JPH07316039A

JPH07316039A - 脂質小胞体形成材料および脂質小胞体

Info

Publication number: JPH07316039A
Application number: JP13142794A
Authority: JP
Inventors: Yoshihiro Yano; 嘉宏矢野; Kazuhiro Akama; 和博赤間; Koji Awai; 浩二粟井; Satoru Tokuyama; 悟徳山
Original assignee: Nippon Oil and Fats Co Ltd
Current assignee: NOF Corp
Priority date: 1994-05-20
Filing date: 1994-05-20
Publication date: 1995-12-05
Anticipated expiration: 2018-09-08
Also published as: JP3443939B2

Abstract

(57)【要約】【目的】リン脂質からなる脂質小胞体として、保存安
定性や生体内分解性にすぐれ、しかもリポソ―ム用の脂
質小胞体として内水相に含ませた物質、たとえば薬物の
徐放性にすぐれるものを提供する。【構成】脂質小胞体の形成材料として、非重合性リン
脂質と、グリセロ―ル基に結合する２個のアシル基のう
ちの一方が重合性のアシル基、他方が非重合性のアシル
基であるホスフアチジルエステルからなる重合性リン脂
質とを、前者の非重合性リン脂質１モルに対して、後者
の重合性リン脂質が０．１〜１０モルとなる割合で混合
使用する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、脂質小胞体形成材料
と、これを用いた脂質小胞体、主にリポソ―ム用の脂質
小胞体、とくに内水相に含ませた薬物を徐々に放出する
ことができる徐放性製剤としての脂質小胞体に関するも
のである。

【０００２】

【従来の技術】徐放性製剤は、強烈な副作用を有する薬
物の副作用を低減したり、血中滞留時間の短い薬物の効
果を長期にわたつて持続させることを目的としたもので
ある。従来、薬物をカプセル化してその有効性を高める
ため、マイクロカプセル〔新版「マイクロカプセル−そ
の製法・性質・応用−」、三共出版（株）、第４２〜６
３頁〕に代表される合成高分子を膜材料としたカプセル
化が行われてきたが、カプセルの粒径制御の難しさや、
生体内分解性、徐放性の制御などの問題があり、医療用
として適当ではなかつた。

【０００３】また、特開昭６０−２１５６２２号、同６
３−２２５１６号などの公報に開示されているように、
分散時間や徐放性の制御にすぐれた薬物担体として、ポ
リ乳酸などのポリマ―に薬剤を含ませた徐放性製剤が知
られているが、これらは、微粒子化の困難さや、変成さ
せずに水溶性薬物を保持させたりすることなどに問題が
あり、やはり医療用として適当ではなかつた。

【０００４】最近になり、天然リン脂質からなる脂質小
胞体が薬物などのカプセル化に有効であることがわか
り、たとえば、特開昭６４−９９３１号公報、日本油脂
（株）＆日油リポソ―ム（株）発行の「ＮＥＷＬＩＰ
ＩＤＳ」ｖｏｌ．１（１９９０年）、特開平２−３００
１２０号公報、特開平３−１６３０３１号公報などにお
いて、数多くの報告がなされてきている。

【０００５】これらの脂質小胞体は、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマ
ルジヨンからなる、いわゆる、リポソ―ムを構成する小
胞体として、内水相との界面に親水性基（リン脂質極性
基）が位置するリン脂質配列分子と、外水相との界面に
親水性基（リン脂質極性基）が位置するリン脂質配列分
子との２分子層膜を形成して、この膜の内側に取り込ま
れる内水相中の水溶性薬物をこの膜を介して徐々に外側
に放出させることにより、薬効を持続的に発揮させるよ
うにしたものである。

【０００６】しかし、天然リン脂質からなる脂質小胞体
では、凍結操作や長期にわたる保管などでの保存安定性
や、体内での安定性が悪く、粒径変化などの性状変化が
起こつて、安定した性能を発揮させにくい問題があり、
また、薬効が短時間のうちに消失するなど徐放性の面で
も十分に満足できなかつた。

【０００７】一方、特開昭６０−６７４８９号、同６２
−２０５０９２号、同６３−５４３８４号、同６３−５
４３８５号などの公報では、重合性基を導入したリン脂
質を用いて、脂質小胞体の形成後に重合処理することを
提案している。この場合は、重合処理で膜の強度が大き
くなるため、保存安定性の向上は望めるが、薬効が逆に
発現されにくく、徐放性の面でやはり満足できない。ま
た、生体内分解性が悪くなり、生体内に小胞体が蓄積す
る問題もある。

【０００８】また、特開昭６２−１０４８４４号公報で
は、徐放性などの改善を期待して、重合性基を導入した
リン脂質と非重合性リン脂質との混合物より脂質小胞体
を形成したのち、非重合性リン脂質を除去し、小孔のあ
る脂質小胞体を形成することを提案しているが、小孔形
成のための除去操作などが面倒で、実用性に欠ける。特
開平４−２０２１２３号公報では、分解性のペプチド脂
質小胞体を用いることを提案しているが、煩雑な重合操
作が必要なうえに、生体内異種ペプチドを用いるための
毒性の問題や抗原性などの問題を避けられない。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】このように、現在のと
ころ、実用性のある徐放性製剤として、保存安定性など
の安定性にすぐれ、かつ生体内分解性にすぐれて生体内
に蓄積することがなく、しかも薬効の徐放性にもすぐれ
たものは、ほとんどみられない。

【００１０】本発明は、このような事情にてらし、リン
脂質からなる脂質小胞体として、保存安定性などの安定
性および生体内分解性にすぐれ、しかもリポソ―ム用の
脂質小胞体として、内水相に含ませた物質の徐放性にす
ぐれるもの、とくに上記物質が薬物である場合に薬効が
長期にわたつて持続する徐放性製剤として適した脂質小
胞体を提供することを目的としている。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の目
的に対し、鋭意研究した結果、脂質小胞体形成材料とし
て、非重合性リン脂質と特定の重合性リン脂質とを特定
割合で混合したものを用いることにより、安定性や生体
内分解性にすぐれ、しかもリポソ―ム用の脂質小胞体と
して、内水相に含ませた物質の徐放性にすぐれるもの、
とくに上記物質が薬物である場合に薬効の持続性にすぐ
れる徐放性製剤として適した脂質小胞体が得られること
を知り、本発明を完成するに至つた。

【００１２】すなわち、本発明は、Ａ）非重合性リン脂
質と、Ｂ）つぎの式（１）；（ただし、式中、Ｒ¹，Ｒ²はそのいずれか一方が重合
性のアシル基、他方が非重合性のアシル基であり、Ｘは
リン脂質極性基である）で表される重合性リン脂質とを
含有し、上記Ａ成分の非重合性リン脂質１モルに対する
上記Ｂ成分の重合性リン脂質の割合が０．１〜１０モル
であることを特徴とする脂質小胞体形成材料と、この材
料より常法により形成したリポソ―ム用などの脂質小胞
体、とくに膜形成後に上記Ｂ成分の重合性リン脂質を重
合させてなる脂質小胞体に係るものである。

【００１３】

【発明の構成・作用】本発明におけるＡ成分の非重合性
リン脂質としては、天然または合成のリン脂質を広く使
用できる。具体的には、一般的なリン脂質である卵黄レ
シチン、大豆レシチン、水添卵黄レシチン、水添大豆レ
シチンなどや、天然または合成のホスフアチジルコリ
ン、ホスフアチジルエタノ―ルアミン、ホスフアチジル
セリン、ホスフアチジルイノシト―ル、ホスフアチジル
グリセロ―ルなどが挙げられ、これらの中からその１種
または２種以上が用いられる。

【００１４】本発明におけるＢ成分の重合性リン脂質
は、式（１）で表されるホスフアチジルエステルであつ
て、式中のＸはホスホリルコリン基、ホスホリルジエタ
ノ―ルアミン基、ホスホリルセリン基、ホスホリルイノ
シト―ル基、ホスホリルグリセロ―ル基などのリン脂質
極性基、Ｒ¹，Ｒ²はそのいずれか一方が重合性のアシ
ル基、他方が非重合性のアシル基である。

【００１５】Ｒ¹，Ｒ²がともに非重合性のアシル基と
なるものは、Ａ成分の非重合性リン脂質に包含される。
また、Ｒ¹，Ｒ²がともに重合性のアシル基となるもの
は、これとＡ成分との併用系としても本発明の効果は奏
されない。つまり、本発明では、上記特定構成の重合性
リン脂質とＡ成分の非重合性リン脂質とを混合使用する
ことに、大きな特徴が存するものである。

【００１６】Ｒ¹，Ｒ²を構成する重合性のアシル基
は、共役二重結合を有する脂肪酸、三重結合を有する脂
肪酸、末端二重結合を有する脂肪酸などの重合性脂肪酸
の残基であり、たとえば、２，４−オクタデカジエン
酸、８，１０，１２−オクタデカトリエン酸、９−（ｐ
−ビニルベンゾイル）ノナニル酸、１２−メタクリロイ
ルオキシドデカン酸、１０−ウンデシン酸、１６−ヘプ
タデシン酸、２２−トリコシン酸、トリコサ−１０，１
２−ジイン酸、トリコサ−２，４−ジイン酸、ノナデカ
−２，４−ジイン酸、１１，１３−テトラデカジエン
酸、１１−（２，４−ヘキサジエニルオキシ）ウンデカ
ノン酸などの各種の脂肪酸の残基を挙げることができ
る。

【００１７】Ｒ¹，Ｒ²を構成する非重合性のアシル基
は、天然または合成の飽和脂肪酸や不飽和脂肪酸などの
非重合性脂肪酸の残基であり、たとえば、カプリン酸、
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン
酸、アラキジン酸、ベヘン酸、オレイン酸、エライジン
酸、リノ―ル酸、リノレン酸、エレオステアリン酸など
の各種の脂肪酸の残基が挙げられる。

【００１８】このようなＢ成分の重合性リン脂質は、た
とえば、レシチンなどの天然または合成のホスフアチジ
ルエステルをホスホリパ―セＡにより加水分解して、リ
ゾレシチンなどのリゾホスフアチジルエステルとし、こ
れに重合性脂肪酸をエステル化反応させるなどの方法に
より、合成することができる。

【００１９】本発明においては、上記Ｂ成分の重合性リ
ン脂質の中から、その１種または２種以上を使用する
が、使用量は、Ａ成分１モルに対し、０．１〜１０モル
とすべきであり、好ましくは０．１２〜８モルである。
０．１モルより少ないと、保存安定性や体内での安定性
に劣り、またリポソ―ム用などの脂質小胞体では内水相
に含ませた物質、たとえば薬物が速やかに放出されるた
め、良好な徐放性が得られない。１０モルより多くなる
と、膜中に形成される重合性リン脂質の緻密な高分子量
ポリマ―ドメインにより、生体内分解性が損なわれて生
体内に蓄積しやすく、またリポソ―ム用などの脂質小胞
体では内水相に含ませた物質、たとえば薬物の放出が損
なわれ、やはり良好な徐放性が得られない。

【００２０】本発明の脂質小胞体形成材料は、Ａ成分の
非重合性リン脂質とＢ成分の重合性リン脂質とを上記割
合で含むほか、リン脂質以外の構成成分として、公知の
膜安定化剤であるコレステロ―ルや脂肪酸などを必要に
より含ませることができる。コレステロ―ルの使用量
は、Ａ，Ｂ両成分のリン脂質１モルに対し、通常１．５
モルまでとするのがよく、また脂肪酸の使用量は、Ａ，
Ｂ両成分のリン脂質１モルに対し、通常０．５モルまで
とするのがよい。また、その他の成分として、界面活性
剤をはじめとする公知の膜親和性の両親媒性物質など
も、本発明の効果を損なわない限り、必要により使用す
ることができる。

【００２１】本発明においては、上記の脂質小胞体形成
材料を用いて、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジヨンからなるリポ
ソ―ムや、Ｏ／Ｗ型エマルジヨンなどの使用形態に応じ
た、所望の脂質小胞体を形成する。その形成法は任意で
あり、公知のいかなる方法によつてもよい。たとえば、
リポソ―ム用の脂質小胞体では、「リポソ―ム」南江堂
出版（１９８８年）に詳しく記載されているように、薄
膜法、超音波処理法、エタノ―ル注入法、フレンチプレ
ス法、押し出し法、透析法、凍結融解法、逆相蒸発法な
どにより形成することができ、とくに好ましくは押し出
し法によつて粒径０．２μｍ前後に形成するのがよい。

【００２２】このように脂質小胞体としての膜形成を行
つたのち、Ｂ成分の重合性リン脂質を重合させることに
より、またその際重合度や重合率を調整することによ
り、保存安定性などの安定性や薬物などの徐放性の面
で、設計どおりの特性を得ることができる。重合法はと
くに限定されず、開始剤重合、紫外線重合、γ線重合、
Ｘ線重合、電子線重合などの公知の方法を自由に選択で
き、これらを適宜組み合わせてもよい。重合後に精製の
必要がないという点からは、紫外線重合、γ線重合、Ｘ
線重合、電子線重合などが好ましい。

【００２３】リポソ―ム用の脂質小胞体を形成する際に
は、内水相中に水溶性の徐放性物質を含ませることがで
きる。とくに徐放性製剤を得る場合は、上記物質として
薬物を含ませることができるが、この薬物としては、小
胞体製剤に適当なものであれば、幅広く使用できる。た
とえば、アスピリン、アセトアミノフエノンなどの解熱
剤、リンデロン、セレスタミンなどの抗炎症剤、塩酸ド
キソルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ブレオ
マイシンなどの制癌剤、ミゾリビンなどの免疫抑制剤、
５−フルオロウラシルなどの代謝拮抗剤、プロプラノロ
―ルなどのベ―タ遮断剤、トリフルオペラジン、メシル
酸チオプロペラジンなどの中枢神経薬剤、天然型または
遺伝子組み替え型インタ―ロイキン２などのリンホカイ
ン、天然型または遺伝子組み替え型インタ―フエロン
（α，β，γ）、増血因子であるエリスロポエチンな
ど、その他、ニコチン酸、コカルボキシラ―ゼなどの各
種ビタミンや、各種生理作用を持つ酵素、抗体、ヘモグ
ロビンなどのタンパクを含め多様な薬剤が挙げられる。
これらの中でも、塩酸ドキソルビシンのような制癌剤
が、本発明においてとくに好ましく用いられる。

【００２４】このようにして得られる薬物含有の脂質小
胞体は、良好な安定性および生体内分解性に加えて、薬
物の徐放性に格段にすぐれていることから、徐放性製剤
として薬物を体内に送り込むキヤリア―として利用さ
れ、ＤＤＳ（ドラツクデリバリ―システム）や人工血
液、人工ワクチンなどの幅広い用途に利用できるほか、
工業的用途しても、分散液としてバイオ素子やマイクロ
セルリアクタ―などの各種の用途に利用することもでき
る。

【００２５】

【発明の効果】以上のように、本発明では、脂質小胞体
形成材料として、非重合性リン脂質と特定の重合性リン
脂質とを特定割合で混合使用したことにより、保存安定
性や生体内安定性にすぐれ、かつ生体内分解性にもすぐ
れた脂質小胞体を形成できる。また、重合性リン脂質の
使用量、膜形成後の重合度や重合率の調整により、リポ
ソ―ム用の脂質小胞体として内水相に含ませた水溶性物
質の徐放性を自由に制御でき、とくに上記物質が薬物で
ある場合この薬効を望む徐放能で自由に徐放させること
ができる実用的な徐放性製剤を得ることができる。

【００２６】

【実施例】つぎに、本発明の実施例を記載して、より具
体的に説明する。ただし、本発明は以下の実施例にのみ
限定されるものではない。

【００２７】実施例１市販の水添卵黄レシチンを、ナジヤ・ナジヤの毒から得
たホスホリパ―ゼＡ₂を用いた既知の方法により処理し
て、１−アシル−Ｌ−３−グリセロホスホリルコリンを
得た。つぎに、これに２Ｅ，４Ｅ−オクタデカジエン酸
をＮ，Ｎ´−カルボジイミダゾ―ルを使つた既知の方法
で反応させることにより、１−アシル−２−（２Ｅ，４
Ｅ−オクタデカジエノイル）−Ｌ−３−グリセロホスホ
リルコリン（以下、ＡＯＤＰＣという）を合成した。

【００２８】このように合成したＡＯＤＰＣからなる重
合性リン脂質と、市販のＬ−α−ジパルミトイルホスフ
アチジルコリン（以下、ＤＰＰＣという）からなる非重
合性リン脂質とを、前者：後者のモル比が８：１となる
割合で、かつ全量が２．４ｇとなるように秤量し、ナス
型フラスコに加え、ベンゼン１５ｍｌを加えて溶解させ
た。これを液体窒素により凍結させ、二晩凍結乾燥させ
て、乾燥粉末からなる脂質小胞体形成材料Ｘ₁を調製し
た。

【００２９】実施例２ＡＯＤＰＣからなる重合性リン脂質と、ＤＰＰＣからな
る非重合性リン脂質との割合を、前者：後者のモル比が
１：１となるように変更した以外は、実施例１と同様に
して、乾燥粉末からなる脂質小胞体形成材料Ｘ₂を調製
した。

【００３０】実施例３ＡＯＤＰＣからなる重合性リン脂質と、ＤＰＰＣからな
る非重合性リン脂質との割合を、前者：後者のモル比が
０．１２：１となるように変更した以外は、実施例１と
同様にして、乾燥粉末からなる脂質小胞体形成材料Ｘ₃
を調製した。

【００３１】比較例１ＡＯＤＰＣからなる重合性リン脂質だけを用いて、実施
例１と同様の凍結乾燥操作により、乾燥粉末からなる脂
質小胞体形成材料Ｙ₁を調製した。

【００３２】比較例２重合性リン脂質として、ＡＯＤＰＣに代えて、既知の方
法で合成した１，２−ジ（２Ｅ，４Ｅ−オクタデカジエ
ノイル）−Ｌ−３−グリセロホスホリルコリン（以下、
ＤＯＤＰＣという）を使用し、これとＤＰＰＣからなる
非重合性リン脂質とを、前者：後者のモル比が１：１と
なるように混合した以外は、実施例１と同様にして、乾
燥粉末からなる脂質小胞体形成材料Ｙ₂を調製した。

【００３３】比較例３ＤＰＰＣからなる非重合性リン脂質だけを用いて、実施
例１と同様の凍結乾燥操作により、乾燥粉末からなる脂
質小胞体形成材料Ｙ₃を調製した。

【００３４】実施例４〜６１０ミリモルのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ９．０）１００
ｍｌに、５（６）−カルボキシフルオロレセイン（以
下、ＣＦという）を１００ミリモル溶かし、ＣＦの溶解
を確認したのち、１ＮのＮａＯＨ水溶液を用いて、ｐＨ
７．４に調整し、ＣＦ溶解ＨＥＰＥＳ緩衝液を調製し
た。

【００３５】このＣＦ溶解ＨＥＰＥＳ緩衝液１２ｍｌ
と、ビ―カ―に秤量した実施例１〜３の各脂質小胞体形
成材料Ｘ₁〜Ｘ₃の０．６ｇとを混ぜ、１２時間スタ―
ラ―を用いて撹拌混合することにより、３種の脂質分散
液を得た。つづいて、この各脂質分散液を、エクストル
―ダ―〔日油リホソ―ム（株）製の商品名〕を用いて、
ポリカ―ボネ―ト製のフイルタ―を通過させることによ
り、０．２μｍの大きさとなるようにサイジングした。

【００３６】つぎに、封入されなかつたＣＦを取り除く
ために、サイジングした分散液をセフアデツクスＧ−５
０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社製の商品名）のゲルカラムで
ゲルろ過した。その際、ゲルろ過の溶媒として、１５０
ミリモルのＮａＣｌを添加した１０ミリモルのＨＥＰＥ
Ｓ緩衝液（ｐＨ７．４）を用いた。このようにして、３
種のＣＦ内包脂質小胞体分散液を得た。

【００３７】比較例４〜６実施例１〜３の各脂質小胞体形成材料Ｘ₁〜Ｘ₃に代え
て、比較例１〜３の各脂質小胞体形成材料Ｙ₁〜Ｙ₃を
用いた以外は、実施例４〜６と同様にして、３種のＣＦ
内包脂質小胞体分散液を得た。

【００３８】上記の実施例４〜６および比較例４〜６で
得た各ＣＦ内包脂質小胞体分散液について、γ線により
照射条件５ＫＧｙ／時間で１時間重合処理したのち、下
記の要領で保存安定性試験および徐放性試験を行つた。
これらの試験結果を、後記の表１に示す。なお、同表に
は、参考のため、用いた脂質小胞体形成材料の種類およ
び重合性リン脂質と非重合性リン脂質の混合モル比を併
記した。

【００３９】＜保存安定性試験＞ＣＦ内包脂質小胞体分
散液を液体窒素を用いて瞬間的に凍結させ、さらに室温
で融解させることによつて、凍結融解前後の粒径安定性
を調べた。粒径は、凍結融解前後の脂質小胞体を、１５
０ミリモルのＮａＣｌを添加した１０ミリモルのＨＥＰ
ＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）を満たしたセル中に一定量は
かつて分散させ、ＮＩＣＯＭＰモデル３７０〔日油リ
ポソ―ム（株）製の商品名〕を使つて測定した。凍結融
解前後の粒径安定性は、粒径変化率として凍結融解後粒
径／凍結前粒径の比で示した。したがつて、凍結融解に
よる粒径変化は１に近いものほど粒径変化が少なく、膜
が安定であることを意味している。

【００４０】＜徐放性試験＞分散液より取り出したＣＦ
内包脂質小胞体を、１５０ミリモルのＮａＣｌを添加し
た１０ミリモルのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）を満
たした温度２５℃の蛍光セル中に一定量はかつて分散さ
せ、蛍光光度計を用いてλ_em＝４９０ｎｍ、λ_em＝５２
０ｎｍを一定時間後に測定することにより、ＣＦの時間
放出性を調べた。封入ＣＦの全量は、界面活性剤Ｔｒｉ
ｔｏｎ−Ｘ−１００を加え、超音波照射することで小胞
体を破壊して測定した。徐放性の評価は、１２０分後の
ＣＦ放出率を比較することにより行つた。好ましい徐放
性は、１２０分後のＣＦ放出率が約１０〜９０％の範囲
にあるときである。

【００４１】

【表１】

【００４２】実施例７〜９超純水を用いて、１０ミリモルのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐ
Ｈ７．４）１００ｍｌを調製した。このＨＥＰＥＳ緩衝
液１２ｍｌと、実施例１〜３の各脂質小胞体形成材料Ｘ
₁〜Ｘ₃の０．６ｇとをビ―カ―内で混合し、１２時間
スタ―ラ―を用いて撹拌混合することにより、３種の脂
質分散液を得た。

【００４３】ついで、この各脂質分散液を、エクストル
―ダ―〔日油リホソ―ム（株）製の商品名〕を用いて、
ポリカ―ボネ―ト製のフイルタ―を通過させることによ
り、０．２μｍの大きさとなるようにサイジングした。
これらの操作をすべてクリ―ンル―ム内に設置したクリ
―ンベンチ上で行い、減菌された器具を用いて行うこと
により、３種の脂質小胞体分散液を無菌的に得た。

【００４４】比較例７〜９実施例１〜３の各脂質小胞体形成材料Ｘ₁〜Ｘ₃に代え
て、比較例１〜３の各脂質小胞体形成材料Ｙ₁〜Ｙ₃を
用いた以外は、実施例７〜９と同様にして、３種の脂質
小胞体分散液を無菌的に得た。

【００４５】上記の実施例７〜９および比較例７〜９で
得た各脂質小胞体分散液について、γ線により照射条件
５ＫＧｙ／時間で１時間重合処理したのち、下記の要領
で生体内蓄積性試験を行つた。この試験結果を、後記の
表２に示す。なお、同表には、参考のために、用いた脂
質小胞体形成材料の種類および重合性リン脂質と非重合
性リン脂質の混合モル比を併記した。

【００４６】＜生体内蓄積性試験＞実験動物には、Ｃｒ
ｊ：ＣＤ（ＳＤ）系ラツト雄（日本チヤ―ルズ・リバ
―）を用いた。脂質小胞体分散液を、ラツト体重に対し
て８．０ｍｌ／Kgに相当する量シリンジに取り、尾静脈
内に１回投与した。対照としては生理食塩水（局方）を
用い、上記と同じ量を同じ方法で投与した。

【００４７】これらのラツトを飼育し、投与３日後およ
び１２０日後に、ネンブタ―ル（商品名）麻酔下で、腹
大動脈より脱血させて屠殺した。脂質小胞体が蓄積した
肝臓を摘出し、組織学的検査を行つた。肝臓は１０％中
性緩衝ホルマリン液に固定後、常法によりパラフイン切
片を作成し、Ｈ．Ｅ染色およびＮｉｌｅｂｌｕｅ染色
標本を作成後、顕微鏡によつて観察した。

【００４８】この観察によると、投与３日後のＨ．Ｅ染
色標本で、生理食塩水投与のものを除いて、泡沫状の物
質を貧食し膨脹したマクロフア―ジ（Ｋｕｐｆｆｅｒ細
胞）が認められた。いずれも、Ｎｉｌｅｂｌｕｅ染色
で紫色を呈し、脂質陽性であつた。脂質小胞体自身はＮ
ｉｌｅｂｌｕｅ染色で紫色を呈するので、貧食物質は
脂質小胞体であると判断した。

【００４９】一方、投与１２０日後の標本については、
ＡＯＤＰＣのみからなる脂質小胞体や、ＤＯＤＰＣをリ
ン脂質の一部成分として用いた脂質小胞体を投与した固
体についてだけ、染色性は薄かつたものの小滴化した弱
好塩基物質を貧食したマクロフア―ジを認めた。これら
のものは、Ｎｉｌｅｂｌｕｅ染色でも薄い桃紫色を呈
し、脂質陽性であつた。以上の試験により、ＡＯＤＰＣ
のみからなる脂質小胞体や、ＤＯＤＰＣをリン脂質の一
部成分として用いた脂質小胞体では、生体内蓄積性が高
いと判断した。

【００５０】上記の試験結果として、投与１２０日後の
標本について、Ｎｉｌｅｂｌｕｅ染色で陽性反応が認
められたものを＋、Ｎｉｌｅｂｌｕｅ染色で陽性反応
がみられなかつたもの、すなわち脂質小胞体様物質の蓄
積が認められなかつたものを−として、その結果を表２
に示した。

【００５１】

【表２】

【００５２】以上の試験結果から明らかなように、本発
明の脂質小胞体形成材料を用いて、膜形成後に重合処理
してなる脂質小胞体は、保存安定性および内包物質の徐
放性にすぐれ、しかも生体内蓄積性が低いという特徴が
あり、実用性の高い徐放性製剤などとして幅広く利用で
きるものであることがわかる。

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【手続補正書】

【提出日】平成７年６月７日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００５

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００５】これらの脂質小胞体は、いわゆる、リポソ
ームを構成する小胞体として、内水相との界面に親水性
基（リン脂質極性基）が位置するリン脂質配列分子と、
外水相との界面に親水性基（リン脂質極性基）が位置す
るリン脂質配列分子との２分子層膜を形成して、この膜
の内側に取り込まれる内水相中の水溶性薬物をこの膜を
介して徐々に外側に放出させることにより、薬効を持続
的に発揮させるようにしたものである。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】Ａ）非重合性リン脂質と、Ｂ）つぎの式
（１）；（ただし、式中、Ｒ¹，Ｒ²はそのいずれか一方が重合
性のアシル基、他方が非重合性のアシル基であり、Ｘは
リン脂質極性基である）で表される重合性リン脂質とを
含有し、上記Ａ成分の非重合性リン脂質１モルに対する
上記Ｂ成分の重合性リン脂質の割合が０．１〜１０モル
であることを特徴とする脂質小胞体形成材料。
【請求項２】請求項１に記載の形成材料よりなる脂質
小胞体。
【請求項３】請求項１に記載の形成材料からなり、か
つ膜形成後にＢ成分の重合性リン脂質を重合させてなる
脂質小胞体。
【請求項４】リポソ―ム用の脂質小胞体であつて、内
水相に薬物が含まれてなる請求項２または請求項３に記
載の脂質小胞体。