JPH07136197A - 薬剤の抗血栓効果の判定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 生体内に近似した血液流動条件下で薬剤の血
液凝抑固制効果を簡便に判定する方法を提供する。 【構成】 血液凝固性の高い材料又は生体組織による血
栓の形成に対する被験薬剤の抗血栓効果を判定する方法
であって、プローセルの壁面の一部を構成する水晶振動
子の表面に血液凝固性の強い材料又は生体組織の層を形
成し、該フローセルに被験薬剤を添加した血液を流通せ
しめ、そして血液流動下での前記血液凝固性の高い材料
又は生体組織の層への血液成分の吸着を、前記水晶発振
子の共振周波数の変化から検出することを特徴とする方
法。 【効果】 薬剤の血液凝固効果を血液流動条件下で判定
することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、血液の凝固性の高い材
料、例えば人工血管のごとき人工臓器や医薬用チューブ
のごとき医療用器機材料、あるいは血管等の生体組織へ
の血栓の付着に対する血液凝固抑制剤の抗血栓効果を判
定する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】生体中で用いる種々の医用材料、例えば
人工血管開発、および薬剤、例えば血液凝固に関連する
疾患の予防治療剤の開発において、血液凝固抑制効果を
判定することは非常に重要である。その場合特に生体内
と同様な流動条件下における判定が重要な要素となって
いる。従来、これらの判定法は血液が静置されている状
態でまたは生体中では起こり得ない乱流状態で、非生理
的条件下でまたは非生理的濃度の薬物により惹起される
血液成分の一つである血小板凝集測定を用いて判定を行
う方法だった。以上のように従来技術の判定法は生体内
と非常に異なる現象の測定により行われており、判定結
果が臨床結果と必ずしも一致しなかった。そこで、生体
内に非常に近い条件で、しかも、簡便に薬剤による血液
凝固性を判定する方法の開発が望まれている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的とすると
ころは、生体内に近似する流動条件下における薬剤によ
る血液凝固抑制効果を簡便に判定するための方法を提供
することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記の課
題を解決すべく種々検討した結果、血液凝固性の高い材
料または生体組織を水晶振動子の表面に付着せしめ、そ
の表面に血液を流動させた場合に、該血液凝固性の高い
材料または生体組織に吸着される血液成分の量を、該水
晶振動子の共振周波数の変化として測定することができ
ることを見出し、この知見に基いて本発明を完成した。

【０００５】従って本発明は、血液凝固性の高い材料又
は生体組織による血栓の形成に対する被験薬剤の抗血栓
効果を判定する方法であって、フローセルの壁面の一部
を構成する水晶振動子の表面に血液凝固性の高い材料又
は生体組織の層を形成し、該フローセルに被験薬剤を添
加した血液を流通せしめ、血液流動下での前記血液凝固
性の高い材料又は生体組織の層への血液成分の吸着を、
前記水晶発振子の共振周波数の変化から検出することを
特徴とする方法を提供する。

【０００６】

【作用】本発明においては、フローセルの壁面の少なく
とも一部分を水晶振動子により構成し、該水晶振動子の
表面に特定の血液凝固性の高い材料又は生体組織の層を
形成し、該フローセルに血液を流通させることにより血
液と前記血液凝固性の高い材料又は生体組織の層とを接
触せしめ、これにより血液の凝固を生じさせて血液成分
を前記血液凝固性の高い材料又は生体組織の層に付着せ
しめる。この結果が水晶振動子の共振周波数の変化とし
て測定される。この場合の変化を、被験薬剤添加した血
液を使用した場合と被験薬剤を添加しない血液を使用し
た場合との間で比較することにより、被験薬剤が血液凝
固活性を有するか否か、及び被験薬剤が血液凝固活性を
有する場合にはその活性の強さを測定することができ
る。

【０００７】上記の方法において、フローセル内に流す
血液の流速を生体内での血流速度に近似させることによ
り、被験薬剤の生体内での抗血栓効果を生体外測定によ
り判定することができる。

【０００８】

【具体的な説明】本発明の方法による抗血栓効果の判定
方法は、あらゆる抗血栓薬剤に適用することができ、す
でに抗血栓効果が知られている薬剤、例えばプロスタグ
ランジン等の抗血栓効果を、特定の材料又は生体組織の
血液凝固作用に対して評価するため、あるいは新規な抗
血栓剤のスクリーニングのため等の用途に用いることが
できる。

【０００９】本発明の方法の実施に用いる装置を構成す
るフローセルとしては、該フローセルを構成する壁面の
少なくとも一部分が水晶振動子により構成されており、
該水晶振動子がその表面に血液凝固性の強い材料または
生体組織の層を形成することができ、該材料又は組織が
該フローセル内を流れる血液に接触するように構成され
ておればよく、その具体的な構造は特に限定されない。
この様なフローセルの例として、特願平４−３１９１８
６号の明細書及び図面に記載されているフローセルを挙
げることができる。

【００１０】前記フローセルに用いる水晶振動子として
は当業界において周知の商業的に入手可能な任意の水晶
振動子を用いることができる。水晶振動子の共振周波数
の測定方法及び測定装置も当業界において周知であり、
商業的に入手可能である。本発明の方法において使用す
る血液としては、前記の血液凝固性の強い材料又は生体
組織の存在下で血液凝固反応を生じさせるものであれば
よく、例えば全血、あるいは全血から血液成分の一部を
除去した血液、例えば赤血球、白血球及び血小板の内の
少なくとも１種の血液成分を含有する成分血液であって
もよい。成分血液の調製方法は当業界においてよく知ら
れている。

【００１１】水晶振動子の表面に付着させる、血液の凝
固性の強い材料としては、種々の医療用材料、例えば人
工臓器、例えば人工血管、人工骨、生体外で使用する種
々の医療用器具、例えば人工透析用チューブ等が考えら
れる。また生体組織としては血管等が考えられる。本発
明の方法の実施に当っては、まず血液凝固を生じさせな
い成分血液、例えばヘパリン採血した血液から白血球及
び血小板を除去した成分血液をフローセルに流すことに
より、温度を一定に安定化し、蛋白質の吸着量を飽和状
態にしてベースラインを得る。この飽和状態の達成は水
晶振動子の共振周波数の一定化により知ることができ
る。次に、被験薬剤を加えた血液を流通させて水晶振動
子の共振周波数の変化を測定する。同様にして被験薬剤
を加えない血液について同様に共振周波数の変化を測定
する。

【００１２】水晶振動子への蛋白質の吸着量が多くなる
に従って共振周波数は減少する。従って、被験薬剤を添
加した血液を流した場合に比べて被験薬剤を添加しなか
った血液を流した場合の共振周波数の減少が大きい場
合、被験薬剤は抗血液凝固活性、すなわち抗血栓効果を
有すると判定される。全血中、赤血球、白血球あるいは
血小板のうち１種類の血液成分を含む成分血液を用いる
ことで個々の血液成分の抗血栓性に与える影響がわか
る。

【００１３】

【実施例】次に、実施例により本発明をさらに具体的に
説明する。実施例 直径２．５cmの基本共振周波数５MHz のＡＴカットされ
た水晶振動子に、市販のポリカーボネイトを溶媒に溶か
してキャストした材料およびポリカーボネイトをさらに
ヒトフィブリノーゲンを固定した材料を準備した。各々
の材料上にフローセルを取付けた。ヘパリン採血した血
液より血小板および白血球を取り除いた成分血液をずり
速度３５０sec ^-1の速度で循環し、約１０分間、温度一
定およびタンパク質吸着飽和を待った。次に、全血に抗
血栓薬剤プロスタグランジンＥ１を終濃度１０μＭ添加
し、循環させたところポリカーボネイトおよびポリカー
ボネイトにさらにフィブリノーゲンを固定した材料とも
に周波数は変化しなかった。一方、抗血栓薬剤プロスタ
グランジンＥ１を添加しない血液を循環させたとき、１
５分間でポリカーボネイトでは約１０００Hz、ポリカー
ボネイトさらにフィブリノーゲンを固定した材料では約
２０００Hzの周波数変化があった。

【００１４】このことから本測定装置により、抗血栓薬
剤プロスタグランジンＥ１の効果を確認することができ
た。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 血液凝固性の高い材料又は生体組織によ
   る血栓の形成に対する被験薬剤の抗血栓効果を判定する
   方法であって、フローセルの壁面の一部を構成する水晶
   振動子の表面に血液凝固性の高い材料又は生体組織の層
   を形成し、該フローセルに被験薬剤を添加した血液を流
   通せしめ、そして血液流動下での前記血液凝固性の高い
   材料又は生体組織の層への血液成分の吸着を、前記水晶
   発振子の共振周波数の変化から検出することを特徴とす
   る方法。
2. 【請求項２】 前記フローセルに流通させる血液が全血
   であることを特徴とする請求項１に記載の被験薬剤の抗
   血栓効果の判定方法。
3. 【請求項３】 前記フローセルに流通させる血液が、赤
   血球、白血球または血小板のうちすくなくとも１種類の
   血球成分を含む成分血液であることを特徴とする請求項
   １に記載の薬剤の抗血栓効果の判定方法。