JPH06506929A - Ｂ型肝炎ウイルス感染の治療のための、１，３−オキサチオラン誘導体の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、１−　（２−（ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５− イルクーシトシン誘導体およびその生理学的に機能する誘導体を、Ｂ型肝炎ウィ ルスの感染を治療するために使用することに関する。

Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢ　Ｖ）は、世界的規模での大きな重要性をもったウィル ス性病原体である。ＨＩＶは、アジアの国々には殆ど共通して見られ、またサハ ラ以南のアフリカで流行している。このウィルスは、病因論的には一次肝細胞力 ルチノーマと関係しており、世界中の肝臓癌の原因の８０％を占めると思われる 。現在、合衆国における感染キャリアは５００、０００人〜１億人と見積もられ ている。キャリアの２５％以上が慢性の活性肝炎になり、かなりの頻度で肝硬変 にまで進行する。合衆国では毎年５０００人がＨＢＶ関連の肝硬変で死亡し、１ ０００人がＨＢＶ関連の肝臓癌で死亡すると見積もられている。例えＨＢＶに対 する一般的なワクチンが揃っていたとしても、有効な抗ＨＢＶ化合物の必要性が なくなることはないであろう。世界的規模では２億２千万人と見積もられる莫大 な数の持続的感染キャリアが、ワクチンの恩恵に浴することなく、ＨＢＶに誘起 される肝臓疾患の危険に曝され続けるであろう。これらキャリア集団は感受性の 人々に対する感染源となり、特定の風土的領域または常習的な薬物の静脈投尋者 およびホモセフシュアルのような高リスク群における発病を継続させることにな る。従って、慢性感染を抑制し且つ肝細胞力ルチノーマへの進行を減少させるた めの、効果的な抗ウィルス剤が切望されている。

ＨＢＶ感染の臨床症状は、頭痛、発熱、倦怠感、悪心、嘔吐、食欲不振および腹 痛に亘っている。通常、ウィルスの複製は免疫応答によって制御され、ヒトでは １週間または１月間の経過を経て回復する。しかし、より過酷な感染の場合には 、上記で概説したような持続的かつ慢性の肝臓病に至る。

「ヒトのウィルス感染（第二版）　Ｊ　（Ｅｖａｎｓ、　Ａ、Ｓ、　（１９８２ ）編、Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、　Ｎｅ ｗ　Ｙｏｒｋ　）の第１２章には、肝炎ウィルス感染の病院論が記載されている 。

欧州特許明細書箱０３８２５２６号は、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩ　Ｖ）の複 製を抑制する上で効果的な、成る種の１．３−τキサチオランヌクレオシド類縁 体を開示している。

驚くべきことに、我々は今回、下記式（Ｉ）の１−（２−（ヒドロキシメチル） −１，３−オキサチオラン−５−イル）−シトシン誘導体およびその生理学的に 機能する誘導体が、強力な抗ＨＢ　Ｖ活性を有することを見出した。

（Ｒは水素原子またはｃｌ−３アルキル基である）式（Ｉ）の好ましい化合物は Ｒが水素原子のもの、即ち、１−（２−（ヒドロキシメチル）−１，３−オキサ チオラン−５−イル）−シトシンである。

式（Ｉ）の化合物は二つのキラル中心を含んでおり、従って光学異性体（エナン ショマー）の二つの対、並びにこれらの混合物（ラセミ混合物を含む）の形で存 在することに留意）　すべきである。こうして、式（Ｉ）の化合物はｃｉｓ−若 しくは１ｅａｎｓ−異性体、またはこれらの混合物の何れがであり得る。

ｃｉｓ−若しくはｔｒａｎｓ−異性体の夫々は、二つの光学異性体の一方、又は ラセミ体を含むこれらの混合物の形で存在し得る。

このような異性体およびこれらの混合物（ラセミ体を含む）は全て本発明の範囲 に含まれる。式（Ｉ）の化合物のｃｉｓ−異性体が好ましい。本発明には、式（ Ｉ）の化合物の光学異性体および幾何異性体、並びに全ての互変異性体が含まれ る。

特に好ましいのは、ｃｉｓ−異性体で且つ（−）異性体、即ち、（−）−ｃｉｓ −１（２（２−ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）−５ −フルオロシトシンである。

本発明の一つの特徴に従えば、Ｂ型肝炎ウィルス感染の治療および予防に使用す るための、式（Ｉ）の化合物またはその生理学的に機能する誘導体が提供される 。本発明の更なる特徴に従えは、Ｂ型肝炎ウィルス感染の治療および予防のため の医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその生理学的に機能する誘導体 の使用が提供される。本発明の更なる側面には、ホスト（例えばヒトのような哺 乳類）におけるＢ型肝炎ウィルス感染を治療または予防する方法であって、前記 ホストを、治療的に有効な量の式（Ｉ）の化合物またはその生理学的に機能する 誘導体で処置することを具備した方法が含まれる。

「生理学的に機能する誘導体」とは、式（Ｉ）の化合物の薬剤的に許容可能な塩 、エステル又はエステルの塩、或いは患者に投与したときに前記式（Ｉ）の化合 物、又はその活性な代謝物もしくは残基を直接または間接的に与えることができ る他の何れかの化合物を意味する。

本発明に従う好ましいエステル類には次のものが含まれる。

即ち、カルボン酸エステルであって、該エステル基のカルボン酸部分の非カルボ ニル成分か直鎖または分岐鎖のアルキル、例えばｎ−プロピル、ｔ−ブチル、ｎ −ブチル、アルコキシアルキル（例えばメトキシメチル）、アリールアルキル（ 例えばベンジル）、アリールオキシアルキル（例えばフェノキシメチル）および アリール（例えばフェニル）から選ばれるもの；スルホン酸エステルであって、 アルキル−若しくはアリールアルキルスルホニル（例えばメタンスルボニル）基 を含むスルホン酸エステル：アミノ酸エステル（例えばＬ−バリル若しくはＬ− イソロイシル基を含むもの）ニジカルボン酸のエステル（例えばヘミスクシネー ト）；および５′−モノ、ジまたはトリ燐酸エステルである。この燐酸エステル は、例えばＣアルコール若しくはその反応性誘導体、または２，３−ジ（Ｃ６− ２４）アシルグリセロールによって更にエステル化されてもよい。

このようなエステル中に存在するアルキル成分は、何れも１〜１８の炭素原子、 特に１〜４の炭素原子を含むのが有利である。また、このようなエステル中に存 在するアリール成分は何れもフェニル基を含むのが有利であり、該フェニル基は 、例えばハロゲン、Ｃｌ−４アルキル、Ｃｌ−４アルコキシ、ニトロまたはヒド ロキシルによって任意に置換され得る。

上記エステル類において、シトシンアミノ基はアミドの形で存在し得る。例えば 、Ｒが０１−６アルキルまたはアリール（例えばハロゲン、Ｃｌ−４アルキル、 Ｃｌ−４アルコキシ、ニドａまたはヒドロキシルによって任意に置換されるフェ ニル）であるとして、−ＮＨＣＯＲの形である。

本発明に従う薬剤的に許容され得る塩の例には塩基との塩、例えばアルカリ金属 （例えばナトリウム）、アルカリ土類金属（例えばマグネシウム）、アンモニウ ム及びＮＸ４＋（Ｘ酒石酸、リンゴ酸、イセチオン酸、コハク酸およびラクトビ オン酸（Ｉａｃｊｏｂｉｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）のような有機カルボン酸の塩；メ タンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸およびｐ−トルエンス ルホン酸のような有機スルホン酸の塩：並びに塩酸、硫酸、燐酸およびスルファ ミン酸のような無機酸の塩が含まれる。

望ましい効果を達成するための薬物治療において必要とされる式（Ｉ）の化合物 またはその生理学的に機能する誘導体（以下では「活性成分」とも呼ばれる）の 量は多くの因子、就中、具体的な用途、使用する特定化合物の性質、投与方法お よび患者の状態に依存するであろう。一般に、１日当たりの適切な投与量は、患 者の体重１ｋｇ当たり３．０〜１２０　ａ＋ｇの範囲、好ましくは６〜９０ｍｇ の範囲、最も好ましくは１５〜６０ｍｇの範囲である。この望ましい投与量は、 好ましくは適切な間隔をおいて１日に２回、３回、４回、５回、６回またはそれ 以上の回数の分割投与で与えられる。これらの分割投与量は単位投与形態、例え ば１単位投与形態当たり１０〜１５００ｍｇ、好ましくは２０〜１０００ｍｇ、 最も好ましくは５０〜７００ｍｇの活性成分を含有する単位投与形態で投与され 得る。

理想的には、活性成分は約１〜約７５μＭ、好ましくは約２〜約５０μＭ、最も 好ましくは約３〜約３０μＭのピーク血漿濃度を達成するように投与されるべき である。これは、例えば０．１〜５％溶液（任意には生理食塩水中）の静脈注射 、または約１〜１００　ｍｇ／ｋｇの活性成分を含有する丸薬の経口投与によっ て達成され得る。望ましい血中レベルの維持は、約０．０１〜約５．０　ｍｇ／ ｋｇ／時を与える連続的注入によって、或いは約０．４〜約１５ｍｇ／ｋｇの活 性成分を含む間欠的注入によって達成され得る。

本発明に従う医薬（以下では「製剤」という）の製造において、式（Ｉ）の化合 物またはその生理学的に機能する誘導体（「活性成分」）は、典型的には、就中 １以上の薬剤的に許容され得る担体または賦形剤、並びに任意には他の治療剤と 混合される。

この製剤には、経口投与、経直腸投与、鼻腔投与、局部投与（経皮、口腔および 舌下を含む）、経膣投与または非経腸投与（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を 含む）に適したものが含まれる。便宜上、該製剤は単位投与形態で提供され得る ものであり、製剤の分野で周知の方法によって調製され得る。このような方法は 、−以上の補助成分を構成する担体に活性成分を混合する工程を含んでいる。該 製剤は一般に、液状担体もしくは微粉砕された固相担体またはその両者に活性成 分を均−且つ親密に混ぜ合わせることによって、また必要であれば、次いで該混 合物を成形することによって調製される。

経口投与に適した本発明の製剤は、夫々が所定量の活性成分を含有するカプセル 、カシェ剤または錠剤のような分離独立した単位剤形として；散剤または顆粒剤 と１７て；水性液体もしくは非水性液体中の溶液または懸濁剤として；または水 中面の液体エマルジョンもしくは油中水の液体エマルジョンとして提供されえる 。活性成分はまた、丸薬、舐剤またはベーストとして提供され得る。

錠剤は、任意には一以上の補助成分と共に、圧縮またはモールドによって製造さ れ得る。圧縮錠剤は、任意にバインダ（例えばポビドン、ゼラチン、ヒドロキシ プロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性稀釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば ナトリウムスターチグリコレート、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロ ースナトリウム）、表面活性剤または分散剤と混合された、粉末または顆粒のよ うな自由流動形態の活性成分を適切な機械の中で圧縮することによって調製され 得る。モールド錠剤は、不活性な液体稀釈剤で湿らせた粉末状化合物を適切な機 会の中でモールドすることによって製造され得る。この錠剤は任意に、コーティ ングされ又は分割溝を付され得る。また、例えばヒドロキシプロピルメチルセル ロースを種々の比率で用いて望ましい放出特性を与えることにより、その中に含 有される活性成分の徐放性および放出制御性を与えるように製剤化され得る。錠 剤は任意に、胃ではなく腸の一部の中で放出されるように、エンテリツクコーテ ィングを施され得る。

また、上記のような経口的使用に適した製剤は、胃の中の酸を中和するように設 計された緩衝剤をも含有し得る。このような緩衝剤は、その共役塩と混合された 弱酸または弱塩基のような種々の有機剤もしくは無機剤から選択され得る。

口腔内での局部投与に適した製剤には、賦香ベース（通常は蔗糖およびアカンア 若しくはトラガカンス）中に活性成分を含有するロゼンジ（ｌｏｘｅｎｇｅ）　 ；ゼラチン及びグリセリン、又は蔗糖およびアカシアのような不活性ベース中に 活性成分を含有するサブロー錠剤（ｐａｓｔｉｌｌｅｓ）　；および適切な液状 担体中に活性成分を含有するマウスウォッシュが含まれる。

直腸内投与に適した製剤は、例えばココアバター又はサリチレートを含有する適 切な基材と共に、座薬として提供され得る。

腟内投与に適した製剤は、活性成分に加えて当該技術分野で公知の適切な担体を 含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲルペースト、フオーム又はスプレ ー製剤として提供され得る。

非経腸的投与に適した製剤には、水性および非水性の等張滅菌注射溶液（抗酸化 剤、緩衝剤、静菌剤および該製剤を患者の血液に対して等張とする溶質を含有し 得る）；並びに該化合物を血液成分または一以上の器官にターゲットするように 設計されたリポソームまたは他の微粒子系としての、水性および非水性の滅菌懸 濁液（懸濁剤および濃化剤を含有し得る）が含まれる。この製剤は、単−投与量 または多数回投与量を密封した容器、例えばアンプル及びバイアルとして提供さ れ得、また使用直前に滅菌済の液状担体（例えば水）の添加のみを必要とするよ うな凍結乾燥条件において保存され得る。即時調合性の注射溶液および懸濁剤は 、先に述べた滅菌済の散剤、顆粒および錠剤から調製してもよい。

好ましい単位投与製剤は、上記に述べたような活性成分の一日投与量もしくは単 位、−日の回分投与量またはその適切な画分を含有するものである。

なお、本発明の製剤は上記で特記した成分に加えて、問題の製剤に関する技術に おいて慣用的な他の成分をも含有し得ることが理解されるべきである。例えば、 経口投与に適した製剤は更に、甘味剤、濃化剤および賦香剤を含有し得る。

式（Ｉ）の化合物は、例えば欧州特許明細書第０３８２５２６号に記載された方 法に従って、又はこれに類似した方法によって調製され得る。

即ち、式（Ｉ）の化合物は、例えば下記ａ）又はｂ）の工程を具備した方法によ って調製され得る。

ａ）任意に保護された５−Ｒ−シトシン化合物（Ｒは上記で定義した通り）を、 次式（ｎＡ）の１，３−オキザチオランと反応させる。

（ここで、Ｒ１は水素またはヒドロキ保護基であり、Ｌは脱離基である） ｂ）次式（ｎ　Ｂ）の化合物を、そのウラシル環における４−位のオキソ基をア ミノ基に変換する試薬と反応させる。残存する保護基は、所望の生成物を得るた めに、例えば酸加水分解または塩基加水分解によって除去される。

〇一 方法ａ）について説明すると、ヒドロキシ保護基には、アシル（例えばアセチル ）、アリールアシル（例えばベンゾイル又は置換ベンゾイル）、トリチル若しく はモノメトキシトリチル、ベンジル若しくは置換ベンジル、トリアルキルシリル （例えばジメチル−ｔ−ブチルシリル）又はジフェニルメチルシリルが含まれる 。５−Ｒ−シトシン化合物は、任意にシリル基（例えばトリメチルシリル）で保 護され得る。このような基は慣用的な方法で除去され得る。脱離基りは、ヌクレ オシド化学の分野で公知の典型的な脱離基、例えば塩素若しくは臭素のようなハ ロゲン、メトキシ若しくはエトキシのようなアルコキシ、又はアセチル若しくは ベンソイルのようなアセチルである。

方法ａ）における反応は、塩化第二スズ又はトリメチルシリルトリフラートのよ うなルイス酸の存在下において、有機溶媒（例えば１，２−ジクロロエタン又は アセトニトリル）中で行なわれ得る。

式（ＩＩＡ）の化合物は、Ｃａｎ、　ｆ、　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　８．１２９　 （１９３３）及び欧州特許明細書第０３８２５２６号に記載されているように、 次式（ＩＩＩ）に示す適切に保護された２−ヒドロキシアセトアルデヒドから得 ることができる。

ＲＩＯＣＨ２ＣＨＯ（ｍ） （ここで、Ｒ１は上記で定義した通りである）この式（ｍ）の化合物と、Ｒが０ １−４アルコキシであるメルカプトアセタールＨ３ＣＨＣＨ（ＯＲ）　、例えば おいて公知であり（Ｃｈｅｍ、　Ｂｔｒ、　８５：９２４−９３２．１９５２） 　、該反応によって、ＬがＯＲ（アルコキシ）、例えばメトキシ又はエトキシで ある式（ＩＩＡ）の化合物を生じる。或いは、Ｌがアルコキシである式（ＩＩＡ ）の化合物は、炭水化物化学の分野において公知の方法により、Ｌがハロゲン又 はアシルである式（ｍＡ）の化合物に変換されてもよい。

式（ｍ）の化合物は、１．２−０−イソプロピリデングリセロールを出発物質と して、これにＲ１（例えば三置換シリル、ベンジル若しくはトリチル）を導入し 、温和な酸（例えば水性のギ酸もしくは酢酸）またはアセトニトリル中の臭化亜 鉛でイソプロピリデン基を除去し、続いてアルコール基を水性過ヨウ素酸塩で酸 化することによって調製され得る。

方法ｂ）について説明すると、式（ＩＩ　Ｂ）の化合物は、有利には４−クロロ フェニルジクロロホスフェートと一緒に、１、　２．４−トリアゾールで有利に 処理されて対応の４−（１，２，４−トリアゾール）化合物にされ、次いで例え ばメタノールとの反応によって所望の４−アミノ（シチジン）化合物に変換され る。

式（ＩＩ　Ｂ）の出発物質は、方法ａ）で説明したのと類似した方法により、例 えば適切な塩基（任意に保護される）を式（ＩＩＡ）の化合物と反応させること によって調製される。

例えば保護された形での（±）−ｃｉｓ異性体と（±）　−Ｄａｎｓ異性体との 分離は、酢酸エチル／メタノール、酢酸エチル／ヘキサン又はジクロロメタン／ メタノールのような有機溶媒混合物を用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィ ーによって達成される。保護基は次いで、夫々の基について適切な試薬を用いる ことにより除去され得る。

（±）エナンショマーの分割は、ブタの肝臓エステラーゼ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅ ｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ６３１７８）のようなエラスター ゼを用いて酵素的に達成され得る。この場合、式（Ｉ）の化合物の５′−アセチ ル誘導体の一方のエナンショマーが脱エステル化される。分離した後、残存する 式（Ｉ）のエステル化された化合物が塩基性条件下（例えば、メタノール中のＮ Ｈ３又はメタノール中のＮａＯＭｅ）で反応され、個々の（＋）エナンショマー 及び（−）エナンショマーが得られる。

或いは、式（Ｉ）の化合物の（±）−ｃｉｓ異性体および（±）−ｔｒａｎｓ異 性体を、トリエチルホスフェート、アセトニトリル又は１，３−ジメチル−３， ４，５，６−チトラヒドロー２（ＩＨ）−ピリミジノンのような不活性溶媒中に おいて燐酸化剤（例えばオキシ塩化燐）と反応させ、５″−モノホスフェート誘 導体またはその塩を得てもよい。

この５′−モノホスフェート誘導体をヘビ毒である５′−ヌクレオチダーゼのよ うな酵素で処理することによって、エナンショマーの一方が優先的に加水分解さ れる。他の５′−モノホスフエートエナンショマーの分離と、これに続く脱燐酸 化によって、個々の（＋）エナンショマー及び（−）エナンショマーが得られる 。

式（Ｉ）の化合物は適切なエステル化剤、例えば酸塩化物または酸無水物との反 応によって、薬剤的に許容可能なエステルに変換され得る。式（Ｉ）の化合物は 慣用的方法、例えば適切な塩基で処理することによって、その薬剤的に許容可能 な塩に変換され得る。式（Ｉ）の化合物のエステル又は塩は、例えば加水分解に よって、もとの軟化合物に変換され得る。

本発明をより良く理解するための例示として、以下に実施例を説明する。

例１： １〜（２−（ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチ欧州特許（Ｅ　Ｐ）明細書 第０３８２５２６号に記載されたようにして、（±）−ｃｉｓ−及び（±）　− ｔｒａｎｓ−２−ベンゾイルオキシメチル−５−（Ｎ４−アセチル−シトシン− １−イル）−１，３−オキサチオランを調製し、（±）　−ｃｉｓ異性体と（± ）−ｔｒａｎｓ異性体とに分離した。エタノール中のジメチルアミンを用いてＮ ４−アセチル基および２−ベンゾイル基を除去し、生成物である（±）　−ｃｉ ｓ−１（２（ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）シトシ ンを単離した。

く方法Ｂ〉 ＥＰ明細書第０３８２５２６号に記載されたようにして、（±）−ｃ１５〜及び （±）　−ｔｒａｎｓ−２−ベンゾイルオキシメチル−５−（ウラシル−１−イ ル）−１，３−オキサチオランを調製した。飽和メタノール性アンモニアを用い て２−ヒドロキシ基を脱保護した後、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨを溶出溶媒に用いて シリカゲル上で異性体を分離した（Ｅ　Ｐ　０３８２５２６号）。

この（±）　−ｃｉｓ異性体をピリジン中において室温で無水酢酸と反応させ、 ２−アセテートを得た。減圧下に３０　’Ｃ未満で溶媒を除去し他。次いで、２ −アセテートをＣＨ（Ｊ）３に溶解し、重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。分 離した有機層を乾燥し、減圧下でＣＨＣ，Ｑ３を蒸発させた。ウラシル塩基のシ トシン塩基への変換は、Ｃ，Ｂ、　Ｒｅｔｓｅ、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、 　、　Ｐｅｔｋｉｎｓ　ｌ、　１１７１．１９８４及びＷ、　Ｌ、　Ｓｕｎｇ、 　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒ？ｓ、　９：６１３９．１９８＋の方法に従 い、乾燥ピリジン中において室温で１，２゜４−トリアゾール及び２当量の４− クロロ−フェニルジクロロホスフェートを用いることにより、４−　（１，２， ４−トリアゾール−１−イル）誘導体を調製することによって行なった。この変 換に続いて、予めアンモニアで飽和されたメタノールと０°Ｃで反応させ、２− アセテートを加水分解して（±）　−ｃｉｓ−１−（２−（ヒドロキシメチル） −１，３−オキサチオラン−５−イル）シトシンを得た。

例　２　： １−　（２−（ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）−５ −メチルシトシン欧州特許（ＥＰ）明細書第０３８２５２６号に記載されたよう にして、（±）−ｃｉｓ−及び（±）　−１ｒａｎｓ−２−ベンゾイルオキシメ チル−５−（チミン−Ｎ−イル）−１，３−オキサチオランを調製し、（±）− ｃｉｓ異性体と（±）　−ｔｒａｎｓ異性体とに分離した。（±）　−ｃｉｓ異 性体を室温でピリジン中の無水酢酸と反応させることにより、２−アセテートを 得た。溶媒を減圧下に３０°Ｃ未満で除去した。次いで、この２−アセテ−させ た。チミン塩基の５−メチルシトシン塩基への変換は、Ｃ，Ｂ、　Ｒｅｅｓｅ、 　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　、　Ｐｅｒｋｉｎｓ　１．１１７１．１９８４ 及びＷ、　Ｌ、　Ｓｕｎｇ、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、　９：６ １３９．１９８１の方法に従い、乾燥ピリジン中において室温で１．　２．４− トリアゾール及び２当量の４−クロロフェニルジクロロホスフェートを用いるこ とにより、４−（１，２，４−トリアゾール−１−イル）誘導体を調製すること によって行なった。この変換に続いて、予めアンモニアで飽和されたメタノール と０°Ｃで反応させ、２−アセテートを加水分解して（±）　−ｃｉｓ−１−（ ２−（ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）−５−メチル シトシンを得た。

製剤処方 以下の製剤例において、「活性成分」は１−　（２−（ヒドロキシメチル）−１ ，３−オキサチオラン−５−イル）シトシンである。

例３：　錠剤処方 ポビドン溶液を用いて成分の湿式造粒を行ない、続いてステアリン酸マグネシウ ムの添加および圧縮を行なうことにより、以下の製剤Ａ、Ｂ及びＣが調製された 。

く製剤Ａ〉 ｍｇ／錠　ｍｇ／錠 （Ａ）活性成分　２５０　２５０ （ｂ）乳糖Ｂ、Ｐ、　２１０　２６ （ｃ）ポビドンＢ、Ｐ、　１５　９ （ｄ）　ナトリウム澱粉グリコレート　２０１２ｔｅ）　ステアリン酸マグネシ ウム　５３く製剤Ｂ〉 ｍｇ／錠　ｍｇ／錠 （ａ）活性成分　２５０　２５０ （ｂ）乳糖　１５０ （Ｃ）　アビセル（Ａｖｉｃｅｌ）　ｐＨｌ　１０１６０　２６（ｄ）　ポビド ンＢ、Ｐ、　１５　９ （ｄ）ナトリウム澱粉グリコレート２０　１２（Ｐ）ステアリン酸マグネシウム 　５３く製剤Ｃ〉 ｍｇ／錠 （ｉｌ）活性成分　１００ （ｂ）乳糖　２００ （ｃ）澱粉　５０ 以下の製剤りおよびＥを、混合成分の直接圧縮により調製した。製剤Ｅにおける 乳糖は直接圧縮タイプ（Ｄａｉｒｙ　Ｃｒｅｓｌ−“Ｚｅｐａｒｏｘ　”　）で ある。

く製剤Ｄ〉 ｍｇ／錠 （ａ）活性成分　２５０ （ｂ）予備ゼラチン化澱粉Ｎ　Ｆ　１５　１５０く製剤Ｅ〉 ｍｇ／錠 （１）活性成分　２５０ （ｂ）乳糖　１５０ （Ｃ）アビセル　１００ く製剤Ｆ〉 ポビドン溶液を用いて下記成分の湿式造粒を行ない、続いてステアリン酸マグネ シウムの添加および圧縮を行なうことにより製剤を調製した。

ｍｇ／錠 （ａ）活性成分　１００ （ｂ）　ヒドロキシプロピルメチルセル　２００ロース（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ　Ｋ ４Ｍ　Ｐｒｅｍｉｕｍ）（ｃ）乳糖Ｂ、　Ｐ、　５０ （（１）ポビドンＢ、　Ｐ、５ （ｅ）ステアリン酸マグネシウム　４ 薬剤の放出は約６〜８時間に亘って起こり、１２時間後に終了した。

例４：　カプセル剤処方 く製剤Ａ〉 上記例３における製剤りの成分を混合し、２分割型の硬質ゼラチンカプセルに充 填することにより、カプセル製剤を調製した。同様の方法で、下記の製剤Ｂを調 製した。

く製剤Ｂ〉 ｍｇ／カプセル （ａ）活性成分　２５０ （ｂ）乳糖Ｂ、Ｐ、　＋４３ （Ｃ）ナトリウム澱粉グリセロール　２５（ｄ）ステアリン酸マグネシウム　２ く製剤Ｃ〉 ｍｇ／カプセル （ａ）活性成分　２５０ （ｂ）　−７クロゴル（Ｍａｃ＋ｏｇｏｌ）　４０００　Ｂ、Ｐ、　３５０く製 剤Ｄ〉 ｍｇ／カプセル （ａ）活性成分　２５０ 製剤りの／７プセルは、活性成分をレシチン及びアラキス浦中に分散さけ、該分 散液を軟質の弾性ゼラチンカプセル中に充填することにより調製された。

く製剤Ｆ（放出制御カプセル）〉 放出制御カプセルは次のようにして調製された。まず、押出し機を用いて下記の 成分（ａ）、　（ｂ）及び（ｃ）を押出し成形し、続いて該押出し物を球状化し 且つ乾燥した。次いで、乾燥されたペレットを放出制御膜（ｄ）でコーティング し、２分割型の硬質セラチンカプセル中に充填した。

ｌｌ１ｇ／カプセル （ａ）活性成分　２５０ （ｂ）微結晶セルロース　１２５ ＦＣ）乳糖Ｂ、　Ｐ、　１２５ 例５：　注射剤 く製剤Ａ〉 活性成分　０．２００ｇ 塩酸溶液（０，１Ｍ）又は 水酸化ナトリウム　ｐＨ４，０〜７，０とする量滅菌水　合計１０ｍＬとする量 活性成分を大部分の水（３５℃〜４０℃）に溶解し、塩酸または水酸化ナトリウ ムを適切に用いてｐＨを４．０〜７．０に調節した。次いで、水を加えてバッチ を所定容量とし、滅菌マイクロポアフィルターを通して１０　ｍＬの琥珀色ガラ ス瓶（タイプ１）中に濾過し、滅菌包装でシールした。

く製剤Ｂ〉 活性成分　０．１２５ パイロジエンを含まない ｐＨ７の滅菌燐酸緩衝液　合計２５ｍＬとする量例６：　筋肉的注射製剤 活性成分　０．２０ｇ ベンジルアルコール　０．１０ｇ グリコフロール（ＧＩ７ｃｏｆｕｒｏｌ）　７５　１．４５ｇベンジルアルコー ル　合計３．００＋ｎＬとする量活性成分をグリコフロール中に溶解した。次い で、ベンジルアルコールを添加して溶解し、水を添加して３ｍＬとした。

次に、この混合物を滅菌マイクロポアフィルタを通して濾過し、３ｍＬの琥珀色 ガラス瓶（タイプ１）に封入した。

例７；　シロップ剤 活性成分　０．２５ｇ ソルビトール溶液　１．５０ｇ グリセロール　００ｇ 安息香酸ナトリウム　００５　ｇ 香料（モモ１７．４２．３１６９）　０１２５　ｍＬ精製水　合計５．ＯＯｍＬ とする量 活性成分を、グリセロール及び大部分の精製水の混合物中に溶解した。この溶液 に安息香酸ナトリウムの水溶液を添加し、続いてソルビトール溶液を添加し、最 後に香料を添加した。精製水で容量を調節し、良（混合した。

例８：　座薬 硬質脂肪Ｂ、　Ｐ、　１７７０ （Ｗｉｌｅｐｓｏｌ　Ｂ１５−　Ｄｙｎａｍｉｔ　Ｎｏｂｅｌ）　２０２０残り のＷｉｔｅｐｓｏｌ　［ｉ１５を懸濁液に添加し、撹拌して均一な混合ツクモー ルド内に充填した。この座薬を室温に冷却した。

活性成分　２５０ 無水デキストロース　３８０ ポテト澱粉　３６３ ステアリン酸マグネシウム　７ 上記の成分を直接混合し、得られた混合物を直接圧縮することによってペッサリ ーを調製した。

例１０： Ｂ型肝炎ウィルスに対する抗ウィルス活性次の二つの化合物、即ち、１−　（２ −（ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）シトシン及び１ −　（２−（２−ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）− ５−メチルシトシンについて、次のように試験を行なった。

５ｅｌｌｓ　ｅｉ　ａｌ、、　ＰＮＡＳ　８４：１００５．１９８７及びＪ、Ｖ ｉｒｏｌ、　６２：２８３６゜ｌ９８８に記載され、特徴付けられたヒトＨＢＶ 産生細胞うイン多くの特徴を共有することが示されており、チンパンジーに病気 を起こさせる能力に示されるように感染性である。抗ＨＢＶ活性をもつ化合物を 同定するために、この細胞ラインがｉｎ　ｖｉｔ＋ｏで用いられた。

６ローおよび１０日ロー細胞外ピリオンＤＮＡ　（ゾーン粒子）を含む上清培地 を回収し、プロティンアーゼＫ　（１ｍｇ／ｍＬ）および硫酸ドデシルナトリウ ム（１％）で処理し、５０℃で１よびプロパツールにより沈殿させた。このＤＮ Ａ沈殿物を、５ｃｈｌｅｉｃｈｅ＋及び５ｃｈｕｅｌｌ　（Ｓ　＆　Ｓ、　０ｐ ｔｉｃａｌ　Ａｖｅ、、Ｋｅｅｎｅ、　Ｎｆｌ−ルによる沈殿の後、細胞内ＤＮ Ａ沈殿物を溶解し、制限工複製中間体の同様の減少によって決定された。

上記の結果を下記に示す。

５−イル）−５−メチルシトシン（化合物Ｂ）の効果８　細胞内ＨＢＶ−ＤＮＡ 　（ゾーン粒子）の分析は、処理の第１０日に続く２４時間である。

°＋＋「ゼロ」はＨＢＶ・ＤＮＡの未検出レベルを示す。また、感度のかノドオ フ値は０、　Ｉ　ｐｇ／のしである。

国際調査報告 フロントページの続き （７２）発明者　へインター、ジョージ・ロバート・ザ・サード アメリカ合衆国、ノース・カロライナ州２７５１４、チャペル・ヒル、ピッチ・ パイン・レーン　１０８

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．Ｂ型肝炎ウイルス感染の治療または予防のための医薬の製造における、次式 （Ｉ）の化合物またはその生理学的に機能する誘導体の使用。 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（但し、Ｒは水素原子またはＣ１−３ アルキル基である）２．請求項１に記載の使用であって、式（Ｉ）の化合物が１ −（２−（ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）シトシン である使用。 ３．請求項１に記載の使用であって、式（Ｉ）の化合物が１−（２−（ヒドロキ シメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）−５−メチルシトシンである 使用。 ４．請求項１に記載の使用であって、前記生理学的に機能する誘導体が、式（Ｉ ）の化合物の薬剤的に許容可能な塩またはエステルである使用。 ５．請求項１〜４の何れか１項に記載の使用であって、前記医薬が単位投与形態 である使用。 ６．請求項５に記載の使用であって、前記単位投与形態が、１０ｍｇ〜１５００ ｍｇの式（Ｉ）の化合物またはその生理学的に機能する誘導体を含有する使用。 ７．請求項５または請求項６に記載の使用であって、前記単位投与形態が錠剤ま たはカプセルである使用。 ８．Ｂ型肝炎ウイルス感染の治療または予防に用いるための、式（Ｉ）の化合物 （請求項１に定義したもの）またはその生理学的に機能する誘導体。 ９．Ｂ型肝炎ウイルス感染の治療または予防に用いるための、１−（２−（ヒド ロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）シトシン。 １０．Ｂ型肝炎ウイルス感染の治療または予防に用いるための、１−（２−（ヒ ドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）−５−メチルシトシン 。 １１．Ｂ型肝炎ウイルスに感染したヒトを治療する方法であって、前記ヒトに対 する抗Ｂ型肝炎ウイルス治療に有効な量の、式（Ｉ）の化合物（請求項１で定義 したもの）またはその生理学的に機能する誘導体を前記ヒトに投与することを具 備した方法。 １２．請求項１１に記載の方法であって、前記式（Ｉ）の化合物が１−（２−（ ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）−５−メチルシトシ ンである方法。 １３．請求項１１に記載の方法であって、前記式（Ｉ）の化合物が１−（２−（ ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）シトシンである方法 。