JPH07102129B2 - 植物の葉肉プロトプラストの培養法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は植物の葉肉プロトプラストの培養法に関する。

（従来の技術） 表面殺菌した植物の葉片を細刻し、これを細胞単離酵素
及び細胞壁分解酵素の混合溶液に漬けて細胞間の接着物
質や細胞壁を取り除くことにより単細胞の裸の細胞すな
わちプロトプラストが得られる。

このプロトプラストを培地に入れ細胞分裂させ培養する
ことが、従来より行われている。

従来は、単離したプロトプラストを液体培地または寒天
培地に置床し、これを恒温培養装置に収容して所定の温
度と照度で培養するのであるが、植物の葉肉細胞は栽培
条件や育成条件によってその生理的活性が著しく変って
くるため、葉肉プロトプラストの培養は常に成功すると
は限らず、失敗も多かった。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明は、葉肉プロトプラストに環境ストレス耐性を付
与することにより、培養の成功率を向上することを目的
とする。

（問題点を解決するための手段） 本発明では、単離した葉肉プロトプラストを培地に置床
してからこれを暗黒下で24〜72時間２〜５℃の低温で処
理した後、従来どおり25〜30℃の低照度（100〜200ルッ
クス）で培養する。

（作用） このように従来の培養に入る前に低温処理すると、葉肉
プロトプラストの外周を覆う薄い原形質膜やその内側の
原形質が引きしまり、環境ストレス耐性が付与され細胞
が活性化する。

（実施例） たばこの葉肉プロトプラストの実施例について説明す
る。

採取した葉片を次のように表面殺菌する。

先ず葉片をオスバン水100〜200倍液に数秒漬け、次にエ
タノール70％液に数秒漬けたら、クリーンベンチ内に移
し、そこでアンチホルミン2.5倍〜５倍に５分から15分
ぐらい漬ける。そしてその後、この葉片を殺菌水で５分
程繰り返し洗浄する。

このように表面殺菌処理を済ませたら葉片を殺菌瀘紙に
のせ、長さ２〜5mm角の細切片に細刻する。

次にこの細切片を所定の無菌酵素液20mlに１昼夜漬け、
そしてその液を２〜４重のガーゼを差し込んだ瀘斗で瀘
過し、細胞壁を取り除く。続いて遠心管に入れて0.5〜
0.7モルのマンニトール液で２〜３回洗浄する。

その後、遠心管より沈降したプロトプラストを取り出し
シャーレ内の液体培地に移し、冷蔵庫に入れ暗黒下で４
℃に保ち低温処理する。

低温処理後、このシャーレを恒温培養装置に収容し蛍光
灯による低照度（100〜200ルックス）の28℃でプロトプ
ラストを培養する。

低温処理の処理時間を変え、これと低温処理をしない従
来法による細胞の分裂数の割合（培養開始後15日目）と
を比較すると、別紙の比較表のとおりである。

この比較表より明らかなとおり、本発明の低温処理をし
たものは、低温処理をしない従来法のものに比較して細
胞分裂数が多い。また低温処理の処理時間のうち48時間
が他の24時間または72時間よりも細胞分裂の結果が良好
であることが判る。

トマト等の野菜の葉肉プロトプラストの場合にも、たば
こと同様の結果が観察された。

（発明の効果） これを要するに本発明の低温処理を施せば、葉肉のプロ
トプラストの耐寒性が増し環境ストレス耐性が向上する
ので、プロトプラストの培養の成功率が向上した植物体
の再生や細胞融合への利用にも役に立つ。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】培地に置床した葉肉プロトプラストを暗黒
   下で24〜72時間の間、２〜５℃の低温で処理した後、25
   〜30℃の低照度（100〜200ルックス）で培養することを
   特徴とする、植物の葉肉プロトプラストの培養法。