JPH0698773A - プラズモジウム・ファルシパルムの抗原をコードするｄｎａ分子 - Google Patents
プラズモジウム・ファルシパルムの抗原をコードするｄｎａ分子Info
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
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- A61K39/015—Hemosporidia antigens, e.g. Plasmodium antigens
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 プラズモジウム・ファルシパルム(Plasmosiu
m falciparum)感染に対する防御免疫を付与するのに好
適な抗原性を有する合成ペプチドおよび合成ポリペプチ
ドをコードしているＤＮＡ分子、該ＤＮＡを含有してい
るベクター、および該ベクターを含有している宿主細胞
の提供。 【構成】 ファルシパルム点在性反復抗原（ＦＩＲＡ）
またはリング−感染赤血球表面抗原（ＲＥＳＡ）をコー
ドしているＤＮＡ分子の塩基配列、発現コントロール配
列と機能的に結合しているヌクレオチド配列を含んでい
る組換えＤＮＡ分子および該ヌクレオチド配列および該
発現コントロール配列がバクテリオファージに挿入され
ている組換ＤＮＡクローニングビヒクルまたはベクタ
ー、これらを含有している宿主細胞。
m falciparum)感染に対する防御免疫を付与するのに好
適な抗原性を有する合成ペプチドおよび合成ポリペプチ
ドをコードしているＤＮＡ分子、該ＤＮＡを含有してい
るベクター、および該ベクターを含有している宿主細胞
の提供。 【構成】 ファルシパルム点在性反復抗原（ＦＩＲＡ）
またはリング−感染赤血球表面抗原（ＲＥＳＡ）をコー
ドしているＤＮＡ分子の塩基配列、発現コントロール配
列と機能的に結合しているヌクレオチド配列を含んでい
る組換えＤＮＡ分子および該ヌクレオチド配列および該
発現コントロール配列がバクテリオファージに挿入され
ている組換ＤＮＡクローニングビヒクルまたはベクタ
ー、これらを含有している宿主細胞。
Description
【０００１】本発明は、プラズモジウム・ファルシパル
ム（Ｐlasmosium falciparum）感染に対する防御免疫を
付与するのに好適な抗原性を有する合成ペプチドおよび
合成ポリペプチドをコードしているＤＮＡ分子、該ＤＮ
Ａを含有しているベクター、および該ベクターを含有し
ている宿主細胞に関する。
ム（Ｐlasmosium falciparum）感染に対する防御免疫を
付与するのに好適な抗原性を有する合成ペプチドおよび
合成ポリペプチドをコードしているＤＮＡ分子、該ＤＮ
Ａを含有しているベクター、および該ベクターを含有し
ている宿主細胞に関する。
【０００２】最も重篤な形のヒトマラリアを引き起こす
原生動物、プラズモジウム・ファルシパルムに対する免
疫は、長年の広範な暴露の後にのみ獲得される。ヒトで
の天然の免疫原として多数のＰ．ファルシパルム・ポリ
ペプチドがあるが、その内、どれだけのものが防御免疫
において重要性を有するかは、全く明らかでない。多く
の抗原がその様な役割を持たず、実際、それらは集団的
に免疫系に過剰に負荷されるので、その内のいくつか
は、反生産的（カウンタープロダクティブ）に作用して
いる可能性がある。多くのＰ．ファルシパルム抗原に株
特異性のあることが明らかにされており、異なる寄生虫
株間での抗原の多様性が免疫回避に一役を担っているの
かもしれない。
原生動物、プラズモジウム・ファルシパルムに対する免
疫は、長年の広範な暴露の後にのみ獲得される。ヒトで
の天然の免疫原として多数のＰ．ファルシパルム・ポリ
ペプチドがあるが、その内、どれだけのものが防御免疫
において重要性を有するかは、全く明らかでない。多く
の抗原がその様な役割を持たず、実際、それらは集団的
に免疫系に過剰に負荷されるので、その内のいくつか
は、反生産的（カウンタープロダクティブ）に作用して
いる可能性がある。多くのＰ．ファルシパルム抗原に株
特異性のあることが明らかにされており、異なる寄生虫
株間での抗原の多様性が免疫回避に一役を担っているの
かもしれない。
【０００３】近年、分子クローニング技術によって、
Ｐ．ファルシパルムの各ポリペプチド抗原の分析が容易
になった（１）。ヒト抗体を用いて、クローンされた配
列を発現する大腸菌（Ｅscherichia coli）コロニーを
スクリーニングすることにより、これらの抗原をコード
している多数のcＤＮＡクローンが単離された。これら
のクローンの生産およびスクリーニングは、国際特許出
願Ｎo．ＰＣＴ／ＡＵ８４／０００１６の明細書に詳細
に記載されている。
Ｐ．ファルシパルムの各ポリペプチド抗原の分析が容易
になった（１）。ヒト抗体を用いて、クローンされた配
列を発現する大腸菌（Ｅscherichia coli）コロニーを
スクリーニングすることにより、これらの抗原をコード
している多数のcＤＮＡクローンが単離された。これら
のクローンの生産およびスクリーニングは、国際特許出
願Ｎo．ＰＣＴ／ＡＵ８４／０００１６の明細書に詳細
に記載されている。
【０００４】その様な抗原の１つは未熟なリング段階
（環状体）のＰ．ファルシパルムに感染した赤血球表面
に存在しているので、リング−感染赤血球表面抗原（Ｒ
ＥＳＡ）と称される。この暴露された部位により、これ
が免疫性攻撃における標的であると思われる。ＲＥＳＡ
は、多くのプラズモジウム抗原に見出された構造上の特
異性、即ち、複数個のオリゴペプチドが直列に繰返し配
された配列（複数のタンデム反復配列）を有する（２〜
６）。
（環状体）のＰ．ファルシパルムに感染した赤血球表面
に存在しているので、リング−感染赤血球表面抗原（Ｒ
ＥＳＡ）と称される。この暴露された部位により、これ
が免疫性攻撃における標的であると思われる。ＲＥＳＡ
は、多くのプラズモジウム抗原に見出された構造上の特
異性、即ち、複数個のオリゴペプチドが直列に繰返し配
された配列（複数のタンデム反復配列）を有する（２〜
６）。
【０００５】ハイブリダイゼーションおよび免疫螢光法
による研究の結果、パプア・ニューギニア（Ｐapua Ｎe
w Ｇuinea）単離体ＦＣ２７由来のＲＥＳＡは、ガーナ
（Ｇhana）由来のＮＦ７株等、広範囲に及ぶＰ．ファル
シパルム単離体内に保持されていることが示された。そ
こで、異なるＰ．ファルシパルムの株から得られたＲＥ
ＳＡｃＤＮＡクローン相互の関係を、免疫学的方法並び
に配列決定法により研究した。パプア・ニューギニア産
のＦＣ２７株由来のＲＥＳＡと反応する抗体がアフリカ
人患者の体内に存在しており、一方、ＮＦ７株由来のＲ
ＥＳＡと反応する抗体がパプア・ニューギニア人患者の
体内に存在していた。Ｐ．ファルシパルムのＦＣ２７株
およびＮＦ７株から得たＲＥＳＡの部分をコードしてい
る８個のｃＤＮＡクローンの完全なヌクレオチド配列か
ら、これら２株のＲＥＳＡポリペプチドは緊密なホモロ
ーガス（同質）性を有しているとの結論を得た。これら
ｃＤＮＡクローンの配列決定により、ＲＥＳＡポリペプ
チドに、タンデム配列反復に係る２個の別々のブロック
が同定された。反復ブロックの１つはＦＣ２７のＲＥＳ
ＡのＣ末端に位置しており、４個の異なる、しかしなが
ら近縁の８、４、４および３個のアミノ酸の酸性配列を
含有している。約６００塩基５'側には、これもまた酸
性アミノ酸に富む、近縁のアミノ酸をコードしている反
復配列の第２のブロックが存在している。配列の相関性
の一致に基づき、これら反復に係る２ブロックは、交差
反応性の抗原決定基（エピトープ）をコードしているこ
とが分った。
による研究の結果、パプア・ニューギニア（Ｐapua Ｎe
w Ｇuinea）単離体ＦＣ２７由来のＲＥＳＡは、ガーナ
（Ｇhana）由来のＮＦ７株等、広範囲に及ぶＰ．ファル
シパルム単離体内に保持されていることが示された。そ
こで、異なるＰ．ファルシパルムの株から得られたＲＥ
ＳＡｃＤＮＡクローン相互の関係を、免疫学的方法並び
に配列決定法により研究した。パプア・ニューギニア産
のＦＣ２７株由来のＲＥＳＡと反応する抗体がアフリカ
人患者の体内に存在しており、一方、ＮＦ７株由来のＲ
ＥＳＡと反応する抗体がパプア・ニューギニア人患者の
体内に存在していた。Ｐ．ファルシパルムのＦＣ２７株
およびＮＦ７株から得たＲＥＳＡの部分をコードしてい
る８個のｃＤＮＡクローンの完全なヌクレオチド配列か
ら、これら２株のＲＥＳＡポリペプチドは緊密なホモロ
ーガス（同質）性を有しているとの結論を得た。これら
ｃＤＮＡクローンの配列決定により、ＲＥＳＡポリペプ
チドに、タンデム配列反復に係る２個の別々のブロック
が同定された。反復ブロックの１つはＦＣ２７のＲＥＳ
ＡのＣ末端に位置しており、４個の異なる、しかしなが
ら近縁の８、４、４および３個のアミノ酸の酸性配列を
含有している。約６００塩基５'側には、これもまた酸
性アミノ酸に富む、近縁のアミノ酸をコードしている反
復配列の第２のブロックが存在している。配列の相関性
の一致に基づき、これら反復に係る２ブロックは、交差
反応性の抗原決定基（エピトープ）をコードしているこ
とが分った。
【０００６】ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した、同期増殖し
た寄生虫抗原のイムノブロットにより、ＲＥＳＡは成熟
トロホゾイト内で分子量（Ｍｒ）２１０,０００のタン
パク質として合成され、リング期（環状体段階）の寄生
虫に感染した赤血球の膜と結合して見出される分子量１
５５,０００の形のものにプロセッシングされることが
示された。Ｍｒ２１０,０００タンパク質は、幾つかの
抗−ＲＥＳＡモノクローナル抗体および抗−ＲＥＳＡペ
プチド抗体と反応しない、ということが最近になって発
見されたことから、Ｍｒ２１０,０００タンパク質は、
Ｍｒ１５５,０００ＲＥＳＡ分子の前駆体でなく、交差
反応性の抗原であるとされている。
た寄生虫抗原のイムノブロットにより、ＲＥＳＡは成熟
トロホゾイト内で分子量（Ｍｒ）２１０,０００のタン
パク質として合成され、リング期（環状体段階）の寄生
虫に感染した赤血球の膜と結合して見出される分子量１
５５,０００の形のものにプロセッシングされることが
示された。Ｍｒ２１０,０００タンパク質は、幾つかの
抗−ＲＥＳＡモノクローナル抗体および抗−ＲＥＳＡペ
プチド抗体と反応しない、ということが最近になって発
見されたことから、Ｍｒ２１０,０００タンパク質は、
Ｍｒ１５５,０００ＲＥＳＡ分子の前駆体でなく、交差
反応性の抗原であるとされている。
【０００７】メロゾイト中のＭｒ１５５,０００ポリペ
プチドは非イオン性界面活性剤トリトンＸ−１００に可
溶性であるが、リング−感染赤血球の膜を透過した後
は、かなり、トリトン−不溶性となる。この様に、ＲＥ
ＳＡは赤血球細胞骨格と相互反応すると思われる。ＲＥ
ＳＡが膜の脂質二分子層を透過するか否かは未だ不明で
あるが、本発明で決定されたＲＥＳＡ遺伝子の完全な配
列から重要な手がかりが得られるかもしれない。これに
より、ＲＥＳＡが、短い介在配列によって隔てられてい
る２個のエクソンを含んでいることが演繹的に示された
（図９）。エクソン１は、多くの生物における、分泌ペ
プチドのシグナルペプチドに典型的な疎水性配列で開始
されている。次いで、約３６アミノ酸残基の親水性配
列、さらに、１４残基の第２の疎水性の配列が続いてい
る。さらに２０２塩基下流には、１６アミノ酸の非−荷
電配列で始まり、次いで、高度に荷電した領域が続く、
エクソン２がある。イントロンの排除によって生じる疎
水性配列は、通常、多くの真核性遺伝子における膜−ア
ンカーセグメントである。
プチドは非イオン性界面活性剤トリトンＸ−１００に可
溶性であるが、リング−感染赤血球の膜を透過した後
は、かなり、トリトン−不溶性となる。この様に、ＲＥ
ＳＡは赤血球細胞骨格と相互反応すると思われる。ＲＥ
ＳＡが膜の脂質二分子層を透過するか否かは未だ不明で
あるが、本発明で決定されたＲＥＳＡ遺伝子の完全な配
列から重要な手がかりが得られるかもしれない。これに
より、ＲＥＳＡが、短い介在配列によって隔てられてい
る２個のエクソンを含んでいることが演繹的に示された
（図９）。エクソン１は、多くの生物における、分泌ペ
プチドのシグナルペプチドに典型的な疎水性配列で開始
されている。次いで、約３６アミノ酸残基の親水性配
列、さらに、１４残基の第２の疎水性の配列が続いてい
る。さらに２０２塩基下流には、１６アミノ酸の非−荷
電配列で始まり、次いで、高度に荷電した領域が続く、
エクソン２がある。イントロンの排除によって生じる疎
水性配列は、通常、多くの真核性遺伝子における膜−ア
ンカーセグメントである。
【０００８】以下に詳述する様に、本発明を完成するに
至った研究の結果、配列、ハイブリダイゼーション、お
よび免疫学的データーに基づき、ＲＥＳＡは、Ｐ．ファ
ルシパルムの大部分、またはすべての株に高度に保存さ
れていると思われる。さらに、ＲＥＳＡの反復性構造並
びにリング感染赤血球上の位置は、間接的な免疫螢光法
等によって検出するのに好適な高い感受性を有している
ので、様々な株間でＲＥＳＡが免疫学的に類似している
ことは、ＲＥＳＡが免疫学的診断の目的に充分に適合し
得ることを意味する。
至った研究の結果、配列、ハイブリダイゼーション、お
よび免疫学的データーに基づき、ＲＥＳＡは、Ｐ．ファ
ルシパルムの大部分、またはすべての株に高度に保存さ
れていると思われる。さらに、ＲＥＳＡの反復性構造並
びにリング感染赤血球上の位置は、間接的な免疫螢光法
等によって検出するのに好適な高い感受性を有している
ので、様々な株間でＲＥＳＡが免疫学的に類似している
ことは、ＲＥＳＡが免疫学的診断の目的に充分に適合し
得ることを意味する。
【０００９】大腸菌内でのクローニングおよび発現の結
果検出されたもう一つの抗原は、ファルシパルム点在性
反復抗原［Ｆalciparum Ｉnterspersed Ｒepeat Ａntig
en（ＦＩＲＡ）］と命名された（６）。他の幾つかの反
復性抗原同様、ＦＩＲＡは、高度に荷電された領域で両
側を囲まれた短い繰返し単位を含む構造単位を含有して
いる。しかしながら、ＦＩＲＡではこの全構造単位自身
が、抗原内で数回、反復されている。
果検出されたもう一つの抗原は、ファルシパルム点在性
反復抗原［Ｆalciparum Ｉnterspersed Ｒepeat Ａntig
en（ＦＩＲＡ）］と命名された（６）。他の幾つかの反
復性抗原同様、ＦＩＲＡは、高度に荷電された領域で両
側を囲まれた短い繰返し単位を含む構造単位を含有して
いる。しかしながら、ＦＩＲＡではこの全構造単位自身
が、抗原内で数回、反復されている。
【００１０】大腸菌内でＦＩＲＡを発現するｃＤＮＡク
ローンは、そのままのコロニー・アッセイにおいて、
Ｐ．ファルシパルムが風土病である地方の人の血清（〜
９３％）と反応した。対応するｃＤＮＡクローンの固定
化リゼイト上、アフィニティ法で精製されたヒト抗体に
より、対応する寄生虫抗原は、Ｍｒ＞３００,０００の
ポリペプチドであることが同定された。この抗原は、シ
ゾント、並びにリング段階のトロホゾイト中にも存在し
ており、これは斑点状の免疫螢光像によって、赤血球と
会合（密接）していることが示された。そのｍＲＮＡは
メロゾイト内で豊富化され、その特異的性質は、リング
−感染赤血球の表面に位置しているＲＥＳＡと共通して
おり、数多くのアレル変異体と一緒に単一の遺伝子にコ
ードされている。ｃＤＮＡクローンの完全なヌクレオチ
ド配列により、酸性および塩基性の両アミノ酸を含む高
度に荷電された領域によって両側面を囲まれたヘキサペ
プチドの１３の反復を含む構造単位であることが判っ
た。この構造単位自身が繰返されるので、反復ブロッ
ク、並びに荷電単位が、分子に沿って点在することにな
る。反復内の配列は荷電単位内の配列よりもはるかに広
範囲に変動している。
ローンは、そのままのコロニー・アッセイにおいて、
Ｐ．ファルシパルムが風土病である地方の人の血清（〜
９３％）と反応した。対応するｃＤＮＡクローンの固定
化リゼイト上、アフィニティ法で精製されたヒト抗体に
より、対応する寄生虫抗原は、Ｍｒ＞３００,０００の
ポリペプチドであることが同定された。この抗原は、シ
ゾント、並びにリング段階のトロホゾイト中にも存在し
ており、これは斑点状の免疫螢光像によって、赤血球と
会合（密接）していることが示された。そのｍＲＮＡは
メロゾイト内で豊富化され、その特異的性質は、リング
−感染赤血球の表面に位置しているＲＥＳＡと共通して
おり、数多くのアレル変異体と一緒に単一の遺伝子にコ
ードされている。ｃＤＮＡクローンの完全なヌクレオチ
ド配列により、酸性および塩基性の両アミノ酸を含む高
度に荷電された領域によって両側面を囲まれたヘキサペ
プチドの１３の反復を含む構造単位であることが判っ
た。この構造単位自身が繰返されるので、反復ブロッ
ク、並びに荷電単位が、分子に沿って点在することにな
る。反復内の配列は荷電単位内の配列よりもはるかに広
範囲に変動している。
【００１１】染色体性ＦＩＲＡクローンの配列から、Ｆ
ＩＲＡ遺伝子がＲＥＳＡと類似のやり方で組織されてい
ることが証明された（図２２）。これは短かい５'エク
ソン、はるかに長い３'エクソン、並びに、それら２エ
クソンの間の境界領域の疎水性セグメントを含有してい
る。ＲＥＳＡと同様、ＦＩＲＡにおける反復も３'エク
ソンのみに限られている。
ＩＲＡ遺伝子がＲＥＳＡと類似のやり方で組織されてい
ることが証明された（図２２）。これは短かい５'エク
ソン、はるかに長い３'エクソン、並びに、それら２エ
クソンの間の境界領域の疎水性セグメントを含有してい
る。ＲＥＳＡと同様、ＦＩＲＡにおける反復も３'エク
ソンのみに限られている。
【００１２】本発明は、リング−感染赤血球表面抗原
（ＲＥＳＡ）、ファルシパルム点在性反復抗原（ＦＩＲ
Ａ）、並びに、それらと交差反応性のＰ．ファルシパル
ムの他の抗原からなる群から選ばれるＰ．ファルシパル
ムの抗原をコードしている塩基配列の全て、または一部
と実質上対応しているヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分
子を提供するものである。更に詳しくは、本発明は、図
１〜図８または図１４〜図２１に示されている塩基配列
の全てまたは一部を、少くともその一部として含有して
いることを特徴とするヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分
子を提供するものである。その様なヌクレオチド配列
は、ＲＥＳＡまたはＦＩＲＡのアミノ酸配列の少くとも
一部を含むポリペプチドをコードしている。
（ＲＥＳＡ）、ファルシパルム点在性反復抗原（ＦＩＲ
Ａ）、並びに、それらと交差反応性のＰ．ファルシパル
ムの他の抗原からなる群から選ばれるＰ．ファルシパル
ムの抗原をコードしている塩基配列の全て、または一部
と実質上対応しているヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分
子を提供するものである。更に詳しくは、本発明は、図
１〜図８または図１４〜図２１に示されている塩基配列
の全てまたは一部を、少くともその一部として含有して
いることを特徴とするヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分
子を提供するものである。その様なヌクレオチド配列
は、ＲＥＳＡまたはＦＩＲＡのアミノ酸配列の少くとも
一部を含むポリペプチドをコードしている。
【００１３】上記の如く、さらには、図１〜図８および
図１４〜図２１にさらに詳しくされている様に、ＲＥＳ
ＡおよびＦＩＲＡのアミノ酸配列は、反復単位と、それ
と接する非−反復性のペプチド単位からなっている。従
って、上記の塩基配列は、１またはそれ以上のこれら反
復単位および／またはフランキング（接する）単位に対
応するポリペプチド、あるいは、それら反復単位および
／またはフランキング単位の組み合わせに対応するポリ
ペプチドをコードしている。
図１４〜図２１にさらに詳しくされている様に、ＲＥＳ
ＡおよびＦＩＲＡのアミノ酸配列は、反復単位と、それ
と接する非−反復性のペプチド単位からなっている。従
って、上記の塩基配列は、１またはそれ以上のこれら反
復単位および／またはフランキング（接する）単位に対
応するポリペプチド、あるいは、それら反復単位および
／またはフランキング単位の組み合わせに対応するポリ
ペプチドをコードしている。
【００１４】本発明はまた、ＲＥＳＡ抗原、ＦＩＲＡ抗
原、およびそれらと交差反応性のＰ．ファルシパルム抗
原からなる群から選択される抗原全体、または一部の抗
原性を表わす合成ペプチドあるいは合成ポリペプチド、
並びに、これら合成ペプチドまたは合成ポリペプチドの
少くとも１種と、薬学的に許容し得る担体とを含有して
なる、哺乳類においてＰ．ファルシパルムに対する免疫
応答を刺激するための組成物をも提供するものである。
本発明のかかる合成ペプチドまたは合成ポリペプチド
は、広範囲にわたって上に述べたヌクレオチド配列を含
有している、発現コントロール配列と機能的（操作可
能）に結合している組換えＤＮＡ分子、あるいはその様
な組換えＤＮＡ分子を含有している組換えＤＮＡクロー
ニングビヒクル、またはベクターを含む宿主細胞内で発
現させることにより調製される。この様にして発現した
合成ペプチドまたは合成ポリペプチドは、ＲＥＳＡまた
はＦＩＲＡ、または他の交差反応性の抗原の全てまたは
一部の抗原性を表わす部分と、組換えＤＮＡ分子に融合
しているＤＮＡによってコードされている付加的なポリ
ペプチドからなる融合ポリペプチドであっても良い。別
法として、この合成ペプチドまたはポリペプチドは、メ
リフィールド（Ｍerrifield）固相合成法等の周知の化
学的手段により、製造することもできる。
原、およびそれらと交差反応性のＰ．ファルシパルム抗
原からなる群から選択される抗原全体、または一部の抗
原性を表わす合成ペプチドあるいは合成ポリペプチド、
並びに、これら合成ペプチドまたは合成ポリペプチドの
少くとも１種と、薬学的に許容し得る担体とを含有して
なる、哺乳類においてＰ．ファルシパルムに対する免疫
応答を刺激するための組成物をも提供するものである。
本発明のかかる合成ペプチドまたは合成ポリペプチド
は、広範囲にわたって上に述べたヌクレオチド配列を含
有している、発現コントロール配列と機能的（操作可
能）に結合している組換えＤＮＡ分子、あるいはその様
な組換えＤＮＡ分子を含有している組換えＤＮＡクロー
ニングビヒクル、またはベクターを含む宿主細胞内で発
現させることにより調製される。この様にして発現した
合成ペプチドまたは合成ポリペプチドは、ＲＥＳＡまた
はＦＩＲＡ、または他の交差反応性の抗原の全てまたは
一部の抗原性を表わす部分と、組換えＤＮＡ分子に融合
しているＤＮＡによってコードされている付加的なポリ
ペプチドからなる融合ポリペプチドであっても良い。別
法として、この合成ペプチドまたはポリペプチドは、メ
リフィールド（Ｍerrifield）固相合成法等の周知の化
学的手段により、製造することもできる。
【００１５】本発明の詳細は、以下の記載、並びに添付
の図面により、さらに明らかとなるであろう。
の図面により、さらに明らかとなるであろう。
【００１６】図１〜図８はＲＥＳＡのヌクレオチド配列
および予測されるアミノ酸配列を示す。ヌクレオチド配
列はジデオキシ法によって決定された（８）。
および予測されるアミノ酸配列を示す。ヌクレオチド配
列はジデオキシ法によって決定された（８）。
【００１７】図９は図１〜図８の配列から推定されるＲ
ＥＳＡ遺伝子の構造を示す。５'および３'エクソンが示
されている。
ＥＳＡ遺伝子の構造を示す。５'および３'エクソンが示
されている。
【００１８】図１０中、Ａは電気泳動試料緩衝液中で溶
解し、抗−ＲＥＳＡ抗体でプローブして得た、Ｐ．ファ
ルシパルムの２個の単離体の同時培養物に関するウエス
タンブロットを示す。ＢおよびＣは、アフィニティ法で
精製したＲＥＳＡに対するヒト抗体を用いて得た、Ｐ．
ファルシパルムの、（１）リング段階、（２）成熟トロ
ホゾイト、（３）シゾント、および（４）メロゾイトに
関するウエスタンブロットを示す。（Ｂ）における抗原
はトリトンＸ−１００で抽出された。（Ｃ）における抗
原はトリトンＸ−１００に不溶性であるが電気泳動試料
緩衝液には可溶性であった。放射性活性マーカーはアマ
ーシャム、インターナト（Ａmersham Ｉnternat．）、
バッキンガムシェア（Ｂuckinghamshire）（英国）から
入手した。これは、ミオシン（２００キロダルトン、Ｋ
dalton）、ホスホリラーゼ−ｂ（９３キロダルトン）、
およびウシ血清アルブミン（６９キロダルトン）を表わ
す。
解し、抗−ＲＥＳＡ抗体でプローブして得た、Ｐ．ファ
ルシパルムの２個の単離体の同時培養物に関するウエス
タンブロットを示す。ＢおよびＣは、アフィニティ法で
精製したＲＥＳＡに対するヒト抗体を用いて得た、Ｐ．
ファルシパルムの、（１）リング段階、（２）成熟トロ
ホゾイト、（３）シゾント、および（４）メロゾイトに
関するウエスタンブロットを示す。（Ｂ）における抗原
はトリトンＸ−１００で抽出された。（Ｃ）における抗
原はトリトンＸ−１００に不溶性であるが電気泳動試料
緩衝液には可溶性であった。放射性活性マーカーはアマ
ーシャム、インターナト（Ａmersham Ｉnternat．）、
バッキンガムシェア（Ｂuckinghamshire）（英国）から
入手した。これは、ミオシン（２００キロダルトン、Ｋ
dalton）、ホスホリラーゼ−ｂ（９３キロダルトン）、
およびウシ血清アルブミン（６９キロダルトン）を表わ
す。
【００１９】図１１は、ウサギ抗−ＲＥＳＡとプロテイ
ンＡ金を用いて検出した、シゾント内でのミロゾイト形
成期における、短糸を持つと思われる低密度小胞内のＲ
ＥＳＡの位置（→）を示す免疫電子顕微鏡写真である。
ロプトリエス（rhoptries）（Ｒ）は標識されていな
い。（Ｘ４１,７００；挿入Ｘ７３,０００）。
ンＡ金を用いて検出した、シゾント内でのミロゾイト形
成期における、短糸を持つと思われる低密度小胞内のＲ
ＥＳＡの位置（→）を示す免疫電子顕微鏡写真である。
ロプトリエス（rhoptries）（Ｒ）は標識されていな
い。（Ｘ４１,７００；挿入Ｘ７３,０００）。
【００２０】図１２は、ウサギ抗−ＲＥＳＡと反応した
リング−感染赤血球の切片の電子顕微鏡写真である。非
感染赤血球の一部も示されている。
リング−感染赤血球の切片の電子顕微鏡写真である。非
感染赤血球の一部も示されている。
【００２１】図１３は、キモトリプシン（２０μg／m
l）で消化したリング段階感染赤血球のウエスタンブロ
ットであって、（１）は０分、（２）は２０分、（３）
は６０分の消化に付されたものを表わす。酵素消化の
後、無傷の赤血球を洗浄し、電気泳動試料緩衝液に溶解
し、１０％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動にか
け、ニトロセルロース上に電気泳動的に移行させた。次
いで、ニトロセルロースフィルターを希釈率１：５００
のウサギ抗−ＲＥＳＡでプローブした。分子量はキロダ
ルトンで示されており、ＲＥＳＡ（１５５Ｋｄ）、β−
ガラクトシダーゼ（１１６Ｋｄ）そしてホスホリラーゼ
−ｂ（９３Ｋｄ）に対応する。
l）で消化したリング段階感染赤血球のウエスタンブロ
ットであって、（１）は０分、（２）は２０分、（３）
は６０分の消化に付されたものを表わす。酵素消化の
後、無傷の赤血球を洗浄し、電気泳動試料緩衝液に溶解
し、１０％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動にか
け、ニトロセルロース上に電気泳動的に移行させた。次
いで、ニトロセルロースフィルターを希釈率１：５００
のウサギ抗−ＲＥＳＡでプローブした。分子量はキロダ
ルトンで示されており、ＲＥＳＡ（１５５Ｋｄ）、β−
ガラクトシダーゼ（１１６Ｋｄ）そしてホスホリラーゼ
−ｂ（９３Ｋｄ）に対応する。
【００２２】図１４〜図２１は、ＦＩＲＡ遺伝子のヌク
レオチド配列および推定のアミノ酸配列を示す。ヌクレ
オチド配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブ
ラリイを組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）さ
せたＥｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配
列の３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
レオチド配列および推定のアミノ酸配列を示す。ヌクレ
オチド配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブ
ラリイを組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）さ
せたＥｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配
列の３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
【００２３】図２２は図１４〜図２１の配列から推定さ
れるＦＩＲＡ遺伝子の構造を示す。
れるＦＩＲＡ遺伝子の構造を示す。
【００２４】図２３はマラリアにさらされた人から得た
血清プールのアフィニティ精製により得たヒト抗体を用
いた、イムノアッセイ（ＡおよびＢ）、並びにウエスタ
ン・ブロット法（ＣおよびＤ）の結果を示す。Ａおよび
Ｃにおける抗体はＦＩＲＡ−セファロース吸収剤を用い
て精製され、他方、ＢおよびＤにおける抗体はλamp３
−セファロース吸収剤を用いて精製された。ＣおよびＤ
におけるＰ．ファルシパルム単離体は、１、パプア・ニ
ューギニア起源のＦＣ２７；２、タイランド起源のＫ
１；および３、ガーナ由来のＮＦ７であった。
血清プールのアフィニティ精製により得たヒト抗体を用
いた、イムノアッセイ（ＡおよびＢ）、並びにウエスタ
ン・ブロット法（ＣおよびＤ）の結果を示す。Ａおよび
Ｃにおける抗体はＦＩＲＡ−セファロース吸収剤を用い
て精製され、他方、ＢおよびＤにおける抗体はλamp３
−セファロース吸収剤を用いて精製された。ＣおよびＤ
におけるＰ．ファルシパルム単離体は、１、パプア・ニ
ューギニア起源のＦＣ２７；２、タイランド起源のＫ
１；および３、ガーナ由来のＮＦ７であった。
【００２５】図２４は、純化した融合ポリペプチド（２
μg／ml）で被覆したマイクロタイタープレートを用い
た固相ＥＬＩＳＡ法により、アフィニティ精製されたＦ
ＩＲＡ抗体を検定した結果を示している。図中、○はＦ
ＩＲＡ・フラグメント、□はＲＥＳＡによる５'反復、
△'はＲＥＳＡの３'反復に相当する。
μg／ml）で被覆したマイクロタイタープレートを用い
た固相ＥＬＩＳＡ法により、アフィニティ精製されたＦ
ＩＲＡ抗体を検定した結果を示している。図中、○はＦ
ＩＲＡ・フラグメント、□はＲＥＳＡによる５'反復、
△'はＲＥＳＡの３'反復に相当する。
【００２６】発明の詳しい記述 原料および方法 Ｐ．ファルシパルム単離体 ＦＣＱ２７／ＰＮＧ（ＦＣ２７）、ＩＭＲ１４３／ＰＮ
Ｇ（ＩＭＲ１４３）、ＩＭＲ１４４／ＰＮＧ（ＩＭＲ１
４４）およびＭＡＤ７１／ＰＮＧ（ＭＡＤ７１）の各単
離体は、パプア・ニューギニアの医学研究所（Ｉnstitu
te of ＭedicalＲsearch）の協力により得られた。ガー
ナ起源のＮＦ７およびタイランド起源のＫ１は、ウォー
リカー氏（Ｄ．Ｗalliker、エジンバラ大学）から提供
された。
Ｇ（ＩＭＲ１４３）、ＩＭＲ１４４／ＰＮＧ（ＩＭＲ１
４４）およびＭＡＤ７１／ＰＮＧ（ＭＡＤ７１）の各単
離体は、パプア・ニューギニアの医学研究所（Ｉnstitu
te of ＭedicalＲsearch）の協力により得られた。ガー
ナ起源のＮＦ７およびタイランド起源のＫ１は、ウォー
リカー氏（Ｄ．Ｗalliker、エジンバラ大学）から提供
された。
【００２７】コロニーイムノアッセイ 一連の起源−陽性コロニーのレプリカを３０℃で一夜増
殖させ、３８℃で誘導し、溶離した（７）。抗−大腸菌
反応性を除くために血清を吸収させ、３％ウシ血清アル
ブミンで、ｐＨ９.６において１／５００に希釈し、最
終的に、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓtaphyloc
occus aureus）由来の125ＩプロテインＡと一緒にイン
キュベートし、一夜、オートラジオグラフした（７）。
殖させ、３８℃で誘導し、溶離した（７）。抗−大腸菌
反応性を除くために血清を吸収させ、３％ウシ血清アル
ブミンで、ｐＨ９.６において１／５００に希釈し、最
終的に、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓtaphyloc
occus aureus）由来の125ＩプロテインＡと一緒にイン
キュベートし、一夜、オートラジオグラフした（７）。
【００２８】血清 血清は、パプア・ニューギニア、マダン（Ｍadang）の
住民の同意の下に入手した。一般的な調査過程では、急
性マラリア症状を示している人が幾人かいる外は、無症
候性の寄生虫血症であることが分った。寄生虫血症患者
を、クロロキンで治療した。子供から標本を得る際に
は、事前に親の承諾を得た。
住民の同意の下に入手した。一般的な調査過程では、急
性マラリア症状を示している人が幾人かいる外は、無症
候性の寄生虫血症であることが分った。寄生虫血症患者
を、クロロキンで治療した。子供から標本を得る際に
は、事前に親の承諾を得た。
【００２９】ハイブリダイゼーション ファージＤＮＡをＣsＣｌ−平衡密度遠心にかけて精製
し、ＥｃｏＲＩ消化に付し、１％低融点アガロースゲル
でサイズ分画化した後、フェノール抽出し、ニック−ト
ランスレーションにより標識した。１mlの０.７５Ｍ Ｎ
aＣl／０.７５Ｍクエン酸ナトリウム／５０％ホルムア
ミド／（５０μg／ml）の鮭精子ＤＮＡ／（１０μg／m
l）のポリ（Ｃ）／０.０２％フィコール（Ｆicoll）／
０.０２％のポリビニルピロリドン／０.０２％ＢＳＡ中
の標識化挿入体３ml（３×１０5cpm）を、一連の抗原−
陽性クローンとハイブリダイズさせた。挿入体をｐＵｃ
−９中にサブクローンし（９）、精製した後、上記の如
くニックトランスレートし、サザーン・ブロット実験に
用いた。
し、ＥｃｏＲＩ消化に付し、１％低融点アガロースゲル
でサイズ分画化した後、フェノール抽出し、ニック−ト
ランスレーションにより標識した。１mlの０.７５Ｍ Ｎ
aＣl／０.７５Ｍクエン酸ナトリウム／５０％ホルムア
ミド／（５０μg／ml）の鮭精子ＤＮＡ／（１０μg／m
l）のポリ（Ｃ）／０.０２％フィコール（Ｆicoll）／
０.０２％のポリビニルピロリドン／０.０２％ＢＳＡ中
の標識化挿入体３ml（３×１０5cpm）を、一連の抗原−
陽性クローンとハイブリダイズさせた。挿入体をｐＵｃ
−９中にサブクローンし（９）、精製した後、上記の如
くニックトランスレートし、サザーン・ブロット実験に
用いた。
【００３０】クローンした染色体セグメントの単離およ
び配列決定 λgt１０ライブラリイから染色体性ＲＥＳＡクローンを
単離し、ＥｃｏＲ１挿入体をｐＵＣ８にサブクローンさ
せた。ＥｃｏＲ１挿入体のＲｓａＩ、ＡｈａＩＩＩおよ
びＳｓｐＩフラグメントをＭ１３ｍｐ１８およびｍｐ１
９ベクターにサブクローンし、ジデオキシ法によって配
列決定した（８）。合成プライマーをも用いた。結果を
スタデン（Ｓtaden）のプログラムに従って処理した
（１０）。示された配列は、３.５kb染色体のＥｃｏＲ
Ｉフラグメントが、そのＥｃｏＲＩ部位において、ｃＤ
ＮＡクローンＡｇ４６のＥｃｏＲＩ部位に結合している
配列からなっていた。
び配列決定 λgt１０ライブラリイから染色体性ＲＥＳＡクローンを
単離し、ＥｃｏＲ１挿入体をｐＵＣ８にサブクローンさ
せた。ＥｃｏＲ１挿入体のＲｓａＩ、ＡｈａＩＩＩおよ
びＳｓｐＩフラグメントをＭ１３ｍｐ１８およびｍｐ１
９ベクターにサブクローンし、ジデオキシ法によって配
列決定した（８）。合成プライマーをも用いた。結果を
スタデン（Ｓtaden）のプログラムに従って処理した
（１０）。示された配列は、３.５kb染色体のＥｃｏＲ
Ｉフラグメントが、そのＥｃｏＲＩ部位において、ｃＤ
ＮＡクローンＡｇ４６のＥｃｏＲＩ部位に結合している
配列からなっていた。
【００３１】初めに、染色体ＦＩＲＡクローンをλgt１
０中の６ｋｂ ＡｈａＩＩＩフラグメントとして同定し
た。このＡｈａＩＩＩフラグメントをｐＵＣ８にサブク
ローンした。次いで、ＰｖｕＩＩおよびＲｓａＩフラグ
メントをＭ１３ｍｐ８およびＭ１３ｍｐ９ベクターにサ
ブクローンし、ジデオキシ法で配列決定した。
０中の６ｋｂ ＡｈａＩＩＩフラグメントとして同定し
た。このＡｈａＩＩＩフラグメントをｐＵＣ８にサブク
ローンした。次いで、ＰｖｕＩＩおよびＲｓａＩフラグ
メントをＭ１３ｍｐ８およびＭ１３ｍｐ９ベクターにサ
ブクローンし、ジデオキシ法で配列決定した。
【００３２】抗−ＲＥＳＡおよび抗−ＦＩＲＡ抗体のア
フィニティ精製 記述の如くにしてＡｇ２８、Ａｇ２３１およびλamp３
各クローンの誘導培養（５０ｍｌ）を調製した（５およ
び６）。ペレット化された細菌を、１００ｍＭりん酸ナ
トリウム緩衝液、ｐＨ６.８／１０ｍＭジチオトレイト
ール中で音波処理した後、１％ＮaＤodＳＯ4を加えて室
温で混合した。可溶性の細菌タンパク質をセファデック
スＧ−１０に通すことにより、１００ｍＭりん酸ナトリ
ウム、ｐＨ６.８／１ｍＭジチオトレイトール／０.１％
ＮaＤodＳＯ4で平衡化し、製造業者の指示に従って室温
でＣＮＢｒ活性化セファロース（ファーマシア、スエー
デン）とコンジュゲート（複合体形成）させた。
フィニティ精製 記述の如くにしてＡｇ２８、Ａｇ２３１およびλamp３
各クローンの誘導培養（５０ｍｌ）を調製した（５およ
び６）。ペレット化された細菌を、１００ｍＭりん酸ナ
トリウム緩衝液、ｐＨ６.８／１０ｍＭジチオトレイト
ール中で音波処理した後、１％ＮaＤodＳＯ4を加えて室
温で混合した。可溶性の細菌タンパク質をセファデック
スＧ−１０に通すことにより、１００ｍＭりん酸ナトリ
ウム、ｐＨ６.８／１ｍＭジチオトレイトール／０.１％
ＮaＤodＳＯ4で平衡化し、製造業者の指示に従って室温
でＣＮＢｒ活性化セファロース（ファーマシア、スエー
デン）とコンジュゲート（複合体形成）させた。
【００３３】パプア・ニューギニアの住民から得たヒト
血清のプールを、遠心して等容量のりん酸緩衝化食塩水
（Ｐi／ＮaＣl）で希釈し、λamp ３−セファロース吸
収剤に予備吸収させた後、Ａｇ２８またはＡｇ２３１吸
収剤上を通過させることにより、清澄化した。非特異的
な結合タンパク質を、１００ｍＭホウ酸ナトリウム／５
００ｍＭ ＮaＣl／０.０５％ Ｔween２０、ｐＨ８.５で
洗浄し、次いで、Ｐi／ＮaＣlで洗浄する洗浄サイクル
を繰返し行うことにより、除去した。結合した抗体を１
００ｍＭグリシン／１５０ｍＭ ＮaＣl、ｐＨ２.６で溶
離し、直ちに、２Ｍトリス：ＨＣｌ、ｐＨ８.０でｐＨ
７.０に調節した。
血清のプールを、遠心して等容量のりん酸緩衝化食塩水
（Ｐi／ＮaＣl）で希釈し、λamp ３−セファロース吸
収剤に予備吸収させた後、Ａｇ２８またはＡｇ２３１吸
収剤上を通過させることにより、清澄化した。非特異的
な結合タンパク質を、１００ｍＭホウ酸ナトリウム／５
００ｍＭ ＮaＣl／０.０５％ Ｔween２０、ｐＨ８.５で
洗浄し、次いで、Ｐi／ＮaＣlで洗浄する洗浄サイクル
を繰返し行うことにより、除去した。結合した抗体を１
００ｍＭグリシン／１５０ｍＭ ＮaＣl、ｐＨ２.６で溶
離し、直ちに、２Ｍトリス：ＨＣｌ、ｐＨ８.０でｐＨ
７.０に調節した。
【００３４】ウエスタン・ブロット Ｐ．ファルシパルムのタンパク抽出物を調製し、７.５
％ポリアクリルアミド／ＮaＤodＳＯ4ゲルにより分画化
した。ゲルから得たタンパク質をニトロセルロース上に
電気泳動的に移行させ、Ｐi／ＮaＣl中、５％脱脂粉乳
中でインキュベートした後、アフィニティ精製したヒト
抗体と反応させた。フイルターを１２５Ｉ−標識プロテ
インＡとインキュベートし、オートラジオグラフィーに
かけた。
％ポリアクリルアミド／ＮaＤodＳＯ4ゲルにより分画化
した。ゲルから得たタンパク質をニトロセルロース上に
電気泳動的に移行させ、Ｐi／ＮaＣl中、５％脱脂粉乳
中でインキュベートした後、アフィニティ精製したヒト
抗体と反応させた。フイルターを１２５Ｉ−標識プロテ
インＡとインキュベートし、オートラジオグラフィーに
かけた。
【００３５】免疫電子顕微鏡写真 Ａｇ２８およびＡｇ２３１免疫吸収剤を用いてアフィニ
ティ精製したヒト抗体、あるいは、Ａｇ２８によって精
製された融合ポリペプチドに対して惹起されたウサギ抗
血清を用い、プロテインＡ−金法によって免疫電子顕微
鏡写真を撮った。免疫電子顕微鏡写真用の標本を０.２
５％グルタルアルデヒドで固定化し（２５℃で１０分
間）、０.１Ｍりん酸緩衝液、ｐＨ７.４中５０ｍＭ Ｎ
Ｈ4Ｃlで希釈した後、調製したばかりのりん酸緩衝液中
５０ｍＭ ＮＨ4Ｃlに入れ、３０分間放置した。次いで
細胞をりん酸緩衝液で２回洗浄し、７０％エタノールで
脱水した後、Ｌ．Ｒ．ホワイト（Ｗhite）樹脂、ハード
・ブレード［ロンドン・レジン（Ｌondon Ｒesin）Ｃ
o．Ｌtd．、ベイシングストーク（Ｂasingstoke）、イ
ングランド］中に入れた。切片を、０.２５％Ｔween２
０含有０.０５Ｍホスフェート、ｐＨ７.４（ＰＯ4：Ｔw
een）中、１％ウシアルブミンまたは卵アルブミン中で
５分間インキュベートした後、ＰＯ4：Ｔween中、ウサ
ギ抗−ＲＥＳＡ抗血清（希釈率１／１００）またはアフ
ィニティ−精製ヒト抗−ＲＥＳＡ抗体、１滴の上に３０
〜６０分間、室温下で移行させた。ＰＯ4：Ｔweenで洗
浄した後、切片を、ＰＯ4：Ｔweenで１／１０に希釈し
たプロテインＡ−金［Ｅ−Ｙラボラトリイズ（Ｌaborat
ories）Ｉnc．］に、３０〜６０分間、移行させた。さ
らに洗浄した後、切片を酢酸ウラニル水溶液で染色し
た。単離したメロゾイトを、４℃において０.２５％グ
ルタルアルデヒド中で１０分間固定化させた後、感染細
胞と同様に処理した。
ティ精製したヒト抗体、あるいは、Ａｇ２８によって精
製された融合ポリペプチドに対して惹起されたウサギ抗
血清を用い、プロテインＡ−金法によって免疫電子顕微
鏡写真を撮った。免疫電子顕微鏡写真用の標本を０.２
５％グルタルアルデヒドで固定化し（２５℃で１０分
間）、０.１Ｍりん酸緩衝液、ｐＨ７.４中５０ｍＭ Ｎ
Ｈ4Ｃlで希釈した後、調製したばかりのりん酸緩衝液中
５０ｍＭ ＮＨ4Ｃlに入れ、３０分間放置した。次いで
細胞をりん酸緩衝液で２回洗浄し、７０％エタノールで
脱水した後、Ｌ．Ｒ．ホワイト（Ｗhite）樹脂、ハード
・ブレード［ロンドン・レジン（Ｌondon Ｒesin）Ｃ
o．Ｌtd．、ベイシングストーク（Ｂasingstoke）、イ
ングランド］中に入れた。切片を、０.２５％Ｔween２
０含有０.０５Ｍホスフェート、ｐＨ７.４（ＰＯ4：Ｔw
een）中、１％ウシアルブミンまたは卵アルブミン中で
５分間インキュベートした後、ＰＯ4：Ｔween中、ウサ
ギ抗−ＲＥＳＡ抗血清（希釈率１／１００）またはアフ
ィニティ−精製ヒト抗−ＲＥＳＡ抗体、１滴の上に３０
〜６０分間、室温下で移行させた。ＰＯ4：Ｔweenで洗
浄した後、切片を、ＰＯ4：Ｔweenで１／１０に希釈し
たプロテインＡ−金［Ｅ−Ｙラボラトリイズ（Ｌaborat
ories）Ｉnc．］に、３０〜６０分間、移行させた。さ
らに洗浄した後、切片を酢酸ウラニル水溶液で染色し
た。単離したメロゾイトを、４℃において０.２５％グ
ルタルアルデヒド中で１０分間固定化させた後、感染細
胞と同様に処理した。
【００３６】結果−ＲＥＳＡ ＦＣ２７からのＲＥＳＡクローンの単離 ＲＥＳＡｃＤＮＡクローンの調製は、国際特許出願Ｎ
o．ＰＣＴ／ＡＵ８４／０００１６の実施例に詳しく記
載されており、本明細書ではそれを引用する。
o．ＰＣＴ／ＡＵ８４／０００１６の実施例に詳しく記
載されており、本明細書ではそれを引用する。
【００３７】ＲＥＳＡポリペプチドの同定 ＲＥＳＡポリペプチドに対して特異的なヒト抗体をアフ
ィニティクロマトグラフィーで精製した。ウエスタンブ
ロットによると、抗体はＭｒ．１５５,０００に優勢な
バンドを示して反応したが、幾つかの実験例では、接近
して移動する二重線（ダブレット）に分割されていた。
抗−ＲＥＳＡ抗体と反応する、より分子量の大きいポリ
ペプチドは、単離体が異ることによりサイズが変化し
（図１０Ａ）、単離耐ＦＣ２７の場合にはＭｒ．２１
０,０００であった。さらに、幾つかの抗原製品におい
ては、より低分子量のポリペプチド（Ｍｒ．８０,００
０）も検出された（図１０Ａ）。Ｍｒ．２１０,０００
ポリペプチドはシゾントに最も豊富であった（図１０
Ｂ）。逆に、Ｍｒ．１５,０００抗原は、メロゾイト、
環状体およびトロホゾイトに多く、シゾント内には少量
であった（図１０ＢおよびＣ）。
ィニティクロマトグラフィーで精製した。ウエスタンブ
ロットによると、抗体はＭｒ．１５５,０００に優勢な
バンドを示して反応したが、幾つかの実験例では、接近
して移動する二重線（ダブレット）に分割されていた。
抗−ＲＥＳＡ抗体と反応する、より分子量の大きいポリ
ペプチドは、単離体が異ることによりサイズが変化し
（図１０Ａ）、単離耐ＦＣ２７の場合にはＭｒ．２１
０,０００であった。さらに、幾つかの抗原製品におい
ては、より低分子量のポリペプチド（Ｍｒ．８０,００
０）も検出された（図１０Ａ）。Ｍｒ．２１０,０００
ポリペプチドはシゾントに最も豊富であった（図１０
Ｂ）。逆に、Ｍｒ．１５,０００抗原は、メロゾイト、
環状体およびトロホゾイトに多く、シゾント内には少量
であった（図１０ＢおよびＣ）。
【００３８】ＲＥＳＡと赤血球膜との相互反応性を調べ
るために洗浄剤（デタージェント、界面活性剤）対する
ＲＥＳＡの溶解性を測定した。Ｍｒ２１０,０００ポリ
ペプチドは非イオン性洗浄剤のＴritonＸ−１００溶液
に可溶性であり、メロゾイト中に存在しているＭｒ１５
５,０００ポリペプチドの大部分も同様であった（図１
０Ｂ）。これに対して、リング段階、並びに他の生活環
におけるＭｒ１５５,０００高原はＴritonＸ−１００に
不溶性であったが、ＳＤＳおよび２−メルカプトエタノ
ールを含んだ電気泳動試料緩衝液には可溶であった（図
１０、ＢおよびＣ）。
るために洗浄剤（デタージェント、界面活性剤）対する
ＲＥＳＡの溶解性を測定した。Ｍｒ２１０,０００ポリ
ペプチドは非イオン性洗浄剤のＴritonＸ−１００溶液
に可溶性であり、メロゾイト中に存在しているＭｒ１５
５,０００ポリペプチドの大部分も同様であった（図１
０Ｂ）。これに対して、リング段階、並びに他の生活環
におけるＭｒ１５５,０００高原はＴritonＸ−１００に
不溶性であったが、ＳＤＳおよび２−メルカプトエタノ
ールを含んだ電気泳動試料緩衝液には可溶であった（図
１０、ＢおよびＣ）。
【００３９】同じイムノブロットをＡｇ２８融合ポリペ
プチドに対して惹起されたモノクローナル抗体、または
ＲＥＳＡ合成ペプチドに対して惹起されたマウスの抗血
清でプローブすると、Ｍｒ．２１０,０００ペプチドは
検出されなかったが、Ｍｒ．１５５,０００ポリペプチ
ドは強いシグナルを示した。従って、Ｍｒ．２１０,０
００ポリペプチドは、ＲＥＳＡの最初の翻訳産物ではな
く、ＲＥＳＡと交差反応し得る、別の遺伝子産物である
と思われる。
プチドに対して惹起されたモノクローナル抗体、または
ＲＥＳＡ合成ペプチドに対して惹起されたマウスの抗血
清でプローブすると、Ｍｒ．２１０,０００ペプチドは
検出されなかったが、Ｍｒ．１５５,０００ポリペプチ
ドは強いシグナルを示した。従って、Ｍｒ．２１０,０
００ポリペプチドは、ＲＥＳＡの最初の翻訳産物ではな
く、ＲＥＳＡと交差反応し得る、別の遺伝子産物である
と思われる。
【００４０】パプア・ニューギニア株由来のＲＥＳＡと
反応する、アフリカ住民患者中の抗−ＲＥＳＡ抗体 大腸菌内で発現されたＲＥＳＡ融合ポリペプチドに対す
るマウスの抗体に関する前記の研究により、これは、様
々な地域から得たＰ．ファルシパルムの全株と交差反応
することが証明された。これらのＲＥＳＡｃＤＮＡクロ
ーンは、パプア・ニューギニア由来の血清との反応性に
基づいて単離されたＰ．ファルシパルムにさらされたヒ
トにおいても、広範囲に及ぶ様々な地域のＲＥＳＡと交
差反応し得る等価の抗体が惹起されるか否かを決定する
ために、パプア・ニューギニア株ＦＣ２７から得た、Ｒ
ＥＳＡの一部を発現する多くのｃＤＮＡクローンに対
し、アフリカ人の血清を試験した。１３３の個別に単離
された抗原陽性クローン（内１６はＲＥＳＡをコードし
ている）の配列と血清とを、既述の、自体そのままのイ
ムノアッセイ法によって反応させた（７）。アフリカ人
の血清は両方ともＲＥＳＡｃＤＮＡクローンと反応し
た。反応の程度は多数のＰＮＧ血清と良く匹敵してい
た。しかしながら、反応の程度は、ＰＮＧ血清の差異に
より、かなり変化するという点が重要である。アフリカ
人血清は、大部分がヘキサペプチド配列の様々な反復か
らなっているＦＩＲＡをコードしているｃＤＮＡクロー
ン等の、他の様々なｃＤＮＡクローンとも反応した。こ
れに対し、ＦＣ２７の株−特異的Ｓ−抗原をコードして
いるｃＤＮＡクローンとは反応しなかった。従って、地
理的に異なった地域からのＲＥＳＡポリペプチドは、人
間にとって天然の免疫原である非−反応性エピトープを
共有していると思われる。
反応する、アフリカ住民患者中の抗−ＲＥＳＡ抗体 大腸菌内で発現されたＲＥＳＡ融合ポリペプチドに対す
るマウスの抗体に関する前記の研究により、これは、様
々な地域から得たＰ．ファルシパルムの全株と交差反応
することが証明された。これらのＲＥＳＡｃＤＮＡクロ
ーンは、パプア・ニューギニア由来の血清との反応性に
基づいて単離されたＰ．ファルシパルムにさらされたヒ
トにおいても、広範囲に及ぶ様々な地域のＲＥＳＡと交
差反応し得る等価の抗体が惹起されるか否かを決定する
ために、パプア・ニューギニア株ＦＣ２７から得た、Ｒ
ＥＳＡの一部を発現する多くのｃＤＮＡクローンに対
し、アフリカ人の血清を試験した。１３３の個別に単離
された抗原陽性クローン（内１６はＲＥＳＡをコードし
ている）の配列と血清とを、既述の、自体そのままのイ
ムノアッセイ法によって反応させた（７）。アフリカ人
の血清は両方ともＲＥＳＡｃＤＮＡクローンと反応し
た。反応の程度は多数のＰＮＧ血清と良く匹敵してい
た。しかしながら、反応の程度は、ＰＮＧ血清の差異に
より、かなり変化するという点が重要である。アフリカ
人血清は、大部分がヘキサペプチド配列の様々な反復か
らなっているＦＩＲＡをコードしているｃＤＮＡクロー
ン等の、他の様々なｃＤＮＡクローンとも反応した。こ
れに対し、ＦＣ２７の株−特異的Ｓ−抗原をコードして
いるｃＤＮＡクローンとは反応しなかった。従って、地
理的に異なった地域からのＲＥＳＡポリペプチドは、人
間にとって天然の免疫原である非−反応性エピトープを
共有していると思われる。
【００４１】ＲＥＳＡの抗原決定基 これまで免疫学的に研究されたＲＥＳＡｃＤＮＡ発現ク
ローンは全て、５'末端で内因性ＥｃｏＲ１部位と接し
ていた。この部位の５'に何らかの抗原決定基が存在す
るか否かを調べるために、ＮＦ７ＡＧ１３から得た大き
いＥｃｏＲ１フラグメントをｐＵＣ９にサブクローン
し、音波処理して無作為にフラグメント（断片）化し、
生じたフラグメントをλＡmp３に再クローンした。この
フラグメントの規定された領域を発現するクローンを同
定するために、得られたクローンを３個の異る制限フラ
グメント、即ち、反復の５'側に位置するフラグメン
ト、反復を含有するフラグメント、並びに反復の３'側
のフラグメントの各々を用いたハイブリダイゼーション
によりスクリーニングした。次に、選択したクローン
が、大きい融合ポリペプチド、即ち、細胞から得た全抽
出物をポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけた後、ク
ーマッシー（Ｃoomassie）ブルー染色により検出可能な
ポリペプチドを発現するかどうかを調べた。配列の正し
いフレームを除く全ての配列には複数個の終止コドンが
存在しているので、その様な発現されたクローンは、既
に抗体結合に関して分析されたあらゆるフラグメントの
５'側にあるＲＥＳＡのフラグメントであると結論し得
る。
ローンは全て、５'末端で内因性ＥｃｏＲ１部位と接し
ていた。この部位の５'に何らかの抗原決定基が存在す
るか否かを調べるために、ＮＦ７ＡＧ１３から得た大き
いＥｃｏＲ１フラグメントをｐＵＣ９にサブクローン
し、音波処理して無作為にフラグメント（断片）化し、
生じたフラグメントをλＡmp３に再クローンした。この
フラグメントの規定された領域を発現するクローンを同
定するために、得られたクローンを３個の異る制限フラ
グメント、即ち、反復の５'側に位置するフラグメン
ト、反復を含有するフラグメント、並びに反復の３'側
のフラグメントの各々を用いたハイブリダイゼーション
によりスクリーニングした。次に、選択したクローン
が、大きい融合ポリペプチド、即ち、細胞から得た全抽
出物をポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけた後、ク
ーマッシー（Ｃoomassie）ブルー染色により検出可能な
ポリペプチドを発現するかどうかを調べた。配列の正し
いフレームを除く全ての配列には複数個の終止コドンが
存在しているので、その様な発現されたクローンは、既
に抗体結合に関して分析されたあらゆるフラグメントの
５'側にあるＲＥＳＡのフラグメントであると結論し得
る。
【００４２】次いで、５'反復を発現するクローンを、
Ｐ．ファルシパルムにさらされた病歴を有するＰＮＧ患
者の血清を用い、そのままのコロニー・イムノアッセイ
に付した。５'反復を含んでいる幾つかのクローンが血
清と反応した。５'ＲＥＳＡ反復にも、３'反復と同様
に、ヒトでの天然の免疫原である抗原決定基が含まれて
いるとの結論に達した。
Ｐ．ファルシパルムにさらされた病歴を有するＰＮＧ患
者の血清を用い、そのままのコロニー・イムノアッセイ
に付した。５'反復を含んでいる幾つかのクローンが血
清と反応した。５'ＲＥＳＡ反復にも、３'反復と同様
に、ヒトでの天然の免疫原である抗原決定基が含まれて
いるとの結論に達した。
【００４３】ＲＥＳＡのエクソン１中の残基１７から５
２までの配列に相当する３６アミノ酸ペプチド（図１〜
図８）を合成し、マラリアにさらされた人での、ＲＥＳ
Ａ該領域に関する抗体を試験するのに用いた。固相ラジ
オイムノアッセイによって測定したところ、幾人かは、
このペプチドに対する著しい抗体レベルを示した。従っ
て、ＲＥＳＡのエクソン１には、天然の免疫原性エピト
ープが存在しており、これは、非反復性配列によってコ
ードされていると思われる。
２までの配列に相当する３６アミノ酸ペプチド（図１〜
図８）を合成し、マラリアにさらされた人での、ＲＥＳ
Ａ該領域に関する抗体を試験するのに用いた。固相ラジ
オイムノアッセイによって測定したところ、幾人かは、
このペプチドに対する著しい抗体レベルを示した。従っ
て、ＲＥＳＡのエクソン１には、天然の免疫原性エピト
ープが存在しており、これは、非反復性配列によってコ
ードされていると思われる。
【００４４】ＲＥＳＡ配列の免疫原性 ＲＥＳＡの３'および５'反復を発現するクローンからＲ
ＥＳＡ／β−ガラクトシダーゼ融合ポリペプチドを単離
した。これらのタンパク質の免疫原性を、抗原０.２５
〜０.５mgと完全フロインド・アジュバントとを用いて
ウサギを免疫することにより、試験した。４〜６週間後
に、不完全アジュバント中に入れた同量の抗原を、ウサ
ギにブースター投与した。どの場合においても、インビ
トロで増殖しているＰ．ファルシパルム中で発現された
ＲＥＳＡ分子と反応する抗体が惹起されていた。
ＥＳＡ／β−ガラクトシダーゼ融合ポリペプチドを単離
した。これらのタンパク質の免疫原性を、抗原０.２５
〜０.５mgと完全フロインド・アジュバントとを用いて
ウサギを免疫することにより、試験した。４〜６週間後
に、不完全アジュバント中に入れた同量の抗原を、ウサ
ギにブースター投与した。どの場合においても、インビ
トロで増殖しているＰ．ファルシパルム中で発現された
ＲＥＳＡ分子と反応する抗体が惹起されていた。
【００４５】キーホール・リンペット・ヘモシアニン
（Ｋeyhole Ｌimpet Ｈaemocyanin）とコンジュゲート
した３種のＲＥＳＡ合成ペプチド（表１）を用いてウサ
ギを免疫し、得られた抗血清を、ウシアルブミンとコン
ジュゲートさせたこれら３ペプチドの各々、並びにＲＥ
ＳＡの３'および５'反復および感染した赤血球の音波処
理物に対応する融合ポリペプチド、に対して調べた。こ
れらのペプチドで免疫されたマウスは全て、その配列を
含んでいるホモローガスなペプチドおよび融合ポリペプ
チドと反応し得る抗体を産生していた。更に、ペプチド
ＲＥＳＡ３'−２（ＥＥＮＶ×５）は、他の３'反復ペプ
チド、ＲＥＳＡ３'−１（ＥＥＮＶＥＨＤＡ）（これは
通常アミノ酸５個の配列を有する）と反応する抗体をも
惹起した。しかしながら、その逆は成立せず、抗ＲＥＳ
Ａ３'−１抗体はＲＥＳＡ３'−２と反応しなかった。
（Ｋeyhole Ｌimpet Ｈaemocyanin）とコンジュゲート
した３種のＲＥＳＡ合成ペプチド（表１）を用いてウサ
ギを免疫し、得られた抗血清を、ウシアルブミンとコン
ジュゲートさせたこれら３ペプチドの各々、並びにＲＥ
ＳＡの３'および５'反復および感染した赤血球の音波処
理物に対応する融合ポリペプチド、に対して調べた。こ
れらのペプチドで免疫されたマウスは全て、その配列を
含んでいるホモローガスなペプチドおよび融合ポリペプ
チドと反応し得る抗体を産生していた。更に、ペプチド
ＲＥＳＡ３'−２（ＥＥＮＶ×５）は、他の３'反復ペプ
チド、ＲＥＳＡ３'−１（ＥＥＮＶＥＨＤＡ）（これは
通常アミノ酸５個の配列を有する）と反応する抗体をも
惹起した。しかしながら、その逆は成立せず、抗ＲＥＳ
Ａ３'−１抗体はＲＥＳＡ３'−２と反応しなかった。
【００４６】これらの抗−ペプチド抗血清をペプチド−
ＢＳＡコンジュゲートについて検定したところ、ＲＥＳ
Ａの５'および３'反復間には見掛け上、交差反応性を認
めなかった。しかし、同じ血清を融合ポリペプチド上で
検定したところ、このペプチドは、両反復構造と反応す
る抗体を惹起することが判った。しかし、ホモローガス
な反復との反応に比べて、ヘテロローガスな反復との反
応は極めて弱かった。
ＢＳＡコンジュゲートについて検定したところ、ＲＥＳ
Ａの５'および３'反復間には見掛け上、交差反応性を認
めなかった。しかし、同じ血清を融合ポリペプチド上で
検定したところ、このペプチドは、両反復構造と反応す
る抗体を惹起することが判った。しかし、ホモローガス
な反復との反応に比べて、ヘテロローガスな反復との反
応は極めて弱かった。
【００４７】この抗−ペプチド抗血清を、感染赤血球の
ウエスタンブロットにおけるプローブとして用いた。全
ての抗血清がＭｒ１５５,０００ＲＥＳＡポリペプチド
と特異的に反応した。
ウエスタンブロットにおけるプローブとして用いた。全
ての抗血清がＭｒ１５５,０００ＲＥＳＡポリペプチド
と特異的に反応した。
【００４８】
【表１】 ＲＥＳＡに於ける反復に対応する配列および合成ペプチド ＲＥＳＡ 反 復 配 列 合 成 ペ プ チ ド 類 ＊の領域 3'反復 ＥＥＮＶＥＨＤＡ(5)+ ＲＥＳＡ3'−1ＥＥＮＶＥＨＤＡ ＥＥＮＡ(1) ＥＥＮＶ(29) ＲＥＳＡ3'−2(ＥＥＮＶ)nn〜4 ＥＥ−Ｖ(4) ＥＥＹＤ(3) 5'反復 −ＥＥＮＥＥＥＨＴＶ−(1) ＤＤＥＨＶＥＥＨＴ−Ａ(1) ＤＤＥＨＶＥＥＰＴＶＡ(2) ＲＥＳＡ5'-1ＤＤＥＨＶＥＥＰＴＶＡＹ −ＤＥＨＶＥＥＰＴＶＡ(1) −ＥＥＨＶＥＥＰＴＶＡ(1) −ＥＥＨＶＥＥＰ−−Ａ(1) ＊ペプチドの合成は、５'−１ペプチドを、アサートン
（Ａtherton）ら（１１）による、キーセルガー（Ｋies
elguhr）ＫＡ樹脂を支持体とするＦＭＯＣ固相合成法に
よって合成したことを除き、メリフィールドの固相法に
従って行った。＋括弧内の数字は、反復ブロック内に各
配列が現われる回数を示す。
（Ａtherton）ら（１１）による、キーセルガー（Ｋies
elguhr）ＫＡ樹脂を支持体とするＦＭＯＣ固相合成法に
よって合成したことを除き、メリフィールドの固相法に
従って行った。＋括弧内の数字は、反復ブロック内に各
配列が現われる回数を示す。
【００４９】ＲＥＳＡの位置 ＲＥＳＡは免疫電子顕微鏡写真により、リング段階の寄
生虫に感染した赤血球の膜上に検出されたが、赤血球内
の未成熟な寄生虫には随伴していなかった（図１２）。
一方、成熟寄生虫を含有している赤血球膜は標識されな
かったのに対し、寄生虫の細胞質内の短糸を有すると思
われる高電子密度のオルガネラには金粒子が付随してい
た（図１１）。Ｓ抗原に対する対照抗体は赤血球膜上の
メロゾイトと反応しなかった。
生虫に感染した赤血球の膜上に検出されたが、赤血球内
の未成熟な寄生虫には随伴していなかった（図１２）。
一方、成熟寄生虫を含有している赤血球膜は標識されな
かったのに対し、寄生虫の細胞質内の短糸を有すると思
われる高電子密度のオルガネラには金粒子が付随してい
た（図１１）。Ｓ抗原に対する対照抗体は赤血球膜上の
メロゾイトと反応しなかった。
【００５０】メロゾイトの標識化は明らかに内部で行わ
れており、メロゾイト表面の特異的な標識化を示唆する
ものはない。標識化は核から離れた集合体中、並びに、
時にはロプトリイ（rhoptry）上で起きる。他のメロゾ
イトにおいては、金粒子はさらに拡散されていたが、粒
子不含のロプトリイ付近に存在していた。同様の金の分
布は、アフィニティ精製ヒト抗体、並びにクローンされ
た抗原に対して惹起されたウサギ抗体の両方に関しても
観察されたが、アフィニティ精製ヒト抗体においてはよ
り高いバックグラウンド標識化が明らかであった。標識
化に関して観察される型（パターン）に特異性のあるこ
とが、他のクローンされたＰ．ファルシパルム抗原
（例、Ｓ抗原）に対するアフィニティ精製ヒト抗体また
はウサギ抗血清について同じ方法を採用しても、ラベリ
ング（標識化）の方が異なっていたり、標識されなかっ
たりすることから、証明された。
れており、メロゾイト表面の特異的な標識化を示唆する
ものはない。標識化は核から離れた集合体中、並びに、
時にはロプトリイ（rhoptry）上で起きる。他のメロゾ
イトにおいては、金粒子はさらに拡散されていたが、粒
子不含のロプトリイ付近に存在していた。同様の金の分
布は、アフィニティ精製ヒト抗体、並びにクローンされ
た抗原に対して惹起されたウサギ抗体の両方に関しても
観察されたが、アフィニティ精製ヒト抗体においてはよ
り高いバックグラウンド標識化が明らかであった。標識
化に関して観察される型（パターン）に特異性のあるこ
とが、他のクローンされたＰ．ファルシパルム抗原
（例、Ｓ抗原）に対するアフィニティ精製ヒト抗体また
はウサギ抗血清について同じ方法を採用しても、ラベリ
ング（標識化）の方が異なっていたり、標識されなかっ
たりすることから、証明された。
【００５１】さらに、ＲＥＳＡの位置を、タンパク分解
的酵素の攻撃における接近可能性に基いて検討した。無
傷の、リング段階の寄生虫に感染した赤血球（約５％寄
生虫血症）をキモトリプシンまたはトリプシンで処理す
ると、Ｍｒ１５５,０００ポリペプチドは限られた数の
部位で開裂され、２個の主フラグメントが生成する。こ
れらは抗ＲＥＳＡ抗体と反応した無傷の分子の様である
（図１３）。この結果は、ＲＥＳＡ分子の少くとも一部
が、リング−感染血球の外面に露出していることを示し
ている。
的酵素の攻撃における接近可能性に基いて検討した。無
傷の、リング段階の寄生虫に感染した赤血球（約５％寄
生虫血症）をキモトリプシンまたはトリプシンで処理す
ると、Ｍｒ１５５,０００ポリペプチドは限られた数の
部位で開裂され、２個の主フラグメントが生成する。こ
れらは抗ＲＥＳＡ抗体と反応した無傷の分子の様である
（図１３）。この結果は、ＲＥＳＡ分子の少くとも一部
が、リング−感染血球の外面に露出していることを示し
ている。
【００５２】インビトロでの寄生虫の発育阻止 Ｐ．ファルシパルムの同期培養物を、アフィニティ精製
ヒト抗−ＲＥＳＡ抗体の存在下、４８時間培養した。阻
害の程度は、通常、対照との比較において２０〜４０％
阻害の範囲で変化した。
ヒト抗−ＲＥＳＡ抗体の存在下、４８時間培養した。阻
害の程度は、通常、対照との比較において２０〜４０％
阻害の範囲で変化した。
【００５３】結果−ＦＩＲＡ ＦＩＲＡを発現するｃＤＮＡクローン ＦＩＲＡｃＤＮＡクローンは、様々な臨床状況にある６
５人から得た１００以上のＰＮＧ血清の組の９５％と反
応した。多くの血清は他のクローンとも強く反応するで
あろうが、これらは、血清の大部分と強力に反応した。
５人から得た１００以上のＰＮＧ血清の組の９５％と反
応した。多くの血清は他のクローンとも強く反応するで
あろうが、これらは、血清の大部分と強力に反応した。
【００５４】ＦＩＲＡは単一の多形性遺伝子によってコ
ードされている ５種のＰ．ファルシパルム単離体（パプア・ニューギニ
ア起源のＦＣ２７、ＩＭＲ１４３、ＩＭＲ１４４および
ＭＡＤ７１、並びにガーナ起源のＮＦ７）由来の染色体
ＤＮＡをＥｃｏＲＩ、ＡｈａＩＩＩおよびＲｓａＩで制
限消化し、サザーン・ブロッティング法で分析した。各
単離体において、単一の非常に大きい（＞２０kb）Ｅｃ
ｏＲＩフラグメントがハイブリダイズした（データーは
示されていない）。ＡｈａＩＩＩおよびＲｓａＩ消化物
中では、様々なサイズの、より小さい単一フラグメント
がハイブリダイズした。このことから、ＦＩＲＡ遺伝子
は多形性であり、調査した全ての単離体中に存在してい
ることが明らかになった。様々なサイズのフラグメント
は、異ったＦＩＲＡ遺伝子のアレルを示している様に思
われる。僅か５個の異る単離体から少くとも３個の異っ
たアレルが検出されたことから、全アレル数は非常に大
きくなると予想される。各単離体中の単一のフラグメン
トの大きさは、血中段階のプラズモジウムの一倍性ゲノ
ムと一致している。
ードされている ５種のＰ．ファルシパルム単離体（パプア・ニューギニ
ア起源のＦＣ２７、ＩＭＲ１４３、ＩＭＲ１４４および
ＭＡＤ７１、並びにガーナ起源のＮＦ７）由来の染色体
ＤＮＡをＥｃｏＲＩ、ＡｈａＩＩＩおよびＲｓａＩで制
限消化し、サザーン・ブロッティング法で分析した。各
単離体において、単一の非常に大きい（＞２０kb）Ｅｃ
ｏＲＩフラグメントがハイブリダイズした（データーは
示されていない）。ＡｈａＩＩＩおよびＲｓａＩ消化物
中では、様々なサイズの、より小さい単一フラグメント
がハイブリダイズした。このことから、ＦＩＲＡ遺伝子
は多形性であり、調査した全ての単離体中に存在してい
ることが明らかになった。様々なサイズのフラグメント
は、異ったＦＩＲＡ遺伝子のアレルを示している様に思
われる。僅か５個の異る単離体から少くとも３個の異っ
たアレルが検出されたことから、全アレル数は非常に大
きくなると予想される。各単離体中の単一のフラグメン
トの大きさは、血中段階のプラズモジウムの一倍性ゲノ
ムと一致している。
【００５５】ＦＩＲＡポリペプチドの同定 ＦＩＲＡポリペプチド（図２３）に対して特異的なヒト
抗体を、アフィニティクロマトグラフィーで精製した。
ウエスタンブロット法において、この抗体は、各単離体
中に含まれている見掛け上極めて大きいＰ．ファルシパ
ルムのポリペプチド（見掛けの分子量＞３００,００
０）と強く反応した（図２３Ｃ）。この極端な領域には
正確なサイズマーカーがないが、ＦＩＲＡの易動度はＦ
Ｃ２７のＭｒ２００,０００Ｓ抗原よりもかなり低かっ
た。ＤＮＡフラグメントの大きさの僅かな違いに関連し
ていると思われたＦＩＲＡポリペプチドの大きさにおけ
る単離体間の差異は検出されなかった（図２３Ｃ）。抗
体は、Ｍｒ＞３００,０００分子のタンパク分解的開裂
産物と思われる多くの小さいポリペプチドとも、弱く様
々に反応した（図２３Ｃ）。ベクター吸収剤上の同じ血
清から精製した対照抗体は反応しなかった（図２３
Ｄ）。さらに、他の抗原陽性クローンからの吸収剤上の
同じ血清から精製した抗体は、Ｍｒ＞３００,０００ポ
リペプチド以外のポリペプチドと特異的に反応した（デ
ーターは記載せず）。結論として、ＦＩＲＡは被検Ｐ．
ファルシパルム各単離体中に発現される非常に大きいポ
リペプチドであり、ＦＣ２７によって発現されたＦＩＲ
Ａのアレルに対する抗体とＫ１．およびＮＦ７によって
発現されたアレルとが交差反応するといえる。
抗体を、アフィニティクロマトグラフィーで精製した。
ウエスタンブロット法において、この抗体は、各単離体
中に含まれている見掛け上極めて大きいＰ．ファルシパ
ルムのポリペプチド（見掛けの分子量＞３００,００
０）と強く反応した（図２３Ｃ）。この極端な領域には
正確なサイズマーカーがないが、ＦＩＲＡの易動度はＦ
Ｃ２７のＭｒ２００,０００Ｓ抗原よりもかなり低かっ
た。ＤＮＡフラグメントの大きさの僅かな違いに関連し
ていると思われたＦＩＲＡポリペプチドの大きさにおけ
る単離体間の差異は検出されなかった（図２３Ｃ）。抗
体は、Ｍｒ＞３００,０００分子のタンパク分解的開裂
産物と思われる多くの小さいポリペプチドとも、弱く様
々に反応した（図２３Ｃ）。ベクター吸収剤上の同じ血
清から精製した対照抗体は反応しなかった（図２３
Ｄ）。さらに、他の抗原陽性クローンからの吸収剤上の
同じ血清から精製した抗体は、Ｍｒ＞３００,０００ポ
リペプチド以外のポリペプチドと特異的に反応した（デ
ーターは記載せず）。結論として、ＦＩＲＡは被検Ｐ．
ファルシパルム各単離体中に発現される非常に大きいポ
リペプチドであり、ＦＣ２７によって発現されたＦＩＲ
Ａのアレルに対する抗体とＫ１．およびＮＦ７によって
発現されたアレルとが交差反応するといえる。
【００５６】ＦＩＲＡおよびそのｍＲＮＡの位置および
段階特異性 アフィニティ精製ヒト抗体並びにクローンＡｇ２３１ま
たはＡｇ２３１科の一員によって免疫されたマウスの血
清は、成熟寄生虫（色素含有）、並びに未成熟な（環状
体、リング型の）寄生虫を含む細胞と反応した。リング
感染細胞上の螢光は不均一であり、寄生虫の限界を越え
て分布している様であった。従って、抗体と、固定化さ
れていない寄生虫処理細胞とを懸濁液中で反応させた場
合、あるいは、軽くグルタルアルデヒドで固定化し、風
乾した寄生虫処理赤血球の単一層とを反応させた場合に
は、赤血球表面で染色されて検出されることはないが、
ＦＩＲＡは寄生虫の外方に出ていると思われる（１
２）。
段階特異性 アフィニティ精製ヒト抗体並びにクローンＡｇ２３１ま
たはＡｇ２３１科の一員によって免疫されたマウスの血
清は、成熟寄生虫（色素含有）、並びに未成熟な（環状
体、リング型の）寄生虫を含む細胞と反応した。リング
感染細胞上の螢光は不均一であり、寄生虫の限界を越え
て分布している様であった。従って、抗体と、固定化さ
れていない寄生虫処理細胞とを懸濁液中で反応させた場
合、あるいは、軽くグルタルアルデヒドで固定化し、風
乾した寄生虫処理赤血球の単一層とを反応させた場合に
は、赤血球表面で染色されて検出されることはないが、
ＦＩＲＡは寄生虫の外方に出ていると思われる（１
２）。
【００５７】この様に、ＦＩＲＡの段階特異性は何故か
ＲＥＳＡと類似している（２）。高度に精製されたメロ
ゾイトのｍＲＮＡから調製したｃＤＮＡと、配列した１
３３コロニーとのハイブリダイゼーションにより、さら
に、ＲＥＳＡとの類似性が明らかになった。Ａｇ２３１
科の全メンバーがメロゾイトｃＤＮＡとハイブリダイズ
した。顕著な点として、この配列中の他のクローンのみ
が、あるいは、７８抗原陽性クローンに関する別個の配
列中のクローンのみが、ＲＥＳＡをコードしているメロ
ゾイトｃＤＮＡとハイブリダイズした（２，１３）。従
って、ＦＩＲＡのｍＲＮＡおよびＲＥＳＡのｍＲＮＡ
は、それらが、メロゾイト期においては極めて豊富化さ
れるＰ．ファルシパルム抗原のｍＲＮＡの間では一般的
ではないといえる。
ＲＥＳＡと類似している（２）。高度に精製されたメロ
ゾイトのｍＲＮＡから調製したｃＤＮＡと、配列した１
３３コロニーとのハイブリダイゼーションにより、さら
に、ＲＥＳＡとの類似性が明らかになった。Ａｇ２３１
科の全メンバーがメロゾイトｃＤＮＡとハイブリダイズ
した。顕著な点として、この配列中の他のクローンのみ
が、あるいは、７８抗原陽性クローンに関する別個の配
列中のクローンのみが、ＲＥＳＡをコードしているメロ
ゾイトｃＤＮＡとハイブリダイズした（２，１３）。従
って、ＦＩＲＡのｍＲＮＡおよびＲＥＳＡのｍＲＮＡ
は、それらが、メロゾイト期においては極めて豊富化さ
れるＰ．ファルシパルム抗原のｍＲＮＡの間では一般的
ではないといえる。
【００５８】ＦＩＲＡ配列 ＡｈａＩＩＩフラグメントを包含している染色体クロー
ンをλgt１０にクローンしてＡｇ２３１.５と命名し、
その完全な配列決定を行った。この遺伝子は介在配列を
含有しており、全構造は著しくＲＥＳＡと似通ってい
る。エクソン１はシグナルペプチドかもしれない（それ
は極めて短かいが）セグメント、次いで親水性アミノ
酸、さらに３２の非荷電アミノ酸から成っている。介在
配列は、この比較的疎水性のセグメントと直接、隣接し
て存在している。残余配列は反復性配列と、内部に点在
している非反復性配列とのブロックで構成されている。
全ての場合、反復性配列は１３のヘキサマーのグループ
として示されたが、これらの５'グループの大部分に
は、非−反復性配列が点在していない。即ち、３９ヘキ
サマーのブロックが存在する。３'末端の欠失によって
リンカー−Ａｈａ結合が変化したと思われるので、３'
末端の構造は不確実である。
ンをλgt１０にクローンしてＡｇ２３１.５と命名し、
その完全な配列決定を行った。この遺伝子は介在配列を
含有しており、全構造は著しくＲＥＳＡと似通ってい
る。エクソン１はシグナルペプチドかもしれない（それ
は極めて短かいが）セグメント、次いで親水性アミノ
酸、さらに３２の非荷電アミノ酸から成っている。介在
配列は、この比較的疎水性のセグメントと直接、隣接し
て存在している。残余配列は反復性配列と、内部に点在
している非反復性配列とのブロックで構成されている。
全ての場合、反復性配列は１３のヘキサマーのグループ
として示されたが、これらの５'グループの大部分に
は、非−反復性配列が点在していない。即ち、３９ヘキ
サマーのブロックが存在する。３'末端の欠失によって
リンカー−Ａｈａ結合が変化したと思われるので、３'
末端の構造は不確実である。
【００５９】反復配列間の交差反応 Ａｇ２３１.６（ＦＩＲＡ）上でアフィラティ精製した
ヒト抗体は、ＥＬＩＳＡにおいて、Ａｇ２３１.６上に
極めて強いシグナルを示し、弱いが極めて明確なシグナ
ルをＡｇ１３.１.７.５（ＲＥＳＡ５'反復）上に示した
が、Ａｇ１３（ＲＥＳＡ３'反復）上には何らのシグナ
ルをも示さなかった（図２４）。この交差反応は、さも
なくば別々の抗原における反復配列相互の類似性（ホモ
ロジイ）と一致している。
ヒト抗体は、ＥＬＩＳＡにおいて、Ａｇ２３１.６上に
極めて強いシグナルを示し、弱いが極めて明確なシグナ
ルをＡｇ１３.１.７.５（ＲＥＳＡ５'反復）上に示した
が、Ａｇ１３（ＲＥＳＡ３'反復）上には何らのシグナ
ルをも示さなかった（図２４）。この交差反応は、さも
なくば別々の抗原における反復配列相互の類似性（ホモ
ロジイ）と一致している。
【００６０】組換えＤＮＡ分子、組換えＤＮＡクローニ
ングビヒクルおよびベクターの調製、宿主細胞−クロー
ニングビヒクルの組合わせ、並びに宿主細胞によるポリ
ペプチドの発現は、国際特許出願Ｎo．ＰＣＴ／ＡＵ８
４／０００１６の明細書に記載されている。この明細書
ではまた、この様にして発現されたＤＮＡ分子およびポ
リペプチドの血清学的診断、並びにプラズモジアに対す
る防御免疫を刺激するための単価または多価ワクチンの
製造における使用法についても詳しく記述されている。
これらの記述は本発明にも等しく適用し得るものであ
り、ここにそれらを引用する。
ングビヒクルおよびベクターの調製、宿主細胞−クロー
ニングビヒクルの組合わせ、並びに宿主細胞によるポリ
ペプチドの発現は、国際特許出願Ｎo．ＰＣＴ／ＡＵ８
４／０００１６の明細書に記載されている。この明細書
ではまた、この様にして発現されたＤＮＡ分子およびポ
リペプチドの血清学的診断、並びにプラズモジアに対す
る防御免疫を刺激するための単価または多価ワクチンの
製造における使用法についても詳しく記述されている。
これらの記述は本発明にも等しく適用し得るものであ
り、ここにそれらを引用する。
【００６１】引用文献 １．ケンプ（Ｋemp，Ｄ．Ｊ．），コペル（Ｃoppel，
Ｒ．Ｌ．），カウマン（Ｃowman，Ａ．Ｆ．），セイン
ト（Ｓaint，Ｒ．Ｂ．），ブラウン（Ｂrown，Ｇ．
Ｖ．）およびアンダーズ（Ａnders，Ｒ．Ｆ．）（１９
８３）プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・ア
カデミィ・オブ・サイエンスィズ（Ｐroc．Ｎatl．Ａca
d．Ｓci．）ＵＳＡ８０，３７８７−３７９１． ２．コペル（Ｃoppel，Ｒ．Ｌ．），カウマン（Ｃowma
n，Ａ．Ｆ．），アンダーズ（Ａnders，Ｒ．Ｆ．），ビ
アンコ（Ｂianco，Ａ．Ｅ．）セイント（Ｓaint，Ｒ．
Ｂ．），リンゲルバッハ（Ｌingelbach，Ｋ．Ｒ．），
ケンプ（Ｋemp，Ｄ．Ｊ．）およびブラウン（Ｂrown，
Ｇ．Ｖ．）（１９８４）ネイチャー（Ｎature）ロンド
ン３１０，７８９−７９２． ３．オザキ（Ｏzaki，Ｌ．Ｓ．），スベック（Ｓvec，
Ｐ．），ナッセンツヴァイヒ（Ｎussenzweig，Ｒ．
Ｓ．），同（Ｎussenzweig，Ｖ．）およびゴッドソン
（Ｇodson，Ｇ．Ｎ．）（１９８３），セル（Ｃell）３
４，８１５−８２２. ４．ダーム（Ｄame，Ｊ．Ｂ．），ウイリアムス（Ｗill
iams，Ｊ．Ｌ．），マクカットハン（ＭcＣutchan，
Ｔ．Ｆ．），ウエーバー（Ｗeber，Ｊ．Ｌ．），ヴィル
ツ（Ｗirtz，Ｒ．Ａ．），ホックメイヤー（Ｈockmeye
r，Ｗ．Ｔ．），サンダース（Ｓanders，Ｇ．Ｓ．），
レッディ（Ｒeddy，Ｅ．Ｐ．），マロイ（Ｍaloy，Ｗ．
Ｌ．）ハインス（Ｈaynes，Ｊ．Ｄ．），シナイダー
（Ｓchneider，Ｉ．），ロバーツ（Ｒoberts，Ｄ．），
ディッグス（Ｄiggs，Ｃ．Ｌ．）およびミラー（Ｍille
r，Ｌ．Ｈ）（１９８４）サイエンス（Ｓcience）２２
５，５９３−５９９． ５．コペル（Ｃoppel，Ｒ．Ｌ．），カウマン（Ｃowma
n，Ａ．Ｆ．），リンゲルバッハ（Ｌingelbach，Ｋ．
Ｒ．），ブラウン（Ｂrown，Ｇ．Ｖ．），セイント（Ｓ
aint，Ｒ．Ｂ．），ケンプ（Ｋemp，Ｄ．Ｊ．）および
アンダース（Ａnders，Ｒ．Ｆ．）（１９８３）ネイチ
ャー（ロンドン）３０６，７５１−７５６.
Ｒ．Ｌ．），カウマン（Ｃowman，Ａ．Ｆ．），セイン
ト（Ｓaint，Ｒ．Ｂ．），ブラウン（Ｂrown，Ｇ．
Ｖ．）およびアンダーズ（Ａnders，Ｒ．Ｆ．）（１９
８３）プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・ア
カデミィ・オブ・サイエンスィズ（Ｐroc．Ｎatl．Ａca
d．Ｓci．）ＵＳＡ８０，３７８７−３７９１． ２．コペル（Ｃoppel，Ｒ．Ｌ．），カウマン（Ｃowma
n，Ａ．Ｆ．），アンダーズ（Ａnders，Ｒ．Ｆ．），ビ
アンコ（Ｂianco，Ａ．Ｅ．）セイント（Ｓaint，Ｒ．
Ｂ．），リンゲルバッハ（Ｌingelbach，Ｋ．Ｒ．），
ケンプ（Ｋemp，Ｄ．Ｊ．）およびブラウン（Ｂrown，
Ｇ．Ｖ．）（１９８４）ネイチャー（Ｎature）ロンド
ン３１０，７８９−７９２． ３．オザキ（Ｏzaki，Ｌ．Ｓ．），スベック（Ｓvec，
Ｐ．），ナッセンツヴァイヒ（Ｎussenzweig，Ｒ．
Ｓ．），同（Ｎussenzweig，Ｖ．）およびゴッドソン
（Ｇodson，Ｇ．Ｎ．）（１９８３），セル（Ｃell）３
４，８１５−８２２. ４．ダーム（Ｄame，Ｊ．Ｂ．），ウイリアムス（Ｗill
iams，Ｊ．Ｌ．），マクカットハン（ＭcＣutchan，
Ｔ．Ｆ．），ウエーバー（Ｗeber，Ｊ．Ｌ．），ヴィル
ツ（Ｗirtz，Ｒ．Ａ．），ホックメイヤー（Ｈockmeye
r，Ｗ．Ｔ．），サンダース（Ｓanders，Ｇ．Ｓ．），
レッディ（Ｒeddy，Ｅ．Ｐ．），マロイ（Ｍaloy，Ｗ．
Ｌ．）ハインス（Ｈaynes，Ｊ．Ｄ．），シナイダー
（Ｓchneider，Ｉ．），ロバーツ（Ｒoberts，Ｄ．），
ディッグス（Ｄiggs，Ｃ．Ｌ．）およびミラー（Ｍille
r，Ｌ．Ｈ）（１９８４）サイエンス（Ｓcience）２２
５，５９３−５９９． ５．コペル（Ｃoppel，Ｒ．Ｌ．），カウマン（Ｃowma
n，Ａ．Ｆ．），リンゲルバッハ（Ｌingelbach，Ｋ．
Ｒ．），ブラウン（Ｂrown，Ｇ．Ｖ．），セイント（Ｓ
aint，Ｒ．Ｂ．），ケンプ（Ｋemp，Ｄ．Ｊ．）および
アンダース（Ａnders，Ｒ．Ｆ．）（１９８３）ネイチ
ャー（ロンドン）３０６，７５１−７５６.
【００６２】６．スタール（Ｓtahl，Ｈ−Ｄ．），クリ
ューサー（Ｃrewther，Ｐ．Ｅ．），アンダース（Ａnde
rs，Ｒ．Ｆ．），ブラウン（Ｂrown，Ｇ．Ｖ．），コペ
ル（Ｃoppel，Ｒ．Ｌ．），ビアンコ（Ｂianco，Ａ．
Ｅ．），ミッチェル（Ｍitchell，Ｇ．Ｆ．）およびケ
ンプ（Ｋemp，Ｄ．Ｊ．）（１９８５）。プロシーディ
ングス・オブ・ナショナル・アカデミィ・オブ・サイエ
ンスィズ（ＵＳＡ）８２，５４３−５４７。 ７．スタール（Ｓtahl，Ｈ−Ｄ．），コペル（Ｃoppe
l，Ｒ．Ｌ．），ブラウン（Ｂrown，Ｇ．Ｖ．），セイ
ント（Ｓaint，Ｒ．Ｂ．），リンゲルバッハ（Ｌingelb
ach，Ｋ．），カウマン（Ｃowman，Ａ．Ｆ．），アンダ
ーズ（Ａnders，Ｒ．Ｆ．）およびケンプ（Ｋemp，Ｄ．
Ｊ．）（１９８４）プロシーディングス・オブ・ザ・ナ
ショナル・アカデミィ・オブ・サイエンスィズ（ＵＳ
Ａ）８１，２４５６−２４６０。 ８．サンガー（Ｓanger，Ｒ．），ニックレン（Ｎickle
n，Ｓ．）およびコウルソン（Ｃoulson，Ａ．Ｒ．）
（１９７７）プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミィ・オブ・サイエンスィズ（ＵＳＡ）７
４，５４６３−５４６７。 ９．メッシング（Ｍessing．Ｊ．）およびビエイラ（Ｖ
ieira，Ｊ．）（１９８２）ジーン（Ｇene）１９，２６
９−２７６。 １０．ステイデン（Ｓtaden，Ｒ．）（１９８０）ヌク
レイック・アシッズ・リサーチ（Ｎucl．Ａcids．Ｒe
s．）８，３６７３−３６９４。
ューサー（Ｃrewther，Ｐ．Ｅ．），アンダース（Ａnde
rs，Ｒ．Ｆ．），ブラウン（Ｂrown，Ｇ．Ｖ．），コペ
ル（Ｃoppel，Ｒ．Ｌ．），ビアンコ（Ｂianco，Ａ．
Ｅ．），ミッチェル（Ｍitchell，Ｇ．Ｆ．）およびケ
ンプ（Ｋemp，Ｄ．Ｊ．）（１９８５）。プロシーディ
ングス・オブ・ナショナル・アカデミィ・オブ・サイエ
ンスィズ（ＵＳＡ）８２，５４３−５４７。 ７．スタール（Ｓtahl，Ｈ−Ｄ．），コペル（Ｃoppe
l，Ｒ．Ｌ．），ブラウン（Ｂrown，Ｇ．Ｖ．），セイ
ント（Ｓaint，Ｒ．Ｂ．），リンゲルバッハ（Ｌingelb
ach，Ｋ．），カウマン（Ｃowman，Ａ．Ｆ．），アンダ
ーズ（Ａnders，Ｒ．Ｆ．）およびケンプ（Ｋemp，Ｄ．
Ｊ．）（１９８４）プロシーディングス・オブ・ザ・ナ
ショナル・アカデミィ・オブ・サイエンスィズ（ＵＳ
Ａ）８１，２４５６−２４６０。 ８．サンガー（Ｓanger，Ｒ．），ニックレン（Ｎickle
n，Ｓ．）およびコウルソン（Ｃoulson，Ａ．Ｒ．）
（１９７７）プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミィ・オブ・サイエンスィズ（ＵＳＡ）７
４，５４６３−５４６７。 ９．メッシング（Ｍessing．Ｊ．）およびビエイラ（Ｖ
ieira，Ｊ．）（１９８２）ジーン（Ｇene）１９，２６
９−２７６。 １０．ステイデン（Ｓtaden，Ｒ．）（１９８０）ヌク
レイック・アシッズ・リサーチ（Ｎucl．Ａcids．Ｒe
s．）８，３６７３−３６９４。
【００６３】１１．アサートン（Ａtherton，Ｅ．），
カビーツェル（Ｃaviezel，Ｍ．），フォックス（Ｆo
x，Ｈ．），ハーキス（Ｈarkiss，Ｄ．），オーバー
（Ｏver，Ｈ．），シェパード（Ｓheppard，Ｒ．Ｃ．）
（１９８３）ジェイ・ケム・ソク・バーキン・トランス
（Ｊ．Ｃhem．Ｓoc．Ｐerkin Ｔrans．）１，６５−７
３。 １２．パールマン（Ｐerlman，Ｈ．），ベーツィンス
（Ｂerzins，Ｋ．），ウォールグレン（Ｗahlgren，
Ｍ．），カールスソン（Ｃarlsson，Ｊ．），ビヨーク
マン（Ｂjorkmann，Ａ．），パタルボヨ（Ｐatarvoyo，
Ｍ．Ｅ．），およびペールマン（Ｐerlmann，Ｐ．）
（１９８４）ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メディソン（Ｊ．Ｅxp．Ｍed．）１５９，１６８６−１
７０４。 １３．アンダース（Ａnders，Ｒ．Ｆ．），コペル（Ｃo
ppel，Ｒ．Ｌ．），ブラウン（Ｂrown，Ｇ．Ｖ．），セ
イント（Ｓaint，Ｒ．Ｂ．），カウマン（Ｃowman，
Ａ．Ｆ．），リンゲルバッハ（Ｌingelbach，Ｋ．
Ｒ．），ミッチェル（Ｍitchell，Ｇ．Ｆ．）およびケ
ンプ（Ｋemp．Ｄ．Ｊ．）（１９８４）モレキュラー・
オブ・バイオロジカル・メディソン（Ｍolec．Ｂiol．
Ｍed．）２，１７７−１９１。
カビーツェル（Ｃaviezel，Ｍ．），フォックス（Ｆo
x，Ｈ．），ハーキス（Ｈarkiss，Ｄ．），オーバー
（Ｏver，Ｈ．），シェパード（Ｓheppard，Ｒ．Ｃ．）
（１９８３）ジェイ・ケム・ソク・バーキン・トランス
（Ｊ．Ｃhem．Ｓoc．Ｐerkin Ｔrans．）１，６５−７
３。 １２．パールマン（Ｐerlman，Ｈ．），ベーツィンス
（Ｂerzins，Ｋ．），ウォールグレン（Ｗahlgren，
Ｍ．），カールスソン（Ｃarlsson，Ｊ．），ビヨーク
マン（Ｂjorkmann，Ａ．），パタルボヨ（Ｐatarvoyo，
Ｍ．Ｅ．），およびペールマン（Ｐerlmann，Ｐ．）
（１９８４）ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メディソン（Ｊ．Ｅxp．Ｍed．）１５９，１６８６−１
７０４。 １３．アンダース（Ａnders，Ｒ．Ｆ．），コペル（Ｃo
ppel，Ｒ．Ｌ．），ブラウン（Ｂrown，Ｇ．Ｖ．），セ
イント（Ｓaint，Ｒ．Ｂ．），カウマン（Ｃowman，
Ａ．Ｆ．），リンゲルバッハ（Ｌingelbach，Ｋ．
Ｒ．），ミッチェル（Ｍitchell，Ｇ．Ｆ．）およびケ
ンプ（Ｋemp．Ｄ．Ｊ．）（１９８４）モレキュラー・
オブ・バイオロジカル・メディソン（Ｍolec．Ｂiol．
Ｍed．）２，１７７−１９１。
【図１】 ＲＥＳＡのヌクレオチド配列および予測され
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
【図２】 ＲＥＳＡのヌクレオチド配列および予測され
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
【図３】 ＲＥＳＡのヌクレオチド配列および予測され
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
【図４】 ＲＥＳＡのヌクレオチド配列および予測され
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
【図５】 ＲＥＳＡのヌクレオチド配列および予測され
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
【図６】 ＲＥＳＡのヌクレオチド配列および予測され
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
【図７】 ＲＥＳＡのヌクレオチド配列および予測され
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
【図８】 ＲＥＳＡのヌクレオチド配列および予測され
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
るアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド配列
はジデオキシ法によって決定された（８）。
【図９】 図１〜図８の配列から推定されるＲＥＳＡ遺
伝子の構造を示す模式図。５'および３'エクソンが示さ
れている。
伝子の構造を示す模式図。５'および３'エクソンが示さ
れている。
【図１０】 Ａは電気泳動試料緩衝液中で溶解し、抗−
ＲＥＳＡ抗体でプローブして得た、Ｐ．ファルシパルム
の２個の単離体の同時培養物に関するウエスタンブロッ
トを示す。ＢおよびＣは、アフィニティ法で精製したＲ
ＥＳＡに対するヒト抗体を用いて得た、Ｐ．ファルシパ
ルムの、（１）リング段階、（２）成熟トロホゾイト、
（３）シゾント、および（４）メロゾイトに関するウエ
スタンブロットを示す模写図。（Ｂ）における抗原はト
リトンＸ−１００で抽出された。（Ｃ）における抗原は
トリトンＸ−１００に不溶性であるが電気泳動試料緩衝
液には可溶性であった。放射性活性マーカーはアマーシ
ャム、インターナト（Ａmersham Ｉnternat．）、バッ
キンガムシェア（Ｂuckinghamshire）（英国）から入手
した。これは、ミオシン（２００キロダルトン、Ｋdalt
on）、ホスホリラーゼ−ｂ（９３キロダルトン）、およ
びウシ血清アルブミン（６９キロダルトン）を表わす。
ＲＥＳＡ抗体でプローブして得た、Ｐ．ファルシパルム
の２個の単離体の同時培養物に関するウエスタンブロッ
トを示す。ＢおよびＣは、アフィニティ法で精製したＲ
ＥＳＡに対するヒト抗体を用いて得た、Ｐ．ファルシパ
ルムの、（１）リング段階、（２）成熟トロホゾイト、
（３）シゾント、および（４）メロゾイトに関するウエ
スタンブロットを示す模写図。（Ｂ）における抗原はト
リトンＸ−１００で抽出された。（Ｃ）における抗原は
トリトンＸ−１００に不溶性であるが電気泳動試料緩衝
液には可溶性であった。放射性活性マーカーはアマーシ
ャム、インターナト（Ａmersham Ｉnternat．）、バッ
キンガムシェア（Ｂuckinghamshire）（英国）から入手
した。これは、ミオシン（２００キロダルトン、Ｋdalt
on）、ホスホリラーゼ−ｂ（９３キロダルトン）、およ
びウシ血清アルブミン（６９キロダルトン）を表わす。
【図１１】 ウサギ抗−ＲＥＳＡとプロテインＡ金を用
いて検出した、シゾント内でのミロゾイト形成期におけ
る、短糸を持つと思われる低密度小胞内のＲＥＳＡの位
置（→）を示す免疫電子顕微鏡写真の模写図である。ロ
プトリエス（rhoptries）（Ｒ）は標識されていない。
（Ｘ４１,７００；挿入Ｘ７３,０００）。
いて検出した、シゾント内でのミロゾイト形成期におけ
る、短糸を持つと思われる低密度小胞内のＲＥＳＡの位
置（→）を示す免疫電子顕微鏡写真の模写図である。ロ
プトリエス（rhoptries）（Ｒ）は標識されていない。
（Ｘ４１,７００；挿入Ｘ７３,０００）。
【図１２】 ウサギ抗−ＲＥＳＡと反応したリング−感
染赤血球の切片の電子顕微鏡写真の模写図である。非感
染赤血球の一部も示されている。
染赤血球の切片の電子顕微鏡写真の模写図である。非感
染赤血球の一部も示されている。
【図１３】 キモトリプシン（２０μg／ml）で消化し
たリング段階感染赤血球のウエスタンブロットの模式図
であって、（１）は０分、（２）は２０分、（３）は６
０分の消化に付されたものを表わす。酵素消化の後、無
傷の赤血球を洗浄し、電気泳動試料緩衝液に溶解し、１
０％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけ、ニ
トロセルロース上に電気泳動的に移行させた。次いで、
ニトロセルロースフィルターを希釈率１：５００のウサ
ギ抗−ＲＥＳＡでプローブした。分子量はキロダルトン
で示されており、ＲＥＳＡ（１５５Ｋｄ）、β−ガラク
トシダーゼ（１１６Ｋｄ）そしてホスホリラーゼ−ｂ
（９３Ｋｄ）に対応する。
たリング段階感染赤血球のウエスタンブロットの模式図
であって、（１）は０分、（２）は２０分、（３）は６
０分の消化に付されたものを表わす。酵素消化の後、無
傷の赤血球を洗浄し、電気泳動試料緩衝液に溶解し、１
０％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけ、ニ
トロセルロース上に電気泳動的に移行させた。次いで、
ニトロセルロースフィルターを希釈率１：５００のウサ
ギ抗−ＲＥＳＡでプローブした。分子量はキロダルトン
で示されており、ＲＥＳＡ（１５５Ｋｄ）、β−ガラク
トシダーゼ（１１６Ｋｄ）そしてホスホリラーゼ−ｂ
（９３Ｋｄ）に対応する。
【図１４】 ＦＩＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列および
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
【図１５】 ＦＩＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列および
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
【図１６】 ＦＩＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列および
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
【図１７】 ＦＩＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列および
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
【図１８】 ＦＩＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列および
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
【図１９】 ＦＩＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列および
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
【図２０】 ＦＩＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列および
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
【図２１】 ＦＩＲＡ遺伝子のヌクレオチド配列および
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
推定のアミノ酸配列の１部を示す配列図。ヌクレオチド
配列はジデオキシ法で決定された（８）。ライブラリイ
を組立てる際に３'末端に結合（ライゲート）させたＥ
ｃｏＲＩリンカーが存在していないので、この配列の
３'末端は不完全である（おそらく欠失による）。
【図２２】 図１４〜２１の配列から推定されるＦＩＲ
Ａ遺伝子の構造を示す模式図。
Ａ遺伝子の構造を示す模式図。
【図２３】 マラリアにさらされた人から得た血清プー
ルのアフィニティ精製により得たヒト抗体を用いた、イ
ムノアッセイ（ＡおよびＢ）、並びにウエスタン・ブロ
ット法（ＣおよびＤ）の結果を示す模式図。ＡおよびＣ
における抗体はＦＩＲＡ−セファロース吸収剤を用いて
精製され、他方、ＢおよびＤにおける抗体はλamp３−
セファロース吸収剤を用いて精製された。ＣおよびＤに
おけるＰ．ファルシパルム単離体は、１、パプア・ニュ
ーギニア起源のＦＣ２７；２、タイランド起源のＫ１；
および３、ガーナ由来のＮＦ７であった。
ルのアフィニティ精製により得たヒト抗体を用いた、イ
ムノアッセイ（ＡおよびＢ）、並びにウエスタン・ブロ
ット法（ＣおよびＤ）の結果を示す模式図。ＡおよびＣ
における抗体はＦＩＲＡ−セファロース吸収剤を用いて
精製され、他方、ＢおよびＤにおける抗体はλamp３−
セファロース吸収剤を用いて精製された。ＣおよびＤに
おけるＰ．ファルシパルム単離体は、１、パプア・ニュ
ーギニア起源のＦＣ２７；２、タイランド起源のＫ１；
および３、ガーナ由来のＮＦ７であった。
【図２４】 純化した融合ポリペプチド（２μg／ml）
で被覆したマイクロタイタープレートを用いた固相ＥＬ
ＩＳＡ法により、アフィニティ精製されたＦＩＲＡ抗体
を検定した結果を示す模式図。図中、○はＦＩＲＡ・フ
ラグメント、□はＲＥＳＡによる５'反復、△'はＲＥＳ
Ａの３'反復に相当する。
で被覆したマイクロタイタープレートを用いた固相ＥＬ
ＩＳＡ法により、アフィニティ精製されたＦＩＲＡ抗体
を検定した結果を示す模式図。図中、○はＦＩＲＡ・フ
ラグメント、□はＲＥＳＡによる５'反復、△'はＲＥＳ
Ａの３'反復に相当する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 15/12 8517−4Ｈ Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ 8214−4Ｂ (Ｃ１２Ｎ 15/30 Ｃ１２Ｒ 1:90） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者 デビッド・ジェイムス・ケンプ オーストラリア連邦ビクトリア3103、ノー ス・バルウィン、ベルモア・ロード309番 (72)発明者 ロビン・フレドリック・アンダース オーストラリア連邦ビクトリア3051、ノー ス・メルボルン、ブロウアン・ストリート 55番 (72)発明者 ロス・レオン・コッペル オーストラリア連邦ビクトリア3143、アー マデイル、マーサー・ロード６番 (72)発明者 グラハム・バレンシイ・ブラウン オーストラリア連邦ビクトリア3103、バル ウィン、ウォルシュ・ストリート35番 (72)発明者 ロバート・ブライス・セント オーストラリア連邦ビクトリア3107、ロウ アー・テンプルストウ、サヴィレ・コート ２番 (72)発明者 アラン・フレドリック・カウマン オーストラリア連邦ビクトリア3054、ノー ス・カールトン、アール・ストリート３ ／20番 (72)発明者 アルバート・エドワード・ビアンコ オーストラリア連邦ビクトリア3032、アス コット・ベイル、バロダ・ストリート34番 (72)発明者 グラハム・フランク・ミッチェル オーストラリア連邦ビクトリア3107、ロウ アー・テンプルストウ、シンクレアー・ア ベニュー21番
Claims (10)
- 【請求項１】 プラズモジウム・ファルシパルムの免疫
原性ポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列を
含有するＤＮＡ分子であって、該ヌクレオチド配列はフ
ァルシパルム点在性反復抗原（ＦＩＲＡ）をコードして
いる以下の配列式（１）： 【化１】 【化２】 【化３】 【化４】 【化５】 【化６】 【化７】 で示される塩基配列の全てまたはその一部分に実質的に
相当するものであるか、またはリングー感染赤血球表面
抗原（ＲＥＳＡ）をコードしている以下の配列式
（２）： 【化８】 【化９】 【化１０】 【化１１】 【化１２】 【化１３】 【化１４】 【化１５】 で示される塩基配列の全てまたはその一部分に実質的に
相当するものであるか（ただし、該その一部分は上記配
列式（２）の３６１９−３９９６部分配列のみからなる
配列またはその一部分ではない）、またはこれらの塩基
配列あるいはその一部分との機能的等価物に実質的に相
当するものであることを特徴とするＤＮＡ分子。 - 【請求項２】 ＥＥＮＶＥＨＤＡ，ＥＥＮＡ，ＥＥＮ
Ｖ，ＥＥＶ，ＥＥＹＤ，ＥＥＮＥＥＨＴＶ，ＤＤＥＨＶ
ＥＥＴＡ，ＤＤＥＨＶＥＥＰＴＶＡ，ＤＥＨＶＥＥＰＴ
ＶＡ，ＥＥＨＶＥＥＰＴＶＡおよびＥＥＨＶＥＥＰＡか
ら選択されるアミノ酸配列をコードしているヌクレオチ
ドサブ配列を含有している第１項に記載のＤＮＡ分子。 - 【請求項３】 該３６１９−３９９６配列中の配列以外
のサブ配列を含んでいる第２項に記載のＤＮＡ分子。 - 【請求項４】 該３６１９−３９９６配列以外の抗原性
エピトープをコードしているサブ配列を、そのヌクレオ
チド配列中に含んでいる第１項〜第３項のいずれかに記
載のＤＮＡ分子。 - 【請求項５】 配列式（２）： 【化１６】 【化１７】 【化１８】 【化１９】 【化２０】 【化２１】 【化２２】 【化２３】 で示されるヌクレオチド配列の一部またはその変異体を
含んでいるＤＮＡ分子であって、該ＤＮＡ分子の発現に
よりＥＥＮＶＥＨＤＡ，ＥＥＮＡ，ＥＥＮＶ，ＥＥＶ，
ＥＥＹＤ，ＥＥＮＥＥＨＴＶ，ＤＤＥＨＶＥＥＴＡ，Ｄ
ＤＥＨＶＥＥＰＴＶＡ，ＤＥＨＶＥＥＰＴＶＡ，ＥＥＨ
ＶＥＥＰＴＶＡおよびＥＥＨＶＥＥＰＡから選択される
免疫原性ポリペプチドが得られる様に含んでいるＤＮＡ
分子。 - 【請求項６】 発現コントロール配列と機能的に結合し
ている第１項〜第５項のいずれかに記載のヌクレオチド
配列を含んでいる組換えＤＮＡ分子。 - 【請求項７】 プラズモジウム・ファルシパルムの少な
くとも１個のポリペプチドまたは蛋白の全てまたはその
一部分を発現し得る組換えＤＮＡクローニングビヒクル
またはベクターであって、発現コントロール配列と機能
的に結合した第１項〜第５項のいずれかに記載のヌクレ
オチド配列が挿入されていることからなるクローニング
ビヒクルまたはベクター。 - 【請求項８】 該ヌクレオチド配列および該発現コント
ロール配列がバクテリオファージに挿入されていること
を特徴とする第７項に記載の組換ＤＮＡクローニングビ
ヒクルまたはベクター。 - 【請求項９】 該バクテリオファージがバクテリオファ
ージλＡmp３である第８項に記載の組換えＤＮＡクロー
ニングビヒクルまたはベクター。 - 【請求項１０】 第６項に記載の組換えＤＮＡ分子、ま
たは第７項に記載の組換えＤＮＡクローニングビヒクル
あるいはベクターを含有している宿主細胞。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AU7066 | 1984-09-11 | ||
| AUPG706784 | 1984-09-11 | ||
| AUPG706684 | 1984-09-11 | ||
| AU7067 | 1984-09-11 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60504121A Division JPS62500142A (ja) | 1984-09-11 | 1985-09-10 | プラズモジウム・ファルシパルムの抗原 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0698773A true JPH0698773A (ja) | 1994-04-12 |
Family
ID=25642846
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5150375A Pending JPH0698773A (ja) | 1984-09-11 | 1993-06-22 | プラズモジウム・ファルシパルムの抗原をコードするｄｎａ分子 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0193586B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0698773A (ja) |
| AU (1) | AU599305B2 (ja) |
| CA (1) | CA1340213C (ja) |
| DE (1) | DE3587503T2 (ja) |
| GB (1) | GB2176191B (ja) |
| HK (1) | HK132693A (ja) |
| IL (1) | IL76338A (ja) |
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| OA (1) | OA08325A (ja) |
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|---|---|---|---|---|
| WO1985003724A1 (en) * | 1984-02-21 | 1985-08-29 | National Research Development Corporation | Improvements in or relating to the production of malaria vaccines |
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| WO1987003882A1 (en) * | 1985-12-24 | 1987-07-02 | The Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Res | Asexual blood stage antigens of plasmodium falciparum |
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| EP0261248B1 (en) * | 1986-03-20 | 1991-05-29 | Sawai Pharmaceutical Co., Ltd. | $g(a), $g(a)-TREHALOSE TRIMYCOLATE AND MEDICINAL COMPOSITION |
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| FR2672290B1 (fr) | 1991-02-05 | 1995-04-21 | Pasteur Institut | Sequences peptidiques specifiques des stades hepatiques de p. falciparum porteuses d'epitopes capables de stimuler les lymphocytes t. |
| US5532133A (en) * | 1993-06-02 | 1996-07-02 | New York University | Plasmodium vivax blood stage antigens, PvESP-1, antibodies, and diagnostic assays |
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|---|---|---|---|---|
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