JPH0687897A - 本質的に純粋なヒト副甲状腺ホルモン - Google Patents
本質的に純粋なヒト副甲状腺ホルモンInfo
- Publication number
- JPH0687897A JPH0687897A JP4156100A JP15610092A JPH0687897A JP H0687897 A JPH0687897 A JP H0687897A JP 4156100 A JP4156100 A JP 4156100A JP 15610092 A JP15610092 A JP 15610092A JP H0687897 A JPH0687897 A JP H0687897A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- parathyroid hormone
- pth
- human parathyroid
- essentially pure
- pure human
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 title 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 title 1
- 101001135770 Homo sapiens Parathyroid hormone Proteins 0.000 claims abstract description 69
- 101001135995 Homo sapiens Probable peptidyl-tRNA hydrolase Proteins 0.000 claims abstract description 69
- 102000058004 human PTH Human genes 0.000 claims abstract description 69
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 claims abstract description 18
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 claims description 83
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims description 33
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 25
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical group CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 18
- UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N dihydrogen phosphate;triethylazanium Chemical group OP(O)(O)=O.CCN(CC)CC UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 12
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 claims description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- -1 cationic ion Chemical class 0.000 claims description 6
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 claims description 4
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 claims description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 claims description 3
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 3
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical class IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims 2
- 239000005495 thyroid hormone Substances 0.000 claims 2
- 229940036555 thyroid hormone Drugs 0.000 claims 2
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 claims 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 claims 1
- 244000000011 human parasite Species 0.000 claims 1
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 claims 1
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 claims 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 13
- 102100036893 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 82
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 32
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 22
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 20
- YPJUNDFVDDCYIH-UHFFFAOYSA-N perfluorobutyric acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F YPJUNDFVDDCYIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 10
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 10
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 5
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 5
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 5
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 5
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 5
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 101001131829 Homo sapiens P protein Proteins 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N chembl252518 Chemical compound C([C@@](OO1)(C)O2)C[C@H]3[C@H](C)CC[C@@H]4[C@@]31[C@@H]2O[C@H](O)[C@@H]4C BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N 0.000 description 2
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 102000047119 human OCA2 Human genes 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JSMYHXFFKXKZRN-SBMIAAHKSA-N (2s,3s,4s)-3-(carboxymethyl)-4-(2-hydroxyphenyl)pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)NC[C@@H]1C1=CC=CC=C1O JSMYHXFFKXKZRN-SBMIAAHKSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100295756 Acinetobacter baumannii (strain ATCC 19606 / DSM 30007 / JCM 6841 / CCUG 19606 / CIP 70.34 / NBRC 109757 / NCIMB 12457 / NCTC 12156 / 81) omp38 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Chemical class 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Chemical class C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108091005598 amidated proteins Proteins 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 101150042295 arfA gene Proteins 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007872 degassing Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- WEHWNAOGRSTTBQ-UHFFFAOYSA-N dipropylamine Chemical compound CCCNCCC WEHWNAOGRSTTBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083224 human transframe polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000001038 ionspray mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical class [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 101150087557 omcB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150115693 ompA gene Proteins 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001009 osteoporotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000000849 parathyroid Effects 0.000 description 1
- 210000002990 parathyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N tributylamine Chemical compound CCCCN(CCCC)CCCC IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Chemical class 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/635—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Glass Compositions (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】 キャピラリー電気泳動分析により検出可能な
タンパク質汚染物質を含まない本質的に純粋なヒト副甲
状腺ホルモン、このホルモンを含有する医薬組成物、並
びにこのホルモンの製造方法及び精製方法。 【効果】 ヒト副甲状腺ホルモンは種々の生理的作用を
有する副甲状腺のタンパク産物であり、骨粗鬆症などの
骨疾患の治療に有用である。
タンパク質汚染物質を含まない本質的に純粋なヒト副甲
状腺ホルモン、このホルモンを含有する医薬組成物、並
びにこのホルモンの製造方法及び精製方法。 【効果】 ヒト副甲状腺ホルモンは種々の生理的作用を
有する副甲状腺のタンパク産物であり、骨粗鬆症などの
骨疾患の治療に有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はヒト副甲状腺ホルモンに
係る。
係る。
【０００２】ヒト副甲状腺ホルモン即ちｈＰＴＨは、種
々の生理的作用を有する副甲状腺のタンパク産物であ
る。特に重要な臨床作用は骨組織に対する同化作用であ
り、ＰＴＨ療法は骨粗鬆症の進行を遅らせるか又は逆行
させることができ、関連骨疾患の治療に有益である。
々の生理的作用を有する副甲状腺のタンパク産物であ
る。特に重要な臨床作用は骨組織に対する同化作用であ
り、ＰＴＨ療法は骨粗鬆症の進行を遅らせるか又は逆行
させることができ、関連骨疾患の治療に有益である。
【０００３】ｈＰＴＨを医薬製品として使用するのに先
立ち、多くの理由で本質的に純粋な形態でタンパク質を
提供することが必要である。例えば、本質的に純粋なＰ
ＴＨを臨床使用すると、ＰＴＨのみに起因し且つ構造的
に関連する汚染物質には起因しない効果を観察すること
ができる。更に、本質的に純粋形態のｈＰＴＨが得られ
るならば、より高い比活性即ちｈＰＴＨ単位量当たり最
高の力価が得られ、所与の適応症を治療するために投与
する用量を最小限にすることができる。更に、汚染物質
を除去すると、骨粗鬆症のような慢性病を治療するため
にＰＨＴを使用する際に特に重要である副作用の危険を
効果的に少なくすることができる。
立ち、多くの理由で本質的に純粋な形態でタンパク質を
提供することが必要である。例えば、本質的に純粋なＰ
ＴＨを臨床使用すると、ＰＴＨのみに起因し且つ構造的
に関連する汚染物質には起因しない効果を観察すること
ができる。更に、本質的に純粋形態のｈＰＴＨが得られ
るならば、より高い比活性即ちｈＰＴＨ単位量当たり最
高の力価が得られ、所与の適応症を治療するために投与
する用量を最小限にすることができる。更に、汚染物質
を除去すると、骨粗鬆症のような慢性病を治療するため
にＰＨＴを使用する際に特に重要である副作用の危険を
効果的に少なくすることができる。
【０００４】
【従来の技術】タンパク質を精製し、タンパク質純度を
分析するために現在使用されている１つの方法は、逆相
高性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）であ
る。他のＨＰＬＣ技術と同様に、逆相法は、特定のタン
パク質がシリカミクロスフェアのベッド中を移動する速
度の可変性を利用する。一方、逆相ＨＰＬＣ技術ではア
ルキル化シリカミクロスフェアを使用し、タンパク質電
荷を利用して分離を行う２相溶媒系を用いてタンパク質
を移動させる。最も典型的には溶媒系は、水相と、典型
的にはアセトニトリル及び（例えばトリフルオロ酢酸
（ＴＦＡ）のような）イオン対生成剤（ｉｏｎ−ｐａｉ
ｒｉｎｇ ａｇｅｎｔ）（電荷改変剤としても知られ
る）を含む有機相とから構成され、水相と有機相との相
対割合はタンパク質サンプルがカラム中を移動するに従
って自動ブレンドにより勾配的に変化する。この方法に
より分析した場合、ただ１種の検出可能なタンパク質種
（２１４ｎｍ又は２８０ｎｍでＵＶ吸光度により測定）
が分析されるタンパク質調製物は１種のタンパク質種か
ら構成されるとみなされ、従って、本質的に純粋なタン
パク質として特徴付けられる。この純度を示すタンパク
質は場合により「ＨＰＬＣグレード」のものとして特徴
付けられる。
分析するために現在使用されている１つの方法は、逆相
高性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）であ
る。他のＨＰＬＣ技術と同様に、逆相法は、特定のタン
パク質がシリカミクロスフェアのベッド中を移動する速
度の可変性を利用する。一方、逆相ＨＰＬＣ技術ではア
ルキル化シリカミクロスフェアを使用し、タンパク質電
荷を利用して分離を行う２相溶媒系を用いてタンパク質
を移動させる。最も典型的には溶媒系は、水相と、典型
的にはアセトニトリル及び（例えばトリフルオロ酢酸
（ＴＦＡ）のような）イオン対生成剤（ｉｏｎ−ｐａｉ
ｒｉｎｇ ａｇｅｎｔ）（電荷改変剤としても知られ
る）を含む有機相とから構成され、水相と有機相との相
対割合はタンパク質サンプルがカラム中を移動するに従
って自動ブレンドにより勾配的に変化する。この方法に
より分析した場合、ただ１種の検出可能なタンパク質種
（２１４ｎｍ又は２８０ｎｍでＵＶ吸光度により測定）
が分析されるタンパク質調製物は１種のタンパク質種か
ら構成されるとみなされ、従って、本質的に純粋なタン
パク質として特徴付けられる。この純度を示すタンパク
質は場合により「ＨＰＬＣグレード」のものとして特徴
付けられる。
【０００５】逆相ＨＰＬＣ技術は種々の起源から得られ
たヒトＰＴＨを精製し、その純度を決定するために使用
されている。ペプチド合成技術を適用することにより、
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．， １９８３， １１４（２）：４９３に報告され
ているようにＫｉｍｕｒａらにより合成ヒトＰＴＨが製
造され、Ｂａｃｈｅｍ Ｉｎｃ．（１９８７−１９８８
カタログ＃ＰＣＡＬ１７５）から市販されている。この
供給者によるとヒトＰＴＨ産物は、イオン対生成剤とし
てのＴＦＡの存在下でアセトニトリル及び水を使用する
逆相ＨＰＬＣにより分析した場合に９９％以上の純度を
有する。
たヒトＰＴＨを精製し、その純度を決定するために使用
されている。ペプチド合成技術を適用することにより、
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．， １９８３， １１４（２）：４９３に報告され
ているようにＫｉｍｕｒａらにより合成ヒトＰＴＨが製
造され、Ｂａｃｈｅｍ Ｉｎｃ．（１９８７−１９８８
カタログ＃ＰＣＡＬ１７５）から市販されている。この
供給者によるとヒトＰＴＨ産物は、イオン対生成剤とし
てのＴＦＡの存在下でアセトニトリル及び水を使用する
逆相ＨＰＬＣにより分析した場合に９９％以上の純度を
有する。
【０００６】より最近では、遺伝子工学的に製造された
細菌宿主からＨＰＬＣグレードのヒトＰＴＨが回収され
ている。例えば、Ｈｏｇｓｅｔら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．， １９９０， ２６５（１３）：７３３８）
は、大腸菌形質転換細胞からのヒトＰＴＨの分泌につい
て記載している。こうして産生されたヒトＰＴＨは培養
ブロス濾液中に回収され、イオン交換クロマトグラフィ
ーにかけられ、その後、イオン対生成剤としてＴＦＡを
補充した従来の水／アセトニトリル溶媒系を使用する逆
相ＨＰＬＣにより分画される。大腸菌から産生されるヒ
トＰＴＨは、ＲａｂｂａｎｉらによりＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．， １９８８， ２６３（３）：１３０７に記
載されているように細胞内産物としても産生されてい
る。酸抽出したＰＴＨを、慣用アセトニトリル／ＴＦＡ
溶媒系を使用するＲＰ−ＨＰＬＣにかけ、その後、主ピ
ークをゲル濾過し、イオン対生成剤としてヘプタフルオ
ロ酪酸（ＨＦＢＡ）を補充した水／アセトニトリル溶媒
系を使用して再び別個に逆相ＨＰＬＣにかけた。ＨＦＢ
Ａはトリフルオロ酢酸と同様に、アニオン性イオン対生
成剤の種類の別の構成員である。こうして分画した材料
を次にＴＦＡを用いて再びＲＰ−ＨＰＬＣ分画にかけ、
その後、ゲル濾過カラムに通した後、最終的に収集して
ＨＰＬＣグレードＰＴＨを得た。Ｓｕｎｇらも同様にヒ
トＰＴＨの大腸菌による産生を報告している（Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．， １９９１， ２６６（５）：２８
３１参照）。これらの著者は、ＴＦＡを補充した従来の
アセトニトリル／水溶媒系を使用するＲＰ−ＨＰＬＣに
よりヒトＰＴＨ産物を精製した。
細菌宿主からＨＰＬＣグレードのヒトＰＴＨが回収され
ている。例えば、Ｈｏｇｓｅｔら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．， １９９０， ２６５（１３）：７３３８）
は、大腸菌形質転換細胞からのヒトＰＴＨの分泌につい
て記載している。こうして産生されたヒトＰＴＨは培養
ブロス濾液中に回収され、イオン交換クロマトグラフィ
ーにかけられ、その後、イオン対生成剤としてＴＦＡを
補充した従来の水／アセトニトリル溶媒系を使用する逆
相ＨＰＬＣにより分画される。大腸菌から産生されるヒ
トＰＴＨは、ＲａｂｂａｎｉらによりＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．， １９８８， ２６３（３）：１３０７に記
載されているように細胞内産物としても産生されてい
る。酸抽出したＰＴＨを、慣用アセトニトリル／ＴＦＡ
溶媒系を使用するＲＰ−ＨＰＬＣにかけ、その後、主ピ
ークをゲル濾過し、イオン対生成剤としてヘプタフルオ
ロ酪酸（ＨＦＢＡ）を補充した水／アセトニトリル溶媒
系を使用して再び別個に逆相ＨＰＬＣにかけた。ＨＦＢ
Ａはトリフルオロ酢酸と同様に、アニオン性イオン対生
成剤の種類の別の構成員である。こうして分画した材料
を次にＴＦＡを用いて再びＲＰ−ＨＰＬＣ分画にかけ、
その後、ゲル濾過カラムに通した後、最終的に収集して
ＨＰＬＣグレードＰＴＨを得た。Ｓｕｎｇらも同様にヒ
トＰＴＨの大腸菌による産生を報告している（Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．， １９９１， ２６６（５）：２８
３１参照）。これらの著者は、ＴＦＡを補充した従来の
アセトニトリル／水溶媒系を使用するＲＰ−ＨＰＬＣに
よりヒトＰＴＨ産物を精製した。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、ＨＰＬ
Ｃグレードの純度を示すＰＴＨ組成物は、実際に、より
高感度のキャピラリー電気泳動（ＣＥ）分析技術により
検出可能なタンパク質不純物を含有することがここに知
見された。従って本発明の目的は、キャピラリー電気泳
動により検出可能なタンパク質汚染物質を本質的に含ま
ない形態のヒトＰＴＨを提供することである。本発明の
別の目的は、本質的に純粋形態でヒトＰＴＨを得るため
の方法を提供することである。本発明の更に別の目的
は、本質的に純粋なヒトＰＴＨを含有する医薬組成物を
提供することである。
Ｃグレードの純度を示すＰＴＨ組成物は、実際に、より
高感度のキャピラリー電気泳動（ＣＥ）分析技術により
検出可能なタンパク質不純物を含有することがここに知
見された。従って本発明の目的は、キャピラリー電気泳
動により検出可能なタンパク質汚染物質を本質的に含ま
ない形態のヒトＰＴＨを提供することである。本発明の
別の目的は、本質的に純粋形態でヒトＰＴＨを得るため
の方法を提供することである。本発明の更に別の目的
は、本質的に純粋なヒトＰＴＨを含有する医薬組成物を
提供することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】発明の概要 本発明は、本質的に純粋な形態、即ちキャピラリー電気
泳動分析により決定した場合に本質的にタンパク質汚染
物質を含有しない形態のヒトＰＴＨを提供する。キャピ
ラリー電気泳動技術は、従来適用されているＨＰＬＣ分
析により純粋であると判断されるヒトＰＴＨ調製物中の
不純物を検出することができ、ＰＴＨ純度のより高感度
な測定手段を提供する。
泳動分析により決定した場合に本質的にタンパク質汚染
物質を含有しない形態のヒトＰＴＨを提供する。キャピ
ラリー電気泳動技術は、従来適用されているＨＰＬＣ分
析により純粋であると判断されるヒトＰＴＨ調製物中の
不純物を検出することができ、ＰＴＨ純度のより高感度
な測定手段を提供する。
【０００９】本発明の１態様によると、純粋なヒトＰＴ
Ｈから構成され且つキャピラリー電気泳動により検出可
能なタンパク質汚染物質を本質的に含まない組成物が提
供される。本発明のこの態様の特定の実施態様による
と、本質的に純粋なヒトＰＴＨは凍結乾燥形態で提供さ
れる。
Ｈから構成され且つキャピラリー電気泳動により検出可
能なタンパク質汚染物質を本質的に含まない組成物が提
供される。本発明のこの態様の特定の実施態様による
と、本質的に純粋なヒトＰＴＨは凍結乾燥形態で提供さ
れる。
【００１０】本発明の別の態様によると、純粋なヒトＰ
ＴＨを医薬上許容可能なキャリヤーと配合する段階を含
む、医薬組成物の製造方法が提供される。本発明の関連
態様によると、純粋なＰＴＨと医薬上許容可能なキャリ
ヤーとを含有する医薬組成物が提供される。本発明のこ
の態様の特定の実施態様によると、医薬組成物は該組成
物中に含まれるＰＴＨの酸化安定性を強化するために有
効な量の還元剤を更に含有する。組成物は更に必要に応
じて第２の治療剤を含有し得る。
ＴＨを医薬上許容可能なキャリヤーと配合する段階を含
む、医薬組成物の製造方法が提供される。本発明の関連
態様によると、純粋なＰＴＨと医薬上許容可能なキャリ
ヤーとを含有する医薬組成物が提供される。本発明のこ
の態様の特定の実施態様によると、医薬組成物は該組成
物中に含まれるＰＴＨの酸化安定性を強化するために有
効な量の還元剤を更に含有する。組成物は更に必要に応
じて第２の治療剤を含有し得る。
【００１１】本発明の別の態様によるとヒトＰＴＨの精
製方法が提供され、該方法は、部分的に精製されたヒト
ＰＴＨ調製物をカチオン性イオン対生成剤の存在下で逆
相ＨＰＬＣにより分画し、調製物中に存在するタンパク
質汚染物質からヒトＰＴＨを分離する段階と、その後、
本質的に純粋なヒトＰＴＨを収集する段階とを含む。
製方法が提供され、該方法は、部分的に精製されたヒト
ＰＴＨ調製物をカチオン性イオン対生成剤の存在下で逆
相ＨＰＬＣにより分画し、調製物中に存在するタンパク
質汚染物質からヒトＰＴＨを分離する段階と、その後、
本質的に純粋なヒトＰＴＨを収集する段階とを含む。
【００１２】以下、本発明の上記及び他の態様を添付図
面を参照しながら詳細に説明する。
面を参照しながら詳細に説明する。
【００１３】好適実施態様の詳細な説明 本発明は、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）により検出可
能なタンパク質汚染物質（即ち夾雑物）を本質的に含有
しない形態のヒトＰＴＨに係る。簡単にするために、本
明細書中ではこの純度を示すＰＴＨを、場合により「Ｃ
Ｅグレード」のヒトＰＴＨ又は「本質的に純粋な」ヒト
ＰＴＨと呼称する。
能なタンパク質汚染物質（即ち夾雑物）を本質的に含有
しない形態のヒトＰＴＨに係る。簡単にするために、本
明細書中ではこの純度を示すＰＴＨを、場合により「Ｃ
Ｅグレード」のヒトＰＴＨ又は「本質的に純粋な」ヒト
ＰＴＨと呼称する。
【００１４】本明細書の目的で「ｈＰＴＨ」、「ヒトＰ
ＴＨ」及び「ヒト副甲状腺ホルモン」なる用語は、下記
の配列で示されるアミド結合により配列される８４個の
αアミノ酸残基から本質的に構成される非グリコシル化
タンパク質に関して交換可能に使用される。
ＴＨ」及び「ヒト副甲状腺ホルモン」なる用語は、下記
の配列で示されるアミド結合により配列される８４個の
αアミノ酸残基から本質的に構成される非グリコシル化
タンパク質に関して交換可能に使用される。
【００１５】
【化１】 タンパク質化学の分野の当業者であれば、ＰＴＨ源の種
類に大幅に依存してわずかな構造変化が存在し得ること
は予想されよう。細胞由来ヒトＰＴＨ、即ち副甲状腺組
織又は微生物供給源に由来するｈＰＴＨは、少量割合の
例えばＣ末端アミド化タンパク質又はＣ末端切断（ｔｒ
ｕｎｃａｔｅｄ）タンパク質を含有し得る。他方、合成
に由来するヒトＰＴＨは、修飾されたα炭素側鎖を有す
るアミノ酸を含む少量割合のＰＴＨ分子を含み得る。Ｃ
ＥグレードのヒトＰＴＨは、当然キャピラリー電気泳動
分析により検出不能であるほど少量存在するという条件
で、このような修飾を有するＰＴＨ分子を含み得る。
類に大幅に依存してわずかな構造変化が存在し得ること
は予想されよう。細胞由来ヒトＰＴＨ、即ち副甲状腺組
織又は微生物供給源に由来するｈＰＴＨは、少量割合の
例えばＣ末端アミド化タンパク質又はＣ末端切断（ｔｒ
ｕｎｃａｔｅｄ）タンパク質を含有し得る。他方、合成
に由来するヒトＰＴＨは、修飾されたα炭素側鎖を有す
るアミノ酸を含む少量割合のＰＴＨ分子を含み得る。Ｃ
ＥグレードのヒトＰＴＨは、当然キャピラリー電気泳動
分析により検出不能であるほど少量存在するという条件
で、このような修飾を有するＰＴＨ分子を含み得る。
【００１６】本発明のＣＥグレードのヒトＰＴＨはより
具体的には、キャピラリー電気泳動分析にかけた場合に
２１４ｎｍでの単一の吸光度ピークとしての移動により
特徴付けられ得る。キャピラリー電気泳動技術は、Ｇｏ
ｒｄｏｎらによりＳｃｉｅｎｃｅ， １９８８， ２４
２：２２４により一般的に論じられているように、非常
に小さい孔径を有するキャピラリー内で質量／電荷比に
基づいてタンパク質を分離する。要約するならば、分析
すべきタンパク質調製物の水性サンプルを減圧によりキ
ャピラリー内に吸引し、電場にかけた後、望ましくは２
１４ｎｍでの吸光度を検出することによりキャピラリー
中のタンパク質種の移動を監視する。特にヒトＰＴＨの
場合、タンパク質種はリン酸により約ｐＨ２に緩衝され
た水性ビヒクル中に約０．２ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ
／ｍｌを含有する調製物を使用すると適切に分離され
る。サンプルを吸引する速度は均一であるが、汚染物質
が存在する場合は検出可能な量を充填するようにサンプ
ルの初期純度に依存して２〜１０秒間サンプルの吸引を
維持することが望ましい。
具体的には、キャピラリー電気泳動分析にかけた場合に
２１４ｎｍでの単一の吸光度ピークとしての移動により
特徴付けられ得る。キャピラリー電気泳動技術は、Ｇｏ
ｒｄｏｎらによりＳｃｉｅｎｃｅ， １９８８， ２４
２：２２４により一般的に論じられているように、非常
に小さい孔径を有するキャピラリー内で質量／電荷比に
基づいてタンパク質を分離する。要約するならば、分析
すべきタンパク質調製物の水性サンプルを減圧によりキ
ャピラリー内に吸引し、電場にかけた後、望ましくは２
１４ｎｍでの吸光度を検出することによりキャピラリー
中のタンパク質種の移動を監視する。特にヒトＰＴＨの
場合、タンパク質種はリン酸により約ｐＨ２に緩衝され
た水性ビヒクル中に約０．２ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ
／ｍｌを含有する調製物を使用すると適切に分離され
る。サンプルを吸引する速度は均一であるが、汚染物質
が存在する場合は検出可能な量を充填するようにサンプ
ルの初期純度に依存して２〜１０秒間サンプルの吸引を
維持することが望ましい。
【００１７】ＣＥグレード純度を示す以外に、本発明の
本質的に純粋なヒトＰＴＨは、例えばＲａｂｂａｎｉら
によりＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ， １９８８， １
２３：２７０９により記載されているＵＭＲ １０６に
よるアデニル酸シクラーゼアッセイで決定した場合に２
ｎｍ以下の極めて低いＥＣ５０、即ち約１．０±０．２
ｎＭのＥＣ５０を示すことを特徴とする。比較のため
に、Ｒａｂｂａｎｉらの前出の文献により記載されてい
るようにして得られたＨＰＬＣグレードのＰＴＨは、こ
のアッセイで３ｎＭ以上のＥＣ５０を有すると述べられ
ている。このｉｎｖｉｔｒｏバイオアッセイは、所与の
ＰＴＨ調製物がＵＭＲ−１０６系のラット骨粗鬆症細胞
内でのアデニル酸シクラーゼ産生を刺激する程度を定量
的に測定する。本明細書中において「ＥＣ５０」なる用
語は、ＵＭＲ−１０６を用いるアデニル酸シクラーゼア
ッセイで半最大応答（ｈａｌｆ−ｍａｘｉｍａｌ ｒｅ
ｓｐｏｎｓｅ）を誘導するために必要な所与のｈＰＴＨ
調製物の濃度（モル濃度として測定）を意味する。
本質的に純粋なヒトＰＴＨは、例えばＲａｂｂａｎｉら
によりＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ， １９８８， １
２３：２７０９により記載されているＵＭＲ １０６に
よるアデニル酸シクラーゼアッセイで決定した場合に２
ｎｍ以下の極めて低いＥＣ５０、即ち約１．０±０．２
ｎＭのＥＣ５０を示すことを特徴とする。比較のため
に、Ｒａｂｂａｎｉらの前出の文献により記載されてい
るようにして得られたＨＰＬＣグレードのＰＴＨは、こ
のアッセイで３ｎＭ以上のＥＣ５０を有すると述べられ
ている。このｉｎｖｉｔｒｏバイオアッセイは、所与の
ＰＴＨ調製物がＵＭＲ−１０６系のラット骨粗鬆症細胞
内でのアデニル酸シクラーゼ産生を刺激する程度を定量
的に測定する。本明細書中において「ＥＣ５０」なる用
語は、ＵＭＲ−１０６を用いるアデニル酸シクラーゼア
ッセイで半最大応答（ｈａｌｆ−ｍａｘｉｍａｌ ｒｅ
ｓｐｏｎｓｅ）を誘導するために必要な所与のｈＰＴＨ
調製物の濃度（モル濃度として測定）を意味する。
【００１８】ＣＥグレードのヒトＰＴＨは更に、イオン
スプレー質量分析法により決定した場合に９４２４±
１．４ダルトンの分子量、即ち理論的分子量である９４
２４．７に実質的に等価の分子量を有することを特徴と
する。
スプレー質量分析法により決定した場合に９４２４±
１．４ダルトンの分子量、即ち理論的分子量である９４
２４．７に実質的に等価の分子量を有することを特徴と
する。
【００１９】上記特徴を有するヒトＰＴＨは、部分的に
精製されたヒトＰＴＨ調製物をカチオン性イオン対生成
剤の存在下で逆相高性能液体クロマトグラフィーにかけ
ることにより得られる。当業者であれば、ＲＰ−ＨＰＬ
Ｃによりタンパク質分離を達成するために従来使用され
ているイオン対生成剤として、ヘプタフルオロ酪酸（Ｈ
ＦＢＡ）、より一般的にはトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）
のようなアニオン性改変剤を挙げることが予想されよ
う。しかしながら、本明細書中に示すように、これらの
イオン対生成剤、特にＨＦＢＡは、クロマトグラフィー
カラムから溶出するヒトＰＴＨをタンパク質汚染物質か
ら別に収集できるように、構造的に関連するタンパク質
汚染物質からヒトＰＴＨを分離するために必要な分離能
を提供しない。カチオン性イオン対生成剤、特にアミン
をベースとするイオン対生成剤（「電荷改変剤（ｃｈａ
ｒｇｅ ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ）」としても知られる）
は、この分離能を提供するのに最適な電荷特性を有する
ことが知見された。
精製されたヒトＰＴＨ調製物をカチオン性イオン対生成
剤の存在下で逆相高性能液体クロマトグラフィーにかけ
ることにより得られる。当業者であれば、ＲＰ−ＨＰＬ
Ｃによりタンパク質分離を達成するために従来使用され
ているイオン対生成剤として、ヘプタフルオロ酪酸（Ｈ
ＦＢＡ）、より一般的にはトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）
のようなアニオン性改変剤を挙げることが予想されよ
う。しかしながら、本明細書中に示すように、これらの
イオン対生成剤、特にＨＦＢＡは、クロマトグラフィー
カラムから溶出するヒトＰＴＨをタンパク質汚染物質か
ら別に収集できるように、構造的に関連するタンパク質
汚染物質からヒトＰＴＨを分離するために必要な分離能
を提供しない。カチオン性イオン対生成剤、特にアミン
をベースとするイオン対生成剤（「電荷改変剤（ｃｈａ
ｒｇｅ ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ）」としても知られる）
は、この分離能を提供するのに最適な電荷特性を有する
ことが知見された。
【００２０】従って、本発明の１態様は、部分的に精製
されたＰＴＨの調製物をカチオン性イオン対生成剤の存
在下で逆相高性能液体クロマトグラフィーにより分画す
る段階を含む、本質的に純粋なヒトＰＴＨの製造方法に
ある。その後、隣接するより小さいタンパク質ピークと
して現れる汚染物質を排除して（２８０ｎｍ、又はより
好ましくは２１４ｎｍでの吸光度により決定されるよう
に）カラム中を移動する主タンパク質ピークを選択的に
収集することにより、本質的に純粋なＰＴＨを回収す
る。
されたＰＴＨの調製物をカチオン性イオン対生成剤の存
在下で逆相高性能液体クロマトグラフィーにより分画す
る段階を含む、本質的に純粋なヒトＰＴＨの製造方法に
ある。その後、隣接するより小さいタンパク質ピークと
して現れる汚染物質を排除して（２８０ｎｍ、又はより
好ましくは２１４ｎｍでの吸光度により決定されるよう
に）カラム中を移動する主タンパク質ピークを選択的に
収集することにより、本質的に純粋なＰＴＨを回収す
る。
【００２１】使用可能なカチオン性イオン対生成剤とし
ては、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチ
ルアミン及びジプロピルアミンのようなジ−及びトリ−
低級アルキルアミンを含むアミンをベースとする物質を
挙げることができる。イオン対生成剤は塩形態で使用す
ると特に好適であり、トリエチルアミンとリン酸を混合
することにより製造されるリン酸トリエチルアミンがこ
の点で好適である。更に、メタノール、プロパノール又
はイソプロパノールのようなアルカノール溶媒中、必要
に応じてギ酸のような有機酸中で、場合により塩形態の
イオン対生成剤を調製してもよい。
ては、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチ
ルアミン及びジプロピルアミンのようなジ−及びトリ−
低級アルキルアミンを含むアミンをベースとする物質を
挙げることができる。イオン対生成剤は塩形態で使用す
ると特に好適であり、トリエチルアミンとリン酸を混合
することにより製造されるリン酸トリエチルアミンがこ
の点で好適である。更に、メタノール、プロパノール又
はイソプロパノールのようなアルカノール溶媒中、必要
に応じてギ酸のような有機酸中で、場合により塩形態の
イオン対生成剤を調製してもよい。
【００２２】アミンをベースとするイオン対生成剤の塩
を使用する場合、ＰＴＨ精製工程の最終段階として、逆
相ＨＰＬＣカラムから収集した物質を脱塩することによ
りイオン対生成剤を除去することが望ましい。脱塩は、
収集したサンプルをゲル濾過、限外濾過、又は逆相ＨＰ
ＬＣのような種々の適切な脱塩方法のいずれか１種にか
けることにより実施することができ、逆相ＨＰＬＣでは
従来のイオン対生成剤であるトリフルオロ酢酸（ＴＦ
Ａ）及びヘプタフルオロ酢酸（ＨＦＢＡ）のような揮発
性イオン対生成剤を使用する。
を使用する場合、ＰＴＨ精製工程の最終段階として、逆
相ＨＰＬＣカラムから収集した物質を脱塩することによ
りイオン対生成剤を除去することが望ましい。脱塩は、
収集したサンプルをゲル濾過、限外濾過、又は逆相ＨＰ
ＬＣのような種々の適切な脱塩方法のいずれか１種にか
けることにより実施することができ、逆相ＨＰＬＣでは
従来のイオン対生成剤であるトリフルオロ酢酸（ＴＦ
Ａ）及びヘプタフルオロ酢酸（ＨＦＢＡ）のような揮発
性イオン対生成剤を使用する。
【００２３】アミンをベースとするイオン対生成剤を配
合し、他のイオン対生成剤を使用する場合に一般的な方
法でＲＰ−ＨＰＬＣ精製法を実施する。ＨＰＬＣ稼動中
に濃度勾配を形成するようにブレンドすべき２種の溶媒
溶液、即ち水及びアミンをベースとするイオン対生成剤
を含有する「溶媒Ａ」溶液と、水、アミンをベースとす
るイオン対生成剤、及びアセトニトリル、メタノール又
は１−プロパノールのような有機成分約８０％を含有す
る「溶媒Ｂ」溶液とをまず調製する。最良の結果はアセ
トニトリルを使用することにより得られる。各溶媒は従
来のプロトコルに従って、市販のＨＰＬＣグレードの試
薬を混合し、次いで例えば０．４５μｍフィルターで濾
過した後、脱ガスして酸素を除去することにより調製さ
れる。
合し、他のイオン対生成剤を使用する場合に一般的な方
法でＲＰ−ＨＰＬＣ精製法を実施する。ＨＰＬＣ稼動中
に濃度勾配を形成するようにブレンドすべき２種の溶媒
溶液、即ち水及びアミンをベースとするイオン対生成剤
を含有する「溶媒Ａ」溶液と、水、アミンをベースとす
るイオン対生成剤、及びアセトニトリル、メタノール又
は１−プロパノールのような有機成分約８０％を含有す
る「溶媒Ｂ」溶液とをまず調製する。最良の結果はアセ
トニトリルを使用することにより得られる。各溶媒は従
来のプロトコルに従って、市販のＨＰＬＣグレードの試
薬を混合し、次いで例えば０．４５μｍフィルターで濾
過した後、脱ガスして酸素を除去することにより調製さ
れる。
【００２４】リン酸トリエチルアミン（ＴＥＡＰ）をイ
オン対生成剤として使用する場合、０．０５〜１．０容
量％のＴＥＡＰの溶媒濃度を使用することができ、最良
の分離は約０．４容量％のＴＥＡＰで達せられる。従っ
て本発明の特に好適な実施態様によると、ＰＴＨ精製は
０．４％トリエチルアミン及び０．４％リン酸（８５
％）を１００％の水に加えることにより構成される溶媒
Ａと、０．４％トリエチルアミン及びｐＨを溶媒Ａと等
しくするために十分な量、一般に約０．４％のリン酸
（８５％）を８０％のアセトニトリルに加えることによ
り構成される溶媒Ｂとを溶媒溶液として使用する逆相Ｈ
ＰＬＣにより得られる。
オン対生成剤として使用する場合、０．０５〜１．０容
量％のＴＥＡＰの溶媒濃度を使用することができ、最良
の分離は約０．４容量％のＴＥＡＰで達せられる。従っ
て本発明の特に好適な実施態様によると、ＰＴＨ精製は
０．４％トリエチルアミン及び０．４％リン酸（８５
％）を１００％の水に加えることにより構成される溶媒
Ａと、０．４％トリエチルアミン及びｐＨを溶媒Ａと等
しくするために十分な量、一般に約０．４％のリン酸
（８５％）を８０％のアセトニトリルに加えることによ
り構成される溶媒Ｂとを溶媒溶液として使用する逆相Ｈ
ＰＬＣにより得られる。
【００２５】溶媒中のアミンをベースとする改変剤の添
加とは別に、実質的に純粋なヒトＰＴＨを含有する調製
物の分画は、逆相ＨＰＬＣ技術（例えばＣＲＣ Ｈａｎ
ｄｂｏｏｋ ｏｆ ＨＰＬＣ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｅｐ
ａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ， Ｐ
ｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ｖｏｌ
ｕｍｅ １， １９８４， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎ
ｃ．）に一般的な方法で市販のＨＰＬＣ装置を使用して
実施され得る。分画に使用されるカラムには、例えばＣ
４〜Ｃ１８の範囲の均一な長さのアルキル基を有するシ
リカビーズを充填してもよく、ＰＴＨ分離にはＣ１８が
好適である。約５μｍの均一寸法及び約３００Åの孔径
を有するＣ１８ビーズを充填したカラムがＰＴＨ精製に
好適であることが知見された。このようなカラムはＲａ
ｉｎｉｎ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔＣｏ．， Ｉｎｃ．
（Ｗｏｂｕｒｎ， ＭＡ）からＨＰＬＣ機械に組み込む
ためのカートリッジとして商品名Ｄｙｎａｍａｘで市販
されている。
加とは別に、実質的に純粋なヒトＰＴＨを含有する調製
物の分画は、逆相ＨＰＬＣ技術（例えばＣＲＣ Ｈａｎ
ｄｂｏｏｋ ｏｆ ＨＰＬＣ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｅｐ
ａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ， Ｐ
ｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ｖｏｌ
ｕｍｅ １， １９８４， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎ
ｃ．）に一般的な方法で市販のＨＰＬＣ装置を使用して
実施され得る。分画に使用されるカラムには、例えばＣ
４〜Ｃ１８の範囲の均一な長さのアルキル基を有するシ
リカビーズを充填してもよく、ＰＴＨ分離にはＣ１８が
好適である。約５μｍの均一寸法及び約３００Åの孔径
を有するＣ１８ビーズを充填したカラムがＰＴＨ精製に
好適であることが知見された。このようなカラムはＲａ
ｉｎｉｎ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔＣｏ．， Ｉｎｃ．
（Ｗｏｂｕｒｎ， ＭＡ）からＨＰＬＣ機械に組み込む
ためのカートリッジとして商品名Ｄｙｎａｍａｘで市販
されている。
【００２６】次に、調製物のサンプルを機械に注入し、
その後、必要に応じて溶媒Ａ及びＢの相対ブレンド比を
調節することにより、実質的に精製されたＰＴＨを分画
する。１００％溶媒Ａから１００％溶媒Ｂまでの直線勾
配を形成することが可能であるが、ＰＴＨ分画のために
より望ましい濃度勾配は、７０％Ａ／３０％Ｂから４０
％Ａ／６０％Ｂを経て７０％Ａ／３０％Ｂに戻る勾配か
ら構成されることが判明した。この勾配は理想的には注
入時間１分につき約１ｍｌの溶媒の流速を使用して達成
される。これらの条件下で、本質的に純粋なＰＴＨは約
２６分で約３５％アセトニトリル中で溶出する。
その後、必要に応じて溶媒Ａ及びＢの相対ブレンド比を
調節することにより、実質的に精製されたＰＴＨを分画
する。１００％溶媒Ａから１００％溶媒Ｂまでの直線勾
配を形成することが可能であるが、ＰＴＨ分画のために
より望ましい濃度勾配は、７０％Ａ／３０％Ｂから４０
％Ａ／６０％Ｂを経て７０％Ａ／３０％Ｂに戻る勾配か
ら構成されることが判明した。この勾配は理想的には注
入時間１分につき約１ｍｌの溶媒の流速を使用して達成
される。これらの条件下で、本質的に純粋なＰＴＨは約
２６分で約３５％アセトニトリル中で溶出する。
【００２７】イオン対生成剤としてトリエチルアミンを
使用する利点は、従来通りにＨＰＬＣカラム中のタンパ
ク質の移動を２１４ｎｍでの吸光度により監視する場合
に得られる。図面に示すように、注入されるＰＴＨサン
プル中の汚染物質は単一の大きい吸光度ピークとして移
動するＰＴＨから分離される。こうして、カラム移動中
にＰＴＨから分離する他の物質を排除し、本質的に純粋
なＰＴＨを溶離液の別のフラクションとして収集するこ
とができる。好ましくはＰＴＨの酸化的失活を避けるた
めに収集直後に逆相ＨＰＬカラムから溶出する本質的に
純粋なＰＴＨを従来通りに凍結乾燥さてもよい。
使用する利点は、従来通りにＨＰＬＣカラム中のタンパ
ク質の移動を２１４ｎｍでの吸光度により監視する場合
に得られる。図面に示すように、注入されるＰＴＨサン
プル中の汚染物質は単一の大きい吸光度ピークとして移
動するＰＴＨから分離される。こうして、カラム移動中
にＰＴＨから分離する他の物質を排除し、本質的に純粋
なＰＴＨを溶離液の別のフラクションとして収集するこ
とができる。好ましくはＰＴＨの酸化的失活を避けるた
めに収集直後に逆相ＨＰＬカラムから溶出する本質的に
純粋なＰＴＨを従来通りに凍結乾燥さてもよい。
【００２８】ＣＥグレードのヒトＰＴＨが一旦得られた
ら、治療用に調合する。即ち、所望量、例えば単位用量
のＰＴＨを発熱物質を含まない滅菌水性賦形剤と混合す
ることにより、このようなＰＴＨを含有する医薬組成物
を調製することができる。酸化を防ぎ、貯蔵寿命を増加
するために必要に応じてシステインのような還元剤を水
性ＰＴＨ組成物に補充してもよい。また、ＰＴＨは酸性
環境のほうが安定であるので、例えば酢酸を使用して水
性賦形剤を酸性化してもよい。更に、必要に応じて所定
量の第２の治療剤を医薬組成物に補充してもよい。例え
ば、骨治療用としては米国特許第４６９８３２８号に記
載されているように有効量のカルシウム塩又はビタミン
Ｄ類似物を配合することができる。
ら、治療用に調合する。即ち、所望量、例えば単位用量
のＰＴＨを発熱物質を含まない滅菌水性賦形剤と混合す
ることにより、このようなＰＴＨを含有する医薬組成物
を調製することができる。酸化を防ぎ、貯蔵寿命を増加
するために必要に応じてシステインのような還元剤を水
性ＰＴＨ組成物に補充してもよい。また、ＰＴＨは酸性
環境のほうが安定であるので、例えば酢酸を使用して水
性賦形剤を酸性化してもよい。更に、必要に応じて所定
量の第２の治療剤を医薬組成物に補充してもよい。例え
ば、骨治療用としては米国特許第４６９８３２８号に記
載されているように有効量のカルシウム塩又はビタミン
Ｄ類似物を配合することができる。
【００２９】本質的に純粋形態で医薬範囲のＰＴＨを使
用すると、これとは別のより低レベルの純度を有する組
成物中に存在する汚染物質により誘導され得る副作用及
び免疫原性を低下させ、所与の生理学的応答を誘導する
ために必要なＰＴＨの量を減少できるという顕著な利点
が得られると予想される。
用すると、これとは別のより低レベルの純度を有する組
成物中に存在する汚染物質により誘導され得る副作用及
び免疫原性を低下させ、所与の生理学的応答を誘導する
ために必要なＰＴＨの量を減少できるという顕著な利点
が得られると予想される。
【００３０】本発明のＰＴＨの精製方法は、哺乳動物組
織、ＰＴＨの微生物源及び合成源からの抽出を含む種々
の技術により得られるＰＴＨ組成物に適用できることも
理解されよう。一般に、このような供給源から単離され
るＰＴＨは、部分的に精製された形態で得られ、即ち本
発明の逆相ＨＰＬＣ方法にかける前に少なくとも１回の
カラム分画段階にかけられる。例えば細菌のような微生
物源から得られる場合、微生物抽出物をまず最初に例え
ば酸抽出又は硫酸アンモニウム沈殿によりＰＴＨを濃縮
するように処理し、処理したサンプルをその後、ＰＴＨ
濃縮（ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）に有用な種々の分画技術
のいずれかにかけることが望ましい。例えば、Ｓ−Ｓｅ
ｐｈａｒｏｓｅもしくはＭｏｎｏ−Ｓカラム等を使用す
るイオン交換クロマトグラフィー、又は例えばフェニル
−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを使用する疎水性相互作用
クロマトグラフィーに粗ＰＴＨサンプルをかける。逆相
ＨＰＬＣによる精製以前に粗サンプルのＰＴＨ含有量を
どの程度まで増加させるかは、ＰＴＨが産生される環境
に大幅に依存する。この点で、本発明の好適実施態様に
よると、ＰＴＨ源は分泌（細胞質）又は排出（細胞外）
産物としてＰＴＨを産生するように遺伝子工学により製
造された大腸菌形質転換細胞であることが望ましい。本
発明の特に好適な実施態様によるとＰＴＨ源は、例えば
参考資料として本明細書の一部に加え、以下に要約する
Ｗｏｎｔらのヨーロッパ特許第３５７３９１号に記載さ
れているような細胞外産物としてＰＴＨを産生する大腸
菌形質転換細胞である。
織、ＰＴＨの微生物源及び合成源からの抽出を含む種々
の技術により得られるＰＴＨ組成物に適用できることも
理解されよう。一般に、このような供給源から単離され
るＰＴＨは、部分的に精製された形態で得られ、即ち本
発明の逆相ＨＰＬＣ方法にかける前に少なくとも１回の
カラム分画段階にかけられる。例えば細菌のような微生
物源から得られる場合、微生物抽出物をまず最初に例え
ば酸抽出又は硫酸アンモニウム沈殿によりＰＴＨを濃縮
するように処理し、処理したサンプルをその後、ＰＴＨ
濃縮（ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）に有用な種々の分画技術
のいずれかにかけることが望ましい。例えば、Ｓ−Ｓｅ
ｐｈａｒｏｓｅもしくはＭｏｎｏ−Ｓカラム等を使用す
るイオン交換クロマトグラフィー、又は例えばフェニル
−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを使用する疎水性相互作用
クロマトグラフィーに粗ＰＴＨサンプルをかける。逆相
ＨＰＬＣによる精製以前に粗サンプルのＰＴＨ含有量を
どの程度まで増加させるかは、ＰＴＨが産生される環境
に大幅に依存する。この点で、本発明の好適実施態様に
よると、ＰＴＨ源は分泌（細胞質）又は排出（細胞外）
産物としてＰＴＨを産生するように遺伝子工学により製
造された大腸菌形質転換細胞であることが望ましい。本
発明の特に好適な実施態様によるとＰＴＨ源は、例えば
参考資料として本明細書の一部に加え、以下に要約する
Ｗｏｎｔらのヨーロッパ特許第３５７３９１号に記載さ
れているような細胞外産物としてＰＴＨを産生する大腸
菌形質転換細胞である。
【００３１】
【実施例】以下の実施例では、比較のために、以下に述
べる種々の供給源から得たＰＴＨサンプルについて分析
及び精製を行った。
べる種々の供給源から得たＰＴＨサンプルについて分析
及び精製を行った。
【００３２】１．大腸菌から排出されたＰＴＨ： この
ＰＴＨ材料は、参考資料として本明細書の一部に加える
１９９０年３月７日付けで公開されたヨーロッパ特許出
願公開第３５７３９１号中にＷｏｎｇとＳｕｔｈｅｒｌ
ａｎｄにより記載されているＰＴＨ製造システムを使用
することにより得た。要約すると、この製造システム
は、ｏｍｐＡシグナルペプチドを有するＰＴＨ前駆物質
の発現を誘導するためにｔａｃプロモーターを使用し、
且つ、株を培養する培地に成熟ヒトＰＴＨを排出する大
腸菌ＪＭ１０１株を産生宿主として利用する。ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ分画に先立ち、この「排出（ｅｘｃｒｅｔｅ
ｄ）」ＰＴＨの実質的に純粋な調製物を次のように得
た。全ブロスのｐＨを氷酢酸で４．０から８．０に調整
し、その後、遠心分離により清澄化した。次にサンプル
を１リットル容Ｓ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム上に充填
し、まず４カラム容量の４０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝
液、次いで６カラム容量の４００ｎＭ酢酸アンモニウム
緩衝液で洗浄した。カラムを８カラム容量以上０．４Ｍ
〜１．０Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液の勾配で溶離させ、
ＰＴＨを含むフラクション（ＰＡＧＥ分析により決定）
をプールした。
ＰＴＨ材料は、参考資料として本明細書の一部に加える
１９９０年３月７日付けで公開されたヨーロッパ特許出
願公開第３５７３９１号中にＷｏｎｇとＳｕｔｈｅｒｌ
ａｎｄにより記載されているＰＴＨ製造システムを使用
することにより得た。要約すると、この製造システム
は、ｏｍｐＡシグナルペプチドを有するＰＴＨ前駆物質
の発現を誘導するためにｔａｃプロモーターを使用し、
且つ、株を培養する培地に成熟ヒトＰＴＨを排出する大
腸菌ＪＭ１０１株を産生宿主として利用する。ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ分画に先立ち、この「排出（ｅｘｃｒｅｔｅ
ｄ）」ＰＴＨの実質的に純粋な調製物を次のように得
た。全ブロスのｐＨを氷酢酸で４．０から８．０に調整
し、その後、遠心分離により清澄化した。次にサンプル
を１リットル容Ｓ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム上に充填
し、まず４カラム容量の４０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝
液、次いで６カラム容量の４００ｎＭ酢酸アンモニウム
緩衝液で洗浄した。カラムを８カラム容量以上０．４Ｍ
〜１．０Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液の勾配で溶離させ、
ＰＴＨを含むフラクション（ＰＡＧＥ分析により決定）
をプールした。
【００３３】プールしたＳ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅフラク
ションを次に５Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ８．０に調整
し、７０ｍｌフェニル−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム上に
充填した。カラムを７カラム容量の０．０６Ｍ酢酸アン
モニウム緩衝液で洗浄した。カラムを１０カラム容量以
上の０．６〜０．４Ｍ酢酸アンモニウム勾配で溶離させ
た。フラクションを集め、Ｃ−１８逆相ＨＰＬＣ（アセ
トニトリル／ＴＦＡ）及びポリアクリルアミドゲル電気
泳動によるアリコート試験に基づいてプールした。
ションを次に５Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ８．０に調整
し、７０ｍｌフェニル−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム上に
充填した。カラムを７カラム容量の０．０６Ｍ酢酸アン
モニウム緩衝液で洗浄した。カラムを１０カラム容量以
上の０．６〜０．４Ｍ酢酸アンモニウム勾配で溶離させ
た。フラクションを集め、Ｃ−１８逆相ＨＰＬＣ（アセ
トニトリル／ＴＦＡ）及びポリアクリルアミドゲル電気
泳動によるアリコート試験に基づいてプールした。
【００３４】プールしたフェニル−Ｓｅｐｈａｒａｓｅ
フラクションを次にイオン対生成剤としてＨＦＢＡを使
用してＣ−１８シリカ中でＲＰ−ＨＰＬＣにより分析し
た処、単一のピークタンパク質移動が検出され、成熟ヒ
トＰＴＨが精製されたことが判明した（図２Ａ）。
フラクションを次にイオン対生成剤としてＨＦＢＡを使
用してＣ−１８シリカ中でＲＰ−ＨＰＬＣにより分析し
た処、単一のピークタンパク質移動が検出され、成熟ヒ
トＰＴＨが精製されたことが判明した（図２Ａ）。
【００３５】２．大腸菌から産生される細胞内ＰＴＨ
このＰＴＨ材料はＳｕｎｇらによりＪ． Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．， １９９１， ２６６（５）：２８３１に記
載されているように製造した。要約すると、これらの著
者により報告されているように、この製造システムはア
ミノペプチダーゼにより成熟ヒトＰＴＨに内在的に転化
されるＮ−メチオニルＰＴＨを製造するためにｌａｃプ
ロモーターを使用する大腸菌Ｙ１０９０株を宿主として
利用する。ＰＴＨを抽出するために、細胞を音波処理に
より破砕し、遠心分離により細胞破片を除去後、酸抽出
により粗ＰＴＨを回収した。抽出したＰＴＨを水酸化ナ
トリウムにより約ｐＨ４に調整し、カチオン交換体Ｍｏ
ｎｏ−Ｓカラムで分画し、プールしたサンプルをその
後、ＴＦＡの存在下に逆相ＨＰＬＣにより分画した。Ｔ
ＦＡの存在下にＨＦＢＡ中でＲＰ−ＨＰＬＣにより成熟
ＰＴＨの単一ピーク純度を分析決定した。
このＰＴＨ材料はＳｕｎｇらによりＪ． Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．， １９９１， ２６６（５）：２８３１に記
載されているように製造した。要約すると、これらの著
者により報告されているように、この製造システムはア
ミノペプチダーゼにより成熟ヒトＰＴＨに内在的に転化
されるＮ−メチオニルＰＴＨを製造するためにｌａｃプ
ロモーターを使用する大腸菌Ｙ１０９０株を宿主として
利用する。ＰＴＨを抽出するために、細胞を音波処理に
より破砕し、遠心分離により細胞破片を除去後、酸抽出
により粗ＰＴＨを回収した。抽出したＰＴＨを水酸化ナ
トリウムにより約ｐＨ４に調整し、カチオン交換体Ｍｏ
ｎｏ−Ｓカラムで分画し、プールしたサンプルをその
後、ＴＦＡの存在下に逆相ＨＰＬＣにより分画した。Ｔ
ＦＡの存在下にＨＦＢＡ中でＲＰ−ＨＰＬＣにより成熟
ＰＴＨの単一ピーク純度を分析決定した。
【００３６】３．合成ＰＴＨ 固相ペプチド合成により
製造されるヒトＰＴＨのサンプルはＢａｃｈｅｍ Ｉｎ
ｃ．（１９８７−１９８８カタログ＃ＰＣＡＬ１７５）
から購入した。供給者により明示されているサンプル仕
様によると、ＰＴＨはイオン対生成剤として０．１％Ｔ
ＦＡを使用するＲＰ−ＨＰＬＣにより分析した場合に９
９％以上の純度を有すると決定された。
製造されるヒトＰＴＨのサンプルはＢａｃｈｅｍ Ｉｎ
ｃ．（１９８７−１９８８カタログ＃ＰＣＡＬ１７５）
から購入した。供給者により明示されているサンプル仕
様によると、ＰＴＨはイオン対生成剤として０．１％Ｔ
ＦＡを使用するＲＰ−ＨＰＬＣにより分析した場合に９
９％以上の純度を有すると決定された。
【００３７】実施例１ キャピラリー電気泳動によるＰ
ＴＨ純度の分析。
ＴＨ純度の分析。
【００３８】逆相ＨＰＬＣ分析の結果、上記のように得
られたサンプルが純粋なヒトＰＴＨを示すことが判明し
たので、より高感度の分析技術であるキャピラリー電気
泳動を使用してサンプルを分析した。この目的で、Ａｐ
ｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから市販されている
キャピラリー電気泳動装置Ｍｏｄｅｌ＃２７０を使用し
た。ＨＦＢＡを用いるＨＰＬＣ精製から回収した、０．
２ｍｇ／ｍｌ〜１．０ｍｇ／ｍｌの濃度のＰＴＨを含有
するＰＴＨサンプルをサンプルチューブに入れ、１００
ｍＭリン酸緩衝液で予め平衡化しておいたキャピラリー
カラム中に吸引した。キャピラリー内で分離を行うため
に使用した条件は電圧＋２０Ｋｖとし、サンプルを２〜
１０秒間減圧吸引により充填した。
られたサンプルが純粋なヒトＰＴＨを示すことが判明し
たので、より高感度の分析技術であるキャピラリー電気
泳動を使用してサンプルを分析した。この目的で、Ａｐ
ｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから市販されている
キャピラリー電気泳動装置Ｍｏｄｅｌ＃２７０を使用し
た。ＨＦＢＡを用いるＨＰＬＣ精製から回収した、０．
２ｍｇ／ｍｌ〜１．０ｍｇ／ｍｌの濃度のＰＴＨを含有
するＰＴＨサンプルをサンプルチューブに入れ、１００
ｍＭリン酸緩衝液で予め平衡化しておいたキャピラリー
カラム中に吸引した。キャピラリー内で分離を行うため
に使用した条件は電圧＋２０Ｋｖとし、サンプルを２〜
１０秒間減圧吸引により充填した。
【００３９】図１に示すように、ＴＦＡ及びＨＦＢＡを
用いる逆相ＨＰＬＣにより分析した場合に純粋であると
みなされるＰＴＨサンプルは実際に、キャピラリー電気
泳動（ＣＥ）により分析した場合に検出可能な種々の種
類の汚染物質を含有する。図１Ａは例えば、ＨＦＢＡ中
で単一ＨＰＬＣピークとして移動する大腸菌排出ＰＴＨ
サンプルのＣＥプロフィル（２１４ｎｍでの吸光度）を
示す。ＣＥプロフィルにはヒトＰＴＨ主ピークの前に溶
出する従来未検出の４つの小さいピークと、いくつかの
トレーリングピーク（ｔｒａｉｌｉｎｇ ｐｅａｋｓ）
が認められる。ＣＥ分析により推定されるサンプルの純
度は約９０％（マーカーピークを含む）である。同様
に、ＲＰ−ＨＰＬＣ／ＴＦＡにより単一ピークとして移
動する大腸菌産生細胞内ＰＴＨ（図１Ｃ）では、ＣＥプ
ロフィルは、ＰＴＨ主ピークより前に溶出する３つの小
さいピークと、小さいトレーリングピークを示し、全体
の純度計算値は９７．８％である。更に、合成ＰＴＨ
（図１Ｂ）は、大きい不均一の主ピークと、前縁部の視
覚化可能な小さいピークと示すＣＥ移動パターンを形成
し、全体の純度は８９％以下であった。大きいピークに
は非脱保護アミノ酸残基を有する複数のＰＴＨ種が存在
すると予想される。
用いる逆相ＨＰＬＣにより分析した場合に純粋であると
みなされるＰＴＨサンプルは実際に、キャピラリー電気
泳動（ＣＥ）により分析した場合に検出可能な種々の種
類の汚染物質を含有する。図１Ａは例えば、ＨＦＢＡ中
で単一ＨＰＬＣピークとして移動する大腸菌排出ＰＴＨ
サンプルのＣＥプロフィル（２１４ｎｍでの吸光度）を
示す。ＣＥプロフィルにはヒトＰＴＨ主ピークの前に溶
出する従来未検出の４つの小さいピークと、いくつかの
トレーリングピーク（ｔｒａｉｌｉｎｇ ｐｅａｋｓ）
が認められる。ＣＥ分析により推定されるサンプルの純
度は約９０％（マーカーピークを含む）である。同様
に、ＲＰ−ＨＰＬＣ／ＴＦＡにより単一ピークとして移
動する大腸菌産生細胞内ＰＴＨ（図１Ｃ）では、ＣＥプ
ロフィルは、ＰＴＨ主ピークより前に溶出する３つの小
さいピークと、小さいトレーリングピークを示し、全体
の純度計算値は９７．８％である。更に、合成ＰＴＨ
（図１Ｂ）は、大きい不均一の主ピークと、前縁部の視
覚化可能な小さいピークと示すＣＥ移動パターンを形成
し、全体の純度は８９％以下であった。大きいピークに
は非脱保護アミノ酸残基を有する複数のＰＴＨ種が存在
すると予想される。
【００４０】実施例２ アミンをベースとするイオン対
生成剤を使用するＲＰ−ＨＰＬＣによるヒトＰＴＨの精
製。
生成剤を使用するＲＰ−ＨＰＬＣによるヒトＰＴＨの精
製。
【００４１】実施例の前文に記載したようにフェニル−
Ｓｅｐｈａｒｏｓｅで分画後に大腸菌排出ヒトＰＴＨ
（Ｗｏｎｇら，上掲）のサンプルを得た。フェニル−Ｓ
ｅｐｈａｒｏｓｅカラムから回収したサンプルをリン酸
添加によりｐＨ８からｐＨ４に調整し、ｐＨ調整したサ
ンプル２００μｌをＨＰＬＣ装置（Ｗａｔｅｒｓ ＨＰ
ＬＣシステム： ７２１ Ｄａｔａ Ｍｏｄｕｌｅ，
７３０ Ｇｒａｄｉｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｒ、５
１０ ＨＰＬＣポンプ２個、Ｕ６Ｋマニュアルインジェ
クター、４４０可変波長デテクター）に注入した。Ｒａ
ｉｎｉｎから商品名Ｄｙｎａｍａｘで市販されている５
μｍ Ｃ−１８シリカビーズ（４．１×２５ｃｍ， 孔
径３００Å）を充填したカラムを装置に組み込んだ。溶
媒Ａ及びＢは、１００％水（Ａ）及び８０％アセトニト
リル（Ｂ）に各々０．４％トリエチルアミン及び０．４
％リン酸を補充した。自動調節される流速は１ｍｌ／ｍ
ｉｎとし、溶媒は指示時間（分）の間以下のようにブレ
ンドされた。
Ｓｅｐｈａｒｏｓｅで分画後に大腸菌排出ヒトＰＴＨ
（Ｗｏｎｇら，上掲）のサンプルを得た。フェニル−Ｓ
ｅｐｈａｒｏｓｅカラムから回収したサンプルをリン酸
添加によりｐＨ８からｐＨ４に調整し、ｐＨ調整したサ
ンプル２００μｌをＨＰＬＣ装置（Ｗａｔｅｒｓ ＨＰ
ＬＣシステム： ７２１ Ｄａｔａ Ｍｏｄｕｌｅ，
７３０ Ｇｒａｄｉｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｒ、５
１０ ＨＰＬＣポンプ２個、Ｕ６Ｋマニュアルインジェ
クター、４４０可変波長デテクター）に注入した。Ｒａ
ｉｎｉｎから商品名Ｄｙｎａｍａｘで市販されている５
μｍ Ｃ−１８シリカビーズ（４．１×２５ｃｍ， 孔
径３００Å）を充填したカラムを装置に組み込んだ。溶
媒Ａ及びＢは、１００％水（Ａ）及び８０％アセトニト
リル（Ｂ）に各々０．４％トリエチルアミン及び０．４
％リン酸を補充した。自動調節される流速は１ｍｌ／ｍ
ｉｎとし、溶媒は指示時間（分）の間以下のようにブレ
ンドされた。
【００４２】
【表１】 主ＰＴＨピークは２６．６２分で３５％アセトニトリル
で溶出し、イオン対生成剤としてＨＦＢＡを使用した場
合に従来では検出されなかった汚染物質から十分に分離
された。この主吸光度ピークをその後のキャピラリー電
気泳動分析のために集め、ＴＥＡＰを用いて同様に操作
した。ＲＰ−ＨＰＬＣは上記に従った。図２はこれらの
ＨＰＬＣ分析の結果を示し、ＨＦＢＡ（図２Ａ）に対す
るＴＥＡＰ（図２Ｂ）の分離能と、同様にＣＥにより単
一ピーク（図３）として特徴付けられるＨＰＬＣグレー
ド（単一ピーク）のヒトＰＴＨ（図２Ｃ）を得る能力を
示す。
で溶出し、イオン対生成剤としてＨＦＢＡを使用した場
合に従来では検出されなかった汚染物質から十分に分離
された。この主吸光度ピークをその後のキャピラリー電
気泳動分析のために集め、ＴＥＡＰを用いて同様に操作
した。ＲＰ−ＨＰＬＣは上記に従った。図２はこれらの
ＨＰＬＣ分析の結果を示し、ＨＦＢＡ（図２Ａ）に対す
るＴＥＡＰ（図２Ｂ）の分離能と、同様にＣＥにより単
一ピーク（図３）として特徴付けられるＨＰＬＣグレー
ド（単一ピーク）のヒトＰＴＨ（図２Ｃ）を得る能力を
示す。
【００４３】大腸菌産生細胞内ＰＴＨも同様にこれらの
条件下でＴＥＡＰを用いるＨＰＬＣ精製にかけた。クロ
マトグラム（図示せず）によると、ＴＦＡ中の分画によ
り分離されない汚染物質の２つのリーディングピークが
確認された。
条件下でＴＥＡＰを用いるＨＰＬＣ精製にかけた。クロ
マトグラム（図示せず）によると、ＴＦＡ中の分画によ
り分離されない汚染物質の２つのリーディングピークが
確認された。
【００４４】実施例３ アミンをベースとするイオン対
生成剤を使用するＲＰ−ＨＰＬＣ前後のヒトＰＴＨ純度
の分析。
生成剤を使用するＲＰ−ＨＰＬＣ前後のヒトＰＴＨ純度
の分析。
【００４５】ＨＦＢＡ精製ＰＴＨと比較するために、実
施例２に記載したように得たＴＥＡＰ精製ＰＴＨを実施
例１に記載した条件下でキャピラリー電気泳動により分
析した。図３は比較結果を示し、ＨＦＰＡ精製材料（図
３Ａ）は複数の吸光度ピーク（２１４ｎｍ）を有してお
り、ＴＥＡＰ精製等価物（図３Ｂ）は単一の吸光度ピー
ク（２１４ｎｍ）を有している。
施例２に記載したように得たＴＥＡＰ精製ＰＴＨを実施
例１に記載した条件下でキャピラリー電気泳動により分
析した。図３は比較結果を示し、ＨＦＰＡ精製材料（図
３Ａ）は複数の吸光度ピーク（２１４ｎｍ）を有してお
り、ＴＥＡＰ精製等価物（図３Ｂ）は単一の吸光度ピー
ク（２１４ｎｍ）を有している。
【図面の簡単な説明】
【図１】排出細菌ＰＴＨ（１Ａ）、市販の合成ＰＴＨ
（１Ｂ）及び細胞内細菌ＰＴＨ（１Ｃ）の各起源から得
られるＨＰＬＣグレードのＰＴＨサンプルのＣＥプロフ
ィルを示す。
（１Ｂ）及び細胞内細菌ＰＴＨ（１Ｃ）の各起源から得
られるＨＰＬＣグレードのＰＴＨサンプルのＣＥプロフ
ィルを示す。
【図２】ＨＦＢＡ（２Ａ）及びＴＥＡＰ（２Ｂ，２Ｃ）
の存在下におけるＰＴＨサンプルのＨＰＬＣプロフィル
を示す。
の存在下におけるＰＴＨサンプルのＨＰＬＣプロフィル
を示す。
【図３】ＨＦＢＡ（３Ａ）及びＴＥＡＰ（３Ｂ）中で逆
相ＨＰＬＣにより分画したＰＴＨサンプルのＣＥプロフ
ィルを示す。
相ＨＰＬＣにより分画したＰＴＨサンプルのＣＥプロフ
ィルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 デニス・アール・シンドレー カナダ国、オンタリオ・エム・９・エイ・ ４・エツクス・８、エトビコーク、メイベ ル・アベニユー・24、アパートメント・ 3415
Claims (20)
- 【請求項１】 キャピラリー電気泳動により検出可能な
タンパク質汚染物質を含まないことを特徴とする本質的
に純粋なヒト副甲状腺ホルモン。 - 【請求項２】 凍結乾燥形態であることを特徴とする請
求項１に記載の本質的に純粋なヒト副甲状腺ホルモン。 - 【請求項３】 請求項１に記載の本質的に純粋なヒト副
甲状腺ホルモンを医薬上許容可能なキャリヤーと配合す
る段階を含むことを特徴とする医薬組成物の製造方法。 - 【請求項４】 治療上有効量の請求項１に記載の本質的
に純粋なヒト副甲状腺ホルモンと、医薬上許容可能なキ
ャリヤーとを含有する医薬組成物。 - 【請求項５】 前記キャリヤーが水性賦形剤であること
を特徴とする請求項４に記載の医薬組成物。 - 【請求項６】 安定性を増進する量の還元剤を更に含有
することを特徴とする請求項５に記載の医薬組成物。 - 【請求項７】 第２の治療剤をさらに含有することを特
徴とする請求項４に記載の医薬組成物。 - 【請求項８】 部分的に精製されたヒト副甲状腺ホルモ
ン調製物をカチオン性イオン対生成剤の存在下で逆相高
性能液体クロマトグラフィーにより分画する段階を含む
ことを特徴とする、ヒト副甲状腺ホルモンの精製方法。 - 【請求項９】 カチオン性イオン対生成剤がアミンをベ
ースとするイオン対生成剤であることを特徴とする請求
項８に記載の方法。 - 【請求項１０】 アミンをベースとするイオン対生成剤
がトリエチルアミン又はその塩であることを特徴とする
請求項９に記載の方法。 - 【請求項１１】 アミンをベースとするイオン対生成剤
がリン酸トリエチルアミンであることを特徴とする請求
項１０に記載の方法。 - 【請求項１２】 部分的に精製された副甲状腺ホルモン
調製物がヒト副甲状腺ホルモンの微生物供給源から得ら
れることを特徴とする請求項１０に記載の方法。 - 【請求項１３】 ヒト副甲状腺ホルモンの微生物供給源
がヒト副甲状腺ホルモンの細菌供給源であることを特徴
とする請求項１２に記載の方法。 - 【請求項１４】 ヒト副甲状腺ホルモンの細菌供給源が
ヒト副甲状腺ホルモンの大腸菌供給源であることを特徴
とする請求項１３に記載の方法。 - 【請求項１５】 （ｉ）大腸菌から産生されたヒト副甲
状腺ホルモンの部分的に精製された調製物を得る段階
と、（ｉｉ）部分的に精製された調製物をトリエチルア
ミン又はその塩の存在下で逆相高性能液体クロマトグラ
フィーにより分画する段階と、（ｉｉｉ）クロマトグラ
フィー段階後に本質的に純粋なヒト副甲状腺ホルモンを
収集する段階とを含むことを特徴とする本質的に純粋な
ヒト副甲状腺ホルモンの製造方法。 - 【請求項１６】 収集したヒト副甲状腺ホルモンを凍結
乾燥する段階を更に含むことを特徴とする請求項１５に
記載の方法。 - 【請求項１７】 請求項８に記載の方法により得られる
本質的に純粋なヒト副甲状腺ホルモン。 - 【請求項１８】 請求項１５に記載の方法により得られ
る本質的に純粋なヒト副甲状腺ホルモン。 - 【請求項１９】 ２１４ｎｍでキャピラリー電気泳動に
より分析した場合に単一ピーク移動を示し、ＵＭＲ １
０６によるアデニル酸シクラーゼアッセイで決定したＥ
Ｃ５０が２ｎＭ以下であることを特徴とする本質的に純
粋なヒト副甲状腺ホルモン。 - 【請求項２０】 請求項１９に記載の本質的に純粋なヒ
ト副甲状腺ホルモンと、医薬上許容可能なキャリヤーと
を含有する医薬組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US707114 | 1991-05-23 | ||
| US07/707,114 US5208041A (en) | 1991-05-23 | 1991-05-23 | Essentially pure human parathyroid hormone |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0687897A true JPH0687897A (ja) | 1994-03-29 |
| JP2563726B2 JP2563726B2 (ja) | 1996-12-18 |
Family
ID=24840399
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4156100A Expired - Lifetime JP2563726B2 (ja) | 1991-05-23 | 1992-05-22 | 本質的に純粋なヒト副甲状腺ホルモン |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5208041A (ja) |
| EP (1) | EP0515228B1 (ja) |
| JP (1) | JP2563726B2 (ja) |
| KR (1) | KR970007755B1 (ja) |
| AT (1) | ATE164394T1 (ja) |
| CA (1) | CA2068438C (ja) |
| DE (1) | DE69224858T2 (ja) |
| DK (1) | DK0515228T3 (ja) |
| ES (1) | ES2115642T3 (ja) |
| FI (1) | FI106802B (ja) |
| HK (1) | HK1004340A1 (ja) |
| IE (1) | IE921672A1 (ja) |
| IL (3) | IL119840A (ja) |
| NO (2) | NO304190B1 (ja) |
| NZ (1) | NZ242855A (ja) |
| ZA (1) | ZA923735B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995011697A1 (fr) * | 1993-10-27 | 1995-05-04 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Accelerateur de guerison utilise en chondroplastie |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5420242A (en) * | 1986-10-22 | 1995-05-30 | Kaare M. Gautvik | Production of human parathyroid hormone from microorganisms |
| USRE37919E1 (en) | 1989-05-12 | 2002-12-03 | The General Hospital Corporation | Recombinant DNA method for production of parathyroid hormone |
| US5962427A (en) | 1994-02-18 | 1999-10-05 | The Regent Of The University Of Michigan | In vivo gene transfer methods for wound healing |
| US5942496A (en) | 1994-02-18 | 1999-08-24 | The Regent Of The University Of Michigan | Methods and compositions for multiple gene transfer into bone cells |
| US20020193338A1 (en) * | 1994-02-18 | 2002-12-19 | Goldstein Steven A. | In vivo gene transfer methods for wound healing |
| US6074840A (en) | 1994-02-18 | 2000-06-13 | The Regents Of The University Of Michigan | Recombinant production of latent TGF-beta binding protein-3 (LTBP-3) |
| US5763416A (en) | 1994-02-18 | 1998-06-09 | The Regent Of The University Of Michigan | Gene transfer into bone cells and tissues |
| US6551618B2 (en) | 1994-03-15 | 2003-04-22 | University Of Birmingham | Compositions and methods for delivery of agents for neuronal regeneration and survival |
| US7923250B2 (en) | 1997-07-30 | 2011-04-12 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Methods of expressing LIM mineralization protein in non-osseous cells |
| US6300127B1 (en) | 1997-07-30 | 2001-10-09 | Emory University | Bone mineralization proteins, DNA, vectors, expression systems |
| US6770623B1 (en) | 1997-12-09 | 2004-08-03 | Eli Lilly And Company | Stabilized teriparatide solutions |
| DZ2873A1 (fr) | 1998-08-19 | 2003-12-15 | Lilly Co Eli | Procédé pour augmenter la dureté et la rigidité osseuse. |
| EP1123401A1 (en) * | 1998-10-22 | 2001-08-16 | The General Hospital Corporation | BIOACTIVE PEPTIDES AND PEPTIDE DERIVATIVES OF PARATHYROID HORMONE (PTH) AND PARATHYROID HORMONE-RELATED PEPTIDE (PTHrP) |
| WO2000032771A1 (en) | 1998-11-30 | 2000-06-08 | The General Hospital Corporation | Pth1r and pth3r receptors, methods and uses thereof |
| US6689566B1 (en) | 1999-01-14 | 2004-02-10 | Scantibodies Laboratory, Inc. | Methods, kits, and antibodies for detecting parathyroid hormone |
| US7820393B2 (en) * | 1999-01-14 | 2010-10-26 | Scantibodies Laboratory, Inc. | Methods, kits and antibodies for detecting parathyroid hormone |
| US20080108086A1 (en) * | 1999-06-02 | 2008-05-08 | Cantor Thomas L | Parathyroid hormone antagonists and uses thereof |
| US7893021B2 (en) * | 1999-06-02 | 2011-02-22 | Scantibodies Laboratory, Inc. | Parathyroid hormone antagonists and uses thereof |
| AU7734800A (en) * | 1999-09-29 | 2001-04-30 | General Hospital Corporation, The | Polypeptide derivatives of parathyroid hormone (pth) |
| AU6788701A (en) | 2000-06-30 | 2002-01-14 | Suntory Ltd | Medicinal components comprising human parathyroid hormone and medicinal compositions for nasal administration containing the components |
| US6387711B1 (en) * | 2000-08-11 | 2002-05-14 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Liquid intact parathyroid hormone (PTH) standards |
| US6905886B2 (en) * | 2000-08-11 | 2005-06-14 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Preservative solutions |
| WO2003009804A2 (en) * | 2001-07-23 | 2003-02-06 | The General Hospital Corporation | Conformationally constrained parathyroid hormone (pth) analogs |
| US20040067526A1 (en) * | 2002-10-03 | 2004-04-08 | Cantor Thomas L. | Methods for diagnosing and guiding treatment of bone turnover disease |
| EP2201960A1 (en) * | 2003-03-19 | 2010-06-30 | The General Hospital Corporation | Conformationally constrained parathyroid hormones with alpha-helix stabilizers |
| KR100540659B1 (ko) * | 2003-07-02 | 2006-01-10 | 삼성전자주식회사 | 이미지 확대 인쇄 방법과 장치 및 컴퓨터 프로그램을저장하는 컴퓨터로 읽을 수 있는 기록 매체 |
| US7910544B2 (en) | 2003-07-17 | 2011-03-22 | The General Hospital Corporation | Conformationally constrained parthyroid hormone (PTH) analogs |
| MXPA06013168A (es) | 2004-05-13 | 2007-05-15 | Johnson & Johnson | Aparato y metodo para el suministro transdermico de agentes de la hormona paratiroidea. |
| US7541140B2 (en) * | 2004-06-03 | 2009-06-02 | Scantibodies Laboratory, Inc. | Assessing risk for kidney stones using parathyroid hormone agonist and antagonist |
| AU2006315132A1 (en) * | 2005-11-10 | 2007-05-24 | Board Of Control Of Michigan Technological University | Black bear parathyroid hormone and methods of using black bear parathyroid hormone |
| JP2009545320A (ja) * | 2006-08-04 | 2009-12-24 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | 副甲状腺ホルモン（ｐｔｈ）のポリペプチド誘導体 |
| BRPI0814962B8 (pt) * | 2007-08-01 | 2021-05-25 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | métodos in vitro para determinar se um composto candidato é um agonista de longa duração ou de curta duração de um receptor acoplado à proteína g, polipeptídeo, seu uso e composição farmacêutica |
| RU2441019C2 (ru) * | 2007-08-09 | 2012-01-27 | Юсв Лимитед | Способ синтеза рекомбинантного паратиреоидного гормона человека |
| MX346473B (es) * | 2009-08-11 | 2017-03-22 | Biocon Ltd | Procesos cromatograficos y compuestos purificados de los mismos. |
| EP2509996A1 (en) | 2009-12-07 | 2012-10-17 | Michigan Technological University | Black bear parathyroid hormone and methods of using black bear parathyroid hormone |
| RU2604809C2 (ru) | 2010-05-13 | 2016-12-10 | Дзе Дженерал Хоспитал Корпорейшн | Аналоги паратиреоидного гормона и их применение |
| KR20150116468A (ko) * | 2011-06-07 | 2015-10-15 | 아사히 가세이 파마 가부시키가이샤 | 고순도 ｐｔｈ 함유 동결 건조 제제 및 그의 제조 방법 |
| CN102993293B (zh) * | 2012-12-05 | 2014-05-07 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种特立帕肽醋酸盐的纯化方法 |
| LU100168B1 (en) | 2017-04-12 | 2018-10-15 | Michael Pazianas | Prevention of Bone and Mineral Disorders by Restoring Calcium and Phosphate Homeostasis in Patients Suffering from Chronic Kidney Disease |
| WO2021195877A1 (en) | 2020-03-30 | 2021-10-07 | Sichuan Luzhou Buchang Bio-Pharmaceutical Co., Ltd. | Formulations of human parathyroid hormone (pth) and methods for producing same |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3886132A (en) * | 1972-12-21 | 1975-05-27 | Us Health | Human parathyroid hormone |
| US5223407A (en) * | 1988-08-31 | 1993-06-29 | Allelix Inc. | Excretion of heterologous proteins from e. coli |
| WO1991005050A1 (en) * | 1989-09-29 | 1991-04-18 | Her Majesty In Right Of Canada As Represented By The National Research Council Of Canada | Synthesis of mature human parathyroid hormone |
-
1991
- 1991-05-23 US US07/707,114 patent/US5208041A/en not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-05-11 IL IL11984092A patent/IL119840A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-05-11 IL IL10182992A patent/IL101829A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-05-12 CA CA002068438A patent/CA2068438C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-21 NO NO19922000A patent/NO304190B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-05-21 NZ NZ242855A patent/NZ242855A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-05-22 EP EP92304692A patent/EP0515228B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-22 DE DE69224858T patent/DE69224858T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-22 ES ES92304692T patent/ES2115642T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-22 DK DK92304692T patent/DK0515228T3/da active
- 1992-05-22 ZA ZA923735A patent/ZA923735B/xx unknown
- 1992-05-22 FI FI922356A patent/FI106802B/fi not_active IP Right Cessation
- 1992-05-22 KR KR92008730A patent/KR970007755B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-05-22 AT AT92304692T patent/ATE164394T1/de active
- 1992-05-22 JP JP4156100A patent/JP2563726B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-01 IE IE167292A patent/IE921672A1/en not_active IP Right Cessation
-
1996
- 1996-12-16 IL IL11984096A patent/IL119840A0/xx unknown
-
1998
- 1998-04-24 HK HK98103454A patent/HK1004340A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-10-24 NO NO2006013C patent/NO2006013I2/no unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995011697A1 (fr) * | 1993-10-27 | 1995-05-04 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Accelerateur de guerison utilise en chondroplastie |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE164394T1 (de) | 1998-04-15 |
| IL119840A (en) | 2005-08-31 |
| NO2006013I2 (no) | 2009-12-07 |
| NO304190B1 (no) | 1998-11-09 |
| NO2006013I1 (no) | 2006-11-06 |
| DE69224858T2 (de) | 1998-07-23 |
| DK0515228T3 (da) | 1998-09-28 |
| IL119840A0 (en) | 1997-03-18 |
| AU639856B2 (en) | 1993-08-05 |
| IL101829A0 (en) | 1992-12-30 |
| IE921672A1 (en) | 1992-12-02 |
| HK1004340A1 (en) | 1998-11-20 |
| NZ242855A (en) | 1994-04-27 |
| ZA923735B (en) | 1993-01-27 |
| NO922000L (no) | 1992-11-24 |
| DE69224858D1 (de) | 1998-04-30 |
| FI922356A (fi) | 1992-11-24 |
| EP0515228A2 (en) | 1992-11-25 |
| ES2115642T3 (es) | 1998-07-01 |
| AU1604992A (en) | 1993-03-11 |
| KR970007755B1 (en) | 1997-05-16 |
| EP0515228A3 (ja) | 1994-05-04 |
| JP2563726B2 (ja) | 1996-12-18 |
| FI922356A0 (fi) | 1992-05-22 |
| CA2068438C (en) | 1996-11-12 |
| FI106802B (fi) | 2001-04-12 |
| NO922000D0 (no) | 1992-05-21 |
| US5208041A (en) | 1993-05-04 |
| EP0515228B1 (en) | 1998-03-25 |
| IL101829A (en) | 1999-12-31 |
| CA2068438A1 (en) | 1992-11-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2563726B2 (ja) | 本質的に純粋なヒト副甲状腺ホルモン | |
| Schulz-Knappe et al. | Isolation and structural analysis of “urodilatin”, a new peptide of the cardiodilatin-(ANP)-family, extracted from human urine | |
| US5013720A (en) | SAP-6-Val proteins and methods | |
| JPH0764875B2 (ja) | 血液凝固阻害作用を有する新規ポリペプチド | |
| EP0228452B1 (en) | Protein purification | |
| JP3285862B2 (ja) | 活性依存性神経栄養因子 | |
| Nakamura et al. | Isolation and amino acid compositions of geographutoxin I and II from the marine snail Conus geographus Linné | |
| WO1987006943A1 (en) | Pulmonary hydrophobic surfactant-associated protein of 6,000 daltons molecular weight and multimers thereof | |
| US5290920A (en) | Method of purifying human epidermal growth factor | |
| CA2113868A1 (en) | Ultra-pure human interleukin-6 | |
| Tsukumo et al. | Purification and characterization of high molecular weight human epidermal growth factor from human urine | |
| Perry et al. | ε-N-Methyl Lysine: an Additional Amino-acid in Human Plasma | |
| Nicola | [44] Granulocyte colony stimulating factor | |
| IE83494B1 (en) | Essentially pure human parathyroid hormone | |
| Jaffe et al. | HPLC isolation and purification of pheromone biosynthesis activating neuropeptide of Heliothis zea | |
| EP0070569B1 (en) | Novel heptadecapeptide, a method for its preparation and a pharmaceutical composition containing the same | |
| Zhang et al. | Analysis and determination of biological activity of short-chain peptides from porcine brain hydrolysate | |
| Janáky et al. | High-performance separation methods in the analysis of a new peptide family: the galanins | |
| Paselk et al. | Preparation of several trifluoroacetyl insulin derivatives | |
| Parman | Comparison of carboxymethyl-cellulose cation-exchange chromatography and high-performance liquid chromatography in the purification of guinea-pig insulin from pancreatic extracts | |
| JP2714430B2 (ja) | Ｎａ，Ｋ―ＡＴＰａｓｅ阻害作用を有する新規ペプタイド | |
| Torres et al. | The isolation and amino acid sequence of some thrombin produced porcine tropoelastin peptides | |
| Camp | Polypeptide neutrophil chemoattractants in the skin | |
| Chang et al. | Rapid purification of arrowhead proteinase inhibitors by high performance hydrophobic interaction chromatography on a PEG bonded phase column | |
| Horitsu | Isolation and Componemt of Rare Acidic Protein in Mammal Organ Part 1: Isolation and Some Chemical Properties of Acidic Protein in Bovine Liver |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080919 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080919 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090919 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090919 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100919 Year of fee payment: 14 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110919 Year of fee payment: 15 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110919 Year of fee payment: 15 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120919 Year of fee payment: 16 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120919 Year of fee payment: 16 |