JPH07194A - 無細胞タンパク合成系によるタンパクの製造方法 - Google Patents
無細胞タンパク合成系によるタンパクの製造方法Info
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- JPH07194A JPH07194A JP14324293A JP14324293A JPH07194A JP H07194 A JPH07194 A JP H07194A JP 14324293 A JP14324293 A JP 14324293A JP 14324293 A JP14324293 A JP 14324293A JP H07194 A JPH07194 A JP H07194A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 無細胞抽出液を含む無細胞タンパク合成系を
用いたタンパクの製造方法において、フォスファターゼ
阻害剤又はグルタチオン合成酵素阻害剤の存在下にタン
パク合成を行うことを特徴とする方法。 【効果】 従来の約２倍の効率でタンパクを合成するこ
とができる。
用いたタンパクの製造方法において、フォスファターゼ
阻害剤又はグルタチオン合成酵素阻害剤の存在下にタン
パク合成を行うことを特徴とする方法。 【効果】 従来の約２倍の効率でタンパクを合成するこ
とができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、無細胞タンパク合成系
を用いたタンパクの製造方法に関する。ここで無細胞タ
ンパク合成系とは、 mＲＮＡの情報を読み取ってタンパ
クやポリペプチドを合成する無細胞翻訳系、並びにＤＮ
Ａを鋳型としてＲＮＡを合成する無細胞転写系と無細胞
翻訳系の両者を含む系のいずれをも意味するものとす
る。
を用いたタンパクの製造方法に関する。ここで無細胞タ
ンパク合成系とは、 mＲＮＡの情報を読み取ってタンパ
クやポリペプチドを合成する無細胞翻訳系、並びにＤＮ
Ａを鋳型としてＲＮＡを合成する無細胞転写系と無細胞
翻訳系の両者を含む系のいずれをも意味するものとす
る。
【０００２】
【従来の技術】無細胞タンパク合成系を用いたタンパク
やポリペプチドの製造方法として、小麦胚芽、ウサギ網
状赤血球、大腸菌等の抽出液を用いる方法が知られてい
る。しかしながら、それらの抽出液を用いて、量的に十
分なタンパクを合成することは難しく、タンパクの合成
量を増加させる為の種々の工夫がなされてきた。その一
つとして、特開平１−５０３１１号公報には、 mＲＮ
Ａ、ＡＴＰ、ＧＴＰ及びアミノ酸を基質として含んでい
るリボソームの無細胞例えばタンパク合成系において、
最終生産物であるＡＭＰ、ＧＤＰ、ピロリン酸塩、無機
リン酸及び合成されたポリペプチドを含んでいる翻訳生
産物を反応系から取り出し、それと同時にアミノ酸、Ａ
ＴＰ及びＧＴＰの形態の基質を、それらの初期濃度を維
持するために反応系へ送り出すポリペプチドの製造方法
が記載されている。この方法によれば、従来１時間程度
でポリペプチドの合成が停止してしまうものが、４０時
間以上に渡って反応が継続し、合成されるポリペプチド
の収量も大きく増加することが示されている。また、こ
の改良法として、特開平４−２００３９０号公報には、
基質の送液系や反応系中の気相の介在を最小限に制御す
ることにより、反応槽内の圧力の変動を減らして基質の
送液を安定化して、ポリペプチドを合成する方法が記載
されている。更に、反応系より反応生成物をとりだす限
外濾過膜を反応系の側面もしくは上面に置くことによ
り、下面に置くのに比べて改良が図られることも合せて
記載されている。しかしながら、これらの方法は、高価
な機器と厳密な送液条件を必要とし、また、連続的に送
り込まれる基質が、タンパク合成反応に十分に利用され
ずに排出されてしまうという問題もあった。
やポリペプチドの製造方法として、小麦胚芽、ウサギ網
状赤血球、大腸菌等の抽出液を用いる方法が知られてい
る。しかしながら、それらの抽出液を用いて、量的に十
分なタンパクを合成することは難しく、タンパクの合成
量を増加させる為の種々の工夫がなされてきた。その一
つとして、特開平１−５０３１１号公報には、 mＲＮ
Ａ、ＡＴＰ、ＧＴＰ及びアミノ酸を基質として含んでい
るリボソームの無細胞例えばタンパク合成系において、
最終生産物であるＡＭＰ、ＧＤＰ、ピロリン酸塩、無機
リン酸及び合成されたポリペプチドを含んでいる翻訳生
産物を反応系から取り出し、それと同時にアミノ酸、Ａ
ＴＰ及びＧＴＰの形態の基質を、それらの初期濃度を維
持するために反応系へ送り出すポリペプチドの製造方法
が記載されている。この方法によれば、従来１時間程度
でポリペプチドの合成が停止してしまうものが、４０時
間以上に渡って反応が継続し、合成されるポリペプチド
の収量も大きく増加することが示されている。また、こ
の改良法として、特開平４−２００３９０号公報には、
基質の送液系や反応系中の気相の介在を最小限に制御す
ることにより、反応槽内の圧力の変動を減らして基質の
送液を安定化して、ポリペプチドを合成する方法が記載
されている。更に、反応系より反応生成物をとりだす限
外濾過膜を反応系の側面もしくは上面に置くことによ
り、下面に置くのに比べて改良が図られることも合せて
記載されている。しかしながら、これらの方法は、高価
な機器と厳密な送液条件を必要とし、また、連続的に送
り込まれる基質が、タンパク合成反応に十分に利用され
ずに排出されてしまうという問題もあった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的
は、上記の従来技術の問題点を解決し、安定かつ簡便に
十分な量のタンパクを合成させることのできる、無細胞
タンパク合成系を用いたタンパクの製造方法を提供する
ことにある。
は、上記の従来技術の問題点を解決し、安定かつ簡便に
十分な量のタンパクを合成させることのできる、無細胞
タンパク合成系を用いたタンパクの製造方法を提供する
ことにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】前記の目的を達成するた
めに、本発明者らは鋭意研究を重ね、無細胞タンパク合
成系のＡＴＰ等の基質エネルギーが、タンパク合成反応
以外で消費されることを抑制することにより、タンパク
合成反応の効率を高くすることができることを見出し、
本発明を完成させるに至った。本発明は、無細胞抽出液
を含む無細胞タンパク合成系を用いたタンパクの製造方
法において、フォスファターゼ阻害剤又はグルタチオン
合成酵素阻害剤の存在下にタンパク合成を行うことを特
徴とする方法である。本発明方法では、基質エネルギー
の殆どがタンパク合成に有効に利用され、タンパク合成
以外の反応により消費されることが抑制されるため、タ
ンパクの合成量を顕著に高くすることができる。本発明
に使用する無細胞抽出液としては、例えば、小麦胚芽抽
出液及び大腸菌細胞抽出液等が挙げられる。この明細書
において、タンパク合成活性は、合成された酵素タンパ
クの酵素量（１unit：１分間に１μmol の基質を変化さ
せる酵素量）で表す。
めに、本発明者らは鋭意研究を重ね、無細胞タンパク合
成系のＡＴＰ等の基質エネルギーが、タンパク合成反応
以外で消費されることを抑制することにより、タンパク
合成反応の効率を高くすることができることを見出し、
本発明を完成させるに至った。本発明は、無細胞抽出液
を含む無細胞タンパク合成系を用いたタンパクの製造方
法において、フォスファターゼ阻害剤又はグルタチオン
合成酵素阻害剤の存在下にタンパク合成を行うことを特
徴とする方法である。本発明方法では、基質エネルギー
の殆どがタンパク合成に有効に利用され、タンパク合成
以外の反応により消費されることが抑制されるため、タ
ンパクの合成量を顕著に高くすることができる。本発明
に使用する無細胞抽出液としては、例えば、小麦胚芽抽
出液及び大腸菌細胞抽出液等が挙げられる。この明細書
において、タンパク合成活性は、合成された酵素タンパ
クの酵素量（１unit：１分間に１μmol の基質を変化さ
せる酵素量）で表す。
【０００５】以下、本発明に使用する無細胞抽出液の調
製から無細胞タンパク合成系におけるタンパク合成活性
の測定までの各段階について詳細に説明する。 ｉ）無細胞抽出液の調製と抽出液の濃縮 無細胞抽出液の調製は、用いる材料に応じて異なるが、
通常のいかなる方法を用いても良い。特に小麦胚芽を用
いる場合は、臭化メチル処理されていない原料小麦の胚
芽を用いる事が望ましい。 ii) 無細胞タンパク合成反応 続いて、タンパク合成反応を実施するが、合成反応は、
バッチ法、連続法等通常のいかなる方法を用いても良
い。反応液には、無細胞抽出液の他、目的とするタンパ
クの構成アミノ酸、目的とするタンパクをコードするＤ
ＮＡ、ＲＮＡ、ＲＮＡポリメラーゼ、緩衝剤、ＡＴＰ、
ＧＴＰ等のエネルギー源、クレアチンホスフェート、ク
レアチンホスホキナーゼ、フォスフォエノールピルビン
酸、ピルビン酸キナーゼ等のＡＴＰ再生系、ＤＴＴ（ジ
チオスレイトール）、スペルミジン、スペルミン等の安
定化剤、ＲＮase 阻害剤等を適量加える。ＡＴＰ、ＧＴ
Ｐ等の基質エネルギー物質、特にＡＴＰの濃度は0.１〜
3.０mMが適当であり、1 mMが最も好ましい。反応は、用
いる無細胞抽出液及び目的とするタンパクの種類等によ
り最適の温度で行なわれ、一般に２０〜４０℃が適当で
ある。
製から無細胞タンパク合成系におけるタンパク合成活性
の測定までの各段階について詳細に説明する。 ｉ）無細胞抽出液の調製と抽出液の濃縮 無細胞抽出液の調製は、用いる材料に応じて異なるが、
通常のいかなる方法を用いても良い。特に小麦胚芽を用
いる場合は、臭化メチル処理されていない原料小麦の胚
芽を用いる事が望ましい。 ii) 無細胞タンパク合成反応 続いて、タンパク合成反応を実施するが、合成反応は、
バッチ法、連続法等通常のいかなる方法を用いても良
い。反応液には、無細胞抽出液の他、目的とするタンパ
クの構成アミノ酸、目的とするタンパクをコードするＤ
ＮＡ、ＲＮＡ、ＲＮＡポリメラーゼ、緩衝剤、ＡＴＰ、
ＧＴＰ等のエネルギー源、クレアチンホスフェート、ク
レアチンホスホキナーゼ、フォスフォエノールピルビン
酸、ピルビン酸キナーゼ等のＡＴＰ再生系、ＤＴＴ（ジ
チオスレイトール）、スペルミジン、スペルミン等の安
定化剤、ＲＮase 阻害剤等を適量加える。ＡＴＰ、ＧＴ
Ｐ等の基質エネルギー物質、特にＡＴＰの濃度は0.１〜
3.０mMが適当であり、1 mMが最も好ましい。反応は、用
いる無細胞抽出液及び目的とするタンパクの種類等によ
り最適の温度で行なわれ、一般に２０〜４０℃が適当で
ある。
【０００６】本発明者らの研究により、従来の反応系を
充分に解析した結果以下の現象が明らかとなった。無細
胞抽出液中には、フォスファターゼ等の脱リン酸酵素
や、グルタチオン合成酵素等のＡＴＰを利用する酵素が
存在する。これらの酵素は、タンパク合成反応に競合し
て基質エネルギーを分解したり消費したりする。この反
応はきわめて活性が高く、基質エネルギーを大量に消費
するため、目的のタンパク合成反応が十分に進行しな
い。この対策として、タンパク合成反応液中の基質エネ
ルギー物質の濃度を高める方法が考えられる。しかし、
無細胞タンパク合成の反応系において基質エネルギー物
質には至適濃度があり、この至適濃度より高くすると、
逆に基質エネルギー物質の活性が大きく阻害されること
が知られており、有効な方法ではない。そこで、タンパ
ク合成反応に競合して基質エネルギーを消費する酵素を
阻害する事が有効ではないかと考えさらに研究を進め
た。その結果、フォスファターゼの阻害剤、若しくはグ
ルタチオン合成酵素の阻害剤を反応系に添加し、これら
の阻害剤の存在下に反応を行うことにより、基質エネル
ギーがタンパク合成反応に有効に利用され、タンパク合
成活性を高めることが確認された。このように本発明に
おいてタンパク合成活性が高くなる主な理由は、反応系
中の基質エネルギーが、目的とするタンパク合成に有効
に利用され、競合する他の反応には利用されにくくなる
ためであると考えられる。
充分に解析した結果以下の現象が明らかとなった。無細
胞抽出液中には、フォスファターゼ等の脱リン酸酵素
や、グルタチオン合成酵素等のＡＴＰを利用する酵素が
存在する。これらの酵素は、タンパク合成反応に競合し
て基質エネルギーを分解したり消費したりする。この反
応はきわめて活性が高く、基質エネルギーを大量に消費
するため、目的のタンパク合成反応が十分に進行しな
い。この対策として、タンパク合成反応液中の基質エネ
ルギー物質の濃度を高める方法が考えられる。しかし、
無細胞タンパク合成の反応系において基質エネルギー物
質には至適濃度があり、この至適濃度より高くすると、
逆に基質エネルギー物質の活性が大きく阻害されること
が知られており、有効な方法ではない。そこで、タンパ
ク合成反応に競合して基質エネルギーを消費する酵素を
阻害する事が有効ではないかと考えさらに研究を進め
た。その結果、フォスファターゼの阻害剤、若しくはグ
ルタチオン合成酵素の阻害剤を反応系に添加し、これら
の阻害剤の存在下に反応を行うことにより、基質エネル
ギーがタンパク合成反応に有効に利用され、タンパク合
成活性を高めることが確認された。このように本発明に
おいてタンパク合成活性が高くなる主な理由は、反応系
中の基質エネルギーが、目的とするタンパク合成に有効
に利用され、競合する他の反応には利用されにくくなる
ためであると考えられる。
【０００７】本発明に使用されるフォスファターゼ阻害
剤の例としては、グリコール酸、グリセリン酸等のα−
ヒドロキシカルボン酸、又はフォスファターゼに対する
抗体が挙げられる。中でもグリコール酸が、価格や簡便
性の面から望ましい。またグルタチオン合成酵素阻害剤
の例としては、グルタチオン（ＧＳＨ）やグルタチオン
合成酵素に対する抗体等が挙げられる。中でもグルタチ
オンが、価格や簡便性の面から望ましい。フォスファタ
ーゼに対する抗体やグルタチオン合成酵素に対する抗体
は、通常の方法により、適当な動物をフォスファターゼ
又はグルタチオン合成酵素により免疫することにより製
造されたものを使用することができる。本発明において
無細胞タンパク合成系に添加されるフォスファターゼ阻
害剤の量は、通常２〜７０mM、好ましくは５〜３０mMで
ある。またグルタチオン合成酵素阻害剤の量は、通常２
〜５０mM、好ましくは５〜２０mMである。フォスファタ
ーゼ阻害剤又はグルタチオン合成酵素阻害剤の量が上記
範囲以外では目的とするタンパク合成活性の向上が十分
でない。
剤の例としては、グリコール酸、グリセリン酸等のα−
ヒドロキシカルボン酸、又はフォスファターゼに対する
抗体が挙げられる。中でもグリコール酸が、価格や簡便
性の面から望ましい。またグルタチオン合成酵素阻害剤
の例としては、グルタチオン（ＧＳＨ）やグルタチオン
合成酵素に対する抗体等が挙げられる。中でもグルタチ
オンが、価格や簡便性の面から望ましい。フォスファタ
ーゼに対する抗体やグルタチオン合成酵素に対する抗体
は、通常の方法により、適当な動物をフォスファターゼ
又はグルタチオン合成酵素により免疫することにより製
造されたものを使用することができる。本発明において
無細胞タンパク合成系に添加されるフォスファターゼ阻
害剤の量は、通常２〜７０mM、好ましくは５〜３０mMで
ある。またグルタチオン合成酵素阻害剤の量は、通常２
〜５０mM、好ましくは５〜２０mMである。フォスファタ
ーゼ阻害剤又はグルタチオン合成酵素阻害剤の量が上記
範囲以外では目的とするタンパク合成活性の向上が十分
でない。
【０００８】以下、比較例及び実施例によって本発明を
具体的に説明する。
具体的に説明する。
【実施例１及び比較例１】 小麦胚芽抽出液の調製 K. MarucとB. Dudock の方法(Nucleic Acids Research
１巻, 11号, 1385-1397 項、1974年）に従って小麦胚芽
抽出液の調製を行なった。この際、抽出液並びに抽出液
の精製に用いるゲル濾過の緩衝液に、１０％程度のグリ
セリンを添加してもよい。 無細胞タンパク合成反応 比較例１の反応液は、60 mM HEPES buffer（ＫＯＨにて
pＨ7.６に調節）、1mM ＡＴＰ、100 μＭ ＧＴＰ，2
mM ＤＴＴ、12mMクレアチンリン酸, 40μｇ／ｍl ク
レアチンホスホキナーゼ, 0.1 mM スペルミジン、0.01
mM スペルミン、160 μＭアミノ酸、1.０Ｕ／μl ＲＮ
ase 阻害剤、１１ nｇ／μl ＤＨＦＲ (ジヒドロフォレ
ートレダクターゼ) 、ＲＮＡ、83 mM Ｋ+ 、2.8 mM Ｍ
ｇ++、小麦胚芽抽出液５μｌの組成からなり、全量を１
５μｌとした。ただし、Ｋ+ 、Ｍｇ++の濃度は、小麦胚
芽抽出液からの持込みも合せた値で表した。反応は30℃
で１時間行なった。実施例１の反応液は、上記比較例１
の反応液中にグリコール酸を最終濃度10 mM になるよう
に添加したものを使用した。 タンパク合成活性の測定 反応終了後の反応液より5.５μｌをとり、次の反応条件
にてＤＨＦＲの活性を測定した。50 mM リン酸ナトリウ
ム緩衝液(pH7.0) 、500 μＭジヒドロフォレート、60μ
Ｍ β−ＮＡＤＰＨ、12 mM ２−メルカプトエタノー
ル。37℃において反応液中の340nm の吸光度の減少を測
定した。下記表１に結果を示す。
１巻, 11号, 1385-1397 項、1974年）に従って小麦胚芽
抽出液の調製を行なった。この際、抽出液並びに抽出液
の精製に用いるゲル濾過の緩衝液に、１０％程度のグリ
セリンを添加してもよい。 無細胞タンパク合成反応 比較例１の反応液は、60 mM HEPES buffer（ＫＯＨにて
pＨ7.６に調節）、1mM ＡＴＰ、100 μＭ ＧＴＰ，2
mM ＤＴＴ、12mMクレアチンリン酸, 40μｇ／ｍl ク
レアチンホスホキナーゼ, 0.1 mM スペルミジン、0.01
mM スペルミン、160 μＭアミノ酸、1.０Ｕ／μl ＲＮ
ase 阻害剤、１１ nｇ／μl ＤＨＦＲ (ジヒドロフォレ
ートレダクターゼ) 、ＲＮＡ、83 mM Ｋ+ 、2.8 mM Ｍ
ｇ++、小麦胚芽抽出液５μｌの組成からなり、全量を１
５μｌとした。ただし、Ｋ+ 、Ｍｇ++の濃度は、小麦胚
芽抽出液からの持込みも合せた値で表した。反応は30℃
で１時間行なった。実施例１の反応液は、上記比較例１
の反応液中にグリコール酸を最終濃度10 mM になるよう
に添加したものを使用した。 タンパク合成活性の測定 反応終了後の反応液より5.５μｌをとり、次の反応条件
にてＤＨＦＲの活性を測定した。50 mM リン酸ナトリウ
ム緩衝液(pH7.0) 、500 μＭジヒドロフォレート、60μ
Ｍ β−ＮＡＤＰＨ、12 mM ２−メルカプトエタノー
ル。37℃において反応液中の340nm の吸光度の減少を測
定した。下記表１に結果を示す。
【０００９】
【実施例２及び比較例２】反応液中にグリコール酸を最
終濃度20 mM になるように添加した他は実施例１及び比
較例１と同様の方法により行なった。表１に結果を示
す。
終濃度20 mM になるように添加した他は実施例１及び比
較例１と同様の方法により行なった。表１に結果を示
す。
【実施例３及び比較例３】反応液中にグルタチオン（Ｇ
ＳＨ）を最終濃度10mMになるように添加した他は実施例
１及び比較例１と同様の方法により行なった。表１に結
果を示す。
ＳＨ）を最終濃度10mMになるように添加した他は実施例
１及び比較例１と同様の方法により行なった。表１に結
果を示す。
【実施例４及び比較例４】反応液中にグルタチオン（Ｇ
ＳＨ）を最終濃度20mMになるように添加した他は実施例
１及び比較例１と同様の方法により行なった。表１に結
果を示す。
ＳＨ）を最終濃度20mMになるように添加した他は実施例
１及び比較例１と同様の方法により行なった。表１に結
果を示す。
【００１０】
【表１】 反応液中の無細胞抽出液の 倍率 タンパク合成活性 (m units/ml) （比較例を１とする） 比較例１ ２５３ １ 実施例１ ４３４ 1.７ 比較例２ ３７３ １ 実施例２ ７５５ 2.０ 比較例３ ２５３ １ 実施例３ ６２４ 2.５ 比較例４ ３３２ １ 実施例４ ６８１ 2.１
【００１１】
【発明の効果】本発明の方法で無細胞タンパク合成反応
を実施すると、従来の約２倍の効率でタンパクを合成す
ることができる。
を実施すると、従来の約２倍の効率でタンパクを合成す
ることができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 山根 恒夫 愛知県名古屋市千種区若水３丁目22−１ (72)発明者 中野 秀雄 愛知県岩倉市東新町下境52 岩倉団地51棟 403号室
Claims (2)
- 【請求項１】 無細胞抽出液を含む無細胞タンパク合成
系を用いたタンパクの製造方法において、フォスファタ
ーゼ阻害剤又はグルタチオン合成酵素阻害剤の存在下に
タンパク合成を行うことを特徴とする方法。 - 【請求項２】 無細胞抽出液が小麦胚芽抽出液である請
求項１記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14324293A JP3434319B2 (ja) | 1993-06-15 | 1993-06-15 | 無細胞タンパク合成系によるタンパクの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14324293A JP3434319B2 (ja) | 1993-06-15 | 1993-06-15 | 無細胞タンパク合成系によるタンパクの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07194A true JPH07194A (ja) | 1995-01-06 |
| JP3434319B2 JP3434319B2 (ja) | 2003-08-04 |
Family
ID=15334207
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14324293A Ceased JP3434319B2 (ja) | 1993-06-15 | 1993-06-15 | 無細胞タンパク合成系によるタンパクの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3434319B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000036133A1 (fr) * | 1998-12-14 | 2000-06-22 | Riken | Procede de production d'un polypeptide dans un systeme de synthese proteique acellulaire |
| WO2002072890A1 (en) * | 2001-03-08 | 2002-09-19 | Invitrogen Corporation | Improved in vitro synthesis system |
| WO2003072796A1 (fr) * | 2002-02-28 | 2003-09-04 | Yaeta Endo | Solution de reaction pour la synthese de proteines sans cellule, procede de preparation de cette solution et procede de synthese de cette proteine utilisant cette solution |
| WO2005075660A1 (ja) * | 2004-02-03 | 2005-08-18 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | 改良された無細胞タンパク質合成用組成物 |
-
1993
- 1993-06-15 JP JP14324293A patent/JP3434319B2/ja not_active Ceased
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000036133A1 (fr) * | 1998-12-14 | 2000-06-22 | Riken | Procede de production d'un polypeptide dans un systeme de synthese proteique acellulaire |
| WO2002072890A1 (en) * | 2001-03-08 | 2002-09-19 | Invitrogen Corporation | Improved in vitro synthesis system |
| WO2003072796A1 (fr) * | 2002-02-28 | 2003-09-04 | Yaeta Endo | Solution de reaction pour la synthese de proteines sans cellule, procede de preparation de cette solution et procede de synthese de cette proteine utilisant cette solution |
| US7273615B2 (en) | 2002-02-28 | 2007-09-25 | Cellfree Sciences Co., Ltd. | Reaction solution for cell-free protein synthesis, method of preparing the same, and protein synthesis method using the same |
| WO2005075660A1 (ja) * | 2004-02-03 | 2005-08-18 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | 改良された無細胞タンパク質合成用組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3434319B2 (ja) | 2003-08-04 |
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