JPH07267877A

JPH07267877A - ヒルジン含有医薬組成物

Info

Publication number: JPH07267877A
Application number: JP7006905A
Authority: JP
Inventors: Tudor Arvinte; アルビンテトゥドール
Original assignee: Ciba Geigy AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 1994-01-26
Filing date: 1995-01-20
Publication date: 1995-10-17
Anticipated expiration: 2017-11-25
Also published as: IL112389A0; AU1131895A; KR100360784B1; EP0665019B1; US5733874A; CA2140971A1; AU701886B2; FI950282A; ES2151022T3; GB9401448D0; ZA95576B; CY2259B1; HUT70474A; ATE195426T1; GR3034816T3; DE69518342T2; DK0665019T3; NO950274L; JP3350604B2; NO316883B1

Abstract

(57)【要約】【目的】本発明の目的は、ヒルジンを含む凍結乾燥医
薬組成物、そして特に安定性の粉末配合品を提供するこ
とである。【構成】本発明に係る医薬組成物は、ヒルジン並びに
カルシウム及び/ 又はマグネシウムの水溶性塩を含んで
成る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ヒルジンを含む組成物
に、そして特に、安定した粉末配合品に関する。

【０００２】

【従来の技術】ヒルジン、すなわち、ヒル｛ヒルド・メ
ディシナリス(Hirudo medicinalis)｝中の天然の抗血液
凝固剤は、単一のポリペプチド種ではなく、ヒルジン変
異体1(HV1)、ヒルジン変異体2(HV2)( 欧州特許出願第15
8 564 号参照) 、ヒルジン変異体3(PA)[PCT 出願第86/0
3493号参照] 及び"des-(Val)₂-hirudin"(欧州特許出願
第158 986 号参照) と命名された少なくとも4 つの代表
から成る一連の等しく作用するポリペプチドである。こ
れらの変異体は、構造において互いに、アミノ酸の数に
より相違するが( 特に、HV1 のN-末端配列は、Val-Val-
Tyr であり、HV2及びHV3 のものは、Ile-Thr-Tyr であ
り、そして"des-(Val)₂-hirudin" のものはThr-Tyr で
ある) 、そのN-末端における疎水性アミノ酸及びそのC-
末端における極性アミノ酸の集積、硫酸モノエステルと
して存在するチロシン残基(Tyr⁶³)、3 つのジスルフィ
ド架橋及び一般的な抗血液凝固活性をもつ。過去数年間
において、ヒルジン変異体をコーディングしているcDNA
s 及び合成遺伝子がクローン化され、そして微生物宿主
内で発現されてきた。これらの発現生成物は、Tyr ⁶³に
おいて硫酸モノエステルを欠いており- そしてそれ故
に" デスルファトヒルジン(desulphatohirudins)" とい
われる- それらは、天然の硫酸化ヒルジンとほとんど同
じ生物学的活性を示すことが明らかにされた。デスルフ
ァトヒルジン変異体HV1 は、大腸菌(Escherichia coli)
内で( 欧州特許出願第158 564 号及び第168 342 号) 、
そしてサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cer
evisiae)内で( 欧州特許出願第168 342 号、第225 633
号、第252 854 号及び第341 215 号) 発現されている。
同様に、デスルファトヒルジンHV2 は、大腸菌(Escheri
chia coli)内で( 欧州特許出願第158 564 号) 、そして
サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisia
e)内で( 欧州特許出願第200 655 号、PCT 出願第86/012
24号) 発現されており、そしてdes-(Val) ₂- デスルフ
ァトヒルジンは、大腸菌(Escherichia coli)内で( 欧州
特許出願第158 986 号) 発現されている。

【０００３】本発明に従えば、用語" ヒルジン" は、上
記文献中に記載された、それぞれ、ヒルジン、デスルフ
ァトヒルジン、ヒルジン変異体又はデスルファトヒルジ
ン変異体あるいはその突然変異体を包含すると意図さ
れ、そして特に、デスルファトヒルジン又はその突然変
異体をコードしているDNA を含む形質転換された微生物
株から獲得できるデスルファトヒルジン化合物又はその
突然変異体である。このようなデスルファトヒルジン
は、例えば、デスルファトヒルジン変異体HV1 、HV1 修
飾(a, b)、HV2 、HV2 修飾(a, b, c) 、HV3 、HV3 の変
異体及びdes(Val ₂)-デスルファトヒルジンである。

【０００４】好ましいデスルファトヒルジンは、以下の
式( 配列番号1):

【化１】｛式中、 a)27、36及び47におけるXaa がそれぞれLys であり、51
におけるXaa がHis であり、そして62におけるXaa がペ
プチド残基Glu-Tyr-Leu-Gln であり(HV1) 、又は b)27におけるXaa がIle 又はGlu であり、そして36、4
7、51及び62におけるXaa がa)において定義したもの(HV
1修飾a)であり、又は c)36におけるXaa がIle 又はGlu であり、そして27、4
7、51及び62におけるXaa がa)において定義したもの(HV
1修飾a)であり、又は d)47におけるXaa がIle 又はGlu であり、そして27、3
6、51及び62におけるXaa がa)において定義したもの(HV
1修飾a)であり、又は e)51におけるXaa がLeu 又はAsp であり、そして27、3
6、47及び62におけるXaa がa)において定義したもの(HV
1修飾a)であり、又は f)62におけるXaa が、Glu-Tyr 、Glu-Tyr-Leu 、Glu-As
p-Leu-Gln 、Glu-Glu-Leu-Gln 、Glu-Tyr-Lys-Arg 、Gl
u-Asp-Lys-Arg 、Glu-Lys-Leu-Gln 、Ser-Phe-Arg-Tyr
、Trp-Glu-Leu-Arg 、Glu-Tyr-Leu-Gln-Pro 及びGlu-T
yr-Leu-Gln-Argから成る群から選ばれており、そして2
7、36、47及び51におけるXaa がa)において定義したも
の(HV1修飾b)である。｝あるいは

【０００５】以下の式( 配列番号2):

【化２】あるいは

【０００６】以下の式( 配列番号3):

【化３】｛式中、 a)47におけるXaa がAsn であり、そして63におけるXaa
がTyr (HV2) であり、又は b)47におけるXaa がLys 、Arg 又はHis であり、そして
63におけるXaa がTyr(HV2修飾a)であり、又は c)63におけるXaa がGlu 又はAsp であり、そして47にお
けるXaa がAsn (HV2修飾b)である。｝あるいは

【０００７】以下の式( 配列番号4):

【化４】あるいは

【０００８】以下の式( 配列番号5):

【化５】をもつものである。

【０００９】HV3 及びそのHV3 の変異体は、そのN-末端
において1 又は2 のアミノ酸により、又はそのC-末端に
おいて18、10、9 、6 、4 又は2 のアミノ酸により短縮
されていることを特徴とする。特に好ましいデスルファ
トヒルジン化合物は、式中Xaa 基がa)の下で定義された
ものである式(I) の化合物又は式中47におけるXaa がLy
s であり、そして63におけるXaa がTyr である式(III)
の化合物である。最も好ましいヒルジンは、式中27、36
及び47におけるXaa がそれぞれLys であり、51における
Xaa がHis であり、そして62におけるXaa がペプチド残
基Glu-Tyr-Leu-Gln である式(I) を有するデスルファト
ヒルジンHV1 である。本発明において使用されるヒルジ
ンは、合成的に、例えば、化学的に、又は好ましくは、
組換え技術により、あるいはヒルからの単離により、生
産されることができる。本発明に従えば、用語" 突然変
異体" とは、単数の又は複数の突然変異により生来のヒ
ルジン又はデスルファトヒルジンとは異なる抗トロンビ
ン活性を示すタンパク質( ムテイン) をいう( 欧州特許
出願第352 227 号及び第352 228 号参照) 。本分野にお
いて公知の方法、例えば、部位指定突然変異誘発により
調製されることができる上記突然変異体をコーディング
しているDNA は、クローン化され、そして微生物宿主、
例えば、大腸菌(Escherichia coli)及び酵母(Saccharom
yces cerevisiae)内で発現されている。

【００１０】本発明において使用されるヒルジン化合物
は、遊離形態においてもそれらの塩形態においても存在
することができる。それらは、幾つかのアミノ酸残基内
に遊離のアミノ基を含むので、本化合物は、酸添加塩の
形態において存在することができる。好適な酸添加塩
は、特に、治療的に許容される酸との薬理学的に許容さ
れる塩である。代表的な無機酸は、ハロゲン化水素酸(
例えば、塩酸) 、そしてまた、硫酸、燐酸及びピロリン
酸である。代表的な有機酸は、特に、アレーンスルホン
酸( 例えば、ベンゼンスルホン酸又はp-トルエンスルホ
ン酸) 、又は低級アルカンスルホン( 例えば、メタンス
ルホン酸) 、並びにカルボン酸、例えば、酢酸、乳酸、
パルミチン酸、ステアリン酸、リンゴ酸、酒石酸、アス
コルビン酸及びクエン酸である。しかしながら、本発明
において使用される化合物は、幾つかのアミノ酸残基内
に遊離のカルボン酸をも含み、ここでカルボキシル基が
そのペプチド全体に酸性の特徴を付与するので、それら
は、無機又は有機塩基との塩、例えば、ナトリウム、カ
リウム、カルシウム又はマグネシウム塩、あるいはまた
アンモニア又は薬理学的に許容される有機窒素含有塩基
から得られるアンモニウム塩の形態において存在するこ
ともできる。しかしながら、それらは、同時に遊離のカ
ルボキシル基及び遊離のアミノ基を含むので、それら
は、分子内塩の形態において存在することもできる。薬
理学的に許容される塩が好ましい。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】ヒルジンを含む投与形
態の開発における1 つの問題は、水溶液中での又は粉末
形態におけるその乏しい安定性である。この乏しい安定
性は、ヒルジンをクロマトグラフィー法、例えば、逆相
HPLC(RP-HPLC) により分析するときに、見られることが
できる。RP-HPLC 法: LiChroCART 125-4カラムを使用す
る(Merck LiChrospher 100 RP-185μm)。溶媒A は、ア
セトニトリル/ 水(25:75) 中の0.5%酢酸アンモニウムで
ある。溶出を、0.5ml/分の流速において45℃において行
う。2 段溶出は、時刻0 において23% 溶媒B から開始し
て24分後に46% 溶媒B まで達する線形グラジエントであ
る。70% 溶媒B における2 分後に、このカラムを、23%
溶媒B において7 分間平衡化する。このRP-HPLC(1mg/ml
ヒルジン) 法を使用した水中の組換えヒルジンHV1(CGP
39393)の典型的なクロマトグラムを図1 中に示す。図1
中、主要ピークの相対面積は、95.15%である。室温にお
ける水中のヒルジンの保存は、時間に伴う副生成物の増
加をもたらす。これは、その主要ピークの面積における
減少及びその小ピークの面積における増加により、それ
自体を示す。生じる変更は、温度ストレス実験を使用し
て、すなわち、高められた温度における保存により、加
速されることができる。我々は、今般、マグネシウム又
はカルシウム塩をヒルジンの安定性を増加させるために
使用することができるということを発見した。

【００１２】

【課題を解決するための手段】従って、本発明は、ヒル
ジン並びにカルシウム及び/ 又はマグネシウムの水溶性
塩を含んで成る凍結乾燥された医薬組成物を、提供す
る。好適な水溶性塩は、硫酸マグネシウム、塩化マグネ
シウム及び塩化カルシウムを含む。本発明に係る組成物
は、上記成分の水溶液を形成させ、そして次に、慣用の
やり方でそれを凍結乾燥させることにより、製造される
ことができる。重要なことは、本組成物が溶液を凍結乾
燥させることにより作られ、その乾燥成分の単なる混合
はその安定性に対する効果を全くもたないということで
ある。金属イオン( マグネシウム及び/ 又はカルシウ
ム) 対ヒルジンのモル比は、40:1までに、好ましくは4:
1 〜20:1の間に、より好ましくは8:1 〜16:1の間に、例
えば、10:1以上であることができる。

【００１３】所望により、糖も本組成物中に含まれるこ
とができる。好適な糖は、マニトール、トレハロース、
シュクロース、ソルビトール、フルクトース、グルコー
ス、マルトース、ラクトース及びデキストランを含む。
好ましい糖は、マニトール及びトレハロースである。凍
結乾燥前の溶液中の糖の量は、5 〜50(w/v)%及び好まし
くは5 〜20(w/v)%を作り出すようなものであることがで
きる。凍結乾燥前の溶液は、好ましくは、等張性であ
る。凍結乾燥前の溶液のpHは、4 〜9 、好ましくは7 〜
8 であることができる。凍結乾燥前の溶液中のヒルジン
の濃度は、0.1 〜500mg/ml、好ましくは20〜80mg/ml で
あることができる。本凍結乾燥生成物は、長期間にわた
り冷蔵保存する必要性を伴わずに安定性である。さら
に、本生成物が水に再溶解された後、得られた溶液も、
長期間、例えば、2 〜3 週間にわたり、安定性である。
但し、溶液中の安定性は、凍結乾燥粉末の安定性と同じ
程には良好ではない。本凍結乾燥生成物を再溶解させる
ことにより作られた溶液は、標準的なアンプルの前充填
シリンジ、又は多投与系の製造において使用されること
ができる。本溶液は、もちろん、投与のために直ちに使
用されることもできる。本発明を以下の実施例により説
明する。ここで、与えられたパーセンテージは重量によ
る。

【００１４】

【実施例】実施例1 組換えデスルファトヒルジンHV1(Ciba-GeigyからのCGP
39393)の水溶液を、水中にそれを溶解させることにより
調製し、又はその塩の150 m モル溶液を以下の表1 中に
与える。そのpHは、4.12〜4.31に変化した。それぞれの
場合において、ヒルジンの濃度は、30mg/ml である。上
記溶液を凍結乾燥させ、そして46℃において保存する。
異なる時において、サンプルを1mg/mlヒルジンまで水中
に溶解させ、そして主要ピークをRP-HPLC により測定す
る。得られた結果を以下の表1 中に与える。

【００１５】表1

【表１】 46℃において長い期間にわたり保存されるときでさえ高
レベルにおいてその安定性が維持されることが分かる。

【００１６】実施例2 組換えデスルファトヒルジンHV1(Ciba-GeigyからのCGP
39393)の水溶液を、以下のような様々な塩溶液中にそれ
を溶解させることにより調製した。 MgCl₂ - 120mモル(1.14%) CaCl₂ - 120mモル(1.33%) MgSO₄ - 287mモル(3.46%) それぞれの場合において、その浸透度は、約300 であ
り、そしてそのpHをNaOHの添加により約7 に調整した。
上記溶液を凍結乾燥させ、そして得られた粉末を79℃に
おいて保存する。一定の保存期間の後、サンプルを1mg/
mlヒルジンまで水中に再溶解させ、そして主要ピークを
RP-HPLC により測定する。得られた結果を以下の表2 中
に与える。

【００１７】表2

【表２】 79℃において保存されるときでさえその生成物が安定性
であることが分かる。

【００１８】実施例3 組換えデスルファトヒルジンHV1(Ciba-GeigyからのCGP
39393)の水溶液を、それを水中、並びに等張性CaCl₂溶
液(120mM) 及び等張性マニトール溶液(5%)中に溶解させ
ることにより作る。それぞれの場合においてヒルジンの
濃度は30mg/mlである。上記溶液を凍結乾燥させ、そし
て得られた粉末を79℃において保存する。一定の保存期
間の後、サンプルを1mg/mlヒルジンまで水中に再溶解さ
せ、そして主要ピークをRP-HPLC により測定する。得ら
れた結果を以下の表3 中に与える。

【００１９】表3

【表３】

【００２０】実施例4 組換えデスルファトヒルジンHV1(Ciba-GeigyからのCGP
39393)の水溶液を、それを水中、並びに等張性MgCl₂溶
液(150mM) 及び等張性マニトール溶液(5%)中に溶解させ
ることにより作る。それぞれの場合においてヒルジンの
濃度は30mg/mlであり、そしてそのpHは約7.3-7.4 であ
る。上記溶液を凍結乾燥させ、そして得られた粉末を76
℃において保存する。一定の保存期間の後、サンプルを
1mg/mlヒルジンまで水中に再溶解させ、そして主要ピー
クをRP-HPLC により測定する。得られた結果を以下の表
4 中に与える。

【００２１】表4

【表４】

【００２２】実施例5 組換えデスルファトヒルジンHV1(Ciba-GeigyからのCGP
39393)の水溶液を、それを、0.52%(48mM)CaCl ₂及び3%
(164mM) マニトールを含む溶液中に溶解させることによ
り作る。ヒルジンの濃度は30mg/ml である。その溶液は
4.3 のpHをもつ。この溶液の半分をNaOHを使用して7.4
に調整されたpHをもつ。両方の溶液を凍結乾燥させ、そ
して46℃において保存する。一定の保存期間の後、サン
プルを1mg/mlヒルジンまで水中に再溶解させ、そして主
要ピークをRP-HPLC により測定する。得られた結果を以
下の表5 中に与える。それらは、7 〜8 間のpHの使用の
有益な効果を示す。但し、pH 4.3においても良好な結果
が示される。

【００２３】表5

【表５】

【００２４】実施例6 50mg/ml の水性デスルファトヒルジンHV1(CibaからのCG
P 39393)に、(51.5mM)塩化マグネシウム、0.57%(51.5m
M) 塩化カルウシウム及び3.5%の賦形剤マニトール、デ
キストラン78kD又はデキストラン10kD、又は余分な賦形
剤は無しを、添加する。そのpHを水酸化ナトリウムによ
り7.4 に調整し、そしてその溶液を凍結乾燥させる。75
℃における一定の時間の後、サンプルを2.5mg/mlヒルジ
ンまで水中に再溶解させ、そして主要ピーク面積をRP-H
PLC により測定する。表6 中の結果は、塩化マグネシウ
ムと塩化カルシウムの混合物が炭水化物の有無にかかわ
らずに使用されることができるということを示してい
る。

【００２５】表6

【表６】

【００２６】

【配列表】

（１）一般情報：（ｉ）出願人：（Ａ）名称：チバ−ガイギ− ＡＧ (CIBA-GEIGY AG) （Ｂ）番地：クリベック街１４１ (Klybeckstrasse 1
41) （Ｃ）市名：バーゼル (Basle) （Ｅ）国名：スイス（Ｆ）郵便番号（ＺＩＰ）：４００２（Ｇ）電話番号：０６１９６９１１１１（Ｈ）テレファックス：０６１６９６７９７６（Ｉ）テレックス：９６２９９１（ｉｉ）発明の名称：安定性乾燥粉末（ｉｉｉ）配列数：５（ｉｖ）コンピューター読み込み形式：（Ａ）媒体：フロッピー・ディスク（Ｂ）コンピューター：ＩＢＭＰＣ互換性（Ｃ）オペレーティング・システム：ＰＣ−ＤＯＳ/ Ｍ
Ｓ−ＤＯＳ（Ｄ）ソフトウェア：Chemtext Version 1.50

【００２７】配列番号：１配列の特徴配列の長さ：６３−６６アミノ酸配列の型：アミノ酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質配列： Val Val Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gln Asn Leu Cys Leu 1 5 10 15 Cys Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Gln Gly Asn Xaa Cys Ile Leu 20 25 30 Gly Ser Asp Gly Glu Xaa Asn Gln Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr 35 40 45 Pro Xaa Pro Gln Ser Xaa Asn Asp Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro 50 55 60 Glu Xaa

【００２８】配列番号：２配列の特徴配列の長さ：６５アミノ酸配列の型：アミノ酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質ハイポセティカル：無しアンチ−センス：無し配列： Leu Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gln Asn Leu Cys Leu 1 5 10 15 Cys Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Gln Gly Asn Lys Cys Ile Leu 20 25 30 Gly Ser Asp Gly Glu Lys Asn Gln Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr 35 40 45 Pro Lys Pro Gln Ser His Asn Asp Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro 50 55 60 Glu Glu Tyr Leu Gln 65

【００２９】配列番号：３配列の特徴配列の長さ：６５アミノ酸配列の型：アミノ酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質ハイポセティカル：無しアンチ−センス：無し配列： Ile Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gln Asn Leu Cys Leu 1 5 10 15 Cys Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Lys Gly Asn Lys Cys Ile Leu 20 25 30 Gly Ser Asn Gly Lys Gly Asn Gln Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr 35 40 45 Pro Xaa Pro Glu Ser His Asn Asn Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro 50 55 60 Glu Glu Xaa Leu Gln 65

【００３０】配列番号：４配列の特徴配列の長さ：６５アミノ酸配列の型：アミノ酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質ハイポセティカル：無しアンチ−センス：無し配列： Val Val Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gln Asn Leu Cys Leu 1 5 10 15 Cys Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Lys Gly Asn Lys Cys Ile Leu 20 25 30 Gly Ser Asn Gly Lys Gly Asn Gln Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr 35 40 45 Pro Asn Pro Glu Ser His Asn Asn Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro 50 55 60 Glu Glu Tyr Leu Gln 65

【００３１】配列番号：５配列の特徴配列の長さ：６６アミノ酸配列の型：アミノ酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質ハイポセティカル：無しアンチ−センス：無し配列： Ile Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gln Asn Leu Cys Leu 1 5 10 15 Cys Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Lys Gly Asn Lys Cys Ile Leu 20 25 30 Gly Ser Gln Gly Lys Asp Asn Gln Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr 35 40 45 Pro Lys Pro Gln Ser His Asn Gln Gly Asp Phe Glu Pro Ile Pro 50 55 60 Glu Asp Ala Tyr Asp Glu 65

【図面の簡単な説明】

【図１】RP-HPLC(1mg/mlヒルジン) 法を使用した水中の
組換えヒルジンHV1(CGP 39393)の典型的なクロマトグラ
ムである。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 35/62 7431−4Ｃ 47/02 Ｊ 47/26 ＢＧＣ０７Ｋ 14/815 8318−4ＨＡ６１Ｋ 9/14 Ｅ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ヒルジン並びにカルシウム及び/ 又はマ
グネシウムの水溶性塩を含んで成る凍結乾燥医薬組成
物。
【請求項２】水溶性塩が塩化カルシウム、塩化マグネ
シウム又は硫酸マグネシウムである、請求項１に記載の
組成物。
【請求項３】カルシウム及び/ 又はマグネシウム・イ
オン対ヒルジンのモル比が40:1までである、請求項１又
は２に記載の組成物。
【請求項４】糖をも含む、先の請求項のいずれかに記
載の組成物。
【請求項５】糖がマニトール、トレハロース、シュク
ロース、ソルビトール、フルクトース、グルコース、マ
ルトース、ラクトース又はデキストランである、請求項
４に記載の組成物。
【請求項６】ヒルジンがデスルファトヒルジン変異体
又はそれらの突然変異体である、先の請求項のいずれか
に記載の組成物。
【請求項７】ヒルジンがデスルファトヒルジンHV1 で
ある、先の請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】成分を水中に溶解させ、そして次にその
溶液を凍結乾燥させることにより得られる、先の請求項
のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】凍結乾燥前の溶液のpHが4 〜9 である、
請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】凍結乾燥前の溶液中のヒルジンの濃度
が0.1 〜500 mg/mlである、請求項８又は９のいずれか
に記載の組成物。
【請求項１１】凍結乾燥前の溶液が等張性である、請
求項８〜１０のいずれか１項に記載の組成物。