JPH071265B2 - アミノ基を有する光学異性体の分析方法 - Google Patents
アミノ基を有する光学異性体の分析方法Info
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- JPH071265B2 JPH071265B2 JP14707983A JP14707983A JPH071265B2 JP H071265 B2 JPH071265 B2 JP H071265B2 JP 14707983 A JP14707983 A JP 14707983A JP 14707983 A JP14707983 A JP 14707983A JP H071265 B2 JPH071265 B2 JP H071265B2
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- amino group
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- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 （イ）産業上の利用分野 この発明は、光学異性体の分析方法に関する。さらに詳
しくは、アミノ酸やカテコールアミン等のアミノ基を有
する光学異性体を光学分割しつつ高感度でかつ簡便に定
性、定量することができる光学異性体の分析方法に関す
る。
しくは、アミノ酸やカテコールアミン等のアミノ基を有
する光学異性体を光学分割しつつ高感度でかつ簡便に定
性、定量することができる光学異性体の分析方法に関す
る。
（ロ）従来技術 クロマトグラフイーことに液体クロマトグラフイーを用
いた光学異性体の光学分割は、これまでに種々の試みが
なされてきた。これらの方法は大別すると、光学活性
な固定相を用いるもの、光学活性な移動相を用いるも
の、試料をあらかじめジアステレオマーに導びいた後
分離するもの、に分けられる。これらのうちとして光
学活性な金属錯体を固定相に用いる配位子交換クロマト
グラフイーや、光学活性固定相と誘導体化した試料の水
素混合による相互作用又はπ−π相互作用の差に基づく
クロマトグラフイーが知られているが、いずれにせよ光
学活性な固定相という特殊な固定相を調整する必要があ
るため簡便さの面で劣り、さらに高感度分析には適さな
い場合もしばしばあつた。の方法は移動相に光学活性
な化合物を添加し続けるため絶えずこの化合物を消費す
るという欠点があつた。また、の方法は繁雑な前処理
を必要とする割に検出が高感度に行なえない場合が多か
つた。
いた光学異性体の光学分割は、これまでに種々の試みが
なされてきた。これらの方法は大別すると、光学活性
な固定相を用いるもの、光学活性な移動相を用いるも
の、試料をあらかじめジアステレオマーに導びいた後
分離するもの、に分けられる。これらのうちとして光
学活性な金属錯体を固定相に用いる配位子交換クロマト
グラフイーや、光学活性固定相と誘導体化した試料の水
素混合による相互作用又はπ−π相互作用の差に基づく
クロマトグラフイーが知られているが、いずれにせよ光
学活性な固定相という特殊な固定相を調整する必要があ
るため簡便さの面で劣り、さらに高感度分析には適さな
い場合もしばしばあつた。の方法は移動相に光学活性
な化合物を添加し続けるため絶えずこの化合物を消費す
るという欠点があつた。また、の方法は繁雑な前処理
を必要とする割に検出が高感度に行なえない場合が多か
つた。
一方、アミノ酸などのアミノ基を有する化合物を高感度
に定性、定量するために従来より、２−メルカプトエタ
ノールの存在下、ｏ−フタルアルデヒドと反応させて発
螢光性の縮合ヘテロ環式誘導体に変換しこの螢光光度
（場合によつては吸光光度）を検出する方法が知られて
いる。しかしこの方法ではアミノ基を有する光学異性体
を光学分割して分析することはできなかつた。
に定性、定量するために従来より、２−メルカプトエタ
ノールの存在下、ｏ−フタルアルデヒドと反応させて発
螢光性の縮合ヘテロ環式誘導体に変換しこの螢光光度
（場合によつては吸光光度）を検出する方法が知られて
いる。しかしこの方法ではアミノ基を有する光学異性体
を光学分割して分析することはできなかつた。
（ハ）発明の目的 この発明は、上記のごとき従来の問題点に鑑みなされた
ものであり、アミノ基を有する光学異性体の光学分割と
高感度分析とが簡便に行ない得る分析方法を提供するこ
とを目的とするものである。
ものであり、アミノ基を有する光学異性体の光学分割と
高感度分析とが簡便に行ない得る分析方法を提供するこ
とを目的とするものである。
この発明の発明者らは、ｏ−フタルアルデヒドと２−メ
ルカプトエタノールとを用いた従来のアミノ基含有化合
物の分析方法に着目して鋭意研究を行なつた結果、上記
２−メルカプトエタノールの代わりにＮ−アセチル−Ｌ
−システインのようなチオール基を有するキラルな化合
物を用いることにより、試料としてアミノ基を有する光
学異性体を用いた際にジアステレオマーが簡便に生成し
通常の液体クロマトグラフイーによつて簡便に分離で
き、さらに該ジアステレオマーは安定な発螢光性の縮合
ヘテロ環式誘導体でありその螢光や吸光特性に基づいて
容易に検出できる事実を見出しこの発明に到達した。
ルカプトエタノールとを用いた従来のアミノ基含有化合
物の分析方法に着目して鋭意研究を行なつた結果、上記
２−メルカプトエタノールの代わりにＮ−アセチル−Ｌ
−システインのようなチオール基を有するキラルな化合
物を用いることにより、試料としてアミノ基を有する光
学異性体を用いた際にジアステレオマーが簡便に生成し
通常の液体クロマトグラフイーによつて簡便に分離で
き、さらに該ジアステレオマーは安定な発螢光性の縮合
ヘテロ環式誘導体でありその螢光や吸光特性に基づいて
容易に検出できる事実を見出しこの発明に到達した。
（ニ）発明の構成 かくしてこの発明によれば、アミノ基を有する光学異性
体含有試料を、アルカリ性下にｏ−フタルアルデヒド及
びチオール基を有するキラルな化合物と反応させて発螢
光性のジアステレオマーを生成させ、これを液体クロマ
トグラフイーによる分離操作に付した後又は前記アミノ
基を有する光学異性体含有試料として光学純度が100％
の試料を用いた場合には付せずして、その螢光光度を検
出することを特徴とするアミノ基を有する光学異性体の
分析方法が提供される。
体含有試料を、アルカリ性下にｏ−フタルアルデヒド及
びチオール基を有するキラルな化合物と反応させて発螢
光性のジアステレオマーを生成させ、これを液体クロマ
トグラフイーによる分離操作に付した後又は前記アミノ
基を有する光学異性体含有試料として光学純度が100％
の試料を用いた場合には付せずして、その螢光光度を検
出することを特徴とするアミノ基を有する光学異性体の
分析方法が提供される。
この発明の分析対象成分となるアミノ基を有する光学異
性体としては種々のアミノ酸ことにα−アミノ酸類、ア
ドレナリン、ドーバのようなカテコールアミン類、グリ
シルセリン、グリシルメチオニンのようなオリゴペプチ
ド類等が挙げられ、これ以外にも種々の合成物質（例え
ば、メチルベンジルアミノ）が挙げられる。かような光
学異性体はD,L−混合体であつてもよく、ラセミ体であ
つてもよく、場合によつては光学純度100％のものすな
わちＤ−体又はＬ−体のいずれかからなるものであつて
もよい。
性体としては種々のアミノ酸ことにα−アミノ酸類、ア
ドレナリン、ドーバのようなカテコールアミン類、グリ
シルセリン、グリシルメチオニンのようなオリゴペプチ
ド類等が挙げられ、これ以外にも種々の合成物質（例え
ば、メチルベンジルアミノ）が挙げられる。かような光
学異性体はD,L−混合体であつてもよく、ラセミ体であ
つてもよく、場合によつては光学純度100％のものすな
わちＤ−体又はＬ−体のいずれかからなるものであつて
もよい。
上記光学異性体を含有する試料は、ｏ−フタルアルデヒ
ド及びチオール基を有するキラルな化合物との反応に供
される。
ド及びチオール基を有するキラルな化合物との反応に供
される。
この発明におけるチオール基を有するキラルな化合物と
しては、チオール基を有するＮ−保護基置換−α−アミ
ノ酸を用いるのが適当であり、例えばＮ−保護基置換−
Ｄ（又はＬ）−システインやＮ−保護基置換−Ｄ（又は
Ｌ）−ペニシラミンが挙げられる。かかるＮ−保護基置
換−α−アミノ酸はチオール基を有するキラルなα−ア
ミノ酸とＮ−末端保護試薬等を原料として公知の方法に
より合成することができる。このＮ−末端保護試薬とし
ては種々のものが挙げられ、具体的には無水酢酸、アセ
チルクロリド、２−ter−ブトキシカルボニルオキシイ
ミド−２−フエニルアセトニトリル、Ｎ−カルボエトキ
シフタルイミド、ベンジルオキシカルボニルクロリド、
Ｓ−エチルチオール−トリフルオロアセテート、ｐ−ニ
トロカルボベンゾキシクロリド、ｏ−ニトロフエニルス
ルホニルクロリド、フエニルトリフルオロアセテート、
ｐ−トルエンスルホニルクロリド、トリチルクロリド等
が挙げられる。ただしこれらのα−アミノ酸誘導体は基
本的に光学純度の高いものを用いることが必要であり、
D,L−混合体を用いるのは好ましくない。通常、光学純
度100％のものを用いるのが好ましい。もちろんチオー
ル基を有するキラルなＮ−保護置換−α−アミノ酸は市
販品を用いてもよく、簡便に入手できる点Ｎ−アセチル
−Ｌ−システインを用いるのが好ましい。
しては、チオール基を有するＮ−保護基置換−α−アミ
ノ酸を用いるのが適当であり、例えばＮ−保護基置換−
Ｄ（又はＬ）−システインやＮ−保護基置換−Ｄ（又は
Ｌ）−ペニシラミンが挙げられる。かかるＮ−保護基置
換−α−アミノ酸はチオール基を有するキラルなα−ア
ミノ酸とＮ−末端保護試薬等を原料として公知の方法に
より合成することができる。このＮ−末端保護試薬とし
ては種々のものが挙げられ、具体的には無水酢酸、アセ
チルクロリド、２−ter−ブトキシカルボニルオキシイ
ミド−２−フエニルアセトニトリル、Ｎ−カルボエトキ
シフタルイミド、ベンジルオキシカルボニルクロリド、
Ｓ−エチルチオール−トリフルオロアセテート、ｐ−ニ
トロカルボベンゾキシクロリド、ｏ−ニトロフエニルス
ルホニルクロリド、フエニルトリフルオロアセテート、
ｐ−トルエンスルホニルクロリド、トリチルクロリド等
が挙げられる。ただしこれらのα−アミノ酸誘導体は基
本的に光学純度の高いものを用いることが必要であり、
D,L−混合体を用いるのは好ましくない。通常、光学純
度100％のものを用いるのが好ましい。もちろんチオー
ル基を有するキラルなＮ−保護置換−α−アミノ酸は市
販品を用いてもよく、簡便に入手できる点Ｎ−アセチル
−Ｌ−システインを用いるのが好ましい。
前記光学異性体を含有する試料と、上記チオール基を有
するキラルな化合物及びｏ−フタルアルデヒド（以下OP
A）との反応は、通常従来の２−メルカプトエタノール
及びOPAを用いた発螢光反応と同様な反応条件下ことに
アルカリ性下で行なわれる。例えば、OPAをメタノール
等の極性溶媒中に溶解したのちチオールを有するキラル
な化合物を加え、さらにpH10〜11のホウ酸塩緩衝液と混
合して弱アルカリ性の反応試薬とし、これとアミノ基を
有する光学異性体を含有する試料を常温下で混和させる
ことにより簡便に行なうことができる。なお、Ｎ−アセ
チル−Ｌ−システインを用いた際の反応スキームは以下
の通りである。
するキラルな化合物及びｏ−フタルアルデヒド（以下OP
A）との反応は、通常従来の２−メルカプトエタノール
及びOPAを用いた発螢光反応と同様な反応条件下ことに
アルカリ性下で行なわれる。例えば、OPAをメタノール
等の極性溶媒中に溶解したのちチオールを有するキラル
な化合物を加え、さらにpH10〜11のホウ酸塩緩衝液と混
合して弱アルカリ性の反応試薬とし、これとアミノ基を
有する光学異性体を含有する試料を常温下で混和させる
ことにより簡便に行なうことができる。なお、Ｎ−アセ
チル−Ｌ−システインを用いた際の反応スキームは以下
の通りである。
この際、試料は光学異性体であるためジアステレオマー
である発螢光性化合物が得られる。例えば試料がD,L−
混合アミノ酸の場合には、下式（Ｉ）、（II） で示される二種類の発螢光性の化合物が得られるがこれ
らはジアステレオマーの関係にあり、通常の液体クロマ
トグラフイーで簡便に分離することができる。なお試料
が光学純度100％の場合も上記いずれかのジアステレオ
マーが生成するが、この際は分離操作はとくに必要はな
い。
である発螢光性化合物が得られる。例えば試料がD,L−
混合アミノ酸の場合には、下式（Ｉ）、（II） で示される二種類の発螢光性の化合物が得られるがこれ
らはジアステレオマーの関係にあり、通常の液体クロマ
トグラフイーで簡便に分離することができる。なお試料
が光学純度100％の場合も上記いずれかのジアステレオ
マーが生成するが、この際は分離操作はとくに必要はな
い。
上記液体クロマトグラフイーとしては例えば、順相、逆
相及びイオン交換クロマトグラフイーが挙げられ、より
具体的には、固定相としてシリカゲルを用い、移動相と
してヘキサンを用いたものや、固定相としてカチオン交
換樹脂を用い移動相として緩衝液を用いたものが挙げら
れる。
相及びイオン交換クロマトグラフイーが挙げられ、より
具体的には、固定相としてシリカゲルを用い、移動相と
してヘキサンを用いたものや、固定相としてカチオン交
換樹脂を用い移動相として緩衝液を用いたものが挙げら
れる。
適宜、液体クロマトグラフイーで分離された前記ジアス
テレオマーはその螢光光度や吸光光度に基づいてそのま
ま簡便に検出することができる。通常、より高感度な検
出が行なえる点、螢光光度を測定することが好ましい。
これらの測定は当該分野で公知の種々の検出器によつて
行なわれる。
テレオマーはその螢光光度や吸光光度に基づいてそのま
ま簡便に検出することができる。通常、より高感度な検
出が行なえる点、螢光光度を測定することが好ましい。
これらの測定は当該分野で公知の種々の検出器によつて
行なわれる。
（ホ）実施例 OPA80mgメタノール1mlに溶解させた後、1gのＮ−アセチ
ル−Ｌ−システインを加えた。これをpH10.4のホウ酸緩
衝液100mlに加えて反応試薬とした。この試薬1mlにアミ
ノ酸試料（D,L−アラニ及びD,L−バリン）2mgを加えて
５分間振りまぜた後、その10μｌをマイクロシリンジ
で、螢光光度計を検出器として有する高速液体クロマト
グラフ装置のカラムに注入して分析を行なつた。クロマ
トグラフイーの条件は以下の通りであつた。
ル−Ｌ−システインを加えた。これをpH10.4のホウ酸緩
衝液100mlに加えて反応試薬とした。この試薬1mlにアミ
ノ酸試料（D,L−アラニ及びD,L−バリン）2mgを加えて
５分間振りまぜた後、その10μｌをマイクロシリンジ
で、螢光光度計を検出器として有する高速液体クロマト
グラフ装置のカラムに注入して分析を行なつた。クロマ
トグラフイーの条件は以下の通りであつた。
イ カ ラ ム:ERC−ODS−1272（６mmφ×200mm） ロ 移 動 相：酢酸ナトリウム（pH6.0）：メタノー
ル ＝65:35の混合液 ハ 流 量 :1.Oml/分 ニ 検出波長 ：励磁波長350nm 螢光波長450nm ホ カラム温度:50℃ D,L−アラニンを用いた際の結果を第１図に、D,L−バリ
ンを用いた際の結果を第２図に示した。
ル ＝65:35の混合液 ハ 流 量 :1.Oml/分 ニ 検出波長 ：励磁波長350nm 螢光波長450nm ホ カラム温度:50℃ D,L−アラニンを用いた際の結果を第１図に、D,L−バリ
ンを用いた際の結果を第２図に示した。
また保持時間を表１に示した。
このようにこの発明の方法によれば光学分割が効率良く
行なわれかつそのまま高感度に分析できることが判る。
行なわれかつそのまま高感度に分析できることが判る。
（ヘ）発明の効果 以上述べたごとく、この発明の方法によれば、アミノ基
を有する光学異性体含有試料ことにD,L−混合試料を簡
便に光学分割できさらにそのまま高感度に定性、定量で
き、種々の光学異性体の分析方法として有用である。な
お、プロリンなどのイミノ基を有する化合物を分析対象
とする際には次亜塩素酸ナトリウムで短時間反応させて
対応する光学活性なアミノ酸に変換して同様に分析を行
なえばよく、ペプチドの場合も前処理して構成アミノ酸
に分解した後、同様に分析を行なうことも可能である。
を有する光学異性体含有試料ことにD,L−混合試料を簡
便に光学分割できさらにそのまま高感度に定性、定量で
き、種々の光学異性体の分析方法として有用である。な
お、プロリンなどのイミノ基を有する化合物を分析対象
とする際には次亜塩素酸ナトリウムで短時間反応させて
対応する光学活性なアミノ酸に変換して同様に分析を行
なえばよく、ペプチドの場合も前処理して構成アミノ酸
に分解した後、同様に分析を行なうことも可能である。
第１図及び第２図はこの発明の分析方法によつて得られ
たクロマトグラムを例示するグラフである。
たクロマトグラムを例示するグラフである。
Claims (2)
- 【請求項１】アミノ基を有する光学異性体含有試料を、
アルカリ性下にｏ−フタルアルデヒド及び光学的に純粋
なチオール基を有するＮ−保護基置換−α−アミノ酸基
のキラルな化合物と反応させて発蛍光性のジアステレオ
マーを生成させ、これを液体クロマトグラフイーによる
分離操作に付した後、又は前記アミノ基を有する光学異
性体含有試料として光学純度が100％の試料を用いた場
合には付せずして、その蛍光光度を検出することを特徴
とするアミノ基を有する光学異性体の分析方法。 - 【請求項２】チオール基を有するＮ−保護基置換−α−
アミノ酸が、Ｎ−アセチル−Ｌ−システインである特許
請求の範囲第１項記載の分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14707983A JPH071265B2 (ja) | 1983-08-11 | 1983-08-11 | アミノ基を有する光学異性体の分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14707983A JPH071265B2 (ja) | 1983-08-11 | 1983-08-11 | アミノ基を有する光学異性体の分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6038652A JPS6038652A (ja) | 1985-02-28 |
| JPH071265B2 true JPH071265B2 (ja) | 1995-01-11 |
Family
ID=15421992
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14707983A Expired - Lifetime JPH071265B2 (ja) | 1983-08-11 | 1983-08-11 | アミノ基を有する光学異性体の分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH071265B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6082967A (ja) * | 1983-10-14 | 1985-05-11 | Shimadzu Corp | アミノ酸分析方法及び装置 |
| JP2878804B2 (ja) * | 1989-09-19 | 1999-04-05 | 東京瓦斯株式会社 | 配管の異常監視装置 |
| CN113820442A (zh) * | 2021-08-18 | 2021-12-21 | 上虞京新药业有限公司 | 一种手性对映异构体2-氨基丁酸光学纯度的检测方法 |
| CN114674965A (zh) * | 2022-03-02 | 2022-06-28 | 苏州康恒研新药物技术有限公司 | 一种基于衍生化技术同时检测替格瑞洛合成中间体tkg中三种不同异构体的方法 |
-
1983
- 1983-08-11 JP JP14707983A patent/JPH071265B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6038652A (ja) | 1985-02-28 |
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