JPH07278175A - ホスホリルコリン含有グリセロ糖脂質化合物 - Google Patents
ホスホリルコリン含有グリセロ糖脂質化合物Info
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- JPH07278175A JPH07278175A JP7059617A JP5961795A JPH07278175A JP H07278175 A JPH07278175 A JP H07278175A JP 7059617 A JP7059617 A JP 7059617A JP 5961795 A JP5961795 A JP 5961795A JP H07278175 A JPH07278175 A JP H07278175A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】構造式Ｉで示される１′−（２，３−ビス（ヘ
キサデカノイルオキシ）プロピル〕−α−Ｄ−グルコピ
ラノス−６′−イル−２″−（トリメチルアンモニウ
ム）エチルフォスフェート。 【効果】構造式Ｉで示される化合物は、マイコプラズマ
・フェルメンタンスの脂質画分から分離精製によって得
られた新規なホスホリルコリン含有グリセロ糖脂質化合
物であり、マイコプラズマ・フェルメンタンスの感染に
ついての診断薬又は医薬、或いは、それらの薬品の中間
体として有用である。
キサデカノイルオキシ）プロピル〕−α−Ｄ−グルコピ
ラノス−６′−イル−２″−（トリメチルアンモニウ
ム）エチルフォスフェート。 【効果】構造式Ｉで示される化合物は、マイコプラズマ
・フェルメンタンスの脂質画分から分離精製によって得
られた新規なホスホリルコリン含有グリセロ糖脂質化合
物であり、マイコプラズマ・フェルメンタンスの感染に
ついての診断薬又は医薬、或いは、それらの薬品の中間
体として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、マイコプラズマ・フェ
ルメンタンス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｆｅｒｍｅｎｔ
ａｎｓ）ＧＧＰＬ株の脂質画分から見出された新規な
『ホスホリルコリン含有α−グルコース（糖）脂質化合
物』に関するものである。
ルメンタンス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｆｅｒｍｅｎｔ
ａｎｓ）ＧＧＰＬ株の脂質画分から見出された新規な
『ホスホリルコリン含有α−グルコース（糖）脂質化合
物』に関するものである。
【０００２】
【従来技術の説明】ヒトレトロウイルスであるＨＴＬＶ
−Ｉ、およびＨＩＶ（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆ
ｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）はいずれもリンパ球のな
かでもとくにヘルパーＴ細胞に感染しやすく、ＨＴＬＶ
−Ｉではこれをモノクローナルに腫瘍化し、ＨＩＶでは
これを破壊することにより発症する。また、マイコプラ
ズマ・フェルメンタンスは、ＨＩＶによるＡＩＤＳの発
症やリウマチの病態に深く係わっているという報告があ
るが、そのメカニズムについては全くわかっていない。
−Ｉ、およびＨＩＶ（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆ
ｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）はいずれもリンパ球のな
かでもとくにヘルパーＴ細胞に感染しやすく、ＨＴＬＶ
−Ｉではこれをモノクローナルに腫瘍化し、ＨＩＶでは
これを破壊することにより発症する。また、マイコプラ
ズマ・フェルメンタンスは、ＨＩＶによるＡＩＤＳの発
症やリウマチの病態に深く係わっているという報告があ
るが、そのメカニズムについては全くわかっていない。
【０００３】
【本発明が解決しようとする問題点】本発明の発明者ら
は、このメカニズムを解明するために、マイコプラズマ
・フェルメンタンスの脂質における主要な抗原性を持つ
種特異的抗原であるところの糖リン脂質を分離、精製し
て構造解析を試み、生理活性を有する可能性のある新規
な構造の物質を見出すべく、鋭意研究した。
は、このメカニズムを解明するために、マイコプラズマ
・フェルメンタンスの脂質における主要な抗原性を持つ
種特異的抗原であるところの糖リン脂質を分離、精製し
て構造解析を試み、生理活性を有する可能性のある新規
な構造の物質を見出すべく、鋭意研究した。
【０００４】
【問題点を解決する手段】発明者らは、前述の目的で研
究を行った結果、新規な糖リン脂質を分離、精製するこ
とに成功し、さらに、その物質を構造解析すること〔例
えば、赤外吸収分析（ＦＴＩＲ）、質量分析、１３Ｃお
よび１Ｈ−ＮＭＲなどにより構造解析すること〕によ
り、その絶対構造を確定した。
究を行った結果、新規な糖リン脂質を分離、精製するこ
とに成功し、さらに、その物質を構造解析すること〔例
えば、赤外吸収分析（ＦＴＩＲ）、質量分析、１３Ｃお
よび１Ｈ−ＮＭＲなどにより構造解析すること〕によ
り、その絶対構造を確定した。
【０００５】即ち、本発明のホスホリルコリン含有グリ
セロ糖脂質化合物は、１’−〔２，３−ビス（ヘキサデ
カノイルオキシ）プロピル〕−α−Ｄ−グルコピラノス
−６’−イル−２”−（トリメチルアンモニウム）エチ
ルフォスフェートに関する。
セロ糖脂質化合物は、１’−〔２，３−ビス（ヘキサデ
カノイルオキシ）プロピル〕−α−Ｄ−グルコピラノス
−６’−イル−２”−（トリメチルアンモニウム）エチ
ルフォスフェートに関する。
【０００６】本発明のホスホリルコリン含有グリセロ糖
脂質化合物は、次に示す構造式Ｉを有している。
脂質化合物は、次に示す構造式Ｉを有している。
【０００７】
【化１】
【０００８】マイコプラズマ・フェルメンタンス（Ｍｙ
ｃｏｐｌａｓｍａ ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）は、最近、
ヒトレトロウイルス感染患者及び細胞から高率に分離さ
れウイルス感染による病態の重要な増悪因子（ｃｏ−ｆ
ａｃｔｏｒ）となっている可能性が示唆されてきてい
る。今回、構造決定した物質は、このマイコプラズマ・
フェルメンタンスを分離、クローニングしてその脂質成
分を解析したところその生物の成分であることがわかっ
た。この物質はマイコプラズマ・フェルメンタンスに特
徴的に見出された新規化合物である。
ｃｏｐｌａｓｍａ ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）は、最近、
ヒトレトロウイルス感染患者及び細胞から高率に分離さ
れウイルス感染による病態の重要な増悪因子（ｃｏ−ｆ
ａｃｔｏｒ）となっている可能性が示唆されてきてい
る。今回、構造決定した物質は、このマイコプラズマ・
フェルメンタンスを分離、クローニングしてその脂質成
分を解析したところその生物の成分であることがわかっ
た。この物質はマイコプラズマ・フェルメンタンスに特
徴的に見出された新規化合物である。
【０００９】この物質はＡＩＤＳの病態、ＲＡの病態解
明の可能性をもつ有望な新規化合物である。また、この
化合物とその中間体は、ヒトレトロウイルス疾患などに
対する医薬またはそのような医薬の中間体としても有望
な化合物である。
明の可能性をもつ有望な新規化合物である。また、この
化合物とその中間体は、ヒトレトロウイルス疾患などに
対する医薬またはそのような医薬の中間体としても有望
な化合物である。
【００１０】以下、本発明の構造式Ｉで示されるホスホ
リルコリン含有グリセロ糖脂質を精製、分離・取得し、
その構造解析を行った実施例を示す。 実施例１ ｉ）培養；マイコプラズマ・フェルメンタンスＧＧＰＬ
株をＰＰＬＯ培地で増殖培養し、これをＰＢＳ（ｐｈｏ
ｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）で２
回洗浄したものを−８０℃に保存した。
リルコリン含有グリセロ糖脂質を精製、分離・取得し、
その構造解析を行った実施例を示す。 実施例１ ｉ）培養；マイコプラズマ・フェルメンタンスＧＧＰＬ
株をＰＰＬＯ培地で増殖培養し、これをＰＢＳ（ｐｈｏ
ｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）で２
回洗浄したものを−８０℃に保存した。
【００１１】ｉｉ）脂質の抽出；脂質は、６０ｍｌ（湿
潤状態の容量）の細胞に対しそれぞれ４００ｍｌのクロ
ロホルムとメタノールとの混合溶媒（クロロホルム：メ
タノール＝２：１、１：１および１：２である３種の混
合溶媒）を用いて抽出し９９３ｍｇの総脂質を得た。
潤状態の容量）の細胞に対しそれぞれ４００ｍｌのクロ
ロホルムとメタノールとの混合溶媒（クロロホルム：メ
タノール＝２：１、１：１および１：２である３種の混
合溶媒）を用いて抽出し９９３ｍｇの総脂質を得た。
【００１２】ｉｉｉ）分画Ａ（非結合部分の取得）；総
脂質はカラム（ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５
カラム）により非結合部分と結合部分とに分け、非結合
部分７７５ｍｇが得られた。
脂質はカラム（ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５
カラム）により非結合部分と結合部分とに分け、非結合
部分７７５ｍｇが得られた。
【００１３】ｉｖ）分画Ｂ（ホスホリルコリン含有グリ
セロ糖脂質の単離）；クロロホルムとメタノールと水と
の混合溶媒の３回濃度勾配を変え（例えば、１回目の容
量比、クロロホルム：メタノール：水＝８３：１６：
０．５〜２０：８０：８）イアトロビーズにかけて分画
Ａ（非結合部分）をさらに分画し、最後に１−プロパノ
ールとアンモニアと水との溶液（容量比、１−プロパノ
ール：アンモニア：水＝８０：５：１５〜７５：５：２
０）による濃度勾配を用いて各成分を単離した。収量
は、ホスホリルコリン含有グリセロ糖脂質（以下、ＧＧ
ＰＬ−１と言う）が３ｍｇであった。
セロ糖脂質の単離）；クロロホルムとメタノールと水と
の混合溶媒の３回濃度勾配を変え（例えば、１回目の容
量比、クロロホルム：メタノール：水＝８３：１６：
０．５〜２０：８０：８）イアトロビーズにかけて分画
Ａ（非結合部分）をさらに分画し、最後に１−プロパノ
ールとアンモニアと水との溶液（容量比、１−プロパノ
ール：アンモニア：水＝８０：５：１５〜７５：５：２
０）による濃度勾配を用いて各成分を単離した。収量
は、ホスホリルコリン含有グリセロ糖脂質（以下、ＧＧ
ＰＬ−１と言う）が３ｍｇであった。
【００１４】ｖ）質量分析；質量分析装置〔フィネガン
・ＭＡＴ社製、機種名：ＴＳＱ７０ｔｒｉｐｌｅ−ｓｔ
ａｇｅ ｇｕａｄｒｕｐｏｌｅ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔ
ｒｏｍｅｔｅｒ〕を用いて、前記のＧＧＰＬ−１につい
て、ＬＳＩＭＳ（Ｌｉｑｕｉｄ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ
ｉｏｎ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｏｒｏｍｅｔｒｙ）及び
ＭＳ／ＭＳ分析を行った。
・ＭＡＴ社製、機種名：ＴＳＱ７０ｔｒｉｐｌｅ−ｓｔ
ａｇｅ ｇｕａｄｒｕｐｏｌｅ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔ
ｒｏｍｅｔｅｒ〕を用いて、前記のＧＧＰＬ−１につい
て、ＬＳＩＭＳ（Ｌｉｑｕｉｄ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ
ｉｏｎ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｏｒｏｍｅｔｒｙ）及び
ＭＳ／ＭＳ分析を行った。
【００１５】ｖｉ）ＮＭＲ分析；前記のＧＧＰＬ−１に
ついて、（ＣＨ３）２ＳＯ−ｄ６／Ｄ２Ｏ（９８：２）
０．５ｍｌに溶解し、ＮＭＲ測定装置（日本電子（株）
製；ＦＸ−４００）を用いて、６０℃で１Ｈおよび１３
Ｃ−ＮＭＲを行った。
ついて、（ＣＨ３）２ＳＯ−ｄ６／Ｄ２Ｏ（９８：２）
０．５ｍｌに溶解し、ＮＭＲ測定装置（日本電子（株）
製；ＦＸ−４００）を用いて、６０℃で１Ｈおよび１３
Ｃ−ＮＭＲを行った。
【００１６】〔詳細な分析試験の結果〕 （ａ）マイコプラズマ・フェルメンタンスのホスホリル
コリン含有グリセロ糖脂質；マイコプラズマ・フェルメ
ンタンスＧＧＰＬ株から抽出した脂質の中性脂質画分に
ｏｒｉｃｉｎｏｌ−Ｈ２ＳＯ４（糖の検出）、及びＤｉ
ｔｔｍｅｒ（リンの検出）試薬に反応する数種の脂質
（リン糖脂質）を検出し、このうち１種（以下、ＧＧＰ
Ｌ−１と言う）についてシリカビーズカラムへの吸着を
行ってその溶出分離を行った。
コリン含有グリセロ糖脂質；マイコプラズマ・フェルメ
ンタンスＧＧＰＬ株から抽出した脂質の中性脂質画分に
ｏｒｉｃｉｎｏｌ−Ｈ２ＳＯ４（糖の検出）、及びＤｉ
ｔｔｍｅｒ（リンの検出）試薬に反応する数種の脂質
（リン糖脂質）を検出し、このうち１種（以下、ＧＧＰ
Ｌ−１と言う）についてシリカビーズカラムへの吸着を
行ってその溶出分離を行った。
【００１７】前記のＧＧＰＬ−１は、クロロホルム／メ
タノール／水による濃度勾配法において、ｌｙｓｏｐｈ
ｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ（以下、ｌｙｓｏ
ＰＣとも言う）と分離不可能であったが、１−プロパノ
ール／アンモニア／水による濃度勾配法（この場合、カ
ラムから溶出した各フラクションを酢酸で速やかに中和
してアルカリによるエステルの分解を抑えた）によって
分離することができた。
タノール／水による濃度勾配法において、ｌｙｓｏｐｈ
ｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ（以下、ｌｙｓｏ
ＰＣとも言う）と分離不可能であったが、１−プロパノ
ール／アンモニア／水による濃度勾配法（この場合、カ
ラムから溶出した各フラクションを酢酸で速やかに中和
してアルカリによるエステルの分解を抑えた）によって
分離することができた。
【００１８】前記ＧＧＰＬ−１は、ｏｒｉｃｉｎｏｌ−
Ｈ２ＳＯ４、Ｄｉｔｔｍｅｒ試薬及びＤｒａｇｅｎｄｏ
ｒｆｆ試薬（コリンの検出）に陽性を示し、しかも、緩
和なアルカリ処理で分解するものであった。
Ｈ２ＳＯ４、Ｄｉｔｔｍｅｒ試薬及びＤｒａｇｅｎｄｏ
ｒｆｆ試薬（コリンの検出）に陽性を示し、しかも、緩
和なアルカリ処理で分解するものであった。
【００１９】（ｂ）ＦＴＩＲ分析；ＧＧＰＬ−１をＩＲ
分析した結果、９６０ｃｍ−１にコリンに由来する強い
吸収が認められ、又、エステル結合に由来する１７４０
ｃｍ−１及び１１７０ｃｍ−１の吸収が認められた。
分析した結果、９６０ｃｍ−１にコリンに由来する強い
吸収が認められ、又、エステル結合に由来する１７４０
ｃｍ−１及び１１７０ｃｍ−１の吸収が認められた。
【００２０】（ｃ）ＬＳＩＭＳ（Ｌｉｑｕｉｄ ｓｅｃ
ｏｎｄａｒｙ ｉｏｎ ｍａｓｓｓｐｅｃｔｏｒｏｍｅ
ｔｒｙ）及びＭＳ／ＭＳ分析；ＧＧＰＬ−１の陽イオン
−ＬＳＩＭＳの結果を図１に示す。その図１によれば、
分子イオンに相当するシグナルｍ／／ｚ８９６および９
２４が確認された。そこで、ＧＧＰＬ−１における主な
分子イオンｍ／ｚ８９６について、ＭＳ／ＭＳ分析を行
った。そのＧＧＰＬ−１の分析において、主要シグナル
の帰属を概略示す結果を、図２に示す。その図２の結果
によれば、Ｍ−Ｃ１６：０（ｐａｌｍｉｔｉｃ ａｃｉ
ｄ）、Ｇｒｏ−Ｈｅｘ−Ｐ−ｃｈｏｌｉｎｅ（ｇｌｙｃ
ｅｒｏｌ ｈｅｘｏｓ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌ
ｉｎｅ）、Ｈｅｘ−Ｐ−ｃｈｏｌｉｎｅ（ｈｅｘｏｓｐ
ｈｏｓｐｈｏｒｙｌ−ｃｈｏｌｉｎｅ）、Ｐ−ｃｈｏｌ
ｉｎｅ（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）、ｃｈ
ｏｌｉｎｅに相当する各シグナルが明確に認められた。
ｏｎｄａｒｙ ｉｏｎ ｍａｓｓｓｐｅｃｔｏｒｏｍｅ
ｔｒｙ）及びＭＳ／ＭＳ分析；ＧＧＰＬ−１の陽イオン
−ＬＳＩＭＳの結果を図１に示す。その図１によれば、
分子イオンに相当するシグナルｍ／／ｚ８９６および９
２４が確認された。そこで、ＧＧＰＬ−１における主な
分子イオンｍ／ｚ８９６について、ＭＳ／ＭＳ分析を行
った。そのＧＧＰＬ−１の分析において、主要シグナル
の帰属を概略示す結果を、図２に示す。その図２の結果
によれば、Ｍ−Ｃ１６：０（ｐａｌｍｉｔｉｃ ａｃｉ
ｄ）、Ｇｒｏ−Ｈｅｘ−Ｐ−ｃｈｏｌｉｎｅ（ｇｌｙｃ
ｅｒｏｌ ｈｅｘｏｓ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌ
ｉｎｅ）、Ｈｅｘ−Ｐ−ｃｈｏｌｉｎｅ（ｈｅｘｏｓｐ
ｈｏｓｐｈｏｒｙｌ−ｃｈｏｌｉｎｅ）、Ｐ−ｃｈｏｌ
ｉｎｅ（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）、ｃｈ
ｏｌｉｎｅに相当する各シグナルが明確に認められた。
【００２１】このことから、ＧＧＰＬ−１における
（［Ｍ＋Ｈ］＋８９６）は、グリセロール−ヘキソース
−ホスホコリンに脂肪酸Ｃ１６：０が２分子結合したグ
リセロ糖リン脂質であることが示唆された。
（［Ｍ＋Ｈ］＋８９６）は、グリセロール−ヘキソース
−ホスホコリンに脂肪酸Ｃ１６：０が２分子結合したグ
リセロ糖リン脂質であることが示唆された。
【００２２】（ｄ）ＮＭＲ分析（１Ｈ−ＮＭＲ）；ＧＧ
ＰＬ−１のＮＭＲ（１Ｈ−ＮＭＲ）分析の結果を、図３
に示す。図３の結果によれば、ＧＧＰＬ−１の構造とし
ては、ＤＨＱ−ＣＯＳＹ ｓｐｅｃｔｒａｍにより、セ
ラミドを含まず、ジアシルグリセロール構造（以下、Ｇ
ｒｏとも言う）を含むことが確認された。また、核に
は、α−グルコースでその６位にホスホリルコリン基が
結合し、１位がグリセロール基と結合していることがわ
かった。１Ｈ−ＮＭＲ分析の各ピークの帰属をさらに詳
細に明らかにした結果を、図８および表１に示す。
ＰＬ−１のＮＭＲ（１Ｈ−ＮＭＲ）分析の結果を、図３
に示す。図３の結果によれば、ＧＧＰＬ−１の構造とし
ては、ＤＨＱ−ＣＯＳＹ ｓｐｅｃｔｒａｍにより、セ
ラミドを含まず、ジアシルグリセロール構造（以下、Ｇ
ｒｏとも言う）を含むことが確認された。また、核に
は、α−グルコースでその６位にホスホリルコリン基が
結合し、１位がグリセロール基と結合していることがわ
かった。１Ｈ−ＮＭＲ分析の各ピークの帰属をさらに詳
細に明らかにした結果を、図８および表１に示す。
【００２３】（ｅ）ＮＭＲ分析（１３Ｃ−ＮＭＲ）；す
べてのピークが前述の各構造であることが説明された。
また、ホスホリルコリン基がα−グルコースの６位に結
合していることも再確認された。
べてのピークが前述の各構造であることが説明された。
また、ホスホリルコリン基がα−グルコースの６位に結
合していることも再確認された。
【００２４】さらに、ＧＧＰＬ−１は、グリセロール構
造のＣ−３（３位の炭素）において酸素を介してグリセ
ロール基がグルコース構造と結合していることを示して
いる約６ｐｐｍの低磁場シフトが見られた。また、ＧＧ
ＰＬ−１において、コリン構造のリン酸エステル側、Ｎ
側およびメチル基炭素は、それぞれの標準品のＰＣとほ
ぼ等しい化学シフトと結合定数を示した。
造のＣ−３（３位の炭素）において酸素を介してグリセ
ロール基がグルコース構造と結合していることを示して
いる約６ｐｐｍの低磁場シフトが見られた。また、ＧＧ
ＰＬ−１において、コリン構造のリン酸エステル側、Ｎ
側およびメチル基炭素は、それぞれの標準品のＰＣとほ
ぼ等しい化学シフトと結合定数を示した。
【００２５】従って、前述のようにして得られたＧＧＰ
Ｌ−１は、グリセロール構造：１モル、脂肪酸構造：２
モル、α−グルコース構造（糖構造）：１モル、ホスホ
リルコリン：１モルを有しており、しかもα−グルコー
スの６’位の炭素にホスホリルコリンが結合している新
規なタイプの糖リン脂質化合物であることが明らかにな
った。
Ｌ−１は、グリセロール構造：１モル、脂肪酸構造：２
モル、α−グルコース構造（糖構造）：１モル、ホスホ
リルコリン：１モルを有しており、しかもα−グルコー
スの６’位の炭素にホスホリルコリンが結合している新
規なタイプの糖リン脂質化合物であることが明らかにな
った。
【００２６】本発明の化合物は、マイコプラズマ・フェ
ルメンタンスＧＧＰＬ株の培養によって得られその構造
が正確に確認されたものであり、その化学的な構造が前
述の構造式Ｉで示される化学構造を有している新規なホ
スホリルコリン含有グリセロ糖脂質化合物である。 即
ち、前記の化合物（ＧＧＰＬ−１）は、１’−〔２，３
−ビス（ヘキサデカノイルオキシ）プロピル〕−α−Ｄ
−グルコピラノス−６’−イル−２”−（トリメチルア
ンモニウム）エチルフォスフェートである。
ルメンタンスＧＧＰＬ株の培養によって得られその構造
が正確に確認されたものであり、その化学的な構造が前
述の構造式Ｉで示される化学構造を有している新規なホ
スホリルコリン含有グリセロ糖脂質化合物である。 即
ち、前記の化合物（ＧＧＰＬ−１）は、１’−〔２，３
−ビス（ヘキサデカノイルオキシ）プロピル〕−α−Ｄ
−グルコピラノス−６’−イル−２”−（トリメチルア
ンモニウム）エチルフォスフェートである。
【００２７】グリセロ糖脂質化合物類は、植物バクテリ
アで数多く見つかっているが、ホスホリルコリンを含有
したこのタイプのものは今まで報告がない。また、α−
グルコースにホスホリルコリン基が結合した構造も今ま
で報告がない。哺乳動物では脳と精巣からグリセロ糖脂
質が分離され構造が決定されているが、これは、α−グ
ルコース核、ホスホリルコリン構造を有していない。以
上のことにより、このＧＧＰＬ−１は極めてユニークで
グリセロ糖脂質である。
アで数多く見つかっているが、ホスホリルコリンを含有
したこのタイプのものは今まで報告がない。また、α−
グルコースにホスホリルコリン基が結合した構造も今ま
で報告がない。哺乳動物では脳と精巣からグリセロ糖脂
質が分離され構造が決定されているが、これは、α−グ
ルコース核、ホスホリルコリン構造を有していない。以
上のことにより、このＧＧＰＬ−１は極めてユニークで
グリセロ糖脂質である。
【００２８】参考例１ ｉ）培養；マイコプラズマ（マイコプラズマ・フェルメ
ンタンスＧＧＰＬ株を含む）の培養はＰＰＬＯ液体基礎
培地（Ｄｉｆｃｏ社製）に１０％（容量／容量）牛血
清、ペニシリン、０．０００２％（重量／容量）フェノ
ールレッドおよび１％グルコースを加えた液体培地１０
０ｍｌにて３７℃で培養する。培地のｐＨの変化によ
り、マイコプラズマの増殖を確認した後、１６，０００
ｘｇで１時間遠心分離する。この洗浄操作をもう一度繰
り返す。このようにして得られた菌体を脂質抽出用の試
料とする。
ンタンスＧＧＰＬ株を含む）の培養はＰＰＬＯ液体基礎
培地（Ｄｉｆｃｏ社製）に１０％（容量／容量）牛血
清、ペニシリン、０．０００２％（重量／容量）フェノ
ールレッドおよび１％グルコースを加えた液体培地１０
０ｍｌにて３７℃で培養する。培地のｐＨの変化によ
り、マイコプラズマの増殖を確認した後、１６，０００
ｘｇで１時間遠心分離する。この洗浄操作をもう一度繰
り返す。このようにして得られた菌体を脂質抽出用の試
料とする。
【００２９】ｉｉ）脂質の抽出；菌体試料をメタノール
１０ｍｌに浮遊させて４時間なじませる。クロロホルム
２０ｍｌを加え、メタノールとの割合が２：１（クロロ
ホルム：メタノール）と成るようにする。超音波で菌体
を破砕し、さらに４時間放置する。３０００ｒｐｍで遠
心し、その上清を回収しエバポレーションし、目的の脂
質を得る。
１０ｍｌに浮遊させて４時間なじませる。クロロホルム
２０ｍｌを加え、メタノールとの割合が２：１（クロロ
ホルム：メタノール）と成るようにする。超音波で菌体
を破砕し、さらに４時間放置する。３０００ｒｐｍで遠
心し、その上清を回収しエバポレーションし、目的の脂
質を得る。
【００３０】ｉｉｉ）分画（ＴＬＣ）；展開溶媒は、ク
ロロホルム：メタノール：０．２％塩化カルシウム水溶
液（５５：４５：１）の混合溶媒を用いた。 ｉｖ）検出；分画後のリン脂質の検出はデットマー（Ｄ
ｉｔｔｍｅｒ’ｓ）の試薬により、糖脂質の検出はオル
シノール（ｏｒｃｉｎｏｌ）の試薬を用い、それぞれ染
色により行った。
ロロホルム：メタノール：０．２％塩化カルシウム水溶
液（５５：４５：１）の混合溶媒を用いた。 ｉｖ）検出；分画後のリン脂質の検出はデットマー（Ｄ
ｉｔｔｍｅｒ’ｓ）の試薬により、糖脂質の検出はオル
シノール（ｏｒｃｉｎｏｌ）の試薬を用い、それぞれ染
色により行った。
【００３１】図４は、各種のマイコプラズマ株の脂質画
分をＴＬＣで展開したものをリン脂質染色する方法で染
色した。図４の各番号は次に示すマイコプラズマ株であ
る。 番号１：ＭＴ−４（ＧＧＰＬ＋）細胞 番号２：マイコプラズマ・フェルメンタンスＧＧＰＬ
（Ｍ．ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ ＧＧＰＬ）株 番号３：マイコプラズマ・アルギニニＧ２３０
（Ｍ．ａｒｇｉｎｉｎｉＧ２３０）株 番号４：マイコプラズマ・フェルメンタンスＰＧ１８
（Ｍ．ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ ＰＧ１８）株 番号５：マイコプラズマ・ヒオルヒニスＤＢＳ１０５０
（Ｍ．ｈｙｏｒｈｉｎｉｓ ＤＢＳ１０５０）株 番号６：マイコプラズマ・オラレＣＨ１９２９９
（Ｍ．ｏｒａｌｅ ＣＨ１９２９９）株 番号７：マイコプラズマ・ペネトランスＧＴＵ−５４−
６Ａｌ（Ｍ．ｐｅｎｅｔｒａｎｓ ＧＴＵ−５４−６Ａ
ｌ）株 番号８：マイコプラズマ・サリバリウムＰＧ２０
（Ｍ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｍＰＧ２０）株
分をＴＬＣで展開したものをリン脂質染色する方法で染
色した。図４の各番号は次に示すマイコプラズマ株であ
る。 番号１：ＭＴ−４（ＧＧＰＬ＋）細胞 番号２：マイコプラズマ・フェルメンタンスＧＧＰＬ
（Ｍ．ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ ＧＧＰＬ）株 番号３：マイコプラズマ・アルギニニＧ２３０
（Ｍ．ａｒｇｉｎｉｎｉＧ２３０）株 番号４：マイコプラズマ・フェルメンタンスＰＧ１８
（Ｍ．ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ ＰＧ１８）株 番号５：マイコプラズマ・ヒオルヒニスＤＢＳ１０５０
（Ｍ．ｈｙｏｒｈｉｎｉｓ ＤＢＳ１０５０）株 番号６：マイコプラズマ・オラレＣＨ１９２９９
（Ｍ．ｏｒａｌｅ ＣＨ１９２９９）株 番号７：マイコプラズマ・ペネトランスＧＴＵ−５４−
６Ａｌ（Ｍ．ｐｅｎｅｔｒａｎｓ ＧＴＵ−５４−６Ａ
ｌ）株 番号８：マイコプラズマ・サリバリウムＰＧ２０
（Ｍ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｍＰＧ２０）株
【００３２】この図から、ＧＧＰＬ−１に相当するバン
ドが示されているが、これはマイコプラズマ・フェルメ
ンタンスが感染したＴ細胞（レーン１）とマイコプラズ
マ・フェルメンタンスＧＧＰＬ株（レーン２）及びマイ
コプラズマ・フェルメンタンスＰＧ１８株（レーン４）
にのみ認められ、その他のマイコプラズマ種では認めら
れなかった。
ドが示されているが、これはマイコプラズマ・フェルメ
ンタンスが感染したＴ細胞（レーン１）とマイコプラズ
マ・フェルメンタンスＧＧＰＬ株（レーン２）及びマイ
コプラズマ・フェルメンタンスＰＧ１８株（レーン４）
にのみ認められ、その他のマイコプラズマ種では認めら
れなかった。
【００３３】図５は、図４と同じ試料についてＴＬＣで
展開後、糖脂質を発色させる試薬を用いて染色したもの
である。ＧＧＰＬ−１に相当するバンドが図４と同様に
染色された。図５における番号１〜８は、図４における
各試料の番号と同じ内容である。
展開後、糖脂質を発色させる試薬を用いて染色したもの
である。ＧＧＰＬ−１に相当するバンドが図４と同様に
染色された。図５における番号１〜８は、図４における
各試料の番号と同じ内容である。
【００３４】図６は、図４と同じ試料についてＴＬＣで
展開後、マイコプラズマ・フェルメンタンスをウサギに
免疫し作製したポリクロナール抗体で図４と同じ試料を
免疫染色したものである。図６よりＧＧＰＬ−１のバン
ドがマイコプラズマ・フェルメンタンスの成分とのみ特
異的に強く反応していることがわかる。図６における番
号１〜８は、図４における各試料の番号と同じ内容であ
る。
展開後、マイコプラズマ・フェルメンタンスをウサギに
免疫し作製したポリクロナール抗体で図４と同じ試料を
免疫染色したものである。図６よりＧＧＰＬ−１のバン
ドがマイコプラズマ・フェルメンタンスの成分とのみ特
異的に強く反応していることがわかる。図６における番
号１〜８は、図４における各試料の番号と同じ内容であ
る。
【００３５】図７は、マイコプラズマ・フェルメンタン
スの脂質をＴＬＣで展開後、他の各種マイコプラズマを
ウサギに免疫し作製した抗血清との反応性を調べたもの
である。他のマイコプラズマ種に対して作製した抗血清
はマイコプラズマ・フェルメンタンスの脂質成分とは反
応せず、マイコプラズマ・フェルメンタンスに対し作製
した血清のみ（番号１，２）が反応していた。
スの脂質をＴＬＣで展開後、他の各種マイコプラズマを
ウサギに免疫し作製した抗血清との反応性を調べたもの
である。他のマイコプラズマ種に対して作製した抗血清
はマイコプラズマ・フェルメンタンスの脂質成分とは反
応せず、マイコプラズマ・フェルメンタンスに対し作製
した血清のみ（番号１，２）が反応していた。
【００３６】図７の各番号は次に示す内容である。 番号１：抗Ｍ．ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ １ 血清 番号２：抗Ｍ．ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ ２ 血清 （番
号１と異なるウサギに免疫したものである） 番号３：抗Ｍ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清 番号４：抗Ｍ．ａｒｇｉｎｉｎｉ血清 番号５：抗Ｍ．ｈｙｏｒｈｉｎｉｓ血清 番号６：抗Ｍ．ｏｒａｌｅ血清 番号７：抗Ｍ．ｈｏｍｉｎｉｓ血清
号１と異なるウサギに免疫したものである） 番号３：抗Ｍ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清 番号４：抗Ｍ．ａｒｇｉｎｉｎｉ血清 番号５：抗Ｍ．ｈｙｏｒｈｉｎｉｓ血清 番号６：抗Ｍ．ｏｒａｌｅ血清 番号７：抗Ｍ．ｈｏｍｉｎｉｓ血清
【００３７】各種マイコプラズマの同定は、血清反応が
今のところ最も重視されている。今回、構造決定した物
質は、マイコプラズマ・フェルメンタンス種に特異的に
存在し、しかも脂質画分において最も重要な抗原決定基
であることが示された。
今のところ最も重視されている。今回、構造決定した物
質は、マイコプラズマ・フェルメンタンス種に特異的に
存在し、しかも脂質画分において最も重要な抗原決定基
であることが示された。
【００３８】
【表１】
【００３９】
【本発明の作用効果】本発明の化合物は、マイコプラズ
マ・フェルメンタンスから精製分離された新規なホスホ
リルコリン含有グリセロ糖脂質化合物である。また、マ
イコプラズマ・フェルメンタンスは、ヒトレトロウイル
ス、あるいはリウマチなどで病原性が強く疑われている
微生物である。従って、このユニークなグリセロ糖脂質
やその中間体が診断薬及び医薬に有用である可能性は大
きい。
マ・フェルメンタンスから精製分離された新規なホスホ
リルコリン含有グリセロ糖脂質化合物である。また、マ
イコプラズマ・フェルメンタンスは、ヒトレトロウイル
ス、あるいはリウマチなどで病原性が強く疑われている
微生物である。従って、このユニークなグリセロ糖脂質
やその中間体が診断薬及び医薬に有用である可能性は大
きい。
【図１】ＧＧＰＬ−１の陽イオン−ＬＳＩＭＳの結果を
示すチャート図である。
示すチャート図である。
【図２】ＧＧＰＬ−１のＭＳ／ＭＳ分析の結果を示すチ
ャート図である。
ャート図である。
【図３】ＧＧＰＬ−１のＮＭＲ（１Ｈ−ＮＭＲ）分析の
結果を示すチャート図である。
結果を示すチャート図である。
【図４】リン脂質染色
【図５】糖脂質の染色
【図６】脂質の免疫染色
【図７】各種抗血清との反応性
【図８】ＧＧＰＬ−１のＮＭＲ（１Ｈ−ＮＭＲ）分析の
結果を示すチャート図である。
結果を示すチャート図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/715
Claims (1)
- 【請求項１】１’−（２，３−ビス（ヘキサデカノイル
オキシ）プロピル〕−α−Ｄ−グルコピラノス−６’−
イル−２”−（トリメチルアンモニウム）エチルフォス
フェート。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05961795A JP3551525B2 (ja) | 1994-02-18 | 1995-02-13 | ホスホリルコリン含有グリセロ糖脂質化合物 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2142994 | 1994-02-18 | ||
| JP6-21429 | 1994-02-18 | ||
| JP05961795A JP3551525B2 (ja) | 1994-02-18 | 1995-02-13 | ホスホリルコリン含有グリセロ糖脂質化合物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07278175A true JPH07278175A (ja) | 1995-10-24 |
| JP3551525B2 JP3551525B2 (ja) | 2004-08-11 |
Family
ID=26358488
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP05961795A Expired - Fee Related JP3551525B2 (ja) | 1994-02-18 | 1995-02-13 | ホスホリルコリン含有グリセロ糖脂質化合物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3551525B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007145361A1 (ja) * | 2006-06-14 | 2007-12-21 | M Bio Technology Inc. | マススペクトロメーターを用いた脂質抗原検出法 |
| JP5212973B2 (ja) * | 2005-08-22 | 2013-06-19 | 国立大学法人名古屋大学 | 糖脂質誘導体合成中間体及びその製造方法、並びに糖脂質誘導体及びその製造方法 |
| JP2016056267A (ja) * | 2014-09-09 | 2016-04-21 | 日油株式会社 | ホスホリルコリン基含有糖誘導体及びその製造方法 |
| JP2016056268A (ja) * | 2014-09-09 | 2016-04-21 | 日油株式会社 | ホスホリルコリン基含有糖誘導体及びその製造方法 |
-
1995
- 1995-02-13 JP JP05961795A patent/JP3551525B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5212973B2 (ja) * | 2005-08-22 | 2013-06-19 | 国立大学法人名古屋大学 | 糖脂質誘導体合成中間体及びその製造方法、並びに糖脂質誘導体及びその製造方法 |
| WO2007145361A1 (ja) * | 2006-06-14 | 2007-12-21 | M Bio Technology Inc. | マススペクトロメーターを用いた脂質抗原検出法 |
| JP5265357B2 (ja) * | 2006-06-14 | 2013-08-14 | エム バイオ テック株式会社 | マススペクトロメーターを用いた脂質抗原検出法 |
| JP2016056267A (ja) * | 2014-09-09 | 2016-04-21 | 日油株式会社 | ホスホリルコリン基含有糖誘導体及びその製造方法 |
| JP2016056268A (ja) * | 2014-09-09 | 2016-04-21 | 日油株式会社 | ホスホリルコリン基含有糖誘導体及びその製造方法 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3551525B2 (ja) | 2004-08-11 |
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