JPH06510527A

JPH06510527A - Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのメロゾイトによる赤血球侵入を抑制することがそれ自体可能な抗体をｉｎ　ｖｉｖｏで誘導し得るポリペプチド、関連生成物及びワクチン組成物の製造のためのその適用

Info

Publication number: JPH06510527A
Application number: JP5503341A
Authority: JP
Inventors: マツテイ，ドウニーズ; シエルフ，アルトウール; ペレラ・ダ・シルバ，リユイ; メルスロー−ピユイジヤロン，オデイル; ボネフオイ，セルジユ; ジイ・サン，ジユルグ
Original assignee: アンステイテユ・パストウール
Priority date: 1991-07-31
Filing date: 1992-07-31
Publication date: 1994-11-24
Also published as: WO1993003057A1; EP0602079A1; AU2442792A; PT100757A; CA2114223A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】Ｐ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのメロゾイトによる赤血球侵入を抑制することがそれ自体可能な抗体をｉｎ　ｖｉｖｏで誘導し得るポリペプチド、関連生成物及びワクチン組成物の製造のためのその適用適用に係る。

るマラリアに関与する寄生虫は、その発育段階及び感染宿主生物中におけるその局在化段階に応じてヒト宿主中で種々の形態をとり、種々の抗原を発現する。ヒトにおける生活環中のこれらの寄生虫の形態及び抗原の相違により、少なくとも４種の異なる発育段階を定義することができる。

ヒトにおける寄生虫の第１の発育段階は、寄生虫を媒介する昆虫が刺すことにより宿主の血液中に導入されるスポロゾイト形態に対応する。第２段階は寄生虫が肝臓に移行して肝細胞に感染する段階に対応し、肝細胞中で寄生虫は発育して肝スキゾントを形成し、肝スキゾントは成熟すると（例えばＰ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍの場合ではスポロゾイトの侵入後６日月）分裂して肝メロゾイトを遊出する。

第３段階は、寄生虫の無性形態（メロゾイト）による赤血球感染である。この発育の赤血球段階は病理発生段階に対応する。第４段階は有性世代形態（生殖母細胞）の形成に対応し、蚊では有性形態即ち細胞外生殖体が形成される。

特にＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ　ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ型の病原性ヒト寄生虫に感染した赤血球の表面に露呈される寄生虫分子を同定するために、過去数年間に多くの研究がなされている。実際に、血液段階の寄生虫のビルレンスはこうして露呈されるペプチド構造の存在に結び付けられることが多かった。寄生虫はよく観察される２つの現象、即ち寄生虫に感染した赤血球（ＰＲＢＣ，“Ｐａｒａｓ　ｉ　ｔ　１ｚｅｄ　Ｒｅｄ　Ｂｌｏｏｄ　Ｃｅ１ｌｓ”の略称）が内皮細胞に固定する現象である毛細血管の閉塞即ち密面（２）と、非感染赤血球がＰＲＢＣに固定して「ロゼッ）Ｊを形成する現象（４０）とに関与すると考えられる。これらの現象は、特にＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ　ｆａｌｃｉｐａｒｕｍにより誘導される重度マラリアの症例の病態生理において重要なメディエータ−の役割を果たすと思われる。

これらの表面分子は、ＰＲＢＣの食作用をその作用の１つとする宿主の免疫防御メカニズムの標的であるとも考えられる（１０．１１）。最近になって赤血球内期の後期に発現される遺伝子が単離された（２０）。発現産物（抗原３３２）は縮重反復アミノ酸配列を含むことが判明した。

抗原３３２の配列を含む組換ポリペプチドと接触によりアフィニティー精製したヒト抗体は、種々の遺伝子の発現産物から構成される１群の寄生虫タンパク質と反応することが判明した（２０）。この群内で同定された抗原としては抗原１１．１　（Ｐｆｌｌ−１）及び（Ｐｆ１５５／ＲＥＳＡ）を挙げることができ、ヒトモノクローナル抗体を使用して観察した処、これらの抗原は交差反応を生じる抗原決定基を含んでいた（２０）。より最近では、Ｕｄｏｍｓａｎｇｔｅｐｃｈら（３６）が突起を含むか又は含まない寄生虫感染赤血球とメラノーマ細胞系Ｃ３２の細胞との細胞付着を抑制することが可能なヒトモノクローナル抗体ｍＡｂ　３３Ｇ２について記載している。更に、このモノクローナル抗体はｉｎ　ｖｉｔｒｏ試験でメロゾイトによる赤血球侵入を有効に抑制することが確認された（３８）。しかしながら、Ｐｆ１５５／ＲＥＳＡ分子との反応性により最初に選択されたこのモノクローナル抗体（３８）は特異性を欠く。また、この抗体は寄生虫による感染の血液段階で出現する他の抗原、特に抗原Ａｇ１ｌ−１及びＡｇ３３２　（２０，３７）とも反応する。抗原Ａｇ３３２は防御免疫を誘導する能力の点で確かに非常に有益である。実際に、遺伝子Ｐｆ３３２に由来する３０３塩基対のフラグメントの発現産物を含む組換ポリペプチドは、メロゾイトによる赤血球侵入の抑制試験の結果、モノクローナル抗体ｍＡｂ３３Ｇ２の特に有効な抑制剤を構成することが判明した（３１）。しかしながら、Ａｇ３３２の特性決定は、この抗原を認識する抗体と寄生虫の他の種々の抗原との交差反応により未だに実現されていない（２０）。

本発明は、遺伝子Ｐｆ３３２中の新規遺伝子配列、該遺体を同定及び特性決定した結果として達成された。該当する遺伝子配列は染色体１１の亜末端領域に位置付けられた。

例エバ合成二量体Ｙ　（ＳＶＴＥＥ　ＩＡＥＥＤＫ）２（２４）やβ−ガラクトシダーゼとの融合タンパク質（２０）のようにＡｇ３３２に由来するか又はＡｇ３３２の配列に類似する他の抗原により誘導される抗体は寄生虫の種々の他の分子とも反応するが、この遺伝子配列により発現される抗原は単一特異性を有するため、これらの抗体とは逆に、イムノプロント及び免疫沈降反応により血液段階で無性寄生虫のメガダルトンタンパク質を特異的に検出できることが判明した。

抗原ＥＢ２００に対して形成される抗体はモノ球と表面反応する。

本発明の抗原の１種である抗原ＥＢ２００のペプチド配列は、クローンＧ９（図１　（Ｃ）　）の配列中の枠で囲んだ部分に対応する特徴的なペプチド配列を有しており、この配列は後述する条件下で遺伝子Ｐｆ３３２のフラグメントの１つを増幅した産物であるクローンＧ９から推定した。

抗原ＥＢ２００はより一般には、下記アミノ酸配列により定義されるポリペプチド配列の全部又は一部を共通して含むアミノ酸モチーフ又は配列を有するポリペプチドの群に属する。

５ＶＴＧＮ　工　Ｉ、ＶＥＧＳＶＴＥＥＶＶＧＥＥＫＬＶＳＥＥ　工　ＶＴＥＥＧＳＶＡＱＥ工ＶＥＥＤＡＦＡＴＥＥ　工　ＤＥ　工　ＥＳＶＴＥＥＶＶＥＥＥＧＰＶＤＥＥ工ＶＱＥＥＧＴＶＴＥＥエエＱＧＥＳＫＶＥＥＶＶＥＥＱＧＳＥＮＥＥＩＦＶＥＥＶＳＡＳＱＥＩＶＱＮＥＳＧＴＥＥＩＬＥＫＶＳＡＳＱＥ工ＶＱＤＧＳＶＴＥＱ工ＩＥＥＬＦＰＶＴＥＥＶＶＮＥＥＥリスザルＳａｉｍｉｒｉ　５ｃｉｕｒｅｕｓにおいて防御免疫応答をｉｎ　ｖｉｖｏで誘導し得、場合により、融合タンパクに組み込むか、オリゴマー化するか又は担体タンパク質に結合したときにリスザルＳａｉｍｉｒｉ　ｓｃ１ｕｒｅｕｓにおいて防御免疫応答をｉｎ　ｖｉｖｏで誘導し得るものであれば、この配列の一部しか含まないペプチドであっても本発明の範囲に含まれる。

本発明の好適ポリペプチドのアミノ酸配列の連続モチーフの上記分配は、タンパク質中の連続反復モチーフの存在を示す以外の目的はないが、この反復は縮重を欠いていない。行末又は行中の空白部分（実際には直接結合）は、これらの連続反復モチーフの部分的な配列の相同を明示する以外に特別の意味はない。部分的に反復又は「縮重」したこれらのモチーフ中にはモチーフＶＴＥＥＶが頻発することに留意されたい。

図２は、（上記定義の１文字表記の代わりにアミノ酸の３文字表記を使用した）同一のアミノ酸配列を示す。図２は、遺伝子Ｐｆ３３２から単離した４１１塩基対のインサートを含む組換クローンＰ　ｆ　ＥＢ２００のコーディング配列も示す。このクローンはヒト免疫血清のプールを用いてベクターλＡｍｐ３中で構築した発現配列のバンクから既に単離されたものであることに留意されたい（２０）。本発明は、抗原Ａｇ３３２に対して特異的であると同時に−ｒユｆａｌｃｉｐａｒｕｍのメロゾイト及び／又は感染赤血球の表面に露呈されるアミノ酸配列が該抗原中に存在することを立証することにより達成された。

ベクターλｇｔＷＥＳ中のＰ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍの初期ゲノムバンクは、（２１）に記載されているようにＤＮａｓｅｌによる消化及びＥｃｏＲＩ部位を含むアダプター（リンカ−）の付加によりそれ自体構築された。

ヌクレアーゼにより消化し、ベクターλｇｔＷＥＳにクローニングしたＰ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのＤＮＡの初期ゲノムバンク（顕著な突起を有するＰａ１ｏ　Ａｌｔｏ株）を、クローンＰｆ３３２に由来するハイブリダイゼーションプローブによりスクリーニングした結果、本発明者らは４個のクローンＣ１，Ｇｌ、Ｃ９及びＣ９０に着目し、これらのクローンを部分的に配列決定した。Ｇｌ、Ｃ９及びＣ９０のオーバーラツプするヌクレオチド配列は夫々２゜９Ｋｂ、４．８Ｋｂ及び１．９Ｋｂの寸法を有していた。

ｃＤＮＡのバンクをスクリーニングし、４６６塩基対のインサートを含むクローン（クローンＣＩ）を得た。

起源となる初期クローンに対するＣＩ、Ｇｌ、Ｃ９及びＣ９０の配列の相対位置を図１（Ａ）に示す。

図１は遺伝子Ｐｆ３３２の制限地図、維持されるフラグメント（ＣＩ、Ｃ９０，Ｇｌ及びＣ９）の夫々の位置、より特定的に配列決定したＣ１．Ｃ９０，Ｇｌ及びＣ９（図１に示す配列のほぼ第１列の下半分から第２列の上半分の間の配列）の配列の部分から推定されるアミノ酸配列を夫々示す。

配列決定した部分を図１では太線により示す。制限地図を作成するために使用した酵素は、ＢａｍＨｌ　（Ｂ）　、ＣＩａｌ　（Ｃ）　、Ｄｒａｌ　（Ｄ）　、ＥｃｏＲｌ　（Ｅ）及びＨｉｎｄ３（Ｈ）である。

これらのフラグメントの部分、より特定的にはＣ９のサブフラグメント（４４１塩基対のＢａｍＨｌ、ＥｃｏＲ１フラグメント）をプラスミドｐＧＥＸ３にサブクローニングした（３２）。グルタチオン−ｓ−トランスフェラーゼとの可溶性融合タンパク質ＰｆＥＢ２００として発現されたタンパク質の配列（以下、ＥＢ２００と呼称する）は、配列決定したＣ９の部分のうち枠で囲んだ部分である。

可溶性ポリペプチドの発現は大腸菌Ｄｈ５α（Ｆ　ｅｎｄＡｌ　ｈｓｄｒ　１７　（ｒｋ−ｍｋ−）ｓｕｐ　Ｅ４４ｔｈｉ−１，λ−，ｒｅｃ　Ａｌ　ｇｙｒ　Ａ９６ｒｅｌ　Ａｔ　ｆ８０ｄ　Ｉａｃ　ＺΔ　Ｍ２Ｓ）中で行った。タンパク質の精製はグルタチオン基を有するアガロースビーズ上でアフィニティークロマトグラフィーにより行った（３２）。融合タンパク質の精製度はＳＤＳ　１０％を含有するポリアクリルアミドゲル上の電気泳動及びクーマシーブルー染色により分析した。

任意の従来技術を使用して（融合又は非融合形態の）タンパク質ＥＢ２００の特異的抗体を製造することができる。

しかしながら、ここでは後述する試験で試験する抗体を以下の条件下で製造した。完全フロイントアジュノ＜ントの存在下で組換タンパク質ＥＢ２００　（２０ μｇ）の皮下注射によりマウスＢａ１ｂ／ｃを免疫感作した。最初の注射から夫々３週間後及び５週間後に不完全フロイントアジュノクント中の抗原各１５μｇを２回繰り返して注射した。最後の注射から７日後に、産生された抗体を含有する血清を免疫感作したマウスから採取した。寄生虫感染赤血球を薄く伸ばして免疫蛍光により抗体力価を決定した。このような血清の抗体は単一特異的であることが判明した。寄生虫感染抽出物を免疫沈降及びウェスタンプロットにより試験し掛けの分子量を有するタンパク質と反応し得ることが判明した。

タンパク質ＥＢ２００及び対応する抗体からは更に以下の点が観察された。

−特にＷｌｌｈ　Ｉ　ｉ　ｎ、Ｂ、らの文献”Ｈｕｍａｎ　ａｎｔｅｎｔｒｙ　１ｎｈｉｂｆｔ　ｍｅｒｏｚｏｌｔｅ　１ｎｖａｓｉｏｎ”（１９８４）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８１：　７９１２を参照してＲ，Ｕｄｏｍｓａｎｇｐｅｔｃｈら（３７）により記載されている試験に基づき、クローンＥＢ２００により発現される組換タンパク質に対する抗体がメロゾイトによる赤血球再侵入をｉｎ　ｖｉｔｒｏで抑制する能力を試験した。この試験によると、抗ＥＢ２００血清の存在下で培養した寄生虫は正常血清の存在下で培養した対照に比較して８４．４％抑制された。同一試験のモノクローナル抗体３３Ｇ２は寄生虫血症の８６．７％を抑制した。従って、抗ＥＢ２００血清（ポリクローナル抗体）とモノクローナル抗体３３Ｇ２の活性は同程度であった。

一抗ＥＢ２００血清はＰ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍに感染したサル赤血球の表面と反応した。

一組換抗原ＰｆＥＢ２００は、オプソニン処理（（ｉ　ｉ）に記載の技術）した寄生虫感染赤血球の、サルの単球による食作用を抑制することが可能である。

これらの結果から明らかなように、寄生虫に感染した赤血球の表面又はメロゾイトの表面にはタンパク質ＥＢ２００のペプチド配列に対応するペプチド配列を含む抗原Ｐｆ３３２の部分が露呈される。

タンパク質ＥＢ２００又はそのフラクションは更に次の特性を有する。

一部タンパク質又はそのフラクションは、寄生虫に対して耐性の動物、特にサルＳａｉｍｉｒｉ　５ｃｉｕｒｅｕｓに由来する血清中に含まれる防御抗体又は免疫グロブリンフラクションにより認識され、該血清又はフラクションはＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ　ｆａｌｃｉｐａｒｕｍに対して天然では感受性のサルを耐性にすることが可能である。

−該タンパク質又はそのフラクションは、サル、特にサルＳａｉｍｉｒｉ　５ｃｉｕｒｅｕｓにおいてマラリアの寄このような試験を実施することが可能な条件は、例えばＤｕｂｏｉｓら、　１９８４　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８１：　２２９−２３２；　Ｐｅｒｒｉｎら、　１９８４．　Ｊ、ｏｆ　Ｅｘｐ、Ｍｅｄ。

１６０：　４４０−４５１及び５ｉｄｄｉｑｕｉら。

１９８７、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４：　３０１４ −３０１８に記載されている。

以上、特にポリペプチドＥＢ２００について説明した。

当然のことながら本発明は同様に、場合により融合タンパク質に組み込むか、オリゴマー化するか又は担体タンパク質と結合した後にリスザルＳａｉｍｉｒｉ　５ｃｉｕｒｅ能なこのポリペプチドの任意の部分に係る。

更に本発明は、Ｐ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ以外でヒトに感染性のＰｌａｓｍｏｄｉｉｍ属、例えば７Ｇ８（ブラジル）、Ｔ９−９６（タイ）　、ＦｃＢＲ（南アメリカ）、３７Ｄ（ＮＦ５４に由来、オランダ）及びＢａｎｊｕｌ（ガンビア）に由来するＤＮＡの対応する配列の発現により得られる等価の全ペプチドに及び、これらの寄生虫はいずれも血清αＥＢ２００による免疫沈降試験で認識される。前記血清はこれらの寄生虫により感染した赤血球も認識する。

一般に、ＥＢ２００に対して予め形成された抗体により認識され、好ましくは場合によりオリゴマー化するか、融合タンパク質に組み込むか又は担体分子と結合した後にヒトマラリアの寄生虫、特にＰ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍに対して活性な抗体をリスザルＳａｉｍｉｒｉ　５ｃｉｕｒｅｕＳの体内に誘導するものであれば、１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失又は付加により前記ペプチドと構造的に区別される全ペプチドは本発明の一部を形成する。

本発明の範囲に含まれるポリペプチド又はペプチドを同定するためには、特にＰ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍに由来するメロゾイトによる赤血球侵入の抑制試験を使用することもできる。特に、アミノ酸配列の一部がＥＢ２００と共通なポリペプチド又はポリペプチドフラグメントであって、同一濃度のメロゾイトの存在下で且つ該当種のポリペプチド又はポリペプチド部分の不在下で同一条件下におかれた対照赤血球調製物中で観察可能な割合の少な（とも５０％ペプチドフラグメントは本発明の一部を構成するとみなすべきである。

本発明は当然のことながら、該当ポリペプチドが同一種の防御免疫原性を有するという前提に基づき、配列ＥＢ２００の両端を越えて伸びる配列の一部を含む全ポリペプチドに係る。ｒＥＢ２００の両端を越えて伸びる部分」という表現は、例えばＥＢ２００の起源であるフラグメントＧ９（図ＩＣ）のヌクレオチド配列から推定されるより大きいペプチド配列中でＥＢ２００のアミノ酸構造の側にあるアミノ酸配列を意味する。

同様に本発明は、得られる改変ペプチドがポリペプチドＥＢ２００の特徴的生物特性を失わないようにアミノ酸配列の所定のアミノアシル残基を他の残基により置換、又は欠失又は他の配列を挿入することにより、上記ペプチドから誘導される全ペプチドに及ぶ。

特に、本発明はより特定的には、融合タンパク質に組み込むか、オリゴマー化するか又は担体タンパク質に結合した場合に、該当種のペプチドがリスザルＳａ　ｉｍｉ　ｒ　１ｓｃｉｕｒｅｕｓにおいて防御免疫応答をｉｎ　ｖｉｖ。

で誘導するか又はメロゾイトによる赤血球侵入を抑制することが可能であるという前提に基づき、ＥＢ２００中に存在する縮重反復モチーフに対応するモノマー配列、特に以下の配列（ａ〜０）に対応する配列を有するペプチドに係る。

（ａ）　Ｓ　Ｖ　Ｔ　Ｇ　Ｎ　Ｘ　Ｌ　Ｖ　Ｅ　Ｇ。

（ｂ）　Ｓ　Ｖ　Ｔ　Ｅ　Ｅ　Ｖ　Ｖ　Ｇ　Ｅ　Ｅ　Ｋ。

（ｃ）　Ｌ　Ｖ　Ｓ　Ｅ　Ｅ　Ｘ　Ｖ　Ｔ　Ｅ　Ｅ　Ｇ。

（ｄ）　Ｓ　Ｖ　Ａ　Ｑ　Ｅ　Ｘ　Ｖ　Ｅ　Ｅ　Ｄ入。

（＊）　Ｐ　Ａ　Ｔ　Ｅ　Ｅ　Ｘ　Ｄ　Ｅ　Ｘ　Ｅ。

（ｆ）　Ｓ　Ｖ　Ｔ　Ｅ　Ｅ　Ｖ　Ｖ　Ｅ　Ｅ　Ｅ　Ｇ。

（ｇ）　Ｐ　Ｖ　Ｄ　Ｅ　Ｅ　Ｘ　Ｖ　Ｑ　Ｅ　Ｅ　Ｇ。

（ｈ）　Ｔ　Ｖ　Ｔ　Ｅ　Ｅ　Ｘ　！　Ｑ　Ｇ　Ｅ。

（ｉ）　Ｓ　Ｋ　Ｖ　Ｅ　Ｅ　Ｖ　Ｖ　Ｅ　Ｅ　Ｑ　Ｇ。

（ｊ）　Ｓ　Ｅ　Ｎ　Ｅ　Ｅ　Ｘ　Ｆ　Ｖ　Ｅ　Ｅ　Ｖ。

（ｋ）　Ｓ　Ａ　Ｓ　Ｑ　Ｅ　Ｘ　Ｖ　Ｑ　Ｎ　Ｅ。

（１）　ｉ９　Ｇ　Ｔ　Ｅ　Ｅ　Ｘ　Ｌ　Ｅ　ＸＶ。

（ｍ）ＳＡＳＱＥ工Ｖ　Ｑ　Ｄ　Ｇ。

（ｎ）ＳＶＴＥＱエエＥ　Ｅ　Ｌ　Ｆ。

（ｏ）　Ｐ　Ｖ　Ｔ　Ｅ　Ｅ　Ｖ　Ｖ　Ｎ　Ｅ　Ｅ　Ｅ。

式：　（Ｘ）３　ＥＥ　（Ｘ）２　ＥＥ　（Ｘ）ｚ−３（式中、Ｘ基の各々は該白基を囲む括弧の後の指数（こ従Ｌ）、各々少な（とも１個の疎水性アミノアシル残基を含むジペプチドみ、リスザルＳａｉｍｉｒｉ　５ｃｉｕｒｅｕｓにおいて防御免疫応答を誘導すること又はＰ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍによる赤血球のｉｎ　ｖｉｔｒｏ侵入を抑制することが可能な全ペプチド等飾物も本発明の一部を構成する。

上述したように、本発明は本発明のペプチドを介入させる全融合タンパク質、オリゴマー又は結合タンパク質にも係る。

これらのペプチドは化学的合成により製造することができる。これらのペプチドのオリゴマー又は担体分子に結合したペプチドについても同様である。これらの合成を行うための技術の非限定的な例を以下に挙げる。

例えば、ＨＯＵＢＥＮＷＥＹＬにより文献”Ｍｅｔｈ。

ｄｅ　ｄｅｒ　ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ″。

Ｅ、Ｗｕｎｓｃｈ編、ｖｏｌ、１５−１及びＩＩ、。

ＴＨＩＥＭＥ、　Ｓｔｕｇｇａｒｔ　１９７４中に記載されているような均質溶液合成法を使用することができる。

この合成法は、選択された最終アミノ酸配列を有するポリペプチドを製造できるように、予め形成されたアミノ酸又はペプチドと選択された予め形成された他のアミノ酸又はペプチドとを必要な順序で順次縮合することからなり、当然のことながら、特に活性化後にペプチド結合の形成に関与するアミン及びカルボキシル基を除き、これらのアミノ酸又はペプチドにより担持される全反応性基を必要に応じて予め保護することが必要である。あるいは、例えば１−エチル−３−（３ −ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドのようなカルボジイミド型の慣用カップリング試薬を使用するカップリング反応を使用してもよい。

使用されるアミノアシルが付加的な酸基を有する場合（特にグルタミン酸の場合）には、これらの基を例えばｔ−ブチルエステル基により保護する。

アミノ酸を漸次合成する場合には好ましくは、まず所望の配列中の隣接するアミノアシルに対応するアミノ酸とＣ末端アミノ酸を縮合し、適当に選択された他のアミノ酸と順次縮合し、最後にＮ−末端アミノ酸を固定する。

多くの場合は、Ｒ，Ｄ、ＭＥＲＲＩＦＩＥＬＤにより論文”５ｏｌｉｄ　ｐｈａｓｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｊ、Ａｍ、Ｓｏｃ、、　４５：　２１４９−２１５４）に記載されている技術を使用すると有利である。

生成すべき鎖の最初のＣ末端アミノ酸は、カルボキシル基を介して不溶性支持体の役割を果たす多孔質ポリマー樹脂に固定する。この最初のアミノ酸のアミノ基は一般に適当な保護基（例えばｔ−ブチルオキシカルボニル基）で予め保護しておく。

得られたモノマー配列のオリゴマー化はそれ自体公知の任意の方法で実施することができる。これらのオリゴマーは例えば２〜２０のモノマー単位を含む。最終的に得られるオリゴマーが水溶性又は水に溶は易いようにする以外は、オリゴマーに含まれ得るモノマー単位の最大数に制限はない。

モノマーの第１のオリゴマー化又は重合方法は、七ツマ−と網状化剤（例えばゲルタールアルデヒド）との反応からなる。他のオリゴマー化又はカップリング法も使用することができ、例えばホモ又はヘテロ２官能性カツプリング剤の存在下でカルボキシル及びアミン末端基を介してモノマー単位を連続的にカップリングしてもよく、これらのモノマー単位に担持される他の官能基は場合により予め保護しておく。

別の好適オリゴマー化法としては、Ｒｉｃｈｍａｎ及びＲｅｅｓｅ、　ＲＴ、（１９８８）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ。

Ａｃａｄ、８５：　１６６２−１６６６又はＰＯ８ｎｅｔｔ、　ＤＮ、　（１９８８）　Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｂｊｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｖ。

１．２８３．　Ｎｏ、４に記載の方法も使用できる。これらの方法は、コアマトリックスの分子量よりも多数の遊離基を含むように相互に結合され且つ別個のアミノ酸又はＣ末端に結合可能な同数のアームを形成する制限された数の３官能性アミノ酸（特にリジン）から形成される小さい「ペプチジルコアマトリックス」を使用する。特に、１９８８年にＰｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、ＵＳＡ、　Ｖｏｌ。

８５、５４０９−５４１３に発表されたＴａｍ、Ｊ、Ｐ。

の論文には、リジンから生成されたこのようなコアマトリックスの構造が示されている。特に、９〜１６個のペプチド鎖を固定するための部位を含むヘプタリジンをベースとするこのような「コアマトリックス」を使用することができる。リシン残基を結合する別の方法を下記図式に示す（「オクトパン−」型の「コアマトリックス」）。

尚、上記図式中、Ｋはリシンを表し、「ペプチド」は」二記の意味であり、従ってＭＡＰと呼称される系（多抗原ペプチド系：”Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　Ａｎｔｉｇｅｎ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｓｔｅｍ”の略称）となる。

例えば結合すべきペプチドと反応可能な８個のアミノ基を含む「コアマトリックス」から出発するならば、ペプチド合成に適用可能な方法を使用することにより、このコアマトリックスの反応性基を介して固定すべきペプチド、特に本発明のペプチドをこのコアマトリックスに結合する。

使用可能な好適方法については上記論文を参照されたい。

「オリゴマー」なる用語は更に、担体分子及び／又はモノマー単位により夫々担持された相補的反応性基を介して生理的に許容可能で、非毒性の（天然又は合成）担体分子に数単位のモノマーを共有結合することにより得られる複合体も含む。適当な基の例を以下に示す。

本発明の複合体の組成に含まれる担体分子又は高分子担体の例としては、テタニーアナトキシン、オバルブミン、血清アルブミン、ヘモシアニン、精製ツベルクリンタンパク質（［精製タンパク質誘導体Ｊ＝ＰＰＤ）等のような天然タンパク質を挙げることができる。

合成高分子担体としては、例えばポリリシン又はポリ（Ｄ−Ｌ−アラニン）−ポリ（Ｌ−リシン）又は免疫学的に不活性なタンパク質を挙げることができる。

文献には、使用可能な他の型の高分子支持体として、一般に２００００以上の分子量を有するものが挙げられている。

ペプチドの１又は複数の反応性基と担体分子の１又は複数の反応性基とを介入させるものであれば任意のカップリング法を使用することができる。有利には、このような反応性基は、タンパク質の合成で使用される類のカップリング剤（例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール等）の存在下でカップリング反応を生じ得るカルボキシル及びアミノ基である。更に、特に夫々ペプチド及び担体分子により担持されるアミノ基を相互に結合する場合にはゲルタールアルデヒドも使用できる。

本発明は更に、本発明のオリゴマーの製造方法にも係り、該方法は、コンピテント細胞により認識されるプロモーターの制御下で前記モノマー単位を含むオリゴマーポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むベクターによりコンピテント細胞培養物の細胞を形質転換することからなり、この形質転換は、ヌクレオチドの前記オリゴマー配列をこれらの細胞中で発現させ且つ前記ヌクレオチド配列の発現産物を回収することが可能な条件下で行われる。このような方法も本発明の一部を構成する。好ましくは、発現産物が好ましくはコンピテント細胞の外部に輸送されるか又は培養培地中に分泌されるようにベクターの要素を選択する以外は、使用可能な方法に固執する必要は全くない。

本発明は当然のことながら対応する酸のフラグメント、より特定的には配列Ｇ９に関して図１（Ｃ）に示すフラグメントの全部又は一部に係る。こ、のＤＮＡフラグメントは別個の状態でもよいし、より大きい寸法の組換ＤＮＡ中に組換られていてもよい。これらの大寸法のＤＮＡとしては、本発明は当然のことながら以下のＤＮＡに係る。

一本発明のペプチドをコードするＤＮＡ配列を介入させ且つ、Ｐ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍに対する防御免疫を誘導する本発明のポリペプチド配列の特性に干渉しない異種ペプチド配列をそれ自体コードするＤＮＡ配列を有する、融合タンパク質をコードするＤＮＡ。

−プロモーターの制御下におかれた本発明のポリペプチド配列を含むベクターであって、該プロモーターが該プロモーターを認識することが可能なポリメラーゼを有するコンピテント宿主細胞中で前記ポリペプチド配列を発現できるように構成された全ベクター。

本発明は当然のことながら、本発明のポリペプチド又はポリペプチドフラグメントの発現を可能にするこのようなベクター又は組換ＤＮＡによりこうして形質転換された細胞培養物にも及ぶ。

更に、上記に定義したような同一の生物特性を有するＥＢ２００又はペプチド又はペプチドフラグメントに含まれる配列の特異的抗体も本発明の一部を構成する。本発明は同一のポリペプチド配列の全特異的モノクローナル抗体及びこれらのモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマにも及ぶ。当業者であればこれらのモノクローナル抗体を製造し、選択すべきモノクローナル抗体により本発明の特徴的なペプチドのアミノ酸配列を特異的に認識させる選別操作で該抗体を選択することができよう。

本発明は更にこれらのポリペプチドを使用する全医薬組成物にも係り、該組成物は場合により、特にヒトにおいてる医薬的に許容可能なビヒクルと組み合わせる。

本発明は更に、本発明のＥＢ２００又は等価ペプチドにより誘導される抗体製剤にも係り、これらの抗体はポリクローナル抗体（該抗体を含む血清又はこれらの血清から精製された免疫グロブリンフラクション）でもよいし、上述のようにして得られたモノクローナル抗体でもよい。特に、本発明は特にＰ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ型の寄生虫の感染による病原性効果から防御するために、この寄生虫に感染した個体又は感染の危険のある個体においてヒト寄生虫とｉｎ　ｖｉｖｏで競合させるためにこのような抗体を含む医薬組成物に係る。

本発明の抗体は更に、より特定的には遺伝子Ｐｆｌｌ−１（２７）及び遺伝子Ｐｆ１５５／ＲＥＳＡ　（３８）の発現産物と免疫交差反応を生じないことを特徴とする。

大腸菌ＤＨ５に含まれるＥＢ２００をコードするヌクレオチド配列を含むクローンは、７月２５日付けでパリ、パスツール研究所のＣｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　ＮａｔｉｏｎａＩｅ　ｄｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ　ｄｅ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎ　ｉ　ｓｍｓ　（ＣＮＣＭ）に寄託番号１−１１２８で寄託された。文献番号により本明細書に引用した参考資料は本明細書を補完するものである。

本発明は更に、これらの抗体の他の適用、特に、例えば慣用抗原−抗体反応によりマラリア寄生虫による感染を特に赤血球感染段階で例えば血清サンプルでｉｎ　ｖｉｔｒ旦診断するための使用にも係る。他方、本発明は最後に、特にＰ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ型又は類似のマラリア寄生虫による感染の特徴的抗体の存在を、より特定的にはメロゾイト形態のこれらの寄生虫の赤血球段階において１ｎｖｉｔｒｏで検出するためのペプチド自体の適用に係る。

補助的な実験データを以下に記載する。

Ｐｆ２１１と同様にＰｆ３３２を種々の洗剤により可溶化した処、抗原は細胞骨格に結合するのでな（寄生虫感染赤血球の膜に結合していることが判明した。

更に抗ＰｆＥＢ２００抗体を使用して寄生虫中の抗原Ｐｆ３３２を位置決定した。寄生虫を空気定着し、間接蛍光標識し、同焦点顕微鏡により分析した処、約０．５〜１μｍの小胞に類似する構造により形成される画像が判明した。

これらの小胞は寄生虫感染赤血球の細胞質中に局在し、寄生虫から解離し、赤血球の膜に輸送された。更に、後期発生形態では、抗原Ｐｆ３３２は赤血球の膜に結合しているようにみえる。実際に免疫電子顕微鏡分析によると、抗原Ｐｆ３３２はマウレル斑点と共に赤血球の膜に輸送されることが判明した。より重要な点として、懸濁免疫蛍光法によると、抗ＰｆＥＢ２００血消はサルの寄生虫感染赤血球の表面と反応する。赤血球の表面にＰｆ３３２のエピトープが存在していることから、この抗原は宿主の免疫反応の標的であり、従って、ワクチンの開発に有益であることが裏付けられた。

予備実験の結果、抗ＰｆＥＢ２００抗体（全精製免疫グロブリン又は組換体ＰｆＥＢ２００と結合したアフィニティーカラムで精製した免疫グロブリン）は対照に比較して寄生虫の発育を６０〜８０％抑制し得ることが判明した。

組換ポリペプチドＰｆＥＢ２００はサル高度免疫血清の存在下で感染赤血球の単球による食作用を抑制する。

本発明は更に、特にＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ　ｆａｌｃｉｐａｒｕｍによるマラリアに対するワクチン特性、より特定的には防御免疫応答（リスザルＳＡＩＭＩＲＩ　５ＣＩＵＲＥＵＳにより代表される霊長類モデルにおいてヒトにおける疾患に関与する血液段階の寄生虫を死滅させることが可能な免疫保護抗体の産生を含む）をｉｎ　ｖｉｖｏで誘導する能力を有する他のペプチド成分と共に上記に定義したペプチドを使用する組成物にも係る。

上記に定義したペプチドＥＢ２００又は類似体と併用すると有利なポリペプチドとしては、より特定的には夫々以下に定義するような「第２のポリペプチド」又は「第３のポリペプチド」を挙げることができる。

「第２のポリペプチド」は、約７２ｋＤＡの分子量を有することから以下の文中では特にｒ７２ｋＤＡ抗原」と呼称するＰ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍの主要抗原から誘導されるポリペプチドから構成され、特に、 −まず、化学療法による制御下の繰り返し感染後に寄生虫に対して耐性になった動物、特にサルＳＡＩＭＩＲＩ　ＳＣＩ　ＵＲＥＵＳに由来し、元来感受性であったサルを耐性にすることが可能な血清中に含まれる防御抗体又は免疫グロブリンフラクションにより認識されることが可能であり、−次に、特にサル、より特定的にはサルＳＡＩＭＩＲＩＳＣＩＵＲＥＵＳにおいてマラリアの寄生虫、より特定的にはＰ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ又は同一の必須生物特性を有する寄生虫に対して活性な抗体をそれ自体誘導することが可能なこの７２ｋＤＡ抗原に由来するポリペプチドから誘導されるポリペプチドから構成される。

この「第２のポリペプチド」自体はしばしば、マラリアが地方病として猛威を奮う地域に居住する患者の血清により認識される。

７２ｋＤＡ抗原ペプチド配列をコードするヌクレオチド配列は、Ｌ、Ｓ、ＭＡＴＴＥＩら　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　（１９８９）１９：　１８２３−１８２８により同定された。「第２のポリペプチド」は有利には７２ｋＤＡ抗原のＣ末端領域の１５３アミノ酸を含むポリペプチド（以下ｉ７２と呼称する）により構成される。ポリペプチドｉ７２をコードする核酸配列と同一のアミノ酸配列を以下に示す。

この「第２のポリペプチド」は更に、ｉ７２の配列の全部又は一部を含む組換ポリペプチド、例えば適当な挿入ヌクレオチド配列により予め改変されたプラスミドｐＧＥＸで大腸菌を形質転換させることによりり、Ｂ、Ｓｍｉ　ｔｈ及びに、Ｓ、Ｊｏｈｎｓｏｎ　（１９８８）　Ｇｅｎｅ　６７、４１−４８により記載の方法に従って得られるＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ　ｊａｐｏｎｉｃｕｍのグルタチオントランスフェラーゼとの融合分子により構成され得る。ペプチドｉ７２をコードするヌクレオチド配列により改変された前記プラスミドにより形質転換された大腸菌の培養物（大腸菌ＤＨ５α）は１９９１年７月２４日付けでパリ、パスツール研究所、Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　Ｎａｔｉｏｎａｌｅ　ｄｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ　ｄｅ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎ　ｉ　ｓｍｅ　ｓ　（ＣＮＣＭ）に寄託番号１−１１２９で寄託された。

「第３のポリペプチド」　（ペプチド又はオリゴペプチド）及びこの第３のポリペプチドをコードする核酸フラグメントは、夫々以下の配列成分を含むことを特徴とする。

ＧＡ（：　’、Ａｋ　テにＴ　ＧＡＡ　ＧＧＧ　ＧＡＡ　ＧＴＴ　ＴＡＴ　’！ＴＡ　ｆｒＴ　にＧＴＴ　ＡＡＡ　ＡＡＧ　ＡＴＡ　ＣＣＴ@ＡＴＡＧｌ＝　Ｓ−Ｌ　Ｃｙｓ　Ｇｌｌ’ｌ　Ｇｌｙ　ＧＩＬＩ　Ｖａｌ　Ｔ’ｆｌ：　Ｌａｕ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ　ＬｙＩ　Ｌｙｓ　Ｉｌ＊　Ｐｒ潤@Ｉｆ＠ｇｐ、ｒｌ　Ｈｐ、　７，４　；Ｈ二　ＨＨｇ↑Ｇ：４Ｃ：Ｃ：Ａニア　：？：二；Ｈ；；　：：：、：〒；　＝↑Ｃ丁ＡＴＡＴＴ）＾　ＴｒＡ　Ｇｋ〒　ＧＧＧ　ｃＡＡ　ＣＡＴＴ”ｒＴ　ＡＴｒ　ＡＴＧ　ｃＡＡ　ＧＣＡ　ｃＴＡ　ＧＣＣＴＧＣＧＣ？？／？　−−Ｉ　Ｌａｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ａｊｎ　ｔｈｅ　Ｈａ　Ｍａｔ　Ｇｉｕ　入１ａ　Ｖａｌ　Ａｌｎ　Ｃｙｍ　入１１Ｔ入：　Ｔ’ｌｊ　ＡＧＣ（ｊＵ　ＣＡＴ　ＴＡＴ　ＣＣＴ　Ｇｌｌ；Ａ　ＣＴＣＡＣＡ　ＣＣＴ　入＆Ａ　’！”！’０　ＴＡｃ　ＡＡＧ@Ｇ？ＡＴｙ＝　Ｌｅｗ　５＊ｒ　Ｇｌｕ　Ｈｌｓ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｌａｕ〒ｈｒ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　ｔａｕ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　ＶａｌＴｒｊＬ　ＴＭ　（、ＡＧ　ＣＣ”ｒ　Ｇ入ＡＭ丁　ｃｃ丁　ＡＡＣＴＧＴ　入＾Ｔ　Ｇ入ＡＣ入Ｇ　ＣＡＴ　ＡＡＧ　ＣＡＴ　Ａ？Ｃ’Ｌ＜二　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　ｐｒｏ　Ｇｌｕ　ｅｙｌ　入１ａ　Ａｌｎ　Ｃｙｓ　Ｍｎ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　ＭＰ　Ｌｙｅ　Ａｌｎ　に−ｔＣＣＡＴ入＾丁　ＣＡＴ　Ｃ入Ｃ入Ｇ？Ｃ入丁　ＧＣＡ　ＡＧＣα入丁　Ｇこ入ａ’ｒｒ　ｃλ↑Ｇ入＾　Ｇ＾テ　ＡテテＧ＾ＧＡｓｐ　入ｓｒ＋　Ａｓｐ　Ａｊｐ　Ｓ＠ｒ　Ａｓｐ　Ａｌａ　５電ｒ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　ｋｓｐ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　ｒｉｍ　Ｇｌ■ λ丁ＡｃＴ〒　ＣλＣＴＧＴ　丁入〒　入ＧＴＧ入〒　〒〒Ｇ　入Ａ〒　入ＡＡ　〒テテ　入＾Ｔ　ｃＡｃ　Ａｍ　’ｆ？Ａ　ＡＣＡＩｌｅ　ｕｕ　Ｇｌｕ　Ｓ＠ｒ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　入ｍｐ　Ｌａｕ　Ａｌｎ　Ｌｙｅ　Ｐｈｅ　Ａｓｈ　Ｇｌｕ　Ｈａｔ　ｔａｕ　ＴｈｅＣ入＾　ＣλＡＴ’Ｔ入　ＣＡＴ　五人＾　入＾丁　五人Ｇ　αλ丁　ＧＣＡ　ＴＡＴ　（：テテｃ’ｒｒ　↑Ｔｏ　ＧＴＴＡＣ？　ＧＡＡＧｌｕ　Ｇｉｎ　ＴＡｕ　Ａｍｎ　Ｌ、ｙ−人ｓｎ　Ｌｙｓ　入ｓｐ　Ｇｌｙ　’ｔｙｘ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｌａｕ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｇｌ■ Ｇ入＾　ＣＡＴ　ＡＣＧ　ＣＧＴ　Ｇ丁＾　＾Ｇ入　ＧＡＴ　Ｇ入Ａ　ＣＡＴ　入＾Ａ　ＡＡＡ　ＡＨＡ　Ａｆｒ　ＡＴＣｍ　Ｃ＾ＡＣＬＬＩ　ＭＰ↑ｈｒ　Ａｒｑ　ＶＪＩＩ　Ｍ９　ＡＪＰ　Ｇｌｕ　Ｍｐ　Ｌｙｅ　Ｌｙｓ　１１＊　１１４１　Ｍｔ　ＰＭ　Ｇｌｕこの「第３のポリペプチド」は１９９０年８月６日付は仏国特許出願第９０　１００３９号に記載されている。

この「第３のポリペプチド」はＰ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍに対する抗体により認識される。

このような核酸により形質転換された大腸菌株は１９９０年７月２７日付けでＣＮＣＭに寄託番号１−９８７で寄託された。

好適な「第３のペプチド」は式：のペプチドＲ２３の配列を含む組換ペプチドである。

対応するＤＮＡ配列を含む大腸菌株は１９９０年７月２７日付けでＣＮＣＭに寄託番号ｌ−９８６で寄託された。

ペプチドＲ２３は同様に、Ｄ、Ｂ、Ｓｍ１ｔｈ及びＫ、Ｓ、Ｊｏｈｎｓｏｎの上記方法により５ｃｈｉｓｔｏｓ。

ｍａ　ｊａｐｏｎｉｃｕｍのグルタチオントランスフヱラーゼとの融合組換タンパク質として製造された。

当然のことながら、ＥＢ２００とｉ７２、ＥＢ２００とＲ２３の組み合わせにおいて、これらの種々のペプチド（ま同様に上記に定義した条件に合致するフラグメント又（よ融合タンパク質により置き換えてもよい。

本発明は当然のことながら、ポリペプチドの上記混合物の夫々の成分から得られる特異抗体の混合物にも係る。これらの抗体混合物は、特にＰ、ｆａｌｃｉ　ａｒｕｍ型のヒト寄生虫による感染による寄生虫血症を抑制する目的でｉｎ　ｖｉｖｏで投与することができる。

最後に本発明は、上述の３種の成分の配列（全部又（ヨ一部）に対応するペプチド配列を含む融合タンノくり質の形態での発現を可能にする条件下で対応する種々の核酸配′１Ｊｌｌ力（相互に組換られた核酸配列の混合物にも及Ｊく。

下記の文献は明細書中に引用されたものである；１、　Ａｈｌｂｏｒｇ、Ｎ、、　Ｌ　−ｓ、　ｖＪ　Ｐ、　Ｐｅ由亡朋、　１９９１．　Ｄｅｆ’Ｗｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｐｉｔｏｐ■@ｒｅｅｏｇｎｉｚｅｄ　ｂｙ２、　ＢｅｒｅｎｄＬ人、　Ｌ、　Ｄ、　Ｊ、　Ｐ、　Ｆｅｒｇｕｓｏ＋、　ａｎｄ　Ｃ１，Ｎｅｗｂｏｌｄ、　１９９０．　Ｓｅｑｕｅｓ狽窒高盾＝@ｉｎ　Ｐｉａｒｍｎｄｉｗｎｆａｌｃｉｐａｒｕｍ　ｍ５ｌｓｒｚ　５ｔｉｃｋｙ　ｃｅｌｌｓ　ｍｄ　５ｔｉｃｋｙ　ｐｒｏｂｌｅｍｓ、　１’ｍｍｔｏＬ　Ｔｏｄａ凵A　６：２４７−２５４゜３、　Ｃｈｅｎ、　Ｅ、　Ｊ、、　ａｎｄ　Ｐ、　Ｈ，Ｓｅｅｂｕｒｇ、　１９８５．５ｕｐｅｒｅｏｉｌ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ：　ａム≠煤@ａｒｗｌ　ｓｉｍｐｌｅ　ｍｅｔｈｏｄｆｏｒ　ｓｅｑｕ−ｇ　ｐ−ｄ　ＤＮんＤＮＮＡ３１６Ｓ−１７０゜４ｃｈｏ醜カ１凪、　Ｐ、、　ａｎｄ　Ｎ、　ＳｉＣＣ）ＬＬ　１９ｇ７．　Ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｅｐ　ｒｒｃｓｈｏｄ　ｏｆ　ＲＮＡ−１≠狽奄盾氏@ｂｙ　ｗ；ｊｔＪｇｕｍｄｉｎｉｕｍ　ｔｈｉｏｃｙ＝Ｌ「１−］−＝−ｐｈｅｎｏｌ＜ｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ、　ノーｒｍ、　Ｂｉｏ■■■香A　１６２二１５６−１６１゜５、　Ｃｈｕ、　Ｇ、、　Ｄ、　Ｖｏｌｌｒｍ、　１ｆＩｄＦＬ　Ｊ、　ｌ１ｈｖｕ、　１９８６．　Ｓｅｐｍｔｉｏｎ　ｏｒ　Ｌｖｇｅ　cＮ＾ｍｏｌｅｃω ｅｓｂｙｅｏｎｔｏｕｒ＜ｍｎｐｅｄ　ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ　ｅｌｅｅｔｒｉｅ　ｆｉｅｌｄｓ、　５ｃｉｅｎｃｅ、　２３４：　１５１１２−P５８５゜６、Ｃｏｐｐｅｌ、Ｒ，Ｌ、Ｊ、Ｇ、Ｃｕ１ｖｅｎｏｒ、＾　Ｅ、Ｂｉａｎｃｏ、Ｐ、Ｅ、Ｃｒｅｗｔｈｅｒ、Ｈ，Ｄ、５ＬＩＩＩＮ１．ＧAＶ、Ｂｒｏｗ。

Ｒ，Ｆ、　Ａｎｄｅｒｃ　ａｒｕｉ　Ｄ、　Ｊ、　Ｋｅｍｐ、　１９８６．　Ｖａｒｉａｂｌｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｕｓｃｃｎｍ　ｗｉ出ｔ■■@ｎｕｆａｃｅ　ｏｒｅｒｙｔｈｒｏｅｙ＋ｅｓ　ｏｒ　Ｐｌａｓｒｒｖｘｉｉｗｎ　ｆａｌｃｊｐａｒｔｕｎ、　Ｍｏ１．　Ｂ　ｉｏｅｈｅｍ、　Ｐａｎｘｉｔ盾戟A　２０：２６５−τ７゜７、　ＣｎｒｅｏｒｌｊＩ、　Ｌ、　Ｍ、、　Ｊ、　Ｋ、　Ｔｈｏｒｒｒｐｓｏｎ、　Ｄ、　Ｗａｌｌｉｋｅｒ、　ａｎｄ　Ｄ、　Ｊ、　Ｋ■高吹A　１９８ｇ、　Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ度ｏｍｂ拍ｔｉｏｎ輌而ｎｓ曲−面墳π甲面刈Ｕ妨体ｓｇｅｎｅｎ日Ｃ−１ル叩℃社筐ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ｉｎ　Ｐｌａｓｍａｄｉｕｍ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、　ＣｅＬ　５３：ｇ０７４１３８．　Ｇｕｓｎｅｒ、　Ｄ、、　Ｚ　５ｈｒａｊｄｃｂ、　ｍｌ　Ｋ、　Ｗｏｈｌｆ−− Ｂｏ耽ｍ■Ｌ１９８５．＾ｐｇｔ　ｔｉｔｉｎ−Ｌ奄汲■垂窒盾狽■魔■ ｖｎ　Ｐｈｙｓａｒｕｍ　ｐｏｔｙｃｅｐｈａｌｕｍ：　ｅｖｕｋｒｃｔ　ｆｏｒ　ｉｔｓ　＄　ａｓ　ｍ　ｒｒｓａｊｏｒ　ｃｏｍｐｏｎ■獅煤@ｏｒ　ａｎｅＪｓｓｔｉｃ　ｃｙｔｏｓｋｅｉｃｔａｌ＄　阻ｒｌｔ−ｉＬＥａｒ、Ｊ、　Ｃｅ１ｌ　ＢｉｏＬ　叫４４−６２゜９、Ｇｏｄｉｎｇ、Ｊ、Ｗ、、　Ｂｔ３Ｅ、Ｈ１１丘「１ｎ、１９８４．Ｅｌｅｃｔｍｐｈｏｒｅｔｉｅｓｍｙｘｓｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎａ獅狽奄■■獅刀Aｉｎ：Ｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　ｍｔｉｇｅｎｓ　ｏｆ　ｐｓｒｍｔｒｘ　３ｇ３Ｊ１５゜ＩＱ、　Ｇｒｏｕｘ、、　）Ｌ、　ｍｄ　Ｊ、　Ｇｙｓｉｎ、　１９９０．０ｐｓｏｎｊｚｘｔｉｏｎ　ｕ　ｗ　ｄｆｅｃｔｏｒ　ｍｅｃｈ≠獅奄唐香@ｉｎ　ｈｕｎｕｎｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｍ１ｐｕｎｓｔ　ａｓｅｘ−七−ｔｕｇｅｓ　ｏｒＰｂ取ｉ鍔ｆａｌｃｉｐｅｒｔｍ：　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｒｏｌｅ　ｏｆ　ＩｇＧ　５ｕｂｃ１１ｉＳｅｓ、　Ｒｅｓ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４１：５２９−５４１１１、　Ｇｒｏｕｘ、　Ｈ，、Ｒ，Ｐｅｍｕｔ、　Ｏ，Ｇａｒｒｍｕｄ、　Ｊ、　Ｐ、　Ｐｏｉｎｇｔ、　ａｎｄ　Ｊ、　Ｇｙｔｉｎ、　１X９０．　Ｆｕｎｃｔ＋ｏｎａｌｃｈＩＩｒｌｃｔｅｎｍＩｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｘｔｉｂｏｄｙ−ｍ−臘ｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ａ−ｂｌｏｏｄ　ｍｇｅｓ　ｏｒＰｌａｓｍａｄｉｕｍｆａｌｃｊｐａｒｕｒｎ　ｉｎ由ｅ　ｍｏｎｋｅｙ　Ｓａｉｍｉｒｉ　ｘｃｉｙｅｕｓ、　Ｅｕｒ、　Ｊ、　１ｎｖｎ浮獅盾k　２（１２３１７−２３２３゜１２、にｅｍｐ、　ＤＪ、、　Ｌ、Ｍ、　ＣｏｒｃｏｒｍＪｌ、　ＬＬ、　Ｃｏｐｐｅｌ、　Ｈ，Ｄ、　５ｕｈＬ人、Ｅ、　Ｂｉａｎｃｏ、@Ｇ、Ｖ、　Ｂｒｏｗｎ、　ａｎｄＲ，Ｆ、　Ａｎｄｅｎ、　１９８５．５ｉｚｅ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｅｈｒｏｍｏｓｏ＋ｎｅｘ　ｆｒｏｍ　１ｎｄｅｐｅｎｄｅｎ{　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｉｓｏｌａｗ　ｏｒＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｎｔｍ、Ｎａｔｕｒｅ　（Ｌｏｎｄｏｎ）、３１５：３４フ−３５０゜＋３．　Ｋｏｅｎｅｎ、　Ｍ、藷、　５ｃｈｅｒｆ、　Ｏ８Ｍｅｒｅｅｒｅａｕ、Ｇ、　Ｌａｎｇｓｌｅｙ、　Ｌ　５ｉｂｉｕｉ、　Ｐ、　cｕｂｏｉｓ、　Ｌ　ＰｅｒｅｍｄａＳｉｌｖｔａｎｄＢ、Ｍｔｌｌｌｅｒ−Ｈｉｌｌ、＋９８４．Ｈｕｎｕｎａｎｔｉｓｅｎｄｅ℃ユｍＰムｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｎｕ■ ｇｅｎｏｍｉｃ　ｃｌｏｎｅｅｎｅｃｘｉｉｎｇ　＊　ｎｏ＋ｕｐｅｐｔｉｄｅｒｅｐｅａＬＮａｔｕｒｅ（Ｉシｏｎｄｏｎ）、３１１：３W２−３ＦＨ＋４．　Ｌａｂｅｉｔ、　Ｓ、、　Ｄ、　Ｐ、　Ｂａｒｌｏｗ、　Ｍ、　Ｇｍｕｔｅｌ、　Ｔ、　Ｏｉｂｓｓｍ、　Ｊ、　ＨＯＩＬ　ＣＬ　gｓｉｅｈ、　ＬＪ、Ｐｒａｎｋｔ、　ＬＬｅｏｒｕｒｄ、　Ｊ、　’Ｎｖｄｍｌｚ人、　％Ｖｈｉｔｉｎｇ、　ｖ−Ｊ、　Ｔｒｍｃｋ、　１９９０．＾ｒｅｇｏＬｔｒ　戸■ｔｍｏ■@ｔｗｏ　ｔｙｐｅｓｏｆ　１００−ｒｅｓｉｄｕｅｓ　ｔｍｔｉｆ　ｉｎ　能５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆｔｊｕｓｎ−Ｎａａｗしｙｒｗｋｘｘ）、２３１：５ｆｆV−５０９１５、　ＬａｅｍｍＬ　Ｕ、　Ｌ　１９７０．　Ｃｌｕｖｉｇｅ　ｏｆ　血鵡ｉ戸耽ｉｄｕｒｉｎｇ　ｆｂｅ　暖ｂｌｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈ■≠■ ｏｒ　ｈａｅｔｅｉａｐｈａｇｅ　ＴＪ、　Ｎａｎｔｒｅレーｏｎ）、　２２７：６１Ｂ６８５゜１６、Ｌａｎｇｓｌｅｙ、Ｇ、、１．Ｅ、Ｈｙｄｅ、Ｍ、Ｇｏｍａｎ、ａｎｄＪ、Ｇ、ｋｓｉｃ　１９１！３．Ｑｏｎｉ口ｇ　ａｎｄｃ）ｕｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏａ　ｏｆ　ｍｅ　ｒＲＮ＾ｇｅｎｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｈｕｍａｎｐａｒｕｓｗ　Ｐ−寵−硼ｆａｌｃ鰍垂≠獅■氏B Ｎｕｃｌ、＾ｃ山Ｒｅｘ、２４：ｇ７０３−１１７１７゜１７　、　Ｌｅｅｃｈ、Ｊ、Ｈ，、Ｊ、Ｗ、Ｂａｒｎｗｅｌｌ、Ｌ、Ｈ，Ｍｉｌｌｅｒ、ｍ３　Ｒ，Ｊ、Ｈｏ−、１９１１４，夏ｄｅｎｔｉ■奄モ≠狽奄盾氏@ｏｒａ　ｘｒｒｍ−５Ｔ１ｃｃｉｆｉｃ　ｒ＋ｕｌａｒｉａｌ　ａｎｔｉｇｅｎ　岬 −ｏｎ　ｔｈｅｍｌａｃｅ　ｏｆＰｉｍｎｏｄｉｕｍｆａｌｃｊｐａｎｘｎ−ｍｆｅｍＡｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｔｃＪ、Ｅｒｐ、ＭｅｃＬ　１５９：１５６フー１５７５゜１Ｂ、　Ｍｍｉｍｔｉｓ、　Ｔ、、　Ｅ、　Ｆ、　Ｐｒ１ｔｓｅｈ、　ａｎｄ　Ｊ、　Ｓａｍ−に、　１９ｇ２−　Ｍｏ１ａ＝ｕｌａｒ　ｃ撃盾獅奄獅■|＾１ｍ−独町ｒｒｕｎｕａ１．　Ｃｏｋｉ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈｍｌ力ｒムーｎｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　−ｒ、　ＮＹ。

＋９．　Ｍａｒｕｙａｒｎｓ、、　Ｌ　１９８６．　Ｃｏｎｎｅｃｔｉｎ、　ｗ　ｅ−ｃ　−ｒｕｏｕｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　ｍｉｘｍ@ｍｕｓｃｌｅ、　ＩｎｔＲｅｖ、　Ｃｙ＋ｏ１．　＋０４：８１−１１４゜２０、　Ｍａｎｅｉ、　Ｄ、、に、　Ｂｅｒｚｉ＋ｕ、　Ｍ、Ｗｓｈｌｇｒｅｎ、ＦＬ　Ｕｄａｍｓｘｇｐｅｔｃｈ、　Ｐ、　Ｐｅｒｌｍａ氏A）１．　Ｗ、　Ｇｎｅｕｔｘ、ん５ｃｈｅｒｆ、Ｂ、Ｍｉｌｌｅｒ−Ｈｉｌｌ、Ｓ、Ｂｏｎｎｅｆｏｙ、Ｍ、Ｇｕｉｕｏａｅ、Ｇ、Ｌａｎｇｃｙ、Ｌ　Ｐｅｒｅｉｒａ　ｄａ@５ｉｌｖｉ２１、Ｍｕｍ、Ｄ、、Ｇ、Ｌａｎｇｓｌｅｙ、ＣＢｎｕ＞Ｂ−Ｍ、ＧｕｕｌｏｔｚＪ、Ｆ、Ｄｕｂ鴬１ｗｈｄ　０５Ｍ１；セｕ−Ｐｕｉｊｍｌｏｎ−１９１Ｌ１１．　Ｔｈｅ　Ｓ−ｍｉｇａｓ　ｏｒ　Ｐム匍＾ム謂ｆａｌｃｔｐｙｓｍ　ＰｓＪｏんｍ　−陣cコｔｓ鳳ｎｅｗ　Ｓ−ａｎｔｉｇｅｎｓｅｒｏｔｙｐｅ、ＭｏＬＢｉｃ（１）Ｃ１口、ｐＨ５ｉｏＬ２フ：ｌフ１−１！１０゜二、　Ｍａｔｔｅｉ、　Ｄ、、人、　５ｃｈｅｒｆ、　Ｏ，Ｂｅ！Ｌｕｕｄｅ、　社−Ｌ　Ｐｅｒｅｉｎ　ｄａ　５ｕｖａ、　１９８９．　`　ｂｅｇＳ藺ｄ−一戸准ｉｎ　ｆｒｏｍ蝕す石順血ｈｉｐｔｒｍｔｅ　Ｐム開−励す−婢ず覇ｔｉｎｄｕ瀉ｓｕｔｃｍｔｉｂｏａｉｅｓ、Ｅｕｒ　Ｊ　１ｍｍｕｒ＋ｏ１１’）、１８２３−１ｇ２３Ｃ。

２３　、　ＭｃＣｕｔｅｔｕｎ、　ＴＪ、、　Ｊ、Ｌ）ｈｎｓｅｎ、　Ｊ、Ｂ、　ＤＩＪＴ！、　−Ｊ、んＭ−一、１９Ｕ、　Ｍｕｎｇ　ｂ■≠氏@ｎｕｃｌｅａｓｅｃｅｓｖｅｓ　ＰｋＬａガ！×ｈ１す胃ｇｅｎｏｒｒｉｃ　ＤＮ＾ａｔｓｉｔｅｓ　ｈ＝ｆｏｒｅ　１ｕ）ｄａｆｔｅｒ　ｇｃ１巳（Ｓｃｉ■獅モ■Q２５：　６２５−６２８゜２４、　Ｍｅｒｅｅｒｅａｔ＋−ＰｕｉｊｕｌＯｎ、　Ｏ，、Ｇ、　Ｌａｎｇｓｌｅｙ、　Ｄ、　Ｍｍ　Ｍ、　Ｇｕｕｌａａｃ、　Ｔ−Ｂ−高bｋ、　Ｋ、　Ｂｅｒｚｉｕ。

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２８、Ｐｏｌｏｇｅ、ＬＧ、、ａｎｄ　Ｊ、Ｖ、ＦＬａｖｅ！ｃｈ、１９８１１．Ｌａｒｇｅｄｅｌｅｔｉｏｍｒｅｓｕｌｔ−セ−ｇｅａｎп@−串ｆＰ、ｆａｌｅｉｐａｒｕｍ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｉ　Ｃｅ止５５：　１１６９ −ｇ７４゜２９、　Ｐｏｎｊ、　Ｍ、、　Ｔ、Ｐａｃｅ、Ｅ、　Ｄｏｖｅ、ｓｒｔ　ＣＰｒｏｎ吐１９１！５．１＆ｎ＃ｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｍｏ窒窒翌■ 窒奄メ@ＤＮ＾５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｉｎ　Ｐｌａｓｎｕｘｉｉｕｍ、　ｂｅｒｚｈｔｉ、　ＥＭＢＯＪ、　４：２９９１−２９９５゜３０、　Ｐｕｄｌｅｓ、Ｊ、、　Ｍ、　Ｍｏｕｄｊｏｕ、　Ｓ、Ｈ４ｓａｍｇｓ、　Ｌ　Ｍ艙り聞亀ｖ−Ｈ，Ｓａｋｍ、　１９９０．　ｈｏkａｔｉｏｎ。

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Ｒ，Ｃａｎｅｒ、　ａｒｉｄ　Ｔ、　Ｆ、　ＭｃＣｕｔｃｈｍ、　１９Ｆｎ、＾石ｓｔｉ山ｎｅ・ｒｉｃｈ　ｐｎｏｔｅｉｎ　ｇｅｎｅ　ｍ≠窒汲刀@ｍ　ｌｉｎｋａｇｅｇｏｕｐ　ｆａｖｏｒｅｄｓｔｎｏｎｇｌｙ　ｉｎ　ｍ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｃｒｏｓｓ　ｏｒ　Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ　ｆａｋｉｐｎｎｔｍA　Ｃｅｕ、　４９：６３３−６４１冒Ｃ１１１−（至） ■■■＋−−Ｌ（３菫？ＩＧＬｉＲＥ　ＬＦＩＧＵＲＥ　２フロントページの続き（５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，Ｓ　識別記号　庁内整理番号Ｃ０７Ｋ　７／１０Ｃ１２Ｎ　５／１０Ｃ１２Ｐ　２１１０２　８２１４−４Ｂ／／　Ｃ０７Ｋ　９９：００（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、ＡＵ、ＣＡ、ＪＰ、ＵＳ（７２）発明者　メルスローーピュイジャロン、オデイルフランス国、９２１３０・イシー・し・ムリノー、プルバール・ポルテール・１１Ｉ（７２）発明者　ボネフオイ、セルシュフランス国、９２１１０・クリシー、リュ・ビルヌープ・６９（７２）発明者　シイ・サン、ジュルグフランス国、６９６７０・ポニュレ、し・ロシュ（番地なし）

Claims

【特許請求の範囲】

１．（場合により、融合タンパク質に組み込むか、オリゴマー化するか又は担体タンパク質に結合したときに）リスザルＳａｉｍｉｒｉ　ｓｃｉｕｒｅｕｓにおいて防御免疫応答をｉｎ　ｖｉｖｏで誘導することが可能であるという前提に基づき、下記アミノ酸配列：【配列があります】により定残されるポリペプチド配列又はこの配列の一部を含むポリペプチド。
２．メロゾイトによる赤血球侵入を抑制することがそれ自体可能な抗体をｉｎ　ｖｉｖｏで誘導することが可能であることを特徴とする請求項１に記載のポリペプチド。
３．前記ポリペプチド又はポリペプチド配列の一部が、同一濃度のメロゾイトの存在下で且つ該当種のポリペプチド又はポリペプチドの一部の不在下で同一条件下におかれた対照赤血球調製物中で観察可能な割合の少なくとも５０％の割合で赤血球侵入を抑制することが可能な抗体をｉｎｖｉｖｏで誘導することが可能であることを特徴とする請求項２に記載のポリペプチド。
４．下記配列（ａ）〜（ｏ）：（ａ）ＳＶＴＧＮＩＬＶＥＧ。（ｂ）ＳＶＴＥＥＶＶＧＥＥＫ。（ｃ）ＬＶＳＥＥＩＶＴＥＥＧ。（ｄ）ＳＶＡＱＥＩＶＥＥＤＡ。（ｅ）ＰＡＴＥＥＩＤＥＩＥ。（ｆ）ＳＶＴＥＥＶＶＥＥＥＧ。（ｇ）ＰＶＤＥＥＩＶＱＥＥＧ。（ｈ）ＴＶＴＥＥＩＩＱＧＥ。（ｇ）ＰＶＤＥＥＩＶＱＥＥＧ。（ｈ）ＴＶＴＥＥＩＩＱＧＥ。（ｉ）ＳＫＶＥＥＶＶＥＥＱＧ。（ｊ）ＳＥＮＥＥＩＦＶＥＥＶ。（ｋ）ＳＡＳＱＥＩＶＱＮＥ。（ｌ）ＳＧＴＥＥＩＬＥＫＶ。（ｍ）ＳＡＳＱＥＩＶＱＤＧ。（ｎ）ＳＶＴＥＱＩＩＥＥＬＦ。（ｏ）ＰＶＴＥＥＶＶＮＥＥＥ。の１つ又は式：（Ｘ）３−ＥＥ−（Ｘ）２−ＥＥ−（Ｘ）２−３（式中、Ｘ基の各々は該当基を囲む括弧の後の指数に従い、少なくとも１個の疎水性アミノアシル残基を各々含むジペプチド又はトリペプチドを表す）により表され得るモチーフを有するペプチド等価物により構成され、該ペプチド等価物がリスザルＳａｉｍｉｒｉ　ｓｃｉｕｒｅｕｓにおいて防御免疫応答を誘導することが可能であることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載のポリペプチドの一部。
５．融合タンパク質に組み込まれているか、オリゴマー化されているか、又は分子、特に担体タンパク質に共有結合されていることを特徴とする請求項１から４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
６．ヒトにおけるマラリアに関与する寄生虫を特に血液段階で死滅させ得る抗体をｉｎ　ｖｉｖｏで誘導することが可能な組成物であって、医薬的に許容可能なビヒクルと共に請求項１から５のいずれか一項に記載のポリペプチド又はポリペプチドの一部を含むことを特徴とする組成物。
７．請求項１から４のいずれか一項に記載のポリペプチド又はポリペプチドの一部の特異的抗体。
８．請求項１から４のいずれか一項に記載のポリペプチド又はポリペプチドの一部をコードすることを特徴とするＤＮＡフラグメント。
９．該フラグメントに対して異種のＤＮＡ成分を該フラグメントの外部に有する融合タンパク質をコードするＤＮＡ中に組換状態で存在することを特徴とする請求項８に記載のＤＮＡフラグメント。
１０．請求項８又は９に記載のＤＮＡフラグメントにより改変されたベクターであって、前記フラグメントがプロモーターの制御下におかれており、該プロモーターが該プロモーターを認識するポリメラーゼを有する細胞宿主中で前記フラグメントを発現できるように構成されている前記ベクター。
１１．請求項１０に記載のベクターにより形質転換された細胞培養物。
１２．被験者から採取した生物サンプル、特に血清中における抗マラリア抗体の存在をｉｎ　ｖｉｔｒｏで診断するための、請求項１から５のいずれか一項に記載のポリペプチド又はペプチドの適用。
１３．被験者から採取した生物サンプル、特に血清中におけるマラリア寄生虫による感染をｉｎ　ｖｉｔｒｏで診断するための請求項７に記載の抗体の適用。
１４．別のワクチン性抗原、好ましくはポリペプチドｉ７２のアミノ酸配列を含む抗原又はポリペプチドＲ２３のアミノ酸配列を含む抗原を含む請求項６に記載の組成物。