JPH0698790A - 無細胞蛋白質合成系によるポリペプチド の製造法 - Google Patents
無細胞蛋白質合成系によるポリペプチド の製造法Info
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- JPH0698790A JPH0698790A JP8148092A JP8148092A JPH0698790A JP H0698790 A JPH0698790 A JP H0698790A JP 8148092 A JP8148092 A JP 8148092A JP 8148092 A JP8148092 A JP 8148092A JP H0698790 A JPH0698790 A JP H0698790A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 無細胞蛋白質合成系において高発現なプロモ
ーター（ｌａｃまたはｔａｃ）にクロラムフェニコール
・アセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）構造遺伝子、
およびその下流にポリペプチド構造遺伝子を連結したプ
ラスミドを用い、連続式無細胞蛋白質合成系によって融
合蛋白質を生成することを特徴とするポリペプチドの製
造方法。 【効果】 各種の生理活性を有するポリペプチドを効率
的に製造できる。
ーター（ｌａｃまたはｔａｃ）にクロラムフェニコール
・アセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）構造遺伝子、
およびその下流にポリペプチド構造遺伝子を連結したプ
ラスミドを用い、連続式無細胞蛋白質合成系によって融
合蛋白質を生成することを特徴とするポリペプチドの製
造方法。 【効果】 各種の生理活性を有するポリペプチドを効率
的に製造できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ポリペプチドの製造法
に関するものである。詳しくは、無細胞蛋白質合成系に
よって様々な生理活性を有するポリペプチドを製造する
方法に関する。
に関するものである。詳しくは、無細胞蛋白質合成系に
よって様々な生理活性を有するポリペプチドを製造する
方法に関する。
【０００２】本発明の方法によって製造されたポリペプ
チドは医療、食品、化学、研究用に使用される。
チドは医療、食品、化学、研究用に使用される。
【０００３】
【従来の技術及び問題点】ポリペプチドの製造方法とし
て現在広く用いられているのは、化学合成法、細胞
抽出法、遺伝子組換え細胞法、の３つの方法である。
しかしの方法は連結したアミノ酸数にして３０〜４０
といういわゆる低分子ペプチドにしか適用できず、また
ラセミ化等による副産物からの目的ペプチドの精製とい
った複雑な後工程を要する。固相合成法によってペプチ
ド鎖長は伸ばすことが出来るようになった現状でも、ポ
リペプチド製造法として用いるには今後の技術開発を要
する生産手段と言える。細胞抽出法は、最も古くから
用いられてきた方法で、目的とするポリペプチドを含む
組織、細胞等から様々なクロマトグラフィー、分離、濃
縮等の工程を経て目的物を抽出する方法である。この方
法のもっとも大きな欠点は、ごく微量にしか含まれてい
ないポリペプチドを取り出そうとした場合、大量の材料
から抽出を開始しなければならず、純粋なポリペプチド
を取得するためには、多段の精製工程を経るうちに当然
ながら回収率が激減することである。遺伝子組換え細
胞法は、目的とする比較的長鎖のポリペプチドの構造遺
伝子を導入した組換え細胞を培養することによって増殖
させ、細胞中における含有率を増加させたポリペプチド
を分離精製する方法である。現在医薬品ポリペプチドの
製造によく用いられているが、この方法の原理的な欠点
は、細胞が本来有していないポリペプチドを生産させよ
うとした場合に、細胞内の蛋白質分解酵素によって宿主
にとっての異種蛋白質として攻撃されたり、生産された
ポリペプチドが不溶化状態に変性しやすいということで
ある。この様に変性したポリペプチドは本来有する生理
活性を失ってしまい、再度正しい生理活性を持つような
高次構造をもったポリペプチドを作るためには複雑な工
程を経なければならない。
て現在広く用いられているのは、化学合成法、細胞
抽出法、遺伝子組換え細胞法、の３つの方法である。
しかしの方法は連結したアミノ酸数にして３０〜４０
といういわゆる低分子ペプチドにしか適用できず、また
ラセミ化等による副産物からの目的ペプチドの精製とい
った複雑な後工程を要する。固相合成法によってペプチ
ド鎖長は伸ばすことが出来るようになった現状でも、ポ
リペプチド製造法として用いるには今後の技術開発を要
する生産手段と言える。細胞抽出法は、最も古くから
用いられてきた方法で、目的とするポリペプチドを含む
組織、細胞等から様々なクロマトグラフィー、分離、濃
縮等の工程を経て目的物を抽出する方法である。この方
法のもっとも大きな欠点は、ごく微量にしか含まれてい
ないポリペプチドを取り出そうとした場合、大量の材料
から抽出を開始しなければならず、純粋なポリペプチド
を取得するためには、多段の精製工程を経るうちに当然
ながら回収率が激減することである。遺伝子組換え細
胞法は、目的とする比較的長鎖のポリペプチドの構造遺
伝子を導入した組換え細胞を培養することによって増殖
させ、細胞中における含有率を増加させたポリペプチド
を分離精製する方法である。現在医薬品ポリペプチドの
製造によく用いられているが、この方法の原理的な欠点
は、細胞が本来有していないポリペプチドを生産させよ
うとした場合に、細胞内の蛋白質分解酵素によって宿主
にとっての異種蛋白質として攻撃されたり、生産された
ポリペプチドが不溶化状態に変性しやすいということで
ある。この様に変性したポリペプチドは本来有する生理
活性を失ってしまい、再度正しい生理活性を持つような
高次構造をもったポリペプチドを作るためには複雑な工
程を経なければならない。
【０００４】
【問題を解決するための手段】この様な従来の技術の欠
点を克服する方法として旧ソ連・蛋白質研究所のスピリ
ンらが〔サイエンス、２４２巻、１１６２−１１６４
頁、１９８８年〕に発表した連続無細胞蛋白質合成法が
あげられる。古来より遺伝子産物の解析に用いられてき
た無細胞蛋白質合成系は、その生産性が低いためポリペ
プチド生産には用いられなかったが、基質溶液の供給と
反応産物、副産物の除去を連続的に行うことで、生産性
が高められることが示されたのである。
点を克服する方法として旧ソ連・蛋白質研究所のスピリ
ンらが〔サイエンス、２４２巻、１１６２−１１６４
頁、１９８８年〕に発表した連続無細胞蛋白質合成法が
あげられる。古来より遺伝子産物の解析に用いられてき
た無細胞蛋白質合成系は、その生産性が低いためポリペ
プチド生産には用いられなかったが、基質溶液の供給と
反応産物、副産物の除去を連続的に行うことで、生産性
が高められることが示されたのである。
【０００５】本発明は、このような連続無細胞蛋白質合
成法の有する利点に着目し、これを更に発展せしめて工
業レベルにまで高める目的でなされたものであって、本
発明は、大腸菌抽出液を用いた連続式無細胞蛋白質合成
系によってポリペプチドを製造する方法において、低分
子ポリペプチドが無細胞反応液中で分解されるのを防
ぎ、生産性を高めるためになされたものである。
成法の有する利点に着目し、これを更に発展せしめて工
業レベルにまで高める目的でなされたものであって、本
発明は、大腸菌抽出液を用いた連続式無細胞蛋白質合成
系によってポリペプチドを製造する方法において、低分
子ポリペプチドが無細胞反応液中で分解されるのを防
ぎ、生産性を高めるためになされたものである。
【０００６】すなわち本発明は、無細胞蛋白質合成系に
おいて高発現なプロモーター、クロラムフェニコール・
アセチルトランスフェラーゼ構造遺伝子（ＣＡＴ遺伝
子）、必要あれば配列特異的プロテアーゼで切断可能な
アミノ酸配列（例えばＩｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒ
ｇ）をコードするＤＮＡ、及び、目的とするポリペプチ
ドをコードするポリペプチド構造遺伝子を含有するプラ
スミドを新たに造成するのに成功し、このプラスミドを
用いて連続式無細胞蛋白質合成系によって融合蛋白質を
先ず製造するものである。
おいて高発現なプロモーター、クロラムフェニコール・
アセチルトランスフェラーゼ構造遺伝子（ＣＡＴ遺伝
子）、必要あれば配列特異的プロテアーゼで切断可能な
アミノ酸配列（例えばＩｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒ
ｇ）をコードするＤＮＡ、及び、目的とするポリペプチ
ドをコードするポリペプチド構造遺伝子を含有するプラ
スミドを新たに造成するのに成功し、このプラスミドを
用いて連続式無細胞蛋白質合成系によって融合蛋白質を
先ず製造するものである。
【０００７】次いで、得られた融合蛋白質を精製した
後、目的ポリペプチドからＣＡＴ蛋白質を切断分離する
ことにより目的ポリペプチドが効率的に得られる。この
場合、融合部分に上記した切断可能なアミノ酸配列を挿
入しておけば、これを特異的プロテアーゼ（例えばファ
クターＸａ）で切断することができ、更に効率的に目的
ポリペプチドを製造することができる。
後、目的ポリペプチドからＣＡＴ蛋白質を切断分離する
ことにより目的ポリペプチドが効率的に得られる。この
場合、融合部分に上記した切断可能なアミノ酸配列を挿
入しておけば、これを特異的プロテアーゼ（例えばファ
クターＸａ）で切断することができ、更に効率的に目的
ポリペプチドを製造することができる。
【０００８】本発明に係るプラスミドを用いて目的とす
るポリペプチドを製造するには、具体的には次のように
すればれよい。
るポリペプチドを製造するには、具体的には次のように
すればれよい。
【０００９】すなわち、１）無細胞反応液中で安定な蛋
白質ＣＡＴ遺伝子のＣ末端付近に目的とするポリペプチ
ド構造遺伝子を翻訳枠が一致するように連結する。この
時ＣＡＴ遺伝子の上流には大腸菌において高発現を示す
プロモーター（ｌａｃまたは、ｔａｃ）を用いる。これ
らを１つのプラスミド上に配置する。２）またＣＡＴ遺
伝子とポリペプチド遺伝子との境界には配列特異的プロ
テアーゼで切断可能なアミノ酸配列から推定されるＤＮ
Ａ配列を挿入しておく。３）この様に構築したプラスミ
ドＤＮＡを常法に従って調製し、連続無細胞蛋白質合成
系の鋳型として加える。４）合成された融合ポリペプチ
ドは大腸菌抽出液由来の夾雑蛋白質を除くため、ＣＡＴ
に特異的に親和性のあるアフィニティークロマトグラフ
ィーで精製する。５）精製された融合蛋白質の融合部分
を特異的プロテアーゼで切断する。６）再びＣＡＴに親
和性のあるアフィニティークロマトグラフィーでＣＡＴ
蛋白質のみを吸着させ、目的とするポリペプチドを溶出
液中に得る。
白質ＣＡＴ遺伝子のＣ末端付近に目的とするポリペプチ
ド構造遺伝子を翻訳枠が一致するように連結する。この
時ＣＡＴ遺伝子の上流には大腸菌において高発現を示す
プロモーター（ｌａｃまたは、ｔａｃ）を用いる。これ
らを１つのプラスミド上に配置する。２）またＣＡＴ遺
伝子とポリペプチド遺伝子との境界には配列特異的プロ
テアーゼで切断可能なアミノ酸配列から推定されるＤＮ
Ａ配列を挿入しておく。３）この様に構築したプラスミ
ドＤＮＡを常法に従って調製し、連続無細胞蛋白質合成
系の鋳型として加える。４）合成された融合ポリペプチ
ドは大腸菌抽出液由来の夾雑蛋白質を除くため、ＣＡＴ
に特異的に親和性のあるアフィニティークロマトグラフ
ィーで精製する。５）精製された融合蛋白質の融合部分
を特異的プロテアーゼで切断する。６）再びＣＡＴに親
和性のあるアフィニティークロマトグラフィーでＣＡＴ
蛋白質のみを吸着させ、目的とするポリペプチドを溶出
液中に得る。
【００１０】このようにして、ヒトカルシトニン前駆体
をはじめとして各種のポリペプチドを極めて効率的に製
造することができる。
をはじめとして各種のポリペプチドを極めて効率的に製
造することができる。
【００１１】
【実施例】以下に、例としてヒトカルシトニン（以下、
ｈＣＴと略称することもある）前駆体を製造する例を実
施例として述べる。
ｈＣＴと略称することもある）前駆体を製造する例を実
施例として述べる。
【００１２】１）ポリペプチド構造遺伝子の合成 ヒトカルシトニン成熟体は、下記の表１に示される配列
表の配列番号１に示す構造で表され、そのＣ末端はアミ
ド化されている。
表の配列番号１に示す構造で表され、そのＣ末端はアミ
ド化されている。
【００１３】
【表１】
【００１４】目的とするｈＣＴ前駆体は、後でアミド化
されるように配列表の配列番号１（表１）のＣ末端にＧ
ｌｙのついた下記の表２に示される配列表の配列番号２
で表されるポリペプチドである。
されるように配列表の配列番号１（表１）のＣ末端にＧ
ｌｙのついた下記の表２に示される配列表の配列番号２
で表されるポリペプチドである。
【００１５】
【表２】
【００１６】さらに、特異的プロテアーゼ（ファクター
Ｘａ：宝酒造）で切断可能な配列（下記の表３に示され
る配列表の配列番号３）をＮ末端に有するようにデザイ
ンした。
Ｘａ：宝酒造）で切断可能な配列（下記の表３に示され
る配列表の配列番号３）をＮ末端に有するようにデザイ
ンした。
【００１７】
【表３】
【００１８】図１にアミノ酸配列と合成したＤＮＡ配列
を示した。ＤＮＡは、Ｃ１〜Ｃ９の９断片に分け、ＤＮ
Ａ合成装置（アプライドバイオシステムズ社製）を用い
てホスホアミダイト法によって各々合成し、逆相高速液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で０．１Ｍトリエチ
ルアミン酢酸（ｐＨ７．５）−アセトニトリルの濃度勾
配溶出によって精製した。精製した合成ＤＮＡを乾固し
た後、ＴＥ緩衝液（１０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ８．
０）、１ｍＭ ＥＤＴＡ）に溶解した。対合する１本鎖
ＤＮＡ同志をアニールして２本鎖ＤＮＡとした後、５’
末端をポリヌクレオチドキナーゼでリン酸化し、ＤＮＡ
リガーゼで連結させてｈＣＴ前駆体（以下ｐｈＣＴと略
称）ＤＮＡとした。これらの実験操作はモレキュラーク
ローニング第二版（コールドスプリングハーバーラボラ
トリー出版）に記載されている常法によった。
を示した。ＤＮＡは、Ｃ１〜Ｃ９の９断片に分け、ＤＮ
Ａ合成装置（アプライドバイオシステムズ社製）を用い
てホスホアミダイト法によって各々合成し、逆相高速液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で０．１Ｍトリエチ
ルアミン酢酸（ｐＨ７．５）−アセトニトリルの濃度勾
配溶出によって精製した。精製した合成ＤＮＡを乾固し
た後、ＴＥ緩衝液（１０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ８．
０）、１ｍＭ ＥＤＴＡ）に溶解した。対合する１本鎖
ＤＮＡ同志をアニールして２本鎖ＤＮＡとした後、５’
末端をポリヌクレオチドキナーゼでリン酸化し、ＤＮＡ
リガーゼで連結させてｈＣＴ前駆体（以下ｐｈＣＴと略
称）ＤＮＡとした。これらの実験操作はモレキュラーク
ローニング第二版（コールドスプリングハーバーラボラ
トリー出版）に記載されている常法によった。
【００１９】２）ＣＡＴ−ｐｈＣＴキメラプラスミドの
構築 ｌａｃプロモーター下流にＣＡＴ遺伝子がクローニング
されたｐＬＣ６のＣＡＴ遺伝子内にあるＮｃｏｌ切断部
位と３’末端のＨｉｎｄIII 切断部位に、上記１）のよ
うに合成したｈｐＣＴ遺伝子を公知の常法によって挿入
し、ｐＬＣ／ＣＴを構築した。（図２参照）
構築 ｌａｃプロモーター下流にＣＡＴ遺伝子がクローニング
されたｐＬＣ６のＣＡＴ遺伝子内にあるＮｃｏｌ切断部
位と３’末端のＨｉｎｄIII 切断部位に、上記１）のよ
うに合成したｈｐＣＴ遺伝子を公知の常法によって挿入
し、ｐＬＣ／ＣＴを構築した。（図２参照）
【００２０】３）連続式無細胞蛋白質合成の実施 本発明者らが考案した実験装置を使用した。概略を図３
に示した。反応容器はポリカーボネート製で反応液部分
は１ｍｌである。図中の限外濾過膜としては分子量１０
万ダルトンを排除限界とするものを用いた。（例えばア
ミコン社製ＹＭ１００）
に示した。反応容器はポリカーボネート製で反応液部分
は１ｍｌである。図中の限外濾過膜としては分子量１０
万ダルトンを排除限界とするものを用いた。（例えばア
ミコン社製ＹＭ１００）
【００２１】大腸菌抽出液（以下Ｓ３０と略称）は常法
によって調製した。（例えばプラット、トランスクリプ
ション・アンド・トランスレーション、１７９頁、ＩＲ
Ｌプレス参照）
によって調製した。（例えばプラット、トランスクリプ
ション・アンド・トランスレーション、１７９頁、ＩＲ
Ｌプレス参照）
【００２２】無細胞反応液は、下記する表４に示すよう
な組成からなる。また供給液は、下記する表５に示す組
成からなり、１時間当り２ｍｌの速度でＨＰＬＣポンプ
で反応槽に送った。連続式無細胞蛋白質合成系において
合成されたＣＡＴ−ｐｈＣＴ融合蛋白質はＣＡＴの酵素
活性で測定した。（例えばショー、メソッド・イン・エ
ンザイモロジー、４３巻、７３７頁、１９７５年参照）
図４に融合蛋白質の合成の経時変化をＣＡＴ活性で表し
た。
な組成からなる。また供給液は、下記する表５に示す組
成からなり、１時間当り２ｍｌの速度でＨＰＬＣポンプ
で反応槽に送った。連続式無細胞蛋白質合成系において
合成されたＣＡＴ−ｐｈＣＴ融合蛋白質はＣＡＴの酵素
活性で測定した。（例えばショー、メソッド・イン・エ
ンザイモロジー、４３巻、７３７頁、１９７５年参照）
図４に融合蛋白質の合成の経時変化をＣＡＴ活性で表し
た。
【００２３】
【表４】
【００２４】
【表５】
【００２５】４）ｐｈＣＴの精製 約２０時間の連続合成後、全合成液をクロラムフェニコ
ールを担体（例えばファルマシア・ＣＨセファロースＣ
Ｌ４Ｂ）に結合させたアフィニティーカラムに吸着さ
せ、夾雑蛋白質を５０ｍＭトリス塩酸ｐＨ７．６、０．
３Ｍ塩化ナトリウムで洗浄し、除いた。（アフィニティ
ーカラムの調製は、ザイデンザイグら、ＦＥＢＳレター
ズ、６２巻、２６６頁、１９７６年参照）カラムからの
溶出は同じ溶液に１ｍｇ／ｍｌのクロラムフェニコール
を含む溶液で行った。溶出液を５０ｍＭトリス塩酸ｐＨ
７．６、０．１Ｍ塩化ナトリウムに対して透析し、クロ
ラムフェニコールを除いた。溶液の一部を取ってＳＤＳ
−ＰＡＧＥで単一バンドに精製されていることを確認し
た後、融合蛋白質１００μｇに対して、ファクターＸａ
（宝酒造製）を１μｇ加え、３０℃で２４時間保温し、
ＣＡＴとｐｈＣＴに分解した。この溶液を再び上記のア
フィニティーカラムに加え、未吸着部分及び５０ｍＭト
リス塩酸ｐＨ７．６、０．３Ｍ塩化ナトリウムで溶出さ
れる画分を分取した。この画分を凍結乾固し、０．１％
トリフルオロ酢酸に溶解し、逆相ＨＰＬＣで精製した。
溶出は０．１％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル
の濃度勾配によった。溶出したｐｈＣＴを凍結乾固し、
２０μｇのｐｈＣＴを得た。その一部を取って、ペプチ
ドシーケンサー（アプライドバイオシステムズ社製）で
分析したところ、予想された配列表の配列番号２のアミ
ノ酸配列と一致した。
ールを担体（例えばファルマシア・ＣＨセファロースＣ
Ｌ４Ｂ）に結合させたアフィニティーカラムに吸着さ
せ、夾雑蛋白質を５０ｍＭトリス塩酸ｐＨ７．６、０．
３Ｍ塩化ナトリウムで洗浄し、除いた。（アフィニティ
ーカラムの調製は、ザイデンザイグら、ＦＥＢＳレター
ズ、６２巻、２６６頁、１９７６年参照）カラムからの
溶出は同じ溶液に１ｍｇ／ｍｌのクロラムフェニコール
を含む溶液で行った。溶出液を５０ｍＭトリス塩酸ｐＨ
７．６、０．１Ｍ塩化ナトリウムに対して透析し、クロ
ラムフェニコールを除いた。溶液の一部を取ってＳＤＳ
−ＰＡＧＥで単一バンドに精製されていることを確認し
た後、融合蛋白質１００μｇに対して、ファクターＸａ
（宝酒造製）を１μｇ加え、３０℃で２４時間保温し、
ＣＡＴとｐｈＣＴに分解した。この溶液を再び上記のア
フィニティーカラムに加え、未吸着部分及び５０ｍＭト
リス塩酸ｐＨ７．６、０．３Ｍ塩化ナトリウムで溶出さ
れる画分を分取した。この画分を凍結乾固し、０．１％
トリフルオロ酢酸に溶解し、逆相ＨＰＬＣで精製した。
溶出は０．１％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル
の濃度勾配によった。溶出したｐｈＣＴを凍結乾固し、
２０μｇのｐｈＣＴを得た。その一部を取って、ペプチ
ドシーケンサー（アプライドバイオシステムズ社製）で
分析したところ、予想された配列表の配列番号２のアミ
ノ酸配列と一致した。
【００２６】
【発明の効果】本発明は従来のポリペプチド製造法（化
学合成法、細胞抽出法、遺伝子組換え細胞法）の欠点を
すべて補うものであり、従来の方法では製造できなかっ
たポリペプチドの製造を可能にした。さらに従来の連続
式無細胞蛋白質合成法における生産効率を高めるため、
分解され易いポリペプチドを無細胞液中で安定なＣＡＴ
蛋白質との融合蛋白質の形で発現させる手法を用いた。
この方法を用いることで、任意の生理活性ポリペプチド
の製造が可能となる。
学合成法、細胞抽出法、遺伝子組換え細胞法）の欠点を
すべて補うものであり、従来の方法では製造できなかっ
たポリペプチドの製造を可能にした。さらに従来の連続
式無細胞蛋白質合成法における生産効率を高めるため、
分解され易いポリペプチドを無細胞液中で安定なＣＡＴ
蛋白質との融合蛋白質の形で発現させる手法を用いた。
この方法を用いることで、任意の生理活性ポリペプチド
の製造が可能となる。
【図１】上段にデザインしたｐｈＣＴのアミノ酸配列を
示し、Ｎ末端側はＣＡＴに融合させたときの、ファクタ
ーＸａの切断部位であり、下段にはアミノ酸配列に対応
するＤＮＡ配列とＣ１〜Ｃ９のＤＮＡ断片の位置を示
す。
示し、Ｎ末端側はＣＡＴに融合させたときの、ファクタ
ーＸａの切断部位であり、下段にはアミノ酸配列に対応
するＤＮＡ配列とＣ１〜Ｃ９のＤＮＡ断片の位置を示
す。
【図２】ＰＬＣ／ＣＴキメラプラスミドの構築図であ
る。
る。
【図３】連続式無細胞蛋白質合成系の概略を示す。
【図４】連続無細胞系によって合成されたＣＡＴ−ｐｈ
ＣＴ融合蛋白質の量をＣＡＴ活性で表した場合の経時変
化を示す。
ＣＴ融合蛋白質の量をＣＡＴ活性で表した場合の経時変
化を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 高 原 義 昌 茨城県つくば市観音台１丁目25番14号 株 式会社神戸製鋼所筑波研究地区内
Claims (2)
- 【請求項１】 無細胞蛋白質合成系において高発現なプ
ロモーター（ｌａｃまたはｔａｃ）にクロラムフェニコ
ール・アセチルトランスフェラーゼ（以下ＣＡＴと略
称）構造遺伝子、およびその下流にポリペプチド構造遺
伝子を連結したプラスミドを用い、連続式無細胞蛋白質
合成系によって融合蛋白質を生成することを特徴とする
ポリペプチドの製造方法。 - 【請求項２】 請求項１記載の製造法によって製造され
た融合蛋白質をアフィニティークロマトグラフィーで精
製後、ＣＡＴ蛋白質とポリペプチドの境界で切断するこ
とによりポリペフチドを回収することを特徴とする方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8148092A JPH0698790A (ja) | 1992-03-04 | 1992-03-04 | 無細胞蛋白質合成系によるポリペプチド の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8148092A JPH0698790A (ja) | 1992-03-04 | 1992-03-04 | 無細胞蛋白質合成系によるポリペプチド の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0698790A true JPH0698790A (ja) | 1994-04-12 |
Family
ID=13747569
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8148092A Pending JPH0698790A (ja) | 1992-03-04 | 1992-03-04 | 無細胞蛋白質合成系によるポリペプチド の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0698790A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005503157A (ja) * | 2001-09-17 | 2005-02-03 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 組換え生産においてタンパク質の溶解性、発現率及び活性を増大させるための方法 |
-
1992
- 1992-03-04 JP JP8148092A patent/JPH0698790A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005503157A (ja) * | 2001-09-17 | 2005-02-03 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 組換え生産においてタンパク質の溶解性、発現率及び活性を増大させるための方法 |
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