JPH06327482A

JPH06327482A - オリゴペプタイド、オリゴヌクレオチドならびにｃ型肝炎ウイルス関連抗体検出方法

Info

Publication number: JPH06327482A
Application number: JP15602693A
Authority: JP
Inventors: Hiroaki Okamoto; 宏明岡本
Original assignee: IMUNO JAPAN KK
Current assignee: IMUNO JAPAN KK
Priority date: 1993-05-21
Filing date: 1993-05-21
Publication date: 1994-11-29

Abstract

(57)【要約】【目的】Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）コア領域の特異オ
リゴペアタイド、これをコードするオリゴヌクレオチ
ド、ならびにこれらを用いたＨＣＶ抗体検出方法等を提
供することを目的とする。【構成】配列番号１記載のオリゴペプタイド、配列番号
２記載のオリゴヌクレオチドならびにこれを宿主細胞に
組み込んで発現させて得るオリゴペプタイド、これらを
抗原として使用するＨＣＶ関連抗体の検出方法、ＨＣＶ
関連抗体、ならびにこれを用いたＨＣＶ検出方法の発
明。【効果】ＨＣＶ関連抗体を簡便、高感度かつ特異的に検
出すると共に、Ｃ型肝疾患患者の重症度の診断、インタ
ーフェロンの治療効果の追跡等の臨床診断に有用な情報
を提供することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（以
下「ＨＣＶ」と略記する）に関連するオリゴペプタイ
ド、オリゴヌクレオチド、抗体、ならびにこれらを用い
たＨＣＶ抗体、抗原検出系に関する。

【０００２】

【従来の技術】１９８８年にＨＣＶ遺伝子の一部が解明
されて以来、ＨＣＶ診断への応用可能な数多くの技術が
開発され実用化されてきた。これまで、ＨＣＶ感染によ
って患者血液中に現われるＨＣＶ関連抗体を検出する抗
体検査法、ならびにウイルス感染宿主内に存在するＨＣ
Ｖ遺伝子を検出する方法、さらにＨＣＶの遺伝子型を判
定する方法等が開発され、広く用いられてきている。こ
れらの診断技術に於ける現時点の最重要課題は、高い感
度と各遺伝子型に共通な、もしくは型特異的な高い特異
性を実現することである。この技術課題を解決する為に
は、ＨＣＶに特異的な遺伝子配列あるいは特異抗原の特
定とそれに基づく診断技術の確立が急務である。実際
に、いくつかの遺伝子の異なるＨＣＶ株については全遺
伝子の配列が解明されており、さらに他の株については
遺伝子配列の一部が解明され、ＨＣＶ特異遺伝子配列の
特定あるいはＨＣＶ特異アミノ酸配列の特定に利用され
た。その結果、従来の検査法に比べ、これらの情報に基
づいて開発された最近の診断法は高い特異性と感度を有
するようになり、これに基づいて適切な治療方針を採用
できるようになりはじめた。しかし、他方、これらの検
査法を用いた場合でも捕捉できないＨＣＶ感染例のある
ことも判明しており、より高い特異性と感度を有する診
断法の開発が望まれている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】ＨＣＶはその遺伝子配
列が初めて解明されてからまだ時間が浅く、ウイルス本
体は未だ確認されていない。またウイルス由来の抗原も
天然界より得られておらず、遺伝子組換えや化学合成に
よって人工的に作成されたもののみが利用されているに
すぎない。したがって現状では、ＨＣＶ遺伝子配列がコ
ードするアミノ酸配列が有する抗原性や活性は推定の域
を出ない。カイロン社がはじめてＨＣＶ関連抗体の測定
系を開発して以来、多くのＨＣＶ検出系が開発されてき
たが、これらはＣ型、あるいは非Ａ非Ｂ型（以下「ＮＡ
ＮＢ型」と略記する）肝疾患の診断、治療に満足すべき
情報を提供しているとは言い難い。ＨＣＶ−ＲＮＡの定
量測定は、ウイルス量の推定には有効であるが、病態と
の相関は必ずしも良好ではなく、また操作性の上でも経
済性の上でも大量検体を扱うには適していない。また、
抗体測定は簡便かつ低価格で実施できるにも関わらず、
従来はＨＣＶ感染者のスクリーニングを目的として開発
されたものが中心であり、Ｃ型肝炎の病態との相関性が
高いものはほとんど開発されていない。

【０００４】本発明の目的は、高い感度と特異性を有
し、かつ従来のＨＣＶ検査法では十分に診断できなかっ
たＣ型肝炎の病態を追跡することが可能な抗体検査方法
と、これに用いるオリゴペプタイドを提供することであ
る。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らはこれまで、
ＨＣＶに関して鋭意研究を続け、既にＨＣＶ−ＲＮＡを
検出する方法（特開平５−２３２００）、ＨＣＶコア抗
体を検出する方法（特願平２−１５３４０１）、ＨＣＶ
の遺伝子型を判別する方法（特願平３−３０７２９６）
など多数のＨＣＶ検出系を開発してきた。しかしながら
本発明者らは、高い感度と特異性を有し、かつ従来のＨ
ＣＶ検査法では十分に診断できなかったＣ型肝炎の病態
を追跡することが可能な抗体検査方法の開発が急務であ
ると考え、さらに研究を進めた。その結果、ＨＣＶコア
領域の一部、詳しくはオープンリーディングフレームの
開始コドンＡＴＧにコードされるメチオニンから数えて
５番目から４０番目の３６個のアミノ酸残基からなるオ
リゴペプタイドＣＰ１４を抗原として用いることによ
り、本目的にかなう測定系を実現できることを見いだ
し、本発明を完成するに至った。

【０００６】本発明のオリゴペプタイドは、本発明のオ
リゴヌクレオチドを適当な宿主に組み込んで発現させる
ことにより、あるいは化学合成により、得ることができ
る。本発明のオリゴペプタイドを抗原として用いること
によって、ヒト血液中などに存在するＨＣＶコア抗体を
特異的、かつ高感度に検出することができ、さらにＣ型
肝疾患患者の病態の追跡に用いることができる。

【０００７】すなわち、本発明は公知のＨＣＶ抗体検出
系とは異なる新しい抗体検出方法の発明であり、またこ
れに用いることのできる配列番号１記載のオリゴペプタ
イドＣＰ１４、または宿主細胞に組み込んでＣＰ１４を
得ることのできる配列番号２記載のオリゴヌクレオチド
ＣＮ１４の発明である。

【０００８】ＨＣＶのコア領域は非常に保存性が高く、
異なった遺伝子型の株間でも配列上の差異は少ない。し
かしながらＨＣＶ総体としては、ＲＮＡウイルスである
ことから遺伝子の変異およびこれに伴うアミノ酸配列の
変異は非常に多く、本発明においても若干の部分置換を
有するオリゴヌクレオチドは本発明の範囲に含まれ、同
様に若干の置換を有するオリゴペプタイドも抗原性を維
持する限り当然本発明の範囲に包含される。また、本発
明はオリゴペプタイドＣＰ１４、またはこれと同一の抗
原性を有するオリゴペプタイドを用い、あるいは抗ヒト
ＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＡ抗体、抗ヒトＩｇＭ抗体の中
から選択される１種以上のポリクローナル抗体またはモ
ノクローナル抗体を用いるＣ型肝炎ウイルス抗体検出方
法の発明である。さらに、本発明は、本発明のオリゴペ
プタイドに対するポリクローナル抗体またはモノクロー
ナル抗体の発明、ならびにこれらの抗体を用いたＣ型肝
炎ウイルス検出方法の発明である。

【０００９】本発明者らは、実施例１、２に示すよう
に、オリゴペプタイドＣＰ１４を用いた新しいＨＣＶ抗
体検出方法を開発した。この抗体検出方法は、既に本発
明者らによって開発されたオリゴペプタイドＣＰ１０、
ＣＰ９を抗原として利用した抗体検出系（特願平２−１
５３４０１）や市販のＨＣＶ抗体検出方法と比較して、
同等以上に抗体検出が可能であるのみならず、本発明の
抗体検出方法では肝疾患の重症度により有意に抗体価が
異なり、さらにＨＣＶ−ＲＮＡ量の変化に呼応するよう
に抗体価が変化するので、臨床的に非常に有用であるこ
とが見いだされた。

【００１０】さらに本発明を詳細に説明すると、実施例
３に示すように、ＮＡＮＢ型慢性肝疾患患者群において
はＩｇＭ型ＣＰ１４抗体の力価は疾患の重症度と相関
し、慢性肝炎患者群における抗体価は肝硬変患者群、肝
細胞ガン患者群より有意に低かった。また実施例４に示
すように、ＩｇＭ型ＣＰ１４抗体はＣ型急性肝炎患者群
において肝炎の発症を顕著に検出しているのみならず、
肝炎の寛解／再燃をも良く反映していた。さらに実施例
５に示すように、インターフェロン治療を施したＣ型肝
炎患者群において、ＩｇＧ型ＣＰ１４抗体、ＩｇＭ型Ｃ
Ｐ１４抗体共に血中ＨＣＶ−ＲＮＡ量の変動に伴って抗
体価が変化した。このことから、インターフェロンの治
療効果を追跡するのにも適していることが確認された。

【００１１】本発明の好適な実施態様は、オリゴペプタ
イドＣＰ１４を常法により化学合成によって得ることで
ある。また、オリゴヌクレオチドＣＮ１４も化学合成に
よって得ることができる。したがって、ＣＮ１４を適当
なベクターに組み込んだ後常法により宿主細胞、例えば
Ｅ．ｃｏｌｉや、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅなどに組み
込み、発現させてＣＰ１４を得ることもできる。

【００１２】ＨＣＶ抗体検出方法の好適な実施態様とし
ては、オリゴペプタイドＣＰ１４を適当な担体、例えば
ポリスチレン製マイクロプレートに固相化し、酵素や放
射性同位元素（^１２５Ｉ）などで標識した抗ヒトＩｇＡ
抗体、抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＭ抗体などとでサ
ンドイッチ型免疫測定系を組むことができる。

【００１３】本発明の抗ＣＰ１４ポリクローナル抗体
は、常法によりウサギ、ラット、マウス等にオリゴペプ
タイドＣＰ１４を免疫することによって得ることがで
き、また免疫したマウスの胸腺細胞をマウスミエローマ
細胞と融合することによって抗ＣＰ１４マウスモノクロ
ーナル抗体を得ることができる。さらに、得られたポリ
クローナル抗体またはモノクローナル抗体を適当な担
体、例えばポリスチレン製マイクロプレートに固相化
し、酵素や放射性同位元素などで標識した抗ＣＰ１４抗
体もしくは他の抗ＨＣＶ抗体とでサンドイッチ型免疫測
定系を組むことにより、ＨＣＶ抗原を検出することがで
きる。

【００１４】

【作用】本発明のオリゴペプタイドＣＰ１４またはこれ
と同一の抗原性を有するオリゴペプタイドは、これを抗
原として用いてＣ型肝炎ウィルス抗体を検出することが
できる。本発明のオリゴペプタイドＣＰ１４またはこれ
と同一の抗原性を有するオリゴペプタイドは、抗ヒトＩ
ｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＡ抗体、抗ヒトＩｇＭ抗体から選
択されるポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体
と共に用いることにより、Ｃ型肝炎ウィルス抗体を検出
することができる。本発明のオリゴペプタイドに対する
ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体は、Ｃ型
肝炎ウィルス抗体を検出することができる。本発明のオ
リゴヌクレオチドは宿主細胞に組み込んで本発明のオリ
ゴペプタイドを得ることができる。

【００１５】

【実施例】以下、本発明の実施例について述べるが、も
とより本発明がこれらの実施例に限定されるものではな
い，実施例１：ペプタイドの製造Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄの固相法に基づき、ペプタイドの
Ｃ末端のアミノ酸をまず架橋ポリエチレンに縮合させ、
ついでＮ末端の方向へ向かってｔ−プトキシカルボニル
アミノ酸を１個ずつ順次縮合させてゆき、以下のアミノ
酸配列を有するペプタイドを合成した。ＣＰ１４：ＰＫＰＱＲＫＴＫＲＮＴＮＲＲＰＱＤＶＫＦ
ＰＧＧＧＱＩＶＧＧＶＹＬＬＰＲＲ（３６−ｍｅｒ，ａ
ａ５−４０）ＣＰ１０：ＰＫＰＱＲＫＴＫＲＮＴＮＲＲＰＱＤＶＫ
（１９−ｍｅｒ，ａａ５−２３）ＣＰ９：ＲＲＧＰＲＬＧＶＲＡＴＲＫＴＳＥＲＳＱＰ
ＲＧＲＲＱＰＩＰＫＶＲＲＰＥＧＲ（３６−ｍｅｒ，ａ
ａ３９−７４）カッコ内、ａａはＨＣＶ遺伝子のＯＲＦ（オープンリ
ーディングフレーム）の開始コドンＡＴＧにコードされ
るメチオニンを１として数えた番号を表す。合成後、６
Ｎ−ＨＣｌ、１１０℃、２４時間減圧下で加水分解し、
上記アミノ酸組成を確認した。

【００１６】実施例２：抗ＨＣＶ抗体測定系（１）測定系の作成ＣＰ１４、ＣＰ１０、ＣＰ９の３種のペプタイドを用い
た酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）による抗ＨＣＶ抗体測定
系を作成した。各ペプタイドは実施例１で得た合成ペプ
タイドを用いた。ＥＩＡ用マイクロプレート（グライナ
ー社製）に１ウエル当たり５μｇ／ｍｌの各合成ペプタ
イド溶液５０μｌ（リン酸ｂｕｆｆｅｒ、１０ｍＭ、ｐ
Ｈ７．５）を固相し、オーバーコートは４０％牛血清入
りのリン酸ｂｕｆｆｅｒで行なった。ＩｇＧクラス抗
体、ＩｇＡクラス抗体の検出では１ウエル当たり４０％
牛血清入りリン酸ｂｕｆｆｅｒ５０μｌと検体１０μｌ
を添加し、ＩｇＭクラス抗体の検出では４０％牛血清入
りのリン酸ｂｕｒｒｅｒで１０倍に希釈した検体を１ウ
エル当たり５０μｌ添加した。室温１時間放置後、０．
０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む生理食塩水でウエルを５回
洗浄した。各ウエルに、酵素標識抗体としてＨｏｒｓｅ
ｒａｄｉｓｈ−ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ標識した抗ヒトＩ
ｇＧ／γマウスモノクローナル抗体（＃Ｂ−２２）、抗
ヒトＩｇＡ／αマウスモノクローナル抗体（＃Ａ−１
３）、抗ＩｇＭ／μマウスモノクローナル抗体（＃Ｍ−
４９）１ｎｇを２５％牛血清５０μｌに溶解した液を加
え、室温にて１時間反応させた。反応終了後、上記と同
じ手順で５回洗浄し、基質として過ホウ酸ナトリウム、
発色剤としてｏ−フェニレンジアミン溶解液５０μｌを
加えて、室温で３０分間反応させた後、４Ｎ硫酸５０μ
ｌを加えて反応を停止させ、４９２ｎｍにおける吸光度
を測定した。（２）カットオフ値の設定ＨＣＶマーカーが陰性で、ＡＬＴ値が正常な献血者血清
６０検体について実施例２−（１）の合成ペプタイドＥ
ＩＡを行なった。得られた吸光度を対数変換し、その平
均値の１０倍をカットオフ値とし、これを越える値を示
すものを陽性と判定した。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡの各
イムノグロブリンクラス別のＥＩＡにおけるカットオフ
値はそれぞれ、抗ＣＰ１４抗体で０．３０、０．１１、
０．２４、抗ＣＰ１０抗体で０．３０、０．２４、０．
２３、抗ＣＰ９抗体で０．３０、０．０７、０．２７で
あった。

【００１７】実施例３：ＮＡＮＢ型慢性肝疾患患者群に
おける抗体測定（１）ＨＣＶ−ＲＮＡ測定ＨＣＶ−ＲＮＡの測定は以下の方法に従い、５’非翻訳
領域の遺伝子を増幅して行なった。血漿０．１ｍｌから
ＲＮＡを抽出し、これをテンプレートにしてｃＤＮＡ合
成後、２段階ＰＣＲ法を行なった。プライマーペアは１
次プライマーとして＃３２（５−ＣＴＧＴＧＡＧＧＡＡ
ＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴ−３’、センス）と＃２９９
（５’−ＡＣＣＣＡＡＣＡＣＴＡＣＴＣＧＧＣＴＡＧ−
３’、アンチセンス）を、２次プライマーとして＃３３
（５’−ＴＴＣＡＣＧＣＡＧＡＡＡＧＣＧＴＣＴＡＧ−
３’、センス）と＃４８（５’−ＧＴＴＧＡＴＣＣＡＡ
ＧＡＡＡＧＧＡＣＣＣ−３’、アンチセンス）を用い
た。またＰＣＲの反応条件は１次２次とも、９４℃によ
る変性１分、５５℃によるプライマー結合反応１分３０
秒、７２℃によるプライマー伸長反応２分を１サイクル
とし３５サイクル行った。ＨＣＶ−ＲＮＡ量はＲＮＡ検
出限界の希釈率の１０の指数をもって示した。

【００１８】（２）肝疾患患者群の設定ＮＡＮＢ型慢性肝疾患患者１４９人（男性９５人、女性
５４人）。内訳は慢性肝炎５０人、肝硬変５０人、原発
性肝細胞ガン４９人であった。一部の肝細胞ガン患者を
除き、肝生検を実施して病理組織学的に診断した。１４
９人中１３６人（９１％）がＥＩＡ−２（オーソ・ダイ
アグノスティックシステムズ社製）にて陽性であった。
内訳は、慢性肝炎５０／５０（１００％）、肝硬変４２
／５０（８４％）、肝細胞ガン４４／４９（９０％）で
あった。

【００１９】（３）抗体測定結果（２）の患者群の血清を用い、実施例（２）−１の方法
に従って抗ＨＣＶ抗体を測定した。表１にグループＡの
１４９人における抗体陽性者を示した。抗体陽性者を抗
体クラス別に見ると、疾患の重症度／ペプタイドの種類
に関係なくＩｇＧが最も多く、次いでＩｇＭ、ＩｇＡの
順であった。またペプタイド別に見ると、疾患の重症度
／抗体クラスの種類に関係なくＣＰ１４が最も多く、次
いでＣＰ１０、ＣＰ９の順であった。表１（肝疾患別の各ペプタイドに対する抗体陽性率）１４９人の患者のうち１１人は、どのペプタイドを用い
てもいずれのクラスの抗体も陰性であった。ＥＩＡ−２
の陰性者１３人のうち９人がＣＰ１４／ＣＰ１０／ＣＰ
９の陰性者で、不一致は６人だけであった。ペプタイド
抗体陰性者の２人はＥＩＡ−２で強陽性であった（Ａ４
９２＞２．０）。肝硬変患者２人、肝細胞ガン患者２人
ではＥＩＡ−２陰性であったのに対して、ＨＣＶペプタ
イド抗体の１種以上が陽性であったが、おおむね弱陽性
であった。ＮＡＮＢ型慢性肝疾患患者群では、ＩｇＧ型
以外ではＩｇＭ型ＣＰ１４抗体が最も陽性率が高くなる
傾向を示した。ＩｇＭ型ＣＰ１４抗体の力価は肝疾患の
重症度に伴って高かった。慢性肝炎患者での吸光度の平
均値（０．３１±０．３３）は肝硬変患者での平均値
（０．５０±０．４８）より低く（ｐ〈０．０５）、ま
た肝細胞ガン患者での平均値（０．５３±０．３８）よ
り低かった（ｐ〈０．０１）。

【表１】

【００２０】実施例４：Ｃ型急性肝炎患者群における抗
体測定（１）肝疾患患者群の設定Ｃ型急性肝炎患者７人（男性３人、女性４人）。うち４
人は輸血後に肝炎を発症した患者（輸血後急性肝炎患
者）であるが、残り３人は輸血も血液製剤も使用したこ
とは無く、薬物利用者でもなかった（散発性急性肝炎患
者）。全員ＨＢｓＡｇ、ＩｇＭ型ＨＢｃ抗体、ＩｇＭ型
ＨＡＶ抗体とも陰性であった。輸血後急性肝炎患者のう
ち、２人は３ケ月後にＡＬＴ値が正常化し（４５ＩＵ／
Ｌ未満）肝炎が寛解したが、残りの５人は３ケ月以内に
一度寛解したがその後１２ケ月までのうちに肝炎が再燃
した。７人全員がＥＩＡ−２陽性であった

【００２１】（２）抗体測定結果（１）の患者群の血清を用い、実施例（２）−１の方法
に従って抗ＨＣＶ抗体を測定した。輸血後Ｃ型肝炎の２
患者は、輸血を受けていない患者で見られた臨床所見を
呈してから３ケ月以内に血清ＡＬＴ値の正常化と共に寛
解したが、１ないし２ケ月半後に再燃した。輸血後肝炎
の１症例および散発性急性Ｃ型肝炎の３症例ではいちど
寛解した後、ＡＬＴ値が異常高値を示した。７症例で見
る限りでは、９種類の抗体の中ではＩｇＭ型ＣＰ１４抗
体が最も良く肝炎の寛解／再燃を反映していた。（図
１）６症例でＩｇＭ型ＣＰ１４抗体が急性肝炎の発症を検出
していた。このうち５症例では５ケ月以内に低下した。
その後、輸血後肝炎の患者でかつ肝炎が寛解した２症例
ではＩｇＭ型ＣＰ１４抗体が低下し続けた。反対に、残
りの５症例、すなわちＡＬＴ値の急激な上昇を示した輸
血後肝炎２例および散発性肝炎３例ではＩｇＭ型ＣＰ１
４抗体は高値を持続した。

【００２２】

【図１】

【００２３】実施例５：Ｃ型慢性肝炎／インターフェロ
ン治療患者群における抗体測定（１）肝疾患患者群の設定ＨＣＶ−ＲＮＡは実施例３−（１）の方法に従って測定
した。組換え型ＩＦＮα−２ａ（日本ロシュ社製）で治
療を受けたＣ型慢性肝炎患者３０人（男性２１人、女性
９人）を対象とした。６００万ユニット／日を１週間連
続投与の後、３００万ユニット／日を週３回、２３週間
投与を行なった。ＩＦＮの効果判定は投与開始直前と、
開始後１ケ月ごとに血液中のＨＣＶ−ＲＮＡを定量測定
して行なった。このうち９人でＨＣＶ−ＲＮＡが消失し
（著効群）、１６人でＨＣＶ−ＲＮＡ量が投与開始前の
１／１０^３以下に一旦下がったがその後１／１０^２以上
に増加した（有効群）。残る５人は、ＩＦＮの投与期間
を通じて投与開始前の１／１０^１以上であった（無効
群）。３０人全員がＥＩＡ−２陽性であった。

【００２４】（２）抗体測定結果（１）の患者群の血清を用い、実施例（２）−１の方法
に従って抗ＨＣＶ抗体を測定した。Ｃ型慢性肝炎患者３
０人について、組換えＩＦＮα−２ａを２４週投与（合
計２４９×１０^６ユニット）期間中のＩｇＭ型ＣＰ１４
抗体を測定した（図２）。インターフェロンに対する反
応は血清中のＨＣＶ−ＲＮＡ量で調べた。著効群、すな
わちインターフェロンに反応し血清ＨＣＶ−ＲＮＡが検
出されなくなった９症例で、ＩｇＭ型ＣＰ１４抗体が４
週後に急減し低値を維持した。ＩｇＧ型ＣＰ１４抗体の
吸光値は連続的に減少したがＩｇＭ型ＣＰ１４抗体より
緩徐であった。有効群、すなわち８週後に血清ＨＣＶ−
ＲＮＡ量が一旦は減少したがその後増加した１６症例で
は、ＩｇＭ型ＣＰ１４抗体は２０週後まで減少しその後
増加した。ＩｇＧ型ＣＰ１４抗体はＩｇＭ型抗体と同じ
動きを見せた。無効群、すなわち血清中のＨＣＶ−ＲＮ
Ａ量が治療前の１／１０以内の変化しか無かった５症例
では、ＩｇＭ型ＣＰ１４抗体は８週後まで減少しその後
増加した。ＩｇＧ型ＣＰ１４抗体も同様の動きを見せた
がＩｇＭ型抗体ほど顕著でなかった。血清ＡＬＴ値はＨ
ＣＶ−ＲＮＡ量に伴って変化し、著効群では４週後に正
常化し、有効群では４〜１２週後に一旦正常化してその
後再上昇し、無効群では高値を示したままであった。

【００２５】

【図２】

【００２６】

【効果】本発明の検出方法は、Ｃ型肝炎ウィルス抗体を
高感度に検出することができるのみでなく、肝疾患の重
症度により有意に抗体値が異なり、ＨＣＶ−ＲＮＡ量の
変化に呼応して抗体価が変化する。また、本発明の検出
方法は、インターフェロンの治療効果を追跡するのにも
適する。

【００２７】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：３６配列の型：アミノ酸鎖の数：一本鎖配列の種類：ペプタイド（ＣＰ１４）

【００２８】配列番号：２配列の長さ：１０８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線性配列の種類：ｃＤＮＡｔｏｇｅｎｏｍｉｃＲＮＡ
（ＣＮ１４）

【図面の簡単な説明】

図１：Ｃ型急性肝炎７症例におけるＩｇＭ型ＣＰ１４抗
体価の時間経過。黒丸は寛解した症例、白丸は再燃した
症例を表し、実線で結んだ症例は輸血後肝炎、点線で結
んだ症例は散発例を示す（実施例４）。図２：インターフェロン治療における著効群、有効群、
無効群におけるＩｇＧ型ならびにＩｇＭ型ＣＰ１４抗体
価、ＨＣＶ−ＲＮＡ量の時間経過。黒丸はＩｇＭ型抗
体、白丸はＩｇＧ型抗体、斜線四角はＨＣＶ−ＲＮＡ量
を示す（実施例５）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｇ０１Ｎ 33/576 Ｚ 8310−2Ｊ 33/577 Ｂ 8310−2Ｊ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号１記載のアミノ酸配列を有するオ
リゴペプタイドＣＰ１４。
【請求項２】請求項１記載のオリゴペプタイドＣＰ１４
と同一の抗原性を有するオリゴペプタイド。
【請求項３】化学合成により得られた請求項１または２
記載のオリゴペプタイド。
【請求項４】配列番号２記載の塩基配列を有するオリゴ
ヌクレオチドＣＮ１４。
【請求項５】請求項４記載のオリゴヌクレオチドと部分
置換を有するオリゴヌクレオチド。
【請求項６】請求項４または５記載のオリゴヌクレオチ
ドを宿主細胞に組み込んで発現させた請求項１または２
記載のオリゴペプタイド。
【請求項７】請求項１ないし３、または６記載のオリゴ
ペプタイドを抗原として用いるＣ型肝炎ウイルス抗体検
出方法。
【請求項８】抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＡ抗体、抗
ヒトＩｇＭ抗体の中から選択される１種以上のポリクロ
ーナル抗体またはモノクローナル抗体を用いる請求項７
記載のＣ型肝炎ウイルス抗体検出方法。
【請求項９】請求項１ないし３、または６記載のオリゴ
ペプタイドに対するポリクローナル抗体またはモノクロ
ーナル抗体。
【請求項１０】請求項９記載の抗体を用いたＣ型肝炎ウ
イルス検出方法。