JPH06303997A

JPH06303997A - ｃＤＮＡの分析方法

Info

Publication number: JPH06303997A
Application number: JP11251593A
Authority: JP
Inventors: Shigeru Takagi; 茂高木; Sukeyuki Kamioka; 祐之上岡
Original assignee: Nippon Telegraph and Telephone Corp
Current assignee: Nippon Telegraph and Telephone Corp
Priority date: 1993-04-16
Filing date: 1993-04-16
Publication date: 1994-11-01

Abstract

(57)【要約】【目的】塩基配列を求める前に、ｃＤＮＡをその種類
毎に分類し２次元的に分離するｃＤＮＡの分析方法を提
供する。【構成】ｍＲＮＡの集合と標識をした、複数種類の逆
転写プライマーを用い、各逆転写プライマー毎に、ｍＲ
ＮＡの集合を鋳型として二本鎖ｃＤＮＡの集合を作成す
る第１の工程と、得られた二本鎖ｃＤＮＡの集合毎に制
限酵素で消化する第２の工程と、消化されたｃＤＮＡの
集合を単位に個別のレーンで電気泳動をする第３の工程
の各工程を少なくとも含むｃＤＮＡの分析方法。該ｃＤ
ＮＡの分析方法を適用し、電気泳動による２種類以上の
分析パターンを得た後、１つの分析パターンのみに存在
するｃＤＮＡを選択回収するｃＤＮＡの分析方法。【効果】遺伝子発現の解析を容易、迅速かつ完全化す
る方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は多種類あるｃＤＮＡを分
類し、２次元的に分離する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】ＤＮＡに書かれた遺伝情報がｍＲＮＡに
転写され、リボソームがこのｍＲＮＡ上の遺伝暗号を解
読しながら、アミノ酸をつなぎ蛋白質を合成する。生体
の各細胞に数千〜数万種類のｍＲＮＡが含まれている。
これらｍＲＮＡ全体についての情報を得ることは、医
学、薬学、水産学、農学分野での基本的課題の一つであ
る。しかし、通常はｍＲＮＡの配列を直接決定すること
は行わず、ｍＲＮＡを鋳型にして合成したｃＤＮＡを基
に分析を行う。このため、従来は（１）オリゴｄＴのプ
ライマーをｍＲＮＡのポリＡ末端部にアニーリングし、
（２）このプライマーから、ｍＲＮＡを鋳型として、そ
れに相補するＤＮＡを逆転写酵素により合成し、（３）
更にもう片方のＤＮＡをＤＮＡポリメラーゼにより合成
して二本鎖ｃＤＮＡを作成し、（４）この二本鎖ｃＤＮ
Ａをベクターに接続し、（５）このベクターを直接ある
いはファージ粒子にパッケージングした後バクテリアに
導入して、バクテリアのコロニーあるいはプラークとし
て分離、増幅後、回収し、（６）回収したｃＤＮＡの塩
基配列を次々求める、という工程をとっていた。ｃＤＮ
Ａの分離は工程（５）で行われていた。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】上述のようなｃＤＮＡ
の分離工程（５）では、分離して得た２つの物が同一種
類の物か、あるいは、異なる種類の物か不明である。更
にこの分離工程（５）では、全体の物が何種類に分類で
きているか不明である。すなわち分離工程（５）では分
離はなされていなかった。このため塩基配列を求める工
程（６）では、同一種類のｍＲＮＡに由来するｃＤＮＡ
の塩基配列を何回も求めてしまい無駄な労力を費やして
しまうという問題がある。また、塩基配列を求める工程
（６）では、すべての種類のｍＲＮＡのうち、既にどれ
だけの物の塩基配列が求まり、どれだけの物が塩基配列
を決定されずに残されているか不明であるため、どこで
工程（６）を終了すればよいかの判断がつけられないと
いう問題がある。更に、ｍＲＮＡの量は種類によって、
数百〜数千倍も異なっているため、従来法では、量の多
いものから先に取り出され、量の少ないものは取りこぼ
しやすいという問題がある。また、２つのｃＤＮＡの集
合があり、含まれているｃＤＮＡの種類の差を求めた
い、例えば、遺伝病にかかった細胞と正常な細胞の遺伝
的差異、あるいは、２つの品種の遺伝的差異を分析した
い場合、従来法では困難であった。本発明の目的は、塩
基配列を求める前に、ｃＤＮＡを選択的に分離するｃＤ
ＮＡの分析方法を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明を概説すれば、本
発明の第１の発明はｃＤＮＡの分析方法に関する発明で
あって、ｍＲＮＡの集合と標識をした、複数種類の逆転
写プライマーを用い、各逆転写プライマー毎に、ｍＲＮ
Ａの集合を鋳型として二本鎖ｃＤＮＡの集合を作成する
第１の工程と、得られた二本鎖ｃＤＮＡの集合毎に制限
酵素で消化する第２の工程と、消化されたｃＤＮＡの集
合を単位に個別のレーンで電気泳動をする第３の工程の
各工程を少なくとも含むことを特徴とする。そして、本
発明の第２の発明は他のｃＤＮＡの分析方法に関する発
明であって、２種類以上のｍＲＮＡの集合の分析に第１
の発明のｃＤＮＡ分析方法を適用し、電気泳動による２
種類以上の分析パターンを得た後、１つの分析パターン
のみに存在するｃＤＮＡを選択回収することを特徴とす
る。

【０００５】本発明は、前記の問題点を解決するため、
塩基配列を求める前に、ｃＤＮＡをその種類毎に分類し
２次元的に分離するｃＤＮＡの分析方法を提供するもの
である。

【０００６】ｍ種類の逆転写プライマーを用い、ｍＲＮ
Ａの集合を鋳型として二本鎖ｃＤＮＡの集合を作成する
第１の工程により、まずｃＤＮＡがｍ種類の集合に分類
される。次に各種類のｃＤＮＡの集合毎に制限酵素で消
化する第２の工程により、ｃＤＮＡが長さに関して平均
ｎ通りに分類され、従って、合計ｍｎ通りに分類され
る。消化されたｃＤＮＡの集合を単位に個別のレーンに
のせることにより、まずｍ通りに分離され、電気泳動に
より、各レーン毎にｃＤＮＡが長さ方向にｎ通りに分離
される。すなわち、工程１と工程２により、ｍｎ通りに
分類されたものが工程３によりｍｎ通りに分離される。
同一逆転写プライマー、同一制限酵素、同一電気泳動条
件を用いれば、同一種類のｃＤＮＡは電気泳動のゲル上
の同一位置に、異なった種類のｃＤＮＡは電気泳動のゲ
ル上の異なった位置に再現性よく配置される。ｍＲＮＡ
の２つの集合Ａ、Ｂに対し、同一逆転写プライマー、同
一制限酵素、同一電気泳動条件を用いて、前記第１工
程、第２工程、及び第３工程を施し、得られた電気泳動
のゲル上の分離分類されたｃＤＮＡの２つのパターンＰ
ａ、Ｐｂを比較する。Ｐａ、Ｐｂの同一種類に対応する
位置にそれぞれｃＤＮＡのバンドｘ、ｙが存在すれば、
ｘ、ｙはＡ、Ｂに共通に含まれるｍＲＮＡ由来のｃＤＮ
Ａであることを意味し、Ｐａのある位置にはｃＤＮＡの
バンドｚが存在するが、Ｐｂの対応する位置にはｃＤＮ
Ａのバンドが存在しないときは、ｚはＡのみ含まれるｍ
ＲＮＡ由来のｃＤＮＡであることを意味する。したがっ
て、ｚのみを電気泳動のゲルから回収することにより２
つのｍＲＮＡの集合Ａ、Ｂ間の引き算の集合Ａ−Ｂ由来
のｃＤＮＡを得る。

【０００７】本発明においては、逆転写プライマーの標
識として、ラジオアイソトープ、蛍光色素、ビオチンの
少なくともいずれか１つ以上を用いることができる。

【０００８】また逆転写プライマーとしてオリゴｄＴの
３′末端にアデニン、グアニン、シトシンのいずれかで
始まる、２〜４塩基長のデオキシヌクレオチドを結合し
た逆転写プライマーを使用する。

【０００９】本発明で使用する逆転写プライマーの例に
は、図１に示す逆転写プライマー２、３、４があり、こ
れは配列表の配列番号１で表されるものである。逆転写
プライマー２、３、４はオリゴｄＴの３′末端にそれぞ
れ、グアニンＧ、アデニンＡ、シトシンＣを付加したも
のである。配列表の配列番号２は、別の逆転写プライマ
ーの例を示す。配列表の配列番号２に示す逆転写プライ
マーは、オリゴｄＴの３′末端にグアニンＧ、あるいは
アデニンＡ、あるいはシトシンＣで始まる２塩基長のオ
リゴヌクレオチドを付加したものである。この１２種類
の逆転写プライマーを用いれば、約１２００〜２４００
のｃＤＮＡが分離分類できる。配列表の配列番号３は、
別の逆転写プライマーの例を示す。配列表の配列番号３
に示す逆転写プライマーは、オリゴｄＴの３′末端にグ
アニンＧ、あるいはアデニンＡ、あるいはシトシンＣで
始まる３塩基長のオリゴヌクレオチドを付加したもので
ある。この４８種類の逆転写プライマーを用いれば、約
５０００〜１００００のｃＤＮＡが分離分類できる。配
列表の配列番号４は、別の逆転写プライマーの例を示
す。配列表の配列番号４に示す逆転写プライマーは、オ
リゴｄＴの３′末端にグアニンＧ、あるいはアデニン
Ａ、あるいはシトシンＣで始まる４塩基長のオリゴヌク
レオチドを付加したものである。この１９２種類の逆転
写プライマーを用いれば、約２００００〜４００００の
ｃＤＮＡが分離分類できる。配列表の配列番号１〜４に
示した逆転写プライマーのオリゴｄＴの長さは、それぞ
れ７塩基、１７塩基、１７塩基、１７塩基となっている
が、これに限定されるものではない。７塩基〜３０塩基
のいずれの長さであっても同様に作用する。

【００１０】

【実施例】以下、本発明を実施例により更に具体的に説
明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。

【００１１】実施例１図１に本発明の一実施例を示す。図１において、１はｍ
ＲＮＡの集合、２、３、４は逆転写プライマー、５は逆
転写及び二本鎖ｃＤＮＡ作成工程、６、７、８は二本鎖
ｃＤＮＡの集合、９は制限酵素消化工程、１０、１１、
１２は制限酵素消化された二本鎖ｃＤＮＡの集合、１３
は電気泳動のゲル、１４、１５、１６は電気泳動のレー
ン、１７は電気泳動工程、１８は分離分類されたｃＤＮ
Ａを意味する。ｍＲＮＡの集合１は３′末端にポリＡ配
列を有する一本鎖ｃＤＮＡの集合であり、多種類含む。
配列のそれぞれ異なる逆転写プライマー２、３、４を準
備する。ｍＲＮＡの集合１に逆転写プライマー２、３、
４を各々独立にアニールし、逆転写酵素を用いた相補鎖
ＤＮＡへの逆転写及びＤＮＡポリメラーゼを用いた二本
鎖ｃＤＮＡ作成工程５により、二本鎖ｃＤＮＡの集合
６、７、８を作成する。二本鎖ｃＤＮＡの集合６は逆転
写プライマー２を用いて作成したものでありポリＡの１
塩基前がシトシンＣであるｍＲＮＡのサブ集合に対応す
る二本鎖ｃＤＮＡの集合となっている。二本鎖ｃＤＮＡ
の集合７は逆転写プライマー３を用いて作成したもので
あり、ポリＡの１塩基前がチミンＴであるｍＲＮＡのサ
ブ集合に対応する二本鎖ｃＤＮＡの集合となっている。
二本鎖ｃＤＮＡの集合８は逆転写プライマー４を用いて
作成したものであり、ポリＡの１塩基前がグアニンＧで
あるｍＲＮＡのサブ集合に対応する二本鎖ｃＤＮＡの集
合となっている。互いに異なる配列を有する逆転写プラ
イマー２、３、４に基づいて作成された二本鎖ｃＤＮＡ
の集合６、７、８は当然互いに異なる。しかし、各々の
二本鎖ｃＤＮＡの集合６、７、８には複数種類のものが
含まれている。すなわち、元の多種類存在するｍＲＮＡ
の集合１を、互いに同じものを含まない、３つの二本鎖
ｃＤＮＡの集合６、７、８のグループに分類したことに
なる。二本鎖ｃＤＮＡの集合６、７、８に各々独立に、
制限酵素消化工程９を施し消化された二本鎖ｃＤＮＡの
集合１０、１１、１２を得る。制限酵素消化により１つ
の二本鎖ｃＤＮＡは複数の二本鎖ｃＤＮＡに分けられる
が、以下、そのうち逆転写プライマーを含む配列、すな
わち、最も３′末端側二本鎖ｃＤＮＡのみ着目する。二
本鎖ｃＤＮＡの種類によって、制限酵素の認識部位は異
なるため、消化された二本鎖ｃＤＮＡの集合１０、１
１、１２には長さによった分類分けが付加されたことに
なる。消化された二本鎖ｃＤＮＡの集合１０、１１、１
２を電気泳動のゲル１３の異なるレーン１４、１５、１
６にのせることにより、まず、逆転写プライマーの種類
によった分離を行う。次に、電気泳動工程１７を施す。
ＤＮＡの鎖長の短いＤＮＡ程、電気泳動で速く流れる性
質によりＤＮＡの鎖長によった分離を行う。電気泳動の
ゲル１３上で、逆転写プライマーを含むｃＤＮＡのみを
検出することにより、分離分類されたｃＤＮＡ１８を得
る。

【００１２】なお、二本鎖ｃＤＮＡのまま電気泳動する
方法と、一本鎖ｃＤＮＡに解離後電気泳動する方法の両
方法とも本発明による分析法に適用可能である。第１工
程５、第２工程９、及び第３工程１７の標準的反応条件
は、既知の条件、例えば、１９８９年、コールドスプ
リングハーバーラボラトリープレス（Cold Sprin
g Harbor Laboratory Press)発行、Ｊ．サムブルック、
Ｅ．Ｆ．フリッチ及びＴ．マニアティス（Ｊ．Sambroo
k、Ｅ．Ｆ．Fritsch 、Ｔ．Maniatis) 共著、モレキュ
ラークローニング：アラボラトリーマニュアル
セカンドエジション（Molecular Cloning ：Ａ Labor
atory Maual Second Edition) を用いる。

【００１３】上記逆転写プライマーとして、標識した逆
転写プライマーを用いることにより、電気泳動のゲル１
３上で、逆転写プライマーを含むｃＤＮＡのみを容易に
検出できるようになる。標識の方法として、ラジオアイ
ソトープ、蛍光色素、ビオチンが有効である。電気泳動
のゲル１３として、約５０cmの長さのポリアクリルアミ
ドゲルを用いると、１レーン当り１００〜２００のｃＤ
ＮＡが分離できるため、図１の３種類の逆転写プライマ
ー２、３、４を用いて、約３００〜６００のｃＤＮＡが
分離分類できる。

【００１４】実施例２図２はｃＤＮＡの集合間の引き算をする方法を示す。図
２において符号１９はｍＲＮＡの集合Ａ、２０はｍＲＮ
Ａの集合Ｂである。２１は逆転写のプライマーの集合の
一要素の例である。また２２、２３は分離分類されたｃ
ＤＮＡのパターン、２４、２５は一方の分離分類された
ｃＤＮＡパターンには存在するが、他方の分離分類され
たｃＤＮＡのパターンには存在しないｃＤＮＡ、２６は
ｃＤＮＡの回収工程、２７、２８は引き算結果であるｃ
ＤＮＡの集合である。逆転写のプライマーの他の要素に
ついても図２と同じ処理を行う。ｍＲＮＡの集合１９、
２０の各々に対して、同じ逆転写のプライマー２１を用
い、逆転写及び二本鎖ｃＤＮＡ作成工程５を施した後、
制限酵素消化工程９により消化する。消化された二本鎖
ｃＤＮＡを電気泳動のゲル１３の異なるレーン１４、１
５にのせ、電気泳動工程１７を施し、分離分類されたｃ
ＤＮＡのパターン２２、２３を得る。２２はｍＲＮＡの
集合Ａより得られたパターンであり、Ｐａと呼ぶことと
する。２３はｍＲＮＡの集合Ｂより得られたパターンで
あり、Ｐｂと呼ぶこととする。Ｐａ、Ｐｂ上の泳動距離
が同一の２つのバンドには、同一種類のｍＲＮＡ由来の
ｃＤＮＡが存在し、泳動距離が異なる２つのバンドに
は、異なった種類のｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡが存在す
る。したがって、２４はＰａに存在するが、Ｐｂには存
在しないｃＤＮＡであり、２５はＰｂには存在するがＰ
ａには存在しないｃＤＮＡである。Ｐａには存在する
が、Ｐｂには存在しないｃＤＮＡのみを独立に回収工程
２６により回収することにより、Ｐａには存在するが、
Ｐｂには存在しないｃＤＮＡの集合２７を得る。また、
逆に、Ｐｂには存在するが、Ｐａには存在しないｃＤＮ
Ａのみを独立に、回収工程２６により回収することによ
り、Ｐｂには存在するが、Ｐａには存在しないｃＤＮＡ
の集合２８を得ることができる。回収工程２６として、
電気泳動のゲル１３より、ｃＤＮＡ２４、２５を切り出
す方法が挙げられる。また、回収工程２６として、電気
泳動のゲル１３より、ｃＤＮＡ２４、２５を電気泳動に
より、流出させて回収する方法が挙げられる。

【００１５】

【発明の効果】以上詳述したように、本発明によるｃＤ
ＮＡの２次元分離分類法は、塩基配列の決定に先立っ
て、ｃＤＮＡの種類を分類し、２次元上の異なる位置に
分離して配置することができるため次のような利点が生
ずる。（イ）従来法で存在していた、同一種類のｍＲＮＡに由
来するｃＤＮＡの塩基配列を何回も求めてしまい、無駄
な労力を費やしてしまうという問題が解決される。（ロ）従来法で存在していた、すべての種類のｍＲＮＡ
のうち、既にどれだけの物の塩基配列が求まり、どれだ
けの物が塩基配列を決定されずに残されているか不明で
あるため、どこで塩基配列決定作業を終了すればよいか
の判断がつけられないという問題が解決される。（ハ）ｍＲＮＡの量は種類によって、数百〜数千倍も異
なっているため、従来法で存在していた、量の多いもの
から先に取り出され、量の少ないものは取りこぼしやす
いという問題が解決される。（ニ）２つのｃＤＮＡの集合に含まれているｃＤＮＡの
種類の差を容易に求めることができる。本発明は、遺伝子発現の解析を容易、迅速かつ完全化す
る方法を提供するものであり、医学、生物学の分野に大
きな貢献をする。

【００１６】

【配列表】

【００１７】配列番号：１配列の長さ：各８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：逆転写プライマー配列５′ＴＴＴＴＴＴＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＣ３′

【００１８】配列番号：２配列の長さ：各１９配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：逆転写プライマー配列５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣ３′

【００１９】配列番号：３配列の長さ：各２０配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：逆転写プライマー配列５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＣ３′

【００２０】配列番号：４配列の長さ：各２１配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：逆転写プライマー配列５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＣＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＣＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＣＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＣＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＣＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＣＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＣＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＣＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＧＣＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＣＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＣＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＧＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＧＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＧＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＧＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＡＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＡＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＡＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＡＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＴＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＴＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＴＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＴＣ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＣＧ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＣＡ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＣＴ３′ ５′ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＣＣ３′

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の１実施例を示す図である。

【図２】ｃＤＮＡの集合間の差をとる方法の１実施例を
示す図である。

【符号の説明】

１：ｍＲＮＡの集合、２、３、４：逆転写プライマー、
５：逆転写及び二本鎖ｃＤＮＡ作成工程、６、７、８：
二本鎖ｃＤＮＡの集合、９：制限酵素消化工程、１０、
１１、１２：制限酵素消化された二本鎖ｃＤＮＡの集
合、１３：電気泳動のゲル、１４、１５、１６は電気泳
動のレーン、１７：電気泳動工程、１８：分離分類され
たｃＤＮＡ、１９：ｍＲＮＡの集合Ａ、２０：ｍＲＮＡ
の集合Ｂ、２１：逆転写のプライマーの集合の一要素の
例、２２、２３：分離分類されたｃＤＮＡのパターン、
２４、２５：一方の分離分類されたｃＤＮＡパターンに
は存在するが、他方の分離分類されたｃＤＮＡのパター
ンには存在しないｃＤＮＡ、２６：ｃＤＮＡの回収工
程、２７、２８：引き算結果であるｃＤＮＡの集合

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ｍＲＮＡの集合と標識をした、複数種類
の逆転写プライマーを用い、各逆転写プライマー毎に、
ｍＲＮＡの集合を鋳型として二本鎖ｃＤＮＡの集合を作
成する第１の工程と、得られた二本鎖ｃＤＮＡの集合毎
に制限酵素で消化する第２の工程と、消化されたｃＤＮ
Ａの集合を単位に個別のレーンで電気泳動をする第３の
工程の各工程を少なくとも含むことを特徴とするｃＤＮ
Ａの分析方法。
【請求項２】逆転写プライマーの標識として、ラジオ
アイソトープ、蛍光色素、ビオチンの少なくともいずれ
か１つ以上を用いることを特徴とする請求項１に記載の
ｃＤＮＡの分析方法。
【請求項３】逆転写プライマーとしてオリゴｄＴの
３′末端にアデニン、グアニン、シトシンのいずれかで
始まる、２〜４塩基長のデオキシヌクレオチドを結合し
た逆転写プライマーを使用することを特徴とする請求項
１又は２に記載のｃＤＮＡの分析方法。
【請求項４】２種類以上のｍＲＮＡの集合の分析に請
求項１〜３に記載のｃＤＮＡ分析方法を適用し、電気泳
動による２種類以上の分析パターンを得た後、１つの分
析パターンのみに存在するｃＤＮＡを選択回収すること
を特徴とするｃＤＮＡの分析方法。