JPH06343453A - 培養用小片 - Google Patents
培養用小片Info
- Publication number
- JPH06343453A JPH06343453A JP13780093A JP13780093A JPH06343453A JP H06343453 A JPH06343453 A JP H06343453A JP 13780093 A JP13780093 A JP 13780093A JP 13780093 A JP13780093 A JP 13780093A JP H06343453 A JPH06343453 A JP H06343453A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- small piece
- culture
- shape
- piece
- plastic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 割れ難くく、培地中で浮き上がらず、高倍率
での顕微鏡観察や蛍光顕微鏡での観察が可能で、コスト
の安い培養用小片を提供する。 【構成】 図示したような円形、半円形、扇形、楕円
形、もしくは多角形の形状を有する、厚さ０．０５〜
０．３ｍｍのフッ素樹脂製フィルムの小片で、その表面
に親水化処理を施した。
での顕微鏡観察や蛍光顕微鏡での観察が可能で、コスト
の安い培養用小片を提供する。 【構成】 図示したような円形、半円形、扇形、楕円
形、もしくは多角形の形状を有する、厚さ０．０５〜
０．３ｍｍのフッ素樹脂製フィルムの小片で、その表面
に親水化処理を施した。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、組織培養、細胞培養等
の分野で使用されるもので、その表面に直接細胞等を培
養し、そのまま染色等を行ない、標本としうる培養用小
片に関するものである。
の分野で使用されるもので、その表面に直接細胞等を培
養し、そのまま染色等を行ない、標本としうる培養用小
片に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】組織培養、細胞培養の分野においては、
培養した組織や細胞の顕微鏡用標本を製作するには、一
般に、ペトリ皿や複数のウェルをもったプレート内に顕
微鏡用プレパラートを作製するときに使用する硝子製の
カバーグラスを留置し、培地中でそのカバーグラス上に
組織や細胞を培養し、培養をおえたら、そのカバーグラ
スをスライドグラス上に接着固定して顕微鏡用の標本と
する。
培養した組織や細胞の顕微鏡用標本を製作するには、一
般に、ペトリ皿や複数のウェルをもったプレート内に顕
微鏡用プレパラートを作製するときに使用する硝子製の
カバーグラスを留置し、培地中でそのカバーグラス上に
組織や細胞を培養し、培養をおえたら、そのカバーグラ
スをスライドグラス上に接着固定して顕微鏡用の標本と
する。
【０００３】この時使用されるカバーグラスは、非常に
破損しやすく、取り扱い途中で割れてしまうことが多い
という欠点があった。又、電子顕微鏡での観察の際等、
ミクロトームによる切片標本への加工も困難である。そ
こで最近、透明なプラスチック表面に親水化処理を施し
たフィルムが使用されるようになってきた。しかし、ガ
ラスに比べてプラスチックフィルムは比重が小さく、
又、培地は比重が大きい為、プラスチックフィルムは培
地中に浮いてしまったり、完全に沈まない問題がある。
そのため細胞を播種しても、目的とするフィルム上に細
胞が接着しなかかったり、両面に接着してしまうという
欠点がある。このような欠点を解消するため、本発明者
は先に、片面に粘着剤を塗布し（実開平５−９８号公
報）、あるいは外周部に複数個の耳部を設けた（実願平
４−５４６９２号）培養用小片の考案をなし開示した。
破損しやすく、取り扱い途中で割れてしまうことが多い
という欠点があった。又、電子顕微鏡での観察の際等、
ミクロトームによる切片標本への加工も困難である。そ
こで最近、透明なプラスチック表面に親水化処理を施し
たフィルムが使用されるようになってきた。しかし、ガ
ラスに比べてプラスチックフィルムは比重が小さく、
又、培地は比重が大きい為、プラスチックフィルムは培
地中に浮いてしまったり、完全に沈まない問題がある。
そのため細胞を播種しても、目的とするフィルム上に細
胞が接着しなかかったり、両面に接着してしまうという
欠点がある。このような欠点を解消するため、本発明者
は先に、片面に粘着剤を塗布し（実開平５−９８号公
報）、あるいは外周部に複数個の耳部を設けた（実願平
４−５４６９２号）培養用小片の考案をなし開示した。
【０００４】一方、細胞の固定染色等では様々な有機溶
剤等が使用されるため耐薬品性を必要とすること、及び
透明性の点から、従来ＰＥＴ（ポリエチレンテレフタレ
ート）のフィルムが使用されている。しかし、ＰＥＴの
フィルムは樹脂の性質上結晶しやすく、そのためフィル
ム全体の光の屈曲率が均一でないため、顕微鏡観察にお
いて高倍率では焦点が合わず、像がぼけるという欠点が
ある。また、ＰＥＴの分子構造上、蛍光が発生しやす
く、蛍光顕微鏡での観察では培養用小片自体が蛍光を発
し、目的とする細胞の像が観察出来ないという欠点があ
る。
剤等が使用されるため耐薬品性を必要とすること、及び
透明性の点から、従来ＰＥＴ（ポリエチレンテレフタレ
ート）のフィルムが使用されている。しかし、ＰＥＴの
フィルムは樹脂の性質上結晶しやすく、そのためフィル
ム全体の光の屈曲率が均一でないため、顕微鏡観察にお
いて高倍率では焦点が合わず、像がぼけるという欠点が
ある。また、ＰＥＴの分子構造上、蛍光が発生しやす
く、蛍光顕微鏡での観察では培養用小片自体が蛍光を発
し、目的とする細胞の像が観察出来ないという欠点があ
る。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、組織や細胞
の培養におけるこのような問題点を解決しようとしたも
ので、その目的とするところは、割れ難く、培地中で浮
き上がらず、高倍率での顕微鏡観察や蛍光顕微鏡での観
察が可能で、シンプルでコストの安い培養用の小片を提
供することにある。
の培養におけるこのような問題点を解決しようとしたも
ので、その目的とするところは、割れ難く、培地中で浮
き上がらず、高倍率での顕微鏡観察や蛍光顕微鏡での観
察が可能で、シンプルでコストの安い培養用の小片を提
供することにある。
【０００６】
【問題を解決するための手段】上記のような目的を達成
するために鋭意研究した結果、本発明者らは、フッ素樹
脂が比重が大きいこと、耐薬品性に優れること、透明性
に優れること、結晶化し難いこと、及び分子構造上蛍光
の発生が少ないこと、かつ表面を親水化処理することに
より細胞の接着が可能であることを見いだし、本発明を
完成するに至った。
するために鋭意研究した結果、本発明者らは、フッ素樹
脂が比重が大きいこと、耐薬品性に優れること、透明性
に優れること、結晶化し難いこと、及び分子構造上蛍光
の発生が少ないこと、かつ表面を親水化処理することに
より細胞の接着が可能であることを見いだし、本発明を
完成するに至った。
【０００７】即ち、本発明は、厚さ０．０５〜０．３ｍ
ｍのフィルム状プラスチックよりなる、円形、半円形、
扇形、楕円形、もしくは多角形の形状を有する小片であ
って、該プラスチック小片の材質がフッ素樹脂であり、
且つその表面に親水化処理を施したことを特徴とする培
養用小片である。
ｍのフィルム状プラスチックよりなる、円形、半円形、
扇形、楕円形、もしくは多角形の形状を有する小片であ
って、該プラスチック小片の材質がフッ素樹脂であり、
且つその表面に親水化処理を施したことを特徴とする培
養用小片である。
【０００８】以下、図面により本発明を詳細に説明す
る。図１は、本発明の一実施例となる培養用小片の形状
を示す上面図である。
る。図１は、本発明の一実施例となる培養用小片の形状
を示す上面図である。
【０００９】本発明の培養用小片は、通常、フッ素樹脂
のフィルムまたはシートを、図１に示すような目的とす
る形状に打ち抜いて作製するが、製法としてはこれに限
定されるものではない。小片（１）の厚さは、０．０５
〜０．３ｍｍの範囲とするのが良い。０．０５ｍｍより
薄いと形状を保ちにくく、また、０．３ｍｍより厚いと
顕微鏡観察の妨げとなる。
のフィルムまたはシートを、図１に示すような目的とす
る形状に打ち抜いて作製するが、製法としてはこれに限
定されるものではない。小片（１）の厚さは、０．０５
〜０．３ｍｍの範囲とするのが良い。０．０５ｍｍより
薄いと形状を保ちにくく、また、０．３ｍｍより厚いと
顕微鏡観察の妨げとなる。
【００１０】フッ素樹脂の種類としては、ＰＴＦＥ（４
フッ化エチレン樹脂）、ＰＣＴＦＥ（３フッ化塩化エチ
レン樹脂）、ＦＥＰ（４フッ化エチレン−６フッ化プロ
ピレン共重合体）、ＰＦＡ（４フッ化エチレン−パーフ
ロロアルコキシ共重合体）等が挙げられるが、これらの
フッ素樹脂は、表面の濡れ性が悪く、そのままでは細胞
は接着できないため、表面に親水化処理を施して細胞の
接着性を付与する。親水化処理の方法としては、コロナ
放電処理や低温プラズマ処理等によるのがよい。
フッ化エチレン樹脂）、ＰＣＴＦＥ（３フッ化塩化エチ
レン樹脂）、ＦＥＰ（４フッ化エチレン−６フッ化プロ
ピレン共重合体）、ＰＦＡ（４フッ化エチレン−パーフ
ロロアルコキシ共重合体）等が挙げられるが、これらの
フッ素樹脂は、表面の濡れ性が悪く、そのままでは細胞
は接着できないため、表面に親水化処理を施して細胞の
接着性を付与する。親水化処理の方法としては、コロナ
放電処理や低温プラズマ処理等によるのがよい。
【００１１】本発明における培養用小片（１）の形状
は、図１に示す様に、円形（ａ）、半円形、楕円形、扇
形（ｃ）、多角形（ｂ）等適宜選べば良く、その大きさ
形状は、用いられるペトリ皿やプレートのウェルの寸
法、形状に合わせて作ることが出来る。又、小片（１）
の大きさ、形状を工夫し、半円形や図１（ｃ）のような
扇形にすることによって、１つのウェルに複数枚を入れ
て使用することも出来る。
は、図１に示す様に、円形（ａ）、半円形、楕円形、扇
形（ｃ）、多角形（ｂ）等適宜選べば良く、その大きさ
形状は、用いられるペトリ皿やプレートのウェルの寸
法、形状に合わせて作ることが出来る。又、小片（１）
の大きさ、形状を工夫し、半円形や図１（ｃ）のような
扇形にすることによって、１つのウェルに複数枚を入れ
て使用することも出来る。
【００１２】また、図１（ｄ）のように外周部に外側へ
向かって突起部（２）を設けたり、図１（ｅ）のように
外周部に内側に向かって互いに近接した２本の切れ込み
（３）を設け、それによって爪部（４）を形成させ、こ
の突起部（２）や爪部（４）を培養前に曲げておけば、
ピンセットで掴みやすくなり、培養後この小片（１）を
ピンセットにより取り出す操作が非常に容易になる。
向かって突起部（２）を設けたり、図１（ｅ）のように
外周部に内側に向かって互いに近接した２本の切れ込み
（３）を設け、それによって爪部（４）を形成させ、こ
の突起部（２）や爪部（４）を培養前に曲げておけば、
ピンセットで掴みやすくなり、培養後この小片（１）を
ピンセットにより取り出す操作が非常に容易になる。
【００１３】
【実施例】次に、実施例により本発明の効果について具
体的に説明する。 〔実施例１〕フッ素樹脂製のシートとして厚さ０．１ｍ
ｍのＦＥＰシートを使用した。直径２５ｍｍの円形に打
ち抜いて、表面をコロナ放電により親水化処理し、紫外
線により殺菌した後、各評価に供した。 〔比較例１〕厚さ０．１ｍｍのＰＥＴシートを直径２５
ｍｍに打ち抜き、表面をコロナ放電により親水化処理
し、紫外線により殺菌して各評価に供した。 〔比較例２〕厚さ０．１ｍｍ、直径２５ｍｍの市販のカ
バーグラスを、紫外線により殺菌し、各評価に供した。
体的に説明する。 〔実施例１〕フッ素樹脂製のシートとして厚さ０．１ｍ
ｍのＦＥＰシートを使用した。直径２５ｍｍの円形に打
ち抜いて、表面をコロナ放電により親水化処理し、紫外
線により殺菌した後、各評価に供した。 〔比較例１〕厚さ０．１ｍｍのＰＥＴシートを直径２５
ｍｍに打ち抜き、表面をコロナ放電により親水化処理
し、紫外線により殺菌して各評価に供した。 〔比較例２〕厚さ０．１ｍｍ、直径２５ｍｍの市販のカ
バーグラスを、紫外線により殺菌し、各評価に供した。
【００１４】〔評価１〕細胞の増殖性 ＨｅＬａ Ｓ３細胞を試験片１枚当たり１００００個播
種し、１０％仔牛血清を添加したＭＥＭ培地中３日間培
養し、１枚当たりの細胞数を比較した。 〔評価２〕顕微鏡での観察性 ＨｅＬａ Ｓ３細胞を試験片に播種し、固定染色後、ス
ライドグラス上に細胞の接着面をスライドグラス側にし
て固定し、顕微鏡により各種倍率で観察して、焦点を合
わせられるかどうかを観察した。
種し、１０％仔牛血清を添加したＭＥＭ培地中３日間培
養し、１枚当たりの細胞数を比較した。 〔評価２〕顕微鏡での観察性 ＨｅＬａ Ｓ３細胞を試験片に播種し、固定染色後、ス
ライドグラス上に細胞の接着面をスライドグラス側にし
て固定し、顕微鏡により各種倍率で観察して、焦点を合
わせられるかどうかを観察した。
【００１５】〔評価３〕蛍光の発生性 倒立顕微鏡に落射蛍光装置を取付け、更に撮影用自動カ
メラを設置し、カメラは一定の露光量に達したところで
シャッターが切れるように設定した。各励起光でのシャ
ッターが切れるまでの時間により、実際に顕微鏡を覗い
た時の結果に等しい形で、蛍光の発生度合いを比較し
た。 〔評価４〕培地中での状態 ＭＥＭ培地中での、各小片の浮き上がりの状態を比較し
た。
メラを設置し、カメラは一定の露光量に達したところで
シャッターが切れるように設定した。各励起光でのシャ
ッターが切れるまでの時間により、実際に顕微鏡を覗い
た時の結果に等しい形で、蛍光の発生度合いを比較し
た。 〔評価４〕培地中での状態 ＭＥＭ培地中での、各小片の浮き上がりの状態を比較し
た。
【００１６】評価１〜評価４の結果は表１にまとめた通
りで、実施例１は細胞の増殖性、顕微鏡での観察性、及
び蛍光の発生は従来のカバーグラスと同等であり、従来
のプラスチック製の培養用小片であるＰＥＴに比べて、
顕微鏡での観察性が良好であることがわかる。又、フッ
素樹脂は比重が大きく、培地中でも浮き上がりは認めら
れない。
りで、実施例１は細胞の増殖性、顕微鏡での観察性、及
び蛍光の発生は従来のカバーグラスと同等であり、従来
のプラスチック製の培養用小片であるＰＥＴに比べて、
顕微鏡での観察性が良好であることがわかる。又、フッ
素樹脂は比重が大きく、培地中でも浮き上がりは認めら
れない。
【００１７】
【表１】
【００１８】
【発明の効果】本発明による培養用小片は、従来のプラ
スチック製培養用小片の欠陥であった培養時の浮き上が
りがなく、培養用小片の上面のみに細胞を付着させて培
養出来るので、顕微鏡での観察性に優れ、また蛍光の発
生が少ないので、蛍光顕微鏡による観察でも支障を生じ
ることがなく、硝子の優れた点と割れにくいというプラ
スチックの優れた点を兼ね備え、培養用小片として最適
である。
スチック製培養用小片の欠陥であった培養時の浮き上が
りがなく、培養用小片の上面のみに細胞を付着させて培
養出来るので、顕微鏡での観察性に優れ、また蛍光の発
生が少ないので、蛍光顕微鏡による観察でも支障を生じ
ることがなく、硝子の優れた点と割れにくいというプラ
スチックの優れた点を兼ね備え、培養用小片として最適
である。
【図１】本発明の１実施例となる培養用小片の形状を示
す上面図である。
す上面図である。
１ 小片 ２ 突起部 ３ 切れ込み ４ 爪部
Claims (4)
- 【請求項１】 厚さ０．０５〜０．３ｍｍのフィルム状
プラスチックよりなる、円形、半円形、扇形、楕円形、
もしくは多角形の形状を有する小片であって、該プラス
チック小片の材質がフッ素樹脂であり、且つその表面に
親水化処理を施したことを特徴とする培養用小片。 - 【請求項２】 フッ素樹脂が、４フッ化エチレン樹脂、
３フッ化塩化エチレン樹脂、４フッ化エチレン−６フッ
化プロピレン共重合樹脂、及び４フッ化エチレン−パー
フロロアルコキシ共重合樹脂の群から選ばれた１種であ
ることを特徴とする、請求項１記載の培養用小片。 - 【請求項３】 フィルム状プラスチック小片の外周部
に、外側に向かって突起部を設けたことを特徴とする、
請求項１記載の培養用小片。 - 【請求項４】 フィルム状プラスチック小片の外周部
に、内側に向かって互いに接近した２本の切り込みを設
け、爪部を形成したことを特徴とする、請求項１記載の
培養用小片。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13780093A JPH06343453A (ja) | 1993-06-08 | 1993-06-08 | 培養用小片 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13780093A JPH06343453A (ja) | 1993-06-08 | 1993-06-08 | 培養用小片 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06343453A true JPH06343453A (ja) | 1994-12-20 |
Family
ID=15207148
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13780093A Pending JPH06343453A (ja) | 1993-06-08 | 1993-06-08 | 培養用小片 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06343453A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003054138A1 (fr) * | 2001-12-20 | 2003-07-03 | Applied Cell Biotechnologies, Inc. | Instrument de culture cellulaire, et procede de separation et de sous-culture de cellules |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03501978A (ja) * | 1988-08-22 | 1991-05-09 | コモンウェルス・サイエンティフィック・アンド・インダストリアル・リサーチ・オーガニゼイション | 細胞の付着および増殖のための材料 |
| JPH0598B2 (ja) * | 1988-03-25 | 1993-01-05 | Shingijutsu Jigyodan |
-
1993
- 1993-06-08 JP JP13780093A patent/JPH06343453A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0598B2 (ja) * | 1988-03-25 | 1993-01-05 | Shingijutsu Jigyodan | |
| JPH03501978A (ja) * | 1988-08-22 | 1991-05-09 | コモンウェルス・サイエンティフィック・アンド・インダストリアル・リサーチ・オーガニゼイション | 細胞の付着および増殖のための材料 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003054138A1 (fr) * | 2001-12-20 | 2003-07-03 | Applied Cell Biotechnologies, Inc. | Instrument de culture cellulaire, et procede de separation et de sous-culture de cellules |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11592438B2 (en) | Device and method for force phenotyping of cells for high-throughput screening and analysis | |
| WO2017177839A1 (zh) | 一种超疏水微坑阵列芯片及其制备方法与应用 | |
| US6037168A (en) | Microbiological assembly comprising resealable closure means | |
| US9657150B2 (en) | Reactive superhydrophobic surfaces, patterned superhydrophobic surfaces, methods for producing the same and use of the patterned superhydrophobic surfaces | |
| Schürmann et al. | The IsoStretcher: an isotropic cell stretch device to study mechanical biosensor pathways in living cells | |
| JP4987885B2 (ja) | 小滴中で反応を行うための装置及びその使用方法 | |
| EP1654347B1 (en) | Improved materials for constructing cell-chips, cell-chip covers, cell-chip coats, processed cell-chips and uses thereof | |
| WO2014165273A1 (en) | Conical devices for three-dimensional aggregate (s) of eukaryotic cells | |
| WO2010027003A1 (ja) | 細胞検出方法及び該方法に用いるマイクロアレイチップ | |
| Sidorova et al. | Microfluidic-assisted analysis of replicating DNA molecules | |
| EP2536819A1 (en) | Array of micromolded structures for sorting adherent cells | |
| Frisk et al. | A silicon-glass microwell platform for high-resolution imaging and high-content screening with single cell resolution | |
| AU2016355349A1 (en) | Selective particles transfer from one device to another | |
| US20190309245A1 (en) | Vessel and method for cell isolation, culture and proliferation | |
| Kong et al. | Analyzing centrioles and cilia by expansion microscopy | |
| KR101571608B1 (ko) | 슬라이드 분리형 세포 배양 접시 및 이를 이용한 세포 분석 방법 | |
| JPH06343453A (ja) | 培養用小片 | |
| JP3133786B2 (ja) | 顕微鏡観察する方法 | |
| WO2016140327A1 (ja) | マイクロチャンバーアレイプレート | |
| Larramendy et al. | Microchannel-connected SU-8 honeycombs by single-step projection photolithography for positioning cells on silicon oxide nanopillar arrays | |
| JP5849806B2 (ja) | 細胞培養基材の検査方法及び検査装置、並びに細胞培養基材の製造方法 | |
| US11841491B2 (en) | Observation vessel, sample preparation method, and observation method | |
| JPH06181740A (ja) | 培養用容器及びその製造方法 | |
| WO2010036913A2 (en) | Quantifying cell migration in wound healing assays | |
| KR20170114525A (ko) | 탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함하는 페트리 접시 |