JPH07206765A - 安息香酸誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 従来に比べ優れた抗腫瘍作用および分化誘導
作用を有する化合物を提供すること。 【構成】 式 （式中、Ｒ¹およびＲ²は同一または異なって水素原子ま
たは炭素原子数１〜５のアルキル基を示す。）で表され
る安息香酸誘導体およびその塩。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は悪性腫瘍増殖の予防およ
び治療に有用な安息香酸誘導体に関する。

【０００２】

【従来の技術】ビタミンＡ酸およびその類縁体は、悪性
腫瘍増殖の予防および治療ならびに座瘡、乾癬およびそ
の他の皮膚疾患の治療に用いられ、全身または局所的に
使用できる。ドイツ特許第３４３４９４８号、同第３４
３４９４２号、ヨーロッパ特許第２２１０１１８号およ
びＨ．ＫａｇｅｃｈｉｋａらのＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，
第３１巻，第２１８２〜２１９２頁（１９８８年）に
は、芳香環が置換したビニレン基、アミド結合、アゾ結
合、ケテン結合等により芳香族カルボン酸またはカルボ
ン酸と連結した化合物が、細胞分化誘導および皮膚疾患
の予防と治療の作用を持っていることが記載されてい
る。また、ヨーロッパ特許第２１２８４８号、同第２１
１５４８号およびＳｈｕｄｏらのＣｈｅｍ．Ｐｈａｒ
ｍ．Ｂｕｌｌ．，第３４巻，第１２１頁（１９８６年）
は、ジ−ｔ−ブチルフェニル基を有する化合物類を開示
し、それらが喘息、アレルギーおよび乾癬等の治療に有
効であるとしている。しかしながら、今までに報告され
た化合物は、細胞分化誘導などの作用が十分でなくビタ
ミンＡ過剰症など毒性が強いため、臨床応用には至らな
かった。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、従来
に比べ優れた抗腫瘍作用および分化誘導作用を有する化
合物を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記目的に
鑑み鋭意検討した結果、新たに合成した化合物が上記目
的を達成できることを見出し、本発明を完成した。

【０００５】本発明は、下記式［１］

【０００６】

【０００７】（式中、Ｒ¹およびＲ²は同一または異なっ
て水素原子または炭素原子数１〜５のアルキル基を示
す。）で表される安息香酸誘導体およびその塩である。

【０００８】本発明において、アルキル基とは直鎖状ま
たは分枝鎖状のアルキル基であり、たとえばメチル基、
エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イ
ソブチル基、ペンチル基などである。また、本発明に係
る化合物の塩とは薬理学的に許容されるものを意味し、
たとえばカリウム、ナトリウム、マグネシウム、アンモ
ニアなどの無機塩基またはトリエチルアミンなどの有機
塩基との塩が挙げられる。

【０００９】本発明の化合物は、式［２］

【００１０】

【００１１】（式中、Ｒ¹は前記と同意義である。）で
表されるアセトフェノン酸誘導体と下記式［３］

【００１２】

【００１３】（式中、Ｒ²は前記と同意義である。）で
表されるホルミル誘導体とを水酸化バリウムの存在下反
応させて製造することができる。

【００１４】本発明化合物の投与方法としては非経口投
与、経口投与が挙げられる。その投与剤形は、非経口投
与の場合は注射剤であり、経口投与の場合には錠剤、顆
粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁剤から選ば
れるいずれか一つの剤形である。これらの投与剤形は、
患者の症状、年齢および治療の目的に応じて適宜選択す
ることができる。各種剤形の製剤の製造においては、常
用の賦形剤（たとえば、結晶セルロース、デンプン、乳
糖、マンニトールなど）、結合剤（たとえば、ヒドロキ
シプロピルセルロース、ポリビニルピロリドンなど）、
滑沢剤（たとえば、ステアリン酸マグネシウム、タルク
など）、崩壊剤（たとえば、カルボキシメチルセルロー
スカルシウムなど）などを用いることができ、通常の製
造法（たとえば、第１２改正日本薬局方に規定する方
法）を用いることができる。

【００１５】投与量は、成人を治療する場合で０．１〜
５００ｍｇであり、これを１日１〜３回に分けて投与す
る。この投与量は、患者の年齢、体重および症状によっ
て適宜増減することができる。

【００１６】

【発明の効果】本発明の化合物は、抗腫瘍作用および分
化誘導作用を有するため悪性腫瘍増殖の予防および治療
に有用である。

【００１７】

【実施例】以下、実施例および試験例を挙げて本発明を
更に詳細に説明する。 実施例１ ３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ヒドロキシアセトフェノ
ン４．５ｇ（１８．３ｍｍｏｌ）および４−ホルミル安
息香酸メチルを１００ｍｌの無水エタノールに溶かし、
乾燥した水酸化バリウムを６ｇ加え、攪拌しながら１０
時間加熱還流した。反応液を冷却後、水酸化ナトリウム
２ｇを２０ｍｌの水に溶かした溶液を加え、攪拌しなが
ら２時間加熱還流した。反応液を冷却後、塩酸でｐＨ５
〜６に調製し、減圧下エタノールを留去した。残渣に１
００ｍｌの水を加えて十分に攪拌し、固体を濾取し、乾
燥後エタノールで結晶させ、淡黄色結晶の４−［３−
（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）
−３−オキソ−１−プロペニル］安息香酸４．５ｇを得
た。

【００１８】ｍｐ ２２２〜２２４℃ 元素分析：Ｃ₂₄Ｈ₂₈Ｏ₄＝３８０．４６ 計算値（％）：Ｃ ７５．７５，Ｈ ７．４２ 実測値（％）：Ｃ ７５．７３，Ｈ ７．３８¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆） δｐｐｍ：１．４２
（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ），７．５２−８．００（ｍ，
８Ｈ，Ａｒ−Ｈ） ＭＳ ｍ／ｅ： ３８０（Ｍ⁺，３０），３６５（Ｍ⁺−ＣＨ₃，１０
０），２３３（６） ＩＲ（ＫＢｒ） ν（ｃｍ^-1）： ３６２０，２９６０，１７８０，１７５５，１６０５，
１５７０，１４２０，１３２０，１２９０，１２１０，
８４５，７８０

【００１９】実施例２ ３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−メトキシアセトフェノン
３．０ｇ（１１ｍｍｏｌ）および４−ホルミル安息香酸
メチル１．８８ｇ（１１ｍｍｏｌ）を４０ｍｌの無水メ
タノールおよび５ｍｌの２０％ナトリウムメトキシド溶
液に加え、室温で４時間攪拌後、一夜放置した。反応液
に水１０ｍｌを加えて室温で一夜攪拌した。塩酸でｐＨ
７にしてから減圧下で大部分のメタノールを留去し、再
び塩酸でｐＨ２〜３にして析出した固体を濾取し、エタ
ノールで再結晶して４−［３−（３，５−ジ−ｔ−ブチ
ル−４−メトキシフェニル）−３−オキソ−１−プロペ
ニル］安息香酸３．８ｇを得た。

【００２０】ｍｐ １９２〜１９４℃ 元素分析：Ｃ₂₅Ｈ₃₀ＮＯ₄＝３９４．４９ 計算値（％）：Ｃ ７６．１１，Ｈ ７．６７ 実測値（％）：Ｃ ７５．７５，Ｈ ７．５９ ＭＳ ｍ／ｅ：３９４（Ｍ⁺，１０），３７８（１
２），２６１（５０），２４７（１００），１４９（９
９）

【００２１】実施例３ 実施例１と同様に、３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ヒド
ロキシアセトフェノン０．６５ｇ（２．６２ｍｍｏｌ）
および２−ホルミル安息香酸メチル０．４３ｇ（２．６
２ｍｍｏｌ）から２−［３−（３，５−ジ−ｔ−ブチル
−４−ヒドロキシフェニル）−３−オキソ−１−プロペ
ニル］安息香酸の粗生性物０．８９ｇを得、これをエタ
ノールで結晶化させて黄色結晶０．７２ｇを得た。

【００２２】ｍｐ １０５〜１０６℃ 元素分析：Ｃ₂₄Ｈ₂₈Ｏ₄＝３８０．４６ 計算値（％）：Ｃ ７５．７５，Ｈ ７．４２ 実測値（％）：Ｃ ７５．６０，Ｈ ６．９３¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆） δｐｐｍ：１．４０
（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ），５．３８，６．０６（ｍ，
２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），７．６８（ｍ，６Ｈ，Ａｒ−Ｈ） ＭＳ ｍ／ｅ：３８０（Ｍ⁺，６７），２３３（１０
０） ＩＲ（ＫＢｒ） ν（ｃｍ^-1）：３５９０，２９６０，
２９１０，１７６０，１６６０，１５８５，１４２０，
１３５０，１２３０，８８０，７８０，７４５

【００２３】

【００２４】試験例１［各種癌細胞増殖阻害作用］ マウスＰ３８８白血病細胞（２００００ｃｅｌｌｓ／ｍ
ｌ）、ヒト鼻咽頭癌ＫＢ細胞（１００００ｃｅｌｌｓ／
ｍｌ）、ヒト小細胞肺癌Ｈ６９細胞（５００００ｃｅｌ
ｌｓ／ｍｌ）、ヒト卵巣癌Ａ２７８０細胞（２００００
ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）またはヒト膀胱癌ＨＴ１１９７細胞
（３００００ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）を１０％ウシ胎児血清
含有ＲＰＭＩ−１６４０培養液またはＭＥＭ培養液に懸
濁後、その０．１ｍｌを９６穴の培養用プレートに添加
し、３７℃、５％炭酸ガス培養器中で２４時間培養し
た。最終０．５％のＤＭＳＯで溶解した種々濃度の実施
例２で得られた化合物を０．１ｍｌ添加し、更に４８、
７２、１２０、７２または９６時間培養した。培養後、
ＰＢＳに溶解したＭＴＴ［３−（４，５−ジメチルチア
ゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウ
ムブロマイド］試薬を添加し更に４時間培養した。培養
終了後、培地を除去し、ＤＭＳＯ１５０μｌを加え、イ
ムノリーダーＮＪ２０００で５４０ｎｍの吸光度を測定
した。コントロールの吸光度に対する薬物処理群の吸光
度の比を求め、Ｐｒｏｂｉｔ法により５０％阻害濃度
（ＩＣ₅₀）を計算した。結果を表１に示した。

【００２５】

【表１】

【００２６】試験例２［マウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ２６の
ｉｎ ｖｉｖｏでの増殖に対する作用］ ２．５×１０⁶ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製したＣｏｌｏｎ
２６の細胞浮遊液０．２ｍｌをＣＤＦ１マウス背部皮下
に移植した。実施例２で得られた化合物は５％アラビア
ゴムに懸濁し、移植後３日目より１日置きに４回経口投
与した。移植後１０日目に腫瘍の大きさを測定し、以下
の式により腫瘍体積を算出した。

【００２７】

【数１】

【００２８】コントロールに対する薬物投与群の腫瘍体
積の割合から抑制率を算出し、表２に示した。

【００２９】

【表２】

【００３０】試験例３［ラット軟骨肉腫のｉｎ ｖｉｖ
ｏでの増殖に対する作用］ 無菌条件下で採取した肉腫細胞をラット腋窩部皮下に移
植した。翌日より各濃度の実施例２で得られた化合物を
１日おきに４回経口投与した。移植後１０日目に腫瘍を
摘出し、腫瘍重量を測定して抑制率を算出した。結果を
表３に示した。

【００３１】

【表３】

【００３２】試験例４［マウスＬｅｗｉｓ肺癌のｉｎ
ｖｉｖｏでの増殖に対する作用］ 無菌条件下で採取した肺癌細胞をマウス腋窩部皮下に移
植した。翌日より各濃度の実施例２で得られた化合物を
１日おきに４回経口投与した。移植後１０日目に腫瘍を
摘出し、腫瘍重量を測定して抑制率を算出した。結果を
表４に示した。

【００３３】

【表４】

【００３４】試験例５ ［マウスＢ１６メラノーマのｉ
ｎ ｖｉｖｏでの増殖に対する作用］ 無菌条件下で採取したメラノーマ細胞をマウス腋窩部皮
下に移植した。翌日より各濃度の実施例２で得られた化
合物を１日おきに３回経口投与した。移植後１０日目に
腫瘍を摘出し、腫瘍重量を測定して抑制率を算出した。
結果を表５に示した。

【００３５】

【表５】

【００３６】試験例６［マウスＳ１８０肉腫のｉｎ ｖ
ｉｖｏでの増殖に対する作用］ 無菌条件下で採取した肉腫細胞をマウス腋窩部皮下に移
植した。翌日より各濃度の実施例２で得られた化合物を
１日おきに３回経口投与した。移植後１０日目に腫瘍を
摘出し、腫瘍重量を測定して抑制率を算出した。結果を
表６に示した。

【００３７】

【表６】

【００３８】試験例７［Ｍ５０７６肉腫移植マウスの生
存期間に対する作用］ 無菌条件下で採取した肉腫細胞をマウス腋窩部皮下に移
植した。翌日より各濃度の実施例２で得られた化合物を
１日おきに４回経口投与した。各投与マウスの生存期間
を測定し、コントロールに対する薬物投与群の延命効果
Ｔ／Ｃ％を以下の式により算出した。結果を表７に示し
た。

【００３９】

【数２】

【００４０】

【表７】

【００４１】試験例８［分化誘導活性］ コリンズらの方法（Ｃａｎｓｅｒ．Ｒｅｓ．，第４２
巻，第４４５〜４４９頁，１９８２年）に従って行っ
た。ＨＬ−６０細胞１×１０⁵個／ｍｌを１０％の牛胎
仔血清添加ＲＰＭＩ−１６４０培地、ペニシリン１００
Ｕ／ｍｌ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍｌ、３７
℃、５％ＣＯ₂で培養した。実施例１で得られた化合物
およびオールトランスビタミンＡ酸は１％および０．１
％のエタノール溶液とし、対照としては０．１％のエタ
ノール溶液を用いた。培養開始時に、薬剤をそれぞれの
濃度になるように添加し、５日間培養後、ＮＢＴ還元能
を指標として分化誘導活性を測定した。すなわち、培養
終了後、細胞を１０００ｒｐｍで遠心分離して回収し、
０．１％ＮＢＴ溶液０．５ｍｌと１２−Ｏ−テトラデカ
ノイルフォルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）２０
０ｎｇを加え、３７℃で６０分間反応させた。反応後の
細胞を遠心分離して集め、塗沫標本を作製、Ｗｒｉｇｈ
ｔ−Ｇｉｅｍｓａ染色液で染色した。顕微鏡下で１検体
につき２００個の細胞を観察し、その内細胞質に青紫色
のホルマザン沈澱のあるものをＮＢＴ還元能陽性細胞し
とた。

【００４２】その結果、ネガティブコントロール群では
１００％の細胞が未熟な細胞であり、ポジティブコント
ロールのビタミンＡ酸では１×１０^-6Ｍでの分化率が９
５〜１００％であり、本発明に係る化合物の５０％分化
率（ＥＣ₅₀）は７．１×１０^-7Ｍであった。

【００４３】試験例９［癌遺伝子の発現に対するｉｎ
ｖｉｔｒｏ試験］ 既知の方法（Ｙ．Ｌｕ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．，第２６３巻，第４８９１〜４８９４頁，１９
８８年）に従い、無菌条件下で１０％の牛胎仔血清添加
ＲＰＭＩ−１６４０培地、ペニシリン１００Ｕ／ｍｌ、
ストレプトマイシン１００μｇ／ｍｌ、５％ＣＯ₂、３
７℃で培養したＨＬ−６０細胞に異なる濃度の実施例１
で得られた化合物で処理した。２、６および１２時間後
にそれぞれ細胞を採取し、その細胞をイソチオシアン酸
グアニジン（ＧＩＴ）溶液［６Ｍイソチオシアン酸グア
ニジン、１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ７）、０．
５％ザルコシル、０．１Ｍ２−メルカプトエタノール］
に懸濁させ、振盪して細胞を破壊した。５．７Ｍ塩化セ
シウム−０．１ＭＥＤＴＡ−Ｎａ（ｐＨ７．５）に上記
細胞ライゼートを重層し、１７４０００Ｇ，２０℃で１
６時間密度勾配遠心をした。無色透明な沈澱を全ＲＮＡ
とし、それをＤＥＰＣで処理した水の中に溶解させ、６
５℃で変性後、Ｏｌｉｇｏ−ｄＴセルロースカラムを通
し緩衝溶液でＯＤ（２６０ｎｍ）が０になるまで洗浄し
てからｍＲＮＡを溶出した。それをエタノールで沈澱さ
せた後ＤＭＳＯで変性させ、１％アガロースゲル電気泳
動して、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ転移法でｍＲＮＡをナイロン
膜上に固定した。ニックトランスレーションでＤＮＡプ
ローブを標識した。³²Ｐで標識したプローブをｍＲＮＡ
に結合させ、オートラジオグラフィー法で癌遺伝子の発
現状態を測定した。

【００４４】その結果を図１に示した。本発明化合物が
コントロールと比較して癌遺伝子発現を顕著に抑制する
ことが判明した。

【００４５】試験例１０ マウス骨髄細胞を用いた小核形成試験により、本発明化
合物の抗突然変異作用を評価した。小核形成はシクロフ
ォスファミド、ＤＭＢＡにより誘導し、本発明に係る化
合物の拮抗作用を観察した。体重１８〜２２ｇのマウス
を１群５匹とし、実施例１で得られた化合物５０ｍｇ／
ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを経口で１日１回４日間連
続投与した。４日目の投与終了後、シクロフォスファミ
ド１００ｍｇ／ｋｇまたはＤＭＢＡ２５ｍｇ／ｋｇを腹
腔内注射して小核形成誘導し、２４時間後常法により小
核試験を行った。表８および９に示されるように、本発
明化合物は陽性対照群に比較し小核形成が有意に抑制さ
れた。

【００４６】

【表８】

【００４７】

【表９】

【００４８】試験例１１［マウス耳介腫脹モデルを用い
た抗プロモーター作用］ ヘッカーらの方法（Ｎａｔｕｒｅｍｉｓｓｅｎｓｃｈａ
ｆｅｔｅｎ，第５４巻，第２８２頁，１９６７年）に従
って行った。

【００４９】体重１８〜２２ｇのマウスを無作意にグル
ープわけし、１群７匹とした。実施例１で得られた化合
物５０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを経口で１日
１回４日間連続投与し、クロトン油を塗布後両耳に孔を
開けた。塗布した耳と塗布しない耳の腫脹の差を指標と
した。

【００５０】その結果、対照群の両耳の腫脹の差は２
５．３±３．４ｍｇ（Ｐ＜０．０５）で、本発明化合物
群の場合は２０．８ｍｇ±４．８ｍｇ（５０ｍｇ／ｋ
ｇ）と１９．９±３．９ｍｇ（１００ｍｇ／ｋｇ）（Ｐ
＜０．０５）であった。従って、本発明化合物がマウス
の耳介腫脹に対する抑制作用を持っていると判断した。

【００５１】試験例１２［ラットの軟骨肉腫モデルを用
いた腫瘍成長に対する作用］ 軟骨肉腫（１：３希釈液、０．５ｍｌ／匹）をラットの
皮下に接種後、２日毎に胃に直接投与法で実施例１で得
られた化合物５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇを９週
間連投した。７週目にラットの腫瘍の重さを測定した結
果、５ｍｇ／ｋｇと１０ｍｇ／ｋｇはそれぞれ対照群に
対する腫瘍抑制率が９８．７％，１００％であった。こ
の結果は本発明化合物がラット可移植性軟骨肉腫に対し
て顕著な抑制作用を有することを示した。

【００５２】試験例１３ ＤＭＢＡおよびクロトン油によるマウス皮膚乳頭腫をモ
デルとして使用し、本発明に係る化合物の化学発ガン物
質に対する拮抗作用を評価した。

【００５３】体重１８〜２２ｇのマウスを無作意に１群
３０匹３群にわけ、８％硫化ナトリウム水溶液で背部脱
毛した。１週間飼育後、脱毛したところに１回につき１
５０ｎｇＤＭＢＡを含んだ０．２ｍｌのジメチルベンゾ
アントラセン−アセトン溶液を塗布し、週２回で２週間
投与した。３週間目から０．２５％クロトン油−アセト
ン溶液を０．２ｍｌ／回塗布し、週２回で１２週間投与
した。ＤＭＢＡを塗布し始めた第１週から５０ｍｇ／ｋ
ｇ、２５ｍｇ／ｋｇで実施例１で得られた化合物をマウ
スの背部に直接投与した。本発明化合物を２日毎に１
回、１２週間投与し、各週の乳頭腫が発現した動物数と
各々の動物に発現した腫瘍数を記録した。

【００５４】その結果、本発明化合物はコントロールと
比較して顕著な抑制作用を有し、その活性は投与依存的
であった（図２）。

【００５５】

【図面の簡単な説明】

【図１】試験例９におけるオートラジオグラフィー法で
の癌遺伝子の発現状態を示す。

【図２】試験例１３における試験結果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ▼チュー▲ 鳳鳴 中華人民共和国北京市宣武区先農壇街１号 中国医学科学院葯物研究所内 (72)発明者 何 暁慶 中華人民共和国北京市宣武区先農壇街１号 中国医学科学院葯物研究所内 (72)発明者 夏 麗娟 中華人民共和国北京市宣武区先農壇街１号 中国医学科学院葯物研究所内 (72)発明者 亀尾 一弥 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内 (72)発明者 中池 司郎 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式 （式中、Ｒ¹およびＲ²は同一または異なって水素原子ま
   たは炭素原子数１〜５のアルキル基を示す。）で表され
   る安息香酸誘導体およびその塩。