JPH06510744A - 変性されたシアリルルイスｘ化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なシアリルルイス１類似体、そのような類似体を含有する製剤組成 物、それらの製造法及びそれらの使用法に関する。

２、文献 次の文献は本出願においてその関係部分において参照番号として引用されている ものである：（１）ホロビッツ（Ｈｏｒｏｗｉｔｚ）著”グリココンジュゲーツ （Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）”　、第１−ｖ巻、編集人・ピグマン（Ｐ ｉｇｍａｎ）　、ニュー・ヨーク・アカデミツク・プレス社（Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ 　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）　（１９７７年、１９７８年、１９８２年、 １９８３年）。

（２）イッポリト（Ｉｐｐｏｌｉｔｏ）等の１９９１年６月ＩＯ日の出願に係る 米国特許出願第０７／７１４．１６１号。

（３）シャウア−（５ｈａｕｅｒ）纒“細胞生物学のモノグラフ（Ｃｅｌｌ　Ｂ ｉｏｌｏｇｙ　Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ）　’　、第１０巻（１９８２年）における “シアル酸”。

（４）ンエングルノド（Ｓｃｈｅｎｇｒｕｎｄ）等のＪ、　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、　、２６４　：１３２３３−１３２３７　（１９８９）。

（５）Ｎ、Ｙ、アカデミツク・プレス社刊、コン（Ｃｏｎｎ）編“受容体（Ｔｈ ｅ　Ｐｅｃｅｐｔｏｒｓ）”におけるボールマン（Ｐａｕｉｓｏｎ）著“動物ウ ィルスと細胞表面の受容体との相互作用（Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎ ｉｍａｌ　Ｖｉｒｕｓｅｓ　ｗｉｔｈＣｅｌｌ　５ｕｒｆａｃｅ　Ｒｅｃｅｐｔ ｏｒｓ）　”　、　第　１３１−２１９　頁　（１９８５年）。

（６）フエイジ（Ｆｅｉｚｉ）のＴｌＢ５．＋６：８４−８６（１９９１）。

（７）ブラントレー（Ｂｒａｎｄｌｅｙ）等のＣｅ１ｌ、６３；８６１−８６３ 　（＋９９０）。

（８）ハコモリ（Ｈａｋｏｍｏｒ　ｉ　）のＡｄｖ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、 、５２：２５７−３３１　（１９８９）。

（９）ハウフトン（Ｈｏｕｇｈｔｏｎ）等の“ガングリオシドと癌に関するノン ポジューム（Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　ｏｎＧａｕｇｌｉｏｓｉｄｅｓ　ａｎｄ　Ｃ ａｎｃｅｒ　）　”　、第２３３−２３７頁、ＶＣＨパブリソシャーズ社（ＶＣ ）ｌ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）　（１９８８年）。

（１０）イリー（Ｉｒ１ｅ）等の“ガングリオシドと癌に関するシンポジューム ”、第２４７−２５７頁、ＶＣＨパブリソンヤーズ社（１９８８年）。

（ｌ　ｌ）　Ｒペル（Ｒ，Ｂｅ１ｌ）、Ｇ、）リッガニ（Ｇ、　Ｔｏｒｒｉｇａ ｎｉ）編、ハワード（Ｈｏｗａｒｄ）著“より良い炭化水素ワクチンへ（Ｔｏｗ ａｒｄｓ　Ｂｅｔｔｅｒ　ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＶａｃｃｉｎｅｓ）”　１ 世界健康機構主催の会議の会議録（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ａ　Ｍｅｅ ｔｉｎｇ　Ｏｒｇａｎｉｚｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈ　Ｏｒ ｇａ旧ｚａｔｉ、ｏｎ）、第２１２−２３６頁、ワイレー、チチェスター社（Ｗ ｉｌｅｙ、　Ｃｈｉｃｈｅｓｔｅｒ）　（１９８７年）。

（１２）へニングソン（Ｈｅｎｎｉｎｇｓｓｏｎ）等のＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎ ｏｌ、Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ　、２　５　：　２　１　３　−　２　４　１　（ １９８７）。

（１３）フアツジ（Ｆｕｎｇ）等のＣａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、５０：４３０８− ４３＋４　（１９９０）　。

（１４）リビングストン（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ）等のＰｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ）　、　８４　：　２９１１−２ ９１５（１９８７）。

（１５）すオア（Ｎａｏｒ）等のＰｒｏｇ、　Ａｌｌｅｒｇｙ、　２２　：１０ ７−１４６　（１９７７）。

（１６）オルショフ（Ｏｒｓｈｏｗ）等のＪ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、、１４９： ６６９−６８５　（１９７９）。

（＋７）／＜−ソウム（Ｂａｒｓｏｕｍ）等のＭｏ１．　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１ ８：４９５−５５０　（１９８１）。

（１８）ジエニングス（Ｊａｎ旧ｎｇｓ）等の米国特許第４゜７２７．１３６号 （１９８５年）。

（１９）ホンダ（Ｈｏｎｄａ）等のＪ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、（東京）９５・＋ ３２３−１３２９　（１９８４）。

（２０）ナカムラ（Ｎａｋａｍｕｒａ）等のＪ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、（東京） 、９９：２１９−２２６　（１９８６）。

（２１）ヘノソト（Ｖｅｎｏｔ）等の米国特許出願第０７／７７］、００７号“ アルファーシアリル化オリゴサ・ソカリトの酵素的合成法（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆ ｏｒ　ｔｈｅ　ＥｎｚｙｍａｔｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　Ａｌｈａ　−５ ｉａｌｙｌａｔｅｄ　ＯｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅＧｌｙｃｏｓｉｄｅｓ） 　”、１９９１年ｌθ月２日出願。

（２２）バルンツク（Ｐａ１ｃｉｃ）等のＣａｒｂｏｈｙｄｒ。

Ｒｅｓ、、　ｌ　９０　：　ｌ−１１（１９８９）　。

（２３）ラトクリッフエ（Ｒａｔｃｌｉｆｆｅ）等の米国特許出願第０７／２７ ８，１０６号、１９８８年１１月３０日出願。

（２４）ワインシュタイン（Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ）等のＪ、　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、、２５７　：１３８４５−１３８５３　（１９８２）。

（２５）クコブスカーラタッｃｌ　（Ｋｕｋｏｗｓａｋａ−Ｌａｔａｌｌｏ）等 のＧｅｎｅｓ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　、４　：　ｌ　２８８−１３ ０３（１９９０）。

（２６）デュマス（Ｄｕｍａｓ）等のＢｉｏｏｒｇ、　Ｍｅｄ、　Ｌｅｔｔｅｒ ｓ、１：４２５−４２８　（１９９１）。

（２７）ブリーエルス（Ｐｒｉｅｅｌｓ）等のＪ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、 ２５６　：１０４５６−１０４６３　（１９８１）。

（２８）エラペンバーガー−カストリ（Ｅｐｐｅｎｂｅｒｇｅｒ（２９）ジョン ソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ）等のＶ［Ｉｌ　ｔｈ　ｒｎｔ。

Ｓｙｍｐ、　Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ　１ハウストン（Ｈｏｕｓｔｏｎ ）、ス：２１２−２２３　（＋９８５）。

（３２）ボールソン（Ｐａｕｌｓｏｎ）等のＥｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、 、＋４０：５２３−５３９　（＋９８４）　。

（３３）ロイター（Ｒｅｕｔｅｒ）等のＧｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｊ、、 ５：ｌ３３−１３５　（＋９８８）　。

（３４）フアツジ（Ｊｉａｎｇ）等の米国特許出願第０７／８４８．２２３号“ ＧＤＰ−フコースの化学的合成（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ 　Ｇ　Ｄ　Ｐ　−Ｆｕｃｏｓｅ）　”、１９９２年３月９日出願。

（３５）ラトクリソフエ等の米国特許第５．０７９゜３５３号。

（３６）ヒガ（）ｌｉｇａ）等のＪ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、２６０・８８ ３８−８８４９　（＋９８５）。

（３７）プロラスマー（Ｂｒｏｓｓｍｅｒ）等のＢｉＯＣｈｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ、、９６　：１２８２−１２８９　（１９８０）。

（３８）クロス（Ｇｒｏｓｓ）等のＥｕｒ、　ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、１互８ 　：　５９５−６０２　（１９８７）。

（３９）グロス等のＥｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、１７７：５８３−５８ ９　（１９８８）。

（４０）クリスチャン（Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ）等のＣａｒｂｏｈｙｄｒ。

Ｒｓｅ、、１９４：４９−６１　（＋９８７）。

（４１）コンラット（Ｃｏｎｒａｄ）等のＦ　Ｅ　Ｂ　Ｓ　Ｌｅｔｔ、、１７０ ：２９５−３００　（１９８４）。

（４２）クリスチャン等のＣａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、↓互（４３）ハー バーカンブ（Ｈａｖｅｒｋａｍｐ）等のＨｏｐｐｅ　−３ｅｙｌｅｒ’ｓ　Ｚ、 Ｐｈｙｓｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、３６０　：１５９−１６６５６（＋９８７）　。

（４５）ヘージドーン（Ｈａｇｅｄｏｒｎ）等の“第１３回炭水化物シンポジュ ーム（Ｘｌｌｌ　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｓｙｍｐ、）　’、イサ力（Ｉｔｈａ ｃａ）、（１９８６年）Ａ４゜（４６）ズビラル（Ｚｂｉｒａｉ）等のＣａｒｂ ｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、＋９４　：Ｃ１５−Ｃ１８（１９８９）　。

（４７）ベノット（Ｖｅｎｏｔ）等の米国特許出願第０７／７７１．２５９号“ ジ−Ｎ−アセチルラクトサミニル構造において終わっているモノフコモル化オリ ゴサ・ソカリトの合成法（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　５ｙｎｔｅｓｉｓ 　ｏｆＭｏｎｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ　Ｏｌｉｇｏｓａｃｃａｈｒｉｄｅ　Ｔ ｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ　１ｎＤｉ−Ｎ　−Ａｃｅｔｙｌｌａｃｔｏｓａｍｉｎｙ ｌ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅｓ）″、１９９１年１０月２日出願。

（４８）リッター等のＩｎｔ、　ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ、１８２　：　３２−４３ 　（１９９１）。

（４９）アブリン（Ａｐｌｉｎ）等のＣ，Ｒ，Ｃ，Ｃｒ１ｔ、　Ｒｅｖ。

Ｂ　ｉ　ｏｃｈｅｍ、、第２５９−３０６頁（＋９８１）。

（５０）クルー（Ｃｒｕｅ）等線、ベーセル（Ｂａｓｅｌ）、カージーｔ−−（ Ｋａｒｇｅｒ）の、上０　：　４８−１１４　（１９８９）、“微生物学及び免 疫学への寄与、コンジュゲートワクチン（Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓｔｏ　Ｍ ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄｌｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ 　Ｖａｃｃｉｎｅｓ）　”におけるディック（Ｄｉｃｋ）等著の“細菌性炭水化 物抗原のグリココンジュゲート（Ｇｌｉｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ　ｏｆ　Ｂａ ｃｔｅｒｉａｌ　ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＡｎｔｉｇｅｎｓ）　”。

（５１）レミオークス（Ｌｅｍｉｅｕｘ）等のＪ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ。

（５３）バーンシュタイン（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ）等の９３−２０１　（１９７ ４）。

（５５）ゴクヘール（Ｇｏｋｈａｌｅ）等のＣａｎ、　Ｊ、　Ｃｈｅ＋ｎ、、（ ５７）　スティッチャ−（Ｓｔｉｃｈｅｒ）等のＢｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、、（５ ９）７ノツト（Ｍａｚｉｄ）等の米国特許第５，０５９゜５３５号“シアリルト ランスフェラーゼの分離、精製法（Ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　５ｅｐａ ｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆＳｉａｌｙｌ　Ｔｒａ ｎｓｆｅｒａｓｅｓ　）　”、（１９９１年１０月２２日発行）。

（６０）パルシック等のＧｌｙｃｏｃｏｎｊ、　ｊ、、５：４９−６３（１９８ ８）　。

（６１）ブラッドフォード（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）等のＡｎａｌ。

ＢｉＯＣｈｅｍ、、７２：２４８−２５４　（１９７６）。

（６２）ボールソン等のＪ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、２５２　：　２３６３ −２３７１　（１９７７）　。

（６３）ハネシアン（Ｈａｎｅｓｓ　１ａｎ）のＣａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ 、、２：８６−８８　（１９６６）。

（６４）シュミット（Ｓｃｈｍｉｄｔ）等のしｉｅｂｉｇｓ　Ａｎｎ。

Ｃｈｅｍ、、１２１−１２４　（１９９１）。

（６５）ヌネッツ（Ｎｕｎｅｚ）等のＣａｎ、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、、旦９：２０ ８６−２０９５　（１９８１）。

（６６）ビーネマン（Ｖｅｅｎｅｍａｎ）等のＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ 、、３２：６１７５−６１７８　（１９９１）。

（６７）チャンドラセカラン（Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋａｒａｍ）等の５ｕｐｐ１ ．　ｔｏ　Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ、　Ｊ、−グリココンジュゲートに関する第１１ 回国際シンポジウムの予稿集（Ａｂｓｔｒａｃｔｓｆｏｒ　ｔｈｅ　ｌ　ｌ　ｔ ｈ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　ｏｎＧｌｙｃｏｃｏｎ ｊｕｇａｔｅｓ　）　（１９９１年）。

（６８）パルシック等のＣａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、１５９：３１５−３ ２４　（１９８７）。

（６９）グレーグ（Ｇｒｅｉｇ）等のＪ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、第８７９頁 （１９６１）。

（７０）ピーカルスカーパートフゼビツツ（Ｐｉｅｋａｒｓｋａ−Ｂａｒｔｏｗ ｚｅｗｉｃｚ）等のＣａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、２０３　＋　３０２−３ ０７　（１９９０）　。

（７Ｉ）ポダンスッキー（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ）等著“ペプチド合成の実際（Ｔ ｈｅ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）”、ス ブリンジャー・ヴアーラグ社（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　−Ｖｅｒｌａｇ）（＋９８４ ）。

（７２）イナズ（Ｉｎａｚｕ）等のＢｕｌｌ、　Ｓｏｃ、　Ｃｈｉｍ、。

Ｊａｐ、、６１１　：４４６７　（１９８８）。

（７３）バーノタス（Ｂｅｒｎｏｔａｓ）等のＢｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、、２７０ 　：　５３９−５４０　（１９９０）。

（７４）ツルンテツ（Ｔｒｕｍｔｅｚ）等のＣａｒｂｏｈｙｒｒ、　Ｒｅｓ、、 １９１　：２９−５２　（１９８９）。

（７５）：＋ヴ７　’／り（ｋｏｖａｃ）等のＣａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、 、１６９・２３−３４　（１９８７）。

（７６）ペチトー（Ｐｅｔｉｔｏｕ）等のＣａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、１ ４７：２２１−２３６　（１９８６）。

（７７）へルコーヤ（Ｂｅ１ｋｈｏｕｙａ）等のＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔ ｔｅｒｓ　、３９７１−３９８０　（１９９１）。

（７８）つオーレンバーグ（Ｗｏ　ｌ　Ｉｅｎｂｅｒｇ）等の米国特許第４，６ １２，１３２号。

（７９）ベトラコヴｙ　（Ｐｅｔｒａｋｏｖａ）等のＣａｎ、　Ｊ。

Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　７０　：２３３−２４０　（＋９９２）。

（８０）マツモト（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ）等のＡｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、 １１６：１０３−１１０（１９８１）。

（８１）！クハーグ（εｋｂｅｒｇ）等のＣａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、１ １０：５５−６７　（＋９８２）。

（８２）ダーメン（Ｄａｈｍｅｎ）等のＣａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、１４ ９−１５７　（１９８１）　。

（８４）アンバムーゾッロ（Ａｍｖａｍ　−Ｚｏｌｌｏ）等のＣａｒｂｏｈｙｄ ｒ、Ｒｅｓ、、　１５０　：１９９−２１２　（１９８６）。

（８５）ボールセン等のＣａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、１０４゜１９５−２ １９　（１９８２）　。

（８６）チャーンヤク（Ｃｈｅｒｕｎｙａｋ）等のＣａｒｂｏｈｙｄｒ。

Ｒｅｓ、、　１２８　：２６９−２８２　（＋９８４）　。

（８７）フエルナンデツーサンタナ（Ｆｅｒｎａｄｅｚ　−３ａｎｔａｎａ）等 のＪ、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｃｈｅｍ、　、８　：　５３１−５３７（＋９ ８９）。

（８８）り一等のＣａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、３７．第１９３頁以降（＋ ９７４）。

（８９）ポズスゲ−（Ｐｏｚｓｇａｙ）等のＢｉｏｏｒｇ、　Ｍｅｄ。

Ｃｈｅｍ、　Ｌｅｔ、、第１巻、第８号、第３９１−３９４頁（１９９１）。

本明細書において述へられている刊行物及び特許出願は全て本発明か関係する技 術分野の当業者の技術水準を示すものである。これら刊行物及び特許出願は全て その全体か、その各々の刊行物又は特許出願の全体が引用、参照されるへく特定 的かつ個々に示されたかの如く、それと同程度にここに引用、参照される。

３、技術状態 炭水化物及び／又はオリゴサツカリドは種々の天然及び病理学上のグリココンジ ュゲート（ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）上に存在する１゜特に関心のあるも のは、特に非還元性糖の末端にシアル酸残基を有する炭水化物及びオリゴサツカ リドである３゜このようなシアル酸末端基付きの炭水化物及びオリゴサツカリド は、一部は炭水化物の構造により、及びそれら構造が特定の配位子に結合するこ とによって運ばれる認識信号の概念に基づ（広範囲の生物学的現象に係わってい る多数の産生物に存在する。

具体的に述へると、このようなシアル酸末端基付きの炭水化物及びオリゴサツカ リドは毒素４、病原性剤、例えばウィルス５の結合用受容体であると考えられ、 従ってそれら炭水化物及びオリゴサツカリドは種々のレクチン、特に細胞癒着６ ７に伴われるもの等の認識部位である。シアリルルイス”　（ｓｉａｌｙｌ　Ｌ ｅｗｉｓ”　）を含めて、血液型決定因子に関係するシアリル化された及びシア リル化／フコシル化されたオリゴサツカリドの構造も哺乳動物における生体内免 疫変調特性及び寛容特性を持つことか示されている２゜これに関しては、本明細 書に記載される変性ノアツルルイス８化合物も免疫変調特性と寛容特性を有する 。

更に、腫瘍関係抗原にある種特定のシアリル末端基付きオリゴサツカリドが存在 することがこの技術分野で記録されているか８、このような抗原上に存在するオ リゴサツカリドの構造は、一般に、腫瘍関係抗原の発現を招くように正常なオリ ゴサツカリドからある種の様式で変性されている１゜黒色腫を持つ患者の、ある 種のシアリル化腫瘍関連抗原、例えばガングリオシド類のＧＤ３、ＣＤ、及びＧ 　Ｍ　ｔに対して向けられるモノクローナル抗体による受動免疫療法の可能性に ついての研究が行われているｓ、＋ｏ０シかし、大部分の腫瘍関連抗原は、その ような腫瘍の成長を抑制するか、妨げると思われる腫瘍特異性抗体を産生させる ことができない。何等かの理論に限定されるものではないが、これは真の腫瘍特 異性抗原がないことに起因し、そしてそのような抗原の構造が限定された数の正 常組織に発現される同様の構造のそれと交叉反応すると考えられる。加えて、炭 水化物抗原は、一般的には、活性な免疫性における役割を果たすと予想されるＴ −細胞性免疫応答をもたらすとは考えられない目。しかし、ある最近の研究は、 場合によっては腫瘍関連炭水化物抗原が抗癌Ｔ−細胞免疫性を持っているように １２．１３、又は細胞毒性抗体を産生ずるように１４振るようことがあることを 示している。

炭水化物の腫瘍関係抗原に細胞毒性の腫瘍特異性抗体を産生させる能力が一般に ないことに鑑み、天然産の弱い抗原をそれらの抗原性を改善するように化学的に 変性することが提案されている１゜これに関しては、シアリル化された炭水化物 腫瘍関係抗原上の特定の基を化学的に変性する方法が報告されている。

非−又は弱い一免疫原性の天然産抗原に対する化学的変性の焦点の大部分はシア リル化された炭水化物腫瘍関係抗原のシアル酸残基の誘導体を合成しなければな らなかった。具体的に言うと、この技術分野において、天然産のシアル酸上に存 在するある種の構造変性はオリゴサツカリドを、選択された宿主において免疫原 性にすると報告されているＩＬ　１７．１Ｓ目２Ｇｉ００人工抗原に関する最近 の研究は、化学的に変性されたシアロント（黒色腫関連糖脂質抗原）はヒトにお いて抗原性であるか、これらの変性シアロシドによってヒトに生成せしめられた 抗体は天然物質とは交叉反応しないことを示している４１１０他方、化学的に変 性されたシアリル化抗原は、これらをマウスに注射すると、天然物質と交叉反応 する抗体を産生ずる。従って、マウスに生成せしめられた交叉結合性のモノクロ ーナル抗体又はポリクローナル抗体は、ヒト宿主における天然物質の存在及び／ 又は量を測定するための診断検定法の基礎か、又は治療剤に、場合によっては、 カップリングさせることができる抗体によって天然物質が攻撃される病状の抗体 療法の基礎として役立ったろう。

上記のことに関しては、ヘノット等２１がシアル酸残基に変性を有する多数のシ アリル化されたすりゴサノカリト構造を生成させるようにオリゴサツカリドの非 還元性末端基に変性されたノアリル基を有するノアリル化オリコサソカリトの簡 単な化学的／酵素的合成法を開示している。

この合成法の利点にもかかわらず、特にそれらはシアリル単位において変性され たシアリルルイス８化合物に利用されるものであるので、免疫応答を変調すると き、及び人工抗原に対する抗体を製造する目的からその人工抗原を製造するとき の両方において有用な種々の構造を与えるようにシアリルルイス１中のガラクト ース及び／又はＮ−アセチルグルコサミンの両サツカリド単位を変性するのが更 に有利であろう。実際上の観点からは、シアル酸単位及びフコース単位を変性さ れたβＱａｌ（１→４）βＧ］ｃＮＡｃのタイプＩＩ構造にそれぞれ適切なシア リルトランスフェラーゼ及びフコシルトランスフェラーゼにより付加させる化学 的／酵素的方法でそのような類似体を製造するのが有利であろう。

シアリルルイス１及びその類似体を製造する場合、適切なシアリルトランスフェ ラーゼに、シアル酸をガラクトースの３−位に転移させてα（２→３）結合を形 成する、ラットの肝臓から得られる公知のβＧａ１（１→４）βＧＩｃＮＡｃ　 α（２→３）シアリルトランスフェラーゼ２４がある。適切なフコシルトランス フェラーゼには、ヒトの乳から容易に得られる公知のβＧａ１（１−３／４）β Ｇ　Ｉ　ｃＮＡｃ　ａ　（１→３／４）フコシルトランスフェラーゼ２２．２１ ．２１及びヒトの血清にも見いだされ、βＧａ１（１→３／４）βＧｌｃＮＡｃ 　α（１→３／４）フコノルトランスフェラーゼと共に同時に回収されるβＧａ ｌ　（１−４）βＧ　ｌ　ｃＮＡｃ　ａ　（２→３）フコシルトランスフェラー ゼがある。βＧａ１（１→３／４）βＧ１ｃＮＡｃ　ａ（１−３／４）フコシル トランスフェラーゼの組換え体も入手できる３ｓ・１゜これに関し、シアリルル イス“構造は、従来は、βｃａｌ（１→４）βＧＩＣＮＡＣ・タイプ１■構造を 適切なグリコジルトランスフェラーゼにより逐次的にシアリル化及びフコシル化 することを伴う組み合わせ化学的／酵素的方法で製造された。具体的に述へると 、βＧａ１（ｌ→４）βＧ１ｃＮＡｃ・タイプ１１構造のシアリル化は、この構 造を適切なシアリルトランスフェラーゼの存在下でＣＭＰ−Ｎｅ　ｕ　５Ａｃと そのＮｅｕ５Ａｃ基をガラクトースの３−位に入れて、αＮｅｕ５Ａｃ　（２→ ３）βＧａｌ　（１−４）βＧ１ｃＮＡｃを形成させるα（２→３）結合を形成 するように接触させることを含む。

次に、この化合物を適切なフコシルトランスフェラーゼの存在下てＧＤＰ−フコ ースとフコース基をＧ１ｃＮＡＣ単位の４−位に入れて、ｃｒＮｅｕ５Ａｃ　（ ２＋３）βＧａ　Ｉ　（１−”４）［αＦＬＪＣ（１−３）］βＧｌｃＮＡＣ（ 即ち、シアリルルイス１）を形成させるα（ｌ→３）結合を形成するように接触 させることによってフコシル化を達成する。

上記の点に関しては、シアリルトランスフェラーゼ及びフコシルトランスフェラ ーゼの使用が最も容易なシアリルルイス′の合成法を与える。それは、これらの 条件下ではシアリル化及びフコシル化はオリゴサツカリド構造の他の部位にある 反応性部分を、化学的合成では一般的である如きに保護／脱保護する必要がない からである。

更に、シアリルトランスフェラーゼは、もしそれを用いなければアノマー特異性 に関して高収率で形成させるのが難しいα（２→３）結合を容易に形成する。

これに関し、この技術分野では、ある種特定の変性はβＧａｌ　（１−４）βＧ ｌｃＮＡｃのガラクトース構造の２−位及び３−位上のβＧａ１（１→３／４） βＧ１ｃＮＡｃ　α（ｌ→３／４）フコシルトランスフェラーゼによって耐性と され得るが、ガラクトースの６−位におけるＮｅｕ５Ａｃ又はデオキシ基の存在 はこの酵素によっては耐性とはされ得ないことが認められている。この技術分野 ではまた、βＧａ１（１−”４）βＧ１ｃＮＡＣジサッカリドのＧｌｃＮＡｃ単 位上の２−ＮＡｃ基の、赤道ヒドロキシル基による置換の結果として得られる化 合物はこの酵素の良好な受容体であるのに対して、ＧＬｃＮＡｃ上のＮＡｃ基の 軸性ヒドロキシル基による置換の結果として得られる化合物はこの酵素の受容体 ではないことも認められている１２９゜いずれにしても、この技術は、βＧａ１ （１−”４）βＧ１ｃＮＡｃジサッカリド又はαＮｅｕ５Ａｃ　（２４３）βＧ ａｌ　（１−”４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃ　）リサッカリドのＧＬｃＮＡｃ構造に 対する他の変性がβＧａ１（１→３／４）βＧＩｃＮＡｃ１　α（ｌ→３／４） フコシルトランスフェラーゼによって耐性とされることがあっても、それが何で あるかに関しては欠けている。

この技術分野ではまた、βＱａｌ（１→４）βＧｌｃＮＡｃ　α（ｌ→３）フコ シルトランスフェラーゼがガラクトース単位の２−及び３−位の変性を耐性とす るが、ラクトース［βＧａ１（１→４）βＧｌｃ］を基質として受け入れないこ とが認められている２１゜予備的データーもこのフコシルトランスフェラーゼが Ｌ−フコースを、末端ガラクトースの２゛−１３゛−及び６′−位及びＧＬｃＮ Ａｃの６−位においてサルフェート基で置換されたタイプＩＩ受容体に転移させ ることが可能であることを示している＠７゜ 同様に、この技術分野においては、従来から、βＧａ１（１−３／４）βＧ　Ｉ 　ｃＮＡｃ　ａ　（２→３）シアリルトランスフェラーゼはＮｅｕ５ＡｃをβＧ ａ１．（１→４）［αＦｕｃ　（１−３）］βＧ１ｃＮＡｃ−構造のガラクトー ス単位のα（２→３）−位には転移させないが”、Ｎｅｕ５ＡｃをβＧａ１（１ −４）［サツカリド（＋−６）］βＧＩｃＮＡｃ−構造のガラクトース単位のα （２→３）−位には転移させる１ことが明らかにされているけれども、βＧａ１ （１−＝４）βＧＩｃＮＡｃ・タイプ１１構造上の池の変性はβｃａｌ（１→３ ／４）βＧＩｃＮＡｃ　α（２→３）シアリルトランスフェラーゼによって耐性 とされることがあっても、その変性が何であるかは知られていない。

この不確かな状態は、βＧａ１（１→３／４）βＧｌｃＮＡｃ　α（２→３）シ アリルトランスフェラーゼを使用し、次いでβＧａ　１　（１→３／４）βＧ１ ｃＮＡｃα（１→３／４）フコシルトランスフェラーゼ又はその他入手可能な許 容し得るトランスフェラーゼを使用することによってβＧａ１（１−＝４）βＧ ＩｃＮＡｃ・タイプＩＩ構造を逐次的にシアリル化及びフコシル化することを期 待して、上記タイプＩＩ構造のガラクトース単位及び／又はＮ−アセチルグルコ サミン単位を変性する合理的な方法を与えるのを困難にするものであった。

上記の技術状態に鑑み、免疫変調特性及び寛容特性を存すると共に、人工抗原に 対する抗原決定因子として使用してモノクローナル抗体及びポリクローナル抗体 を生成させることができるだろう変性されたシアリルルイス１構造を開発するこ とが特にを利なことであろう。これらの変性されたシアリルルイス８構造が、変 性されたβＧａ１（１−”４）βＧＩｃＮＡｃ構造を適切なシアリルトランスフ ェラーゼ及び適切なフコシルトランスフェラーゼにより逐次的にシアリル化及び フコシル化することによって容易に製造することができるならば、これも更に存 利なことてあろう。

発明の概要 本発明は、一部は、本明細書に記載される変性されたシアリルルイス゛化合物が 生体内での抗原に対する細胞性免疫応答をその抗原からの後の対抗に対して耐性 を与えっつ変調し、そして人工抗原を製造してこれら構造に指向する抗体を産生 させることの両者において有用であると言う発見に関する。これに関し、（特に マウスにおける）これら人工抗原に対抗して作り出されるモノクローナル抗体又 はポリクローナル抗体はシアリルルイス１構造のヒト宿主における存在を測定す るための診断上の検定法において有用である。更に、これら抗体は、抗体が病気 に罹った粒子（例えば、癌細胞）上のシアリルルイス１構造プの抗原構造を攻撃 するだろう病状に対する抗体療法において有用であるとも考えられる。

本発明はシアリルルイス８のガラクトース単位及び／又はＮ−アセチルグルコサ ミン単位に対してなされた変性が、特定のシアリルトランスフェラーゼ及びフコ シルトランスフェラーゼと適合性があり、このためこれら化合物のシアリル残基 及びフコシル残基が逐次的酵素法で容易に作られると言う更なる発見に関する。

具体的に述へると、βＧａ　Ｉ　（１→３／４）βＧｌｃＮＡｃ　α（２→３） シアリルトランスフェラーゼはＮ−アセチルグルコサミン単位の２−及び６−位 に対して広範な変性を受け入れることができると共に、βＧａ１（ｌ→４）βＧ ＩｃＮＡｃ・タイプ１１構造のガラクトース単位の２−位の一部変性をも受け入 れることができ、また更にシアル酸をガラクトースの３−位に容易に転移させて ガラク）・−スサソカリド上にα（２→３）結合を形成させることができること がここに発見されたのである。同様に、βＧａ　１　（１−”３／４）βＧＩＣ ＮＡＣα（ｌ→３／４）フコシルトランスフェラーゼはＮ−アセチルグルコサミ ン単位の６−位に対して広範な変性を、またそのアセチルグルコサミン単位の２ −位に対して一部変性を受け入れることができると共に、βＧａ１（１→４）β Ｇ］ｃＮＡｃ・タイプ１１構造のガラクトースサツカリドの２−位における非酸 素含有変性も受け入れることができ、また更にＬ−フコースを容易に転移させて Ｎ−アセチルグルコサミン構造上にα（ｌ→３）フコース残基を形成することが できることがここに発見されたのである。

これらの発見の故に、本発明者はβＧａ１（１→３／４）βＧＩｃＮＡｃ　α（ ２→３）シアリルトランスフェラーゼ及びβＧａ　ｌ　（１→３／４）βＧ１ｃ ＮＡｃα（ｌ→３／４）フコシルトランスフェラーゼによって可能にされた変性 の重なりがＮ−アセドルグルコサミンの２−及び６−位とβＧａ１（１→４）β Ｇ１ｃＮＡｃ・タイプ１１構造のガラクトース単位の２−位における変性を可能 にし、そして更にそれぞれのトランスフェラーゼによる逐次的シアリル化とフコ シル化を可能にすると結論したのである。

従って、本発明は、その組成面の１つの態様において、式Ｉ て表される、哺乳動物における抗原に対する細胞性免疫応答を変調する際の使用 に適した化合物、及びその製剤上許容し１ｑる塩に関する。

たたし、上記の式において： Ｒは水素、サツカリド、オリゴサツカリド又は少なくとも１個の炭素原子を有す るアグリコンより成る群から選択され； Ｒ１は水素、−ＮＲ２、−Ｎ、　、−ＮＨＳＯ３Ｈ，−ＮＲ，Ｃ（０）Ｒ＠　、 −Ｎ＝Ｃ（Ｒ７）２、−ＮＨＣＨ（Ｒ７）、　、−Ｎ　（Ｒ，）２、−０　（Ｃ （０＞）、Ｒ，、−３Ｒ，、フルオロ、クロロ、ブロモ及びサルフェートよりな る群から選択され、ここで 場合によってヒドロキシ、クロロ、ブロモ、炭素原子数１〜４個のアルコキシ、 フェニル、並びにヒドロキシ、炭素原子数１〜４個のアルキル、炭素原子数１〜 ４個のアルコキシ、クロロ、ブロモ及びサルフエ−１・よりなる群から選択され る１〜３個の置換基て置換されたフェニルよりなる群から選択される１個又は２ 個以上の置換基で置換されている炭素原子数１〜４個のアルキル、 アミノ酸残基又はポリペブチジル残基、−ＯＲ，。（ただし、Ｒ１゜は炭素原子 数１〜４個のアルキル、又はヒドロキシル基で置換された炭素原子数２〜４個の アルキルである）、及び−ＮＲ，、Ｒ，２（たたし、Ｒ８及びＲ１２は独立に水 素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択される） よりなる群から選択され、 各Ｒ７は独立に水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択され 、 Ｒ，は独立に水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択され、 場合によってヒドロキシ、クロロ、ブロモ、炭素原子数１〜４個のアルコキシ、 フェニル、並びにヒドロキシ、炭素原子数１〜４個のアルキル、炭素原子数１〜 ４個のアルコキシ、クロロ、ブロモ及びサルフェートよりなる群から選択される １〜３個の置換基で置換されたフェニルよりなる群から選択される１個又は２個 以上の置換基で置換されている炭素原子数１〜４個のアルキル よりなる群から選択され、そして ｐは０又は１に等しい整数であり。

Ｒ１は水素、−Ｎｓ、−ＮＨ，、−ＮＨ３Ｏ，Ｈｌ−ＮＲ＋ｓＣ（０）ＲＩＢ、 　Ｎ　＝　Ｃ（Ｒ１４）−１−ＮＨＣＨ（Ｒ，、）２、　Ｎ（Ｒｌｉ）ｚ、−０ （Ｃ（０））　、Ｒ，、、フルオロ、クロロ、ブロモ及びサルフェートよりなる 群から選択され、ただし 場合によってヒドロキシ、クロロ、ブロモ及び炭素原子数１〜４個のアルコキシ よりなる群から選択される１個又は２個以上の置換基で置換されている炭素原子 数１〜４個のアルキル、 アミノ酸残基又はポリペブチジル残基、ＯＲ＋□（ただし、Ｒ１□は炭素原子数 １〜４個のアルキル、又はヒドロキシ基で置換された炭素原子数２〜４個のアル キルである）、及び Ｎ　Ｒ＋ｓＲ＋９（ただし、ＲＩＢ及びＲ１１は独立に水素及び炭素原子数１〜 ４個のアルキルよりなる群から選択される） よりなる群から選択され、 各ＲＩ４は独立に水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択さ れ、 各Ｒ＋ｓは独立に水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択さ れ、 ＲＩＢは 場合によってヒドロキシ、クロロ、ブロモ及び炭素原子数１〜４個のアルコキシ よりなる群から選択される１個又は２個以上の置換基で置換されている炭素原子 数１〜４個のアルキル よりなる群から選択され、そして ｑは０又はｌに等しい整数であり： Ｒ８は水素、フルオロ及びヒドロキシよりなる群から選択され。

Ｒ４はシアリルであり： Ｒ６はし一フコシルであり；そして ＹはＯ，Ｓ、−ＮＨ−及び結合よりなる群から選択され； ただし、Ｒ１がヒドロキシルであり、かっＲ２が−ＮＨＣ（０）ＣＨ２であると き、Ｒ３はヒドロキシルではなく、また Ｒ、及びＲ２がヒドロキシルであるとき、Ｒ８はヒドロキシルではない。

式Ｉにおいて、Ｒ１はヒドロキシル、炭素原子数１〜４個のアルコキシ、クロロ 、ブロモ又はフルオロであるのか好ましい。Ｒ７は−ＮＨ２、ＮＨＣ（０）Ｒ＋ ）又は−Ｎ２であるのが好ましい。Ｒ２はヒドロキシルであるのが好ましい。

式Ｉの化合物は細胞性免疫炎症応答を変調するときに特に有用である。

本発明は、その組成面のもう１つの態様において、製剤上不活性なキャリアー及 び有効量の式Ｉの化合物を含んで成る、哺乳動物（例えば、ヒト）に投与してそ の哺乳動物における細胞性免疫応答を変調するのに適した製剤組成物に関する。

Ｒがキャリアーに結合することができるアグリコンであるとき、式Ｉの化合物は 人工抗原を製造する際にも有用である。従って、本発明は、その組成面の更にも う１つの態様において、抗原性キャリアーに結合することができるアグリコン部 分を含有する式Ｉの化合物から製造される人工抗原に関する。

本発明は、その組成面の更にもう１つの態様において、式Ｉの化合物の製造にお いて有用な新規な中間体に関する。

本発明は、その方法面の１つの態様において、細胞性免疫応答を変調するときに 存効な量の式Ｉの化合物を哺乳動物に投与することから成る、その哺乳動物にお ける細胞性免疫応答を変調する方法に関する。

本発明は、その方法面のもう１つの態様において、次の （ａ）式（］ （式中、Ｒ，Ｒ，、Ｒ，、Ｒ，及びＹは前記で定義された通りである。） の化合物を選択し。

（ｂ）前記化合物をそのガラクトース部分の３位においてβＧａ　１　（１−３ ／　４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃ　ａ　（２→３）シアリルトランスフェラーゼによ りシアリル化してガラクトース単位の３−位においてシアリル残基をα（２→３ ）シアリル結合に入れ：そして（Ｃ）工程（ｂ）で製造された化合物をＮ−アセ チルグルコサミン部分の３位においてβＧａ１（１→３／４）βＧｌｃＮＡｃ　 α（ｌ→３／４）フコシルトランスフェラーセによりフコシル化してＮ−アセチ ルグルコサミン単位上の３−位においてフルコシル残基をα（ｌ→３）結合に入 れる 工程から成る、式Ｉの化合物の製造法に関する。

図面の簡単な説明 図１はＮ−アセチルグルコサミン単位の２−位に置換基を存するシアリルルイス ”類似体（化合物１２ｂ−ｄ）のシアリルルイス８　（化合物ｌ）及びそのシア リルルイス１類似体を製造する際に使用される中間体（化合物１１ｂ−ｄ）の構 造を説明ものである。

図２はＡｃがアセチルを表し、Ｂｎがベンジルを表し、そしてＲが−（ＣＨ２） 、Ｃｏ、ＣＨ，を表す図１に記載されるシアリルルイス１類似体（１２ｂ−ｄ） の化学−酵素的合成の一般反応式を説明するものである。

図３はＮ−アセチルグルコサミン単位のＣ−２及び／又はＣ−６位において変性 されたシアリルルイス３類似体のもう１つ別の化学−酵素的合成を説明するもの である。

図４及び５はシアリルルイス゛類似体を製造するときに使用される出発物質の合 成の一般反応式を説明するものである。

図６はＮ−アセチルグルコサミン単位のＣ−６位において変性されたシアリルル イス１類似体の化学−酵素的合成の一般反応式を説明するものである。

図７はＮ−アセチルグルコサミン単位のＣ−２位において変性されたシアリルル イス８類似体の全化学合成の一般反応式を説明するものである。

図８はＧ１ｃＮＡｃサツカリド単位の６−アジド誘導体を製造するための一般反 応式を説明するものである。

図９は６−アルコキシ誘導体をＧｌｃＮＡｃサツカリド単位の６−位に導入する ための一般反応式を説明する上記のように、本発明は、一部は、哺乳動物におい て細胞性免疫応答の生体内変調に有用な新規なシアリルルイス１類似体の発見に 関する。更に、適切なアグリコンを採用すると、これらのシアリルルイス８類似 体はシアリルルイス８に対してモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体を生 成させる人工抗原を製造するのにも使用することができる。

本発明は、更に、一部は、シアリルルイス１類似体の新規な合成法に関する。

しかし、本発明を更に詳細に検討する前に、まず次の用語についてその定義を与 えることとする。

定義 本明細書において使用されている次の用語は以下に与えられる定義を有する： “哺乳動物における抗原に対する細胞性免疫応答”なる用語は、細胞−細胞間相 互作用によって仲介されるそのような哺乳動物の免疫応答を意味する。この用語 にはＤＴＨ応答等の対抗原−細胞性炎症応答のみならず、心筋梗塞形成、ウィル ス誘発肺炎、ショック及び後遺症（例えば、多発性器官不全）、成人の呼吸困難 症候群、乾癖、関節炎等に由来する細胞性炎症応答が含まれる。

細胞性免疫応答は白血球仲介応答であるのが好ましい。

“シアリルルイス１“　（場合によっては、“ＳＬｅ””と称される）なる用語 は、次の構造：を有するテトラサツカリドを意味する。シアリルルイス１の芯体 であるβＧａ１（１−”４）βＧＩｃＮＡｃ構造は、血液型決定因子に対するそ の関係の故に、“タイプ１１構造”と称されることが多い。

“オリゴサツカリド”なる用語は、２〜約ｌθ個のサツカリド単位を有する炭水 化物構造を意味する。採用される個々のサツカリド単位は重要ではなく、例とし て挙げると、グルコース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセ チルガラクトサミン、フコース、シアル酸、３−デオキシ−Ｄ、Ｌ−オクッロソ ン酸等の天然及び合成の全誘導体かある。

本明細書に記載される全てのサツカリド単位は、それらのピラノース体として存 在していることに加えて、Ｌ体として存在しているフコースを除けば、それらの ０体としても？’Ｆ在している。

”シアル酸”又は“シアリル”なる用語は、ＣＭＰ−誘導体としてβＧａ１（１ −３／４）βＧ］ｃＮＡｃα（２→３）シアリルトランスフエラーゼと適合性が ある、シアル酸及びその類似体の全天然構造を意味する。

これに関して、ＣＭＰ−誘導体としてこのシアリルトランスフエララーゼを結合 させるようにこの酵素によって認識され、次いて前記式ＩＩの化合物への転移に 利用できるようになるものであれば、いかなるシアル酸もシアリルトランスフエ ララーゼと適合性があると言われる。

シアル酸の天然産構造には、例として挙げると、５−アセトアミド−３，５−ジ デオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−がラクト−ノヌロピラノシロン酸（“Ｎｅｕ５Ａ ｃ“）、Ｎ−グリコリルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ｇｃ）及び９−０−アセチルノ イラミン酸（Ｎｅｕ５，９ＡＣｘ）がある。

今日まで知られている天然産シアル酸の完全なリストはシャウアーによって与え られている３゜シアル酸の類似体とは、シアル酸の天然産構造の類似体を意味し 、これにはシアル酸単位が１個又は２個以上の官能基をそのような構造に導入し 、及び／又はそのような構造から除去するように化学的に変性されたものが含ま れる。例えば、そのような変性は−ＯＨ官能基の除去、アミン官能基の導入、ハ ロ官能基の導入等をもたらすことが可能である。

シアル酸のある種特定の類似体はこの技術分野で公知であって、例としては９− アジド−Ｎｅｕ５Ａｃ、９−アミツーＮｅｕ５Ａｃ、９−デオキシ−Ｎｅｕ５Ａ ｃ。

９−フルオロ−Ｎｅｕ５Ａｃ、９−ブロモ−Ｎｅｕ５Ａｃ、７−ゾオキシーＮｅ ｕ５Ａｃ１７−ニピーＮｅｕ５Ａｃ、７，８−ビス−エピ−Ｎｅｕ５Ａｃ、４− ０−メチルーＮｅｕ５Ａｃ、４−Ｎ−アセチル−Ｎｅｕ５Ａｃ。

４，７−シーゾオキシーＮｅｕ５Ａｃ、４−才キソーＮｅｕ５Ａｃ並びにＮｅｕ ５Ａｃの６−チオ類似体がある。

シアル酸の類似体を記述するときに本明細書で採用された命名法はロイター等が 記載する通りである３３゜シアル酸のＣＭＰ−ヌクレオチド誘導体は、天然産シ アル酸又はその類似体のシチジン−５゛　−モノホスフェート誘導体を意味する 。シアル酸がＮｅｕ５Ａｃである場合、ＣＭＰ誘導体は式： “フコース”又は“フコシル”なる用語は、ＧＤＰ−誘導体としてβＧａ１（１ →３／４）βＧＩｃＮＡｃα（ｌ→３／４）フコシルトランスフェラーゼと適合 性があるし一フコース及びその類似体ｓ５を意味する。以下に記されるように、 このフコシルトランスフェラーゼはヒトの乳から容易に単離される２２゜更に、 これらのフコース又はフコシル化合物は適切な特異性を有する他のフコシルトラ ンスフェラーゼ、例えばクローンされたフコシルトランスフェラーゼと適合性が あると考えられる上記の点に関して、ＧＤＰ−誘導体として、βＧａ１（１→３ ／４）βＧ１ｃＮＡｃ　α（ｌ→３／４）フコシルトランスフェラーゼに結合さ せるようにこの酵素によって認識され、次いで式ＩＩＩ　： （式中、Ｒ４はシアリル又は水素である。）の化合物への転移に利用できるよう になるものであれば、いかなるフコース化合物もこのフコシルトランスフェラー ゼと適合性があると言われる。

フコースの類似体とはフコースの天然産及び合成の類似体を意味し、それにはフ コース単位が１個又は２個以上の官能基をこの構造に導入し、及び／又はその構 造から除去するように化学的に変性されたものが含まれる。

例えば、そのような変性は−ＯＨ官能基の除去、アミン官能基の導入、ハロ官能 基の導入等をもたらすことが可能である。

フコースのある種特定の適合性類似体はこの技術分野で公知であって、例として は３−デオキシ−フコース、アラビノース等がある５５゜ フコースのＧＤＰ−誘導体は式： を有するグアノシン　５′−（β−Ｌ−フコピラノシル）ジホスフェート及びそ の何等かのそして全ての適合性塩を意味する。ＧＤＰ−フコースの製造法はこの 技術分野で公知である。しかし、ＧＤＰ−フコースは、ジアング等３４が本明細 書で全体が引用、参照される米国特許出願第０７／８４８．２２３号明細書に記 載する方法で製造するのが好ましい。

グアノシン　５°　−（β−Ｌ−フコピラノシル）ジホスフェートについて使用 される通り、“適合性塩″なる用語は、対イオン（即ち、カチオン）を容易に形 成し、かつ意図した反応及び／又は精製に適合性があるグアノシン　５′　−（ β−Ｌ−フコピラノシル）ジホスフェートのそのような塩を意味する。適当な適 合性の塩に、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、ア ンモニウム、モノ−、ジー、トリー又はテトラ−アルキルアンモニウム、鉄、亜 鉛等のような対イオンから製造されたものがある。

“アミノ酸残基又はポリペブチジル残基”なる用語１よ、適切な形のアミノ酸又 はポリペプチドを式Ｉのオリゴサツカリドグリコシドと、又は図１のオリゴサツ カリドグリコンドを製造するのに用いられ、そしてそのＧｌｃＮＡｃ単位の２− 又は６−位にアミン官能基（ＮＨ２）を存する中間体と、そのアミンが上記アミ ノ酸又はポリペプチド上のカルボキシル基又は活性化されたカルボキシル基と反 応してアミド結合を形成する条件下で反応させることによって得られる生成物を 意味する。使用される個々のアミノ酸又はポリペプチドは重要ではない。しかし 、好ましい態様において、ポリペプチドは約２〜約５個、好ましくは約２〜３個 のアミノ酸を含有するものである。

“製剤上許容し得る塩”なる用語には、この技術分野で周知である種々の有機及 び無機の対温から誘導される、式Ｉの化合物の製剤上許容し得る付加塩が包含さ れ、それには、例として示すだけであるが、ナトリウム、カリウム、カルシウム 、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウム等がある。

“除去可能な１１鎖基（ｂｌｏｃｋｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ）　”なる用語は、ガラ クトース、Ｎ−アセチルグルコサミンの１個又は２個以上のヒドロキシル基に結 合されると、シアリルルイス８部分のシアル酸（カルボン酸部分のヒドロキシル 基を含む）東位及び／叉はフコース単位がこれらのヒドロキシル基において反応 か起こるのを妨げ、そして保護基が慣用の化学的工程又は酵素的工程で除去され てヒドロキシル基を再生することができる任意の基を意味する。

採用される個々の除去可能な封鎖基は重要ではなく、そして好ましい除去可能な ヒドロキシル封鎖基は通常の置換基、例えばヘンジル、アセチル、クロロアセチ ル、ベンジリジン、ｔ−ブチルジフェニルシリル及びヒドロキシル官能基に酵素 的にか、又は化学的に導入可能で、かつ後に生成物の性質に適合した温和な条件 下で酵素的方法又は化学的方法で選択的に除去可能な他の任意の基を包含する。

１つのそのような追加の意図された封鎖基はα−ガラクトンダーセで酵素的に除 去することができるα−ガラクトースである。

“少なくとも１個の炭素原子を有するアグリコン”なる用８ｈは、少なくとも１ 個の炭素原子を有する非サツカリド含有残基を意味する。アグリコンは−（Ａ） −Ｚより成る群から選択される。ただし、上記式中のＡは結合、炭素原子数２〜 １０個のアルキレン基及び−（ＣＨ２−ＣＲ２０Ｇ　）−−なる形の部分（たた し、ｎは１〜５に等しい整数であり、Ｒ２ｏは水素、メチル又はエチルより成る 群から選択され、そしてＧは水素、ハロゲン、酸素、硫黄、窒素、フェニル、並 びにアミン、ヒドロキシル、ハロ、炭素原子数１〜４個のアルキル及び炭素原子 数１〜４個のアルコキシより成る群から選択される１〜３個の置換基で置換され たフェニルより成る群から選択される）を表し、そしてＺは水素、メチルフェニ ル及びニトロフェニルより成る群から選択され、またＧが酸素、硫黄又は窒素で はなく、かつＡが結合ではないとき、Ｚは一０Ｈ１−３Ｈ１−ＮＨ２、−ＮＨＲ ，□、　Ｎ（Ｒ２１Ｌ、−Ｃ（０）ＯＨ１−Ｃ（０）　０Ｒ２１、−Ｃ（０）Ｎ Ｈ−ＮＨ２、−Ｃ（０）ＮＨ２，−Ｃ（０）ＮＨＲ２，、−Ｃ（０）　Ｎ　（Ｒ ２，）２及び−０Ｒ２□（ただし、各Ｒ２１は独立に炭素原子数１〜４個のアル キルであり、そしてＲ７２は炭素原子数３〜１０個のアルケニル基である）より 成る群からも選択される。

アルファーンアリル化されたオリゴサツカリドグリコントを人工コンンユゲ−１ ・の製造に用いると、アグリコン、即ちＲはキャリアーに結合させることができ る基のＲ２３となる。Ｒ２３は、好ましくは、−（Ａ）　−Ｚ’　より成る群か ら選択される。ただし、上記式中のＡは炭素原子数２〜ＩＯ個のアルキレン基及 び−（ＣＨ２−ＣＲ，４Ｇ）。−なる形の部分（ただし、ｎは１〜５に等しい整 数であり、Ｒ２４は水素、メチル又はエチルより成る群から選択され、モしてＧ は水素、酸素、硫黄、窒素、フェニル、並びにアミン、ヒドロキシル、ハロ、炭 素原子数１〜４個のアルキル及び炭素原子数１〜４個のアルコキシより成る群か ら選択される１〜３個の置換基で置換されたフェニルより成る群から選択される ）より成る群から選択され、そしてＺｏは水素及びニトロフェニルより成る群か ら選択され、またＧが酸素、硫黄又は窒素でないとき、Ｚｏ　は−０Ｈ１−３Ｈ １−ＮＨ２、−ＮＨＲ，、、−Ｃ（０）ＯＨ１−Ｃ（０）　０Ｒｔｓ、−Ｃ（０ ）ＮＨＮ１１□及び−ＯＲ２ｇ（たたし、各Ｒ２，は独立に炭素原子数１〜４個 のアルキルであり、そしてＲ２，は炭素原子数３〜ＩＯ個のアルケニル基である ）より成る群からも選択され、たたしＡが結合であるとき、Ｚｏは水素ではない 。

このような場合、基−（Ａ）−Ｚ’　はキャリアーに結合させることかできる基 を表すか、又はキャリアーに結合させることかできる基に誘導体化することかで きる基である。適切なキャリアーを選択することが免疫原性特性を高めるときに 有用である。

無数のアグリコンかこの技術分野で知られている。例えは、パラーニｌ−ロフェ ニル基を含む結合腕（即ち、−ＹＲ−−ＱＣ，Ｈ４ｐＮＯ２）かエフバーブ等に よって明らかにされている１１゜合成中の適切な時間に、そのニトロ基はＮ−） リフルオロアセトアミドとして保護することかできるアミノ基に還元される。支 持体にカップリングさせる前に、そのトリフルオロアセトアミされ、それによっ てマスクが取れてアミノ基が現れる。

硫黄を含有する結合腕はダーメン等によって明らかにされているＩ２。１体的に 述へると、この結合腕は、請求核基との置換反応において種々の末端官能基、例 えば−ＯＣＨ２（ｌ（２ＳＣＨ２Ｃｏ２ＣＨ．及び−ＯＣＨ。

ＣＨ２　ＳＣ６　Ｈｌ−１）ＮＨ２を有する結合腕をもたらすことが示されてい る２−ブロモエチル基から誘導される。

ラナ等ｓ３はトリフルオロアセトアミド保護基を除去するとマスクが取れてカッ プリングに使用される第一アミノ基を現出させることかできる６−ドリフルオロ アセトアミトーヘキシル結合腕（　０　（ＣＨ２）＠　ＮＨＣＯＣＦ．）を開示 している。

公知の結合腕の他の例を挙げるど、７−メドキシカルポニルー３．６−ジオキサ へブチル結合腕８４（−０ＣＨ２−ＣＨ２）２　０ＣＨ２Ｃｏ．ＣＨ．）；　２ −（４−メトキシ力ルポニルブタンカルポキサミト）エチルｓ５（−０ＣＨ２Ｃ Ｈ２ＮＨＣ　（０）（ＣＨ２）４　ＣｏｔＣＨａ）；適切なモノマーとのラジカ ル共重合によってコポリマーをもたらすアリル結合腕”（ＯＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２ ）＋［−０　（ＣＨ２　ＣＨ２　０）２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２　］として知られる 他のアリル結合腕Ｉ７かある。更に、アリル結合腕は２−アミノエタンチオール の存在下で誘導体化して１結合腕−ＯＣＨ２　ＣＨｚ　ＣＨ２　ＳＣＨ．ＣＨ。

ＮＨ２を与えることができる。

更に、ラトクリッフエ等２３によって示されるように、基Ｒは還元性の糖末端基 の所に結合腕を有する追加のサツカリド又はオリゴサツカリドであることができ る。

アグリコン部分は、好ましくは、疎水性基であり、そして最も好ましくは−（Ｃ Ｈ．）ｓ　ＣＯＯＣＨ．　、−（ＣＨ２）、ＯＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２及び−（ＣＨ ２）。

ＣＨ２０Ｈより成る群から選択される疎水性基である。

特に、疎水性基、最も特別には基−（ＣＨ，）、ＣＯＯＣＨ３又は−（ＣＨ，） ａ　０ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ，又は−（ＣＨ２）、ＣＨ，ＯＨの使用がこのシアリル トランスフェラーゼによりシアル酸を転移させるために受容体特性をある程度向 上させることができる。

キャリアーは、蛍光標識、放射性標識、ビオチン又は光可変性結合腕或いは被標 的部分に対する結合を含む低分子量又は高分子量の非免疫原性又は抗原性のキャ リアーである。キャリアーは抗原性キャリアーである方が好ましく、従って人工 コンジュゲートは人工抗原である。

場合によっては、非免疫原性キャリアーを用いるのが有利である。

他方、キャリアーは低分子量キャリアー、例えばエチレンジアミン、ヘキサメチ レンジアミン、トリス（２−アミノエチル）アミン、Ｌ−リシルリシン、ポリー Ｌ−リシン及び様々の分子量を有するポリマーであることができる。

“抗原性キャリアー”なる用語は式■（ただし、Ｒ＝Ｒ２３）のオリゴサツカリ ドグリコシドのキャリアーに対する結合を可能にし、そして特定のキャリアーが 内因性でない動物に注射したとき抗原応答を生む１種又は２種以上の官能基を存 するキャリアーを意味する。このようなキャリアーは蛋白質［例えば、ウシの血 清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒトの血清アルブミン（Ｈ３Ａ）　、ジフテリア又は 破傷風のトキソイド、Ｓ一層等］であることができ、そして本明細書において、 これらキャリアーは、場合によって、“Ａｇ”なる略号で称される。

人工抗原を製造する際に使用するために選択される個々の抗原性キャリアーは、 もしキャリアーがそのようなオリゴサツカリドグリコシドのキャリアーに対する 結合を可能にする１種又は２種以上の官能基を含有するか、又は含有するように 誘導体化することができるならば、重要ではない。適当な官能基に、例としてで あるが、カルホン酸基、アミン基（第一アミン及び第二アミンを含む）、ヒドロ キシル基、チオ基等がある。このような官能基は一般に抗原性キャリアー上に見 いだされ（例えば、蛋白質は無数のそのような官能基を存する）、及び／又はそ のようなキャリアーにこの技術分野で認められている方法で導入することができ る。

式Ｉのオリゴサツカリドグルコシドの１種又は２種以上の抗原性キャリアーに対 するカップリングで本明細書において“人工抗原”と記載される生成物がもたら される。これは、この人工抗原が動物に注射されると１種又は２種以上の天然産 オリゴサツカリドグルコシドの決定因子を有することとなるからである。こうし て製造される人工抗原は式。

［オリゴサツカリド−Ｙ　Ｒｚ＊］−Ａｇて表すのが好ましい。たたし、式中の オリゴサツカリド−Ｙは前記式Ｉの化合物（ただし、ＲはＲｏである）を表し、 Ａｇは上記定義の通りであり、そしてｐは少なくともｌに等しい整数である。こ の態様において、人工抗原Ａｇはアグリコン基、即ち基Ｒ２３上の相補性官能基 にカンブリングする抗原上の官能基を介してオリゴサツカリドグルコシドに結合 されている。

“抗体“なる用語は表面上に、又は他の分子に特定的に結合し、そのためにその 分子の特定の空間的及び極性上の組織と相補性であると定義されるキャビティー の中に１つの領域を有する免疫グロブリン又はその誘導体を意味する。抗体はモ ノクローナル抗体であってもよいし、ポリクローナル抗体であってもよく、そし てこれはこの技術分野で周知の方法で、例えば宿主の免疫化及び血清の採集又は 雑種細胞系統技術て製造することができる。

これに関して、上記の人工抗原は、シアリルルイス′決定因子を含めて抗原上の 抗原決定因子を認識し、かつそれに相補性であり、しかも天然物質と交叉反応す る抗体を生成させるときに有用である。

“天然物質”なる用語は、物質が１種又は２種以上のシアリルルイス８類似体を 含有し、かつ物質が病気に罹っている哺乳動物において非免疫原性であるか、又 は弱い免疫原性である、定義された病状と関連している天然産物質（例えは、腫 瘍関連炭水化物抗原）を意味する。

Ｂ　方法論 前記のように、本発明は、一部は、抗原に対する細胞性免疫応答を変調すること と、抗体生成用の人工抗原を提供することの両者において有用なシアリルルイス °の新規な類似体に関する。シアリルルイス８のこれらの新規な類似体は図面に 記載される種々の合成経路で製造することができる。

１つの好ましい態様において、式Ｉに記載されるシアリルルイス８の類似体はＮ −アセチルグルコサミン単位の２−及び／又は６−位において、及び／又はガラ クトース単位の２−位において誘導体化されたβＧａ１（１→４）βＧｌｃＮＡ ｃ−ＯＲ骨格をまず合成することによって製造される。この骨格は次にβＧａ１ （１→３／４）βＧＩｃＮＡｃ　α（２→３）シアリルトランスフェラーゼ及び βＧａ　Ｉ　（１−”３／４）βＧＩｃＮＡｃα（ｌ→３／４）フコンルトラン スフェラーゼを用いて逐次的にシアリル化及びフコシル化される。

このようなシアリルトランスフェラーゼ及びフコシルトランスフエラーセの使用 はシアリル基及び／又はフコシル基の上に変性を有するものを含めてシアリルル イス１類似体を容易に合成させる。例えば、これらのトランスフェラーゼを使用 すると、Ｎｅｕ５Ａｃ又はその類似体の骨格構造への転移のみならず、フコース 及びその類縁体のこの骨格構造への転移も可能となる。

しかし、全化学的合成に頼る方法や一部だけ酵素的合成に頼る方法を含めてこれ ら化合物を製造する別法かある。今度は、シアリルルイス０類似体又はその中間 体の製造のための図２〜９に示される一般反応式を更に詳細に議論する。

シアリルルイス６類似体が人工抗原を製造するために使用されるべき場合、これ らの類似体を抗原キャリアーにカップリングさせ、次いで適切な動物に注射して 抗体を生成させる。

Ｂ１．Ｎ−アセチルグルコサミンのＣ−２又はＣ−６位において変性されている シアリル ルイス８テトラサツカリドの化学−酵素的合成図２に示されるトリサツカリド４ は公知の化合物であって、ラトクリッフェ等によって明らかにされている３ｓ０ この化合物を次にこの技術分野で周知の慣用工程で誘導体化して図１に記載され るトリサツカリドｌｌｂ、１１Ｃ及びｌｉｄを与える。

具体的に述へると、トリサツカリド４のベンジルエステル（−ＣＯＯＢｎ）の、 炭素担持５％パラジウム（Ｐｄ／Ｃ）の存在下、酢酸エチル（ＣＨ＝　ＣＯ２Ｃ ２Ｈｓ　）中ての大気圧における水素化（Ｒ２）とそれに続くメタノール中ナト リウムメトキシド（ＣＨｓ　ＯＮａ、ＣＨｓ　ＯＨ）による脱０−アセチル化で トリサツカリドＩｌｂが得られた。２−アジド基を不変のままにして置（ために この第一工程では溶剤として酢酸エチルの使用が推奨される。この工程では非常 に少量の、慣用の分離技術（例えば、クロマトグラフィー）で分離することがで きる不純物しか形成されない。

別に、トリサツカリド４の２−アシド基の、ピリジン、水及びトリエチルアミン の混合物中ての硫化水素（Ｈ，Ｓ）による還元で２−アミノトリサツカリド９が 得られた。上記ベンジルエステル（−ＣＯＯＢｎ）の還元とそれに続く脱０−ア セチル化（上記）でトリサツカリドｌｌｃがもたらされる。

トリサツカリドｌｉｄはまずトリサツカリド９のＮ−プロピオニル化をメタノー ル（ＣＨ，ＯＨ）で無水プロピオン酸［（ＣＨＩ　ＧＨ，Ｃｏ）ｔｏ］を使用し て実施し、トリサツカリドｌＯを与えることによって製造される。

トリサツカリドＩＯには慣用の分離技術（例えば、クロマトグラフィー）で分離 することができる少量の対応する３−０−プロピオニル化物質が随伴していた。

前記のようにアシル保護基及びベンジル保護基を除去すると、トリサツカリドｌ ｉｄが得られた。

トリサツカリドＩｌｃも−ＮＨＣ（０）Ｒ＋ｉ、−ＮＨ３Ｏ３Ｈｌ　Ｎ　＝　Ｃ （Ｒ１４）！、　Ｎ　ＨＣＨ（Ｒ１４）！、−Ｎ（Ｒ１６）！及びアミノ酸残基 誘導体又はポリペブチジル残基誘導体を与える常用の方法で誘導体化することが できる。例えば、−ＮＨ，基は慣用技術を用いて次の化合物と反応させることが できるニ ーカルホン酸、酸無水物又は酸クロリド；これは前記基−ＮＲ２との反応てアミ ドを与える（例えば、トリサツカリド７ｄのプロピオン酸アミドの形成による） ；別法として、所望とされる酸を、イナズ等が報告するように７２活性化し、次 いてアミノ基と反応させることができる；このカルボン酸、酸無水物、酸クロリ ド又は活性化された酸は水素、又は場合によってヒドロキシ、クロロ、ブロモ及 び炭素原子数１〜４個のアルコキシより成る群から選択される１種又は２種以上 の置換基（好ましくは１種又は２種の置換基）で置換された炭素原子数１〜４個 のアルキルである基Ｒ１３（即ち、置換基−ＮＨＣ（０）Ｒ１３の一部としての 基）を与えるように選択される。

一ボダンスツキー等によって報告されている７１、酸基の所で活性化されている 適当な形のアミノ酸部分又はポリペプチド部分。

一アルデヒド又はケトン（炭素原子数１〜４個）：これらは前記基−ＮＲ２との 制御されたｐＨにおける反応で、還元すると（例えは、シアノ硼水素化ナトリウ ムにより）ハーノータス等が報告する７３アルキルアミン置換基［即ち、−ＮＨ ＣＨ（Ｒ，、）２］を与えるイミン［−Ｎ二Ｃ（Ｒ，、）２］を形成する； 一つオーレンハーグ等７３によって米国特許第４，６１２．１３２号明細書に報 告される、前記アミンと反応すると開環して、アルキレンが炭素原子数２〜４個 のものであるＨＯ−アルキレン−〇Ｃ（０）ＮＨ−置換基を有するカルバメート 基を形成するエチレンカーボネート又はブロビレンカーホネートのような環式カ ーボネート；−クロロホルメート（即ぢ、ＣＩ　Ｃ（０）　ＯＲ＋、）　：これ は、グレーグ等によって開示されるように６９反応せしめられる。この場合、ク ロロホルメートは炭素原子数１〜４個のアルキルである基Ｒ１７を有するニー活 性化された中間体をもたらＯ＝Ｃ（ＯＣ＠　Ｈ４−１）Ｎｏ□）２　、その中間 体は、ビーカルスカーパートフセヒッツ等が記載するように７０、次いでアミン （ＨＮＲ、、Ｒ、、）と反応して尿素［−ＮＨＣ（０）Ｎ　Ｒ＋＋Ｒ＋＊］を与 える； −トリメチルアミン、三酸化硫黄（Ｓｏ、）；これらは前記アミンと、ペチトー ７６が記載するように基−ＮＨＳＯ３Ｈを形成するように反応せしめられる；及 び 一誘導体化された蟻酸又はその他の物質、これらは前記アミンとの反応によって ホルムアミド（−ＮＨ−ＣＨＯ）７４を形成し、これは更にイソシアノ（−Ｎ＝ Ｃ＝０）に官能化され、そして水素化トリブチル錫（Ｂ　ｕ　ｔＳｎＨ）７４に よりデオキシ誘導体に還元される。

トリサツカリドｆｌｂ、Ｉｌｃ及びｌｉｄ並びにそれらトリサツカリドに由来す る誘導体は次にその適切なトリサツカリドをβＧａ１（１→３／４）βＧＩｃＮ Ａｃα（１−３／４）フコシルトランスフェラーゼとＧＤＰ−フコースの存在下 で、シアリルルイス１の類似体であるテトラサツカリド１２ｂ、１２ｃ及び１２ ｄを与えるように接触させることによってフコシル化される。

図３は適切に誘導体化されたβＱａｌ（１→４）βＧｌｃＮＡｃ構造からこの構 造の逐次酵素的シアリル化とフコシル化によって本発明のシアリルルイス１類似 体を製造する一般反応式を説明するものである。図３はＮ−アセチルグルコサミ ン（Ｇ　Ｉ　ｃＮＡｃ）構造の２−又は６−位における変性を説明しているだけ である。しかし、これらの変性はＮ−アセチルグルコサミンの２−及び６−位の 両位置において変性させるべ（組み合わせ得ることが分かる。図３はガラクトー スの２−位にあるヒドロキシル基だけを説明しているが、この位置は水素又はフ ルオロで置換されていてもよいことも更に分かる。このような置換ガラクトース 化合物はこの技術分野で公知である。これらガラクトース化合物の図３に示され る諸反応での置換はシアリルルイス８類似体にこれら変性ガラクトース単位をも たらす。

酵素的シアリル化 図３において、シアリル化はβＧａ１（１→３／４）βＧ］ｃＮＡｃ　α（２→ ３）シアリルトランスフェラーゼ［即ち、βＧａ１（１→３／４）βＧ１ｃＮＡ ｃα（２−３）ＳＴ］の使用によって達成される。α−シアル（２−３）βＧａ ｌを形成するガラクトースの３−位へのシアル酸の酵素的転移はそのヌクレオチ ド（ＣＭＰ）誘導体・＼の前合成（即ち、活性化）を必要とする。

シアル酸の活性化は、通常、容易に入手てきる酵素ＣＭＰ−ノアル酸シンターセ を使用することによって行われ、そして文献はシアル酸の種々の類似体、例えば ９−置換Ｎｅｕ５Ａｃ３６３７３ｓ”　、７−ニビーＮｅｕ５Ａｃ”、７．８− ヒス−エピ−Ｎｅｕ５Ａｃ４ｔ、４−０−メチル−Ｎｅｕ５Ａｃ４２．４−デオ キシ−Ｎｅｕ５Ａｃ”、４−アセトアミド−Ｎｅｕ５Ａｃ”、７−ジオキシ−Ｎ ｅｕ５Ａｃ”、４．７−シブオキシ−Ｎｅｕ５Ａｃ４０、Ｎｅ　ｕ　５Ａｃの６ −千オ誘導体４′及びＮｅｕ５０Ｈ（ＫＤＮ）の活性化の例を与えている。

得られたＣＭＰ−シアル酸類似体（これは図３においてＮｅｕ５ＡｃのＣＭＰ誘 導体、即ちＣＭＰ−Ｎｅｕ５Ａｃとして説明されている）は次にβＧａ１（１→ ３／４）βＧ１ｃＮＡｃ　α（２→３）シアリルトランスフェラーゼの存在下、 シアル酸がガラクトースの３−位に転移されてαＮｅｕ５Ａｃ　（２−＋３）β Ｇａｌ結合を形成する条件下で、誘導体化βＧａ１（１→４）βＧｌｃＮＡｃ− ＯＲ化合物と結合される。この技術分野で公知の適当な条件は、適切な緩衝液、 例えば０．１　Ｍナトリウム力コジレート（ｓｏｄｉｕｍ　ｃａｇｏｄｙｌａｔ ｅ）中、適切なｐＨと温度の条件、例えばｐ）１６．５〜７．５及び温度２５〜 ４５℃、好ましくは３５〜４０℃での上記誘導体化βＧａ１（１→４）βＧＩｃ ＮＡｃ−ＯＲ化合物と上記ＣＭＰ−シアル酸との混合物に対するシアリルトラン スフェラーゼの付加を含み、そのとき同時に１２時間乃至４日間のインキュベー ションか行われる。得られたシアリル化生成物はこれを単離し、ＨＰＬＣ、イオ ン交換−、ゲル−１逆相−又は吸着クロマトグラフィーから成る慣用の方法を用 いて精製することができる。

上記の点に関して、βＧａ１（１→３／４）βＧｌｃＮＡｃ　α（２→３）シア リルトランスフェラーゼにより、βＧａ１（１−”４）βＧＩｃＮＡｃｆｌ造の Ｇ１ｃＮＡｃ基の３−位におけるα−フコース基の置換はＮｅｕ５Ａｃの末端が ラクト−スへの転移を妨げることが示されている。他方、βＧａ１（１→４）β Ｇ１ｃＮＡｃ構造のＧ］ｃＮＡｃ基の６−位におけるサツカリドの置換はＮｅ　 ｕ　５Ａｃのこのシアリルトランスフェラーゼによる末端ガラクトースへの転移 を可能にすると報告されている１゜検定の諸反応において、ラットの肝臓からの 親和性精製されたβＧａ　Ｉ　（１→３／４）βＧ１ｃＮＡｃα（２→３）シア リルトランスフェラーゼは、シアル酸をβＧａ１（１−４）βＧ］ｃＮＡｃのＧ ＩｃＮＡｃ単位の２−位（Ｒ２）又は６−位（Ｒ３）において変性されたガラク トース（化合物２２ｂ、ｃ、ｄ　；　１５ｂ、ｇ）の３−位に効率的に転移させ ることがここに見いだされた。

これらの検定は実施例に記載されるが、これら検定反応の結果を以下の表１に示 す。

表Ｉ βＧａ　Ｉ　（１−３／４）βＧＩｃＮＡｃ　（２（２表Ｉに示されるデーター はＧ］ｃＮＡｃの２−又は６−位において変性されているβＧａ１（１→４）β ＧｌｃＮＡｃ−ＯＲ構造の誘導体はガラクトース単位の３−位においてシアル酸 を受容し、かつシアル酸基をガラクトースのα（２→３）位に入れるようにこの シアリルトランスフェラーゼにより活性化されることを示している。

二のデーターは更に、場合によってはシアル酸の変性βＧａｌ　（１−４）βＧ 　Ｉ　ｃ　Ｎ　Ａ　ｃ構造−＼の転移の相対速度は未変性の構造のそれよりも驚 くほど高いことを示している。

酵素的フコシル化 図３において、フコツル化はβＧａ１（１→３／４）βＧ１ｃＮＡｃ　α（ｌ→ ３／４）フコシルトランスフェラーゼ［即ち、βＧａ１（１−３／４）βＧｌｃ ＮＡＣα（ｌ→３／４）ＦＴ］の使用によって達成される。

ａＦｕｃ　（１−＋３）βＧｌｃＮＡｃを形成するＧＩｃＮＡｃの３−位へのフ コースの酵素的転移はそのヌクレオチド（ＧＤＰ）誘導体の前合成を必要とする 。ＧＤＰ−フコースの合成はジアング等が記載し３４、そして後記の実施例にお いて実証されるようにして達成するのが好ましい。

ＧＤＰ−フコース（ＧＤＰ−Ｆｕｃ）は次に、βＧａ１（１→３／４）βＧＩｃ ＮＡｃ　α（ｌ→３／４）フコシルトランスフェラーゼの存在下、フコースがシ アリル化されたβＧａｌ　（１→４）βＧ１ｃＮＡｃ−ＯＲ化合物のＧＩｃＮＡ ｃ単位の３−位に転移してβＧａ１（ｌ→４）βＧＩｃＮＡｃ骨格において誘導 体化されたαＮｅｕ５Ａｃ　（２−”３）βＧａｌ　（１→４）［ｃｒ’Ｆｕｃ （ｌ→３）］βＧＩｃＮＡｃ−ＯＲ化合物（シアル酸かαＮｅ　ｕ　５Ａｃであ る場合）を形成する条件下で、そのシアリル化βＧａ１（１→４）βＧＩｃＮＡ ｃ−ＯＲ化合物と結合せしめられる。この技術分野て公知の適当な条件は、適切 な緩衝液、例えば５０ｍＭカコジル酸ナトリウム中、適切なｐＨと温度の条件、 例えばｐＨ６，５及び温度３０〜４５°Ｃ１好ましくは３５〜４０°Ｃでの上記 誘導体化αＮｅｕ５Ａｃ　（２→３）βＧａ１（１→４）βＧｌ　ｃＮＡｃ−Ｏ Ｒ化合物（シアル酸がαＮｅｕ５Ａｃである場合）と上記ＧＤＰ−フコースとの 混合物に対するフコシルトランスフェラーゼの付加を含み、そのとき同時に１２ 時間乃至４日間のインキュベーションが行われる。得られたシアリル化及びフコ シル化された生成物はこれを単離し、ＨＰＬＣ、イオン交換−、ゲル−１逆相− 又は吸着−クロマトグラフィーを含む慣用の方法を用いて精製することができる 。

トリサツカリドｌ１ｂ−ｄの場合、これらトリサツカリドの予備フコシル化をパ ルシック等！２に従って行った。

生成物はその文献に記載されるように精製した。トリサツカリド１ｌｂ−ｄの構 造は３００　ＭＨｚでの’Ｈ−ｎ。

ｍ、ｒ、により（表！Ｉ）、また得られたシアリルルイス１化合物＋２ｂ−ｄの 構造は５００　ＭＨｚでの’Ｈ−ｎ。

ｍ、ｒ、により（表ＩＩ）以下の通り確認した。

ａＮｅｕ５Ａｃ　（２→３）　βＧａ１（１−４）　βＧ１ｃＮＡｃ−ＯＲ又は βＧａ１（１−”４）βＧ１ｃＮＡｃ−ＯＲのＮ−アセチルグルコサミンの２− 文は６−位の変性に起因して起こるＮ−アセチルグルコサミンの４−位における 酵素的フコシル化に対する効果を確認するために、化合物１１ａ、ｌｌｂ、ｌｌ ｃ及びｌｉｄ並びに化合物１５ｇのフコシル化の相対速度を分析した。これに関 して、化合物１５ｇはパルシック等の手法■に従って合成した。

ヒトの乳に由来するβＧａ１（１→３／４）βＧｌｃＮＡｃ　α（ｌ→３／４） フコシルトランスフェラーゼによるし一フコースの化合物１１ａ−ｄ及び１５ｇ への相対転移速度を２ｍＭの受容体濃度においてパルシック等２２に従って測定 した。これらの検定は実施例において説明されている。これら検定反応の結果を 以下の表ＩＩＩに要約して示す： 表１１１ ヒトの乳から単離されたフコシル 上記のデーターは、タイプＩＩ構造［βＧａ１（１→４）βＧ　ｌ　ｃＮＡｃ］ のＧｌｃＮＡｃの２−及び６−位における変性はβＧａ　］　（１−”３／４） βＧｌｃＮＡｃα（１→３／４）フコシルトランスフェラーゼ（こよって受け入 れられることを証明している。加えて、末端ガラクトースの６−位に遊離ヒドロ キシル基か必要なこと（よ以前から報告されている４７ｏシかし、Ｌ−フコース （よこのβ−ガラクトースの２−１３−及び４−位におけるＯＨか、例えは特定 の糖単位によって置換され、これらの位置に結合されている場合にタイプＩＩ構 造の誘導体（こ転移させることができる。このことは、このフコシルトランスフ ェラーゼを使用すると置換が末端β−ガラクトースの２−及び３−位、そして多 分４−位のヒドロキシルにおいて可能であることを示している。

更に、ＧｌｃＮＡｃのＣ−２位置において変性されたシアリル化トリサツカリド は対応するアシアロ（ａｓｉａｌｏ）−ジサッカリドよりこのフコシルトランス フェラーゼに対する蔦くほど良好な受容体である。

しかして、誘導体化されたβＧａＪ（１→４）βＧ１ｃＮＡｃ構造のＧ１ｃＮＡ ｃ単位の３−位へのし一フコースの転移に対してこのフコシルトランスフェラー ゼにより必要とされる三次元トポグラフィ−は（１）ガラクトース単位上には６ −ヒドロキシル基を、またＧｌｃＮＡｃ上には３−ヒドロキシル基を含むことで ある。βｃａｌ（１−３／４）βＧ］ｃＮＡｃ　（Ｚ（１−３／４）フコシルト ランスフェラーゼ又は他の起源に由来する同様のフコシルトランスフェラーゼの βＧａ１（１→４）βＧＩｃＮＡｃジサッカリドに対する特異性のこの知識は合 成目的に対する変化し易い酵素の作用性を劇的に高める。

従って、表１−１１１のデーターは、これらを合わせると、ＧｌｃＮＡｃの２− 及び／又は６−位において変性されたβＧａ１（１−”４）βＧ　１　ｃＮＡｃ −ＯＲへのシアル酸とＬ−フコースの逐次酵素的転移は、未変性の（天然）構造 の場合のように進行することを証明している。従って、βＧａ１（１−”４）β ＧＩｃＮＡｃのＧｌｃＮＡｃ単位の２−及び６−位における化学的変性はシアリ ルトランスフェラーゼ及びフコシルトランスフェラーゼの基質である化合物をも たらすだろう。

以下に示されるように、ＧＩｃＮＡｃ単位の２−及び／又は６−位において変性 されたシアリルルイス８類似体もこれら化合物の全化学的合成によって製造する ことができる。

図４はサツカリドモノマーを最初とする出発物質βｃａｌ（１→４）βＧ］ｃＮ Ａｃの特定のジサッカリド誘導体の化学合成を説明するものである。これに関し 、ガラクト−ス単位とＧＩｃＮＡｃ単位との化学的カップリングではβＧａ　Ｉ 　（１−＝３）βＧ１ｃＮＡｃ（タイプＩ骨烙）とβＧａ　Ｉ　（１→４）βＧ ＩｃＮＡｃ（タイプＩＩ骨格）の両者か形成され、この両者は慣用の精製技術（ 即ち、クロマトグラフィー）で分離することができる。

具体的に述へると、図４において、公知３６の２−アジド化合ｆｊＪ＋６はその ６−位において除去可能な保護基（即ち、Ｓ　ｌ　（Ｃｓ　Ｈ６）２　ｔ　Ｂ　 ｕ）て慣用技術ｆｆ６により保護される。この誘導体１７は次にガラクトースの 完全にアノル化された誘導体１８とトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホ ネート（ＴＭＳＯＴｆ）の存在下で結合せしめられる。その後、回収された生成 物を別個の工程でテトラヒドロフラン中において塩化アンモニウム（ＮＨ，ＣＩ ）、弗化カリウム（ＫＦ）を用いて処理する。この反応でβＧａ１（１−＝３） βＧＩｃＮｓ−ＯＲ誘導体及びβＧａ１（１−”４）βＧＩｃＮ＊　ＯＲ誘導体 １９及び２１の混合物が生成し、これら両誘導体をクロマトグラフィー等の慣用 の方法で分離する。

誘導体２１を次にナトリウムメトキシドのメタノール中混合物（ＣＨ＝　ＯＮ　 ａ　／　ＣＨ＊　ＯＨ）を用いて脱保護して誘導体２２ｂを得る。この誘導体２ ２ｂは、トリサツカリドｌｌｃ及びｌｌｄについて前記された同様の手法を遂行 すると、そのアミン誘導体２２ｃか又はそのプロピオネート（Ｐ　ｒ）誘導体２ ２ｄのいずれかに転化させることができる。

別法として、誘導体２１はこれを慣用技術でトシル化してＧＩｃＮｚ誘導体の６ −位にトシル基を与えることができる。このトシル誘導体は次に適切な核試薬を 使用する置換反応により６−ハロ置換基を形成するのに用いることかできる。誘 導体２１はビス−トリブチル錫オキシドの存在下でのハロゲン化アルキルによる アルキル化で６−アルコキシ置換基に転化させることができる。

更に、図４には示されないか、ツルンテツ等が記載する合成反応式７４と同様の 合成反応式を用いると、２−デオキシ（Ｒ，＝Ｈ）誘導体及び２−アルコキシグ ルコース誘導体か製造される。具体的に述へると、グルコースの公知の３．４． ６−）リアシル化１．２−オルトエステルを常用の条件下で脱アシル化してグル コースの１゜２−オルトエステルを得る。この化合物を次に慣用技術を用いてグ ルコースの３．４．６−１−リベンジル　ｌ。

２−オルトエステルに転化させる。得られた化合物のこのＩ、２−オルトエステ ルを次に慣用技術により開環させて、保護されたグリコジル供与体、例えばグル コースの１α−ブロモ−２−アセチル−３，４，６−１−リベンジル誘導体を得 る。このｌα−ブロモ誘導体を次に慣用技術でグリコシド（−ＯＲ）に転化させ 、次いでその２−アセチル基を除去する。この２−位は今や慣用法、例えばまず １当量の塩基の存在下で二硫化炭素及び沃化メチルで処理して−Ｃ（Ｓ）ＳＣＨ ，誘導体を形成し、続いて水素化トリブチル錫と反応させることによって封鎖さ れた２−デオキシを形成させることができるようになっているか、又は封鎖され た２−アルコキシを製造することができるようになっている。その封鎖基は慣用 技術で除去される。

図５は６−デオキシβＧａ　ｌ　（１−”４）Ｇｌ　ｃＮＡｃ−ＯＲ１即ち化合 物１５ｂ及び６−ブロモβＧａ１（１−４）Ｇ　］　ｃＮＡｃ−ＯＲ１即ち化合 物１５ａの合成を説明するものである。６−デオキシ化合物１５ｂは、除去可能 なヘンジイル封鎖基（Ｂｚ）で３−ヒドロキシ位において無水安息香酸とのピリ ジン中ての反応により保護されている、ベンジリデン環が封鎖された公知のサツ カリド（８−メトキシカルボニルオクチル　２−アセトアミド−４，６−０−ベ ンジリデン−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド）　６１から合成される 。上記化合物を四塩化炭素（ＣＣＶ、）中、６５°ＣにおいてＮ−ブロモスクシ ンイミド及び炭酸バリウムと反応させることによって更に転化させると、それは ３．４−ジベンゾイル−６−ブロモ−ＧＩｃＮＡｃ化合物となる。この化合物は 、順次、ＡＩＢＮ（アブビスイソブチロニトリル）の存在下、７０〜９０°Ｃに おけ６　（Ｃ４Ｈｓ）ｓ　ＳｎＨトｃ７）反応、続いてメタノール／ナトリウム メトキシドによる処理によって６−ジオキシ−ＧＩｃＮＡｃに転化せしめられる 。得られた６−ゾオキシーＧ１ｃＮＡｃグリコシドを１−位にβ結合の形成を可 能にする適切な残留基を有するガラクトースの公知の２．３．４．６−チトラア シル化誘導体と反応させる。適当な残留基（ｌｅａｖｉｎｇｇｒｏｕｐ）はα− ブロモ及びα−トリクロロ−アセトアミデート［（２−ＱＣ（＝ＮＨ）ＣＣｌ− ］　を包含スル。コノ反応はβ結合の形成を促進する触媒の存在下で行われる。

適当な触媒に、前駆体がガラクトシルプロミドである場合にテトラ−Ｎ−メチル 尿素の存在下におけるトリフルオロメタンスルホン酸銀；及び供与体がガラクト シルトリクロロアセトアミデートである場合に三弗化硼素エーテレートがある。

この反応でβＧａ１（１→３）βＧｌｃＮＡｃ−ＯＲ及びβＧａ　ｌ　（１→４ ）ＧｌｃＮＡｃ−ＯＲて保護された化合物がもたらされ、これらは慣用技術（例 えば、クロマトグラフィー）で単離及び分離することができる。次いで、除去可 能な保護基の除去で化合物１５ｂがもたらされる。

また図５に示されるように、脱ベンゾイル化された６−ブロモ−Ｇ　Ｉ　ｃＮＡ ｃグリコシド前駆体は、１−位に当該６−ブロモ化合物へのルートを与えるよう にβ結合の形成を可能にする適切な残留基を存するガラクトースの公知の２．３ ，４．６−チトラアシル化誘導体と反応させることかできる。適当な残留基には α０Ｃ（＝ＮＨ）ＣＣｌ　３があり、その反応は化合物１５ｂを製造するのに用 いられる反応と同様にして行われる。

図６及び７はＧＩｃＮＡｃ誘導体の６−位（図６）又は２−位（図７）が変性さ れた、ラトクリッフエ等に記載される手法３Ｓの１つを用いることによるα−シ アリル（２−３）βＧａ１（１−４）βＧ１ｃＮＡｃ−ＯＲ誘導体の化学合成を 説明するものである。

具体的に説明すると、図６に説明されるように、ＧｌｃＮＡｃの適切な６−置換 誘導体を公知の５１グリコシド２７か、又は上記で詳細に説明した図５に示され る公知の、ベンジリデン環が封鎖されたサツカリドの保護された形のもの（グリ コシド２７から誘導される）のいずれかから上記のようにして製造する。この６ −誘導体化された封鎖物質（図５に示される）を次に慣用の方法を用いて脱封鎖 してＧＩｃＮＡｃの６＝誘導体である化合物２８を得る。

化合物２８を次にこの技術分野で公知の方法でジサッカリＩ’　２９　ｂと結合 させてＮｅｕ５Ａｃ単位及びガラクト−ス単位の上に常用の除去可能な封鎖基を 有するトリサツカリド３０及び３Ｉを得る。具体的に述べると、化合物２９ｂを ジサッカリド２９ａ”から公知の方法で合成し、次いて適切な触媒、例えば［Ｂ Ｆ、、（ＣｚＨｓ）０］の存在下で化合物２８と反応させてそれぞれ対応するβ （ｌ→３）又はβ（ｌ→４）結合したトリサツカリド３０及び３１の混合物を得 る。化合物３０：３１の比率は置換基Ｒ，の性質と反応条件に依存する。いずれ にしても、トリサツカリド３ｏ及び３１は、典型的には、クロマトグラフィーを 含めて慣用の技術で分離、晴製される。トリサツカリド３１上の封鎖基の除去も 慣用法（即ち、炭素担持パラジウムの存在下における水素の付加、それに続くメ タノールの存在下におけるナトリウムメトキシドによる処理）で行われ、それに よってトリサツカリド・ａＮｅ　ｕ　５Ａｃ　（２−＋３）βＧａ１（１−４） βＧ］ｃＮＡｃ２５かもたららされる。このトリサツカリド２５のフコンル化は βＧａ１（１→３／４）βＧ］ｃＮＡｃ　α（ｌ→３／４）フコシルトランスフ エラーセ［βＧａ１（１−３／４）βＧＩｃＮＡｃ　ａ（１−３／４）ＦＴ］の 存在下でＧＤＰ−フコース（ＧＤＰ−Ｆｕｃ）を用いて行ってＧｌｃＮＡｃ単位 の６−位において変性されたシアリルルイス８類似体をもたらすようにするのが 好ましい。

置換基Ｒ１がアンド（−Ｎ、−ｍ：の合成は後記において説明される）であると き、この置換基はモノサツカリドレベル（図６に示される）か又はトリサツカリ ド３１のレベルのいずれかにおいて前記のように他の適切な置換基Ｒ１に更に官 能化することができる。例えば、トリサツカリド３１の基Ｒ３がアジド基である 場合、この基はトリサツカリド３１において官能化されてアミノ、アミド、イミ ノ等の上記置換基をあたえることができる。

いずれにしても、官能化は、一般に、形成予定の官能基か更に意図される反応の いずれをも妨害しない合成のある時点において行わイ］る。例えば、モノサツカ リド２８の官能基Ｒ３がジサッカリド２９ｂとモノサツカリド２８とのカップリ ング反応を妨害するとしたら、この官能基はトリサツカリド３１に導入すること ができる。

図７において、ＧＩｃＮＡｃ−ＯＲの適切な２−置換、６−保護誘導体、即ち化 合物３２は、例えば図４に示される公知の封鎖されたサツカリド１７から製造さ れる。

化合物３２を次にラトクリッフエ等が記載する方法３５のようなこの技術分野で 公知の方法を用いて、ジサッカリト２９ａ又は２９ｂと結合させてＮｅｕ５Ａｃ 単位のり、Ｇａｌ単位の上及びＧ１ｃＮＡｃ単位の６−位の上に常用の除去可能 な封鎖基を有するトリサツカリドを得る。具体的に述へると、化合物２９ｂをジ サッカリド２９ａから合成し、次いて適切な触媒、例えば［ＢＦ＊、（Ｃ２Ｈ， ）Ｏ］の存在下で化合物３２と反応させてそれぞれ対応するβ（ｌ→３）又はβ （ｌ→４）結合したトリサツカリドの混合物を与える。β（ｌ→３）化合物対β （１→４）化合物の比率は置換基Ｒ３の性質と反応条件に依存する。いずれにし ても、これらのトリサツカリドは、典型的には、クロマトグラフィーを含めて慣 用の技術で分離、精製される。この保護されたトリサツカリドのフコシル化を次 にそのトリサツカリドとラトクリッフェ等り５が記載するテトラ−０−ベンジル −フコピラノシルプロミドのような適切なフコシル供与体との反応により遂行す る。得られるテトラサツカリド上の封鎖基の除去も慣用法で行われ、それによっ てＧ１ｃＮＡｃ単位の２−位において変性されたシアリルルイス０類似体がもた らされる。

別法として、そして１つの好ましい態様において、フコシル化は脱保護されたト リサツカリドをβＧａ１（１→３／４）βＧＩｃＮＡｃ　ｃｚ（１→３／４）フ コシルトランスフェラーゼ［βＧａ　１　（１→３／４）βＧｌｃＮＡｃ　ａ　 （１→３／４）ＦＴ］の存在下でＧＤＰ−７コース（ＧＤＰ−Ｆｕｃ）と接触さ せてＧｌｃＮＡｃ単位の２−位において変性されたシアリルルイス１類似体をも たらすことによって達成される。

前記のように、置換基Ｒ２がアジド（Ｎａ）であるとき、この置換基はモノサツ カリドレベルか又は保護されたトリサツカリドレベルのいずれかにおいて前記の ように他の適切な置換基Ｒ２に更に官能化することができる。

例えば、保護トリサツカリドの基Ｒ１がアジド基である場合、この基はこのトリ サツカリドにおいて官能化されてアミノ、アミド、イミノ等の上記置換基をあた えることがてきる。官能化は、一般に、形成予定の官能基が更に意図される反応 のいずれをも妨害しない合成の時点において行われる。例えば、モノサツカリド ３２の官能基Ｒ２がジサッカリド２９ｂとモノサツカリド３２とのカップリング 反応を妨害するとしたら、そのときこの官能基は保護トリサツカリドに導入する ことができる。

ＧＩｃＮＡｃの６−位における他の誘導体はこの技術分野で認められている方法 で製造することができ、次いてこれらの化合物はこれをガラクトースにカップリ ングさせてβＧａ１（１→３）βＧ１ｃＮＡｃ−ＯＲ誘導体及びβＧａ１（１→ ４）βＧ１ｃＮＡｃ−ＯＲ誘導体を形成することができる。これらの誘導体は慣 用技術（例えば、クロマトグラフィー）で分離することができる。

βＧａｌ　（＋−４）βＧＩｃＮＡｃ−ＯＲ誘導体は順次、これを（図３を通し て）前記されるようにシアリル化及びフコシル化して６−位において変性された シアリルルイス８誘導体を与えることができる。

上記の点に関し、６−位にクロロ、ブロモ又はヨード置換基を有する化合物２８ はベルコーヤ等が報告する方法７７を用いて未変性ＧＩｃＮＡｃ−ＯＲの直接ハ ロゲン化によって製造する二とかできる。

Ｇ　ｌ　ｃ　Ｎ　Ａ　ｃ　−ＯＲの６−アジド誘導体は図８に記載されるように して製造することかできる。具体的に述へると、ＧｌｃＮＡｃ−ＯＲ１即ち化合 物２７を（ＣＨ３０ＬＣＨ−Ｃ，Ｈ４−ｐ−０ＣＨ，との反応により４．６−０ −ｐ−メトキシベンジリジンで封鎖された化合物４１に転化させる。この化合物 を次に４−ＣＨｉ　０−Ｃｓ　Ｈ４−ＣＨｔ　Ｂｒとの反応で３−ヒドロキシル 位において保護してＸが４　ＣＨｓ　ＯＣ＠　Ｈ４−ＣＨ，−である化合物４２ を与える。化合物゛４２を酢酸（ＡｃＯＨ）との水中、約４５°Ｃにおける反応 により４−及び６−位において一部脱保護して化合物４３を得る。化合物４３を ピリジン中のメシルクロリド（ｍｅｓｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅ：　Ｍｓ　Ｃ１／ｐ 　ｙ）と反応させることによって６−メシレート（ｍｅｓｙｌａｔｅ）　、即ち 化合物４４を製造する。次に、ナトリウムアジドとのミメチルホルムアミド（Ｄ 　Ｍ　Ｆ　）中での反応により６−アジド誘導体、即ち化合物４５を形成し、そ してその３−封鎖基をジクロロジシアノキノン（ＤＤＱ）により除去することに よって化合物４６を生成させる。

上記６−メシル化合物４４は周知の化学的方法によってハロ置換基、アルコキシ 置換基、エステル置換基、サルフェート等を含めて多数の６−置換基のいずれに も誘導体化することができる。

６−アジド化合物４５はトリサツカリド４について前記したようにしてシアリル ルイス８類似体合成の適切な時点に６−アミノ化合物に誘導体化することができ る。

この６−アミノ誘導体は次にこれを常用の方法で更に官能化して、常用の方法て −ＮＨＣ（０）Ｒ，、、−ＮＨ３Ｏ，Ｈｌ　Ｎ＝Ｃ（Ｒ７）２　、　ＮＨＣＨ（ Ｒ−）２、Ｎ（Ｒ＝Ｌ及びアミノ酸残基誘導体又はポリペブチジル残基誘導体を 得ることができる。例えば、基−Ｎ　Ｈｔは慣用技術で次の化合物と反応させる ことができるニーカルボン酸、酸無水物又は酸クロリド：これらは基−ＮＨ２と の反応でアミドを与える（例えば、トリサツカリド７ｄのプロピオン酸アミドの 形成による）：別法として、所望どされる酸をイナズ等が報告するように７２活 性化し、次いて前記アミノ基と反応させることができる：このカルボン酸、酸無 水物、酸クロリド又は活性化された酸は水素、又は場合によってヒドロキシ、ク ロロ、ブロモ及び炭素原子数１〜４個のアルコキシより成る群から選択される１ 種又は２種以上の置換基（好ましくは１種又は２種の置換基）で置換された炭素 原子数１〜４個のアルキルである基Ｒｅ（即ち、置換基−ＮＨＣ（０）Ｒ，の一 部としての基）を与えるように選択される。

−ボダンスッキー等によって報告されている７１、酸基の所で活性化されている 適当な形のアミノ酸部分又はポリペプチド部分ニ ーアルデヒド又はケトン（炭素原子数１〜４個）；これらは基−ＮＨ２との制御 されたｐＨにおける反応で、還元すると（例えば、シアノ硼水素化ナトリウムに より）バーノータス等が報告する７３アルキルアミン置換基［即ち、−ＮＨＣＨ （Ｒｔ）２　］を与えるイミン［−’Ｎ＝Ｃ（Ｒ７）ｚ］を形成する。

−ウォーレンバーグ等７１が米国特許第４，６１２．１３２号明細書において報 告する、前記アミンと反応すると開環して、アルキレンが炭素原子数２〜４個の ものであるＨＯ−アルキレン−〇Ｃ（０）ＮＨ−置換基を有するカルバメート基 を形成するエチレンカーボネート又はプロピレンカーボネートのような環式カー ボネートニークロロホルメート（即ち、ＣＩ　Ｃ（０）　ＯＲ，。）；これは前 記アミンとグレーグ等によって開示されるように６９反応せしめられる。この場 合、クロロホルメートは炭素原子数１〜４個のアルキルである基ＲＩＯを有する ；−活性化された中間体をもたらすＯ＝Ｃ（０−Ｃ。

Ｈ４ｐＮＯｚ）ｚ　；この中間体は、ピーカルスカーバルトスセビツ等が記載す るように７０、次いでアミン（ＨＮＲＩＩＲＩ２）と反応せしめられて尿素［− ＮＨＣ（０）ＮＲＩＩＲ＋２］を与える。

一トリメチルアミン、三酸化硫黄（ＳＯｓ）；これらは前記アミンとｐＨ９，５ において、ペチトーが記載するように７６、基−ＮＨ３Ｏ，Ｈを形成するように 反応せしめられる：及び 一誘導体化された蟻酸又はその他の物質；これらは前記アミンとの反応によって ホルムアミド（−ＮＨ−ＣＨＯ）７４を形成し、これは更にイソシアノ（−Ｎ＝ Ｃ＝０）に官能化され、そして水素化トリブチル錫（ＢｕｔＳｎＨ）７４により デオキシ誘導体に還元される。

ＧｌｃＮＡｃの６−アルコキシ誘導体は図９に記載される方法て製造することが できる。具体的に説明すると、ＧＩｃＮＡｃ−ＯＲ１即ち化合物２７を酸性媒体 中のＣ，Ｈ，ＣＨ（ＯＣＨ３）とアセトニトリル中で反応させて４．６−二保護 ベンジリジン化合物４７を得る。この化合物４７は、順次、ジメチルホルムアミ ドの存在下、約Ｏ″Ｃにおいてベンジル（Ｂｎ）プロミド及び水素化ナトリウム と反応させてその３−位にベンジル保護基を有する化合物、即ち化合物４８を得 ることができる。化合物４８を約８０〜９０°Ｃにおいて酢酸及び水と接触させ ることによってその４，６−位において脱保護すると、化合物４９が得られる。

化合物４９とビス［トリブチル錫］オキシド及びＲｅ　Ｂｒ　（Ｒｅはアルキル 又は置換アルキルである）との反応は６−アルコキシ化合物５ｏを与える。その ベンジル基のパラジウム／炭素上での水素による通常の脱保護は化合物５１を生 成させる。

その６−３Ｒ，化合物はその６−メシル誘導体、即ち化合物４４からチオ酢酸カ リウムＣＨ！　Ｃ（０）ＳＫ’との反応で製造され６−位におけるチオアセテー ト誘導体を与える。このチオアセテート誘導体を次に緩和な塩基で処理して６− ３Ｈ誘導体を生成させる。この６−ＳＨはハロゲン化アルキル（例えば、ＣＨ， Ｂｒ）と反応させてその６−３Ｒ，誘導体を与えることができ、この誘導体は、 順次、ニオ１を部分的に又は完全に酸化して６−スルホン誘導体又は６−スルホ キシド誘導体、即ち−Ｓ　（０）Ｒ，及び−３（０）２Ｒ，（たたし、Ｒ，は炭 素原子数１〜４個のアルキルである）にすることができる。

その６−フルオロ化合物は化合物４９をピリジン中で塩化メシルと反応させて６ −メシレートを形成することによって、公知の化学的方法７９により製造される 。この６−メシレートはテトラエチルアンモニウムフルオリドと反応すると６− フルオロ誘導体を与える。そのベンジル基を水素と炭素担持パラジウムにより脱 保護すると、化合物２７の６−デオキシ　６−フルオロ誘導体が得られた。

上記の反応式はＧＩｃＮＡｃの多数の２−又は６−置換誘導体を示すものである 。しかし、これらの変性は２−及び６−の再位置に置換基を与えるべく組み合わ せ得ることは明らかである。ジ置換が所望される場合、これらの変性は互いに適 合し得るように合成の適切な時点で行われる。即ち、２−位におけるその変性は ６−位における変性に対して行われなければならない。これはこの技術の通常の 技能範囲内のものである。

更に、上記のように、２−及び／又は６−位で誘導体化された（特に、２−アジ ドの）物質に対する所望とされる変性は引き続く反応とは非適合性である官能基 を導入しないように合成ルートの適切な点で行われる。しかし、ＧＩｃＮＡｃの ６−置換誘導体の場合、βＧａ１（ｌ→４）結合はＵＤＰ−ガラクト−ス及び市 販のＧｌｃＮＡｃ　β（ｌ→４）ガラクトシルトランスフエラーゼを用いること によって形成させることができる。このＧｌｃＮＡｃ　β（ｌ→４）ガラクトシ ルトランスフェラーゼは６−位における変性を受け入れることが知られている。

イチ力’７　（Ｉｃｈｉｋａｗａ）等のＡｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、２０２ ・２１５−１３８　（１９９２）を参照されたい。

Ｂ２．　シアリルルイス１類似体の抗原性キャリアーに対するカップリング ｉ、シアリルルイス１誘導体の人工抗原に対するカップリング 人工抗原を形成するように抗原性キャリアーに結合することができる官能基を有 するアグリコンを含有するオリゴサツカリドグルコシドをカップリング（結合） させる手法は文献４ｓ５０に記載されている。このような抗原性キャリアーは、 一般に、アグリコン（又はその誘導体）上の官能基と反応する少なくとも１種の 相補反応性の官能基を有する。官能基と採用されるカップリング手法は使用され るシアリルルイス８類似体の性質と、特にこの類似体上に存在する官能基（例え ば、Ｎ−アセチルグルコサミン単位の２−及び／又は６−位の官能基、並びにシ アル酸単位上のカルボキシル基）と確実に適合性となるように注意すべきである 。この技術分野で記録されている１つの適当なカップリング手法は、公知の手法 に従ってアシルアジド（−ＣＯＮ、）に変換されるアグリコン上のエステル官能 基（ＣＯＯＲ’　、ただしＲ′は残留基であるか、又は例えば炭素原子数１〜６ 個のアルキルのような残留基に変換可能である）を採用する方法である。アシル アジドは次いで公知の手法８１．６２に従って抗原性キャリアーにカップリング させることができる。

当業者によって認められているように、アシルアジド法は変性されたシアリルル イス８類似体がアミン置換基を含有しているときはカップリングに使用すること ができない。

もう１つの適当な手法はエチレン末端基、好ましくは活性化されたエチレン末端 基、例えばアリルオキシ基−０−ＣＨ，ＣＨ＝ＣＨ２（これは次いで、キャリア ーに対するカップリングを行うために公知の方法６３・ｓ４で活性化させるごと ができる）を有するアグリコン部分を使用するものである。

シアリルルイス１類似体のアグリコン官能基が一旦活性化されてしまうと、カッ プリング反応は、一般に、モル量又は実質的にモル過剰のこのオリゴサツカリド グリコシドをキャリアーを含有する組成物に、アグリコン上の官能基又は活性化 された官能基（活性化が必要であるならば）がキャリアー上の相補反応性官能基 と反応する条件下で添加することによって行われる。添加されるシアリルルイス ８類似体の量はキャリアー上の反応部位の数と共に各キャリアーに結合されるそ のような類似体の数を指定し、そしてこの数は選択されるキャリアーと共に変わ る。一般に、キャリアー当たり少なくとも１個のそのような置換基を与えるよう に十分なシアリルルイス１類似体が添加される。置換基の数は、好ましくは各キ ャリアーにつき１〜約６０個、更に好ましくは約１〜約２０個である。

以下の実施例は反応性官能基を有するキャリアーをアグリコン部分の上に相補反 応性官能基、又はアグリコン部分の上の相補反応性官能基に活性化（誘導体化） することができる官能基を存するシアリルルイス１類似体にカップリングさせる ための手法を与えるものである。これらの実施例は本発明を限定するものではな い。

ｉｉ、　βＧａ１（１→４）βＧＩｃＮＡｃ−ＯＲ誘導体の人工抗原へのカップ リング、それに続くシアリル化とフコシル化 上記のように、シアリルルイス１類似体を人工抗原に結合させる際に有用なカッ プリング反応は、採用されるカップリング反応がシアリルルイス１類似体上の官 能基に意図されない様式て（例えば、そのシアル酸上の−Ｃ００Ｈ基において） 影響を及はしてはならないと言うことによって制限される。この制限を回避する には、初めにβＧａ１（１−４）βＧＩｃＮＡｃ誘導体を抗原性キャリアーにそ のアグリコン官能基を介してカップリングさせ、次いて逐次的方法てシアル酸及 びフコースを、１個又は２個以上のシアリルルイス１類似体をペンダントに有す る人工抗原を与えるようにその人工抗原に結合されたβＧａｌ　（１→４）βＧ ＩｃＮＡｃ誘導体に酵素的に転移させるのか有利であろう。

この態様において、アシアロオリゴサツカリドグリコシドの抗原性キャリアーに 対するカップリングは上記と同し方法で達成される。同様に、人工抗原に結合さ れたβＧａ１（１→４）βＧ１ｃＮＡｃ誘導体に対するシアル酸とフコース酵素 的転移も上記と同じ方法で達成される。

ｉ　ｉ　ｉ、抗原性キャリアー以外のキャリアーに対するカップリング 小さい分子量のキャリアーは高められた抑制効力を持つ二価、三価又は多価のハ ブテンを与えることができるだろう。適切なシアリル化ルイス８の高分子キャリ アー又はシアリルルイス８モノマーと適切なモノマーとの共重合は非免疫原性の 又は生物適合性の生成物をもたらすことができるだろう。人工のリポソーム又は ミセルは抗原、薬物キャリアー又は多価の阻害物質として使用することができる だろう。従って、本明細書に記載されるシアリルルイス１類似体は、抗原性キャ リアーにカップリングすることに加えて、これを他のキャリアーにカップリング 又は他のキャリアーと合体させることができる。

例えば、そのようなオリゴサツカリドグリコシドのアグリコン部分が疎水性基を 含有するならば、そのオリゴサツカリドグリコシドをミセル及びリポソームに組 み込ませることができる。

シアリルルイス１類似体を含有するリポソーム及びミセルは細胞付着現象／ター ゲティングの抗原又は阻害物質に有用である。

同様に、使用されるキャリアーは１種又は２種以上の反応性官能基を存する固相 粒子であることができ、これは、その固相粒子が少なくとも１種のコンジュゲー ト化されたシアリルルイス３類似体を含有するように固相粒子にカップリングさ せるアグリコン上の相補反応性官能基を含有する１種又は２種以上のシアリルル イス軍類似体と反応させることができる。このようなカップリングは上記のカッ プリング反応と同様に進行するだろう。この態様において、得られる固相粒子は 酵素（シアリルトランスフェラーゼに非ず）、レクチン又は他の生物学的受容体 をそのような物質を含有する水溶液から単離する際に有用てあろう。反応性官能 基を含有する固相粒子はこの技術分野で周知であり、これには活性化されたセフ ァロース（Ｓｅｐｈｒｏｓｅ）　、アミノプロピル−シリカ、アミノプロピル− ＣＰＧ　（気孔が制御されたガラス）、アミノエチルセルロース、トリサクリル ’　（Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ”　）　−ＮＨ、ガラスピーズ、ポリアクリルアミド 粒子等がある。

シアリルルイス８類似体はまた、非免疫原性、生物適合性及びキャリア一分子当 たり無数のシアリルルイス１類似体を含むことの能力等の性質について選ばれる 、高分子の性質を持つもっと大きな分子量のキャリアーにもカップリングさせる ことができる。

１種又は２種以上のシアリルルイス８類似体を含有する固相又は高分子性のキャ リアーはまた、例えばそれらが天然物質を含有している疑いがあると見られる試 料に加えられる競争免疫検定においても有用である。試料には次いでシアリルル イス１類似体に抗して生じせしめられる、天然物質と交叉反応する抗体が添加さ れる。このような抗体には検出可能な信号を与えるように適切な標識が付けられ る。標識の付けられた抗体の固相又は高分子性のキャリアーに対する結合の度合 いは試料中に見いだされる天然物質の量に依存する。インキュベーション後、固 相又は高分子性のキャリアーが次に試料から単離され、そのキャリアーに結合し た抗体の量が信号のレベルを測定することによって確認される。測定された信号 の標準値に対する相関関係は試料中の天然抗原のレベルの査定を可能にする。

更に、非免疫原性コンジュゲートは、多価コンジュゲートが一価のハプテンより も有効な抑制物質であると考えられる場合に細胞付着現象の抑制物質として有用 であ本明細書に記載されるシアリルルイス１類似体は病気の治療に有用である。

この治療には、例として挙げるものであるが、細胞性炎症応答を変調すること等 を含めて抗原に対する細胞性免疫応答の治療がある。

本明細書に記載されるシアリルルイス１類似体は、これを約０．５〜約５０　ｍ ｇ／　ｋｇ一体重、好ましくは約０．５〜約５ｍｇ／ｋｇ一体重の用量範囲で投 与するとき、抗原に対する細胞性免疫応答を抑制する際に有効である。採用され る特定の用量は治療されている個々の細胞性免疫応答により、並びに有害な免疫 応答のひどさ、患者の年令及び一般的な病状等のような因子に依存してなされる 主治医の判断により調整される。シアリルルイス１類似体は経口、非経口、経直 腸、経皮等で投与することができる。

シアリルルイス１類似体は非経口投与するのが好ましい。

シアリルルイス８類似体による細胞性免疫応答の抑制は免疫応答の開始を必要と するので、シアリルルイス８類似体は、一般的に言えば、免疫応答開始の約０． ５時間後、好ましくは１時間後、最も好ましくは少なくとも約５時間後に患者に 投与される。

シアリルルイス１類似体の投与は、抗原に対する細胞性免疫応答を変調すること に加えて、同じ抗原からの追加の対抗に対しである程度の寛容性も与える。これ に関し、シアリルルイス１類似体の投与数週間後の同じ抗原による再対抗は著し く低下した免疫応答（即ち、細胞性免疫応答の抑制）をもたらす。しかして、シ アリルルイス°類似体の投与は抗原に対する細胞性免疫応答の変調（例えば、抑 制）とその抗原による将来の対抗に対する寛容性を付与する。

本発明の方法は製剤上許容し得るキャリアーとを動量のシアリルルイス′類似体 を含んで成る製剤組成物の使用によるよって一般に達成される。製剤上許容し得 るキャリアーには、例として挙げると、水、緩衝剤入り食塩水等がある。シアリ ルルイス１類似体の有効量は、患者に投与されるときオリゴサツカリドグリコシ ドの前記用量を与えるそのような量である。適当な製剤組成物はアジュバント、 防腐剤等のような任意成分を更に含有することができると考えられる。

また、適当な製剤組成物はこの技術分野て周知の経皮性組成物又は包帯類であっ てもよいと考えられる。

更に、本明細書に記載されるシアリルルイス８類似体は、抗原性キャリアーに結 合される場合、人工抗原としても有用である。従って、このような類似体は人工 抗原の製造において中間体として作用する。

本明細書に記載されるシアリルルイス１類似体を含有する人工抗原はマウスに、 例えば天然物質と交叉反応する抗体を産生させるように、注射することができる 。このような抗体は天然物質を含有している疑いがあるとされる試料中のその天 然物質の存在及び／又はレベルを測定するための免疫検定技術において使用する ことができる。

上記のことに加えて、このような抗体（特に、モノクローナル抗体）は特定の天 然抗原（即ち、天然物質）に対する抗体療法において使用することができる。具 体的に述・＼ると、本明細書に記載される、シアリルルイス８類似体の１種又は ２種以上を含有する人工抗原は、シアリルルイス１類似体上に位置する、天然抗 原における抗原決定因子と同様のものであるだろう１種又は２種以上の抗原決定 因子を有することができる。この人工抗原は、それがマウスに注射されると、天 然抗原と交叉反応する抗体を産生させる。このような抗体は次いでこれらを採集 し、天然抗原に対する抗体治療に使用することができる。これらの抗体はモノク ローナル抗体であるのが好ましい。シアリルルイス１類似体を含有する人工抗原 の抗原決定因子を認識し、そして天然抗原上の同様の抗原決定因子と交叉反応す るモノクローナル抗体を生成させるハイブリドーマ細胞系を単離する方法はこの 技術分野において周知である。場合によっては、このような抗体をそれらの治療 効果を高めるべく治療剤にカップリングさせることができる。

同様に、人工抗原以外の人工コンジュゲートの実用性も前記された通りである。

次の実施例は本発明を例証するために与えられるもので、これら実施例をいかな る意味においても本発明の範囲を限定するものと解してはならない。

これらの実施例において、以下において特に定義されない限りは、使用されてい る略号は一般に受け入れられている意味を有するものである。

ＡＢ＝ＡＢパターン ＡＴＰ＝アデノシントリー燐酸 ａＸ＝軸の ＢＳＡ＝ウシの血清アルブミン ｂｔ＝広いトリブレット ＣＤＰ＝シチジンジー燐酸 ｄ＝ダブレット ｄｄ＝ダブレットのダブレット ｄｄｄ＝ダブレットのダブレットのダブレットＤＴＨ＝遅延型過敏症 ｅｑ＝赤道の ｉ、ｒ、＝赤外 ＫＬＨ＝キーホール・リンペット・ヘモシアニン（Ｋｅｙｈｏｌｅ　Ｌｉｍｐｅ ｔ　Ｈｅｍｏｃｙ　ａｎｉｎ）ｍ＝マルチブレット ｔ、１．ｃ、＝薄層クロマトグラフィーＵ＝単位 ＡＧ　ｌＸ８（ホルメート形）＝バイオーラド・ラボラトリーズ社［Ｂｊｏ−Ｒ ａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ］　、リッチモンド（Ｒｉｃｈｍｏｎｄ）　、 ＣＡ］から入手できるイオン交換樹脂・ＡＧＩＸ８（ホルメート形）、ダウエッ クス（Ｄｏｗｅｘ）　５０　Ｗ　Ｘ　８　（Ｈ＋形）＝タウ・ケミカフ１社［Ｄ ｏｗ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ミツドランド（Ｍｉｄｌａｎｄ）、Ｍ！］から入手で きるイオン交換樹脂・ダウエックス５０ＷＸ８（Ｈ＋形）ＩＲＣ−５０樹脂（Ｈ ”形）＝ローム・アンド・ハース社［Ｒｏｈｍ　＆　Ｈａａｓ、フィラデルフィ ア（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ）　、ＰＡ］から入手できるイオン交換樹脂・Ｉ ＲＣ−５０（Ｈ″″形）。

市販成分はメーカー名と、適切な場合は発注番号で挙げる。列挙されているメー カーの幾つかのものは次の通りであるニ アマージャム社（Ａｍｅｒｓｈａｍ）　＝アマージャム・カナダ社［Ａｍｅｒｓ ｈａｍ　Ｃａｎａｄａ　Ｌｉ　ｍ１ｔｅｄ　；オンタリオ（０ｎｔａｒｉｏ）、 カナダ国］ バイオラド社（ＢｉｏＲａｄ）　”バイオ−ラド・ラボラボラトリーズ社、リッ チモンド、ＣＡ イアトロン社（Ｉａｔｒｏｎ）　＝イアトロン・ラボラボラトリーズ社（［ａｔ ｒｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　：東京、日本国）メルク社（Ｍｅｒｋ）　 ＝Ｅ、メルク社［Ｅ、　Ｍｅｒｋ　ＡＧ　；ダルムシュタット（Ｄａｒｍｓｔａ ｄｔ）、ドイツ国］ミリポア社（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）＝ミリボッ社［Ｍｉｌｌ ｉｐｏｒｅＣｏｒｐ、；ペッドフォード（Ｂｅｄｆｏｒｄ）、ＭＡ］ペルーフリ ーズ・バイオロジカルス社（Ｐｅｌ−ＦｒｅｅｚｅＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）＝ ペルーフリーズ社［Ｐｅｉ　Ｆｒｅｅｚ　；　ロジャース（Ｒｏｇｅｒｓ）　； アーカンサス（Ａｒｋａｎｓａｓ）　］ファーマシア社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ） 　＝ファーマシア・バイオシステムズ社［Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｓｙｓｔ ｅｍｓ　Ｉｎｃ、；ピスキャタウエー（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ）　、Ｎ　Ｊ　］ サーバ社（５ｅｒｖａ）　＝サーバ・ファインバイオへミカ社［５ｅｒｖａ　Ｆ ｅｉｎｂｉｏｃｈｅｍｉｃ　ａ　；　ハイデルベルグ（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ） 　、ドイツ国］シグマ社（Ｓｉｇｍａ）＝シグマ・ケミカル社［ＳｉｇｍａＣｈ ｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎ　；セントルイス（Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ　）、ＭＳ ］ ウォータース社（Ｗａｔｅｒ）＝ウォータース・アソシェーツ社［Ｗａｔｅｒｓ 　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ、　Ｉｎｃ、　；ミツドフォード（Ｍｉｌｆｏｒｄ）、 ＭＡ］。

シリカゲル（メルク社、６Ｏ−Ｆ２．、）の予備塗被板を分析用ｔ、１．ｃ、に 使用し、スポットは硫酸の５％エタノール溶液を噴霧した後炭化する（ｃｈａｒ ｒｉｎｇ）ことによって検出した。カラムクロマトグラフィーにはシリカゲル６ ０（メルク社、２３０〜４００メツシユ）を用いた。イアトロビーズ（Ｉａｔｒ ｏｂｅａｄｓ）はイアトロン社からのものであった（発注番号６ＲＳ−８０６０ ）。ミレックス（Ｍｉｌｌｅｘ）−ＧＶフィルター（０，２２μ）はミリポア社 からのものであった。Ｃｐｓセブーパック（５ｅｐ−Ｐａｋ）カートリッジ及び バルクＣ１，シリカゲルはウォータース・アソシエーツ社からのものであった。

市販試薬を化学反応において使用し、溶剤は通常の手法に従って精製、乾燥した 。特に明記されなければ、反応混合物はジクロロメタンによる希釈と重炭酸ナト リウムの希薄溶液、それに続く水による洗浄によって処理した。硫酸マグネシウ ム上での乾燥後、溶剤を浴温３５℃又は必要なときはそれより低い温度を用いる 真空蒸発で除去した。

’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、は、特に明記されなければ、内部標準としてり、ｏ中２．２ ２５に設定されたＣＤＣ１，かアセトンのいずれかの中のテトラメチルシランを 用い、外囲温度において３００　ＭＨｚ又は５００　ＭＨｚにおいて記録した。

化学シフトとカップリング定数［観察されたスプリッティング（ｓｐｌｉｔｔｉ 口ｇ）］はそれらがあたがも−次であるかの如くに報告された。ｎ、ｍ、ｒ、デ ーターは一部だけを報告する。ＩＣ−ｎ、ｍ、ｒ、スペクトルは参考としてＤ２ ０において６７．４に設定されたＣＤＣ１，又はジオキサン中のテトラメチルシ ランを用いて７５．５　ＭＨｚで記録した。

凍結したラットの肝臓はペルーフリーズ・バイオロジカルス社からのものであっ た。ＣＭＰ−［”Ｃｌ　Ｎｅｕ５Ａｃはアマージャム社から入手したものであっ た。セファロース６Ｂ、ダウエックスＩＸ８はファーマシア社からのものであり 、またＣＭＰ−Ｎｅｕ５Ａｃはシグマ社から、ＡＣ８液体シンチレーション・カ クテルはアマージャム社からのものであった。ＧＤＰ−フコースは以下に記載さ れる化学合成により得た。他の化学薬品は全て分析等級のもので、それらは市販 のものであった。

βＧａ１（１→３／４）βＧ　ｌ　ｃＮＡｃ　ａ　（２−）３）シアリルトラン スフェラーゼ［（ＥＣ２，４，９９゜５）−場合によっては“α（２→３）ＳＴ ”と称される］及びβＧａ１（１−＝４）βＧ　１　ｃＮＡｃ　ａ　Ｃ２−＋６ ）シアリルトランスフェラーゼ［（ＥＣ２，４，９９゜１）−場合によっては“ α（２→６）ＳＴ”と称される］をワインシュタイ等■に従ってトリトン（Ｔｒ ｉｔｏｎ）ＣＦ−５４（シグマ社）を用いてラットの肝臓（６００ｇ）から抽出 した。トリトン抽出物からの酵素をスティチャー等の方法ｌ′７の報告された修 正法６１によりシバクロン・ブルー（Ｃｉｂａｃｒｏｎ　Ｂｌｕｅ）Ｆ　３　Ｇ 　Ａ−セファロースで一部精製、濃縮した。その清浄剤抽出物（３Ｌ、蛋白質３ 、５　ｍｇ／　ｍＬ）をナトリウム力コディレート（ｐＨ６，５）　１０ｍＭ、 ０．１５Ｍ−ＮａＣ１，２５％グリセロール、２つの部分に分けた０、１％トリ トンＣＦ−５４（緩衝液Ａ）中で平衡にされたセファロース６Ｂ［ディージ（Ｄ ｅａｎ）とワトソン（Ｗａｔｓｏｎ”に従って製造］に連結されたシバクロン・ ブルーＦ３ＧＡ（サーバ社）のカラム（８×２０　ｃｍ）に装填した。緩衝剤Ａ との間には洗浄工程がある。

二〇カラムを蛋白質がそれ以上溶離しなくなるまで同じ緩衝液で洗浄し、次いで ２．０Ｍ−ＮａＣ１を含有する緩衝液Ａを用いて溶離させた。シアリルトランス フェラーゼを含有する活性な両分をプールし、アミコン（ＡｍｉｃｎＰＭ）ａｏ 膜での限外濾過により濃縮し、そして２００容量の緩衝液Ａに対して透析した。

α（２−３）ＳＴをα（２→６）ＳＴから分離し、そしてハブテンＩＩ、即ちβ Ｇａ　Ｉ　（１→３）　βＧ　１　ｃ　ＮＡ　ｃ　Ｏ（ＣＨｔ）−Ｃ０ＯＨのＮ −スクシンイミジルエステルを必要とする当該技術で認められている技術を用い てマツモト等８０が記載するようにそのハブテンを活性化されたセファロースに 共有結合させることにより得られたマトリックス（Ｌｅ’−セファロース）でマ ジッド等５＠が記載するようにアフィニティークロマトグラフィーによって精製 した。上記の色素クロマトグラフィーで部分的に精製された、α（２−３）　Ｓ Ｔ　・ｍｌ　６０ｍＵ及びａ　（２→６）　ＳＴ　・２゜４Ｕ（蛋白誓約８６０ ｍｇ）を含有するシアリルトランスフェラーゼをＣＤ　Ｐ　２．５　ｍＭ金含有 る等容量の緩衝液Ａにより流量５　ｍＬ／時で希釈した。そのカラムを前記の平 衡用緩衝液で洗浄してゆるく結合している蛋白質を全て除去した。酵素活性を定 量すると、不活性な蛋白質及びα（２→６）ＳＴの大部分を溶離させたが、カラ ムにその適用中、及びそれに続く洗浄工程中に強く吸着されたα（２−３）ＳＴ の溶離は妨害（ｕｎｒｅｔａｒｄ）されなかった。

次に、そのα（２→３）ＳＴを０．２Ｍラクトースを含有する緩衝液入を用いて カラムから溶離させた。α（２→３）ＳＴを含有する両分（各２　ｍＬ）をプー ルし、アミコンＰＭ３０膜で歩容量（〜Ｉ　ｍＬ）まで濃縮した。この濃縮物を ２００容量の、５０ｍＭナトリウム力コディレート（ｐＨ６，５）　、０．２５ ｋｉ・ＮａＣｌ、５０％グリセロール、０．１％トリトンＣｌ−５４に対して透 析し、そして−２０°Ｃて貯蔵した。比活性度２．７　Ｕ　／ｍｇ−蛋白質まで ８２゜０００倍精製されたこの調製物はβＧａ１（１→４）βＧ　１　ｃＮＡｃ ｏ　（ＣＨｘ）ｓ　Ｃ００ＣＨｓ”を受容体として使用する予備的シアリル化を 行い、そして生成物を’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、分光分析法及びｔ、１．ｃ、で分析し たときα（２→６）ＳＴ活性を持っていないことが示シアリルトランスフェラー ゼの活性を次の標準的な方法に従って検定した。即ち、α（２→３）ＳＴ及びα （２→６）ＳＴの活性を、それぞれ化合物２０ａ及び２２ａ（化合物２０ａは化 合物２２のβＧａ１（１→３）βＧ］ｃＮＡｃに相当する）であるそれらα（２ →３）ＳＴ及びα（２→６）ＳＴの受容体基質以外は同一の反応混合物において 定量した。インキュベーション混合物は総容量６０μＬ中に、０．５％トリトン ＣＦ−５４を含有する２５ｍＭナトリウム力コディレート（ｐｎｅ、　５　）中 の９ｎｍｏｌのＣＭＰ−［Ｉ４Ｃｌ　Ｎｅ　ｕ　５Ａｃ　（アマーシ士ム社）　 （３，３４０ｃｐｍ　／ｎｍｏｌ）　、２ｍＭの受容体基質、１ｍｇ／ｍＬのＢ ＳＡ及び酵素（０−０，２ｍｕ）を含有していた。

３７°Ｃでインキュベーション（１０〜３０分）後、放射性生成物をセダーバッ クＣ１１カートリツジ５ｏ（）オータース社）を用いる手法で単離した。そのカ ートリッジを背景のカウントが洗浄液中に得られるまて水（３０ｍＬ）で洗浄し た。放射線標識された生成物を次にメタノール（２ｘ　５　ｍｌ）により溶離し 、そしてＡＣＳシンチレーションカクテル（Ｉ　ＯｍＬ）中でベックマン（Ｂｅ ｃｋｍａｎ）　Ｌ　Ｓ−３８０１シンチレーシヨンカウンターを用いて定量した 。酵素活性１単位は飽和基質濃度におけるインキュベージ３２１分当たりに形成 される生成物１μモルと定義される。蛋白質濃度はブラッドフォートの方法６１ を用いて評価した。

ソアリルトランスフエラーゼの動力学 ラットの肝臓・α（２→３）ＳＴの初期転移速度を一定のオリゴサツカリド受容 体基質濃度（２ｍＭ−ミリモル）において報告されている方法ｓ＠！２を用いて 測定した。標準のインキュベーション混合物は総容量６０μＬ中に、０．５％ト リトンＣＦ−５４を含有する２５ｍＭナトリウム力コディレート緩衝液（ｐＨ６ ，５）中に５６０ｕＭ　（フィクロモル）のＣＭＰ−［”ＣコＮｅｕ５Ａｃ（３ ０，０００ｃ、ｐ、ｍ、）　、２ｍＭの受容体基質、ｌｏ＋ｇ／ｍｌのＢＳＡ及 び３６０μＵの酵素を含有していた。

３７°Ｃにおけるインキュベーションの３０分後に１０ｍＭのＣＴＰ５０μＬを 添加することによって反応を停止させた。放射線標識された生成物を疎水性の８ −メトキシカルボニルオクチルアグリコンを有する受容体についてはセダーパッ ク法＠０によるか、又はボールマン等６！が記載する池のアグリコンを存する受 容体についてはダウエックスｌＸ８（ＰＯ２”−１１００〜２００メツシユ）に よるイオン交換クロマトグラフィーによって単離した。

初期速度はα（２→３）ＳＴについてβＧａ１（１→４）βＧｌｃＮＡｃ−ＯＲ を用いて得られた値に対する百分率として表される。あらゆる場合に、ＣＭＰ− ［”Ｃ］−Ｎｅｕ５Ａｃの１５％未満が生成物に転移され、そして検定は２回ず つ行った。

この酵素はルイスａ＋ｂ−共与体から得られたヒトの乳からパルシック等２ｔが 記載するＧＤＰ−ヘキサノールアミンセファロースでのアフィニティークロマト グラフィーを使用する方法に従って精製した。

フコシルトランスフェラーゼの動力学 フコシルトランスフェラーゼの動力学はパルシック等２鵞か報告するようにして 行った。インキュベーション混合物は、（５０μＬ中に）２５ｍＭナトリウム力 コディレート緩衝液（ｐＨｅ、　５　）中にの１０ｇＭのＧＤＰ−［”Ｃ］−７ コース（７７一ン＋Ｌ社）（２５，０００ｃ。

１）、ｍ、）　、２ｍＭの受容体サツカリド、ｌＯμＵのフコシルトランスフェ ラーゼ、８ｍＭのＭｎＣｌ２を含有していた。３７°Ｃにおけるインキュベーシ ョンの２０分後に３５ｍＭのＥＤＴＡｌ、０μＬを添加することによって反応を 停止させ、そして放射線標識された生成物をセダーパック法＠６によって分離し た。ＧＤＰ−［目Ｃ］−フコースの２０％未満が生成物に転移された。初期速度 は表ＩＩＩに記載されるようにａ　Ｎ　ｅ　ｕ　５　Ａ　ｃ　（２−３）βＧａ １（１→４）βＧＩｃＮＡｃ−ＯＲ又はβＧａ１（１→４）βＧ１ｃＮＡｃ−Ｏ Ｒを用いて得られた値に対する百分率として表される。

実施例１−出発物質の合成／受容体の合成：化合物２゜ｂ、２０ｃ、２２ｂ、２ ２ｃ、２２ｄ（図Ａ、８−メトキシカルボニル　２，３．４．６−テトラ−０− アセチルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−０−２−アジド−２−デ オキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物１９）及び８−メトキシカルボニル 　２．３．４．６−テトラ−０−アセチルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ →４）−０−２−アジド−２−デすキシーβ−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２ １）の製造トリメチルシリル）−リフルオロメタンスルホネート（０，４６０ｇ 、１．９４ミリモル）の乾燥塩化メチレン（５ｍＬ）中等液を２２°Ｃで撹拌さ れているジクロロメタン中の化合物１７”　（１，２０ｇ、　１．９４ミリモル ）、化合物１８　（０，７５７ｇ、　１．９４ミリモル）及び分子篩４人（２ｇ ）の混合物にシリンジで滴下した。２時間後、反応をトリエチルアミンの添加に より停止させ、その混合物を濾過し、そして常法の通り処理した。回収された物 質を溶離剤としてヘキサン類と酢酸エチルとの３〜１混合物を用いてシリカゲル （１５０ｇ）によるクロマトグラフに掛けてβ（ｌ→３）ジサッヵリドとβ（１ →４）ジサッカリドとの混合物（１，１０ｇ、６０％）を得た。この混合物はこ の段階では分離することができなかった。

テトラエチルアンモニウムクロリド（０，１９６ｇ、１゜１８ミリモル）及び無 水の弗化カリウム（０，２９９ｇ。

５、１５　ミリモル）を上記ジサッヵリドの混合物（０，４６０ｇ、０．４８７ ミリモル）の乾燥アセトニトリル（１０ｍＬ）中等液に加えた。２２°Ｃで２４ 時間後、酢酸（１〜５　ｍＬ）を加え、そして溶剤を真空蒸発させた。その残分 ヲクｏｏホルム（２０ｍＬ）に溶解し、重炭酸ナトリウムの希薄溶液で、続いて 水で洗浄した。回収された粗生成物を溶離剤として酢酸エチルとヘキサンとのｌ ＝１混合物を用いてシリカゲル（３６ｇ）によるクロマトグラフに掛けてβ（１ −４）ジサッカリド２１（１５７ｍｇ、４６％）とβ（１→３）ジサッカリド１ ９（９６ｍｇ、２８％）を得た。

シサッカリド２１　：　Ｃａ’）　ｏ　”＋６．９°　（Ｃ１，０，ＣＨＣＬ＊ 　）　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、（ＣＤＤ　ｌ５）５．３８１（ｄ、ＩＨ，Ｊｓ　４３ ．５Ｈｚ、Ｈ４’　）　、５．２２２（ｄｄ、ＩＨ，ＪＩ□８．０Ｈｚ、ｔＪ２ ’、２’　ｌｏ、ＯＨｚ、　Ｈ−２°）、５．０Ｉ４（ｄｄ、ＩＨ，Ｈ−３’） 、４．６２８　（ｄ、　ＩＨ，Ｈ−ビ）、　４．２５７　（ｍ、　Ｈ−１（ｄ。

Ｊ　Ｉ、　２　Ｂ−０ｆ（ｚ）　ヲ含ムｌ　、　３．４２０−３．６４０　（ｍ 、　ＣＯ２ＣＨｚ　（ｓ、３．６５０）を含む）、２．２２７（ｔ。

２Ｈ，Ｊ７．５Ｈｚ、ＣＨｘ　Ｃｏｔ）、２．１５０．２．１００（２）、１． ９５０　（３ｓ、１２Ｈ，４０Ａｃ）、１．６００　（ｍ、４８．　メチレン類 ）　、　１．３００　（ｍ、８Ｈ。

メチレン類）。

ジサッカリド＋　９　；　（（Ｚ）　ｏ　”＋７．８°　（ｃ　１．　ＣＨＣＩ ｓ　）　、’Ｈｎ、　ｍ、ｒ、（ＣＤＣＩｇ）　５．３５９（ｄ、ＩＨ，Ｊｒ、 ａ　３．２Ｈｚ）　、５．２２５　（ｄｄ、ＩＨＪｌ、ｚ　８．０．Ｊ２　□　 １Ｏ）１ｚ、Ｈ２’　）、５．０１３（ｄｄ、ＩＨ，Ｈ−３）、４．５２４　（ ｄ、ＩＨ，Ｈ−ビ）、４．３００　（ｄ、　Ｊｌ、ｚ８．ＯＨｚ、　Ｈｌ）、３ ．６２８　（Ｓ、３Ｈ，Ｃｏｔ　ＣＨｔ）、２．１５０．２．０８０゜２．００ ０，１．９２０　（４ｓ、１２Ｈ，４０ＡＣ）、１゜６００　（ｍ、４Ｈ，メチ レン類）　、　１．３００　（ｍ、８Ｈ。

メチレン類）。

同定のために両ジサッカリドをピリジンと無水酢酸との混合物中で過アセチル化 した。

化合物２１の過アセチル誘導体：５．３１４　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｓ　４３．５． Ｊａ　ｓ　＜ＩＨｚ、Ｈ４’　）＋　５．０４７　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｌ　２８． ０．Ｊｒ、ｘ、ＩＯ，ＯＨ２゜Ｈ−２’　）、４．８７０−４．９７０　（ｍ、 ２Ｈ，ｉｎｃ　１゜Ｈ３，４，９２３（ｄｄ、Ｊｚ　２．　Ｊｓ　４．１０．０ Ｈｚ）及びＨ−３’　（４，９０３，ｄｄ、））、４．４２０（ｍ、２Ｈ，ｉｎ ｃ　１．Ｈ−１’（ｄ））、４．３００　（ｄ。

Ｊｌ、ｔ　８．ＯＨｚ、　Ｈ−１）、　１．６２７　（ｍ、１ｎｃ１．　Ｃ０２ ＣＨＩ　（Ｓ、３．６２７））、３．３３５　（ｄｄ、ＩＨ。

Ｈ２）、２．２３０　（ｔ、Ｊ　７．５）ＩＺ、ＣＨ２ＣＯ資）２．０８０．　 ２．０？０．２．０５０，２．０　１０．　１．９８０゜１．９３６　（５ｓ、 １８８．　６　０Ａｃ）、１．５７０　（ｍ。

４Ｈ，メチレン類）　、　１．２１０　（ｍ、８Ｈ，メチレン類）。

化合物１９の過アセチル誘導体：５．ｌ　２０　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｓ、ａ　３． ５．ＪＳ４．１．ＯＨｚ、Ｈ４°）、５．０８０　（ｄｄ、ＩＨ１Ｊ＋１．ｒ　 ７．８＋　Ｊｌ、ｓ、１０．０Ｈｚ。

Ｈ−２’　）、４．９８０　（ｄｄ、ＩＨ，Ｈ−３’　）、４．８７５　（ｄｄ 、Ｉ　Ｈ，ＪＳ、４−Ｊａ、ｓ　−１０，０Ｈｚ、　Ｈ−４）４．７１５　（ｄ 、ＩＨ，Ｈ−１’　）、４．２５７　（ｄ。

ＩＨ，Ｊｌ、２　８．ＯＨ２，Ｈ１）　、３．８２７　（ｓ、３Ｈ９ＣＯ２ＣＨ ｓ）３．３２０　（ｄ　ｄ、Ｉ　Ｈ，Ｊｔ、ｓ　１０．ＯＨｚ。

Ｈ２）　、　２．２３０　（ｔ、　Ｊ　７．５Ｈｚ、ＣＨｚ　ＣＯり、２゜０８ ０．２．０５０．２．０２０．２．０１０．１．９７０゜（６ｓ、１８Ｈ，６０ Ａｃ）、１．６００　（ｍ、４Ｈ。

メチレン類）、１．２５０　（ｍ＋　８８．　メチレン類）。

８．８−メトキシカルボニルオクチル　β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ→３ ）−０−２−アジド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２０ｂ ）の製造 触媒量の、ナトリウムメトキシドのメタノール中希薄溶液を化合物１９（０，０ ４５ｇ、０．０６４ミリモル）のメタノール（２ｍＬ）中溶液に加えた。２２° Ｃで５時間後、ダウエックス５０ＷＸ８（Ｈゝ形）による中和、及び濾過を行い 、その溶剤を真空蒸発させると、純粋な２０ｂ（３０ｍｇ１８８％）が得られた ：　［α］。ロー１１．７゜（ｃ　Ｏ，６５，Ｈ２０）’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、（Ｃ Ｄｓ　ＣＤ、ＤＯＨ；４．８０）；δ４．４５　（ｄ、ＩＨ，Ｊ　７．０Ｈｚ） 及び４．３４　（ｄ、ＩＨ，８７，５Ｈｚ）　；Ｈ−１及びＨ−１’　３．６１ 　（ｓ、Ｃｏｔ　ＣＨ，）、２．２７　（ｔ、２Ｈ。

Ｊ　７．５Ｈｚ、ＣＨ，Ｃ０２）、　１．５８　（ｍ、４Ｈ，’）及び１゜３０ 　（ｍ、８Ｈ）：メチレン類。

Ｃ，８−メトキシカルボニルオクチル　β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ→３ ）−０−２−アミノ−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２０Ｃ ）の製造 化合物２０ｂ　（０，０１８ｇ、０．０３４ミリモル）をメタノール（２ｍＬ） 中、炭素担持５％パラジウムの存在下で大気圧において６時間水素化した。セラ イト（Ｃｅｌｉ　ｔｅ）を通して濾過した後、溶剤を蒸発させ、その残分を溶離 剤としてクロロホルムとメタノールとの混合物を用いてイアトロビーズ（２ｇ） によるクロマトグラフに掛けると、純粋な化合物２０ｃが得られた；　〔α）　 ＤｌＧ−４，２°　（ｃ　Ｏ，４８，Ｈｚ　Ｏ）　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ。

（Ｄ、ｏ；於４．８０）；δ４．５６及び４．４８（２ｄ、各々ＩＨ，、Ｊ　７ ．５Ｈｚ）　：Ｈ−１及びＨ−］’　３．７０　（ｓ。

ＣＯ□ＣＨ，）、　２．９０　（〜ｔ＋　Ｉ−Ｉ（＋　Ｊ　９．５Ｈｚ、Ｈ−２ ）　、　２．４２　（ｔ、２Ｈ，Ｊ　７．５Ｈ２，ＣＨ２Ｃ０２）。

１．６２　（ｍ、４Ｈ，）及び１．３５　（ｍ、８Ｈ）：メチレン類。

Ｄ、８−メトキシカルボニルオクチル　β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ→４ ）−０−２−アジド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２２ｂ ）の製造 触媒量の、ナトリウムメトキシドのメタノール中希薄溶液を化合物２１　（０， ０２７ｇ、　０．３８ミリモル）のメタノール（２ｍＬ）中溶液に加えた。２２ °Ｃで５時間後、ダウエックス５０ＷＸ　８　（Ｈ”形）による中和及び濾過を 行い、その溶剤を真空蒸発させた。その残分を溶離剤としてクロロホルムとメタ ノールとの６５　：　３５混合物を用いてイアトロビーズによるクロマトグラフ に掛けると化合物２２ｂ（０，０１９ｇ、９２％）が得られた：（α）”ｏ　１ ２．４°　（ｃ　Ｏ，７３，ＣＨｓ　ＯＨ）　；’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、（ＣＤｓ　 ＯＤ、ＤＯＨ：於４．８０）：δ４．３２　（ｄ、ＩＨ，Ｊ　７．５）１ｚ）及 び４．３０（ｄ。

ＩＨ，Ｊ　８．０Ｈｚ）　：Ｈ−１及びＨ−１’　、　３．６０　（ｓ。

Ｃ０２ＣＨｓ）、３．１３　（ｄｄ、Ｊｌ、ｓ　８．ＯＪｌ、＄　１０゜０Ｈｚ 、　Ｈ−２）　、　２．４７　（ｔ、２Ｈ，Ｊ　７．５Ｈｚ。

ＣＨｚ　Ｃｏｔ）、１．５６　（ｍ、４Ｈ，）及び１．２９（ｍ。

８Ｈ）：メチレン類。

Ｅ、８−メトキシカルボニルオクチル　β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ→４ ）−０−２−アミノ−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２２Ｃ ）の製造 化合物２２ｂ　（０，０１６ｇ、０．２９ミリモル）をメタノール（５ｍＬ）中 、炭素担持５％パラジウム（１０ｍｇ）の存在下で２２°Ｃにおいて５時間水素 化した。セライトを通して濾過した後、溶剤を蒸発させ、その残分を溶離剤とし てクロロホルムとメタノールとの８：２混合物を用いてイアトロビーズ（２，５ ｇ）によるクロマトグラフに掛けると、純粋な２２ｃ（０，０１３ｇ、８６％） が得られた。［α］２°Ｉ、２．８°　（ｃ、０．４２、Ｈ２Ｏ）。

Ｆ、８−メトキシカルボニルオクチル　β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ→４ ）−０−２−デオキシ−２−プロピオンアミド−β−Ｄ−グルコピラノシト（化 合物２２ｄ）の製造 化合物２１　（０，０１７ｇ、　０．０３２ミリモル）をメタノール（８ｍＬ） 中、炭素担持５％パラジウム（５ｍｇ）の存在下で大気圧において８時間水素化 した。セライトを通して濾過し、そして溶剤を蒸発させた後、その残分を若干の トリエチルアミン（０，１５０ｍＬ＞を含有するメタノール（３ｍＬ）に溶解し た。無水プロピオン酸（０，１５０ｍＬ）を加え、その混合物を２２°Ｃにおい て４時間撹拌し、その後溶剤を蒸発させ、乾固させた。その残分をピリジンと無 水酢酸との２＝１混合物（４ｍＬ）中で２２°Ｃにおいて１８時間アセチル化し た。メタノールの添加後、その混合物を常法の如く処理し、そして溶剤を蒸発さ せた後にその残分を溶離剤として酢酸エチルとへキサンとのｌ：ｌ混合物を用い てシリカゲルによるクロマトグラフに掛けると、化合物２２ｄの純粋なヘキサ− ０−アセテートが得られた；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、（ＣＤＣＬＩ）：５．５０　 （ｄ、ＩＨ，Ｊ　９．５Ｈｚ、　ＮＨ）　、　５．３２　（〜ｄ。

Ｊ、＜’　３．５Ｈｚ、　Ｈ−４’　）　、　５．０７　（ｍ、２Ｈ，Ｈ−２′ 及びＨ−３）、４．９３　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ２．、、．１０゜０Ｈｚ、　Ｈ−３ ’　）　、　４．２５　（ｍ、３Ｈ，Ｈ−１及びＨ−１７を含ム）　、３．６３ 　（ｓ、Ｃｏｘ　ＣＨｚ）、２．２５７ｃｔ、２Ｈ，Ｊ　７．５．ＣＨ２Ｃ０２ ）、２．１３７　（ｄｑ。

Ｊｌ、０及び７．５Ｈｚ、ＮＨＣＨｚ）、　２．１１．２．０７．２゜０２　（ ３）、１．９３　（４ｓ、１．２Ｈ，６０Ａｚ）、１゜５４０　（ｍ、４Ｈ）及 び１．２５　（ｍ、８Ｈ）：メチレン類、１．０９　（ｔ、２Ｈ，ＮＨＣＨｚ　 ＣＨ，）。

上記のジサッカリドを触媒量のナトリウムメトキシド溶液を含有する乾燥メタノ ール（ｌ　ｍＭ）中で脱０−アセチル化した。ダウエックス５０ＷＸ８（Ｈ＋形 ）樹脂による中和及び濾過後、溶剤を蒸発させると、後に純粋な２２ｄが残った ；　Ｃａ）　”ｏ　−１８，０’　（ｃ　Ｏ，４３゜ＣＨｓ　ＯＨ）；　’Ｈ− ｎ、ｍ、ｒ、（ＣＤｓ　ＯＤ、Ｄ。

Ｈ＝於４．８０）：δ４．３６　（ｄ、Ｉ　Ｈ，Ｊ　８．０ｆ（ｚ）及び４．３ ３　（ｄ、ＩＨ，Ｊ　７．５Ｈｚ）　：Ｈ−１及びＨ−Ｆ、　３．６０　（ｓ、 　Ｃｏｗ　ＣＨ，）、　２．２６　（ｔ、　２Ｈ。

Ｊ　７．５Ｈｚ、ＣＨｔ　Ｃ０２）、　２．１８　（Ｑ、２Ｈ，Ｊ　７゜５Ｈ２ ，ＮＨＣＯＣＨ２）、１．５１　（ｍ、４Ｈ，）及び１．２６　（ｍ、８Ｈ）： メチレン類、　１．０９　（ｔ、３Ｈ，ＮＨＣＯＣＨ２ＣＨｚ）。

実施例２−シアリル化トリサツカリド（化合物１１ｂ、１１ｃ及び１ｉｄ）の合 成 Ａ、８−メトキシカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ −Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノシロン酸（ｎｏｎｕｌｏ ｐｙｒａｎｏｓｙｌｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）　）　−（２−＄　３　）　−〇−（ β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（Ｉ→４）−０−（２−アジド−２−デオキシ −β−り一グルコピラノシト（トリサツカリド１ｌｂ）の製造 トリサツカリド４（２８，８ｍｇ、０．２４ミリモル）を酢酸エチル（１，５ｍ Ｌ）中、炭素担持５％パラジウムの存在下で２２°Ｃにおいて１時間水素化して 中間体遊離酸を得た。［α］Ｄ２０１８．６°　（ｃ、０．３、クロロホルム） 。

この生成物を触媒量のナトリウムメトキシドを用いてメタノール中、２２°Ｃに おいて１６時間脱０−アセチル化し、そして回収された物質をバイオゲル（Ｂｉ ｏＧｅｌ）　Ｐ　２によるクロマトグラフに掛けると、トリサツカリド１１ｂ（ １０，４ｍｇ、５５％）が得られた。［α］Ｄ２０−６．５°　（ｃ、０．１７ 、水）。’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、データーは前記表Ｉ＋に示される。

８．８−メトキシカルボニルオクチル（ベンジル−５−アセトアミド−４，７， ８，９−テトラ−〇−アセチルー３．５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ− ガラクトー２−ノヌロピラノシロネート）−（２→３）−０−（２，４，６−ト リー〇−アセチルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（ｌ→４）−０−（６−０ −アセチル−２−アミノ−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド）（トリサ ツカリド９）の製造 ピリジン（３２ｍＬ）、水（４，８ｍＬ）及びトリエチルアミン（１，３ｍＬ＞ の混合物中のトリサツカリド４（４００ｍｇ、０．３２ミリモル）の溶液に硫化 水素を通して泡立てる。２２°Ｃにおいて１６時間後、この混合物を乾固するま で蒸発させ、次いてトルエンと共に同時蒸発を行って粗トリサツカリド（４３０ ｇ）を得る。この物質の一部（８５，９ｍｇ、０．０７ミリモル）をクロマトグ ラフ（ｌＯ・ｌトルエン：エタノール）に掛けると、トリサツカリド９（５５ｍ ｇ、７０％）が得られる。〔α）、＋２５゜９°　（ｃ　Ｏ，２２，ｃｈｌｏｒ ｏｆｏｒｍ）　；　’Ｈ−ｎ、　ｍ、ｒ。

（ＣＤＣ１，）：δ５．４８０　（ｍ、Ｈ−８”　、　５．４２　（ｄ。

Ｊ　１２．５　Ｈｚと重り合う、ベンジル化合物）、５．３４０（ｄｄ、ＩＨ， Ｊｇ−７・２．５．　Ｊｔｌ、ｓ−８，５Ｈｚ、　Ｈ−７”　）、５．０５２　 （ｍ、ベンジル化合物（ｄ）及びＨ−２’　ｄｄ　（Ｊ＋　２８．０．Ｊ２２１ ０．ＯＨｚを含む）５゜０００　（ｄｄ、ＩＨ，、Ｌ　４３．５Ｈｚ、Ｈ−４’ 　）、４゜４９０　（ｄ、ＩＨ，Ｊ　ｌＯ，ＯＨｚ、ＮＨ）、４．８６０（ｄｄ ｄ、ＩＨ，Ｊ３−−−．４−　４．５．、Ｌ、−４，１２，０゜Ｊ４−６−　１ １．０Ｈｚ、　Ｈ４”　）　、４．６４０　（ｍ、、２Ｈ。

Ｈ−１゛及びＨ−３°を含む）　、　３．６６０　（ｓ、３Ｈ。

０ＣＨｓ）、２．７８０　（ｄ　ｄ、Ｊｔ、ｓ　８．５Ｈｚ　Ｈ２）　。

２．６０４　（ｄ　ｄ、ｌ　Ｈ９Ｊｓ−−−、ｓ・−１３，０Ｈｚ）、２．３０ ０　（ｔ、Ｊ　７．　５Ｈｚ、ＣＨｔ　ｃｏｔ）、２．２６０．　２．１７０． ２．１１５，２．０８０　（３）、２．０５０，１．９８５゜１．８３０　（７ ｓ、２７Ｈ，８０Ａｃ、Ｉ　ＮＡｃ）。

１．６７　（ｔ、ＩＨ，Ｊｓ、−、、ｓ−、、１２，５）１ｚ、Ｊ　Ｈ３ａｘ） 、１．６００　（ｍ、６Ｈ，メチレン類）、１．２４０（ｍ、８Ｈ，メチレン類 ）。

０．８−メトキシカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ −Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクトー２−ノヌロピラノシロン酸）−（２→３） −０−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（ｌ→４）−０−（２−アミノ−２− デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（トリサツカリド１ｌｃ）の製造 純粋なトリサツカリド９（５３ｍｇ、０．０４ミリモル）の溶液をメタノール中 、炭素担持５％パラジウムの存在下、２２°Ｃにおいて１時間水素化する。触媒 を濾過し、メタノールを蒸発させると酸中量体（４４ｍｇ）が得られる。［ｆｆ ］ｏ＋１１．３°　（ｃ、０．２２、水）。この化合物を触媒量のナトリウムメ トキシドを用いてメタノール中、２２°Ｃにおいて２４時間脱０−アセチル化す る。酢酸による中和後に得られる溶液を蒸発させると後に物質か残り、これをバ イオゲルＰ２によるクロマトグラフィーで精製してｌ・リサッカリド１１　ｃ　 （２９，５ｍｇ、９９％）を得る。［ｃｒ］ｏ　５．５°　（ｃ、０．２２、水 ）。

’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、のデーターは前記の表ＩＩに示される。

Ｄ、８−メトキシカルボニルオクチル（ベンジル−５−アセトアミド−４，７， ８，９−テトラ−〇＝ニアセチル−３，５−ジデオキシＤ−グリセロ−α−Ｄ− ガラクトー２−ノヌロビラノシロネー））−（２→３）−０−（２，４，６−） ソー０−アセチルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（ｌ→４）−０−（６−０ −アセチル−２−デオキシ−２−Ｎ−プロピオンアミド−β−Ｄ−グルコピラノ シド）（トリサツカリド１０）の製造粗アミノ化合物９　（９８ｍｇ、　０．０ ８ミリモル）をピリジンと水との混合物（ピリジン／水比、約１０：１）中のそ のトリサツカリド化合物９の溶液に無水プロピオン酸を１０分間にわたり滴下す ることによってＮ−プロピオネート化する。この混合物を２２℃において一晩撹 拌し、真空蒸発させ、そしてトルエンと同時蒸発させると後に残分が残り、これ をクロマトグラフ（１００：１０のトルエン：エタノール）に掛けるとトリサツ カリドｌ０（７５，４ｍｇ、７１％）が得られる。（（Ｚ）　ｏ　＋１０゜３° 　（ｃ　Ｏ，１７，りｏｏホルム）；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ。

（ＣＤＣＩｇ）：δ７．４００　（ｍ、５Ｈ，芳香族化合物）。

５．５４３　（ｄ、ＩＨ，Ｊ　７．５Ｈｚ、　ＮＨ）、　５．４８０（ｍ、ＩＨ ，Ｈ−８”）、５．４４０　（ｄ、ＩＨ，Ｊ　１２、５　Ｈｚベンジル化合物） と重り合う、　５．３４１　（ｄｄ。

ＩＨ，Ｊａ・７−　２．５．　Ｊｔ−、＊−８，５Ｈｚ、　Ｈ７”　）　、４９ ０−５．０００　（ｍ、３Ｈ，ベンジル化合物（５，０５１゜ｄ、Ｊ　１２．５ Ｈｚ）、Ｈ−２’　（５，０３８，ｄｄ。

Ｊｌ　２８．０９　Ｊｔ　８１０．０Ｈｚ）、及びＮＨ（ｄ、Ｊｌ　０、５　Ｈ ｚ）を含む）、４．８５９　（ｄｄｄ、ＩＨ。

Ｊｌ−＊＊、４−　４．６．Ｊｌ−ａｍ、４−１２．５．Ｊａ−、＊２１０．５ Ｈｚ。

Ｈ−４”　）　、　４．６１０−４．６９　（ｍ、　２Ｈ，Ｈ−ビ（ｄ）及びＨ −３’　（ｄｄ）を含む）　、　３．５８−３．７０（ｍ、２Ｈ，ＯＣＨ＊　（ ｓ、３．６６８）を含む）、２．６０２　（ｄ　ｄ、Ｉ　ＨｌＪ　ｘ、＊＊、ｓ 、−１２−５Ｈｚ、Ｈ３”ｅＱ）、２．１５０−２．３３０　（ｍ、ＩＯＨ，１ ｎｃｈ、。

ＣＨ２ＣＯ２（ｔ、Ｊ　７．５Ｈｚ）、ＮＨＣＯＣＨｚ　（ｑ。

Ｊ　７．５　Ｈｚ）及びアセチル化合物（２，２６０，２，＋　８０゜２ｓ）） 、２．０８８　（４）２．０６８，１．９８７．１．８３８　（４ｓ、２１Ｈ， アセチレン化合物）、１．６６２　（ｔ。

ＩＨ，Ｈ−３”　ａｘ）、１．５７０　（ｍ、６Ｈ，メチレン類）　、　１．２ ４０　（ｍ、８Ｈ，メチレン類）、１．１３０（ｔ、３Ｈ，ＣＨＣ２ＣＨＩ）。

Ｅ、８−メトキシカルボニルオクチル（５−アセトアミｌ’−３，５−ジデオキ シ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクトー２−ノヌロピラノシロン酸）−（２→３ ）−０−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（ｌ→４）−０−（２−デオキシ− ２−Ｎ−プロピオンアミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（ｌｉｄ）の製造 トリサツカリド１０　（７１ｍｇ、　０．０５５ミリモル）をトリサツカリドｌ ｌｃの合成において示したのと同じようにして水素化して中間体生成物（６４ｍ ｇ、９７％）を得る。［α１．−２２．６°　（ｃ、０．２３、クロロホルム） 。この物質を常法の通りに脱Ｏ−アセチル化し、その回収された物質をバイオゲ ルＰ２によるクロマトグラフに掛けると、トリサツカリドｌｉｄ（３９ｍｇ、８ ３％）が得られる。［α］、−８，５°　（ｃ、０．２、水）。

’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、のデーターは前記の表１■に示される。

実施例３−予備フコシル化 ｉ、ＧＤＰ−フコースの合成 テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムヒドロキシド（４０％ｗ／ｗ水溶液、約１５０ 　ｇ）を燐酸（８５％ｗ　／　ｗ水溶液、１８ｇ、０．１５５ミリモル）の水（ １５０ｍＬ）中溶液にｐＨが７に達するまで滴下した。次いで、水を真空蒸発さ せてシロップを得、これを乾燥アセトニトリル（２ｘ４００ｍＬ）、続いて乾燥 トルエン（２Ｘ４００ｍＬ）と共に同時蒸発させた。得られた白色固体（７５ｇ ）を真空乾燥し、使用時まで五酸化燐上で真空の下において貯蔵した。

ビス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）水素ホスフェ−１−（５８ｇ、１２７ ．８ミリモル）の乾燥アセトニトリル（３００ｍＬ）中溶液を分子篩（４人、２ ０ｇ）の存在下、窒素の下で室温において約１時間撹拌した。トリー〇−アセチ ル　フコシル−１−プロミド（ヌネッッ等６６の方法でＬ−フコーステトラアセ テート３１ｇ、９３ミリモルから製造したばかりのもの）の乾燥トルエン（１０ ０ｍＬ）中溶液を０°Ｃにおいて冷却された上記の溶液に約０．５時間で滴下し た。Ｏ″Ｃにおいて１時間以上経過した後、その混合物を室温にもたらし、３時 間撹拌した。ｔ、１．Ｃ，（１：１のトルエン：酢酸エチル）は基線（ｂａｓｅ 　１ｉｎｅ）上に主スポットを、そして幾つかのもっと早く移動するもっと小さ いスポットを示した。

この混合物をセライトのパッド（アセトニトリルで更に洗浄したもの）を介して 濾過し、そしてその溶剤を真空蒸発させて赤色のシロップを得た。この物質を水 （４００ｍＬ）に溶解し、そして酢酸エチル（２５０ｍＬ、２回）て抽出した。

次に、その水性層を真空蒸発させると後に黄色がかったシロップが残り、これに 水酸化アンモニウム溶液（２５％水溶液、２００　ｍＬ）を加えた。この混合物 を室温で３時間撹拌し、その後ｔ、１．ｃ、（６５：３５：８のクロロホルム： メタノール：水）は基線スポットを示した。その溶剤を真空蒸発させて黄色がか ったシロップを得、これを水（４００ｍＬ）で希釈した。

この溶液のｐＨをチェックし、必要あれば少量の塩化水素の添加によりＩ）Ｈ７ にした。この溶液をイオン交換樹脂・ダウエックス２×８０カラム［２００〜４ ００メツシユ、５Ｘ４５ｃｍ、この樹脂のメタノール（８００ｍＬ）、水（１２ ００ｍＬ）、重炭酸アンモニウム（ＩＭ、１６００ｍＬ）及び水（１２００ｍＬ ）による逐次洗浄によって調製された重炭酸塩形コにゆっくり吸着させた。次に 、このカラムを通して水（１０００ｍＬ）、続いて重炭酸アンモニウム溶液（０ ，５Ｍ、２．３　ｍＬ／分、−晩）を流した。溶離液を複数画分（１５ｍＬ）に 分けて採集し、生成物をｔ。

１、ｃ、プレート上にスポットを形成させた後炭化させることによって検出した 。両分２０〜５７をプールし、真空蒸発させると後に白色固体が残った。この固 体を更に水（３Ｘ３００ｍｌ）と共に同時蒸発させ、最後の５０１１１１を凍結 乾燥し、次いでその残分を真空ポンプを用いて乾燥してβ−Ｌ−フコピラノシル ー１−ホスフェート（９，５ｇ、４０％）を、　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、スペクトル 中、δ＝１．９４０におけるシングレットによって同定される若干の酢酸アンモ ニウムを含有するβアノマーとαアノマーとの１２：１混合物として得た。この 生成物をダウエックス５×８樹ｌ１ｌ（１００〜２００メツシユ、トリエチルア ンモニウム形）のカラムを通してゆっくり流し、そして水で溶離させると、溶離 液の凍結乾燥後β−Ｌ−フコピラノシル−１−ホスフェートのビス−トリエチル アンモニウム塩が粘着性のガムとして得られた。

’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、δ：４．８４０　（ｄｄ、Ｊｌ、２　＝Ｊ＋、ｐ　＝７．５ Ｈｚ、Ｈｌ）　、３．８２　（Ｑ、Ｉ　Ｈ，Ｊｓ、ｓ６．５Ｈｚ、Ｈ５）、３． ７５０　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｓ、＜　３．５゜Ｊ、、、１．０）１ｚ、Ｈ−４）　 、３．６７９　（ｄｄ、Ｉ　Ｈ。

＋２．２　＋０．ＯＨ２，Ｈ３）　、３．５２０　（ｄｄ、　ＩＨ，Ｈ−２）　 、　１．９４０　（Ｓ、アセテート）、　１．２６　（ｄ、　Ｈ−６）、３．２ ０　（ｑ、＋７．４Ｈｚ、ＮＣ旦、）と１゜２８０及び１．２６０　（ＮＣＨ２ ＣＨｓ及びＨ−６）における信号の積分はその生成物が大規模に乾燥すると一部 のトリエチルアンモニウムを放す可能性のあるビス−トリエチルアンモニウム塩 であることを示している。＋”Ｃ−ｎ、ｍ、ｒ、δ：　９８．３　（ｄ、Ｊｃ、 、Ｐ　３．４Ｈ２，Ｃ−１）、７２．８　（ｄ、ＪＣ，２Ｐ　７．５Ｈ２，Ｃ− ２）、１６．４（Ｃ−６）；　”Ｐ−ｎ、ｍ、ｒ、δ；＋２．６（Ｓ）。

β−Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェートは水中、２２°Ｃにおいて長期間貯 蔵すると（１日以上）ゆっくり分解して行く模様であり、従ってこの物質は２２ °Ｃ以上の温度において水溶液として放置し、取り扱い又は貯蔵すべきてはない 。本発明の場合、この物質を一１８°Ｃに保ち、五酸化燐上て真空乾燥した後火 の工程で使用した。

グアノシン　５“−（β−１−フコピラノシル）−ジホスフェートはβ−Ｌ−フ コピラノシルー１−ホスフェートから以下に記載するこの技術分野で認められて いる２つの異なる手法を用いて製造した。

手法＃ｌ β−Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェートとグアノシン　５′−モノ−ホスホ モルホリゾート［４−モルホリン−Ｎ、Ｎ“　−ジシクロへキシル−カルボキサ ミジン塩、ミズーリー州（Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）　、セントルイスのシグマ社から 入手、“ＧＭＰ−モルホリゾート”］とをヌネッツの元々の手法６６の最近の修 正法＠４６６に記載されるように反応させた。よって、トリーｎ−オクチルアミ ン［０，８００ｇ、ウィスコンシン州（Ｗｉｓｃｏｎｓ　ｉｎ）、ミルウォーキ ー（Ｍｉ　Ｉｗａｕｋｅｅ）のアルドリッチ・ケミカル社（Ａｒｄｒｉｃｈ　Ｃ ｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）から入手］をβ−Ｌ−フコピラノシルー１− ホスフェート（トリエチルアンモニウム塩、１．ｏＯｇ、約２．２０ミリモル） の乾燥ピリジン（１０ｍＬ）中温合物に窒素下で加え、次いで溶剤を真空下で除 去した。このプロセスを乾燥空気だけがそのフラスコに入るように注意しながら ３回繰り返した。ＧＭＰ−モルホリゾート（２，４ｇ、約３．３０ミリモル）を 乾燥ジメチルホルムアミドとピリジンとのｌ：１混合物（ｌＯｍＬ）に溶解させ た。それら溶剤を真空蒸発させ、そしてこの手順を上記のように３回繰り返した 。その残分を同し溶剤混合物（２０ｍＬ）に溶解し、その溶液を粉砕された分子 篩（２ｇ、４人）が加えられた前記の反応フラスコに加えた。この混合物を窒素 下、室温において撹拌した。ｔ、１．Ｃ，（水酸化アンモニウム、イソプロパツ ール及び水の３：５：２の２５％水溶液）は出発ＧＭｐ　−モ／Ｉ、ホリデート （Ｒｆ−０，８、Ｕ、Ｖ、）　、グアノシン　５゛−（β−１−フコピラノシル ）−ジホスフェート（Ｒｆ〜０．５、Ｕ、Ｖ、及び炭化）に相当するスポットを 、続いて出発フコース−１−ホスフェート（Ｒｆ〜０．４４、炭化）の尾引きス ポットを示した。Ｕ、Ｖ。

活性の追加スポットも僅かに存在していた。室温において４日間撹拌した後、そ の黄色がかった混合物をトルエンと共に同時真空蒸発させ、そしてその黄色がが った残分を更に真空ポンプて一晩乾燥すると後に粘稠な残分（２，４３ｇ）が残 った。次に、そのフラスコに水（１０ｍＬ）を加えて黄色の曇った溶液を得、こ れをＡＧ５０Ｗ−ＸＩ２（バイオラド社から入手）樹脂のカラム（１００〜２０ ０メツシユ、２５　Ｘｌ、　５ｃｍ、　Ｎａ”形）の頂部に加えた。生成物を気 孔率後に水で溶離させた。ｔ、１゜Ｃ，プレート上にスポットを形成させた後に Ｕ、Ｖ、と炭化の両者により両分（これは活性であった）を回収し、その溶液を 真空下で一晩凍結乾燥すると粗製物質（１，９６ｇ）か得られた。

この残分を水（１０ｍＬ、総量）に溶解し、そして水、メタノール及び水（各２ ５０＋ｎＬ）で洗浄することによって状態調節された疎水性Ｃ１１シリカゲルの カラム（ウォータース社、２．５　ｘ　３０　ｃｍ）にゆっくり吸着させた。次 に、二〇カラムを通して水を流しく０．４　ｍＬ／分）、溶離液を複数画分（０ ，８ｍＬ）として採集し、それら画分をｔ。

１、ｃ、（水酸化アンモニウム、イソプロパツール及び水の３：５：２の２５％ 水溶液）でチェックした。β−Ｌ−フ：ｌピラ）シル−１−ホスフェート（Ｒｆ −０，５４、炭化）は両分２９〜４５に溶離された。強いＵ、Ｖ、活性スポット （Ｒｆ−０，５１）を示す生成物は主として両分４６〜６５に溶離させた。Ｒｆ が以上のものより大きいか又は小さいその他の少量のＵ、Ｖ、活性スポットが観 察された。グアノシン　５′　＝（β−■−フコピラノシル）−ジホスフェート （Ｒｆ〜０．６２）を含有する両分５９〜８６はまた狭いＵ、Ｖ、活性スポット （Ｒｆ〜０．５７）を示した。両分５９〜８６をプールし、−晩凍結乾燥すると グアノシン　５゛−（β−１−フコピラノシル）−ジホスフェートに富んだ物質 ０．３５３　ｇが得られた。　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、は、この物質はδ＝４．１２ 及びδ＝５．０５に信号を与える少量の不純物で汚染されていることを示した。

画分２９〜４５及び画分４７〜５７を別個にプールし、凍結乾燥するとβ−Ｌ− フコピラノシルー■−ホスフェート（それぞれ０．２６４　ｇ及び０．２２３ｇ 、これらにおいて第二両分は若干の不純物を含有している）が回収された。適切 な両分をプールすると、時には、若干量のグアノシン　５′　＝（β−１−フコ ピラノシル）−ジホスフェートが高純度（’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、）で得られた。

一般的には、グアノシン　５°　−（β−１−フコピラノシル）−ジホスフエ− １・に富んだ物質を全て最低量の水に溶解し、大量のメタノールで、続いて水で 洗浄することによって再生された同じカラムに流した。精製されたグアノシン　 ５゛−（β−１−フコピラノシル）−ジホスフェー１−　（ｔ、１．ｃ、）を含 有する両分をプールし、真空下で凍結乾燥すると後に白色のふあふあした物質（ １８７ｇ、１６％）が残った。　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、は前記で報告したデーター ５５と同一であった。

手法＃２ β−Ｌ−フコピラノシル＝１−ホスフェート及びグアノシン　５′−モノホスモ ルホリゾート（４−モルホリン−Ｎ、Ｎ’　−ジシクロへキシル−カルボキサミ ジン塩−“Ｇ　Ｍ　Ｐ−モルホリゾート”）を前記の元々の手法＄５に示される 通りに乾燥ピリジン中で反応させた。よって、β−Ｌ−フコピラノシルー１−ホ スフェート（トリエチルアンモニウム塩、０．５２８ｇ、約１．１８ミリモル） を乾燥ピリジン（２０ｍＬ）に溶解し、そして溶剤を真空下で除去した。このプ ロセスを乾燥空気だけがそのフラスコに入るように注意しなから３回繰り返した 。ＧＭＰ−モルホリゾート（１，２ｇ、約１．６５ミリモル）及びピリジン（２ ０ｍＬ）をその反応フラスコに加え、その溶剤を真空蒸発させ、そしてこのプロ セスを上記のように３回繰り返した。その最終残分にピリジン（２０ｍＬ）を加 え、その不均質混合物を窒素下、室温において３〜４日間撹拌した。この結果、 不溶物か形成され、これは時には音波処理で粉砕しなければならなかった。

この反応の後にｔ、１．ｃ、を行い、そして第一手法に示したように処理してＧ ＤＰ−フコース（１２０ｍｇ。

１６％）を得た。

ｉｉ、酵素反応条件 βＧａ１（１→３／４）βＧＩｃＮＡｃ　α（１−＋３／４）フコシルトランス フェラーゼをパルシック等■が記載するＧＤＰ−ヘキサノールアミンセファロー スによるアフィニティークロマトグラフィーを用いる方法に従ってヒトの乳から 精製した。この酵素反応はプラスチック管中で３７°Ｃにおいてナトリウム力コ ディレート緩衝液（１００ｍＭ、　ｐＨ６，５）　、ＭｎＣ１２（１０ｍＭ）　 、ＡＴＰ　（１，６ｍＭ）　、　ＮａＮ２（１，６ｍＭ）を用いて行った。最終 反応混合物をＨ２０（５ｍＬ）で希釈し、そして既報■のようにＣＩ８セブーパ ックカートリッジに適用した。

Ｈ２０（３０ｍＬ）で洗浄後、その生成物をＣＨｔＯＨで溶離させ、それらの溶 剤を蒸発させた。その残分をＣＨＣｌ５　、ＣＨ２０Ｈ及びＨ，Ｏの６５　：　 ３５　：　５混合物に溶解し、そしてイアトロビーズ（０，２００〜０．５００ ｇ）の小さなカラムに適用した。同じ溶剤混合物で洗浄した後、生成物を同じ溶 剤の６５　：　３５　：　８混合物適切な両分（ｔ、１．ｃ、）をプールし、溶 剤を真空蒸発させ、その残分をＨ，Ｏ中のＡＣ３０ＷＸ８　（Ｎａ”形）（バイ オラド社）の小さなカラムを通して流し、そして生成物を真空下での凍結乾燥後 に回収した。それらテトラサツカリドの’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、データーは前記の表 ＩＩに示されている。

ｉ　ｉ　ｉ、　フコシル化反応 Ａ、８−メトキシカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３，５−ジ−デオキ シ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクトー２−ノヌロピラノシロン酸）−（２→３ ）−０−［β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（ｌ→４）−０−［α−Ｌ−フコピ ラノシル−（ｌ→３）−０］　−（２−アジド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコ ピラノシド）（テトラサツカリド１２ｂ）の製造 トリサツカリドｌ　ｌ　ｂ　（７，７ｍｇ）　、ＧＤＰ−フコース（１８ｍｇ） 、フコシルトランスフェラーゼ（２０ｍｕ）及び子ウシの腸のアルカリ性ホスフ ァターゼ（ＩＯＵ）を緩衝液（２ｍＬ）中て７２時間インキュベートした。単離 及び精製するとテトラサツカリド１２ｂ（２，８４ｍｇ）が得られた。

８．８−メトキシカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３，５−ジ−デオキ シ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクトー２−ノヌロピラノシロン酸）−（２→３ ）−０−［β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（ｌ→４）−０−［α−Ｌ−フコピ ラノシル−（ｌ→３）　−０］　−（２−アミノ−２−デオキシ−β−Ｄ−グル コピラノシド）（テトラサツカリド１２Ｃ）の製造 トリサツカリドｌ　１　ｃ　（８，４ｍｇ）　、ＧＤＰ−フコース（１８ｍｇ） 、フコシルトランスフェラーゼ（２０ｍＵ）及び子ウシの腸のアルカリ性ホスフ ァターゼ（ＩＯＵ）を緩衝液（２ｍＬ）中で６７時間インキュベートした。単離 及び精製するとテトラサツカリド１２　Ｃ（２，４６ｏ＋ｇ）が得られた。

Ｃ，８−メトキシカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３，５−ジ−デオキ シ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクトー２−ノヌロピラノシロン酸）−（２→３ ）−０−［β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−（ｌ→４）−０−［α−Ｌ−フコピ ラノシル−（ｌ→３）−０１−（２−Ｎ−プロピオンアミド−２−デオキシ−β −Ｄ−グルコピラノシド）（テトラサツカリド１２ｄ）の製造トリサツカリド１ １　ｄ　（８，３ｍｇ）　、　ＧＤＰ−フコース（１８ｍｇ）、フコシルトラン スフェラーゼ（１８ｍｌ）及び子ウシの腸のアルカリ性ホスファターゼ（ＩＯＵ ）を緩衝液（２ｍＬ）中で７２時間インキュベートした。単離及び精製するとテ トラサツカリド１２　ｄ　（６，１７ｍｇ）が得られた。

実施例５−人工抗原の合成 グリコシド部分に適切な官能基を有するシアリルルイス１類似体は１種又は２種 以上の相補性官能基を有する抗原性キャリアーにこの技術分野で公知の手法に従 ってコンジュゲートさせることができる。使用される結合化学的方法に依存して 、シアリル基及びフコシル基をコンジュゲートされるべきサツカリドに含めるこ とができ、即ちβＧａｌ　（１−”４）βＧｌｃＮＡｃ誘導体をコンジュゲート させ、得られたコンジュゲートをシアリル化及びフコシル化してシアリルルイス １類似体をあたえることができる。

具体的に述べると、構造２２ｂのようなジサッカリドグリコシドのＢＳＡ、ＫＬ Ｈ又は他のキャリアーへのコンジュゲート化はレミオークス等及びピント等の“ アシルアジド”法６１ｓ２のような手法で達成される。得られるコンジュゲート を次に前記の方法と同様の方法でシアリル化及びフコシル化し、その生成物を限 外濾過とゲル−濾過との組み合わせで精製して１種又は２種以上のシアリルルイ ス１類似体が結合された人工抗原を得る。

同様に、人工抗原を創製するのにＫＬＨ、ヒト血清アルブミン（Ｈ３Ａ）　、ジ フテリア又は破傷風の毒素、Ｓ一層等を含めて他の抗原性キャリアーを用いるこ とができる。同様に、βＧａｌ　（１−４）βＧ１ｃＮＡｃの他の誘導体を化合 物２２ｂに代えて用いられる抗原性キャリアーにコンジュゲート（カップリング ）させることができるだろう。

別法として、テトラサツカリド＋２ｂを１種又は２種以上の相補性官能基を有す る抗原性キャリアーにこの技術分野で公知の手法に従って直接コンジュゲートさ せることができる。例えば、テトラサツカリド１２ｂの−（ＣＨ２）、ＣＯ，Ｃ Ｈ□アグリコンはこれをヒドラジンとＮ２Ｏ４との反応で変性してそのエステル （ＣＯＯＣＨ，）をアシルアジド（−Ｃ（０）Ｎ、）に転化させることができる 。アシルアジドは次いで抗原性キャリアー上のアミノ官能基との反応で置換され 、その結果アルファーシアリル化オリゴサツカリドグリコシドはアミド結合を介 してキャリアーに結合せしめられる。

キャリアーは無数のアミン基を含有していることができるので、キャリアーは１ 種より多いシアリルルイス８誘導体を付加することができる。

実施例６−シアリルルイス３類似体を含有するアグレゲート（ａｇｇｒｅｇａｔ ｅ）の合成 リポソーム及びミセルのようなアグリゲートはシアリルルイス８類似体を組み込 むように製造することができる。具体的に述べると、シアリルルイス８類似体の そのようなアグリゲートへの組み込みはアグリコン部分がそのようなアグリゲー トに組み込まれるべく十分に疎水性であることを要する。このような疎水性アグ リコンは、サツカリドをアグリゲートに組み込む能力を改善すると思われるナフ チル、置換ナフチル、オクチル等のような種々の部分で延長されているー（ＣＨ ｔ）＊　Ｃ００ＣＨ。

を含むことができると考えられる。

このようなアグリゲートにおいて、シアリルルイス１類似体の疎水性アグリコン 基はアグリゲートの脂質部分に分配されて行き、これに対してテトラサツカリド 基は一般に水性相に分配される。

このようなアグリゲートの製造法はこの技術分野で周知である。例えば、本明細 書において引用、参照するものとする米国特許第４，５２２．８０３号明細書を 参照されたい。

更に、シアリルルイス１類似体は、代理人のドケットＮｏ、０００４７５−０１ １として、本出願と同時に出願された、“変性されたシアリルルイス８化合物” と題される米国特許出願第０７／８８７，７４７号明細書に開示される。上記の ように、この出願は本出願と同時に出願されたもので、その全体を本明細書にお いて引用、参照するものとする。

以上、本発明をここに十分に説明したが、当業者であれば、本発明はその範囲と 精神又は本発明の任意の態様に影響を及ぼすことなく、広いかつ均等な条件、パ ラメーター等の範囲内で実施することができることは分かるだろう。

本発明の前記実施方法の、医学、化学、生化学、免疫学及び／又は関連分野の当 業者に自明な修正は以下の請求の範囲の範囲内にあるものとする。

Ｆｉｇｕｒｅ　５ 胚 Ｆｉｇｕｒｅ　８ ↓ 柘 Ｆｉｇｕｒｅ　９ Ｂ、−１アルキル 補正書の写しく翻訳文）提出書（曲性＠１８４条の８）平成５年１２月９日

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ で表される化合物及びその製剤上許容し得る塩：ただし、式中の Ｒは水素、サッカリド、オリゴサッカリド又は少なくとも１個の炭素原子を有す るアグリコンより成る群から選択され； Ｒ１は水素、−ＮＨ２、−Ｎ２、−ＮＨＳＯ３Ｈ、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−Ｎ ＝Ｃ（Ｒ７）２、−ＮＨＣＨ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ８）２、−ＳＲ６、−Ｏ（Ｃ （Ｏ））ｐＲ９、フルオロ、クロロ、プロモ及びサルフェートよりなる群から選 択され、ここでＲ６は 水素、 場合によってヒドロキシ、クロロ、プロモ、炭素原子数１〜４個のアルコキシ、 フェニル、並びにヒドロキシ、炭素原子数１〜４個のアルキル、炭素原子数１〜 ４個のアルコキシ、クロロ、プロモ及びサルフェートよりなる群から選択される １〜３個の置換基で置換されたフェニルよりなる群から選択される１個又は２個 以上の置換基で置換されている炭素原子数１〜４個のアルキル、 アミノ酸残基又はポリペプチジル残基、−ＯＲ１０（ただし、Ｒ１０は炭素原子 数１〜４個のアルキル、又はヒドロキシル基で置換された炭素原子数２〜４個の アルキルである）、及び−ＮＲ１１Ｒ１２（ただし、Ｒ１１及びＲ１２は独立に 水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択される） よりなる群から選択され、 端Ｒ７は独立に水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択され 、 Ｒ３は独立に水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択され、 Ｒ３は 水素、 場合によってヒドロキシ、クロロ、プロモ、炭素原子数１〜４個のアルコキシ、 フェニル、並びにヒドロキシ、炭素原子数１〜４個のアルキル、炭素原子数１〜 ４個のアルコキシ、クロロ、プロモ及びサルフェートよりなる群から選択される １〜３個の置換基で置換されたフェニルよりなる群から選択される１個又は２個 以上の置換基で置換されている炭素原子数１〜４個のアルキル よりなる群から選択され、そして ｐは０又は１に等しい整数であり； Ｒ２は水素、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＲ１５Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、 −Ｎ＝Ｃ（Ｒ１４）２、−ＮＨＣＨ（Ｒ１４）２、−Ｎ（Ｒ１６）２、−Ｏ（Ｃ （Ｏ））ｑＲ１６、フルオロ、クロロ及びサルフェートよりなる群から選択され 、ここで Ｒ１３は 水素、 場合によってヒドロキシ、クロロ、プロモ及び炭素原子数１〜４個のアルコキシ よりなる群から選択される１個又は２個以上の置換基で置換されている炭素原子 数１〜４個のアルキル、 アミノ酸残基又はポリペプチジル残基、−ＯＲ１７（ただし、Ｒ１７は炭素原子 数１〜４個のアルキル、又はヒドロキシ基で置換された炭素原子数２〜４個のア ルキルである）、及び −ＮＲ１８Ｒ１９（ただし、Ｒ１８及びＲ１９は独立に水素及び炭素原子数１〜 ４個のアルキルよりなる群から選択される） よりなる群から選択され、 各Ｒ１４は独立に水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択さ れ、 各Ｒ１５は独立に水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択さ れ、 Ｒ１６は 水素、 場合によってヒドロキシ、クロロ、プロモ及び炭素原子数１〜４個のアルコキシ よりなる群から選択される１個又は２個以上の置換基で置換されている炭素原子 数１〜４個のアルキル よりなる群から選択され、そして ｑは０又は１に等しい整数であり； Ｒ３は水素、フルオロ及びヒドロキシよりなる群から選択され； Ｒ４はシアリルであり； Ｒ５はし−フコシルであり；そして ＹはＯ、Ｓ、−ＮＨ−及び結合よりなる群から選択されり； ただし、Ｒ１がヒドロキシルであり、かつＲ２が−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３であると き、Ｒ３はヒドロキシではない。
2. ２．Ｒ３がヒドロキシルである、請求の範囲第１項に記載の化合物。
3. ３．Ｒ１がヒドロキシル、炭素原子数１〜４個のアルコキシ、フルオロ、クロロ 又はプロモである、請求の範囲第２項に記載の化合物。
4. ４．Ｒ２が−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ１３又は−Ｎ３よりなる群から選択され る、請求の範囲第１項に記載の化合物。
5. ５．Ｒ４がＮｅｕ５Ａｃである、請求の範囲第１項に記載の化合物。
6. ６．Ｒ５がフコースである、請求の範囲第１項に記載の化合物。
7. ７．Ｒ１がヒドロキシであり、Ｒ２がアジドであり、Ｒ３がヒドロキシであり、 Ｒ４がＮｅｕ５Ａｃであり、そしてＲ５がフコースである、請求の範囲第１項に 記載の化合物。
8. ８．Ｒ１がヒドロキシであり、Ｒ２が−ＮＨ２であり、Ｒ３がヒドロキシであり 、Ｒ４がＮｅｕ５Ａｃであり、そしてＲ５がフコースである、請求の範囲第１項 に記載の化合物。
9. ９．Ｒ１がクロロであり、Ｒ２が −ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３であり、Ｒ３がヒドロキシであり、Ｒ４がＮｅｕ５Ａｃで あり、そしてＲ５がフコースである、請求の範囲第１項に記載の化合物。
10. １０．Ｒ１がプロモであり、Ｒ２が −ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３であり、Ｒ３がヒドロキシであり、Ｒ４がＮｅｕ５Ａｃで あり、そしてＲ５がフコースである、請求の範囲第１項に記載の化合物。
11. １１．Ｒ１がフルオロであり、Ｒ２が −ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３であり、Ｒ３がヒドロキシであり、Ｒ４がＮｅｕ５Ａｃで あり、そしてＲ５がフコースである、請求の範囲第１項に記載の化合物。
12. １２．製剤上不活性なキャリアー及び有効量の請求の範囲第１項に記載の化合物 を含んで成る、哺乳動物に投与して該哺乳動物における細胞性免疫応答を変調す るのに適した製剤組成物。
13. １３．細胞性免疫応答を変調する際に有効な量の請求の範囲第１項に記載の化合 物を哺乳動物に投与することから成る、該哺乳動物における該免疫応答を変調す る方法。
14. １４．次の： （ａ）式ＩＩ ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩ（式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＹは 前記で定義された通りである。） の化合物を選択し； （ｂ）該化合物をそのガラクトース部分の３位においてβＧａｌ（１→３／４） βＧｌｃＮＡｃα（２→３）−シアリルトランスフェラーゼ及びβＧａｌ（１→ ３）βＧａｌＮＡｃα（２→３）−シアリルトランスフェラーゼより成る群から 選択されるシアリルトランスフェラーゼによりシアリル化してα（２→３）シア リル残基をガラクトース単位上に入れ；そして（ｃ）工程（ｂ）で製造された化 合物をそのＮ−アセチルグルコサミン部分の４位においてβＧａｌ（１→３／４ ）βＧｌｃＮＡｃα（１→３／４）フコシルトランスフェラーゼによりフコシル 化してＮ−アセチルグルコサミン単位上にα（１→４）フルコシル残基を形成す る 工程を含んで成る、請求の範囲第１項に記載の化合物の製造法。
15. １５．式 ［オリゴサッカリド−Ｙ−Ｒ２３］ｐ−Ａｇで表される人工抗原：ただし、オリ ゴサッカリドは式Ｉ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ で表される化合物であり；式中の Ｒ１は水素、−ＮＨ２、−Ｎ３、−ＮＨＳＯ３Ｈ、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−Ｎ ＝Ｃ（Ｒ７）２、−ＮＨＣＨ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ８）２、−ＳＲ８、−Ｏ（Ｃ （Ｏ））ｐＲ９、フルオロ、クロロ、プロモ及びサルフェートよりなる群から選 択され、ここでＲ６は 水素、 場合によってヒドロキシ、クロロ、プロモ、炭素原子数１〜４個のアルコキシ、 フェニル、並びにヒドロキシ、炭素原子数１〜４個のアルキル、炭素原子数１〜 ４個のアルコキシ、クロロ、プロモ及びサルフェートよりなる群から選択される １〜３個の置換基で置換されたフェニルよりなる群から選択される１個又は２個 以上の置換基で置換されている炭素原子数１〜４個のアルキル、 アミノ酸残基又はポリペプチジル残基、−ＯＲ１０（ただし、Ｒ１０は炭素原子 数１〜４個のアルキル、又はヒドロキシ基で置換された炭素原子数２〜４個のア ルキルである）、及び −ＮＲ１１Ｒ１２（ただし、Ｒ１１及びＲ１２は独立に水素及び炭素原子数１〜 ４個のアルキルよりなる群から選択される） よりなる群から選択され、 端Ｒ７は独立に水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択され 、 Ｒ８は独立に水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択され、 Ｒ９は 水素、 場合によってヒドロキシ、クロロ、プロモ、炭素原子数１〜４個のアルコキシ、 フェニル、並びにヒドロキシ、炭素原子数１〜４個のアルキル、炭素原子数１〜 ４個のアルコキシ、クロロ、プロモ及びサルフェートよりなる群から選択される １〜３個の置換基で置換されたフェニルよりなる群から選択される１個又は２個 以上の置換基で置換されている炭素原子数１〜４個のアルキル よりなる群から選択され、そして ｐは０又は１に等しい整数であり； Ｒ２は水素、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＲ１５Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、 −Ｎ＝Ｃ（Ｒ１４）２、−ＮＨＣＨ（Ｒ１４）２、−Ｎ（Ｒ１５）２、−Ｏ（Ｃ （Ｏ））ｑＲ１６フルオロ、クロロ及びサルフェートよりなる群から選択され、 ここで Ｒ１３は 水素、 場合によってヒドロキシ、クロロ、プロモ及び炭素原子数１〜４個のアルコキシ よりなる群から選択される１個又は２個以上の置換基で置換されている炭素原子 数１〜４個のアルキル、 アミノ酸残基又はポリペプチジル残基、−ＯＲ１７（ただし、Ｒ１７は炭素原子 数１〜４個のアルキル、又はヒドロキシル基で置換された炭素原子数２〜４個の アルキルである）、及び−ＮＲ１８Ｒ１９（ただし、Ｒ１８及びＲ１９は独立に 水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択される） よりなる群から選択され、 各Ｒ１４は独立に水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択さ れ、 各Ｒ１５は独立に水素及び炭素原子数１〜４個のアルキルよりなる群から選択さ れ、 Ｒ１６は 水素、 場合によってヒドロキシ、クロロ、プロモ及び炭素原子数１〜４個のアルコキシ よりなる群から選択される１個又は２個以上の置換基で置換されている炭素原子 数１〜４個のアルキル よりなる群から選択され、そして ｑは０又は１に等しい整数であり； Ｒ２は水素、フルオロ及びヒドロキシよりなる群から選択され； Ｒ４はシアリルであり； Ｒ５はＬ−フコシルであり；そして ＹはＯ、Ｓ、−ＮＨ−及び結合よりなる群から選択され； Ｒ２３は抗原性キャリアーに結合され得るアグリコン部分であり； ｐは少なくとも１に等しい整数であり；そしてＡｇは抗原性キャリアーである。