JPH07227297A - 中空糸を用いた微生物の検査方法及びその装置 - Google Patents
中空糸を用いた微生物の検査方法及びその装置Info
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- JPH07227297A JPH07227297A JP6044701A JP4470194A JPH07227297A JP H07227297 A JPH07227297 A JP H07227297A JP 6044701 A JP6044701 A JP 6044701A JP 4470194 A JP4470194 A JP 4470194A JP H07227297 A JPH07227297 A JP H07227297A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 検体中の微生物の有無を簡便で迅速、的確に
確かめる検査方法及びそれに用いる濾過器を提供する。 【構成】 検体を中空糸濾過器で濾過、洗浄し、該中空
糸濾過器中の中空糸に補捉された微生物と液体培地を接
触させ、培養した後、該液体培地の変化をみることによ
って検体中の微生物の存在の有無を判定することを特徴
とする微生物の検査方法及びそれに用いる中空糸濾過
器。
確かめる検査方法及びそれに用いる濾過器を提供する。 【構成】 検体を中空糸濾過器で濾過、洗浄し、該中空
糸濾過器中の中空糸に補捉された微生物と液体培地を接
触させ、培養した後、該液体培地の変化をみることによ
って検体中の微生物の存在の有無を判定することを特徴
とする微生物の検査方法及びそれに用いる中空糸濾過
器。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は検体中の微生物の有無を
確認する検査方法及びそれに用いる中空糸濾過器に関す
る。
確認する検査方法及びそれに用いる中空糸濾過器に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】各種の飲料や食品分野、医薬品や医療の
分野、バイオテクノロジー、エレクトロニクス等の分野
においては、微生物の有無を確認する検査方法が極めて
重要であり、従来より種々の方法が提案され、実施され
ている。それらの方法の中で現在最も一般的に行われて
いる方法は日本薬局方に収載されている無菌試験法であ
る。この方法には検体の一部を直接培地に加えて培養
し、検体中の微生物の有無を確かめる直接法とメンブレ
ンフィルターを用いて検体を濾過した後、そのフィルタ
ーを培地に入れて培養し、検体中の微生物の有無を確か
めるメンブレンフィルター法がある。
分野、バイオテクノロジー、エレクトロニクス等の分野
においては、微生物の有無を確認する検査方法が極めて
重要であり、従来より種々の方法が提案され、実施され
ている。それらの方法の中で現在最も一般的に行われて
いる方法は日本薬局方に収載されている無菌試験法であ
る。この方法には検体の一部を直接培地に加えて培養
し、検体中の微生物の有無を確かめる直接法とメンブレ
ンフィルターを用いて検体を濾過した後、そのフィルタ
ーを培地に入れて培養し、検体中の微生物の有無を確か
めるメンブレンフィルター法がある。
【０００３】又、微生物の１種であるマイコプラズマの
有無の検査に対しては生物製剤否定性試験法が用いられ
ているが、この方法にも上記の無菌試験法と同様に直接
塗抹培養法もしくは増菌培養法とメンブレンフィルター
法がある。
有無の検査に対しては生物製剤否定性試験法が用いられ
ているが、この方法にも上記の無菌試験法と同様に直接
塗抹培養法もしくは増菌培養法とメンブレンフィルター
法がある。
【０００４】一方、中空糸を用いて種々の濾過を行うこ
とはよく知られており、又、中空糸に微生物を担持させ
て目的とする生産物を得る技術も種々知られている。し
かし、本発明のように中空糸を用いて検体中の微生物の
有無を検査しようとする試みは今迄なされていない。
とはよく知られており、又、中空糸に微生物を担持させ
て目的とする生産物を得る技術も種々知られている。し
かし、本発明のように中空糸を用いて検体中の微生物の
有無を検査しようとする試みは今迄なされていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】上記した従来の検査方
法には夫々改善を要する問題点がある。特に、実務上定
性的でよいから簡便で迅速に検体中の微生の有無を確認
したい場合には上記の従来法は適した方法とはいえなか
った。すなわち、無菌試験法における直接法では、検体
量が通常１〜５ミリリットルと少ないため、存在する微
生物の数が少ない場合に判定を誤る危険性があり、通常
１検体あたり１０本以上検査しなくてはならず、簡便さ
の点で問題があった。そして、この点は生物製剤否定性
試験法における培養法の場合も同様であった。
法には夫々改善を要する問題点がある。特に、実務上定
性的でよいから簡便で迅速に検体中の微生の有無を確認
したい場合には上記の従来法は適した方法とはいえなか
った。すなわち、無菌試験法における直接法では、検体
量が通常１〜５ミリリットルと少ないため、存在する微
生物の数が少ない場合に判定を誤る危険性があり、通常
１検体あたり１０本以上検査しなくてはならず、簡便さ
の点で問題があった。そして、この点は生物製剤否定性
試験法における培養法の場合も同様であった。
【０００６】又、無菌試験法及び生物製剤否定性試験法
におけるメンブレンフィルター法の場合には、使用され
るメンブレンフィルターの直径が２０〜５０mmであるた
め、培養及び判定に通常使用されている直径約１６〜２
０mmの試験管にはそのままでは入れ難いため、ハサミ等
で小さく切ったり、折りたたんでから試験管に入れて培
養しなければならなかった。そのため手間がかかり、雑
菌等の汚染の危険性も増すという問題点があった。試験
管の代わりにシャーレに入れて培養した場合にも、培養
液がこぼれやすい上に濁度や色調の変化の観察がしにく
く、判定が難しいという別の問題点があった。
におけるメンブレンフィルター法の場合には、使用され
るメンブレンフィルターの直径が２０〜５０mmであるた
め、培養及び判定に通常使用されている直径約１６〜２
０mmの試験管にはそのままでは入れ難いため、ハサミ等
で小さく切ったり、折りたたんでから試験管に入れて培
養しなければならなかった。そのため手間がかかり、雑
菌等の汚染の危険性も増すという問題点があった。試験
管の代わりにシャーレに入れて培養した場合にも、培養
液がこぼれやすい上に濁度や色調の変化の観察がしにく
く、判定が難しいという別の問題点があった。
【０００７】また、濾過装置に培地を入れる方法に於い
ても、メンブレンフィルターは中空糸に比べ単位体積当
りの濾過面積がその約１／５〜１／１０と小さく、それ
を組み込んだ濾過装置は中空糸のものに比べ５〜１０倍
の体積を必要とするため、試験をするのにスペースがよ
り大きく必要な上、何回も検査する必要のある現場では
保管にも問題があった。
ても、メンブレンフィルターは中空糸に比べ単位体積当
りの濾過面積がその約１／５〜１／１０と小さく、それ
を組み込んだ濾過装置は中空糸のものに比べ５〜１０倍
の体積を必要とするため、試験をするのにスペースがよ
り大きく必要な上、何回も検査する必要のある現場では
保管にも問題があった。
【０００８】したがって、従来の検体中の微生物の有無
を確かめる検査方法はいずれも本発明が目的とする簡便
で迅速、的確な検査方法という点では満足のいく方法で
はなかったのである。本発明は、このような現状に鑑
み、前記の食品等の分野における工場、研究所等の現場
で希求されている検体中の微生物の有無を簡便で且つ迅
速、的確に確認する検査方法を提供することを目的とす
るものである。
を確かめる検査方法はいずれも本発明が目的とする簡便
で迅速、的確な検査方法という点では満足のいく方法で
はなかったのである。本発明は、このような現状に鑑
み、前記の食品等の分野における工場、研究所等の現場
で希求されている検体中の微生物の有無を簡便で且つ迅
速、的確に確認する検査方法を提供することを目的とす
るものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者は上記課題を解
決するため鋭意研究を行った結果、中空糸をフィルター
にしたコンパクトな濾過器を考案し、これを用いて検体
を濾過、洗浄後、該中空糸濾過器ごと試験管中の培養液
に入れるか、該濾過器中に培養液を注入して培養し、そ
の培養液の濁度又は色調の変化をみることにより検査す
るという本発明に到達した。
決するため鋭意研究を行った結果、中空糸をフィルター
にしたコンパクトな濾過器を考案し、これを用いて検体
を濾過、洗浄後、該中空糸濾過器ごと試験管中の培養液
に入れるか、該濾過器中に培養液を注入して培養し、そ
の培養液の濁度又は色調の変化をみることにより検査す
るという本発明に到達した。
【００１０】すなわち本発明は、検体を中空糸濾過器で
濾過した後、洗浄し、次いで該中空糸濾過器の中空糸に
補捉された微生物と液体培地を接触させ、該微生物を培
養した後、その液体培地の変化をみることによって検体
中の微生物の存在の有無を判定することを特徴とする微
生物の検査方法及びそれに用いる濾過器を提供するもの
である。
濾過した後、洗浄し、次いで該中空糸濾過器の中空糸に
補捉された微生物と液体培地を接触させ、該微生物を培
養した後、その液体培地の変化をみることによって検体
中の微生物の存在の有無を判定することを特徴とする微
生物の検査方法及びそれに用いる濾過器を提供するもの
である。
【００１１】以下本発明を詳細に説明する。本発明の中
空糸濾過器は、ループ状に折り曲げるか又は一端を封止
して４〜１０cmの長さにした中空糸を１〜１００本、好
ましくは５〜５０本束ねて、外径０．５〜５cm、長さ５
〜１５cmの円筒状ハウジング内に挿入し、開口端部を接
着剤等でハウジング内に固定した濾過器である。その例
を図１、図２、図３に示す。
空糸濾過器は、ループ状に折り曲げるか又は一端を封止
して４〜１０cmの長さにした中空糸を１〜１００本、好
ましくは５〜５０本束ねて、外径０．５〜５cm、長さ５
〜１５cmの円筒状ハウジング内に挿入し、開口端部を接
着剤等でハウジング内に固定した濾過器である。その例
を図１、図２、図３に示す。
【００１２】図１のＡに、ハウジング内に中空糸が高い
密度で充填されているタイプの本発明中空糸濾過器を示
す。このタイプの濾過器は図１のＢに示すように試験管
中の培養液に濾過器ごと浸して用いられる。試験管は一
般に直径１６〜３０mmのものが用いられるので、該濾過
器のハウジングの外径は２５mm以下のものが好ましい。
密度で充填されているタイプの本発明中空糸濾過器を示
す。このタイプの濾過器は図１のＢに示すように試験管
中の培養液に濾過器ごと浸して用いられる。試験管は一
般に直径１６〜３０mmのものが用いられるので、該濾過
器のハウジングの外径は２５mm以下のものが好ましい。
【００１３】図２のＡに、中空糸の充填密度が比較的高
く、ハウジング上部に空隙部を設けたタイプの本発明中
空糸濾過器を示す。このタイプの濾過器は図２のＢに示
すように培養液をハウジング内に注入して用いられる。
濾過器の入口には空気の通る栓をし、出口には液が漏れ
ない栓をして用いる。
く、ハウジング上部に空隙部を設けたタイプの本発明中
空糸濾過器を示す。このタイプの濾過器は図２のＢに示
すように培養液をハウジング内に注入して用いられる。
濾過器の入口には空気の通る栓をし、出口には液が漏れ
ない栓をして用いる。
【００１４】図２Ａタイプの中空糸濾過器における中空
糸束の上部にある空隙部は、中空糸がある部分では液体
培地の色調変化が観察しにくいという問題点を解決した
ものであって、該空隙部を満たした培養液の色調変化に
よって容易に判定できるという作用効果を有する。この
タイプの濾過器のハウジング外径は試験管に入れる必要
がないので、図１タイプのものに比べ大きくすることが
できるが、大きすぎると培養液の量が多くなり、微生物
の生育が遅くなるという別の問題点があるので、好まし
くは５cm以下にするのがよい。
糸束の上部にある空隙部は、中空糸がある部分では液体
培地の色調変化が観察しにくいという問題点を解決した
ものであって、該空隙部を満たした培養液の色調変化に
よって容易に判定できるという作用効果を有する。この
タイプの濾過器のハウジング外径は試験管に入れる必要
がないので、図１タイプのものに比べ大きくすることが
できるが、大きすぎると培養液の量が多くなり、微生物
の生育が遅くなるという別の問題点があるので、好まし
くは５cm以下にするのがよい。
【００１５】図３のＡに中空糸の充填密度が低い図２の
濾過器と同じ使い方をするタイプの本発明中空糸濾過器
を示す。このタイプは、中空糸の充填密度が低く、そこ
での色調変化の観察が容易に行えるので上部空隙部を設
ける必要がなく、コンパクトになるという特長をもって
いる。
濾過器と同じ使い方をするタイプの本発明中空糸濾過器
を示す。このタイプは、中空糸の充填密度が低く、そこ
での色調変化の観察が容易に行えるので上部空隙部を設
ける必要がなく、コンパクトになるという特長をもって
いる。
【００１６】上記の各図中、１は中空糸、２はハウジン
グ、３は中空糸固定部、４は検体入口、４−１は入口
栓、５は検体濾液出口、５−１は出口栓である。ハウジ
ング２内の中空糸１の本数は、多い程濾過面積は増える
が、多すぎると培養液の循環が悪くなり、微生物の生育
が遅れて判定に時間がかかるので予備実験で適正本数を
予め調べておくことが望ましい。通常は１〜１００本程
度であるが、好ましくは５〜５０本である。
グ、３は中空糸固定部、４は検体入口、４−１は入口
栓、５は検体濾液出口、５−１は出口栓である。ハウジ
ング２内の中空糸１の本数は、多い程濾過面積は増える
が、多すぎると培養液の循環が悪くなり、微生物の生育
が遅れて判定に時間がかかるので予備実験で適正本数を
予め調べておくことが望ましい。通常は１〜１００本程
度であるが、好ましくは５〜５０本である。
【００１７】又、図には示していないが、中空糸をルー
プ状に折り曲げないで、４〜１０cmの長さにカットした
中空糸の上部を熱により溶融して封止し、その下部を接
着剤等でハウジング内に固定したものも同様に使用でき
る。
プ状に折り曲げないで、４〜１０cmの長さにカットした
中空糸の上部を熱により溶融して封止し、その下部を接
着剤等でハウジング内に固定したものも同様に使用でき
る。
【００１８】濾過器に於ける検体の流れは、濾過器の入
口４から注入された検体液は中空糸の外側で、該検体中
の微生物が補捉され、中空糸壁を通過した濾液は中空糸
の内部に入り、次いで、濾過器出口５から排出されると
いう流れになる。
口４から注入された検体液は中空糸の外側で、該検体中
の微生物が補捉され、中空糸壁を通過した濾液は中空糸
の内部に入り、次いで、濾過器出口５から排出されると
いう流れになる。
【００１９】本発明の濾過器に用いられる中空糸は、ポ
リスルフォン系、ポリフッ化ビリデン系、ポリアクリロ
ニトリル系、ポリメタクリレート系、ポリアミド系、酢
酸セルロース系の中空糸が用いられるが、他の材質のも
のも使用できる。
リスルフォン系、ポリフッ化ビリデン系、ポリアクリロ
ニトリル系、ポリメタクリレート系、ポリアミド系、酢
酸セルロース系の中空糸が用いられるが、他の材質のも
のも使用できる。
【００２０】該中空糸の外径は５０〜２００μｍ、好ま
しくは３００〜１０００μｍであり、膜厚は１０〜５０
０μｍ、好ましくは５０〜３００μｍであり、孔径は
０．０１〜３．０μｍ、好ましくはマイコプラズマを対
象とする場合０．０１〜０．２μｍ、マイコプラズマ以
外の細菌の場合には０．４〜２．０μｍのものが用いら
れる。
しくは３００〜１０００μｍであり、膜厚は１０〜５０
０μｍ、好ましくは５０〜３００μｍであり、孔径は
０．０１〜３．０μｍ、好ましくはマイコプラズマを対
象とする場合０．０１〜０．２μｍ、マイコプラズマ以
外の細菌の場合には０．４〜２．０μｍのものが用いら
れる。
【００２１】ハウジングの材質としては、ホリカーボネ
ート、ポリスルフォン、ポリプロピレン、アクリル樹
脂、ポリエチレン、ＡＢＳ樹脂、変性ＰＰＥ樹脂等が用
いられる。本発明が対象とする検体は、その中に微生物
が存在しているか否かが問題になる検体であって、液体
もしくは溶液または懸濁液にすることができる固体であ
る。これらのうち検体が液体の場合には、そのままか、
或いは滅菌した生理食塩水、純水、緩衝液等で希釈して
供試する。固体の検体の場合には、上記の液体で溶解す
るか懸濁せしめ、必要により遠心分離などによって沈降
物を除去した後、供試することができる。
ート、ポリスルフォン、ポリプロピレン、アクリル樹
脂、ポリエチレン、ＡＢＳ樹脂、変性ＰＰＥ樹脂等が用
いられる。本発明が対象とする検体は、その中に微生物
が存在しているか否かが問題になる検体であって、液体
もしくは溶液または懸濁液にすることができる固体であ
る。これらのうち検体が液体の場合には、そのままか、
或いは滅菌した生理食塩水、純水、緩衝液等で希釈して
供試する。固体の検体の場合には、上記の液体で溶解す
るか懸濁せしめ、必要により遠心分離などによって沈降
物を除去した後、供試することができる。
【００２２】微生物の有無の判定を必要とする本発明の
対象となる検体の具体例をあげると ビール、日本酒、焼酎、ワイン等のアルコール飲料、
コーラ、サイダー等の炭酸飲料、缶コーヒー、ウーロン
茶、日本茶、紅茶、スポーツドリンク、ミネラルウオー
ター、各種ドリンク類等の飲料類、 注射液、抗生物質製剤等の医薬品類、 エレクトロニクス工業等で使用される純水、洗浄水
類、 血清、及び血清を含む細胞培養用培養液、 医療検査の対象となる尿、タン等 が挙げられる。これらのうち〜の検体の対象微生物
はマイコプラズマを除く細菌及び／又は酵母類が主体で
あり、、はマイコプラズマが主体である。
対象となる検体の具体例をあげると ビール、日本酒、焼酎、ワイン等のアルコール飲料、
コーラ、サイダー等の炭酸飲料、缶コーヒー、ウーロン
茶、日本茶、紅茶、スポーツドリンク、ミネラルウオー
ター、各種ドリンク類等の飲料類、 注射液、抗生物質製剤等の医薬品類、 エレクトロニクス工業等で使用される純水、洗浄水
類、 血清、及び血清を含む細胞培養用培養液、 医療検査の対象となる尿、タン等 が挙げられる。これらのうち〜の検体の対象微生物
はマイコプラズマを除く細菌及び／又は酵母類が主体で
あり、、はマイコプラズマが主体である。
【００２３】以上例示した分野の検体特に〜および
の血清においては、一般に微生物数が少ない（例えば
１０2 ／ml以下）場合が多く、このような分野の迅速な
微生物存在検査には従来は苦労していたが、本発明の方
法によって極めて簡便、迅速、的確に検査が可能となっ
た。検査に要する検体量としては濾過可能な量であれば
よいが、一般には１０〜５００mlでよい。
の血清においては、一般に微生物数が少ない（例えば
１０2 ／ml以下）場合が多く、このような分野の迅速な
微生物存在検査には従来は苦労していたが、本発明の方
法によって極めて簡便、迅速、的確に検査が可能となっ
た。検査に要する検体量としては濾過可能な量であれば
よいが、一般には１０〜５００mlでよい。
【００２４】次に本発明の検査方法を操作手順に従って
説明する。 検体の調製 検体が液体でそのまま使用できるときはそのままでよい
が、濃度が濃すぎるような場合とかタンのように検体量
が少ない場合には前記したように生理食塩水、純水、緩
衝液等により希釈して検体とする。又、固体の場合には
前記の通り上記の液で溶解するか懸濁し、必要により遠
心分離により沈降物を除去して検体とする。
説明する。 検体の調製 検体が液体でそのまま使用できるときはそのままでよい
が、濃度が濃すぎるような場合とかタンのように検体量
が少ない場合には前記したように生理食塩水、純水、緩
衝液等により希釈して検体とする。又、固体の場合には
前記の通り上記の液で溶解するか懸濁し、必要により遠
心分離により沈降物を除去して検体とする。
【００２５】調製した検体を中空糸濾過器を用いて濾
過する。調製した検体は通常１０〜５００ml程度、滅菌
済みのシリンジ又は滅菌チューブ等を介した圧入装置に
より本発明の中空糸濾過器の入口４から注入され、中空
糸の外側に微生物を補捉した後、中空糸内部に流入した
濾液は出口５より排出される。
過する。調製した検体は通常１０〜５００ml程度、滅菌
済みのシリンジ又は滅菌チューブ等を介した圧入装置に
より本発明の中空糸濾過器の入口４から注入され、中空
糸の外側に微生物を補捉した後、中空糸内部に流入した
濾液は出口５より排出される。
【００２６】検体を濾過した中空糸濾過器を洗浄液で
洗浄する。洗浄液としては滅菌した緩衝液、生理食塩
水、純水等の微生物の生理活性を疎外しない液が用いら
れ、その注入、洗浄は上記と同様の方法で行う。
洗浄する。洗浄液としては滅菌した緩衝液、生理食塩
水、純水等の微生物の生理活性を疎外しない液が用いら
れ、その注入、洗浄は上記と同様の方法で行う。
【００２７】洗浄した中空糸濾過器を培養液と接触さ
せる。抵触の態様としては、図１Ｂに示すように試験管
に培養液を入れておき、その中に該中空糸濾過器を浸す
か又は図２Ｂもしくは図３Ｂのように濾過器のハウジン
グ内に培養液を注入して行う。これらの方法において、
濾過器をはじめ栓その他器具類は全て滅菌処理しておく
ことは当然である。
せる。抵触の態様としては、図１Ｂに示すように試験管
に培養液を入れておき、その中に該中空糸濾過器を浸す
か又は図２Ｂもしくは図３Ｂのように濾過器のハウジン
グ内に培養液を注入して行う。これらの方法において、
濾過器をはじめ栓その他器具類は全て滅菌処理しておく
ことは当然である。
【００２８】培養液はその検体に存在していると予想さ
れる微生物に適した液体培地が用いられる。通常は医薬
品中の細菌、真菌の場合には局方に記載されている無菌
試験用チオグリコール酸培地Ｉ，IIやブドウ糖・ペプト
ン培地を用い、食品や水の場合には例えば普通ブイヨン
培地、ＳＣＤ培地、ＴＧＥ培地等を用い、マイコプラズ
マの場合にはマイコプラズマ否定試験用液体培地や実施
例に示す培地を用いることができる。
れる微生物に適した液体培地が用いられる。通常は医薬
品中の細菌、真菌の場合には局方に記載されている無菌
試験用チオグリコール酸培地Ｉ，IIやブドウ糖・ペプト
ン培地を用い、食品や水の場合には例えば普通ブイヨン
培地、ＳＣＤ培地、ＴＧＥ培地等を用い、マイコプラズ
マの場合にはマイコプラズマ否定試験用液体培地や実施
例に示す培地を用いることができる。
【００２９】培養する 一般的には温度３０〜４０℃で１日〜２週間、常法に従
い培養する。なおホットベンダー用製品のような場合に
は５５℃前後の温度で培養することもある。又、静置培
養が一般的だが、振盪培養が適する場合もある。
い培養する。なおホットベンダー用製品のような場合に
は５５℃前後の温度で培養することもある。又、静置培
養が一般的だが、振盪培養が適する場合もある。
【００３０】判定する 液体培地の変化を肉眼で観察し、微生物の発育の有無を
確認し判定する。具体的にはマイコプラズマ以外の微生
物の場合には、一般に培養液の濁度で判定するが、菌株
によっては培地表面の菌膜で判定する場合もある。酸を
生成する微生物の場合にはＢｒｏｍｔｈｍｏｌ Ｂｌｕ
ｅ，Ｃｒｙｓｔａｌ Ｖｉｏｌｅｔ，Ｐｈｅｎｏｌ Ｒ
ｅｄ等のｐＨ指示薬を培地中に添加してその変色により
判定することもできる。
確認し判定する。具体的にはマイコプラズマ以外の微生
物の場合には、一般に培養液の濁度で判定するが、菌株
によっては培地表面の菌膜で判定する場合もある。酸を
生成する微生物の場合にはＢｒｏｍｔｈｍｏｌ Ｂｌｕ
ｅ，Ｃｒｙｓｔａｌ Ｖｉｏｌｅｔ，Ｐｈｅｎｏｌ Ｒ
ｅｄ等のｐＨ指示薬を培地中に添加してその変色により
判定することもできる。
【００３１】マイコプラズマの場合には培養液の濁度で
は判定できないので、一般にＰｈｅｎｏｌ Ｒｅｄ等の
ｐＨ指示薬を添加し変色で判定する。グルコースを資化
する菌の場合は赤橙色から黄色に変色し、アルギニンや
尿素を資化する菌の場合は赤橙色から赤色に変色する。
は判定できないので、一般にＰｈｅｎｏｌ Ｒｅｄ等の
ｐＨ指示薬を添加し変色で判定する。グルコースを資化
する菌の場合は赤橙色から黄色に変色し、アルギニンや
尿素を資化する菌の場合は赤橙色から赤色に変色する。
【００３２】
【実施例】以下、実施例により本発明を説明する。
【００３３】実施例１ 表１に示した培地を用いて３７℃で培養し、次いで−８
０℃に凍結しておいたマイコプラズマ アルギニイニイ
（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ａｒｇｉｎｉｎｉ）〔菌数約
１０9 個／ml〕を解凍し、ｐＨ７．２のリン酸緩衝液で
１０8 倍に稀釈して検体液を調製した（菌数約１０個／
ml）。この検体液を図１に示す下記の中空糸濾過器を用
いて濾過した。
０℃に凍結しておいたマイコプラズマ アルギニイニイ
（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ａｒｇｉｎｉｎｉ）〔菌数約
１０9 個／ml〕を解凍し、ｐＨ７．２のリン酸緩衝液で
１０8 倍に稀釈して検体液を調製した（菌数約１０個／
ml）。この検体液を図１に示す下記の中空糸濾過器を用
いて濾過した。
【００３４】（中空糸濾過器） ・ハウジング 材質：ポリカーボネート 寸法（図１に於いて） ａ1 ＝７０mm、ｂ1 ＝１０mm、ｃ1 ＝５０mm、ｄ1 ＝１
０mm、ｅ1 ＝７mm、ｆ1 ＝１０mm、ｇ1 ＝４mm ・中空糸 材質：ポリスルフォン 孔径：０．０４μｍ 外径：３８０μｍ 膜厚：１００μｍ 本数：２０本
０mm、ｅ1 ＝７mm、ｆ1 ＝１０mm、ｇ1 ＝４mm ・中空糸 材質：ポリスルフォン 孔径：０．０４μｍ 外径：３８０μｍ 膜厚：１００μｍ 本数：２０本
【００３５】濾過は図１に示した上記の中空糸濾過器の
入口４より、上記検体液１mlとリン酸緩衝液９mlからな
る混合液１０mlをシリンジにより濾過器に注入して行っ
た。次いで、ｐＨ７．２のリン酸緩衝液１０mlで洗浄
し、表１に示した培養液１３mlを入れた直径１８mmの試
験管に該濾過器を浸し、インキュベーター中で３７℃に
て４８時間培養した。対象として、上記の１０8 倍に稀
釈した菌の稀釈液１mlを表１に示した培養液１２mlが入
った直径１８mmの試験管に入れ、上記実施例と同じ条件
及び方法で培養した。培養後、上記実施例及び対象の培
養液を観察したところ、両者とも赤橙色から赤色に変色
しており、検体中にマイコプラズマ・アルギニイニイが
存在していることが確認された。
入口４より、上記検体液１mlとリン酸緩衝液９mlからな
る混合液１０mlをシリンジにより濾過器に注入して行っ
た。次いで、ｐＨ７．２のリン酸緩衝液１０mlで洗浄
し、表１に示した培養液１３mlを入れた直径１８mmの試
験管に該濾過器を浸し、インキュベーター中で３７℃に
て４８時間培養した。対象として、上記の１０8 倍に稀
釈した菌の稀釈液１mlを表１に示した培養液１２mlが入
った直径１８mmの試験管に入れ、上記実施例と同じ条件
及び方法で培養した。培養後、上記実施例及び対象の培
養液を観察したところ、両者とも赤橙色から赤色に変色
しており、検体中にマイコプラズマ・アルギニイニイが
存在していることが確認された。
【００３６】
【表１】
【００３７】実施例２ 表１の液体培地中の１０％アルギニン塩酸塩溶液（２０
ml）にかえて、１０％グルコース溶液（２０ml）を用い
た他は表１と同一組成（配合量）の液体培地を用いて、
３７℃で２０〜２４時間培養したアコレプラズマ レイ
ドロウイー（Ａｃｈｏｌｅｐｌａｓｍａ ｌａｉｄｌａ
ｗｉｉ）〔菌数約１０8 ／ml〕をｐＨ７．２のリン酸緩
衝液で１０6 倍に稀釈し、さらにウマの血清で１０倍に
稀釈して菌数約１０個／mlの血清サンプルの検体を調製
した。この検体１mlとリン酸緩衝液９mlを混合し、中空
糸の本数を５本に減らした以外は実施例１で用いたのと
同じ中空糸濾過器を用いて実施例１と同様に濾過、洗浄
した。
ml）にかえて、１０％グルコース溶液（２０ml）を用い
た他は表１と同一組成（配合量）の液体培地を用いて、
３７℃で２０〜２４時間培養したアコレプラズマ レイ
ドロウイー（Ａｃｈｏｌｅｐｌａｓｍａ ｌａｉｄｌａ
ｗｉｉ）〔菌数約１０8 ／ml〕をｐＨ７．２のリン酸緩
衝液で１０6 倍に稀釈し、さらにウマの血清で１０倍に
稀釈して菌数約１０個／mlの血清サンプルの検体を調製
した。この検体１mlとリン酸緩衝液９mlを混合し、中空
糸の本数を５本に減らした以外は実施例１で用いたのと
同じ中空糸濾過器を用いて実施例１と同様に濾過、洗浄
した。
【００３８】次に、上記のグルコース含有液体培地１３
mlを入れた直径１８mmの試験管に該濾過器を浸し、イン
キュベーター中で３７℃にて３日間培養した。対象とし
て上記検体１mlを中空糸濾過器を通さないで、直接上記
液体培地１２mlを入れた直径１８mmの試験管に入れイン
キュベーター中で３７℃にて３日間培養した。培養後、
培養液（培地）を観察したところ両者とも赤橙色から黄
色に変色しており、検体中の微生物であるアコレプラズ
マ レイドロウイー（Ａｃｈｏｌｅｐｌａｓｍａ ｌａ
ｉｄｌａｗｉｉ）が存在していることが確認された。
mlを入れた直径１８mmの試験管に該濾過器を浸し、イン
キュベーター中で３７℃にて３日間培養した。対象とし
て上記検体１mlを中空糸濾過器を通さないで、直接上記
液体培地１２mlを入れた直径１８mmの試験管に入れイン
キュベーター中で３７℃にて３日間培養した。培養後、
培養液（培地）を観察したところ両者とも赤橙色から黄
色に変色しており、検体中の微生物であるアコレプラズ
マ レイドロウイー（Ａｃｈｏｌｅｐｌａｓｍａ ｌａ
ｉｄｌａｗｉｉ）が存在していることが確認された。
【００３９】実施例３ 中空糸濾過器として、図２に示すタイプの下記濾過器を
用いた。 （中空糸濾過器） ・ハウジング 材質：ポリカーボネート 寸法（図２に於いて） ａ2 ＝１００mm、ｂ2 ＝２０mm、ｃ2 ＝７０mm、ｄ2 ＝
１０mm、ｅ2 ＝７mm、ｆ2 ＝２０mm、ｇ2 ＝７mm、ｈ2
＝３０mm
用いた。 （中空糸濾過器） ・ハウジング 材質：ポリカーボネート 寸法（図２に於いて） ａ2 ＝１００mm、ｂ2 ＝２０mm、ｃ2 ＝７０mm、ｄ2 ＝
１０mm、ｅ2 ＝７mm、ｆ2 ＝２０mm、ｇ2 ＝７mm、ｈ2
＝３０mm
【００４０】・中空糸 材質：ポリスルフォン 孔径：０．０４μｍ 外径：４００μｍ 膜厚：１００μｍ 本数：３０本
【００４１】検体としては、実施例２で調製したアコレ
プラズマ レイドロウイー（Ａｃｈｏｌｅｐｌａｓｍａ
ｌａｉｄｌａｗｉｉ）含有検体をさらにウマの血清で
１０倍に稀釈し菌数約１／mlとした検体を用いた。この
検体液１０mlとｐＨ７．２のリン酸緩衝液９０mlを混合
し、図２の濾過器の入口４に滅菌済連結チューブから加
圧ポンプを用いて、該混合液を注入して濾過し、次いで
リン酸緩衝液５０mlで洗浄した。
プラズマ レイドロウイー（Ａｃｈｏｌｅｐｌａｓｍａ
ｌａｉｄｌａｗｉｉ）含有検体をさらにウマの血清で
１０倍に稀釈し菌数約１／mlとした検体を用いた。この
検体液１０mlとｐＨ７．２のリン酸緩衝液９０mlを混合
し、図２の濾過器の入口４に滅菌済連結チューブから加
圧ポンプを用いて、該混合液を注入して濾過し、次いで
リン酸緩衝液５０mlで洗浄した。
【００４２】この濾過器の出口５を滅菌済栓５−１で栓
をした後、入口４より実施例２と同じ培地（液）を約２
５ml注入し、３７℃でインキュベーター中にて３日間培
養した。上記培養後、ハウジング内の培地（液）を観察
したところ赤橙色から黄色に変色していることが観察さ
れ、検体中にアコレプラズマ レイドロウイー（Ａｃｈ
ｏｌｅｐｌａｓｍａ ｌａｉｄｌａｗｉｉ）が存在して
いることが確認された。
をした後、入口４より実施例２と同じ培地（液）を約２
５ml注入し、３７℃でインキュベーター中にて３日間培
養した。上記培養後、ハウジング内の培地（液）を観察
したところ赤橙色から黄色に変色していることが観察さ
れ、検体中にアコレプラズマ レイドロウイー（Ａｃｈ
ｏｌｅｐｌａｓｍａ ｌａｉｄｌａｗｉｉ）が存在して
いることが確認された。
【００４３】実施例４ ＳＣＤ培地（液）で１６時間培養したバチルス・スブチ
リス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を滅菌し
た生理食塩水で１０5 倍及び１０6 倍に稀釈し、夫々の
稀釈液１０mlを実施例１で用いた中空糸濾過器で濾過し
１０mlの生理食塩水で洗浄後、１５mlのＳＣＤ培地
（液）を入れた直径１８mmの試験管に浸した。いずれの
場合も１２時間以内に培地は濁り試験管の底部にバチル
ス・スブリチスの沈降物が認められ、振とうすると濁り
がよりはっきりと観察された。
リス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を滅菌し
た生理食塩水で１０5 倍及び１０6 倍に稀釈し、夫々の
稀釈液１０mlを実施例１で用いた中空糸濾過器で濾過し
１０mlの生理食塩水で洗浄後、１５mlのＳＣＤ培地
（液）を入れた直径１８mmの試験管に浸した。いずれの
場合も１２時間以内に培地は濁り試験管の底部にバチル
ス・スブリチスの沈降物が認められ、振とうすると濁り
がよりはっきりと観察された。
【００４４】実施例５ ＳＣＤ培地（液）で１６時間培養した大腸菌（Ｅｓｃｈ
ｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）を滅菌した生理食塩水で１
０7 倍に稀釈した。この稀釈液１００mlを実施例３で用
いたのと同じ中空糸濾過器を用いて実施例３と同じ操作
を行い濾過、洗浄した後、出口の密封をし、次いでブロ
ムクレゾールパープルを０．００６％添加したＳＣＤ培
地（液）を入口から約２５ml添加し、３７℃で２４時間
培養した。培養後の培養液の色は紫色から灰色〜灰紫色
に変化し、底部に菌体の沈降物が認められた。
ｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）を滅菌した生理食塩水で１
０7 倍に稀釈した。この稀釈液１００mlを実施例３で用
いたのと同じ中空糸濾過器を用いて実施例３と同じ操作
を行い濾過、洗浄した後、出口の密封をし、次いでブロ
ムクレゾールパープルを０．００６％添加したＳＣＤ培
地（液）を入口から約２５ml添加し、３７℃で２４時間
培養した。培養後の培養液の色は紫色から灰色〜灰紫色
に変化し、底部に菌体の沈降物が認められた。
【００４５】実施例６ 市販のミネラルウオーター（輸入品）を１０2 倍に稀釈
した検体液１０mlを実施例１で使用したのと同じ中空糸
濾過器を用いて濾過した後、１０mlの生理食塩水で洗浄
した。次にこれをＴＧＥ培地（液）（標準培地を更に１
０倍に稀釈した培地（液）を使用）１３mlを入れた直径
１８mmの試験管内に浸し、３０℃で４日間培養したとこ
ろ、試験管底部に菌体の沈降物が認められ、振とうする
と培地（液）が濁るのが観察された。
した検体液１０mlを実施例１で使用したのと同じ中空糸
濾過器を用いて濾過した後、１０mlの生理食塩水で洗浄
した。次にこれをＴＧＥ培地（液）（標準培地を更に１
０倍に稀釈した培地（液）を使用）１３mlを入れた直径
１８mmの試験管内に浸し、３０℃で４日間培養したとこ
ろ、試験管底部に菌体の沈降物が認められ、振とうする
と培地（液）が濁るのが観察された。
【００４６】実施例７ 表２の培地を用いて３７℃で２０〜２４時間培養したウ
レアプラズマ ウレアリティカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍ
ａ ｕｒｅａｌｉｔｉｃｕｍ）を生理食塩水で１０4 倍
に稀釈し、検体液を調製した。検体液１mlと生理食塩水
９mlを実施例１で用いたのと同じ中空糸濾過器で濾過
し、１０mlの生理食塩水で洗浄後、表２の培地１３mlを
入れた直径１８mmの試験管に浸した。一方、１０4 倍稀
釈液１mlを表２の培地１２mlを入れた試験管に加えたも
のを対象とした。両者とも３７℃で２日間培養したとこ
ろ、いずれも培地（液）の色は黄色から赤色に変色し、
検体中にウレアプラズマ ウレアリティカム（Ｕｒｅａ
ｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｉｔｉｃｕｍ）が存在してい
ることが確認された。
レアプラズマ ウレアリティカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍ
ａ ｕｒｅａｌｉｔｉｃｕｍ）を生理食塩水で１０4 倍
に稀釈し、検体液を調製した。検体液１mlと生理食塩水
９mlを実施例１で用いたのと同じ中空糸濾過器で濾過
し、１０mlの生理食塩水で洗浄後、表２の培地１３mlを
入れた直径１８mmの試験管に浸した。一方、１０4 倍稀
釈液１mlを表２の培地１２mlを入れた試験管に加えたも
のを対象とした。両者とも３７℃で２日間培養したとこ
ろ、いずれも培地（液）の色は黄色から赤色に変色し、
検体中にウレアプラズマ ウレアリティカム（Ｕｒｅａ
ｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｉｔｉｃｕｍ）が存在してい
ることが確認された。
【００４７】
【表２】
【００４８】実施例８ 表１の培地を用いて３７℃で４０〜４８時間培養したマ
イコプラズマ ホミニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｏ
ｍｉｎｉｓ）をヒトの尿を用いて１０4 倍に稀釈し検体
液を調製した。検体液１mlとｐＨ７．２のリン酸緩衝液
９mlを混合し、実施例１で用いたのと同じ中空糸濾過器
で実施例１と同様にして濾過、洗浄した後、表１の培地
１３mlを入れた直径１８mmの試験管内に浸し、３７℃で
２日間培養したところ、培養液の色は赤橙色から赤色に
変色していたのが観察され、マイコプラズマ ホミニス
（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｏｍｉｎｉｓ）が検体中に
存在していることが確認された。
イコプラズマ ホミニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｏ
ｍｉｎｉｓ）をヒトの尿を用いて１０4 倍に稀釈し検体
液を調製した。検体液１mlとｐＨ７．２のリン酸緩衝液
９mlを混合し、実施例１で用いたのと同じ中空糸濾過器
で実施例１と同様にして濾過、洗浄した後、表１の培地
１３mlを入れた直径１８mmの試験管内に浸し、３７℃で
２日間培養したところ、培養液の色は赤橙色から赤色に
変色していたのが観察され、マイコプラズマ ホミニス
（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｏｍｉｎｉｓ）が検体中に
存在していることが確認された。
【００４９】
【発明の効果】本発明の検査方法は、検体中の微生物の
有無を迅速、的確、簡便に確かめることができるので、
飲料・食品分野、医薬品・医療分野、バイオテクノロジ
ー・エレクトロニクス分野等の工程管理、品質管理、研
究開発等に於いて大きな効果を発揮する。
有無を迅速、的確、簡便に確かめることができるので、
飲料・食品分野、医薬品・医療分野、バイオテクノロジ
ー・エレクトロニクス分野等の工程管理、品質管理、研
究開発等に於いて大きな効果を発揮する。
【図１】Ａは本発明の中空糸濾過器の１実施例の断面図
であり、Ｂはそれの使用態様を示す断面図である。
であり、Ｂはそれの使用態様を示す断面図である。
【図２】Ａは本発明の中空糸濾過器の１実施例の断面図
であり、Ｂはそれの使用態様を示す断面図である。
であり、Ｂはそれの使用態様を示す断面図である。
【図３】Ａは本発明の中空糸濾過器の１実施例の断面図
であり、Ｂはそれの使用態様を示す断面図である。
であり、Ｂはそれの使用態様を示す断面図である。
１ 中空糸 ２ ハウジング ３ 中空糸固定部 ４ 栓付入口 ４−１ 入口栓 ５ 栓付濾過器出口 ５−１ 出口栓 ６ 試験管 ７ 液体培地
Claims (10)
- 【請求項１】 検体を中空糸濾過器で濾過した後、洗浄
し、次いで該中空糸濾過器の中空糸に補捉された微生物
と液体培地を接触させ、該微生物を培養した後、その液
体培地の変化をみることによって検体中の微生物の存在
の有無を判定することを特徴とする微生物の検査方法。 - 【請求項２】 検体が飲料類、医薬品類、エレクトロニ
クス工業で用いられる水類、培地類、又は尿・タン類か
ら採取された検体である請求項１記載の検査方法。 - 【請求項３】 捕捉微生物と液体培地の接触を試験管中
の液体培地に濾過、洗浄後の中空糸濾過器を浸すことに
よって行う請求項１記載の検査方法。 - 【請求項４】 捕捉微生物と液体培地の接触を濾過、洗
浄後の中空糸濾過器のハウジング内に液体培地を注入す
ることによって行う請求項１記載の検査方法。 - 【請求項５】 培養後の液体培地の変化を該液体培地の
濁度及び／又は色調変化でみる請求項１記載の検査方
法。 - 【請求項６】 洗浄を滅菌した緩衝液、生理食塩水、水
から選ばれた洗浄液で行う請求項１記載の検査方法。 - 【請求項７】 中空糸が１〜１００本束ねられて検体の
入り口と出口を有する円筒状ハウジング内に挿入され、
その中空糸の開口端部が該ハウジングに固定されている
検体中の微生物の有無を検査する中空糸濾過器。 - 【請求項８】 中空糸が、孔径０．０１〜２．０μｍ、
外径３００〜１０００μｍ、膜厚５０〜３００μｍの中
空糸である請求項７記載の中空糸濾過器。 - 【請求項９】 中空糸がループ状に折り曲げるか又は一
端を封止してハウジング内での長さを４〜１０cmにした
請求項７記載の中空糸濾過器。 - 【請求項１０】 円筒状ハウジングが、検体の入り口と
出口を有し、外径０．５〜５cm，長さ５〜１５cmのプラ
スチックス製の円筒状ハウジングである請求項７記載の
中空糸濾過器。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04470194A JP3461556B2 (ja) | 1994-02-21 | 1994-02-21 | 中空糸を用いた微生物の検査方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04470194A JP3461556B2 (ja) | 1994-02-21 | 1994-02-21 | 中空糸を用いた微生物の検査方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07227297A true JPH07227297A (ja) | 1995-08-29 |
| JP3461556B2 JP3461556B2 (ja) | 2003-10-27 |
Family
ID=12698730
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04470194A Expired - Lifetime JP3461556B2 (ja) | 1994-02-21 | 1994-02-21 | 中空糸を用いた微生物の検査方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3461556B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2781391A1 (fr) * | 1998-07-27 | 2000-01-28 | Toulouse Inst Nat Polytech | Procede et appareil pour l'homogeneisation de deux milieux liquides contenant des composants solides ou dissous et/ou des micro-organismes |
| JP2001000842A (ja) * | 1998-05-22 | 2001-01-09 | Daicel Chem Ind Ltd | 病原性原虫濃縮用モジュールおよび濃縮方法 |
| WO2001011006A2 (en) * | 1999-08-06 | 2001-02-15 | Fluid Technologies Plc | Detection of micro-organisms |
| JP2011062216A (ja) * | 2011-01-05 | 2011-03-31 | Univ Of Tokyo | 細胞培養用中空糸モジュールおよび細胞培養方法 |
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|---|---|---|---|---|
| JPS6068006A (ja) * | 1983-09-24 | 1985-04-18 | Kuraray Co Ltd | 濾過装置 |
| JPS62160605U (ja) * | 1986-03-29 | 1987-10-13 | ||
| JPH02163098A (ja) * | 1988-12-14 | 1990-06-22 | Japan Organo Co Ltd | 生菌の検出法 |
| JPH03123497A (ja) * | 1989-10-06 | 1991-05-27 | Japan Organo Co Ltd | 微量嫌気性細菌の迅速検出法 |
| JPH0530997A (ja) * | 1991-08-05 | 1993-02-09 | Nippon Millipore Kogyo Kk | 菌数の測定法 |
-
1994
- 1994-02-21 JP JP04470194A patent/JP3461556B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (5)
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| JPH0530997A (ja) * | 1991-08-05 | 1993-02-09 | Nippon Millipore Kogyo Kk | 菌数の測定法 |
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| JP2001000842A (ja) * | 1998-05-22 | 2001-01-09 | Daicel Chem Ind Ltd | 病原性原虫濃縮用モジュールおよび濃縮方法 |
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| WO2001011006A2 (en) * | 1999-08-06 | 2001-02-15 | Fluid Technologies Plc | Detection of micro-organisms |
| WO2001011006A3 (en) * | 1999-08-06 | 2001-09-20 | Fsm Technologies Ltd | Detection of micro-organisms |
| JP2003506073A (ja) * | 1999-08-06 | 2003-02-18 | フルード テクノロジーズ パブリック リミテッド カンパニー | 微生物の検出 |
| JP4772242B2 (ja) * | 1999-08-06 | 2011-09-14 | ミリポア・コーポレイション | 微生物の検出 |
| US8039206B1 (en) * | 1999-08-06 | 2011-10-18 | Millipore Corporation | Detection of micro-organisms |
| JP2011062216A (ja) * | 2011-01-05 | 2011-03-31 | Univ Of Tokyo | 細胞培養用中空糸モジュールおよび細胞培養方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3461556B2 (ja) | 2003-10-27 |
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| JP2001136998A (ja) | 目的細菌の検出方法、サルモネラ検出用選択培地、及び半流動選択培地が充填された容器 |
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