JPH07118276A - 生理活性物質ａｄ−２６ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】駆虫、殺ダニおよび殺虫作用を有する新規生理
活性物質を提供する。 【構成】式 【化１】 〔式中、Ｒ₁は水素原子またはアシル基を、Ｒ₂は水素原
子またはアシル化されていてもよい水酸基を示す〕で表
される化合物。 【効果】生理活性物質ＡＤ−２６およびその誘導体は強
力な駆虫、殺ダニ、殺虫作用を有し、とりわけ動物用医
薬品として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、駆虫・殺ダニ・殺虫作
用を示す新規生理活性物質ＡＤ−２６、その製造法およ
び用途ならびにそれらを生産する微生物に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、微生物を起源とする駆虫・殺虫性
物質としては、糸状菌の生産する環状ペプチドであるデ
ストルキシン〔アグリカルチュラル・バイオロジカル・
ケミストリイ（Agricultural and Biological Chemistr
y）第２６巻、第３６頁（１９６２年）〕、バチルス属
細菌の生産する結晶性蛋白質であるデルタ−エンドトキ
シン〔農薬と園芸 第４７巻、第１１号、第１５０７頁
（１９７２年）〕放線菌の生産するピェリシジン〔アグ
リカルチュラル・バイオロジカル・ケミストリイ第３０
巻、第１頁（１９６６年）〕、ピロリドンを母核とする
電子伝達阻害物質マクロテトロライド類にはいるテトラ
ナクチン〔ジャーナル・アンチバイオティクス（Journa
l Antibiotics）第２４Ａ巻、第４１８頁（１９７１
年）〕、マクロライド系のミルベマイシン〔テトラヘド
ロン・レターズ（Tetrahedron Letters）第７１１頁
（１９７５年）〕、アバメクチン類〔アンチミクロバイ
アル・エイジェンツ・アンド・ケモセラピイ（Antimicr
obial Agents and Chemotherapy）第１５巻、第３６１
頁（１９７９年）〕、ＬＬ−Ｆ２８２４９α〔ジャーナ
ル・オブ・ケミカル・ソサイエテイ・ケミカル・コミュ
ニケーションズ（Journalof Chemical Society Chemica
l Communications）第４０２頁（１９８７年）〕などが
知られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】寄生虫感染は、人間お
よび動物に対して、貧血・栄養不良・衰弱・体重減少な
どの症状をもたらし、もし治療しないで置くと、感染宿
主を死に至らしめることもあり得る。このような寄生虫
感染を回避し、人間及び動物の健康を守るために、より
優れた駆虫剤、殺虫剤および殺ダニ剤の開発が求められ
ている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、多数の微
生物培養液中から新しい駆虫・殺ダニ・殺虫剤を得るた
めの探索研究を行ったところ、ストレプトミセス属の菌
株が、駆虫・殺ダニ・殺虫作用を有する物質を産生する
ことを見出した。該微生物を適宜の培地に培養すること
により、駆虫・殺ダニ・殺虫作用を有する物質を培養物
中または菌体中に蓄積しうることを認め、活性物質を単
離し、その物理化学的性質から、当該活性物質が新規物
質であることを確かめ、これらの知見に基づいてさらに
研究を続けた結果、本発明を完成するに至った。すなわ
ち、本発明は、式

【化２】 〔式中、Ｒ₁は水素原子またはアシル基を、Ｒ₂は水素原
子またはアシル化されていてもよい水酸基を示す〕で表
される化合物、（２）（１）においてＲ₁およびＲ₂がと
もに水素原子である生理活性物質ＡＤ−２６−１、
（３）（１）においてＲ₁がカルバミル基でＲ₂が水素原
子である生理活性物質ＡＤ−２６−２、（４）（１）に
おいてＲ₁が水素原子でＲ₂が２−ピロリルカルボキシ基
である生理活性物質ＡＤ−２６−３、（５）ストレプト
ミセス属に属する生理活性物質ＡＤ−２６の生産能を有
する微生物を培地に培養し、培養液中に生理活性物質Ａ
Ｄ−２６を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴
とする前記（１）記載の生理活性物質ＡＤ−２６の製造
法、（６）（１）記載の化合物を含有してなる駆虫、殺
ダニもしくは殺虫剤および（７）生理活性物質ＡＤ−２
６の生産能を有するストレプトミセス エスピー・ＡＬ
−５５７８２株に関する。上記化合物（Ｉ）に関し、Ｒ
₁およびＲ₂におけるアシル基としてはカルボン酸由来の
アシル基（−ＣＯＲ₃）、スルホン酸由来のアシル基
（−ＳＯ₃Ｒ₄）、カルバミル基（−ＣＯＮＲ₅Ｒ₆）など
挙げられる。なおＲ₃，Ｒ₄，Ｒ₅およびＲ₆はそれぞれ水
素原子、Ｃ_1-6アルキル基，アリール基（フェニル，ナ
フチルなど）、または硫黄，窒素または（および）酸素
原子を含む４〜６員複素環基（ピロール，ピリジン，ピ
リミジン，チアゾール，オキサゾールなど）を表わす。
とりわけ本発明においてはＲ₁として水素原子またはカ
ルバミル基が、Ｒ₂として水素原子、水酸基または２−
ピロリルカルボキシ基が好ましい。

【０００５】本発明に用いることができる微生物として
は、ストレプトミセス属に属し、ＡＤ−２６−１、ＡＤ
−２６−２、ＡＤ−２６−３などの生理活性物質ＡＤ−
２６を産生する能力を有する微生物であればいずれのも
のでもよいその具体例としては、滋賀県土壌より分離さ
れたストレプトミセス エスピー・ＡＬ−５５７８２
（Streptomyces sp. ＡＬ−５５７８２）などは具体的
に使用しうる例として挙げられる。ＡＬ−５５７８２株
について、インターナショナル・ジャーナル・オブ・シ
ステマティック・バクテリオロジー（International Jo
urnal of Systematic Bacteriology），第１６巻、３１
３−３４０頁（１９６６年）記載の方法に準じて検討し
た菌学的性状は下記のとおりである。なお、培地上の所
見は特に記載のないかぎり、２８℃において１４日間培
養し、観察したものである。

【０００６】（I）形態的特徴 気菌糸は、よく伸長分岐した基生菌糸から単純分岐状に
伸長しており、その先端に形成された胞子連鎖（通常１
０〜５０個以上）は緻密ならせん状を呈する。輪生糸は
認められない。胞子は楕円形（φ０.９〜１.２×０.３
×０.４μm）を示し、その表面は細くて長いトゲ状であ
る。 （II）各種培地上での生育状態 各種培地における生育の程度（Ｇ）、気菌糸の生育およ
び色調（ＡＭ）、裏面の色調（Ｒ）、可溶性色素の有無
および色調（ＳＰ）などについて以下に列記する。色の
記載について（ ）で示す標準色調記号は、コンティナ
ー・コーポレーション・オブ・アメリカ（Container Co
rporation of America）のザ・カラー・ハーモニー・マ
ニュアル（The Color Harmony Manualu）第４版、１９
５８年によった。

【０００７】

【表１】

【０００８】 （III）生理的性質 (a) 生育温度範囲 ： １５〜３４℃ 最適生育温度範囲 ： ２３〜３１℃ (b) 硝酸塩の還元 ： 陽性 (c) ゼラチンの液化 ： 陽性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） (d) 澱粉の加水分解 ： 陽性 (e) 脱脂乳の凝固 ： 陰性 脱脂乳のペプトン化 ： 陽性 (f) メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地 ： 陰性 ペプトン・酵母エキス・ ： 陰性 鉄 寒天培地 (g) 炭素源の資化性 （プリードハム・ゴットリープ寒天培地） Ｌ−アラビノース ： − （注）＋＋：比較的良好な生育 Ｄ−キシロース ： − ＋ ：生育を認める Ｄ−グルコース ： ＋ ± ：＋又は−の判定が困難 Ｄ−フラクトース ： − − ：生育せず シュクロース ： − イノシトール ： − Ｌ−ラムノース ： − ラフィノース ： ＋＋ Ｄ−マンニット ： − 対 照 ： −

【０００９】（IV）菌体分析 長谷川らの方法（Journal of General Applied Microbi
ology ２９，３１９−３２２（１９８３））に準じて分
析したところ、菌体の塩酸加水分解液中のジアミノピメ
リン酸は、ＬＬ−体であった。以上の結果から本菌体
は、気菌糸の色は灰色を呈し、胞子連鎖は緻密ならせん
状であり、胞子表面は細くて長いトゲ状、メラニン色素
を産生しないこと及びジアミノピメリン酸がＬＬ−体で
あるなど諸性質から判断するとストレプトマイセス（St
reptomyces）属に属することが明かであり、ストレプト
マイセス・エスピー・ＡＬ−５５７８２（Streptomyces
sp. ＡＬ−５５７８２）と称することができる。上記
ストレプトミセス エスピー・ＡＬ−５５７８２（Stre
ptomyces sp. ＡＬ−５５７８２）は財団法人醗酵研究
所に平成５年８月２６日から寄託番号ＩＦＯ−１５５４
２として寄託されており、また本微生物は、日本国通商
産業省工業技術院生命工学工業技術研究所（ＮＩＢＨ，
日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号）に平成５年１
０月１２日から寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１３９０２とし
て寄託されている。

【００１０】ストレプトミセス属菌は、微生物の一般的
性質として自然的または変異剤によって変異を起こし得
る。たとえばＸ線、ガンマー線、紫外線等の放射線の照
射、更には単胞子分離、種々の薬剤による処理または薬
剤を含有する培地上での培養、その他の手段で変異させ
て得られる多くの変異株、あるいは自然的に得られる突
然変異株であっても、ＡＤ−２６−１、ＡＤ−２６−２
および／またはＡＤ−２６−３を生産する性質を有する
ものはすべて本発明の方法に利用し得る。

【００１１】本発明方法の培養に用いられる培地は用い
られる菌株が利用し得る栄養源を含むものなら、液状で
も固状でもよいが、大量を処理するときには液体培地を
用いるのがより適当である。培地には同化し得る栄養
源、消化し得る窒素源、無機物質、微量栄養素を適宜配
合される。炭素源としては、たとえばブドウ糖、乳糖、
ショ糖、麦芽糖、デキストリン、でん粉、グリセリン、
マンニトール、ソルビトール、油脂類（例、大豆油、オ
リーブ油、ヌカ油、ゴマ油、ラード油、チキン油な
ど）、窒素源としては、たとえば肉エキス、酵母エキ
ス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・スチープ・リカー、ペ
プトン、綿実粉、廃糖蜜、尿素、アンモニウム塩類
（例、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アン
モニウム、酢酸アンモニウムなど）その他が用いられ
る。さらにナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネ
シウムなどを含む塩類、鉄、マンガン、亜鉛、コバル
ト、ニッケルなどの金属塩、りん酸、ホウ酸などの塩類
や酢酸、プロピオン酸などの有機酸の塩類が適宜用いら
れる。その他、アミノ酸（例、グルタミン酸、アスパラ
ギン酸、アラニン、リジン、バリン、メチオニン、プロ
リン等）、ビタミン類（例、Ｂ₁、Ｂ₂、ニコチン酸、Ｂ
₁₂、Ｃ等）、核酸類（例、プリン、ピリミジンおよびそ
の誘導体）等を含有させてもよい。もちろん培地のｐＨ
を調節する目的で無機または有機の酸、アルカリ類、緩
衝剤等を加え、あるいは消泡の目的で油脂類、表面活性
剤等の適量を添加される。

【００１２】培養の手段は静置培養でも、振盪培養ある
いは通気撹拌培養法等の手段を用いてもよい。大量の処
理には、いわゆる深部通気撹拌培養によるのが望ましい
ことはいうまでもない。培養の条件は培地の状態、組
成、菌株の種類、培養の手段によって一定しないのは当
然であるが、それらは通常１５℃〜３２℃の温度で、初
発ｐＨ約５〜９付近に選択するのがよい。とりわけ、培
養中期の温度は２０℃〜３０℃、また初発ｐＨは約６〜
８の条件が望ましい。培養時期も前記の諸条件により一
定しないが、該生理活性物質濃度が最大となるまで培養
するのがよい。これに要する時間は液体培地を用いる振
盪培養または通気撹拌培養の場合は通常約１〜１０日間
程度である。生成した生理活性物質ＡＤ−２６−１、Ａ
Ｄ−２６−２および／またはＡＤ−２６−３は、その化
学的性質に従って培養物から抽出、精製することが可能
である。

【００１３】ＡＤ−２６−１、ＡＤ−２６−２および／
またはＡＤ−２６−３の大部分は、菌体中に生産される
ので、培養物からろ過または遠心分離によって菌体を分
離し、菌体をアセトンまたは酢酸エチルあるいはアルコ
ールを用いて、精製することができる。なお、工業的に
は、菌体分離操作を省略して、培養物に直接、メタノー
ル、アセトン、ブタノール、酢酸エチルなどの有機溶媒
を添加して得られる抽出液から精製する方がより有利な
場合もある。ＡＤ−２６−１、ＡＤ−２６−２および／
またはＡＤ−２６−３は、中性脂溶性物質であるので、
培養液から採取する際には、通常これらと類縁の微生物
代謝産物を採取する際に用いられる分離・精製の手段を
適量利用することができる。たとえば、夾雑物との溶解
度の差を利用する方法、あるいは活性炭、非イオン性ハ
イポーラス樹脂、シリカゲル、アルミナ、デキストラン
ゲル等の各種担体を用いるクロマトグラフィーなどがそ
れぞれ単独または組み合わせて利用する方法などが用い
らる。

【００１４】培養物からＡＤ−２６−１、ＡＤ−２６−
２および／またはＡＤ−２６−３を単離採取する方法を
具体的に説明すると、まず培養液から遠心分離によって
菌体を集め、これにアセトンのような有機溶媒を加え
て、よく撹拌した後、遠心分離により沈澱物を除去す
る。得られた上澄液を濃縮した後、ｐＨを調整し、これ
に酢酸エチルのような溶媒を加えて、よく撹拌する。有
機層を酸、水、アルカリ、水で順次洗浄した後、濃縮
し、得られた濃縮液をシリカゲルのカラムクロマトグラ
フィーにかける。展開溶媒としては、例えばクロロホル
ム−メタノールまたはトルエン−酢酸エチルの混合溶媒
が用いられる。有効画分を集めて濃縮した後、Sephadex
ＬＨ−２０のクロマトグラフィーに付す。展開溶媒と
してはメタノールあるいはヘキサン−トルエン−メタノ
ール、ヘキサン−塩化メチレン−メタノール等の混合溶
媒系が用いられる。有効画分を含む溶出液は濃縮後、更
に分取高速液体クロマトグラフィーを用いて精製され
る。ここで用いられるカラム充填剤としては、ＯＤＳ−
ＡＭ １２０−Ｓ１０（山村化学研究所製）が、溶媒系
としては、含水アセトニトリルが挙げられる。

【００１５】このようにして得られたＡＤ−２６−１、
ＡＤ−２６−２およびＡＤ−２６−３（実施例２に分離
方法を詳述）の物理化学的性質は次に示す通りである。ＡＤ−２６−１ １) 形 状：無色結晶 ２) 融 点：１７８〜１７９℃ ３) 比施光度：〔α〕_D ²² ＋５０.９（ｃ＝１.０２，ア
セトン） ４) 分 子 量：４２８（ＥＩＭＳ） ５) 分 子 式：Ｃ₂₆Ｈ₃₆Ｏ₅ ６) 元素分析値（Ｃ₂₆Ｈ₃₆Ｏ₅として） 計算値：Ｃ；７２.８７ Ｈ；８.４７ 実測値：Ｃ，７２.７０ Ｈ；８.４２ ７) 紫外線吸収スペクトル：メタノール中 λ_max（ε）：238(sh), 244(30000), 251(sh) (nm) ８) 赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤法による主な吸
収を示す： （波数、cm-¹)：3560, 3430, 2950, 2930, 2850, 1690,
1440, 1370, 1270, 1200, 1180, 1160, 1110, 1030, 9
90, 960, 915, 895, 855

【００１６】９) ¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル（３００Ｍ
Ｈｚ，重クロロホルム中でのケミカルシフト，δpp
m）：1.00(3H,d,J=6.6Hz), 0.95-1.10(1H,m), 1.19-1.4
1(2H,m), 1.46(3H,s), 1.45-1.62(1H,m), 1.71(3H,dd,J
=6.5Hz,1.5Hz), 1.80(1H,dd,J=12.5Hz,12.4Hz), 1.86(3
H,br.s), 1.80-2.07(2H,m), 2.16(1H,d,J=12.3Hz), 2.2
7-2.42(2H,m), 3.22(1H,q,J=2.4Hz), 3.97(1H,d,J=5.9H
z), 4.30(1H,br.d,J=4.5Hz), 4.65(1H,dd,J=14.3Hz,2.4
Hz), 4.67(1H,br.s), 4.69(1H,dd,J=14.3Hz,2.4Hz), 5.
02(1H,dd,J=10.9Hz,4.5Hz), 5.25-5.42(4H,m), 5.63-5.
84(3H,m) ただし、s：シングレット（singlet），d：ダブレット
（doublet），t：トリプレット（triplet），q：クァル
テット（quartet），br.：ブロード（broad）を示す。 10) ¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル（７５ＭＨｚ，重クロロ
ホルム中でのケミカルシフト，δppm）：15.2(CH₃), 1
7.8(CH₃), 19.6(CH₃), 21.9(CH₃), 26.2(CH₂), 27.9(CH
₂), 34.4(CH₂), 36.0(CH), 45.7(CH), 48.3(CH₂), 67.8
(CH), 68.5(CH₂), 76.3(CH), 79.2(CH), 79.3(Q), 117.
8(CH), 119.5(CH), 123.1(CH), 126.2(CH), 129.2(CH),
130.0(CH), 133.9(Q), 137.4(Q), 140.1(Q), 142.6(C
H), 173.8(Q) ただし、ＣＨはメチン基、ＣＨ₂はメチレン基、ＣＨ₃は
メチル基およびＱは四級炭素を示す。

【００１７】11) 呈色反応： 陽性：アニスアルデヒド 陰性：ニンヒドリン，硫酸セリウム，アンスロン，ナフ
トレゾルシン・硫酸 12) 溶解性 可溶：メタノール，エタノール，アセトニトリル，アセ
トン，ジエチルエーテル，酢酸エチル，トルエン，クロ
ロホルム，塩化メチレン 難溶：水 13) 薄層クロマトグラフィー（担体，シリカゲルガラス
プレート６０Ｆ₂₅₄，０.２５mm，独メルク社製）： 展 開 溶 媒 Ｒf クロロホルム−メタノール（２０：１） ０.５４ トルエン−酢酸エチル（１：１） ０.４７ 14) 高速液体クロマトグラフィー： 担 体：ノバパックＣ₁₈ ４μm, ８×１００mm（日
本ミリポアリミテッド社製） 溶 媒 系：７５％アセトニトリル／０.１％トリフルオ
ロ酢酸 流 速：１.０ml／分 検 出 法：ＵＶ吸収，２４４nm 保持時間：９.５分 15) 酸性，中性，塩基性の別：中性

【００１８】ＡＤ−２６−２ １) 形 状：無色結晶 ２) 融 点：２０８〜２１２℃ ３) 比施光度：〔α〕_D ²² ＋８４.５（ｃ＝１.３８，ア
セトン） ４) 分 子 量：４７１（ＥＩＭＳ） ５) 分 子 式：Ｃ₂₇Ｈ₃₇Ｏ₆ ６) 元素分析値（Ｃ₂₇Ｈ₃₇Ｏ₆として） 計算値：Ｃ；６８.７７ Ｈ；７.９１ Ｎ；
２.９７ 実測値：Ｃ，６８.６４ Ｈ；８.０７ Ｎ；
２.８７ ７) 紫外線吸収スペクトル：メタノール中 λ_max（ε）：238(31800), 244(32500), 253(sh) (nm) ８) 赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤法による主な吸
収を示す： （波数、cm-¹)：3420, 3300, 3220, 2950, 2930, 2860,
1740, 1700, 1620, 1450, 1440, 1380, 1350, 1190, 1
160, 1120, 1060, 1000, 970, 900, 780, 600

【００１９】９) ¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル（３００Ｍ
Ｈｚ，重クロロホルム中でのケミカルシフト，δpp
m）：1.00(3H,d,J=6.6Hz), 0.95-1.12(1H,m), 1.20-1.3
7(2H,m), 1.47(3H,s), 1.45-1.63(1H,m), 1.72(3H,dd,J
=6.5Hz,1.4Hz), 1.82(1H,dd,J=12.3Hz,12.5Hz), 1.82(3
H,s), 1.79-2.07(2H,m), 2.16(1H,br.d,J=12.5Hz), 2.2
8-2.44(1H,m), 3.10(1H,q,J=2.4Hz), 3.81(1H,br.d,J=
0.6Hz), 4.41(1H,s), 4.61(2H,d,J=2.3Hz), 4.80(2H,b
r.s), 5.00(1H,dd,J=10.5Hz,4.1Hz), 5.17(1H,s), 5.21
-5.41(3H,m), 5.53(1H,q,J=1.6Hz), 5.65-5.92(3H,m) ただし、s，d，t，q，br. は前記と同意義である。 10) ¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル（７５ＭＨｚ，重クロロ
ホルム中でのケミカルシフト，δppm）：１５．２（Ｃ
Ｈ_３）， １７．８（ＣＨ_３）， １９．０（Ｃ
Ｈ_３）， ２２．０（ＣＨ_３）， ２５．７（Ｃ
Ｈ_２）， ２７．７（ＣＨ_２）， ３３．９（Ｃ
Ｈ_２）， ３６．０（ＣＨ）， ４６．３（ＣＨ），
４８．４（ＣＨ_２）， ６８．０（ＣＨ_２）， ７０．
８（ＣＨ）， ７５．０（Ｑ）， ７６．４（ＣＨ），
８３．７（ＣＨ）， １１９．６（ＣＨ）， １２
１．０（ＣＨ）， １２３．４（ＣＨ）， １２６．１
（ＣＨ）， １２９．３（ＣＨ）， １３０．３（Ｃ
Ｈ）， １３３．７（Ｑ）， １３４．２（Ｑ）， １
３８．７（Ｑ）， １４２．５（ＣＨ）， １５６．４
（Ｑ）， １７３．２（Ｑ） ただし、ＣＨ，ＣＨ_２，ＣＨ₃，Ｑは前記と同意義であ
る。

【００２０】11) 呈色反応： 陽性：アニスアルデヒド 陰性：ニンヒドリン，硫酸セリウム，アンスロン，ナフ
トレゾルシン・硫酸12) 溶解性 可溶：メタノール，エタノール，アセトニトリル，アセ
トン，ジエチルエーテル，酢酸エチル，トルエン，クロ
ロホルム，塩化メチレン 難溶：水 13) 薄層クロマトグラフィー（担体，シリカゲルガラス
プレート６０Ｆ₂₅₄，０.２５mm，独メルク社製）： 展 開 溶 媒 Ｒf クロロホルム−メタノール（２０：１） ０.３９ トルエン−酢酸エチル（１：１） ０.３９ 14) 高速液体クロマトグラフィー： 担 体：ノバパックＣ₁₈ ４μm, ８×１００mm（日
本ミリポアリミテッド社製） 溶 媒 系：７５％アセトニトリル／０.１％トリフルオ
ロ酢酸 流 速：１.０ml／分 検 出 法：ＵＶ吸収，２４４nm 保持時間：１０.６分 15) 酸性，中性，塩基性の別：中性

【００２１】ＡＤ−２６−３ １) 形 状：無色粉末 ２) 分 子 量：５３７（ＥＩＭＳ） ３) 分 子 式：Ｃ₃₁Ｈ₃₉ＮＯ₇ ４) 元素分析値（Ｃ₃₁Ｈ₃₉ＮＯ₇として） 計算値：Ｃ；６９.２５ Ｈ；７.３１ Ｎ；
２.６１ 実測値：Ｃ，６８.３２ Ｈ；７.３８ Ｎ；
２.７７ ５) 紫外線吸収スペクトル：メタノール中 λ_max（ε）：238(sh), 244(45500), 252(sh), 268(sh)
(nm) ６) 赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤法による主な吸
収を示す： （波数、cm-¹)：3430, 2960, 2930, 2860, 1710, 1560,
1450, 1410, 1310, 1170, 1130, 1080, 1000, 970, 88
0, 830, 750

【００２２】７) ¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル（３００Ｍ
Ｈｚ，重クロロホルム中でのケミカルシフト，δpp
m）：1.00(3H,d,J=6.6Hz), 0.93-1.08(1H,m), 1.19-1.4
1(2H,m), 1.47(3H,m), 1.46-1.62(2H,m), 1.70(3H,dd,J
=6.5Hz,1.4Hz), 1.81(1H,t,J=12.3Hz), 1.77-2.07(2H,
m), 2.16(1H,br.d,J=12.3Hz), 2.28-2.44(1H,m), 3.30
(1H,br.t,J=1.8Hz), 4.20(1H,d,J=5.8Hz), 4.55(1H,br.
d,J=4.5Hz), 4.66(1H,dd,J=14.5Hz,2.3Hz), 4.72(1H,d
d,J=14.5Hz,2.3Hz), 4.74(1H,br.s), 4.81(1H,d,J=13.0
Hz), 4.98-5.08(2H,m), 5.25-5.42(3H,m), 5.63-5.87(4
H,m), 6.24-6.29(1H,m), 6.93-6.98(2H,m), 9.25(1H,b
r.s) ただし、s，d，t，q，br. は前記と同意義である。 ８) ¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル（７５ＭＨｚ，重クロロ
ホルム中でのケミカルシフト，δppm）：15.2(CH₃), 1
7.7(CH₃), 21.9(CH₃), 26.2(CH₂), 27.9(CH₂), 34.4(CH
₂), 36.0(CH), 45.7(CH), 48.3(CH₂), 64.1(CH₂), 64.8
(CH), 68.5(CH₂), 76.6(CH), 79.3(CH), 79.4(Q), 110.
4(CH), 115.9(CH), 119.9(CH), 122.1(CH), 122.2(Q),
123.1(CH), 123.4(CH), 126.2(CH), 129.1(CH), 130.3
(CH), 133.9(Q), 136.1(Q),139.6(Q), 142.9(CH), 161.
0(Q), 173.1(Q) ただし、ＣＨ，ＣＨ₂，ＣＨ₃，Ｑは前記と同意義であ
る。

【００２３】９) 呈色反応： 陽性：アニスアルデヒド，ニンヒドリン 陰性：硫酸セリウム，アンスロン，ナフトレゾルシン・
硫酸 10) 溶解性 可溶：メタノール，エタノール，アセトニトリル，アセ
トン，ジエチルエーテル，酢酸エチル，トルエン，クロ
ロホルム，塩化メチレン 難溶：水 11) 薄層クロマトグラフィー（担体，シリカゲルガラス
プレート６０Ｆ₂₅₄，０.２５mm，独メルク社製）： 展 開 溶 媒 Ｒf クロロホルム−メタノール（２０：１） ０.４４ トルエン−酢酸エチル（１：１） ０.３９ 12) 高速液体クロマトグラフィー： 担 体：ノバパックＣ₁₈ ４μm, ８×１００mm（日
本ミリポアリミテッド社製） 溶 媒 系：７５％アセトニトリル／０.１％トリフルオ
ロ酢酸 流 速：１.０ml／分 検 出 法：ＵＶ吸収，２４４nm 保持時間：８.６分 15) 酸性，中性，塩基性の別：中性

【００２４】生理活性物質ＡＤ−２６−１およびＡＤ−
２６−３はそれぞれＡＤ−２６のさらなる誘導体合成の
中間体としても用いることができる。すなわち、直接公
知の方法によりアシル化することによりＲ₁がアシル基
である化合物が製造できる。また、ＡＤ−２６−３を塩
基性物質（Ｎa₂ＣＯ₃，ＫＯＨなど）または酸（ＨＣl，
Ｈ₂ＳＯ₄）の存在下加水分解を行いＲ₂が水酸基である
化合物を製造し、さらに上記と同様にアシル化すること
によりＲ₂がアシル基である化合物を製造することがで
きる。アシル化はそれぞれアシル基に対応する酸をＤＤ
Ｃ等の脱水剤の存在下反応させるか、または上記酸の反
応性誘導体（ハロゲカ化物，無水物）を反応させること
により行うことができる。

【００２５】

【作用】以下に実験例を挙げて生理活性物質ＡＤ−２６
−１、ＡＤ−２６−２およびＡＤ−２６−３の抗線虫活
性ならびに節足動物に対する活性を試験法と共に示す。 実験例１ 抗線虫活性 セノラブヂチス属線虫（Caenorhabditis）に対する活性
を、イン・ビトロスクリーニング試験法によって評価し
た。すなわち、被試験化合物を５０％アセトンに溶解
し、マイクロプレート（８×１２well）の各well内に、
ダイリューターを用いて段階的濃度に薬液を希釈充填し
た。次に寒天培地表面に発育させた上記線虫をリン酸緩
衝液で洗い出し、線虫浮遊液を調製した。上記薬液を充
填したマイクロプレート１well宛０.２mlの線虫浮遊液
（線虫約１００雙を含む）を上乗せして各濃度の薬液に
線虫を暴露させた。薬剤の最終濃度は、１１.１１ppm〜
０.０００５ppmに調製した。感作後２４時間以内の運動
停止状態を実体顕微鏡で観察し、５０％運動阻止最小濃
度（ＩＣ₅₀）および１００％運動阻止最小濃度（ＩＣ
₁₀₀）により薬物の活性を評価した。その結果を〔表
２〕に示す。

【表２】

【００２６】実験例２ 節足動物に対する活性 アルテミア・サリナ（Artemia salina）に対する活性
を、ザ・ジャーナル・オブ・アンチバイオティクス（Th
e Journal of Antibiotics）第４２巻８号第１３０４頁
〜１３０７頁（１９８９年）に記された Blizzard らの
方法に準じたイン・ビトロスクリーニング方法によって
評価した。その結果、A. salina を死滅させるＡＤ−２
６−１，ＡＤ−２６−２およびＡＤ−２６−３の１００
％運動最小阻止濃度（ＩＣ₁₀₀）を〔表３〕に示す。

【表３】

【００２７】実験例３ ネズミ盲腸蟯虫 Syphacia obve
lata に対する駆虫活性 同居感染により Syphacia obvelata を感染させた８週
齢のマウスに対して、個々の化合物を所定濃度に混合し
た飼料を剖検時まで不断給与し、駆虫活性を調べた。感
染の有無は同居感染４週間後、各個体ごとに肛門周囲の
セロテープによる塗沫で虫卵検査を行い、確認し、虫卵
陽性マウスを１群５頭づつ用いた。投薬６日後、各マウ
スを剖検し、盲腸を摘出して、盲腸内の線虫数を実体顕
微鏡下（×２０倍）で調べ、線虫の有無、特に線虫数の
減少程度から寄生減少率＊を算出し化合物の効果を判定
した。その結果を〔表４〕に示す。 ＊：寄生の程度により以下の４段階（寄生指数）に評価
する。 ０：虫体の検出認めず ＋１：虫体１０雙
以下の検出 ＋２：虫体１０〜５０雙の検出 ＋３：虫体５０
雙以上の検出

【数１】

【００２８】

【表４】

【００２９】本発明化合物は低毒性で抗線虫活性および
節足動物に対する活性を有し、人間および動物の健康お
よび農業において、医学的または獣医学的あるいは農薬
学的に許容される処方により、駆虫剤、殺虫剤および殺
ダニ剤として、安全に適用することができる。すなわ
ち、本発明の生理活性物質ＡＤ−２６（化合物(Ｉ)）は
前記の実験例においても示されるとおり、強力な駆虫、
殺ダニ、殺虫作用を有し、とりわけ哺乳動物、例えばイ
ヌ，ネコなどの愛玩動物、牛，ブタ，ヒツジ，馬などの
経済動物の外部寄生虫・内部寄生虫の予防、治療剤とし
て有用である。例えば、シラミ，ハエ，チック，マイト
などの外部寄生虫の殺虫剤、殺ダニ剤として、ならび
に、例えば糸状虫，回虫，円虫，鉤虫，肺虫などの内部
寄生虫の駆虫剤として用いることができる。化合物
（Ｉ）は、通常医薬品として生理的に許容される賦形
剤、希釈剤などとともに散剤、錠剤，ペースト，カプセ
ル剤，水剤，注射剤として経口的または非経口的に投与
される。例えば経口的に投与する場合目的により異なる
がおおよそ体重１kg当たり１日平均量０.００５〜０.５
mgの割合で投与する。経口で投与する場合直接製剤を投
与しても良いし、動物飼料や飲料水に加えて投与するこ
ともできる。

【００３０】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説
明するが、これによって本発明が限定されるものではな
い。 実施例１ Streptomyces sp. ＡＬ−５５８２を Bact-Yeast Malt
Extract Agar（Difco社製）からなる斜面培地で培養し
て得られた培養物から１白金耳量の菌体を採取し、これ
を、予め、１２２℃で３０分間加熱処理を施した可溶性
澱粉３％、グルコース２％、コーン・スチープ・リカー
（ＣＳＬ）１％、大豆粉１％、ポリペプトン０.５％、
食塩０.３％、炭酸カルシウム０.５％、pＨ７からなる
種培地４０mlを含む２００ml容フラスコに接種して、２
８℃で２日間、振盪培養した。次に、このようにして得
られた種培養液１mlを、予め、１２２℃で３０分間加熱
処理を施したデキストリン３％、グルコース２％、ＣＳ
Ｌ ０.５％、大豆粉０.５％、硫酸アンモニウム０.５
％、食塩０.２％、塩化コバルト０.００１％、炭酸カル
シウム０.５％、pＨ７からなる醗酵培地４０mlを含む２
００ml容フラスコに移植して、２８℃で７日間振盪培養
した。

【００３１】実施例２ 実施例１のようにして得られた培養液（１０リットル）
を遠心分離により菌体を集めた。得られた菌体をアセト
ン（２リットル）に懸濁し、３０分間撹拌した。遠心分
離により、沈澱物を除去し、得られた液を減圧下で濃縮
して、アセトンを留去した後、水を加えて１リットルに
した。濃塩酸でｐＨを３に調整後、酢酸エチル（１リッ
トル）で２回抽出した。酢酸エチル相を集め、これを水
（３００ml）、３％炭酸ナトリウム水溶液（１リット
ル）、水（５００ml）で２回ずつ順次洗浄した後、濃縮
し濃縮液２３.１gを得た。濃縮液にトルエンを加えて１
００mlとし、これをシリカゲル（５００ml，Kieselgel
６０，７０〜２３０メッシュ，独メルク社製）のカラ
ムにかけた後、吸着物をトルエン、トルエン−酢酸エチ
ル（１９：１〜４：１）で順次溶出したところ、トルエ
ン−酢酸エチル（１９：１〜１０：１）による溶出部か
らはＡＤ−２６−１を含む粗画分（１.２８ｇ）が、ト
ルエン−酢酸エチル（４：１）による溶出部からはＡＤ
−２６−２およびＡＤ−２６−３を含む粗画分（合計
３.７５ｇ）が得られた。

【００３２】ＡＤ−２６−１を含む粗画分を Sephadex
ＬＨ−２０（５５０ml，ファルマシア社製）のカラムに
付した後、メタノールで溶出した。ＡＤ−２６−１を含
む画分を集めて、減圧下に濃縮したところ、油状物（４
５４mg）が得られた。この油状物を Sephadex ＬＨ−２
０（５５０ml）のカラムにかけて、ヘキサン−塩化メチ
レン−メタノール（１０：１０：１）で溶出した。ＡＤ
−２６−１を含む画分を濃縮したところ、粗物質３６９
mgが得られた。この粗物質を更に分取高速液体クロマト
グラフィー（充填剤：ＯＤＳ−ＡＭ １２０−Ｓ１０
（山村化学研究所製）、カラム：ＬＣ５０ＨＪ ５０mm
×２１０mm（栗田工業社製），展開溶媒：６５％アセト
ニトリル，流速：４０ml／分，検出：ＵＶ ２４０nm）
にかけ、保持時間５０〜７０分のピークを集めて濃縮乾
固した。乾固物をメタノールに溶解後結晶化して、ＡＤ
−２６−１の無色結晶（１８７mg）を得た。

【００３３】ＡＤ−２６−２およびＡＤ−２６−３を含
む粗画分を Sephadex ＬＨ−２０（１１００ml）のカラ
ムに付した後、メタノールで溶出した。ＡＤ−２６−２
およびＡＤ−２６−３を含む画分を濃縮して油状物（合
計１.１５ｇ）を得た。この油状物を Sephadex ＬＨ−
２０（１８００ml）のカラムに付した後、ヘキサン−ト
ルエン−メタノール（３：１：１）で溶出した。溶出液
を濃縮したところ、ＡＤ−２６−２を含む画分からは、
２７０mgの粗物質が、ＡＤ−２６−３を含む画分から
は、４３５mgの粗物質が得られた。ＡＤ−２６−２を含
む粗物質をジイソプロピルエーテルに溶解後、結晶化
し、ＡＤ−２６−２の無色結晶（１９０mg）を得た。Ａ
Ｄ−２６−３を含む粗物質を分取高速液体クロマトグラ
フィー（充填剤：ＯＤＳ−ＡＭ １２０−Ｓ１０（山村
化学研究所製）、カラム：ＬＣ５０ＨＪ ５０mm×２１
０mm（栗田工業社製），展開溶媒：６０％アセトニトリ
ル，流速：４０ml／分，検出：ＵＶ ２４４nm）に付
し、保持時間７８〜１７５分のピークを集めた後、濃縮
した。得られた濃縮物（３６０mg）をアセトン−水で処
理して、ＡＤ−２６−３の無色粉末（３２６mg）を得
た。

【００３４】

【発明の効果】本発明の新規化合物ＡＤ−２６−１、Ａ
Ｄ−２６−２、ＡＤ−２６−３およびその誘導体は、駆
虫剤、殺虫剤及び殺ダニ剤として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:465）

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式 【化１】 〔式中、Ｒ₁は水素原子またはアシル基を、Ｒ₂は水素原
   子またはアシル化されていてもよい水酸基を示す〕で表
   される化合物。
2. 【請求項２】請求項１においてＲ₁およびＲ₂がともに水
   素原子である生理活性物質ＡＤ−２６−１。
3. 【請求項３】請求項１においてＲ₁がカルバミル基でＲ₂
   が水素原子である生理活性物質ＡＤ−２６−２。
4. 【請求項４】請求項１においてＲ₁が水素原子でＲ₂が２
   −ピロリルカルボキシ基である生理活性物質ＡＤ−２６
   −３。
5. 【請求項５】ストレプトミセス属に属する生理活性物質
   ＡＤ−２６の生産能を有する微生物を培地に培養し、培
   養液中に生理活性物質ＡＤ−２６を生成蓄積せしめ、こ
   れを採取することを特徴とする請求項１記載の生理活性
   物質ＡＤ−２６の製造法。
6. 【請求項６】請求項１記載の化合物を含有してなる駆
   虫、殺ダニもしくは殺虫剤。
7. 【請求項７】生理活性物質ＡＤ−２６の生産能を有する
   ストレプトミセス エスピー・ＡＬ−５５７８２株。