JPH07228599A - カルシトニン誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 式（１） 【化１】 （式中、A1はＳｅｒまたはＤ−Ｓｅｒ、A2はＡｓｎまた
はＡｓｐ、A3はＳｅｒまたはＤ−Ｓｅｒ、A4はＬｙｓま
たはＬｙｓ（Ａｃ）、A5はＬｅｕ、Ｄ−Ｌｅｕまたは、
D-Leu-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-、A6はＨｉｓまたはＨ
ｉｓ（１−Ｍｅ）、A7はＬｙｓまたはＬｙｓ（Ａｃ）、
A8はＴｙｒまたは３−（３’，５’−ジクロロベンジ
ル）Ｔｙｒ、A9はＡｓｐまたはβ−Ａｓｐをそれぞれ示
す。但し、A1がＳｅｒ、A2がＡｓｎ、A3がＳｅｒ、A4が
Ｌｙｓ、A5がＬｅｕ、A6がＨｉｓ、A7がＬｙｓ、A8がＴ
ｙｒ、A9がＡｓｐである場合を除く。）で表されるペプ
チド。 【効果】 新規かつ有用な血清カルシウム低下作用を有
するペプチドを提供しえる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規な血清カルシウム
低下作用を有するペプチドに関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、血清カルシウム低下作用を有する
種々のペプチドが知られており、例えば、ヒトカルシト
ニンを始めとして、ウナギカルシトニン、サケカルシト
ニン、ブタカルシトニン、ニワトリカルシトニン等の天
然型及びその誘導体が知られている。

【０００３】ヒトカルシトニン等のカルシトニンは、骨
粗しょう症、高カルシウム血症、ページェット病等の治
療に用いられるが、人体に使用する医薬としては、本来
の生体成分であるヒトカルシトニンが抗原性等の面から
好ましいと思われるが、カルシウム低下作用が弱く投与
量を増加させる必要があるので、使い続けたときに効き
が悪くなる可能性も否定できず、さらに新しい血清カル
シウム低下作用を有するペプチドの開発が求められてい
る。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上述の如
く、新規な血清カルシウム低下作用を有するペプチドの
提供を目的とするものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記問題
点を鑑み、新規な多数のペプチドを合成し、その生理活
性を調べ検討した結果、血清カルシウム低下作用を有す
る多くの新規ペプチドを知り、本発明を完成するに至っ
た。即ち本発明は、式（１）

【０００６】

【化２】

【０００７】（式中、A1はＳｅｒまたはＤ−Ｓｅｒ、A2
はＡｓｎまたはＡｓｐ、A3はＳｅｒまたはＤ−Ｓｅｒ、
A4はＬｙｓまたはＬｙｓ（Ａｃ）、A5はＬｅｕ、Ｄ−Ｌ
ｅｕまたは、D-Leu-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-、A6はＨ
ｉｓまたはＨｉｓ（１−Ｍｅ）、A7はＬｙｓまたはＬｙ
ｓ（Ａｃ）、A8はＴｙｒまたは３−（３’，５’−ジク
ロロベンジル）Ｔｙｒ、A9はＡｓｐまたはβ−Ａｓｐを
それぞれ示す。但し、A1がＳｅｒ、A2がＡｓｎ、A3がＳ
ｅｒ、A4がＬｙｓ、A5がＬｅｕ、A6がＨｉｓ、A7がＬｙ
ｓ、A8がＴｙｒ、A9がＡｓｐである場合を除く。）で表
されるペプチドである。

【０００８】本発明のペプチドは、以下の通り、公知の
ペプチド合成の常法手段によって合成できる。 （１）液相法によって製造する場合 例えば、Ｃ末端のプロリン基のカルボキシル基をアミド
基に転化し、式（１）で示されるアミノ酸順序に個々の
保護されていないか、又は好ましくは保護されたアミノ
酸および（または）低級ペプチドを縮合し、任意の過程
で環化反応に付し、縮合反応し、保護基がある場合は、
例えば、最終段階で活性基の保護基を酸分解により脱離
することにより得られる。

【０００９】縮合反応及び環化反応自体はペプチド合成
の常法手段に従って、保護基の脱着、縮合反応を繰り返
すことにより行なわれる。即ち、本化合物の製造におい
て使用される各種の保護基はペプチド合成において既知
なもの、例えば加水分解、酸分解、還元、アミノリシ
ス、ヒドラジノリシスなどのような既知手段によって容
易に脱離することができる保護基が用いられる。このよ
うな保護基はペプチド合成化学の分野の文献ならびに参
考書に記載されている。本発明においては、例えばα−
アミノ基の保護にｔ−ブチルオキシカルボニル基、ベン
ジルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキシ
カルボニル基、フルオレニルメチル基を用い、側鎖のア
ミノ基、即ちリジンのε−アミノ基の保護にベンジルオ
キシカルボニル基、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニ
ル基、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル基を用い、
α−カルボキシル基の保護にメチルエステル基、ベンジ
ルエステル基を用い、側鎖のカルボキシル基、即ちアス
パラギン酸またはグルタミン酸の側鎖のカルボキシル基
の保護にベンジルエステル基、シクロヘキシルエステル
基、ｔ−ブチルエステル基を用い、α−アミノスベリン
酸の側鎖のカルボキシル基の保護にｔ−ブチルエステル
基を用い、セリンおよびスレオニンの水酸基の保護にベ
ンジル基を用い、チロシンの水酸基の保護に２、６−ジ
クロルベンジル基を用い、アルギニンのグアニジノ基の
保護にメシチレン−２−スルホニル基またはトシル基を
用いるのが好ましい。

【００１０】本化合物の合成においては個々のアミノ酸
および（または）低級ペプチドの縮合は例えば、保護さ
れたα−アミノ基および活性化末端α−カルボキシル基
をもつアミノ酸または低級ペプチドと遊離のα−アミノ
基および保護された末端カルボキシル基をもつアミノ酸
または低級ペプチドとを反応させるか、あるいは活性化
α−アミノ基および保護された末端カルボキシル基をも
つアミノ酸または低級ペプチドと遊離の末端カルボキシ
ル基をもつアミノ酸または低級ペプチドとを反応させる
ことにより実施することができる。

【００１１】この場合、カルボキシル基は、例えば、酸
アジド、酸無水物、酸イミダゾリドまたは活性エステ
ル、例えばシアノメチルエステル、ｐ−ニトロフェニル
エステル、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステルなど
に変換することによって活性化させることができる。ま
た、カルボジイミド、例えばＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシ
ル−カルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ−エチル−Ｎ’−３
−ジメチルアミノプロピル−カルボジイミド、Ｎ，Ｎ’
−カルボニル−ジイミダゾールなどの縮合剤を使用して
反応させることによって活性化することができる。

【００１２】本発明において好ましい縮合方法及び環化
反応は、アジド法、活性エステル法、混合酸無水物法お
よびカルボジイミド法である。縮合の各段階ではラセミ
化が起こらない方法またはラセミ化が最小になる方法を
用いるのが望ましく、好ましくはアジド法、活性エステ
ル法、Ｗｕｎｓｃｈ法［Ｚ．Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃ
ｈ．，２１ｂ，４２６（１９６６）］またはＧｅｉｇｅ
ｒ法（Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１０．，７８８（１９７
０）］などが挙げられる。

【００１３】なお、環化反応は上述の縮合反応と同じ方
法が可能である。縮合順序および環化位置は式で示され
るアミノ酸順序であれば、如何なる順序如何なる位置で
も合成し得るが、Ｃ末端側から順次アミノ酸および（ま
たは）低級ペプチドを連結させること、およびアミノス
ベリン酸のωカルボキシル末端と所定のＮ末端アミノ酸
との結合を環化位置とすることが好ましい。

【００１４】こうして保護されたε−アミノ基、側鎖カ
ルボキシル基、グアニジノ基および水酸基を有するペプ
チドが得られる、これらの保護基は好ましくは、酸分
解、例えばトリフルオロメタンスルホン酸、無水弗化水
素などによる方法によって一段階で脱離され、目的の化
合物が得られる。 （２）固相法によって製造する場合 本発明においては、上記の液相法によるペプチド合成法
の他に、固相法によるペプチド合成法を一部または全部
に利用して本化合物を合成することができる。

【００１５】たとえば、Ｃ末端ペプチドフラグメントを
固相法により合成し、Ｎ−末端部のα−アミノスベリン
酸を含む環状ペプチドフラグメントを液相法により合成
し、引続き上記２つのペプチドフラグメントを固相法に
より縮合して得られた保護されたペプチド樹脂が得られ
る。これらの保護基および樹脂は、公知の方法、例えば
トリフルオロメタンスルホン酸、無水弗化水素などによ
る方法によって一段階で脱離され、目的の化合物が得ら
れる。

【００１６】上記の固相法で用いられる樹脂としては、
固相法で通常用いられる樹脂、例えばベンズヒドリルア
ミン樹脂、ｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂などが
挙げられる。この樹脂は、官能基当量や架橋度の違いに
よって所望の性状を有する樹脂が入手可能であり、市販
品を購入することもできる。上記の固相法においては、
樹脂に式で示されるアミノ酸順序にＣ−末端のアミノ酸
から順次一つずつ縮合させて行なう。該アミノ酸の官能
基は公知の方法により保護基で保護される。上記の保護
基の例としては、上記で述べた通りである。

【００１７】上記の固相反応に際しては、樹脂を反応器
に入れ、ジクロロメタン、クロロホルム、ジメチルホル
ムアミド、ベンゼン等の樹脂を膨潤させる溶媒を樹脂１
ｇに対し、溶媒２〜２０ｍｌの割合で添加する。これ
に、予め別の反応器で樹脂中のアミノ基１当量に対し１
〜６当量のＢｏｃ（ｔ−ブチルオキシカルボニル）アミ
ノ酸とＤＣＣを反応させ、得られた対称無水物を副生し
たジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）より分離して、上記
樹脂の入った反応器に加える。縮合剤（ＤＣＣ）の使用
量はＢｏｃ−アミノ酸１当量に対し、０．５から３当量
を用いる。反応は通常５〜６０分行なわれる。

【００１８】各工程で得られたＢｏｃ−アミノ酸−樹脂
またはＢｏｃ−ペプチド−樹脂の一部を採取し、常法に
従い反応したＢｏｃ−アミノ酸量を求めればよい。次
に、α−アミノ基の保護基であるＢｏｃをトリフルオロ
酢酸のような酸で脱離して、順次縮合反応を遂行すれば
よい。上記の固相法によるペプチド合成は自動固相合成
機を用いるが、手動法で遂行してもよい。これらの操作
はすべて窒素ガス気流下で行なうのが望ましい。

【００１９】このようにしてペプチドが結合した樹脂が
得られる。このようにして得られた保護ペプチド結合樹
脂は上記で述べた通り、無水弗化水素などにより、一段
階で保護基と樹脂が脱離される。 （３）分離精製その他 このようにして得られた化合物はペプチドまたは蛋白質
を精製する公知の手段によって分離精製することができ
る。例えば、セファデックスＧ−２５，セファデックス
Ｇ−５０、セファデックスＬＨ−２０などのゲル濾過剤
を用いるゲル濾過法、カルボキシメチルセルロース、そ
の他のイオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィ
ー、逆相系合成高分子樹脂または化学修飾シリカゲル担
体を用いたカラムクロマトグラフィ及び高速液体クロマ
トグラフィーなどにより行なうことができる。

【００２０】本発明の新規化合物はその方法の条件によ
り塩基またはその塩の形で得られる。たとえば、酢酸な
どの公知の有機酸との塩を形成することができる。尚、
本明細書に記載の略記号は次の意味を有する。 Ａｓｕ：Ｌ−α−アミノスベリン酸 Ａｓｎ：Ｌ−アスパラギン Ａｓｐ：Ｌ−アスパラギン酸

【００２１】

【化３】

【００２２】Ａｌａ：Ｌ−アラニン Ｔｈｒ：Ｌ−スレオニン Ｖａｌ：Ｌ−バリン Ｈｉｓ：Ｌ−ヒスチジン Ａｒｇ：Ｌ−アルギニン Ｌｅｕ：Ｌ−ロイシン Ｔｙｒ：Ｌ−チロシン Ｓｅｒ：Ｌ−セリン Ｇｌｙ：グリシン Ｌｙｓ：Ｌ−リジン Ｐｒｏ：Ｌ−プロリン Ｇｌｕ：Ｌ−グルタミン酸 Ｇｌｎ：Ｌ−グルタミン Ｄ−Ｓｅｒ：Ｄ−セリン Ｄ−Ｌｅｕ：Ｄ−ロイシン Ｈｉｓ（１−Ｍｅ）：Ｌ−１−メチルヒスチジン Ｂｏｃ−：ｔ−ブチルオキシカルボニル Ｚ−：カルボベンゾキシ Ｆｍｏｃ−：フルオレニルメチル Ｃｌ−Ｚ：ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル Ｃｌ2 Ｂｚｌ：2,6-ジクロロベンジル Ａｃ：アセチル Ｂｚｌ：ベンジル ＯＢｚｌ：ベンジルエステル ＯＭｅ：メチルエステル ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸 エーテル：ジエチルエーテル ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド ＭｅＯＨ：メタノール ＤＣＭ：ジクロロメタン ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＭＢＨＡ樹脂：ｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂 ＯＳｕ：Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル ＯｔＢｕ：ｔ−ブチルエステル Ｔｏｓ：トシル ＷＳＣＤ・ＨＣｌ：１−エチル−３−（３−ジメチルア
ミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩

【００２３】

【実施例】以下、実施例により本発明を説明するが、本
発明はこれらの実施例に限られるものではない。なお、
各実施例におけるアミノ酸分析は、被検体に６Ｎ塩酸を
加え１１０゜Ｃで２４時間加水分解させ、これを減圧乾
固した後、アミノ酸分析計により分析した。また、物性
値で示した高速液体クロマトグラフィーの保持時間を測
定した条件は、以下の通りである。 （高速液体クロマトグラフィー条件） カラム：ＯＤＳカラム 内径４ｍｍ, 長さ１５０ｍｍ 溶出液：グラジエント A液：０．１％ＴＦＡ水 B液：アセトニトリル 初期Ｂ液濃度１５％からＢ液濃度４５％までの直線濃度
勾配溶出（30分間） 流速 １ｍｌ／分 検出波長 ２２５ｎｍ

【００２４】

【実施例１】式

【００２５】

【化４】

【００２６】で表される化合物（F01 化合物と略すこと
がある）の製造 （１）

【００２７】

【化５】

【００２８】の製造表記化合物は、特公昭５３−４１６
７７公報実施例２(1) 〜(14)の方法に準じて製造した。
すなわち、同公報と相違する部位で使用したBoc-Ser(Bz
l)-OSu の代りにBoc-D-Ser(Bzl)-OSuを用いて、あとは
同様に合成した。 （２）

【００２９】

【化６】

【００３０】の製造 固相合成装置としてApplied Biosystems社製４３０−Ａ
ペプチドシンセサイザーを用いて固相合成を行った。Ｍ
ＢＨＡ樹脂（Applied Biosystems社製、アミノ基0.61m
モル／ｇ）０．８ｇをペプチド固相合成用反応容器に入
れ、ＤＣＭ８ｍｌ（４回、各１分）、６０％ＴＦＡ含有
ＤＣＭ溶液８ｍｌ（２０分）、ＤＣＭ４ｍｌ（３回、各
１５秒）、ＤＩＥＡ１ｍｌ含有ＤＭＦ溶液３ｍｌ（２
回、各１分）、ＤＭＦ８ｍｌ（６回、各４０秒）の順に
窒素ガス気流中攪拌下処理し、各々の処理後濾過した。

【００３１】一方、Boc-Pro ２ｍモルをＤＣＭ５ｍｌに
溶かし、アミノ酸活性化容器中でＤＣＣ（０．５Ｍ−Ｄ
ＣＭ溶液）２ｍｌを加え、５分間反応させた。反応液を
濾過して濃縮容器に移し、これにＤＭＦ３ｍｌを加え、
窒素ガス気流下ＤＣＭを留去した。これにＤＭＦ３ｍｌ
を加え、前記の反応容器に移して２５分反応させた。次
いで、ＤＣＭ８ｍｌ（６回、各２０秒）で洗浄、濾過し
てBoc-Pro-MBHA樹脂を得た。

【００３２】次に、前記のBoc-Pro-MBHA樹脂を反応容器
中ＤＣＭ８ｍｌ（４回、各１分で洗浄し、濾過した。こ
れに６０％ＴＦＡ含有ＤＣＭ溶液８ｍｌを加え、２０分
間攪拌し、Boc を脱離した。得られた樹脂をＤＣＭ４ｍ
ｌ（３回、各１５秒）、ＤＩＥＡ１ｍｌ含有ＤＭＦ溶液
３ｍｌ（２回、各１分）、ＤＭＦ８ｍｌ（６回、各４０
秒）で順次洗浄し、濾過した。

【００３３】さらに、Boc-Thr(Bzl)２ｍモルをＤＣＭ５
ｍｌに溶解し、アミノ酸活性化容器中でＤＣＣ（０．５
Ｍ−ＤＣＭ溶液）２ｍｌを加え、５分間反応させた。次
いで、Boc-Pro の場合と同様に処理し、ＤＭＦを加えて
窒素ガス気流下で濃縮した後、反応容器に移して２０分
間反応させた。次いで、ＤＣＭ８ｍｌ（６回、各２０
秒）で洗浄、濾過してBoc-Thr(Bzl)-Pro-MBHA 樹脂を得
た。

【００３４】以下、Ｃ末端からＮ末端への順で上記目的
物の配列に従い、順次対応する保護アミノ酸をカップリ
ングして最後の保護アミノ酸を結合後、Ｎ末端Ｂｏｃ基
を脱保護するため、ＴＦＡ処理とその後の洗浄を行い、
上記目的物２．２ｇを得た。上記固相合成において、Ar
g 、Gln を結合する場合は、２m モルの対応する保護ア
ミノ酸をＤＭＦ−ＤＣＭ（３：１）混合溶媒４ｍｌ中、
ＤＣＣ溶液２ｍｌ、ＨＯＢｔ溶液（０．５Ｍ−ＤＭＦ溶
液）２ｍｌを加え、１分間反応させた後、他のアミノ酸
同様に処理し、反応容器に移してカップリング反応さ
せ、ＤＣＭ洗浄、濾過後、もう一度２m モル保護アミノ
酸をＤＭＦ−ＤＣＭ（３：１）混合溶媒４ｍｌ中ＤＣＣ
溶液２ｍｌ、ＨＯＢｔ溶液（０．５Ｍ−ＤＭＦ）２ｍｌ
を加え、２５分間反応させたものを反応容器に移してカ
ップリングさせる、いわゆるダブルカップリング法で行
なった。

【００３５】固相法並びに実施例で使用したアミノ酸は
次の通りである。

【００３６】

【化７】

【００３７】

【化８】

【００３８】（３）上記（１）で得られた化合物と
（２）で得られた化合物との結合 上記（１）で得られた化合物 700mgをＤＭＦ４ｍｌとＮ
メチルピロリドン２ｍｌの混合溶媒に溶解し、これに、
上記（２）で得られた化合物１．８９ｇを加えＨＯＢｔ
０．１３５ｇを加え、−１５゜Ｃに冷却下、ＷＳＣＤ・
ＨＣｌ ０．１９２ｇを加え、一晩攪拌した。反応終了
後、吸引濾過し、ＤＭＦ５ｍｌとＮメチルピロリドン５
ｍｌの混合溶媒１０ｍｌ、ＤＭＦ１０ｍｌ、ＤＣＭ１０
ｍｌの順に洗浄し、減圧乾燥して、反応物２．４ｇを得
た。 （４）F01 化合物の製造 上記（３）で得られた化合物１．０g をＨＦ反応装置
（（株）ペプチド研究所製）に移し、アニソール２ｍｌ
を加え、これに無水フッ化水素２０ｍｌを加え、０゜Ｃ
で１時間攪拌した。反応後、無水フッ化水素を減圧下留
去後、残渣をエーテルで洗浄し、これに０．１Ｍ酢酸２
０ｍｌを加え、ペプチドを抽出した。抽出液をＤｏｗｅ
ｘ １Ｘ２のカラム（２．６×１５ｃｍ）に通し、０．
１Ｍ酢酸６０ｍｌで溶出して凍結乾燥した。これを逆相
系高速液体クロマトグラフィーにより精製し、セファデ
ックスＧ−25樹脂でゲル濾過して４．８ｍｇを得た。 物性値 アミノ酸分析値：Asp 2.02(2),Thr 3.76(4),Ser 2.90
(3),Glu 3.13(3),Pro 1.94(2),Gly 2.96(3), Ala 1.00
(1),Val 2.00(2),Leu 4.75(5),Tyr 0.77(1),Lys 2.03
(2),His 0.93(1), Arg 1.06(1),Asu 1.07(1) 高速液体クロマトグラフィーでの保持時間：２３．３分

【００３９】

【実施例２】式

【００４０】

【化９】

【００４１】で表される化合物（F05 化合物と略すこと
がある）の製造 （１）

【００４２】

【化１０】

【００４３】の化合物（以下、フラグメント（１）と略
すことがある）の製造 フラグメント（１）は、特公昭５３−４１６７７公報実
施例２(1) 〜(14)の方法により製造した。 （２）

【００４４】

【化１１】

【００４５】の製造 実施例１（２）に準じて行うが、実施例１（２）と相違
する部位であるＬｅｕを結合する際、Boc-Leu ・H2O の
代りにBoc-D-Leu ・H2O を使用して固相合成して２．１
ｇを得た。 （３）上記（１）で得られた化合物と（２）で得られた
化合物との結合 上記（１）で得られた化合物５００ｍｇと上記（２）で
得られた化合物１．１ｇを使用して実施例１（３）と同
様に実施して反応物１．４ｇを得た。 （４）F05 化合物の製造 上記（３）で得られた化合物１．０g を実施例１（４）
と同様に処理して、逆相系高速液体クロマトグラフィー
により精製し、セファデックスＧ−25樹脂でゲル濾過し
て上記目的物５．６ｍｇを得た。 物性値 アミノ酸分析値：Asp 2.02(2),Thr 3.91(4),Ser 2.85
(3),Glu 3.13(3),Pro 2.33(2),Gly 3.09(3), Ala 1.00
(1),Val 1.93(2),Leu 5.38(5),Tyr 0.98(1),Lys 2.20
(2),His 1.17(1), Arg 1.07(1),Asu 1.20(1) 高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間：２３．
５分

【００４６】

【実施例３】式

【００４７】

【化１２】

【００４８】で表される化合物（F17 化合物と略すこと
がある）の製造 （１）フラグメント（１）の製造 フラグメント（１）は、特公昭５３−４１６７７公報実
施例２(1) 〜(14)の方法により製造した。 （２）

【００４９】

【化１３】

【００５０】の製造 実施例１（２）に準じて行うが、実施例１（２）と相違
する部位であるＬｙｓを結合する際、Boc-Lys(Cl-Z) の
代りにBoc-Lys(Ac) を使用して固相合成して２．１ｇを
得た。 （３）上記（１）で得られた化合物と（２）で得られた
化合物との結合 上記（１）で得られた化合物５００ｍｇと上記（２）で
得られた化合物１．１ｇを使用して実施例１（３）と同
様に実施して反応物１．４ｇを得た。 （４）F17 化合物の製造 上記（３）で得られた化合物１．０g を実施例１（４）
と同様に処理して、逆相系高速液体クロマトグラフィー
により精製し、セファデックスＧ−25樹脂でゲル濾過し
て上記目的物４．９ｍｇを得た。 物性値 アミノ酸分析値：Asp 1.94(2),Thr 3.65(4),Ser 2.56
(3),Glu 3.06(3),Pro 1.96(2),Gly 2.91(3), Ala 1.00
(1),Val 1.96(2),Leu 4.76(5),Tyr 0.96(1),Lys 1.95
(2),His 0.97(1), Arg 0.98(1),Asu 0.90(1) 高速液体クロマトグラフィーの保持時間：２８．５分

【００５１】

【実施例４】式

【００５２】

【化１４】

【００５３】で表される化合物（F48 化合物と略すこと
がある）の製造 （１）フラグメント（１）の製造 フラグメント（１）は、特公昭５３−４１６７７公報実
施例２(1) 〜(14)の方法により製造した。 （２）

【００５４】

【化１５】

【００５５】の製造 実施例１（２）に準じて行うが、実施例１（２）と相違
する部位であるＬｙｓを結合する際、Boc-Lys(Cl-Z) の
代りにBoc-Lys(Ac) を使用して固相合成して２．０ｇを
得た。 （３）上記（１）で得られた化合物と（２）で得られた
化合物との結合 上記（１）で得られた化合物５００ｍｇと上記（２）で
得られた化合物１．１ｇを使用して実施例１（３）と同
様に実施して反応物１．４ｇを得た。 （４）F48 化合物の製造 上記（３）で得られた化合物１．０g を実施例１（４）
と同様に処理して、逆相系高速液体クロマトグラフィー
により精製し、セファデックスＧ−25樹脂でゲル濾過し
て上記目的物７．８ｍｇを得た。 物性値 アミノ酸分析値：Asp 1.98(2),Thr 3.63(4),Ser 2.55
(3),Glu 3.09(3),Pro 1.96(2),Gly 2.89(3), Ala 1.00
(1),Val 1.94(2),Leu 4.71(5),Tyr 0.80(1),Lys 1.93
(2),His 0.96(1), Arg 1.00(1),Asu 0.88(1) 高速液体クロマトグラフィーの保持時間：２７．７分

【００５６】

【実施例５】式

【００５７】

【化１６】

【００５８】で表される化合物（F06 化合物と略すこと
がある）の製造 （１）

【００５９】

【化１７】

【００６０】の製造 表記化合物は、特公昭５３−４１６７７公報実施例２
(1) 〜(14)の方法に準じて製造した。すなわち、同公報
と相違する部位で使用したBoc-Ser(Bzl)-OSu の代りに
Boc-D-Ser(Bzl)-OSuを用いて、あとは同様に合成した。 （２）

【００６１】

【化１８】 の製造 実施例１（２）と同様にして上記目的物２．１ｇを得
た。 （３）上記（１）で得られた化合物と（２）で得られた
化合物との結合 上記（１）で得られた化合物５００ｍｇと上記（２）で
得られた化合物１．１ｇを使用して実施例１（３）と同
様に実施して反応物１．３ｇを得た。 （４）F06 化合物の製造 上記（３）で得られた化合物１．０g を実施例１（４）
と同様に処理して、逆相系高速液体クロマトグラフィー
により精製し、セファデックスＧ−25樹脂でゲル濾過し
て上記目的物５．８ｍｇを得た。 物性値 アミノ酸分析値：Asp 2.03(2),Thr 3.95(4),Ser 2.90
(3),Glu 3.19(3),Pro 2.25(2),Gly 3.13(3), Ala 1.00
(1),Val 1.93(2),Leu 5.47(5),Tyr 1.01(1),Lys 2.24
(2),His 1.07(1), Arg 1.10(1),Asu 1.21(1) 高速液体クロマトグラフィーの保持時間：２３．７分

【００６２】

【実施例６】式

【００６３】

【化１９】

【００６４】で表される化合物（F49 化合物と略すこと
がある）の製造 （１）フラグメント（１）の製造 フラグメント（１）は、特公昭５３−４１６７７公報実
施例２(1) 〜(14)の方法により製造した。 （２）

【００６５】

【化２０】

【００６６】の製造 実施例１（２）と同様にして上記目的物２．２ｇを得
た。 （３）上記（１）で得られた化合物と（２）で得られた
化合物との結合 上記（１）で得られた化合物６００ｍｇと上記（２）で
得られた化合物１．１ｇを使用して実施例１（３）と同
様に実施して反応物１．５ｇを得た。 （４）F49 化合物の製造 上記（３）で得られた化合物１．０g を実施例１（４）
と同様に処理して、逆相系高速液体クロマトグラフィー
により精製し、セファデックスＧ−25樹脂でゲル濾過し
て上記目的物６．１ｍｇを得た。 物性値 アミノ酸分析値：Asp 2.03(2),Thr 3.72(4),Ser 2.87
(3),Glu 3.13(3),Pro 2.20(2),Gly 3.05(3),Ala 1.00
(1),Val 1.95(2),Leu 5.10(5),Tyr 1.01(1),Lys 2.13
(2),His 1.03(1),Arg 1.05(1),Asu 1.14(1) 高速液体クロマトグラフィーの保持時間：３０．５分

【００６７】

【実施例７】式

【００６８】

【化２１】

【００６９】で表される化合物（F31 化合物と略すこと
がある）の製造 （１）フラグメント（１）の製造 フラグメント（１）は、特公昭５３−４１６７７公報実
施例２(1) 〜(14)の方法により製造した。 （２）

【００７０】

【化２２】

【００７１】の製造 実施例１．（２）と同様に実施例１．（２）で製造した
配列に追加されている所定のＤーＬｅｕ，Ｌｙｓ，Ｌｅ
ｕ, Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ、に対応する保護アミノ酸
を所定の位置で固相法で順次結合して、２．５ｇを得
た。 （３）上記（１）で得られた化合物と（２）で得られた
化合物との結合 上記（１）で得られた化合物５００ｍｇと上記（２）で
得られた化合物１．１ｇを使用して実施例１（３）と同
様に実施して反応物１．３ｇを得た。 （４）F31 化合物の製造 上記（３）で得られた化合物１．０g を実施例１（４）
と同様に処理して、逆相系高速液体クロマトグラフィー
により精製し、セファデックスＧ−25樹脂でゲル濾過し
て上記目的物７．３ｍｇを得た。 物性値 アミノ酸分析値：Asp 2.03(2),Thr 3.78(4),Ser 3.43
(4),Glu 5.17(5),Pro 2.05(2),Gly 2.99(3), Ala 1.00
(1),Val 2.12(2),Leu 6.96(7),Tyr 0.87(1),Lys 2.94
(3),His 0.99(1), Arg 1.08(1),Asu 1.02(1) 高速液体クロマトグラフィーの保持時間：２３．５分

【００７２】

【実施例８】式

【００７３】

【化２３】

【００７４】で表される化合物（F27 化合物と略すこと
がある）の製造 （１）フラグメント（１）の製造 フラグメント（１）は、特公昭５３−４１６７７公報実
施例２(1) 〜(14)の方法により製造した。 （２）

【００７５】

【化２４】

【００７６】の製造 実施例１（２）と同様にBoc-His(Tos)の代りにBoc-His
(1-Me) を使用して上記目的物２．１ｇを得た。 （３）上記（１）で得られた化合物と（２）で得られた
化合物との結合 上記（１）で得られた化合物５００ｍｇと上記（２）で
得られた化合物１．１ｇを使用して実施例１（３）と同
様に実施して反応物１．３ｇを得た。 （４）F27 化合物の製造 上記（３）で得られた化合物１．０g を実施例１（４）
と同様に処理して、逆相系高速液体クロマトグラフィー
により精製し、セファデックスＧ−25樹脂でゲル濾過し
て上記目的物５．５ｍｇを得た。 物性値 アミノ酸分析値：Asp 1.97(2),Thr 3.66(4),Ser 2.50
(3),Glu 3.00(3),Pro 1.95(2),Gly 2.91(3), Ala 1.00
(1),Val 1.96(2) Leu 4.69(5),Tyr 0.74(1),Lys 1.92
(2),Arg 0.96(1), Asu 1.19(1),His(1-Me) 0.83(1) 高速液体クロマトグラフィーの保持時間：２５．５分

【００７７】

【実施例９】式

【００７８】

【化２５】

【００７９】で表される化合物（F45 化合物と略すこと
がある）の製造 （１）フラグメント（１）の製造 フラグメント（１）は、特公昭５３−４１６７７公報実
施例２(1) 〜(14)の方法により製造した。 （２）

【００８０】

【化２６】

【００８１】の製造 実施例１（２）と同様にBoc-Asp(OBzl) の代りにBoc-As
p(OH)OBzl を使用して上記目的物２．２ｇを得た。 （３）上記（１）で得られた化合物と（２）で得られた
化合物との結合 上記（１）で得られた化合物５００ｍｇと上記（２）で
得られた化合物１．１ｇを使用して実施例１（３）と同
様に実施して反応物１．３ｇを得た。 （４）F45 化合物の製造 上記（３）で得られた化合物１．０g を実施例１（４）
と同様に処理して、逆相系高速液体クロマトグラフィー
により精製し、セファデックスＧ−25樹脂でゲル濾過し
て上記目的物５．９ｍｇを得た。 物性値 アミノ酸分析値：Asp 2.02(2),Thr 3.76(4),Ser 2.71
(3),Glu 3.12(3),Pro 1.94(2),Gly 3.03(3),Ala 1.00
(1),Val 2.00(2),Leu 4.91(5),Tyr 0.80(1),Lys 2.15
(2),His 1.14(1),Arg 1.02(1),Asu 1.10(1) 高速液体クロマトグラフィーの保持時間：２５．５分

【００８２】

【実施例１０】式

【００８３】

【化２７】

【００８４】で表される化合物（F43 化合物と略すこと
がある）の製造 （１）

【００８５】

【化２８】

【００８６】の製造 上記化合物は特公昭５３−４１６７７公報実施例２(1)
〜(14)の方法に準じて製造した。すなわち、同公報の方
法で変化している所定のAsn の結合位置で使用したBoc-
Asn の代りにFmoc-Asp(OtBu)-OSu を用いた。またＳｅ
ｒの結合位置で使用したBoc-Ser(Bzl)の代わりにFmoc-S
er(OtBu)-OSu を用いた。 （２）

【００８７】

【化２９】

【００８８】の製造 実施例１（２）と同様にして上記目的物２．１ｇを得
た。 （３）上記（１）で得られた化合物と（２）で得られた
化合物との結合 上記（１）で得られた化合物７００ｍｇと上記（２）で
得られた化合物１．２ｇを使用して実施例１（３）と同
様に実施して反応物１．５ｇを得た。 （４）F43 化合物の製造 上記（３）で得られた化合物１．０g を実施例１（４）
と同様に処理して、逆相系高速液体クロマトグラフィー
により精製し、セファデックスＧ−25樹脂でゲル濾過し
て上記目的物６．７ｍｇを得た。 物性値 アミノ酸分析値：Asp 1.94(2),Thr 3.64(4),Ser 2.62
(3),Glu 2.99(3),Pro 1.94(2),Gly 2.94(3),Ala 1.00
(1),Val 1.92(2),Leu 4.73(5),Tyr 0.83(1),Lys 2.09
(2),His 1.10(1),Arg 0.98(1),Asu 1.13(1) 高速液体クロマトグラフィーの保持時間：２４．８分

【００８９】

【実施例１１】式

【００９０】

【化３０】

【００９１】で表される化合物（F03 化合物と略すこと
がある）の製造 （１）

【００９２】

【化３１】

【００９３】の製造 上記化合物は特公昭５３−４１６７７公報実施例２の方
法に従って、スケールを１０倍にして製造して、２２ｇ
を得た。 （２） F03 化合物の製造 上記（１）で得られた化合物１５．０g を実施例１
（４）と同様にアニソール６０ｍｌと無水フッ化水素３
００ｍｌで０℃、１時間反応した後、実施例１（４）と
同様に処理した後、逆相系高速液体クロマトグラフィー
により精製し、セファデックスG ー 25樹脂でゲル濾過し
て上記目的物１５９ｍｇを得た。 物性値 アミノ酸分析：Asp 2.00(2),Thr 3.72(4),Ser 2.92(3),
Glu 3.09(3),Pro 1.92(2),Gly 2.93(3),Ala 1.00(1),Va
l 1.95(2),Leu 5.14(5),Lys 2.05(2),His 0.94(1),Arg
1.01(1),Asu 1.01(1) 高速液体クロマトグラフィーの保持時間：２９．７分

【００９４】

【試験例】

活性測定 下記の方法で被験物質として実施例で製造した各物質
の、活性比を測定した。体重９０〜１１０ｇの健康な
Ｓ．Ｄ．系雄性ラットを用いた。ラットを４群に分け各
群１０匹とし、次に示すようにエルカトニン標準品及び
被験物質を静脈内に投与した。

【００９５】 第１群 標準品高用量 第３群 被験物質高用量 第２群 標準品低用量 第４群 被験物質低用量 投与１時間後に、エ−テル麻酔下に各試験動物より、血
清を採血し、血清を分離した。血清に除たんぱく操作を
加え、原子吸光度法により血清カルシウム濃度を測定し
た。

【００９６】各群の血清カルシウム濃度を用いて、平行
線検定法により標準品に対する被験物質の相対力価を求
めた。その力価を、ヒトカルシトニンの力価で割って活
性比を求め、下記表にまとめた。

【００９７】

【表１】

【００９８】

【発明の効果】新規かつ有用な血清カルシウム低下作用
を有するペプチドを提供しえる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（１） 【化１】 （式中、A1はＳｅｒまたはＤ−Ｓｅｒ、A2はＡｓｎまた
   はＡｓｐ、A3はＳｅｒまたはＤ−Ｓｅｒ、A4はＬｙｓま
   たはＬｙｓ（Ａｃ）、A5はＬｅｕ、Ｄ−Ｌｅｕまたは、
   D-Leu-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-、A6はＨｉｓまたはＨ
   ｉｓ（１−Ｍｅ）、A7はＬｙｓまたはＬｙｓ（Ａｃ）、
   A8はＴｙｒまたは３−（３’，５’−ジクロロベンジ
   ル）Ｔｙｒ、A9はＡｓｐまたはβ−Ａｓｐをそれぞれ示
   す。但し、A1がＳｅｒ、A2がＡｓｎ、A3がＳｅｒ、A4が
   Ｌｙｓ、A5がＬｅｕ、A6がＨｉｓ、A7がＬｙｓ、A8がＴ
   ｙｒ、A9がＡｓｐである場合を除く。）で表されるペプ
   チド。