し、次いで12lのカーボイ中の7kg
の氷に注ぎ入れる。ペースト様の沈澱物を、ポリプロピ
レン濾布（Aldrich）または三層のワットマン＃１瀘紙
のどちらかを使ってブフナー漏斗上に集め、濾過を促進
するために時折かき取る。淡黄色のケークを１の冷水
で３回洗い、そして１の熱メタノールに溶解し、これ
に１のヘキサンおよび500mlの熱水を加える。生じた
二相系を、全ての固体物質を溶けるまで蒸気沿上で加熱
する。この混合物を20℃まで２−３時間放冷する；この
時点で溶媒の界面に結晶が形成しはじめる。次にこの混
合物を−15℃で一晩冷却して褐色の上層のヘキサン相、
淡黄色の下層の水相および白色の結晶物質を与える。結
晶（TLCによりおおよそ90％の純度）を吸収により集
め、そして前述したようにメタノール／ヘキサン／水
（2:2:1）から再結晶する。

生じた物質（TLCにより95％以上の純度）を、中程度の
多孔度のガラスフリットを有する３のガラスのブフナ
ー漏斗中CHCl₃で溶出することにより、シリカゲル（200
g,60−200メッシュ,Baker）に通す。そのCHCl₃溶液をロ
ータリーエバポレーターで乾固し、そして残渣をメタノ
ール／水から再結晶すると66.6g（70％）の無色針状晶
を与える。

このような方法により製造された生成物の構造は、既知
の分析法により１と確認された。窒素下で25゜,4゜およ
び−17℃において保存された１の試料は、２年後全く分
解を示さなかった（TLCおよびHPLCによる分析）。１ （空気とアルゴン中両方とも）、６（アルゴン中）お
よび５（空気とアルゴン中両方とも）の試料を小スケー
ルでの前記の加水分解にかけた。粗反応混合物のTLC分
析は、R_f0.70,0.65（６と同じR_f）および0.31に主要な
スポットを示し５の場合は（１と６は付加）、R_f0.36
（12と同じR_f）にさらに主要スポットが観察された。GC
およびHPLCも同様な結果を与えた。

発明の範囲および精神を逸脱することなく、本発明に様
々な変更を行うことができることは、当業者にとって明
らかであろう。

【図面の簡単な説明】

第１図は、相当する構造式と共に本発明に従った反応式
の模式的流れ図を表わす。 第２図は、本発明の方法により製造された中間体および
副生成物を示している。 第３図は、本明細書中で検討される幾つかの化合物の詳
細な構造式を表わす。

フロントページの続き (72)発明者 ケー―シ ウァング アメリカ合衆国，バージニア 22209，ア ーリントン，309，ノース ピアース ス トリート 1305 (72)発明者 アレムカ キシク アメリカ合衆国，テキサス 77025，ヒュ ーストン，アパートメント 202，ベルフ ォンテイン 2601 (56)参考文献 特開 昭54−55734（ＪＰ，Ａ) Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ Ｖｏｌ．51，Ｎ ｏ．21，Ｐ．4047−4053（1986) Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓ ｉｃｓ ｏｆ Ｌｉｐｉｄｓ Ｖｏｌ．18 Ｎｏ．３ Ｐ．240−257（1977) Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐ．52−63 （1954) Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ． Ｌｉｐｉｄｓ Ｖｏｌ．18 Ｐ．233−239（1977)

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】３β−ベンゾイルオキシコレクタ−5,7−
   ジエンを３β−ベンゾイルオキシ−５−コレスタ−7,14
   −ジエンへ変換する方法であって、 （ｉ）３β−ベンゾイルオキシコレスタ−5,7−ジエン
   を、高くても−55℃の温度の溶媒中、前記３β−ベンゾ
   イルオキシコレスタ−5,4−ジエンを前記３β−ベンゾ
   イルオキシ−５−コレスタ−7,14−ジエンに変換するの
   に十分な時間、少なくとも2Mの前記溶媒中の濃度のHC1
   と接触させ； （ii）有意な量の３β−ベンゾイルオキシ−５−コレス
   タ−8,14−ジエンの形成を防ぐために、生じた反応混合
   物を塩基で中和し；そして （iii）前記３β−ベンゾイルオキシ−５−コレスタ−
   7,14−ジエンを回収する； ことを含んで成る方法。
2. 【請求項２】前記３β−ベンゾイルオキシ−５−コレス
   タ−7,14−ジエンが３β−ベンゾイルオキシ−５α−コ
   レスタ−7,14−ジエンである、請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】前記３β−ベンゾイルオキシ−５−コレス
   タ−7,14−ジエンが３β−ベンゾイルオキシ−５β−コ
   レスタ−7,14−ジエンである、請求項１に記載の方法。
4. 【請求項４】前記HC1の濃度が2.0M〜2.5Mである、請求
   項１に記載の方法。
5. 【請求項５】前記温度が−65℃〜−75℃である、請求項
   ４に記載の方法。
6. 【請求項６】前記HClがガスとして前記反応混合物中に
   2.0〜2.5Mの濃度まで導入される、請求項１に記載の方
   法。
7. 【請求項７】前記溶媒がCHCl₃およびCH₂Cl₂の混合物を
   含んで成る、請求項１に記載の方法。
8. 【請求項８】前記溶媒混合物が約3:1の比のCHCl₃および
   CH₂Cl₂から成る、請求項７に記載の方法。
9. 【請求項９】前記の中和段階の前に、水酸化ナトリウム
   のトラップを通して前記反応混合物からHClを除去する
   段階をさらに含んで成る、請求項１に記載の方法。
10. 【請求項１０】前記塩基が、濃NH₄OHである、請求項１
    に記載の方法。
11. 【請求項１１】前記３β−ベンゾイルオキシ−５−コレ
    スタ−7,14−ジエンを得る前に、前記３β−ベンゾイル
    オキシ−コレスタ−5,7−ジエンを３β−ベンゾイルオ
    キシ−６α−クロロ−５α−コレスタ−７−エンに変換
    する、請求項１に記載の方法。
12. 【請求項１２】前記反応混合物を中和する時を決定する
    ために前記の最初の反応混合物をモニタリングする段階
    をさらに含んで成る、請求項１に記載の方法。
13. 【請求項１３】前記モニタリングがクロマトグラフィー
    により達成される、請求項12に記載の方法。
14. 【請求項１４】前記３β−ベンゾイルオキシコレスタ−
    5,7−ジエンが、７−デヒドロコレステロールと塩化ベ
    ンゾイルとを反応することにより得られる、請求項１に
    記載の方法。