JPH06296494A - インドロピロロカルバゾール誘導体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】微生物を用いた培養法によって、一般式 【化１】 ［式中、Ｘ¹及びＸ²はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲ
ン原子、ヒドロキシ基等を示し、Ｒは水素原子、アミノ
基、低級アルキル基等を示す］で表される化合物を製造
する方法。 【効果】 上記一般式［ＩＩ］で表される化合物は、優
れた抗腫瘍効果を有することからその有効な製造法は医
薬品製造分野においての利用が期待される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬の分野で有用であ
り、さらに詳細にはインドロピロロカルバゾール系の抗
腫瘍性物質の製造に際し、グリコシル基の導入を円滑か
つ効率的に行う方法として有用である。

【０００２】

【従来の技術】本発明者らは抗腫瘍性物質の探索研究を
行って、微生物代謝産物中に新規な抗腫瘍性物質ＢＥ−
１３７９３Ｃ（１２，１３−ジヒドロ−１，１１−ジヒ
ドロキシ−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，
４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン）を見
出し、先の特許出願（特開平３−２０２７７号）におい
て開示した「ザ・ジャーナル・オブ・アンチビオティク
ス（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）第４４巻、７２３〜
７２８頁（１９９１年）参照］。また、本発明者らは、
上記ＢＥ−１３７９３Ｃの１３位に単糖残基を導入する
ことにより、より優れた抗腫瘍活性を示す、一般式

【０００３】

【化４】 ［式中、Ｒ¹は単糖残基のヒドロキシ基が、水素原子、
低級アルキル基、低級アルキルカルボニルオキシ基及び
低級アルコキシ基よりなる群から選ばれる同一又は異な
る１〜３個の置換基で置換されていてもよい炭素数５〜
７個の単糖残基を示す］で表されるインドロピロロカル
バゾール誘導体を見出し、開示した（国際公開 ＷＯ９
１／１８００３）。そしてさらに研究を行った結果、該
インドロピロロカルバゾール誘導体の１３位に単糖残基
を導入し、かつ、６位に種々の化学修飾を加え、一般式

【０００４】

【化５】 ［式中、Ｒ¹及びＲ²はそれぞれ独立に水素原子、低級ア
ルキル基、低級アルケニル基、低級アルキニル基、アリ
ール基、アラルキル基又は複素環基（該低級アルキル
基、低級アルケニル基、低級アルキニル基、アリール
基、アラルキル基及び複素環基は、カルボキシル基、カ
ルバモイル基、スルホ基、アミノ基、シアノ基、モノ−
低級アルキルアミノ基、ジ−低級アルキルアミノ基、ヒ
ドロキシ基及びハロゲン原子よりなる群から選ばれる１
〜５個の置換基を有していても良い）或いは式：−Ｙ−
Ｒ³の基を示し、ここで、Ｙはカルボニル基、チオカル
ボニル基又はスルホニル基を示し、Ｒ³は水素原子、低
級アルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアル
キル基、アリール基、アラルキル基、低級アルコキシ
基、ヒドラジノ基、アミノ基、アリールアミノ基、カル
バモイル基又は複素環基（該低級アルキル基、シクロア
ルキル基、シクロアルキルアルキル基、アリール基、ア
ラルキル基及び複素環基はハロゲン原子、保護されてい
てもよいヒドロキシ基、アミノ基、カルボキシル基、カ
ルバモイル基、シアノ基及び低級アルコキシカルボニル
基よりなる群から選ばれる１〜４個の置換基を有してい
ても良く、そして該アミノ基及びカルバモイル基はさら
にハロゲン原子、ヒドロキシ基、アミノ基、カルボキシ
ル基、カルバモイル基及び低級アルコキシカルボニル基
よりなる群から選ばれる置換基で置換されていても良い
低級アルキル基でモノ−又はジ−置換されていてもよ
い）を示すか、或いはＲ¹とＲ²は一緒になって低級アル
キリデン基（該低級アルキリデン基はアミノ基、モノ−
低級アルキルアミノ基、ジ−低級アルキルアミノ基、ヒ
ドロキシ基、カルボキシル基及びスルホ基よりなる群か
ら選ばれる１〜４個の置換基を有していても良い）を示
すか、或いはＲ¹とＲ²はそれらが結合している窒素原子
と一緒になって複素環基（該複素環基はアミノ基、ヒド
ロキシ基、カルボキシル基及びスルホ基よりなる群から
選ばれる基で置換されていても良い低級アルキル基をそ
の環上に有していても良い）を形成し、Ｇは五炭糖基又
は六炭糖基を示し、Ｘ¹及びＸ²はそれぞれ独立に水素原
子、ハロゲン原子、アミノ基、モノ−低級アルキルアミ
ノ基、ジ−低級アルキルアミノ基、ヒドロキシ基、低級
アルコキシ基、アラルコキシ基、カルボキシル基、低級
アルコシカルボニル基又は低級アルキル基を示す］で表
される化合物又はその製薬学的に許容しうる塩がさらに
一層強い抗腫瘍活性を示すことを見出し、欧州特許公開
公報 ＥＰ−Ａ−５４５１９５において開示した。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】先の特許出願（国際公
開 ＷＯ９１／１８００３及び欧州特許公開公報０５４
５１９５ Ａ１）において開示したインドロピロロカル
バゾール系の抗腫瘍性物質の製造において、グリコシル
基を導入するに際し、より円滑に且つ効率よく導入を行
う方法を見出すことが本発明が解決しようとする課題で
ある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、上記課題
を解決すべく、種々の方法を考案した結果、微生物を用
いてグリコシル基を導入する方法が著しく効率的である
ことを見出して本発明を完成した。

【０００７】即ち、本発明は一般式［Ｉ］

【０００８】

【化６】 ［式中、Ｘ¹及びＸ²はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲ
ン原子、アミノ基、モノ−低級アルキルアミノ基、ジ−
低級アルキルアミノ基、ヒドロキシ基、低級アルコキシ
基、アラルコキシ基、カルボキシル基、低級アルコキシ
カルボニル基、低級アルカノイルオキシ基又は低級アル
キル基を示し、Ｒは水素原子、アミノ基、ホルミルアミ
ノ基、低級アルカノイルアミノ基、モノ低級アルキルア
ミノ基、ジ低級アルキルアミノ基、ヒドロキシ基、低級
アルコキシ基、アラルコキシ基、アラルキル基又は低級
アルキル基を示す］で表される化合物を微生物の培養液
中に懸濁若しくは溶解し、微生物変換によって、一般式
［ＩＩ］

【０００９】

【化７】 ［式中、Ｘ¹、Ｘ²及びＲは前記の意味を有する］で表さ
れる化合物に変換する製法である。

【００１０】次に本明細書において用いられる用語の意
味を説明する。

【００１１】「低級」なる語は、この語が付された基又
は化合物の炭素数が６個以下であることを意味する。従
って、低級アルキル基とは、例えばメチル基、エチル
基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチ
ル基、ペンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基等の炭
素数１〜６個のアルキル基を意味する。

【００１２】低級アルカノイルオキシ基とは、例えばア
セチルオキシ基、プロピオニルオキシ基、イソプロピオ
ニルオキシ基、ブタノイルオキシ基、イソブタノイルオ
キシ基、ペンタノイルオキシ基、イソペンタノイルオキ
シ基、ヘキサノイルオキシ基等の炭素数２〜６個のアル
カノイルオキシ基を意味する。

【００１３】低級アルコキシ基とは、例えばメトキシ
基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブ
トキシ基、イソブトキシ基、ペンチルオキシ基、イソペ
ンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基等の炭素数１〜６個
のアルコキシ基を意味する。

【００１４】低級アルコキシカルボニル基とは、例えば
メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポ
キシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ブト
キシカルボニル基、ペントキシカルボニル基等の炭素数
２〜６個のアルコキシカルボニル基を意味する。

【００１５】アラルキル基とは、ベンジル基、フェネチ
ル基、フェニルプロピル基、α−ナフチルメチル基、β
−ナフチルメチル基、ナフチルエチル基、テトラヒドロ
ナフチルメチル基等の炭素数７〜１２個のアラルキル基
を意味する。

【００１６】アラルコキシ基とは、例えばベンジルオキ
シ基、フェネチルオキシ基、フェニルプロポキシ基、α
−ナフチルメトキシ基、β−ナフチルメトキシ基、ナフ
チルエトキシ基、テトラヒドロナフチルメトキシ基等の
炭素数７〜１２個のアラルコキシ基を意味する。

【００１７】モノ低級アルキルアミノ基とは、例えばメ
チルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、イ
ソプロピルアミノ基、ブチルアミノ基、イソブチルアミ
ノ基、ペンチルアミノ基、イソペンチルアミノ基、ヘキ
シルアミノ基等の炭素数１〜６個のモノアルキルアミノ
基を意味する。

【００１８】ジ低級アルキルアミノ基とは、例えばジメ
チルアミノ基、ジエチルアミノ基、エチルプロピルアミ
ノ基、メチルプロピルアミノ基、ブチルエチルアミノ
基、メチルペンチルアミノ基、エチルヘキシルアミノ基
等の炭素数１〜６個のアルキル基を窒素原子上に２個有
するジアルキルアミノ基を意味する。

【００１９】低級アルカノイルアミノ基とは、例えばア
セチルアミノ基、プロピオニルアミノ基、イソプロピオ
ニルアミノ基、ブタノイルアミノ基、イソブタノイルア
ミノ基、ペンタノイルアミノ基、イソペンタノイルアミ
ノ基、ヘキサノイルアミノ基等の炭素数２〜６個のアル
カノイルアミノ基を意味する。

【００２０】ハロゲン原子とはフッ素原子、塩素原子、
臭素原子及びヨウ素原子を意味する。

【００２１】式：

【００２２】

【化８】 で表されるグリコシル基としては、例えばアロース、ア
ルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イド
ース、ガラクトース、タロース残基を例示することがで
き、グルコース残基が特に好ましい。

【００２３】次に本発明化合物の製造法について説明す
る。

【００２４】本発明は微生物を用いて化合物［Ｉ］をグ
リコシレーションし、化合物［ＩＩ］を製造する方法で
ある。従って本発明に使用する微生物は化合物［Ｉ］を
グリコシレーションすることのできる微生物であればい
ずれでも良いが、例えば千葉県市原市養老渓谷の土壌よ
り分離された放線菌の一種、ミクロテトラスポラ・エス
ピー（Ｍｉｃｒｏｔｅｔｒａｓｐｏｒａ ｓｐ．）Ａ３
４５４９株又はサッカロスリクス・エヤロコロニジェネ
ス（Ｓａｃｃｈａｒｏｔｈｒｉｘ ａｅｒｏｃｏｌｏｎ
ｉｇｅｎｅｓ）ＡＴＣＣ３９２４３等が使用できる。

【００２５】以下にＡ３４５４９株の菌学的性状を示
す。 １．形態 Ａ３４５４９株は、真性の気菌糸を着生せず、基生菌糸
上に胞子は見られない。また、菌糸の分断も認められ
ず、胞子のう及び菌核等の特殊な器官も観察されない。 ２．各種寒天平板培地における培養性状 各種寒天平板培地において２８℃、１４日間培養した結
果を第１表に示す。

【００２６】

【表１】 ３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培
養） １８℃〜４３℃で生育し、最適生育温度は３０℃前後と
思われる。 ４．生理学的諸性質 （１）ゼラチンの液化 陽性
（弱い） （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） （２）スターチの加水分解 陰性 （スターチ・無機塩寒天培地） （３）脱脂粉乳の凝固 陰性 （スキムミルク培地） （４）脱脂粉乳のペプトン化 陽性
（弱い） （スキムミルク培地） （５）メラニン様色素の生成 陰性 （６）食塩耐性 食塩含
有量２％以下で生育 （イースト・麦芽寒天培地） ５．炭素源の利用能 プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８℃、１４日間培養したが生育は見られ
ず、判定することが出来なかった。

【００２７】Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロース、Ｌ−ア
ラビノース、Ｌ−ラムノース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−
ガラクトース、ラフィノース、Ｄ−マンニトール、イノ
シトール、サリシン、シュクロース ６．菌体成分 細胞壁からはｍｅｓｏ−ジアミノピメリン酸が検出され
たがグリシン、アラビノース及びガラクトースは検出さ
れず、細胞壁タイプはＩＩＩ型であることが示唆され
た。全菌体主要糖成分はマデュロース（アラビノース、
ガラクトース及びキシロースを含まない）が検出され、
糖パターンはＢ型、またリン脂質タイプはＰＩＶであ
り、、メナキノンの主成分はＭＫ−９（Ｈ４）であっ
た。

【００２８】以上の菌学的諸性質よりＡ３４５４９株は
放線菌ミクロテトラスポーラ属に属すると考えられ、Ａ
３４５４９株をミクロテトラスポーラ エスピー Ａ３
４５４９（Ｍｉｃｒｏｔｅｔｒａｓｐｏｒａ ｓｐ．Ａ
３４５４９）と称することとした。

【００２９】尚、本菌株は、１９９２年１１月１７日に
工業技術院微生物工業技術研究所に寄託された［微工研
菌寄第１３２９２号（ＦＥＲＭ Ｐ−１３２９２）］
が、１９９３年２月２５日に国際寄託に移管された（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−４２０６）。

【００３０】本発明のグリコシレーションする能力を有
する微生物の変異株は、例えばＸ線若しくは紫外線等の
照射処理、例えばナイトロジェン・マスタード、アザセ
リン、亜硝酸、２−アミノプリン若しくはＮ−メチル−
Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）等の
変異誘起剤による処理、ファージ接触、形質転換、形質
導入又は接合等の通常用いられる菌種変換処理方法によ
り一般式［Ｉ］で表される化合物をグリコシレーション
し、一般式［ＩＩ］で表される化合物に変換する能力を
有する微生物を変異させた微生物である。

【００３１】化合物［Ｉ］を化合物［ＩＩ］に変換する
に際して用いる微生物株は、栄養源含有培地に接種して
好気的に発育させる。栄養源としては、微生物の栄養源
として公知のものが使用できる。例えば、炭素源として
は、市販されているグルコース、アロース、アルトロー
ス、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、
タロース、グリセリン、麦芽糖、デンプン、庶糖、糖蜜
又はデキストリンなどが単独又は混合物として用いられ
る。窒素源としては、市販されている大豆粉、コーング
ルテンミール、コーンスティープリカー、肉エキス、酵
母エキス、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、魚粉、無機ア
ンモニウム塩又は硝酸ナトリウムなどが単独又は混合物
として用いられる。無機塩としては、市販されている炭
酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マ
グネシウム又は各種リン酸塩などを使用することができ
る。その他必要に応じて、鉄、マンガン、モリブデン、
銅又は亜鉛などの重金属塩を微量添加してもよい。ま
た、発泡の著しい時には、消泡剤として、例えば大豆油
又は亜麻仁油等の植物油、オクタデカノール等の高級ア
ルコール類、各種シリコン化合物等を適宜添加しても良
い。これらのもの以外でも、該微生物が利用し、生育に
役立つもの例えば３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスル
ホン酸又はホウ酸ナトリウムなどであれば、いずれも使
用することができる。

【００３２】培養方法としては、化合物［Ｉ］を添加す
る他は一般の微生物代謝産物の生産方法と同様に行えば
よく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培養の場合
は、静置培養、撹拌培養、振盪培養又は通気培養などの
いずれを実施してもよいが、特に振盪培養又は深部通気
撹拌培養が好ましい。培養温度は２０℃〜３７℃が適当
であるが、好ましくは２５℃〜３０℃である。好ましい
培地のｐＨは４〜８の範囲で、培養期間は２日間〜２０
日間、好ましくは７日間〜１５日間である。

【００３３】培養物から目的とする化合物［ＩＩ］を採
取するには、微生物の生産する代謝物の培養物から採取
するのに通常使用される分離手段が適宜利用される。化
合物［ＩＩ］は培養濾液中及び菌体中に存在するので、
培養濾液又は菌体より通常の分離手段、例えば溶媒抽出
法、イオン交換樹脂法又は吸着若しくは分配クロマトグ
ラフィー法及びゲル濾過法等を単独又は組合せて行うこ
とにより精製できる。また高速液体クロマトグラフィー
や薄層クロマトグラフィーなども抽出精製に利用可能で
ある。

【００３４】本発明に使用する一般式［Ｉ］で表される
原料化合物は、一般式［ＩＩＩ］

【００３５】

【化９】 ［式中、Ａは酸素原子又は−ＮＨ−を示し、Ｘ¹、Ｘ²は
前記の意味を有する］で表される化合物又は存在する官
能基が保護されたその誘導体に一般式

【００３６】

【化１０】 ［式中、Ｒは前記の意味を有する］で表される化合物を
反応させ、必要に応じて保護基を除去することにより製
造するか、或は化合物［ＩＩＩ］又はその官能基保護誘
導体にヒドラジンを反応させ、請求項１記載の一般式
［Ｉ］で表される化合物のうち、Ｒがアミノ基である化
合物を製造し、次いで、この化合物の構造式中、式

【００３７】

【化１１】 で表される部分をホルミル化、低級アルカノイル化、ア
ラルキル化、アルキル化するか、或は化合物［ＩＩＩ］
又はその官能基保護誘導体にヒドロキシルアミンを反応
させ、請求項１記載の一般式［Ｉ］で表される化合物の
うち、Ｒがヒドロキシ基である化合物を製造し、次いで
この化合物の構造式中、式

【００３８】

【化１２】 で表される部分をアラルキル化又は低級アルキル化し、
更に必要に応じて保護基の除去を行うことにより製造す
ることができる。

【００３９】本発明に使用する出発原料化合物［ＩＩ
Ｉ］のうちＡが−ＮＨ−である化合物は、公知の方法、
例えばダブル・フィッシャー・インドリゼーション法
［ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー
（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）第５４巻、８２４〜８２８
頁（１９８９年）参照］により製造することができる。
また、別の方法としては、ジャーナル・オブ・ザ・ケミ
カル・ソサイエティ・パーキン・トランスアクションズ
Ｉ（Ｊ．Ｃｈｅｍ．．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａ
ｎｓａｃｔｉｏｎｓ Ｉ）２４７５〜２４８０頁（１９
９０年）に記載のインドロカルバゾールの合成法も挙げ
ることができる。また更に、テトラヘドロン（Ｔｅｔｒ
ａｈｅｄｒｏｎ）第４４巻、２８８７〜２８９２頁（１
９８８年）に記載の合成法を利用することもできる。ま
た、出発原料化合物［ＩＩＩ］のうち、Ａが酸素原子で
ある化合物は、参考例３に示す方法によって製造するこ
とができる。

【００４０】化合物［ＩＶ］は、市販品を用いることが
でき、また公知の方法で製造することもできる。

【００４１】一般式［ＩＩＩ］で表される化合物又はそ
の官能基保護誘導体と一般式［ＩＶ］で表される化合物
との反応は化学の分野で広く知られたイミド又は酸無水
物とヒドラジン、ヒドラジン誘導体、ヒドロキシアミ
ン、アルコキシアミン又は低級アルキルアミンとの反応
である。この反応は、化合物［ＩＩＩ］に化合物［Ｉ
Ｖ］を無溶媒で直接反応させて良いが、反応に悪影響を
及ぼさない溶媒、例えばテトラヒドロフラン等を反応溶
媒として使用してもよい。反応に用いる化合物［ＩＶ］
の量は化合物［ＩＩＩ］又はその官能基保護誘導体に対
して通常少過剰から大過剰用いて行うことができるが、
無溶媒の場合には１０〜４０モルの過剰量を用いること
が好ましい。

【００４２】反応温度は通常約−５０〜約５０℃の範囲
であり、必要に応じてこれ以上又はこれ以下の温度を選
択することもできる。反応時間は通常約３０分〜約２日
間の範囲内であるが必要に応じてこれ以上又はこれ以下
の時間で行うこともできる。

【００４３】このようにして得られる一般式［Ｉ］で表
される化合物のうちＲがアミノ基である化合物中の、式

【００４４】

【化１３】 のホルミル化は、アミノ基のホルミル化において通常用
いられる方法で行うことができ、例えばギ酸、ホルムア
ミド、ジメチルホルムアミド等と加熱するか、又は、反
応に悪影響を及ぼさない溶媒中若しくは無溶媒でギ酸と
酸無水物との混合物を反応させる方法等により行うこと
ができる。

【００４５】通常、ギ酸、ホルムアミド、ジメチルホル
ムアミド等との反応は、約３０℃〜溶媒の沸点の範囲内
で行われるが、必要に応じて、これ以上又はこれ以下の
温度で行うこともでき、反応時間は、通常約３０分〜約
２日間の範囲内である。この際、塩酸、硫酸等の酸触媒
の存在下に行うことが好ましい。

【００４６】ギ酸と酸無水物の混合物でホルミル化する
場合は、通常約−５℃〜室温の範囲内で行われるが、必
要に応じてこれ以上又はこれ以下の範囲で行うこともで
き、また、反応時間は通常約１０分間〜約５時間である
が、必要に応じて、これより長く又は短くすることもで
きる。

【００４７】また、低級アルカノイル化は、無溶媒又は
適当な溶媒中、対応する低級アルカン酸ハロゲン化物又
は酸無水物を反応させる方法等により行うことができ
る。

【００４８】反応温度は、通常、約−５℃〜溶媒の沸点
の範囲内で行われるが、必要に応じて、これ以下の温度
で行うこともできる。

【００４９】酸ハロゲン化物及び酸無水物は、通常、Ｒ
がアミノ基である一般式［Ｉ］の化合物に対して、少過
剰量使用されるが、必要に応じて、これ以下又はこれ以
上を用いることもでき、反応時間は、通常、約３０分か
ら約２日間である。

【００５０】Ｒがアミノ基である一般式［Ｉ］の化合物
のアルキル化反応は、公知の方法、例えばアルキルハラ
イド、アルキルメシレート又はアルキルトシレート等と
の反応、又はアルデヒド化合物若しくはケトン化合物と
縮合、還元反応等により行うことができる。

【００５１】また、Ｒがアミノ基である一般式［Ｉ］の
化合物のアラルキル化反応は、アルキル化反応と同様の
方法により行うことができる。

【００５２】同様の方法によって、一般式［ＩＩＩ］で
表される化合物のうちＡが−ＮＨ−である化合物のＡを
アラルキル化又はアルキル化することができ、請求項１
記載の一般式［Ｉ］で表される化合物のうちＲがアラル
キル基又は低級アルキル基である化合物を製造すること
ができる。

【００５３】官能基の保護及び保護基の除去は、通常の
化学分野で広く知られた方法で行うことができる。

【００５４】また、上記反応の生成物は有機合成化学の
分野における公知の方法、例えば沈澱法、溶媒抽出法、
再結晶、クロマトグラフィー法等により精製することが
できる。

【００５５】

【実施例】以下に参考例及び実施例を挙げて本発明をよ
り具体的に説明するが、本発明はこれら実施例のみに限
定されるものではない。 参考例１式

【００５６】

【化１４】 で表される化合物の製造 ＢＥ−１３７９３Ｃ ０．５２ｇを抱水ヒドラジン（和
光純薬）３ｍｌに溶解し、室温に１時間撹拌した。濃塩
酸を溶液が酸性になるまで加え、生じた沈殿を濾取し、
精製水で洗浄後、減圧下に乾燥することにより、表題の
式［Ｖ］で表される化合物０．５３ｇを得た（収率９８
％）。

【００５７】Ｒｆ値：０．６３（メルク社製 キーゼル
ゲル６０Ｆ₂₅₄，展開溶媒：クロロホルム−メタノール
−テトラヒドロフラン＝３：１：１） ＨＰＬＣ；１９．１分（カラム：クロマトレックスＯＤ
Ｓ，内径４．６ｍｍ，長さ２５０ｍｍ，検出：ＵＶ３０
５ｎｍ，流速：１ｍｌ／分，移動相：５０％から１００
％メタノールまで，３０分間のリニアグラジエント） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７３［Ｍ＋Ｈ］^{+ 1} Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆），δ（ｐ
ｐｍ）：１１．６（２Ｈ，ｓ），１０．２（２Ｈ，
ｓ），８．４４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．１
４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），６．９８（２Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），４．９０（２Ｈ，ｓ） 参考例２式

【００５８】

【化１５】 で表される化合物の製造 ａ）エチルマグネシウムブロマイド（ＥｔＭｇＢｒ）の
テトラヒドロフラン溶液（０．９３モル，６．９ｍｌ）
を４５℃に加温し、これに６−メトキシインドール（９
４９ｍｇ）のトルエン溶液（７．８ｍｌ）を添加した。
４０分後に２，３−ジブロモ−Ｎ−メチルマレイミド
（３８８ｍｇ）のトルエン溶液（７．８ｍｌ）を４０分
間を要して滴下により添加し、次いで２時間還流した。
反応液を氷冷し、２０％クエン酸水溶液を添加後、酢酸
エチルで抽出し、有機溶媒層を減圧下に濃縮し、残留物
をセファデックスＬＨ−２０のカラムクロマトグラフィ
ーを行って、メタノールで展開することにより、２，３
−ビス−（６−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イ
ル）−Ｎ−メチルマレイミド４１５ｍｇを得た（収率７
２％）。

【００５９】ｂ）参考例２のａ）において得られた２，
３−ビス−（６−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イ
ル）−Ｎ−メチルマレイミド４１０ｍｇと、２，３−ジ
クロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（Ｄ
ＤＱ）２５５ｍｇと、触媒量のｐ−トルエンスルホン酸
を乾燥ベンゼン１５０ｍｌに添加し、４５分間アルゴン
気流下で還流した。反応液を冷却後、飽和チオ硫酸ナト
リウム水溶液を添加し、酢酸エチルで抽出した。有機層
を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、次いで飽和
食塩水で洗浄した後、減圧下に濃縮した。得られた残留
物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム−メ
タノール−テトラヒドロフラン＝３０：１：１）に付
し、次いでクロロホルム−メタノール（１０：１）で展
開することにより、トリメチルアルチリアフラビンＣ
２５０ｍｇを得た（収率６２％）。

【００６０】ｃ）参考例２のｂ）において得られたトリ
メチルアルチリアフラビンＣ ２５０ｍｇと、ピリジン
塩酸塩２．２ｇとの混合物を封管中１８０℃で９０分間
加熱した。反応物を冷却し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミドと１Ｎ塩酸とで希釈後、酢酸エチルで抽出した。有
機層を水、次いで飽和食塩水で洗浄後、減圧下に濃縮乾
固し、残留物をセファデックスＬＨ−２０のクロマトグ
ラフィー用カラムにかけ、メタノールで展開することに
より、表題の式［ＶＩ］で表される化合物（６−メチル
アルチリアフラビンＣ）１３１ｍｇを得た（収率５６
％）。

【００６１】ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７２［Ｍ＋
Ｈ］^{+ 1} Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆），δ（ｐ
ｐｍ）：１１．３５（２Ｈ，ｓ），９．７３（２Ｈ，
ｓ），８．７０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．０
４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），６．７８（２Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝８．６，２．０Ｈｚ），３．１４（３Ｈ，ｓ） 参考例３式

【００６２】

【化１６】 で表される化合物の製造 ２Ｎ苛性カリ水溶液１００ｍｌにＢＥ−１３７９３Ｃ
１．２ｇを添加し、室温で５時間撹拌した。反応液のｐ
Ｈを濃塩酸を用いて１．０に調整することにより生じた
沈殿を濾取し、水３０ｍｌで洗浄後、減圧下に乾燥し、
表題の式［ＶＩＩ］で表される化合物９６５ｍｇを得た
（収率８０％）。

【００６３】ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５９［Ｍ＋
Ｈ］^{+ 1} Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆），δ（ｐ
ｐｍ）：１１．９（２Ｈ，ｂｒｓ），１０．４（２Ｈ，
ｂｒｓ），８．２４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），
７．１８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．０１（２
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ） 実施例１１２，１３−ジヒドロ−１，１１−ジヒドロキシ−１３
−（β−Ｄ−グルコピラノシル）−５Ｈ−インドロ
［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−
５，７（６Ｈ）−ジオンの製造法 斜面寒天培地に培養したミクロテトラスポラ・エスピー
（Ｍｉｃｒｏｔｅｔｒａｓｐｏｒａ ｓｐ．） Ａ３４
５４９株をグルコース０．２％、デキストリン２．０
％、オートミ−ル０．５％、脱脂米ヌカ０．５％、脱脂
肉骨粉０．２％、乾燥酵母０．１％、硫酸マグネシウム
・７水和物０．０５％、臭化ナトリウム０．０５％、塩
化ナトリウム０．５％、リン酸水素二カリウム０．１％
からなる培地（滅菌前ｐＨ７．２）１１０ｍｌを含む５
００ｍｌ容の培養用三角フラスコ１本に接種し、２８℃
で８日間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養し
た。この培養液２ｍｌを上記組成の培地１１０ｍｌを含
む５００ｍｌ容の培養用三角フラスコ２０本に接種し、
２８℃で回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。
９日間培養した時点で、１フラスコあたりＢＥ−１３７
９３Ｃの２０ｍｇ／ｍｌジメチルスルホキシド溶液０．
５ｍｌを添加し、同上条件下で更に１５日間培養した。

【００６４】上記培養液をメチルエチルケトン（ＭＥ
Ｋ）３Ｌで抽出した。ＭＥＫ抽出液を減圧下で濃縮し
た。得られた濃縮液を酢酸エチルを用いて抽出した。酢
酸エチル抽出液（８５０ｍｌ）を無水硫酸ナトリウムで
脱水後、濃縮乾固した。これをシリカゲルのカラムクロ
マトグラフィー（内径２ｃｍ，長さ３０ｃｍ，ＢＷ−３
５０シリカゲル，富士デヴィソン化学社製）に付し、ク
ロロホルム−メタノール−テトラヒドロフラン−２８％
アンモニア水（２：１：３：０．２）で洗浄後、クロロ
ホルム−メタノール−テトラヒドロフラン（３：１：
１）で溶出した。目的物を含む分画を濃縮乾固した後、
少量のテトラヒドロフラン−エタノール（１：３）に溶
解し、セファデックスＬＨ−２０のカラムクロマトグラ
フィー（内径１．５ｃｍ，長さ８７ｃｍ）に付し、エタ
ノールで溶出し、目的物を含む分画を濃縮乾固すること
により表題化合物、１２，１３−ジヒドロ−１，１１−
ジヒドロキシ−１３−（β−Ｄ−グルコピラノシル）−
５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カ
ルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン５３．９ｍｇを得
た。

【００６５】Ｒｆ値：０．３９（メルク社製，キーゼル
ゲル６０Ｆ₂₅₄，展開溶媒；クロロホルム−メタノール
−テトラヒドロフラン−酢酸＝３：１：１：０．１） ＨＰＬＣ；Ｒｔ ８．７分（カラム：クロマトレックス
ＯＤＳ，内径４．６ｍｍ，長さ２５０ｍｍ，検出：ＵＶ
３０５ｎｍ，流速：１ｍｌ／分，移動相：メタノー
ル：水＝６：４） ＨＲ ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：５１９．１３１３¹ Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆），δ（ｐ
ｐｍ）：１１．０（１Ｈ，ｓ），１０．９（１Ｈ，
ｓ），１０．３（１Ｈ，ｂｒｓ），９．９３（１Ｈ，ｂ
ｒｓ），８．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），８．
５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．１７（２Ｈ，
ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．
３Ｈｚ），７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），
６．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），５．４１（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），５．３４（１Ｈ，ｂｒ
ｓ），５．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．８
９（１Ｈ，ｂｒｓ），４．０２（２Ｈ，ｍ），３．７４
（１Ｈ，ｍ），３．６３（２Ｈ，ｍ），３．４１（１
Ｈ，ｍ） 実施例２１２，１３−ジヒドロ−１，１１−ジヒドロキシ−１３
−（β−Ｄ−グルコピラノシル）−５Ｈ−インドロ
［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−
５，７（６Ｈ）−ジオンの製造法 斜面寒天培地に培養したサッカロスリクス エヤロコロ
ニジェネス（Ｓａｃｃｈａｒｏｔｈｒｉｘ ａｅｒｏｃ
ｏｌｏｎｉｇｅｎｅｓ）ＡＴＣＣ ３９２４３株をグル
コース３．０％、ソーヤフラワー１．０％、綿実粕１．
０％及び炭酸カルシウム０．３％からなる培地（滅菌前
ｐＨ７．２）１１０ｍｌを含む５００ｍｌ容の培地用三
角フラスコ７本に接種し、２８℃で４８時間、回転振盪
機（毎分１８０回転）上で培養した。この培養液４ｍｌ
ずつをグルコース１．０％、デキストリン６．０％、亜
麻仁粕１．５％、粉末酵母０．５％、硫酸第一鉄７水和
物０．１％、リン酸二水素アンモニウム０．１％、硫酸
アンモニウム０．１％及び炭酸カルシウム１．０％から
なる培地（滅菌前ｐＨ７．２）１１０ｍｌを含む５００
ｍｌ容の培地用三角フラスコ１５０本に接種し、２８℃
で回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。１２０
時間培養した時点で、１フラスコあたりＢＥ−１３７９
３Ｃの２２ｍｇ／ｍｌ ジメチルスルホキシド（ＤＭＳ
Ｏ）溶液０．５ｍｌを添加し、同上条件下で更に１２０
時間培養した。

【００６６】上記培養液を濾過して得られた菌体をメタ
ノールで２回（５．１Ｌ，５．６Ｌ）、テトラヒドロフ
ランで２回（２．２Ｌ，２．３Ｌ）抽出した。メタノー
ル及びテトラヒドロフラン抽出液を合わせて約１６００
ｍｌまで濃縮した。濃縮して得られた水溶液をヘキサン
（７８０ｍｌ）で抽出して不純物を除去し、この水層を
酢酸エチル３．３Ｌを用いて抽出した。酢酸エチル抽出
液を濃縮乾固し、得られた残渣を酢酸エチル約９０ｍｌ
で洗浄した後の残渣をメタノール約９０ｍｌで抽出し
た。メタノール抽出液を濃縮乾固して、６９４ｍｇの黄
橙色固体を得た。これをメタノール４０ｍｌに溶解し、
メタノールを溶出液としたセファデックスＬＨ−２０
（３．０×５３ｃｍ，ファルマシア社製）のカラムクロ
マトに付し、目的の化合物を含む分画を集めて濃縮乾固
した。これをシリカゲルのカラムクロマトグラフィー
（１．５×４６ｃｍ，キーゼルゲル６０，メルク社）に
付し、クロロホルム、次いでクロロホルム：メタノール
（１０：１）で洗浄後、酢酸エチル：メタノール（１
０：１）で溶出した。溶出液を濃縮乾固して目的の表題
化合物、１２，１３−ジヒドロ−１，１１−ジヒドロキ
シ−１３−（−Ｄ−グルコピラノシル）−５Ｈ−インド
ロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−
５，７（６Ｈ）−ジオン（１６９ｍｇ）を得た。

【００６７】こうして得られた表題化合物の物性データ
は、実施例１で得られた化合物の物性データと同一であ
る。 実施例３６−アミノ−１２，１３−ジヒドロ−１，１１−ジヒド
ロキシ−１３−（β−Ｄ−グルコピラノシル）−５Ｈ−
インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾ
ール−５，７（６Ｈ）−ジオンの製造法 斜面寒天培地に培養したサッカロスリクス エヤロコロ
ニジェネス（Ｓａｃｃｈａｒｏｔｈｒｉｘ ａｅｒｏｃ
ｏｌｏｎｉｇｅｎｅｓ）ＡＴＣＣ ３９２４３株をグル
コース３．０％、ソーヤフラワー１．０％、綿実粕１．
０％及び炭酸カルシウム０．３％からなる培地（滅菌前
ｐＨ７．２）（培地Ａ）１１０ｍｌを含む５００ｍｌ容
の培地用三角フラスコ１本に接種し、２８℃で７２時
間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。この
培養液２ｍｌずつをグルコース１．０％、デキストリン
６．０％、亜麻仁粕１．５％、粉末酵母０．５％、硫酸
第一鉄７水和物０．１％、リン酸二水素アンモニウム
０．１％、硫酸アンモニウム０．１％及び炭酸カルシウ
ム１．０％からなる培地（滅菌前ｐＨ７．２）（培地
Ｂ）１１０ｍｌを含む５００ｍｌ容の培地用三角フラス
コ８本に接種し、２８℃で回転振盪機（毎分１８０回
転）上で培養した。１２０時間培養した時点で、１フラ
スコあたり６−アミノ−１２，１３−ジヒドロ−１，１
１−ジヒドロキシ−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロ
ロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオ
ンの５０ｍｇを含むテトラヒドロフラン−メタノール
（３：７）溶液１ｍｌを添加し、同上条件下で更に９６
時間培養した。

【００６８】上記培養液を濾過して得られた菌体をテト
ラヒドロフラン８００ｍｌで抽出した。得られた抽出液
７５０ｍｌを減圧乾固した後、水５００ｍｌより、酢酸
エチル−ｎ−ブタノール（１０：１）溶液で２回抽出し
た。酢酸エチル、ブタノール層を減圧濃縮後、シリカゲ
ルクロマトグラフィー（２．５×４５ｃｍ，キーゼルゲ
ル６０，メルク社）に付し、クロロホルム−メタノール
−テトラヒドロフラン−２５％アンモニア水（２：１：
３：０．２）、次いでメタノール−テトラヒドロフラン
−２５％アンモニア水（１：３：０．２）で溶出した。
目的の溶出液を減圧乾固後、残渣を少量のテトラヒドロ
フランを含むエタノールに溶解し、濃縮することによ
り、沈殿として表題化合物１４３ｍｇを得た。

【００６９】Ｒｆ値：０．２８（メルク社製，キーゼル
ゲル６０Ｆ₂₅₄，展開溶媒：クロロホルム−メタノール
−テトラヒドロフラン＝３：１：１） ＨＰＬＣ；Ｒｔ １７．５分（カラム：クロマトレック
スＯＤＳ，内径４．６ｍｍ，長さ２５０ｍｍ，検出：Ｕ
Ｖ ３０５ｎｍ，流速：１ｍｌ／分，移動相：５０％か
ら１００％メタノールまで，３０分間のリニアグラジエ
ント） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：５３５［Ｍ＋Ｈ］^{+ 1} Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆），δ（ｐ
ｐｍ）：１０．９（１Ｈ，ｓ），１０．４（１Ｈ，
ｓ），１０．０（１Ｈ，ｓ），８．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝７．８Ｈｚ），８．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈ
ｚ），７．１９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．０
５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），７．０２（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
８Ｈｚ），５．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），
５．３４（１Ｈ，ｂｒｓ），５．２２（１Ｈ，ｂｒ
ｓ），４．９６（２Ｈ，ｂｒｓ），４．９１（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），４．０１（２Ｈ，ｍ），３．７
４（１Ｈ，ｍ），３．６３（２Ｈ，ｍ），３．３９（１
Ｈ，ｍ） 実施例４６−メチル−１２，１３−ジヒドロ−２，１０−ジヒド
ロキシ−１３−（β−Ｄ−グルコピラノシル）−５Ｈ−
インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾ
ール−５，７（６Ｈ）−ジオンの製造法 斜面寒天培地に培養したサッカロスリクス・エヤロコロ
ニジェネス（Ｓａｃｃｈａｒｏｔｈｒｉｘ ａｅｒｏｃ
ｏｌｏｎｉｇｅｎｅｓ）ＡＴＣＣ３９２４３株を実施例
３に記載されている培地Ａ １１０ｍｌを含む５００ｍ
ｌ容の培地用三角フラスコ１本に接種後、実施例３記載
の培養条件を用いて７２時間培養した後、この培養液２
ｍｌずつを実施例３記載の培地Ｂを含む５００ｍｌ容の
三角フラスコ２本に接種し、同様の培養条件を用いて１
２０時間培養した時点で、１フラスコあたり、６−メチ
ル−１２，１３−ジヒドロ−２，１０−ジヒドロキシ−
５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カ
ルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオンの１０ｍｇを含む
メタノール１ｍｌを添加し、更に１２０時間培養した。

【００７０】上記培養液を濾過して得られた菌体をテト
ラヒドロフラン１００ｍｌで２回抽出した。得られた抽
出液を減圧乾固後、水５０ｍｌより酢酸エチル５０ｍｌ
で４回抽出した。酢酸エチル層を減圧下で濃縮乾固しエ
タノールに溶解し、セファデックスＬＨ−２０（１．５
×９０ｃｍ，ファルマシア社製）のカラムクロマトグラ
フィーに付し、エタノールで溶出した。目的の化合物を
含むフラクションを減圧濃縮乾固して、表題化合物１
１．１ｍｇを得た。

【００７１】Ｒｆ値：０．１９（メルク社製，キーゼル
ゲル６０Ｆ₂₅₄，展開溶媒：クロロホルム−メタノール
−テトラヒドロフラン＝３：１：１） ＨＰＬＣ；Ｒｔ ２０．０分（カラム：クロマトレック
スＯＤＳ，内径４．６ｍｍ，長さ２５０ｍｍ，検出：Ｕ
Ｖ ３０５ｎｍ，流速：１ｍｌ／分，移動相：５０％か
ら１００％メタノールまで，３０分間のリニアグラジエ
ント） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：５３４［Ｍ＋Ｈ］^{+ 1} Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆），δ（ｐ
ｐｍ）：１１．２（１Ｈ，ｓ），９．７６（２Ｈ，ｂｒ
ｓ），８．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），８．８
０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．１８（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），６．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．
０Ｈｚ），６．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．０
Ｈｚ），６．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．０Ｈ
ｚ），５．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），５．８
７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），５．３５（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），５．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．
９Ｈｚ），４．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），
４．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．７，３．４Ｈｚ），
３．９１（２Ｈ，ｍ），３．７７（１Ｈ，ｍ），３．５
１（２Ｈ，ｍ），３．１５（３Ｈ，ｓ）

【００７２】

【発明の効果】本発明は抗腫瘍性物質として用いられる
インドロピロロカルバゾール誘導体の製造に極めて効率
的なことから医薬品製造の分野において有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 須田 寛之 茨城県つくば市大久保３番 萬有製薬株式 会社つくば研究所内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式 【化１】 ［式中、Ｘ¹及びＸ²はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲ
   ン原子、アミノ基、モノ−低級アルキルアミノ基、ジ−
   低級アルキルアミノ基、ヒドロキシ基、低級アルコキシ
   基、アラルコキシ基、カルボキシル基、低級アルコキシ
   カルボニル基、低級アルカノイルオキシ基又は低級アル
   キル基を示し、Ｒは水素原子、アミノ基、ホルミルアミ
   ノ基、低級アルカノイルアミノ基、モノ低級アルキルア
   ミノ基、ジ低級アルキルアミノ基、ヒドロキシ基、低級
   アルコキシ基、アラルコキシ基、アラルキル基又は低級
   アルキル基を示す］で表される化合物をグリコシレーシ
   ョンする能力を有する微生物と培養し、その培養液から
   一般式［ＩＩ］ 【化２】 ［式中、Ｘ¹、Ｘ²及びＲは前記と同じ意味を有する］で
   表される化合物を採取することを特徴とする一般式［Ｉ
   Ｉ］で表される化合物の製造法。
2. 【請求項２】グリコシレーションする能力を有する微生
   物がミクロテトラスポラ（Ｍｉｃｒｏｔｅｔｒａｓｐｏ
   ｒａ）属又はサッカロスリクス（Ｓａｃｃｈａｒｏｔｈ
   ｒｉｘ）属に属する微生物或はその変異株であることを
   特徴とする請求項１記載の製造法。
3. 【請求項３】グリコシレーションする能力を有する微生
   物がミクロテトラスポラ・エスピー（Ｍｉｃｒｏｔｅｔ
   ｒａｓｐｏｒａ ｓｐ．）Ａ３４５４９株又はサッカロ
   スリクス・エヤロコロニジェネス（Ｓａｃｃｈａｒｏｔ
   ｈｒｉｘ ａｅｒｏｃｏｌｏｎｉｇｅｎｅｓ）ＡＴＣＣ
   ３９２４３株或はその突然変異株であることを特徴とす
   る請求項１記載の製造法。
4. 【請求項４】Ｘ¹及びＸ²がヒドロキシ基であり、Ｒが水
   素原子、アミノ基又は低級アルキル基であり、式 【化３】 で表される基がグルコース残基であることを特徴とする
   請求項１記載の製造法。
5. 【請求項５】請求項１記載の化合物［Ｉ］を化合物［Ｉ
   Ｉ］に変換する能力を有するミクロテトラスポラ（Ｍｉ
   ｃｒｏｔｅｔｒａｓｐｏｒａ）属に属する微生物又はそ
   の変異株。
6. 【請求項６】ミクロテトラスポラ・エスピー（Ｍｉｃｒ
   ｏｔｅｔｒａｓｐｏｒａ ｓｐ．）Ａ３４５４９株又は
   その変異株であることを特徴とする請求項５記載の微生
   物。