JPH06507558A

JPH06507558A - ポリマーコーティング

Info

Publication number: JPH06507558A
Application number: JP4510158A
Authority: JP
Inventors: イアンニ，イアナキス・ペトロウ; ワイルズ，マーテイン・チヤールズ
Original assignee: バイオコンパテイブルズ・リミテツド
Priority date: 1991-06-07
Filing date: 1992-06-05
Publication date: 1994-09-01
Also published as: DE69214466D1; DE69214466T2; US5496581A; EP0641226A1; EP0641226B1; GB9112267D0; ATE143815T1; WO1992021386A1; ES2093271T3

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ポリマーコーティング本発明は、タンパクの吸着を防止もしくは阻害するか、またはトロンビン形成を減少するように材料の表面を処理することに関する。

血液と接触する装置において、問題は、未処理の金属、ガラスもしくはプラスチックの表面におけるトロンビン形成反応から生ずる。そのような反応は、深刻な、時には悲惨な結果をもたらす血小板付着および凝固に導（可能性がある。それ故、そのような反応を減じ、好ましくは避ける表面の処理を発展させることが望まれる。

問題は、また、医療装置のような多くの応用に使用される装置の表面に、非特異的にタンパクが吸着することから起きる。例えば、多くのバイオセンサーのような多くの近代的診断装置において、検体と検出器種の間の特殊な相互作用が関係する。そのような場合には、非特異的なタンパク吸着は、感度において劇的な損失を招くことになるし、または装置を操作不可能にすることもある。同様に、バイオ分離膜が使用される場合には、非特異的なタンパク吸着は、目詰まりを引き起こし、それにより膜を汚染することになる。

タンパク吸着は、また、コンタクトレンズのような視力補正器具においても問題として認識される。そのような器具に形成されるタンパクは、装着している人の安心感を削ぎ、視覚の悪化に導く。

多（の近代の外科的および医学的操作は、外科的充填、補綴、カテーテル、流出管および体外回路のような血液と接触する装置の使用を含む。

そのような装置は、使用されてから、衛生的理由によって廃棄される：それ故、そのような装置は、入手出来る最も経済的な材料、通常はポリマープラスチックもしくはガラスから作られる。しかしながら、既に述べたようにガラスおよび多くの合成ならびに天然ポリマーは、血小板の付着や賦活を起こし易い。凝固カスケードの開始は、チューブを塞いだり、濾過および透析膜のような他の装置を詰まらせることになり、さらに、ある場合には、患者に対し悲惨な結果をもたらすことにもなる試験方法の障害へとつながる。その上さらに、装置が、充填され、長期間留まるようにした場合には、そのような血小板凝固や凝血は、長期間にわたって避けられねばならない。

現存の技術をもって、血液透析のための体外循環、重い呼吸不全の状態での長期ガス交換、および、例えば、心臓外科後の心臓維持の間、血液凝塊の形成を防ぐためには、全身系のヘパリン投与が行われる。そのような全身系の抗凝血剤処置の後には過度の出血の危険があるため、多くの患者は、可能な治療上の計量から遠ざけられる。同じように、例えば、重病の患者における動脈の酸素、炭酸ガス圧、およびｐＨの連続測定のための市販カテーテルセンサーは、センサー膜上の微小凝血および装置の不全を防ぐために、全身系のヘパリン投与を特徴とする特にヘパリン断片の末端付着を含む装置のヘパリン化は、表面の抗トロンビン形成性コーティングとなり、それによって全身系のヘパリン処置の必要性を克服するであろう、ということが考えられる。かくして、ヘパリンを末端付着によって結合させるという方法が、発展された［ｔｌ。

ｆｆｍａｎ、　Ｊ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、　１１７：３２８（１９８３）、　Ｌａｒｍ、　０．　ｅｔａｌ、、　Ｂｉｏａ＋ａｔ、　Ｍｅｄ、　Ｄｅｖ、　Ａｒｔ、　Ｏｒｇ、、　１１：１６１（１９８３）］。得られた表面は、抗トロンビンならびに抗トロンビンの存在で急速に阻害された多量のトロンビンを吸着した［Ｐａ５ｃｈｅ、　Ｂ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｔｈｒｏｍｂ、　Ｒｅｓ、、　４４７３９（１９８６）。

末端付着したヘパリンおよびその内皮は、血漿の存在下のトロンビンの阻害に関して、定量的および定性的な両面で同様に働き［Ａｒｎａｎｄｅｒ　Ｃ。

郵」す、、　Ｊ、　Ｂｉａｓｅｄ、　Ｍａｔ、　Ｒｅｓ、、　２０：２３５（１９８６）］、また末末端者したヘパリンを付与されたポリエチレンの表面は、ファクターＸａを阻害する可成の能力を示す［Ｋｏｄａｍａ、　Ｋ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｔｈｒｏｍｂ、　Ｈａｅｍｏｓｔａｓ、（１９８７）コという、指摘は興味深い。

末端付着したヘパリンをもつ強固なポリエチレンチューブ部分が、４力月にわたってブタの胸部大動脈に保持された［Ａｒｎａｎｄｅｒ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ、　。

Ｂｉｏｍａｔ、　Ｒｅｓ、、　（１９８７）］。伸長したポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）が血管移植用片に応用された場合、および羊の動脈に移植されたポリウレタンに応用された場合［Ｅｓｑｕｉｖｅｌ、　Ｃ，０，ｅｔ　ａｌ、、　Ｓｕｒｇｅｒｙ。

９５　：　１０２（１９８４）］、末末端者したヘパリン表面は、血小板とフィブリンの沈着を十分に減少させた。

表面をヘパリン化した装置を通しての血液の体外循環は、抗トロンビン性を達成するための主な決定因子として、血小板の役割と血漿凝固機構とを区別する可能性を提供した。これらの実験において他の硫酸化ポリマーによるコーティングが、ヘパリンコーティングと同様に血小板適合性ではあるものの、しかし、なお、トロンビン形成性であることが示された。フィブリノペプチドＡに対するラジオ免疫アッセイ［Ｎｏ５ｓｅｌ。

Ｈ，Ｌ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、、　５４：４３（１９７４）］を用いて、ヘパリン分子が血漿成分と相互作用し得るコーティングのみが、血液との接触においてフィブリノーゲンのフィブリンへの変換を防ぐことが出来る、ことが示された［Ｌａ５ｓｏｎ　Ｒ，ａｎｄ　Ｌｉｎｄａｈｌ　Ｕ、、Ａｒｔｉｆ、　Ｏｒｇ、、　Ｖｏｌ　３．５ｕｐｐｌ。

Ｐｒｏｃ、　ｏｆ　ｔｈｅ　５ｅｃｏｎｄ　ｍｅｅｔｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｔｎｔｅｒｎ、　Ｓｏｃ、　Ａｒｔｉｆ、　Ｏｒｇ、。

（１９７９）；　Ｌａｒｓｓｏｎ　Ｒ，、ｅｔ　ａｌ、、　Ｔｈｒｏｍｂ、　Ｒｅｓ、、　１９：４３（１９８０）；　Ｌａｒｍ、　０゜ｅｔ　ａｌ、、　Ｂｉｏａ＋ａｔ、　ｌｅｄ、　Ｄｅｗ、　Ａｒｔ、　Ｏｒｇ、、　１１：１６１（１９８３）］。

か（して、固定化されたヘパリン上の完全な官能基の存在が、抗トロンビン性を達成するために必須であり、血液と接触する医療装置上をヘパリンコーティングすることが、危険な全身系の抗凝血処置を不要とすることが出来た。

実験的な血液透析が、全身系のヘパリン投与なしに、末端付着したヘパリン表面をもつ酢酸セルロースの中空糸フィルターを用いて、遂行された。全、体外システムをコーティングする効果が、透析される動物におけるフィブリノペプチドＡの水準が、外科処置されない麻酔対象動物におけるよりも高くはないという事実、にょって示された［＾ｒｎａｎｄｅｒＣ，，ｅｔ　ａｌ、、　Ｐｒｏｃ、　Ｅｕｒ、Ｓａｃ、　Ａｒｔ、　Ｏｒｇ、、　９：３１２（１９８２）、　Ｌｉｎ５．　Ｌ、−Ｅ　ｅｔａｌ、、　Ｐｒｏｃ、　ＥＤＴＡ−ＥＲＡ、　２１：２７０（１９８４）］。末末端者したヘパリン表面が、体外循環に使用された場合、二酸化炭素の除去のための静脈−静脈バイパスは、イヌにおいて定常状態で２４時間容易に実施された。ヘパリンの少量の遊離後も、凝血機構は、血液循環におけるフィブリノペプチドＡの水準によって測定されるように影響を受けていないと思われた［Ｌａｒｍ、　Ｏ，ｅｔ　ａｌ１９表面修飾による抗血栓症へのアプローチ、　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　１ｎａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｏｒｇａｎｓ、　ｌ５ＡＩＯＰｒｅｓｓ、　Ｃ１ｅｖｅｌａｎｄ　１９８６．　ｐ３１３．　Ｉｎａｃｉｏ、　Ｊ。

ｅｔａｌ、、表面をヘパリン化した静脈から静脈へのバイパスを用いる二酸化炭素の体外排泄、　ＥＵＲＯＸＹ　１ｏｒｋｓｈｏｐ　ｏｎ　ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ｏｆ　ｅｘａｌ、、　Ｔｒａｎｓ、＾ｔ　Ｓｏｃ、Ａｒｔ、Ｉｎｔ、Ｏｒｇ、３２二５３０（１９８６）］。

ヘパリン化は、凝血を減じたり、防ぐことが出来るけれども、これは、血液生化学との干渉、例えば、抗トロンビンと他の微細な変質との複合化、を犠牲にしている。ヘパリン化された表面は、抗凝血薬として投与された場合、多くのヘパリンの効果を発揮しており、それ故、この技術が、血液と接触する装置の血液適合性を改良するために用いられた場合、ヘパリンの逆の副次的効果を、計算に入れておく必要がある。

近年において、特に血液適合性有機グループの共有結合によって、血液に接触する表面の生物適合性を改良する表面処理の発展に対し、また、外科的移植、補綴および人工心臓のような、血液と接触する装置に使用するための、より生物適合性の材料の製造に対して、多数の努力が払われて来た（例えば、欧州特許出願公開第００３２６２２号および欧州特許出願公開第０１５７４９６号参照）。

特に、欧州特許出願公開第００３２６２２号では、血液と接触する表面のコーティングに使用出来るジアセチレン化リン脂質について開示している。コーティングされた表面は、続けて化学線（例えば、紫外線）によって照射され、重合した安定なコーティング表面を提供し、また、血液と接触する表面の生物適合性を改良する。

しかしながら、そのような操作は、紫外線照射のような照射に、例えば、それらの位置（チューブの内面のような）の関係で容易に曝され得ない血液と接触する表面への応用に対しては、適していないし、あるいは、例えば、塩化ポリビニル（ＰＶＣ）の表面には、それらが、ガンマ線に感受性であるので適さない。

今、われわれは、血液と接触する表面のトロンビン形成を減少させるか、または、タンパク表面の非特異的な吸着を阻害もしくは防御する単純な方法を発明したが、それは、紫外線照射を利用できず、モして／またはガンマ線に感受性の表面に効果的に使用出来る方法である。その表面は、トロンビン形成もしくはタンパク吸着が、長期間にわたって避けられるような安定な被膜によってコーティングされる。

われわれは、本発明において使用されるコーティングが、抗トロンビン形成のものとしてよりも、むしろ非トロンビン形成の、そして血液生化学との相互作用を全く伴わないものとして、見なされ得ることを信じる。

それ故、そのようなコーティングされた表面は、血液と接触する装置において、また、非特異的なタンパク吸着を減じることが望まれる装置、例えば、被検体とバイオセンサーのような検出蓋積との特異的相互作用を必要とする診断装置、生物的分離膜および視力補正器具において応用される。

そのような有利な性質を示す処理された表面は、未処理膜と比較して、改善された生物適合性を有するということが出来る。

また、本発明の方法によってコーティングされた表面は、実効表面電荷を持たないことが、分かった。そのような性質は、本発明の方法を、さらに一層の応用、例えば、電子工業および静電気帯電や妨害バックグラウンドチャージを減らす必要のある電気化学的検出における応用へと導（。

さらに加えて、本発明は、コーティングされた表面が、湿潤性並びに潤滑性を改善するという、多くの応用における一層の有益性を提供する。

このことは、例えば、管内での気泡の発生を抑えたり、また外科的切開を通してのカテーテルの挿入を容易にすることでも役立つ。

本発明によって、有機溶剤中のポリマーの溶液もしくは懸濁液をその表面に適用すること、およびその溶剤を除去することを包含する表面をコーティングする方法が提供されるが、この場合、そのポリマーは、式（Ｉ）のリン脂質を重合することによって得られる：式中、ＢＩおよびＢ２の少なくとも一つは、式（ＩＩ）ニー（Ｃｏ）ｐ−Ｘｉ　−ＣＩＩ　Ｃ−ＣＩＩ　Ｃ−Ｙｌ（エエ）の基であり、この場合、ｐは０もしくは１、好ましくは、１であり、ＸＩは、脂肪族もしくは脂環式基、ＹｌはＨｌまたは一価の脂肪族もしくは脂環式基であり、各Ｂ１および／またはＢ２中のＸｌおよびＹｌの全炭素原子数は、８〜２６であり、さらにＢｌおよびＢ２のその他のものは、（ａ）式（Ｉ　Ｉ）の同じか、もしくは異なる基、または、（ｂ）少なくとも８個の炭素原子数を有する脂肪族もしくは脂環式基、のいずれかであり；ｍは、２．３もしくは４であり、各Ｒは、独立に１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を表す。

本発明の方法に使用されたポリマーは、通常、式（Ｉ　Ｉ　Ｉ）の反復単位を含有するであろう：式中、Ｚｌ、Ｚ２、Ｚ３およびＺ４の二つは、上記Ｙ１の各基であり、Ｚｌ。

Ｚ２、Ｚ”およびＺ’の他ノ二つハ、各、式−Ｘｌ−（Ｃｏ）ｐ−Ｇであり、ここで、ＸＩおよびｐは、上記定義されたものであり、Ｇは、式（Ｉ）のリン脂質の残された部分に対応するものである。特に、それらは、ジアセチレン単位の逆の端の間を結合する反復単位を含有してもよく、この場合、ＺｌおよびＺ４または、Ｚ２およびＺ３は、式Ｙ１であり、Ｚ２およびＺ３または、ＺｌおよびＺ４は、式−Ｘ’−（Ｃｏ）ｐ−Ｇである、すなわち式（ＩＶ）の基である：式（Ｉ）の共役ジーインは、式（Ｖ）の双性イオン基をもつ。

好適な双性イオン基は、天然のリン脂質レシチンおよびスフィンゴミエリンのリン酸結合基の同族類、すなわち、ｍが、２であり、Ｒが、メチルであるコリンリン酸基である。各Ｒ基が、メチルであることが、好ましいが、一方、それが天然に存在する生成物にあるように、Ｒは、エチル、プロピルもしくはブチルでもよ（、また同じでも、異なっていてもよい。

本発明の一つの実施態様では、式（Ｉ）の共役ジーインにおいて、両方のＢ１およびＢ２は、同じかもしくは異なる式（Ｉ　Ｉ）の基である。

ＢｌおよびＢ２が同じである化合物を称していう対称化合物は、合成が最も容易であり、従ってより好適である。

はない。例えば、Ｙｌが、水素であり、Ｘｌが少なくとも８個の炭素原子をもつように、カルボン酸エステルもしくはエーテル官能基から離れた疎水鎖の末端に位置することが、共役ジ−イン系に対して可能である。

しかしながら、ＸｌおよびＹｌにおいてほぼ同数の炭素原子であるように、疎水鎖の中心の方に位置するよう、共役ジ−イン系に対して配列することが、通常は、より都合がよい。

ＸＩおよびＹｌは、好ましくは、各々脂肪族もしくは脂環式基であり、より好ましくは、各々分枝していない飽和の炭化水素化合物である。しかしながら、ＸｌおよびＹｌは、一方では、分枝鎖炭化水素部を含有するか、または炭化水素鎖に置換基、例えば、アルコキシ置換基もしくはハロゲン、を含有する脂肪族もしくは脂環式基でもよい。また、ＸＩおよびＹｌ基に対して、炭素−炭素不飽和結合を含むことも可能である。

式（Ｉ　Ｉ）の各基Ｂ１およびＢＩにおけるＸＩおよびＹｌの全炭素原子数は、各疎水鎖が、カルボニル炭素原子を除いて全炭素原子１２〜３０個を有するように、８〜２６個である。われわれは、もし、基Ｂ１および／またはＢＩが、炭素原子１２個より少ない場合には、得られる材料は、非常に低温を除いて重合させることが困難である、ということを発見した。実際問題として、われわれは、最も満足できる結果は、カルボニル炭素原子を除く基Ｂ′および／またはＢＩにおいて、炭素原子１６〜２６である場合、特に、２０〜２６である場合に、得られることを見出だしている。

式（１）の好適な化合物は、Ｂ１およびＢＩが、両方、式（Ｉ　Ｉ）の基であり、ＸＩが、基−（ＣＨｚ）ａ−であり、好ましくは、ｐが１である化合物を包含する。

基ｘ１およびＹｌは、また、脂環式配置において３〜８個もしくはそれ以上の炭素原子を含む脂環式残基を含有することが出来る。

共役ジーインの重合に関する以下の議論から明らかになる理由によって、ＢｌおよびＢ２の両方は、共役ジ−イン系が分子内および分子間両方の重合に関与出来るように、共役ジ−イン系を含有することが好ましい。

しかしながら、十分な程度の重合は、基Ｂ１およびＢ２の一つが共役ジ−イン系を有することのみが必須である場合に、分子間重合によって容易に得ることが出来る。実際、ある場合には、ＢＩおよびＢ２の一つのみが共役ジ−イン系をもつジーインを使用することが好ましく、それによって、線状リン脂質ポリマーが得られ、ポリマー鏡開に架橋結合を有するものは出来ない。

Ｂ１およびＢ２の一つのみが、共役ジ−イン系をもつ場合には、Ｂ１およびＢ２の他の一つは、脂肪族もしくは脂環式残基、好ましくは、炭化水素残基でもよく、それは、飽和されているか、または、オレフィンもしくは共役ジ−イン系と分離しているか共役している多分１個のアセチレン不飽和をもつことが出来る。そのような基は、エステルもしくはエーテル基を通してグリセロール残基に再び結合され、少なくとも１２個の炭素原子をもつであろう。

式（Ｉ）の最も好適なリン脂質は、１，２−ジトリコサノイル−１０゜１２−ジイン−５ｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリンおよび１，２−ジペンタコサノイル−１０，１２−ジイン−５ｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、即ち、次式の化合物である：式（１）の共役ジーインは、欧州特許出願公開第００３２６２２号に記載されている方法によって作成される。

式（Ｉ）の共役ジーインは、化学線、通常ガンマ線照射によって重合させることが出来る。そのような照射は、隣接するジアセチレン鎖において共役ジ−イン系の間で重合を起こさせる。このことは、既に定義したように式（Ｉ　Ｉ　１）の繰り返し単位を含むポリマーを生じさせる。

Ｂ１およびＢ２の両方が、共役ジ−イン系を含有する場合には、出来るだけ安定なコーティングを提供するために望ましい、分子内および分子間両方の反応が起きるであろう。この理由から、Ｂ１およびＢＩの両方が、共役ジ−イン系を含有することが好ましく、分子内反応を最適にするために、ＢＩおよびＢ２における共役ジ−イン系の相対的位置は、はぼ同じであること、言い換えれば、共役ジ− イン系をグリセロール残基に結合している炭素鎖は、長さで炭素原子２個以上達わないことが好ましい。

しかしながら、ＢＩおよびＢｔの両方に共役ジ−イン系を含むジーインが使用される場合には、いくらかの溶剤不溶性のポリマーが、ポリマー鏡開の架橋結合によって得ること力咄来る。このことは、そのような架橋結合を最小にする反応物と反応条件の選択によって、および／または不溶性の架橋結合物から可溶性のポリマーを分離することによってコントロール出来る。

プレ重合は、通常ガンマ線の照射によって開始されるが、原則的に、共役ジ−イン系の重合を引き起こし得るいかなる方法も、本発明におｌ、）て使用されるポリマーの作成に使用することが出来る。

リン脂質は、意味のある分子整列があればどんな形でも（例えば、固相においても、または水の存在においても）プレ重合され得る。

式（Ｉ）の１ル脂賀は、典型的には、波長　、０５〜１４ｎｍ、照射量１〜５０、好ましくは２〜１０、例えば２．５Ｍ、Ｒａｄのガンマ線照射によって、固形の塊状に重合される：正確な照射量は、要求される重合程度に依存する。この方法は、乾燥細粉状リン脂質において行われる。

式（Ｉ）のリン脂質は、そのほか、紫外線照射によっても重合させることが出来る。一般に、短波長紫外線の照射、例えば約２５４ｎｍの波長をもつものが使用される。典型的な照射は、乾燥粉状リン脂質において行われるが、この場合には、材料の大部分が、確実に照射に曝されるように、規則的にリン脂質を撹拌する必要がある。

式（１）のリン脂質は、また、基材上に薄層としてプレ重合させ、基材から除かれ、本発明の方法において使用することが出来る。好適な基材は、ガラスもしくはポリエチレンを包含する。薄層は、クロロホルムもしくはエタノールのような溶剤にリン脂質を溶解し、基材上の溶剤をゆっくりと蒸発させることによって作成される。そのような薄層の使用は、重合の間のリン脂質分子を方向づけるのに役立つ。照射後、得られるポリマーは、例えば、掻き取るか、もしくは有機溶剤に溶解することによって基材から除かれる。

式（Ｉ）のリン脂質は、また、水溶液もしくは懸濁液の形で、重合させることも出来る。

共役ジーインは、既知の方法で作成される水相中のリポソームの形で、照射されることもある。そのようなリポソームは、例えば、水媒体中に共役ジーインを分散させ、その脂質以上の温度、またはその温度でリポソーム形成が起きるチャツプマン（Ｃｈａｐｍａｎ）遷移温度に、分散液の温度をを上げ、その後外界温度まで分散液を逆に冷却することによって作成される。しかしながら、重合が、リポソーム上で行われる時には、ポリマー鏡開の架橋結合は、しばしば不溶性ポリマーの形成を起こす。それ故、この場合には、ＢｌおよびＢ２基の１個のみが、共役ジーインを有するリン脂質を使用することが好ましい。

さらにその他には、共役ジーインは、水相と有機相聞の乳濁液の形での照射によってプレ重合させることも出来る。そのような乳濁液のために好適な有機相は、クロロホルム、ジクロロメタン、もしくはジエチルエーテルを包含する。

プレ重合リン脂質は、表面をコーティングする前に、式（Ｉ）の未重合リン脂質およびポリマー鏡開で架橋結合された材料とから分離してもよい。これは、有機溶剤中の未重合モノマー、プレ重合ポリマーおよび架橋結合された材料の相違する溶解性を利用して行うことが出来る。例えば、クロロホルム中での、モノマーおよびプレ重合材料の可溶性、架橋結合材料の不溶性を利用して、架橋結合材料を除（ことが出来る。次いで、プレ重合材料は、モノマーが可溶性でポリマーが不溶性であるアセトニトリルを（例えば５０℃で）使用して、モノマー材料から分離出来る。あるいはまた、七ツマ−とプレ重合材料の分離は、例えば、溶媒としてクロロホルム／エタノール混合液（例、１：１）を用いる、ゲル浸透クロマトグラフィーカラムにより可能である。

さもなくば、リン脂質は、ポリマーとモノマー類の混合物として、それ以上の精製をすることなく、表面上にコーティングされてもよく、この場合には、コスト効率の点でかなり有利となる。

表面をコーティングする前に、重合リン脂質は、ホスファチジルコリンの１もしくはそれ以上の脂肪酸ジエステルと混合されてもよい。

本発明の方法において使用されるホスファチジルコリンの脂肪酸ジエステルは、飽和および不飽和脂肪酸のエステルを包含し、ジパルミトイルホスファチジルコリン（Ｄ　Ｐ　Ｐ　Ｃ）およびシミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ ’ｌのような純粋な単一化合物、そのような化合物の混合物、ならびに卵黄もしくは大豆レシチンからのホスファチジルコリンの脂肪酸ジエステルのような精製された天然産物でもよい。ホスファチジルコリンの混合ジエステルが、使用されてもよい。好ましくは、脂肪酸側鎖は、分枝してなく直線状であり、炭素原子１２〜２０個である。

精製された天然産物は、ホスファチジルコリンの脂肪酸ジエステル以外の少量の成分を含むが、これらは、一般的にコーティングの生物適合性を阻害するほど多い量で存在してはならない。特に、ホスファチジルセリン、およびタンパク吸着もしくは血液凝固を引き起こすその他の陰イオン性リン脂質は、避けねばならない。

これらのホスファチジルコリンのジエステルの使用は、それらが容易に入手出来るので、経済的にかなり有利である。本発明の方法にそのような混合物が使用される場合は、それは、表面のコーティングに十分な安定性を持たせるために、重合されるジアセチレンリン脂質の重量に対し、好ましくは、少なくとも１０％、より好ましくは、２０％を含有する。

処理される表面は、コーティングに対して、場合により、表面の汚染物を除き、コーティングの付着を改善するための洗浄がなされ、表面の疎水性を増大させるためのシリル化、プラズマ重合もしくはその他の方法が施されてもよい。

表面の予備洗浄は、コーティングを行う際に使用する溶剤もしくは溶剤系と同じかまたは異なる以下に示すような好適な溶剤を使用するのが効果的である。表面はまた、酸素ガス中でのプラズマエツチングによって清浄にされる。シラン化による表面の前処理は、好ましくは、ハロシラン、例えば、トリクロロ−オクタデシルシランもしくはクロロジメチルオクタデシルシランのような反応性アルキルシランをヘキサンもしくはクロロホルムのような適切な溶剤に溶解しての使用が効果的である。

過剰の反応物は、その後の洗浄段階で除去される。

その他には、疎水性を増大させるための前処理は、グロー放電を与える条件でのプラズマ重合、例えば、プラズマバレルエツチングにより効果的に行われる。そのような前処理に使用される好適なモノマーは、炭素原子５〜２０個、好ましくは、５〜１２個を有するアルカン、例えば、ヘキサン、オクタンもしくはデカン、および炭素原子５〜２０個、好ましくは、１２〜２０個を有するアルキルシラン、例えば、オクタデシルシランもしくはビニルシラン、を包含する。

コーティングの厚さは、その機器の使用目的によって選択されるであろう。本発明によるコーティングのために考えられる典型的な厚さは、３〜１０１０００ｎ好ましくは、１０〜５００ｎｍ、さらに最適なものは約１１００ｎである。

処理される表面は、血液に接触する表面であってもよ（、あるいは、例えば、バイオセンサー、バイオ分離膜、または電子機器もしくは部品、電気化学的検出もしくは分析装置、の表面のようなその他のタイプの表面でもよい。それは、血液に接触する装置のような最終製品の表面でもよ（、または、最終製品の形成に使用される材料の表面であってもよい。

後者の場合、次の形成段階は、本発明の方法によってその装置の部分に作られる、使用中の表面を保護するためのコーティングの破壊を避けるために、また、リン脂質コーティングに対する、例えば、高温による化学的損傷を避けるために選択される。処理される表面は、以下においては、“基材（ｓｕｂｓｔｒａｔｅ） ″として言及されるであろう。

本発明によりコーティングされた基材の例は、ガラス（例、ソーダガラス、シリカガラス）、銀およびステンレス鋼のような金属、セルロースおよび半合成セルロース誘導体のような天然ポリマー、ならびに、ポリウレタン（例、ペンタン）、塩化ポリビニル（ＰＶＣ）のようなビニルポリマー、ポリエチレンテレフタレート（例、ダクロン）のようなポリエステル、ポリエチレンおよびポリプロピレンのようなポリアルケン、ポリカーボネートおよびポリスルホンおよびポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）　、ニフッ化ポリビニリデン（ＰＶＤＦ）およびテトラフルオロエチレンとへキサフルオロプロピレンのコポリマーであるフッ素化エチレンポリマー（Ｆ　Ｅ　Ｐ）を含むその他のポリ（フルオロアルケン）のようなフルオロポリマー、のような人工ポリマーを包含する。

溶剤は、プレ重合リン脂質を溶解もしくは懸濁するのに都合がよいどんな有機溶剤でもよい。好ましくは、その溶剤は、毒性および環境汚染のないもの、除去が容易なもの、処理される材料に適合性のもの、ならびに、薬理学的に受容可能なものに対して選ばれる。その溶剤は、ポリマー基材を膨潤させるものでもよく、このことは、基材の表面にプレ重合リン脂質を浸透させることによって処理操作を助けることになる。一方ではまた、特に維持すべき大きさの許容度が微細である場合、またはそれによって他の有用な性質が侵される場合には、溶剤はポリマー基材の膨潤を避けるように選択される。

好適な溶剤は、水、メタノール、エタノールおよびイソ−もしくはｎ−プロパツールのような低級アルカノール、ジクロロメタン、クロロホルム、主として炭素原子５〜１０個、例えば、ペンタンもしくはヘキサンを含むアルカンのようなハロゲン化アルカン、ならびに、それらの混合液を包含する。特に好適な溶剤は、容量でエタノール：クロロホルムが、２０：１〜８０：１、好ましくは、４０：１、のようなエタノールとクロロホルムの混合液である。その他の好適な溶剤は、容量でフレオン（Ｆｒｅｏｎ）　：　ｘタノールが、５０　：　５０〜９９　：　１、好ましくは、９０：１０、のようなフレオンとエタノールの混合液である。

プレ重合リン脂質は、有機溶剤による溶液もしくは懸濁液として用いられる。懸濁液が使用される場合には、プレ重合リン脂質の均一なコーティングを確実に得るために、その懸濁液は、一般に十分に微細であらねばならない。プレ重合リン脂質の懸濁液は、例えば、溶剤として水、もしくはフレオンとエタノールの混合液で用いられる。

溶剤中のプレ重合リン脂質の濃度は、基材の効果的なコーティングをするために、過度に大量の溶剤の使用（および続いて起きる溶剤除去の技術的困難および経済的損失）を避けるように選択される。適切な濃度は、０．５〜３５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは、２〜２０ｍｇ／ｍｌ、例えば、５〜１０ｍｇ／ｍｌの範囲である。

プレ重合リン脂質の溶液もしくは懸濁液は、コーティング浴への浸漬、噴霧、塗布もしくは平面基材へのスピンコーティング（ｓｐｉｎ−ｃｏａｔｉｎｇ）のようないかなる便宜的なコーティング技術によっても応用出来るし、またコーティング条件は、ホスファチジルジエステルが、より疎水性の基材にはより強く付着するので、望まれるコーティングの厚さおよび基材の疎水性によって変化させることも出来る。好適なコーティングは、好適な溶剤による適切な濃度のプレ重合リン脂質溶液もしくは懸濁液の浴中に、適切な温度で、コーティングされる基材を被覆するのに十分な時間、基材を浸漬することによって行われる。

その溶剤は、通常の技術、好ましくは、減圧もしくは大気圧下で、ガス流動の中でおよび／または昇温しで蒸発させることにより除去され得る。溶剤の選択に対する留意、溶液の濃度、およびコーティングと溶剤除去技術によって、ホスファチジルコリンジエステルのコーティングの厚さは、望みの範囲内にコントロールすることが出来る。

特に好適な溶剤、濃度およびコーティングと溶剤除去技術は、実施例によって詳述、例示される。

血液に接する表面が本発明の方法を用いてコーティングされる代表的な血液に接触する機器は、以下のものを包含する、即ち、カテーテル、例えば、中心静脈カテーテル、胸部流出カテーテル、および血管形成用バルーンカテーテルのようなチューブ、心臓および／または肺バイパスにおけるような体外循環、および全血酸素供給器のような完全体外循環器、カニユーレ、脈管移植、縫合に使用されるチューブ、血液分離、アフェレーシスおよびドナーフェレーシスユニット（ａｐｈｅｒｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｄｏｎｏｒｐｈｅｒｅｓｉｓ　ｕｎｉｔ）に使用されるような膜、全血酸素供給器に使用されるようなガス交換膜、ポリカーボネート膜および血液透析膜のような膜、および診断およびバイオセンサー機器に使用される膜、バイオセンサーおよび血液凝固時間の測定に使われるキュベツトのような診断用、補綴、人工心臓および外科的移植に使用されるその他の機器である。

バイオセンサーのような診断器具、バイオ分離膜、コンタクトレンズのような視力矯正器具を含むその他の機器が、タンパクの非特異的付着を減するために処理されてもよい。

次の実施例は、本発明を具体的に説明するものであるが、如何なる点においてもそれを限定することを意図するものではない。

〔参考実施例］１．２−ジペンタコサノイル−１０，１２−ジイン−５ｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（ＤＡＰＣ）の乾燥粉末１ｇが、２．５ＭＲａｄのガンマ線（１〜１０ｎｍ）照射を受けた。得られた物質は、エタノール／クロロホルム（４０：　１　ｖ／ｖ）中に重量で１０％溶解し、モノマーおよびポリマー（９０：１０）の混合物であったが、モノマー重量は、次のゲル浸透クロマトグラフィーによる分離で測定された。

ゲル浸透クロマトグラフィープレ重合ＤＡＰＣは、次の操作によるゲル浸透クロマトグラフィーによって未重合ＤＡＰＣから分離される：カラム（１５ｃｍｘ３ｃｍ径）は、ＣＨＣｌ５／！タノール（５０１５０）で前膨潤されたセファデックスＬ　Ｈ６０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を用いて作成される。そのカラムは、使用前に脱気される。クロマトグラフィーの条件は、低圧液体クロマトグラフィーハードウェアー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いて制御される。これは、ＰＩペリスタルポンブ、フィルター（２８０ｎｍ）をもつＵＶＩ検出器およびＲＥＣＩＥＣ様より成る。

最少量の移動相（ＣＨＣＩｇ／エタノール　５０１５０）に溶解されたｐｐＤＡＰＣ（５００ｍｇ）が、カラム上に加えられる。分離は、イソクラティック（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ）システムおよび流速１．５ｍｌ／ｍｉｎで行われた。分画は、１２分毎に集められる。高分子量の重合物質は、溶媒の先端にカラムから流出する。低分子量の重合物質は、減少する分子量の順に流出する。未重合ＤＡＰＣは、最後に流出する。

ＵＶ可視分光法およびＴＬＣが、カラムからの分画成分の同定に使用される。未重合ＤＡＰＣを含まない重合分画が蓄えられる。未重合ＤＡＰＣ分画は、再重合のために蓄えられる。

溶剤抽出別の方法では、未重合ＤＡＰＣは、溶剤抽出によって重合ＤＡＰＣから分離することが出来る。分離は、未重合ＤＡＰＣが、５０℃において５０ｍｇ／ｍｌまでアセトニトリルに溶解するが、重合ＤＡＰＣは、５０℃では不溶であるという原理を用いて、次の操作により実施される：ｐｐＤＡＰＣ（Ｉｇ）が、５分間、加温（５０℃）しっつアセトニトリル（５０ｍｌ）で処理され、アセトニトリルが除去される。ｐｐＤＡＰＣは、同じ方法でさらに３回アセトニトリルにより処理され、洗浄物は合わせて濾過される。この方法で、少なくとも８０％の未重合ＤＡＰＣが、抽出される。残っている未重合ＤＡＰＣは、クロロホルムに再溶解し、その方法を繰り返すことによって抽出される。

残っているｐｐＤＡＰＣは、未重合ＤＡＰＣに対してＴＬＣ，ＵＶ分光法もしくはゲル浸透クロマトグラフィーによって試験される。ＴＬＣは、ＣＨＣ１ｓ／　Ｍ　ｅ　ＯＨ／　２５％ＮＨｓ　（６９０：　２７０　：　４５）により展開（シリカプレート）され、ヨードとモリブデンブルーを用いて発色させる。

重合ＤＡＰＣは、４５０ｎｍにおいてＵＶ可視吸収極大を有する。このピークは、非常に幅広く、Ｕｖの方へ伸びている。モノマーのＤＡＰＣは、２１０．２２５．２４０および２５０ｎｍにおいて４個のピークをもつＵＶスペクトルを有するが、精製されたｐｐＤＡＰＣは、これらのＵＶピークを有さない。

参考実施例２参考実施例１が、照射量５．０ＭＲａｄを用いて繰り返された。得られた物質は、モノマー：ポリマー重量で８８　：１２であった。

参考実施例３参考実施例１が、照射量７．５ＭＲａｄを用いて繰り返された。得られた物質は、モノマー：ポリマー重量で７６　：　２４であった。

［実施例１］ＰＶＣチューブの処理体外循環に使用されるタイプの硬質および軟質チューブのサンプルが、温エタノールもしくは濾過蒸留水のいずれかを用いて洗浄され、コーティング前に十分に乾燥された。

両タイプのチューブとも、汚染を避けるために無塵域において、プレ重合ＤＡＰＣ（ｐｐＤＡＰＣ）（参考実施例により作成され、モノマーから分離された）のエタノール：クロロホルム（４０：　ｌｖ／ｖ）　中のコーティング溶液もしくはフレオン：エタノール（１０：　１ｖ／ｖ）　中の微細懸濁液（５ｍｇ／ｍｌもしくは１０ｍｇ／ｍｌ）を、中空のチューブ中にピペッティングし、チューブの全内面が均一にコーティングされるまで、その溶液を静かに後退、前進させる（長さ１２０ｃｍまでの部分に対して）ことによってコーティングされた。

過剰のコーティング溶液は、回収浴中に排出させ、チューブは室温で乾燥された。上記方法で作成されたコーティングは、表面分析技術により判定して均一であった。

［実施例２〕ポリエチレン（ＰＥ）リボンのコーティングＰＥリボンは、始めにエタノールで洗浄され、乾燥された。次いで、そのリボンは、プレ重合ＤＡＰＣのエタノール：クロロホルム（４０：ｌｖ／ｖ）溶液（濃度１０ｍｇ／ｍｌ）中に、短時間浸漬され、ソノ後、風乾された。

このことが、ガンマ線照射、２．５ＭＲａｄ　（モノマー：ポリマー比が重量で９０　＋　１０）　、５．０ＭＲａｄ　（モノマー：ポリマー比が重量で８８：１２）および７．５ＭＲａｄ　（モノマー：ポリマー比が重量で７６：２４）によって作成されたモノマーとポリマーの混合物を含有するｐｐＤＡＰＣ溶液を用いて繰り返された。

上記方法で得られたコーティングは、表面分析技術により判定して均一であった。

［実施例３コ混合脂質によるＰＥリボンのコーティングＰＥが、ｐｐＤＡＰＣ／ＤＰＰＣもしくはｐｐＤＡＰＣ／ＤＭＰＣの７５　：　２５．５０　：　５０もしくは２５　：　７５　（ｗ／ｖ）の混合物の溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）によって、実施例２と同様の方法をも用いてコーティングされた。

［実施例４コポリエチレンカテーテルのコーティング酸化チタニウム添加剤を含有するカテーテルが、フレオンで洗浄され、フレオン中のｐｐＤＡＰＣ溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）に浸漬することによってコーティングされた。その温度は、２５℃であった。

［実施例５］ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）薬物バイアル瓶のコーティングＰＥＴバイアル瓶は、始めにエタノール中で洗浄され、乾燥された。

エタノール：クロロホルム（４０：　１）のｐｐＤＡＰＣ溶液（２ｍｇ／ｍｌ）の１ｍｌ量が、バイアル瓶中にピペットで注入され、バイアル瓶は、溶剤のほとんどが蒸発してしまうまで、ゆっくりと回転された。次いで、そのバイアル瓶は、逆転され、過剰の溶剤が除かれた。

［実施例６コボアサイズ１０〜１４μｍの織られたＰＥＴ濾過膜材が、サイズに合わせ切断され、コーティング容器の底に置かれた。コーティング溶液［クロロホルム、エタノール：クロロホルム（４０：　ｌｖ／ｖ）　、フレオン：エタノール（１０：　１ｖ／ｖ）もしくはフレオンのいずれかに溶解したｐｐＤＡＰｃＯ，５，１，０，２，５，５，０，７，５，１ｏもしくは２０ｍｇ／ｍｌ］が、そのフィルター上に流された。コーティング溶液は、ゆっくりとコーティング容器を揺らせることによって、フィルターの全表面に広げられた。３０秒後、そのフィルターは、容器から取り出され、過剰な液が除去されてから、層流キャビネット中に吊るして風乾された。

その材料の多孔度は、コールタ−ポロメトリー（Ｃｏｕｌｔｅｒ　ｐｏｒｏｍｅｔｅｒｙ）によってチェックし、すべての場合に変化はなかった。

［実施例７］ＰＥで織られた膜のｐｐＤＡＰＣ／ＤＰＰＣ混合物によるコーティング実施例６の方法が、ｐｐＤＡＰＣ／ＤＰＰＣ（ｐｐＤＡＰＣ２，５ｍｇ／ｍｌおよびＤＰＰＣ７，５ｍｇ／ｍｌ）の混合物を用いて繰り返された。

［実施例８］ガラス薬物バイアル瓶のコーティングガラスバイアル瓶は、エタノールで洗浄され、乾燥された。エタノール：りｏｏホルム（４０：　１　ｖ／ｖ）のｐｐＤＡＰＣ溶液（２ｍｇ／ｍｌ）の１ｍｌ量が、バイアル瓶中にピペットで注入され、バイアル瓶は、溶剤のほとんどが蒸発してしまうまで、ゆっくりと回転された。次いで、そのバイアル瓶は、素早く逆転され、過剰の溶剤が除かれた。

［実施例９〕ガラス薬物バイアル瓶のコーティングガラスバイアル瓶は、ｐｐＤＡＰＣで処理される前に、表面を強い疎水性にするためシラン化された。それにより得られたシランの層の上には、非常に安定なコーティングが形成される。

シラン化は、そのバイアル瓶にモノクロロジメチルオクタデシルシランの溶液（クロロホルム中０．１％Ｗ／Ｖ）の添加によって実施された。

バイアル瓶は、反応のため１６時間放置され、クロロホルムで洗浄され、風乾された。その後、そのバイアル瓶は、実施例８の方法を用いてｐｐＤＡＰＣによってコーティングされた。

［実施例１０］酸素供給器に使用されるタイプのポリプロピレン中空糸が、コーティング前にまずフレオンを用いて洗浄され、風乾された。ｐｐＤＡＰＣ溶液（２，４，５および１０ｍｇ／ｍｌ）が、その材料をコーティングするために使用された。この場合、ｐｐＤＡＰＣは、フレオン：エタノール（９：１ｖ／ｖ）中に溶解された。

中空糸は、ｐｐＤＡＰＣ溶液で満たされたＵ型のコーティング容器中をゆっ（りと引いて通すことによってコーティングされ、風乾された。

そのコーティングは、表面分析技術によって中空糸の外面のみに行われていることが示された。

［実施例１１］ポリプロピレン薬物バイアル瓶のコーティングポリプロピレンバイアル瓶は、エタノールで洗浄され、乾燥され、実施例８の方法によってコーティングされた。

［実施例１２コスピンコーティングによるポリスチレンペトリ皿のコーティングベトリ皿（無菌的に製造された無菌ポリスチレン微生物用プレート）が、回転させられ（１５００ｒｐｍ）、エタノール：クロロホルム（４０：１）中のｐｐＤＡＰＣ溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌが、１ｍｌピペットを用いて回転する皿に注入された。その皿は、３０秒間回転され、次いで室温で乾燥された。

［実施例１３］ポリエステル糸縫合材のコーティング染色されたおよび染色されてないポリエステル糸で編まれた縫合材のサンプルが、コーティング前に温エタノール中で洗浄され、風乾された。

洗浄され、風乾されたサンプルは、エタノール：クロロホルム（４０：１）中のｐｐＤＡＰＣ溶液（１０ｍｇ／ｒｎｌ）を含有するＵ型チューブ中をその縫合材を引いて通すことによってコーティングされ、次いで室温で風乾された。

［実施例１４］スピンコーティングによる銀フィルムのコーティングガラス上に真空蒸着によって形成された銀フィルムが、５５０〜２０ＱＱｒｐｍの間で速度変化させて、スピンコーティングによってコーティングされた。エタノール：クロロホルム（４０：　１）中のｐｐＤＡＰＣ溶液（１，２５，２，５，５，０および１０ｍｇ／ｍｌ）が、使用された。コーティングは、表面分析技術による測定によって均一であることが判った。

［実施例１５］スピンコーティングによる銀フィルムのコーティングガラス上に真空蒸着によって形成された銀フィルムが、コーティング前にエタノールで洗浄され、風乾された。それは、１−デカンチオールの溶液（２ｍＭ）中に浸漬され、−夜装置された。得られた表面は、強い疎水性であった。その銀フィルムは、上記実施例１４に従ってコーティングされた。

［実施例１６コ研磨ステンレス棒のコーティング研磨ステンレス棒は、エタノールで洗浄され、乾燥された。次いで、その棒は、エタノール：クロロホルム（４０：１）中のｐＩ）ＤＡＰＣ溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）中に、直接浸漬することによってコーティングされた。その棒は、風乾のために放置された。

［実施例１７］ポリイミドのコーティングカプトン（Ｋａｐｔｏｎ、ポリイミド）は、エタノールで洗浄され、乾燥された。その材料は、エタノール：クロロホルム（４０：１）中のｐｐＤＡＰＣ溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）中に、直接浸漬することによってコーティングされた。次いで、その材料は、風乾された。

［実施例１８］ＩＶカテーテルの処理ＦＥＰ　（フッ素化エチレンポリマー）製のＩＶカテーテルが、浸漬法を用いてＩ）Ｉ）ＤＡＰＣによってコーティングされた。ｐｐＤＡＰＣ（１０ｍｇ／ｍｌ）は、エタノール：りｏｏホルム（４０：ｌｖ／ｖ）に溶解され、サンプルが、この溶液に数秒間浸漬された。次いで、カテーテルは、風乾された。

［実施例１９］プラズマエツチングおよびオクタン処理ポリアミド網、ステンレス針、ＰＴＦＥチューブおよびポリプロピレンのサンプルが、ヘキサンで洗浄され、乾燥された。そのサンプルが、プラズマバレルエツチング機（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、　Ｐｏ１ａｒｉｏｎ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ製ＲＦ　Ｐｌａｓａｈａ　Ｂａｒｒｅｌ　Ｅｔｃｈｅｒ　ＰＴ７１００）のエツチングチャンバー内に置かれた。

サンプルは、酸素ガス中で５分間エツチングされた。次いで、そのサンプルが、オクタン（５ｍｌ　ｓ）の存在するアルゴンガス中に置かれた。

オクタンによるエツチングは、５分間進行し、オクタンが除かれた後、そのチャンバーは、酸素によって再び満たされた。その操作は、サンプルが、静止水接触角の測定によって疎水性であると判定されるまで繰り返された。各エツチング段階の間で、エツチングは、必要に応じて前戻りされた。

エツチング操作に使用された条件は、表１に示されたとおりであった。

エツチングされた前処理サンプルは、エタノール：クロロホルム（４０：１）中のｐｐＤＡＰＣ溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）中に、１０秒間浸漬することによってコーティングされた。そのサンプルは、風乾され（３０秒）、次いで、層流筒中で一夜徹底的に乾燥された。

（表１）　０２／オクタン　プラズマエツチングの条件ステンレス鋼大　気　−０□　Ａｒ／オクタン順電力　−９０Ｗ　３０讐反射電力　−４賢　３Ｗ真空度　−１ｍＢａｒ　３８紅時間　−３ｘ　５　ｗｉｎ　３　ｘ　５　ｗｉｎ反射電力　−４Ｗ　３讐真空度　−２ｍＢｓぼ　３８紅時間　−３ｘ　５　ｗｉｎ　３　ｘ　５　ｗｉｎ順電力　−タＯＷ　４０Ｗ反射電力　−２Ｗ　２Ｈ真空度　−２七山ご　３ｍＢａｒ時間　−２ｘ　５　ｍｉｎ　２　ｘ　５　ｍｉｎ反射電力　−２讐　３４讐［実施例２０コプラズマエツチングおよびシラン処理ポリアミド網、ステンレス針、ＰＴＦＥチューブおよびポリプロピレンのサンプルが、ヘキサンで洗浄され、乾燥された。次いで、そのサンプルが、プラズマバレルエツチング装置（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、　Ｐｏ１ａｒｉｏｎ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ製ＲＦ　Ｐｌａｓｍａ　Ｂａｒｒｅｌ　Ｅｔｃｈｅｒ　ＰＴ７１００）のエツチングチャンバー内に置かれた。サンプルは、チャンバー圧１ｍＢａｒにおける酸素ガス中で、ホワード（ｆｏｒｗａｒｄ）電力１５０Ｗおよびリフレクト（ｒｅｆｌｅｃｔｅｄ）電力５Ｗによるエツチングによって疎水性に作られた。

次いで、そのサンプルが、クロロホルム（２０％）中のオクタデシルシランによって１６時間処理されてシラン化された。過剰のシランは、クロロホルムによる洗浄（３回）によって除去された。全てのサンプルが、静止水接触角による判定で疎水性であることが判った。

エツチングされた前処理サンプルは、エタノール；クロロホルム（４０：１）中のｐｐＤＡＰＣ溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）中に、１０秒間浸漬することによってコーティングされた。そのサンプルは、風乾され（３０秒）、次いで、層流筒中で一夜徹底的に乾燥された。

［実施例２１］血小板付着による処理材料の試験管内血液適合性試験定量的な血小板付着試験が、室温において３０分間、新鮮なりエン酸塩前ヒト全血中に、サンプルを浸漬することによって実施された。チューブサンプルは、両端をシールされた長さ３０ｃｍに作成され（血液は、注射針でサンプル中に注入）旋回ミキサーを用いて常に混合された（試験は、３並列で実施）。この測定で使用された血液は、３人の提供者、１．２および３よりそれぞれ２本の注射器を用いて採血された。

インキュベーション後、そのサンプルは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で洗浄され、チューブ壁に付着している全ての血小板からＡＴＰを遊離させるために、２ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）含有の１％トリクロロ酢酸溶液（ＴＣＡ）（ｗ／ｖ）中で抽出された。

抽出液中に存在するＡＴＰ量は、製造者の指示に従ってＬＫＢファルマシア製ＡＴＰ定量用キットおよび蛍光光度計を用いて測定された。

サンプルに付着している血小板数が、既知の血小板数と関連するＡＴＰレベルを用いる標準曲線から測定された。実施例１に従って作成されたＰＶＣチューブに対する結果は、表２の通りである。

（表２）結果は、チューブの長さ３ｃｍ当たりの血小板Ｘ１０６の概数として表された。

コーティングされたＰｖＣへの血小板付着の明らかな減少が観察され、このことは、ｐｐＤＡＰＣによるコーテイング後のＰｖＣチューブのトロンビン形成において、大きな減少があることを示している。

実施例２によって作成されたＰＥリボンサンプル（２，２ｘ３．　３ｃｍ”）に対する結果は、表３に示す。

結果は、材料の７．２６ｃｍ”当たりの付着血小板ｘ１０６の概数として表された。

ｍ：ｐ＝モノマー：ポリマー比（表３）実施例４によってコーティングされたカテーテルに対する結果は、表４に示す。

（表４）結果は、カテーテルの長さ４．５ｃｍ当たりの付着血小板ｘｌｏ’の概数として表された。

実施例６によって作成されたＰＥＴで織られた濾過材（４，８４ｃｍりに対する結果は、表５に示す。

（表５）結果は、材料のサンプル４．８４ｃｍ”当たりの付着血小板ｘ１０６の概数として表された。

実施例１０によって作成されたポリプロピレン中空糸に対する結果は、表６に示す。

（表６）結果は、中空糸の長さ２０ｃｍ当たりの付着血小板ｘｌＯ’の概数として表された。

実施例１２によってコーティングされたポリスチレンペトリ皿に対する結果は、表７に示す。

結果は、ベトリ皿全面当たりの付着血小板Ｘ１０６の概数として表された。

実施例１６によってコーティングされたステンレス棒に対する結果は、表８に示す。

（表８）結果は、材料の長さ３ｃｍ当たりの付着血小板ＸＩＯ’の概数として表された。

実施例１７によって作成されたポリイミドに対する結果は、表９に示す。

（表９）て表された。

実施例１８によってコーティングされたＩＶカテーテルに対する結果は、表１０に示す。

（表１０）結果は、カテーテルの長さ５ｃｍ当たりの付着血小板ｘ１０６の概数として表された。

実施例１９または２０に従って、オクタンもしくはオクタデシルシランを用いて前処理され、ｐｐＤＡＰＣによってコーティングされたＰＴＦＥチューブ、ポリアミド網およびポリプロピレン材料に対する結果は、プラズマエツチングまたはｐｐＤＡＰＣによって処理されない材料と比較して、次の表１１に示す。

（表１１）［実施例２２］ヒト全血に対する試験管内凝固時間積々の未コーティングおよびコーティング薬物バイアル瓶における凝固時間が、次のようにして測定された：１、新鮮凍結血漿２００μｌが、３７℃に予め加温され、バイアル瓶に添加された。

２、予め加温（３７℃）されたＣａＣＩｇ（０，２５Ｍ）２００μｍが、そのバイアル瓶に添加され、タイマーをスタートした。

３、バイアル瓶は、３７℃の温水浴中に漬けて３７℃に維持された。

４、最初の凝固が観察された時にタイマーを停止した。

全ての試験において、コーティングされたバイアル瓶は、未コーティングのものより長い凝固時間を要し、このことはトロンビン形成が、弱いことを示している。

［実施例２３］走査電子顕微鏡による試験管内血小板付着の観察実施例１３．１４，１５．１６および１７によって処理された材料のサンプルが、新鮮なりエン酸塩加金血中で、前記実施例１９に記載のようにしてインキュベートされた。これらの材料は、血液から取り出された後、ＰＢＳを用いて洗浄され、次の溶液＝２５％グルタルアルデヒド２ｍｌ　０．１５ＭＰＢＳ　（ｐＨ７，４）８３ｍｌおよび飽和ピクリン酸１５ｍ１の少量で固定することによって走査電子顕微鏡に供された。

そのサンプルは、ＰＢＳ中で洗浄され、エタノール（７０％）、次（λで無水エタノールを用いて脱水された。最後にサンプルは、金蒸着をされ（３０ｍＡで３分間）、電子顕微鏡下で観察された。

桓！電子顕微鏡は、ｐｐＤＡＰＣでコーティングされた材料が、未コーティングの材料に比べより少ない血球を付着すること、さらに血小板（嘘、処理された材料によっては活性化されないこと、を示した。それ故、ｐｐＤＡＰＣコーティングされた材料は、未処理材料よりトロンビン形成性が低いと考えられる。

ステンレス鋼、ポリイミド、銀、ｐｖｃ、ポリエチレン、ポリプロピレンおよび編み上げポリエステルは、全て、この技術によってトロンビン形成性が減少したと判定された。

［実施例２４］フィブリノーゲン沈着試験ヒト血漿中でサンプルをインキュベートし、二重に抗体（第１の抗体は、ヒトフィブリノーゲンに特異的であり、ホースラディツシュ（セイヨウワサビ）ペルオキシダーゼに共役された第２の抗体は、第１の抗体に特異的である）によって吸着されたフィブリノーゲンを検出する酵素免疫測定法が、使用された。

定量は、その表面上のＨＲＰＯ活性を測定することによって行われた。

実施例１９および２０に記載されたようにして得られたシラン化およびオクタン処理された両サンプルが、コーティングおよび未コーティングのもので試験され、その結果が、実施例２のように、コーティング材料へのタンパク吸着の減少を未コーティング材料へのタンパク吸着に対する％として表された。

ｐｐＤＡＰＣでコーティングされたポリエチレンリボンより成るサンプルが、その測定に加えられた。

すべてのサンプルが、３並列で分析された。測定精度は、３並列のデータに対する平均変動係数が約１０％であるとして表された。

（表１３）［実施例２５］２次的誘導物のＵＶ分光法によるタンパク吸着の試験方法ホウ酸バッファー１リットルが、塩化ナトリウム８．５ｇ、ホウ酸４゜６ｇおよびホウ砂０．４ｇを蒸留水１リツトルに溶解して調製された。

この溶液のｐＨは、測定により７．２８であった。リリチウム溶液（１゜２ｍｇ／ｍｌ）は、ホウ酸バッファー２５０ｍ１中にリリチウム３００ｍｇを溶解して調製された。測定は、リリチウム溶液（１０ｍ　ｌ　）を、未コーティングか、または実施例５．　８．　９および１１に記載したようにしてｐｐＤＡＰＣによりコーティングされた薬物バイアル瓶に添加して始められた。次いで、そのサンプルが、３７℃で２４時間インキュベートされた。

そのサンプルの吸収が、２次的誘導物について測定され、表１４に示すようにタンパク吸着の量の算出に使用された。

（表１４）［実施例２３］コーティングされた材料の全コーテイング量およびコーティングの安定性の測定ｐｐＤＡＰＣに対する定量が、前記の各実施例において作成されたコーティングされた材料を、ホスホリパーゼＤ１コリンオキシダーゼ、フェノールおよび４− アミノアンチピリンを含有する発色試薬中に浸漬することによって実施された。

そのサンプルは、３７℃で２０分間インキュベートされ、５０５　ｎｍにおける吸収が、パーキン−エルマー製ラムダ１５ＵＶ／可視分光光度計を用いて測定された。コーテイング物質の濃度は、既知の濃度の未コーティングｐｐＤＡＰＣの校正曲線を用いて決定された。コーティングの安定性は、３７℃で１時間、ＰＢＳ中でサンプルをインキュベートして測定された。ＰＢＳは、クロロホルムで抽出され、その溶剤が採取され、脂質の量は上記発色試薬の添加によって測定された。

（表１５）実施例２によってコーティングされたＰＥリボンの全コーティング量Ｎ、Ｄ＝検出されず：測定の検出限界以下サンプルサイズ＝２５ｍｍｘ２５ｍｍ（表１６）（表１７）実施例６によってコーティングされたＰＥＴで織られた濾過材のＮ、　Ｄ：＝検出されず：測定の検出限界以下サンプルサイズ＝３５ｍｍｘ３５ｍｍ（表１８）実施例１０によるポリプロピレン中空糸上の全コーテイング量およびＮ、　Ｄ＝検出されず：測定の検出限界以下サンプルの長さ＝１５ｃｍ（表１９）実施例３による混合脂質を用いてコーティングされたＰＥリボンのＮ、　Ｄ＝検出されず：測定の検出限界以下［実施例２７コ処理された表面上への水の散布試験実施例２の方法を用いてｐｐＤＡＰＣによってコーティングされたＰＥリボンが、ウィルヘルミースライド（Ｗｉｌｈｅｌｍｙ　５ｌｉｄｅ）技法を用いて、湿潤性試験に供された。動的接触角は、コーティング前の８９°からコーテイング後の５６°に減少した。

静止接触角は、ｐｐＤＡＰＣによりコーティングされた種々の基材に対して、５ μｌの水滴を添加し、基材との接触角を水平顕微鏡を用いて測定することによって測られた。

（表２０）全ての場合において、ｐｐＤＡＰＣによるコーテイング後に、接触角における顕著な減少がおき、表面の湿潤性が増大したことが示された。

［実施例２８］ＳＤＳゲル電気泳動によって測定されたｐｐＤＡＰＣでコーティングされたＰｖＣチューブへのタンパク吸着未処理のものおよび実施例１により処理コーティングされたＰｖＣチューブが、新鮮凍結血漿（ＦＦＰ）２ｍｌを入れた５ｍｌのプラスティックチューブ中に置かれた。チューブは、室温で１時間、旋回ミキサー上で回転された。

その血漿がデカントされ、各サンプルが、０．０２Ｍ）リス１０．１６ＭＮａＣ１，ｐＨ７，５で数回すすがれた。各サンプルは、室温で５分間、緩衝生理食塩水で洗浄するために放置された。そのサンプルは、さらに数回、前と同様にすすがれ、さらに５分間洗浄された。洗浄は、もう１回繰り返された。

サンプルは、新しい乾燥チューブに置かれ、ＳＤＳ　ＰＡＧＥサンプ／ｌ／／＜ッファ−３００μｌが添加された。そのチューブは、室温で一夜、回転放置された。

バッファーのサンプル２０μｌが、各チューブから採取され、還元条件下でＳＤＳ　ＰＡＧＥにかけられた。そのゲルはクマシーブルー（ＣｏｏｍａｓｓｉｅＢｌｕｅ）Ｒ２５０を用いて染色され、タンパクバンドが検査された。

吸着されたタンパクの範囲および量における、顕著な減少が検出され、そのことは、その表面が、ｐｐＤＡＰＣでのコーティングによって、より生物的適合性を得たことを示した。

［実施例２９コｐｐＤＡＰＣコーティングの滑らかさ実施例４によってコーティングされたカテーテルが、インストロン（Ｉｎｓｔｒｏｎ）装置を用いてコーティングの滑らかさに対して試験された。

２”／ｍｉｎで、成形型を通してコーティングされたカテーテルを押し出す力は、ｐｐＤＡＰＣでのコーティングによって半減された。

［実施例３０］表面電荷の減少疎水性表面を作成するためにモノクロロオクタデシルシランで前処理された石英キュベツトへのｐｐＤＡＰＣのコーティングは、実効表面電荷を顕著に減少した。壁電位は数ｍＶに減少された。それ故、ｐｐＤＡＰＣコーティングは、静電荷もしくは妨害バックグラウンド電荷を減らす必要のある電子工業および電気化学的検出／分析において使用されてもよい。

補正書の写しく翻訳文）提出書　（特許法第１８４条の８）平成５年１１月２５日

Claims

【特許請求の範囲】

１．有機溶剤中のポリマーの溶液もしくは懸濁液を表面に適用し、そしてその溶剤を除去することを含んでなる表面のコーティング方法であって、前記ポリマーが、式（Ｉ）のリン脂質を重合することによって得られる方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）式中、Ｂ１およびＢ２の少なくとも一つは、式（ＩＩ）：−（ｃｏ）Ｐ−Ｘ１−Ｃ＝Ｃ−Ｃ−Ｙ１（ＩＩ）の基であり、この場合、Ｐは０もしくは１であり、Ｘ１は、脂肪族もしくは脂環式基、Ｙ１はＨ、または一価の脂肪族もしくは脂環式基であり、各Ｂ１および／またはＢ２中のＸ１およびＹ１の全炭素原子数は、８〜２６であり、さらにＢ１およびＢ２のその他のものは、（ａ）式（ＩＩ）の同じか、もしくは異なる基、または、（ｂ）少なくとも８個の炭素原子数を有する脂肪族もしくは脂環式基、のいずれかであり；ｍは、２、３もしくは４であり、各Ｒは、独立して１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を表す。
２．表面が血液に接触する表面である請求の範囲第１項記載の方法。
３．表面がタンパクの非特異的吸着を受けやすい表面である請求の範囲第１項もしくは第２項記載の方法。
４．式（Ｉ）のリン脂質において、Ｂ１およびＢ２が同一もしくは異なる式（ＩＩ）の基である請求の範囲第１、２もしくは３項記載の方法。
５．式（Ｉ）のリン脂質において、式（ＩＩ）の各基Ｂ１および／またはＢ２が、カルボニル炭素原子を除いて８〜２６個の炭素原子を含有する前各項のいずれかに記載の方法。
６．式（Ｉ）のリン脂質において、各Ｘ１の炭素原子数が、そのジーインが化学線照射によって分子内および分子間の両重合を引き起こすような炭素数である前各項のいずれかに記載の方法。
７．式（Ｉ）のリン脂質において、各Ｂ１およびＢ２が−ＣＯ−（ＣＨ２）８− Ｃ＝Ｃ−Ｃ＝Ｃ−Ｙ１を表し、この場合、基Ｙ１が同一もしくは異なるものであることを特徴とする前各項のいずれかに記載の方法。
８．式（Ｉ）のリン脂質において、ｍが２であり、各Ｒがメチルである前各項のいずれかに記載の方法。
９．式（Ｉ）のリン脂質が ▲数式、化学式、表等があります▼ である前各項のいずれかに記載の方法。
１０．式（Ｉ）のリン脂質が ▲数式、化学式、表等があります▼ である前各項のいずれかに記載の方法。
１１．表面が、式（Ｉ）の未重合リン脂質および式（Ｉ）のリン脂質から得られるポリマーを包含する混合物を用いて、処理される前各項のいずれかに記載の方法。
１２．式（Ｉ）のリン脂質から得られるポリマーおよびホスファチジルコリンのジエステルを包含する混合物が、表面に適用される前各項のいずれかに記載の方法。
１３．ホスファチジルコリンのジエステルが、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリンもしくはジステアロイルホスファチジルコリンである第１１項に記載の方法。
１４．ポリマーによってコーティングする前に、表面の疎水性を増大させるために、表面を処理すること含む前各項のいずれかに記載の方法。
１５．ポリマーによってコーティングする前に、表面が反応性のアルキルシランによって処理されるが、またはアルカンもしくはアルキルシランの存在下でプラズマ重合される請求の範囲第１４項記載の方法。
１６．表面が低級アルカノールもしくはハロゲン化アルカンもしくはそれらの混合液中のポリマー溶液によって処理される前各項のいずれかに記載の方法。
１７．溶液もしくは懸濁液がリン脂質０．５〜３５ｍｇ／ｍ１を含有する前各項のいずれかに記載の方法。
１８．溶液がコーティング浴中への浸漬、散布、塗布もしくはスピンコーティングによって適用される前各項のいずれかに記載の方法。
１９．コーティングが３〜１０００ｎｍの厚さを有する前各項のいずれかに記載の方法。