JPH06292827A

JPH06292827A - ウイルスの通過を阻止する物質からなる濾過助剤およびそれを使用した濾過方法

Info

Publication number: JPH06292827A
Application number: JP5097594A
Authority: JP
Inventors: Akihiro Tominaga; 明宏冨永
Original assignee: Seikagaku Corp
Current assignee: Seikagaku Corp
Priority date: 1993-02-11
Filing date: 1994-02-10
Publication date: 1994-10-21
Anticipated expiration: 2018-02-04
Also published as: JP3372638B2

Abstract

(57)【要約】（修正有）【構成】生体に安全な、かつ、それ自体ではメンブラ
ンフィルターを通過するがウイルスと接触するとウイル
スのメンブランフィルターの通過を阻止する物質からな
る濾過助剤、ならびに、その濾過助剤の存在下、被処理
液をメンブランフィルターで処理する濾過方法。上記物
質として、ヒアルロン酸、アルギン酸等の水溶性粘質高
分子化合物が使用される。好ましくは、ヒアルロン酸を
被処理液中に終濃度がヒアルロン酸ナトリウム５ｍｇ／
ｍｌ以上となるように存在させて該メンブランフィルタ
ーで処理する。【効果】公知のフィルターによる微生物の分離方法が
もつ利点をすべてそなえたままで、非常に簡便かつ迅速
に、ウイルスを除去あるいは濃縮することができる。例
えばヒアルロン酸は生体への毒性もなく、また蛋白とも
吸着しないことから、濾液中の目的成分の回収は容易に
できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ウイルスの通過を阻止
する物質からなる濾過助剤およびそれを使用した濾過方
法に関する。詳細には、本発明は、生体に安全な、か
つ、それ自体ではメンブランフィルターを通過するがウ
イルスと接触するとウイルスのメンブランフィルターの
通過を阻止する物質からなる濾過助剤およびそれを使用
した濾過方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】ウイルスの除去や不活性化は生物由来の
製剤や遺伝子組換え技術を用いて製造される医薬品の製
造プロセスにおいて重大な問題になっており、そのため
の研究や開発が色々行われている。従来法としてのウイ
ルス不活化法は、１）有機溶媒（エーテル、クロロホル
ム）によるエンベロープの脂質膜破壊，２）フェノー
ル、ホルマリン、界面活性剤等によるウイルス蛋白の変
性，３）物理的条件（熱，乾燥，浸透圧変化など）によ
るエンベロープの破壊，４）放射線や紫外線によるウイ
ルス核酸の傷害などがある。これらのウイルス不活化法
は、多くの場合、ウイルスのみならず他の成分の蛋白変
性や核酸傷害を伴い、有効成分の生理活性の保持が十分
ではない。

【０００３】微生物を捕捉するために、メンブランフィ
ルターを用いて微生物の大きさにより分離する方法があ
る。細菌や酵母などの微生物を捕捉するには、例えば孔
径０．２２μｍであるとか０．４５μｍのものが通常使
用されている。こうしたフィルターによる微生物の分離
は、使用法が簡単である、短時間で操作できる、化学変
化がない、処理液へのケミカルの添加がなく組成が変わ
らない、熱変性がない等の利点がある。しかしながら、
よりサイズの小さなウイルスやマイコプラズマなどは膜
を透過してしまい捕捉できないことが多い。

【０００４】そのため最近では、孔径を小さくしたり孔
構造を工夫することにより、サイズの小さなウイルスを
分離可能な多孔質膜が提案されている（例えば特開昭６
０−１４２８６０号公報、特開昭６３−２３６５０１号
公報、特開平１−２２３０５号公報）。これらの技術に
おいては、サイズの小さいウイルスをその大きさにより
捕捉しようとするものであり、基本的には膜の孔径を小
さくしている。

【０００５】上記方法は、極めて微小なウイルスを分離
するにはフィルターの孔径を２０ｎｍ（０．０２μｍ）
程度の極めて小さな孔にする必要がある。こうしたウイ
ルス粒子の除去法は、ポアサイズが通常のメンブランフ
ィルターの１／１０〜１／２０とさらに小さくなるた
め、濾過圧を高くする必要性や、濾過時間の増大などが
考えられる。そのために濾過速度が遅くなり、目詰まり
を生じ易い。また、フィルターに大孔径のピンホール等
が存在するとウイルスが通り抜けて除去できず、ウイル
スの除去方法として充分満足のゆくものではなかった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】そこで本発明は、公知
のフィルターによる微生物の分離方法がもつ利点をすべ
てそなえたままで、非常に簡便かつ迅速に、ウイルスを
除去あるいは濃縮することができる方法を提供すること
を目的とする。そして、医薬品製剤の製造に適用する場
合、製剤中からの感染性粒子の消失という目的を達成す
るためには、ウイルスのみが除去あるいは不活化され、
製剤中の有効成分は出来る限り傷害もしくは損失を受け
ないような条件の確立が望まれる。従って、本発明は、
簡便で効率的にウイルスを除去或いは捕捉でき、かつ有
効成分の回収が容易な方法を提供することを目的とす
る。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、ウイルスが混
入している製剤やウイルスが存在している試料中より迅
速かつ有効にウイルスを除去し或いは濃縮し、そして有
効成分を損失することなく、また十分に回収出来ること
を目的とする。この目的は、ウイルスが夾雑する試料
を、生体に安全な、かつ、それ自体ではメンブランフィ
ルターを通過するがウイルスと接触するとウイルスのメ
ンブランフィルターの通過を阻止する物質、即ち安全
な、かつ、水溶性粘質高分子化合物である物質、例えば
ヒアルロン酸またはアルギン酸の存在下において、メン
ブランフィルターによって濾過することにより達成され
る。

【０００８】したがって本発明は、生体に安全な、か
つ、それ自体ではメンブランフィルターを通過するがウ
イルスと接触するとウイルスのメンブランフィルターの
通過を阻止する物質からなる濾過助剤、ならびに、その
濾過助剤の存在下、被処理液をメンブランフィルターで
処理する濾過方法を提供する。

【０００９】（１）出発原料（被処理液）本発明で適用される出発原料は、当該ウイルスが混入し
ている水または蛋白質やその他の有用成分を含有する溶
液である。例えば、人血漿蛋白質，尿由来蛋白等を含有
する生体由来の溶液が例示される。また、遺伝子工学的
にウイルスをベクターとして用いて発現させた蛋白質を
含有する溶液も、蛋白質回収液中にウイルスを含有する
という点で例示される。更に、ウイルスの研究試料等も
含まれる。本発明の処理対象は、これら記述したものに
限定されるものではなく、広く当該ウイルスの混入が考
えられる試料或いはウイルスを含有する試料である。そ
して、本発明の処理は、原料を溶液状態とすることが必
須である。

【００１０】（２）対象とされるウイルス本発明において除去あるいは濃縮の対象とされるウイル
スは、ヘルペスウイルス，バキュロウイルス，ワクチニ
アウイルス，センダイウイルス，ニューカッスル病ウイ
ルス（ＮＤＶ）等が例示される。

【００１１】（３）メンブランフィルター本発明で使用されるメンブランフィルターのポアサイズ
（孔径）と膜の材質は対象とされるウイルス並びに生体
に安全な、かつ、それ自体ではメンブランフィルターを
通過するがウイルスと接触するとウイルスのメンブラン
フィルターの通過を阻止する物質の種類により最適の組
合せが選択される。すなわち、メンブランフィルターの
孔径と膜の材質は使用する濾過助剤がウイルスと接触す
るとウイルスの通過を阻止するかどうか実験的追試によ
り決定される。例えばウイルスの除去を目的とする場
合、有効なウイルス除去効率を得るために、ポアサイズ
は０．４５μｍ以下のものが好ましい。

【００１２】たとえば、被処理液に蛋白が共存せず、対
象ウイルスが単純ヘルペス１型ウイルス（ヘルペスシン
プレックスｔｙｐｅ−１）等のヘルペスウイルスであっ
て、膜のポアサイズが０．４５〜０．２２μｍの場合、
膜の材質はセルロース混合エステルがよい結果を与え
る。被処理液に蛋白が共存する場合は、ポアサイズ０．
２２μｍ以下のセルロース混合エステルあるいはポリ弗
化ビニリデンにより良好なウイルス除去ができる。

【００１３】（４）濾過助剤生体に安全な、かつ、それ自体ではメンブランフィルタ
ーを通過するが、ウイルスと接触するとウイルスのメン
ブランフィルターの通過を阻止する物質は、そのような
特性を有する物質であれば何でもよい。そのような物質
としては生体に安全であることが知られた水溶性粘質高
分子化合物が挙げら、本発明は、生体に安全な、かつ、
それ自体ではメンブランフィルターを通過するがウイル
スと接触するとウイルスのメンブランフィルターの通過
を阻止する水溶性粘質高分子化合物からなる濾過助剤、
ならびに、被処理液を、上記水溶性粘質高分子化合物か
らなる濾過助剤の存在下、メンブランフィルターで処理
する濾過方法を提供する。

【００１４】上記水溶性粘質高分子化合物としては、水
溶性粘質多糖類が例示され、本発明は、生体に安全な、
かつ、それ自体ではメンブランフィルターを通過するが
ウイルスと接触するとウイルスのメンブランフィルター
の通過を阻止する水溶性粘質多糖類からなる濾過助剤、
ならびに、被処理液を、上記水溶性粘質多糖類からなる
濾過助剤の存在下、メンブランフィルターで処理する濾
過方法を提供する。水溶性粘質多糖類としては、後に詳
述するクリコサミノグリカン、グリクロナン（ポリウロ
ン酸）のほか、メチルセルロース、デキストラン、ペク
チン、デンプン、アラビアガム、グアーガム等が例示さ
れる。

【００１５】上記水溶性粘質多糖類としては、水溶性粘
質酸性多糖類が例示され、本発明は、生体に安全な、か
つ、それ自体ではメンブランフィルターを通過するがウ
イルスと接触するとウイルスのメンブランフィルターの
通過を阻止する水溶性粘質酸性多糖類からなる濾過助
剤、ならびに、被処理液を、上記水溶性粘質酸性多糖類
からなる濾過助剤の存在下、メンブランフィルターで処
理する濾過方法を提供する。

【００１６】上記水溶性粘質酸性多糖類としては、特に
グリコサミノグリカン（ムコ多糖）が生体に対する安全
性およびウイルスを捕捉する効果が高い点で好ましい。
したがって本発明は、生体に安全な、かつ、それ自体で
はメンブランフィルターを通過するがウイルスと接触す
るとウイルスのメンブランフィルターの通過を阻止する
グリコサミノグリカンからなる濾過助剤、ならびに、被
処理液を、上記グリコサミノグリカンからなる濾過助剤
の存在下、メンブランフィルターで処理する濾過方法を
提供する。

【００１７】本発明で使用するグリコサミノグリカンと
しては、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン、ヒアル
ロン酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ケ
ラタン硫酸、ケラトポリ硫酸またはその誘導体（アシル
化体、硫酸化体、脱アシル化体、脱硫酸化体等）等が例
示される。これらは、好ましくはその生理的に許容され
る塩であって水溶性のものが使用される。これらは軟
骨、鶏冠、臍帯などのような生体成分から抽出して得ら
れるもの、発酵法で生産されるもの、酵素的もしくは化
学的に合成もしくは修飾されたものなど公知の方法で得
られるものなどその由来、製法には限定されない。その
分子量も特に限定されない。

【００１８】また、水溶牲粘質酸性多糖類が例えばアル
ギン酸等のグリクロナン（ポリウロン酸）である場合、
本発明は、生体に安全な、かつ、それ自体ではメンブラ
ンフィルターを通過するがウイルスと接触するとウイル
スのメンブランフィルターの通過を阻止するアルギン酸
等のグリクロナンからなる濾過助剤、ならびに、被処理
液を、上記アルギン酸等のグリクロナンからなる濾過助
剤の存在下、メンブランフィルターで処理する濾過方法
を提供する。

【００１９】本発明では、最も好ましくは水溶性粘質高
分子化合物としてヒアルロン酸またはその塩が使用さ
れ、ヒアルロン酸のアルカリ金属（ナトリウム、カリウ
ム等）塩、アミン（トリ−ｎ−ブチルアミン、トリエチ
ルアミン、ピリジン等）塩等が使用される。ヒアルロン
酸の分子量は特に限定されないが、通常、平均分子量が
約５０万〜３５０万、より好ましくは８０〜１２０万の
もので、精製されたものを使用する。精製度が低いもの
だと、不純物の濾液中への混入が危惧されるため、精製
された生体に安全なものを使用する。

【００２０】したがって本発明は、生体に安全な、か
つ、それ自体ではメンブランフィルターを通過するがウ
イルスと接触するとウイルスのメンブランフィルターの
通過を阻止するヒアルロン酸からなる濾過助剤、ならび
に、被処理液を、上記ヒアルロン酸からなる濾過助剤の
存在下、メンブランフィルターで処理する濾過方法を提
供する。

【００２１】以下、ヒアルロン酸ナトリウム（以下、単
に「ヒアルロン酸」ということもある。）またはアルギ
ン酸ナトリウム（以下、単に「アルギン酸」ということ
もある。）を使用した場合について説明をする。（５）処理条件ウイルス除去を目的とする場合、対象となる試料へ、あ
らかじめヒアルロン酸を加え、ヒアルロン酸の終濃度が
５ｍｇ／ｍｌ以上、粘度として、ズリ速度（Ｓ^−１）１
〜４０のとき、みかけ粘度１５００〜１５０ｍＰａ・ｓ
を示す条件となるようにする。このヒアルロン酸含有試
料を、メンブランフィルターにて濾過する。加圧の程度
はヒアルロン酸の分子量、濃度、粘度によって異なる。
たとえば、０．４５μｍでは、ヒアルロン酸：１０ｍｇ
／ｍｌまで低圧で濾過可能であり、０．２２μｍでは、
ヒアルロン酸：１０ｍｇ／ｍｌでは高圧が必要となる。

【００２２】特に、本発明は、生体に安全な、かつ、そ
れ自体では０．４５μｍ以下のセルロース混合エステル
膜またはポリ弗化ビニリデン膜からなるメンブランフィ
ルターを通過するがウイルスと接触するとウイルスの該
メンブランフィルターの通過を阻止するヒアルロン酸ま
たはアルギン酸からなる濾過助剤；ならびに、被処理液
を、生体に安全な、かつ、それ自体では０．４５μｍ以
下のセルロース混合エステル膜またはポリ弗化ビニリデ
ン膜からなるメンブランフィルターを通過するがウイル
スと接触するとウイルスの該メンブランフィルターの通
過を阻止するヒアルロン酸またはアルギン酸からなる濾
過助剤の存在下、該メンブランフィルターで処理する濾
過方法を提供する。

【００２３】被処理液が蛋白が存在するものである場
合、メンブランフィルターとして０．２２μｍ以下のセ
ルロース混合エステル膜あるいはポリ弗化ビニリデン膜
を用いることが好ましい。その場合、ヒアルロン酸を終
濃度としてヒアルロン酸ナトリウム５ｍｇ／ｍｌ以上添
加して行う。または、アルギン酸を終濃度としてアルギ
ン酸ナトリウム１０ｍｇ／ｍｌ以上添加して行う。メン
ブランフィルターで処理後、メンブランフィルターを通
過した濾過助剤を分離もしくは分解して除去することが
できる。

【００２４】したがって本発明は、蛋白が存在する被処
理液用濾過助剤であって、生体に安全な、かつ、それ自
体では０．２２μｍ以下のセルロース混合エステル膜ま
たはポリ弗化ビニリデン膜からなるメンブランフィルタ
ーを通過するが、ウイルスと接触するとウイルスの通過
を阻止するアルギン酸からなる濾過助剤；ならびに、蛋
白が存在する被処理液を、生体に安全な、かつ、それ自
体ではウイルスと接触すると０．２２μｍ以下のセルロ
ース混合エステル膜またはポリ弗化ビニリデン膜からな
るメンブランフィルターを通過するがウイルスと接触す
るとウイルスの該メンブランフィルターの通過を阻止す
るアルギン酸を濾過助剤として、アルギン酸を終濃度と
してアルギン酸ナトリウムを１０ｍｇ／ｍｌ以上添加し
て該メンブランフィルターで処理する濾過方法を提供す
る。

【００２５】また本発明は、蛋白が存在する被処理液用
濾過助剤であって、生体に安全な、かつ、それ自体では
０．２２μｍ以下のセルロース混合エステル膜またはポ
リ弗化ビニリデン膜からなるメンブランフィルターを通
過するがウイルスと接触するとウイルスの該メンブラン
フィルターの通過を阻止するヒアルロン酸からなる蛋白
が存在する被処理液用濾過助剤；ならびに、蛋白が存在
する被処理液を、生体に安全な、かつ、それ自体では
０．２２μｍ以下のセルロース混合エステル膜またはポ
リ弗化ビニリデン膜からなるメンブランフィルターを通
過するがウイルスと接触するとウイルスの該メンブラン
フィルターの通過を阻止するヒアルロン酸を濾過助剤と
して、ヒアルロン酸を終濃度としてヒアルロン酸ナトリ
ウム５ｍｇ／ｍｌ以上添加して該メンブランフィルター
で処理する濾過方法を提供する。

【００２６】濾過条件は、含有ウイルス量や回収目的の
蛋白質の性質に応じて、適宜設定することが出来る。す
なわち、ヒアルロン酸の終濃度と、膜のポアサイズにつ
いて、ヒアルロン酸の濃度あるいは分子量を上げるとウ
イルスの除去効率は上がるが濾過時間が延長し、ポアサ
イズを小さくするとウイルスの除去効率は上がるが濾過
時間が延長する、という関係を参考にしながら、最適条
件を決める。ウイルスの種類によっても異なることはい
うまでもない。

【００２７】（６）精製メンブランフィルターを通過した水溶性粘質高分子化合
物は、目的物質との分子量、電荷の差によって分画除去
したり、濾過助剤のみを特異的に分解する手段（たとえ
ば、固定化酵素を用いた酵素分解）によって分解除去す
ることも可能である。特に、ヒアルロン酸は、非常に分
子量サイズの大きな高分子多糖体であり、特殊な蛋白
（ヒアルロネクチンなどごく少数の蛋白）を除き、通常
の蛋白質はゲル濾過法等により容易に分画できる。ヒア
ルロン酸を酵素分解するためにはヒアルロニダーゼ、コ
ンドロイチナーゼＡＢＣ、コンドロイチナーゼＡＣ等を
使用することができる。

【００２８】したがって本発明は、被処理液を、生体に
安全な、かつ、それ自体ではメンブランフィルターを通
過するがウイルスと接触するとウイルスのメンブランフ
ィルターの通過を阻止するヒアルロン酸からなる濾過助
剤の存在下、メンブランフィルターで処理し、その後メ
ンブランフィルターを通過した濾過助剤を濾液から分離
もしくは分解して除去する濾過方法を提供する。

【００２９】

【実施例】以下、本発明を実施例によって説明する。本
発明は、実施例によって限定されるものではない。

【００３０】実施例１単純ヘルペス１型ウイルス（ＨＳＶ−１）を含有する培
地〔２％牛血清含有イーグル（Ｅａｇｌｅ）ＭＥＭ培
地〕とヒアルロン酸ナトリウム水溶液（５ｍｇ／ｍｌ，
リン酸緩衝食塩水，ｐＨ７．４）を１：９の割合で混合
したもの（なお、この被処理液中には、ウイルス溶液中
の牛血清が、終濃度として０．２％存在）を、メンブラ
ンフィルター（０．４５μｍ：マイレックスＨＡ，ミリ
ポア社）にて濾過した。この濾液中のウイルス量を、宿
主細胞としてＶｅｒｏ細胞を用い、ブラーク形成法によ
りその感染価を測定した。この結果を表１（ウイルス含
有試料の濾過前と濾過後におけるウイルス量の変動）に
示した。表に示したように、ウイルス含有培地中へヒア
ルロン酸が添加されない場合と添加された場合におい
て、その両者の間で、ウイルスの膜透過量に著しい差が
認められた。なお、ヒアルロン酸自身によるウイルスの
不活化はまったく認められなかった。

【００３１】

【表１】

【００３２】実施例２ウイルス膜透過量に対するヒアルロン酸濃度とメンブラ
ンフィルターのポアサイズ並びに材質について表２（ウ
イルス除去効率に及ぼす膜のポアサイズと材質、並びに
ヒアルロン酸添加濃度の影響）に示したごとく検討し
た。実験操作は、実施例１と同様に行った。その結果、
ポアサイズを０．２２μｍ，０．４５μｍ，０．８８μ
ｍで比較すると、０．２２μｍがウイルスの膜透過量が
最も少なかった。ヒアルロン酸添加濃度については、そ
の終濃度が高い程有効であると考えられた。膜の材質に
ついて同一ポアサイズ（０．４５μｍ）で、セルロース
混合エステルとポリ弗化ビニリデンで比較した結果、セ
ルロース混合エステルの方がウイルスの膜透過量は顕著
に少なかった。

【００３３】

【表２】

【００３４】以上の結果から、蛋白が共存しない被処理
液について、ウイルス除去を行う好適な条件として以下
に記載する条件が考えられる。１）ヒアルロン酸添加濃度：終濃度５ｍｇ／ｍｌ以上２）ポアサイズ：０．２２〜０．４５μｍ３）膜の材質：セルロース混合エステル４）ｐＨ：中性付近，温度；室温で可，５）圧：特別な高圧を必要としない。（０．２２μｍでヒアルロン酸１０ｍｇ／ｍｌ以上の場
合のみ、高圧が必要となる）

【００３５】実施例３ヒアルロン酸濃度のウイルスの膜透過量へ及ぼす影響
を、牛血清（以下、「血清」と略す。）存在下（終濃度
１．０と５．０％）において、セルロース混合エステル
膜（０．２２μｍ：マイレックスＧＳ，ミリポア社）と
ポリ弗化ビニリデン膜（０．２２μｍ：マイレックスＧ
Ｖ，ミリポア社）を用いて、図１（血清１％存在下にお
けるウイルスの膜透過量へ及ぼすヒアルロン酸濃度の影
響）および図２（血清５％存在下におけるウイルスの膜
透過量へ及ぼすヒアルロン酸濃度の影響）に示したごと
く検討した。図１においてＧＳ（血清１．０％）は０．
２２μｍのセルロース混合エステル膜（マイレックスＧ
Ｓ）、ＧＶ（血清１．０％）は０．２２μｍのポリ弗化
ビニリデン膜（マイレックスＧＶ）を用いた場合の結果
を表す。図２においてＧＳ（血清５．０％）は０．２２
μｍのセルロース混合エステル膜（マイレックスＧ
Ｓ）、ＧＶ（血清５．０％）は０．２２μｍのポリ弗化
ビニリデン膜（マイレックスＧＶ）を用いた場合の結果
を表す。なお、これらの実験に用いたウイルス含有試料
の濾過前のウイルス濃度は４×１０^４ＰＦＵ／ｍｌであ
った。実験操作は、実施例１と同様に行った。

【００３６】その結果、セルロース混合エステル膜なら
びにポリ弗化ビニリデン膜は、ともにヒアルロン酸の添
加濃度が増加するに伴って、ウイルスの膜透過量は減少
した。血清蛋白の存在下の影響については、セルロース
混合エステル膜で血清蛋白量の増加に伴って、ウイルス
の膜透過量の増加が認められたが、牛血清５％において
も、ヒアルロン酸２．５ｍｇ／ｍｌ以上で、ウイルス除
去効果は維持された。ポリ弗化ビニリデン膜において
は、血清蛋白によるウイルスの膜透過量の変動は認めら
れなかった。

【００３７】実施例４血清蛋白濃度のウイルスの膜透過量へ及ぼす影響を、ヒ
アルロン酸非存在下ならびに存在下において、セルロー
ス混合エステル膜（０．２２μｍ：マイレックスＧＳ，
ミリポア社）とポリ弗化ビニリデン膜（０．２２μｍ：
マイレックスＧＶ，ミリポア社）を用いて、図３（ウイ
ルスの膜透過量に及ぼす血清濃度の影響）に示したごと
く検討した。図３において、ＧＳ（ヒアルロン酸５ｍｇ
／ｍｌ存在下）は０．２２μｍセルロース混合エステル
膜（マイレックスＧＳ）、ＧＶ（ヒアルロン酸５ｍｇ／
ｍｌ存在下）は、０．２２μｍのポリ弗化ビニリデン膜
（マイレックスＧＶ）をヒアルロン酸５ｍｇ／ｍｌ存在
下で、膜濾過を行った結果を表し、ＧＳ（ヒアルロン非
存在下）は、０．２２μｍセルロース混合エステル膜
（マイレックスＧＳ）、ＧＶ（ヒアルロン酸非存在下）
は、０．２２μｍポリ弗化ビニリデン膜（マイレックス
ＧＶ）をヒアルロン酸非存在下で膜濾過を行った結果を
表す。実験操作は、実施例１と同様に行った。

【００３８】その結果、セルロース混合エステル膜なら
びにポリ弗化ビニリデン膜の０．２２μｍのポアサイズ
を用いた場合、両者の膜において、ヒアルロン酸非存在
下のものと比べヒアルロン酸（終濃度５ｍｇ／ｍｌ）存
在下のものは、血清蛋白が高濃度存在しても、ウイルス
の膜透過量を顕著に減少させた。

【００３９】実施例５他の粘質多糖類としてアルギン酸（アルギン酸ナトリウ
ム：５００〜６００ｃｐ，和光純薬工業）を用いて、ヒ
アルロン酸との比較検討を０．２２μｍのポリ弗化ビニ
リデン膜を用いて、図４（ウイルスの膜透過量へ及ぼす
アルギン酸の影響を、ヒアルロン酸と比較した結果）に
示したごとく行った。図４において、ＧＶ（アルギン
酸）は、アルギン酸（０，１．０，２．５，５．０，
７．５ｍｇ／ｍｌ）存在下での膜濾過を行った結果を表
し、ＧＶ（ヒアルロン酸）は、ヒアルロン酸を同様の濃
度の存在下で膜濾過を行った結果を表す。なお、濾過膜
としては、両者ともに０．２２μｍのポリ弗化ビニリデ
ン膜（マイレックスＧＶ）を用いた。実験操作は、実施
例１と同様に行った。

【００４０】その結果、アルギン酸においても、ヒアル
ロン酸と同様のウイルス除去効果が認められた。ウイル
スの膜透過量が、ヒアルロン酸に比べ、アルギン酸にお
いて高いのは、両者は同一濃度においては、アルギン酸
の方がヒアルロン酸より粘性が低いためと考えられる。
アルギン酸においても、十分な粘性を与える濃度とすれ
ば、良好なウイルス除去における濾過助剤となり得ると
考えられる。

【００４１】

【発明の効果】公知のフィルターによる微生物の分離方
法がもつ利点をすべてそなえたままで、本発明は、非常
に簡便かつ迅速に、ウイルスを除去あるいは濃縮するこ
とができる。処理液へ添加する生体に安全な水溶性粘質
高分子化合物、例えばヒアルロン酸は、生体への毒性も
なく、また蛋白とも吸着しないことから、濾過助剤とし
て使用しても、濾液中の目的成分の回収は容易にでき
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】血清１％存在下におけるウイルスの膜透過量へ
及ぼすヒアルロン酸濃度の影響を示した説明図である。

【図２】血清５％存在下におけるウイルスの膜透過量へ
及ぼすヒアルロン酸濃度の影響を示した説明図である。

【図３】ウイルスの膜透過量に及ぼす血清濃度の影響を
示した説明図である。

【図４】ウイルスの膜透過量へ及ぼすアルギン酸の影響
を、ヒアルロン酸と比較した結果を示した説明図であ
る。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】生体に安全な、かつ、それ自体ではメン
ブランフィルターを通過するがウイルスと接触するとウ
イルスのメンブランフィルターの通過を阻止する物質か
らなる濾過助剤。
【請求項２】上記物質が水溶性粘質高分子化合物であ
る請求項１記載の濾過助剤。
【請求項３】上記水溶性粘質高分子化合物が水溶性粘
質多糖類である請求項２記載の濾過助剤。
【請求項４】上記水溶性粘質多糖類が水溶性粘質酸性
多糖類である請求項３記載の濾過助剤。
【請求項５】上記水溶生粘質酸性多糖類がグリコサミ
ノグリカンまたはグリクロナンである請求項４記載の濾
過助剤。
【請求項６】上記グリコサミノグリカンがヒアルロン
酸である請求項５記載の濾過助剤。
【請求項７】上記グリクロナンがアルギン酸である請
求項５記載の濾過助剤。
【請求項８】被処理液を、生体に安全な、かつ、それ
自体ではメンブランフィルターを通過するがウイルスと
接触するとウイルスのメンブランフィルターの通過を阻
止する物質からなる濾過助剤の存在下、メンブランフィ
ルターで処理する濾過方法。
【請求項９】上記物質が水溶性粘質高分子化合物であ
る請求項８記載の濾過方法。
【請求項１０】上記水溶性粘質高分子化合物が水溶性
粘質多糖類である請求項９記載の濾過方法。
【請求項１１】上記水溶性粘質多糖類が水溶性粘質酸
性多糖類である請求項１０記載の濾過方法。
【請求項１２】上記水溶性粘質酸性多糖類がグリコサ
ミノグリカンまたはグリクロナンである請求項１１記載
の濾過方法。
【請求項１３】上記グリコサミノグリカンがヒアルロ
ン酸である請求項１２記載の濾過方法。
【請求項１４】メンブランフィルターとしてポアサイ
ズ０．２２μｍ以下のセルロース混合エステル膜または
ポリ弗化ビニリデン膜を用いる請求項１３記載の濾過方
法。
【請求項１５】被処理液は蛋白を含有するものである
請求項１４記載の濾過方法。
【請求項１６】ヒアルロン酸を被処理液中に終濃度が
ヒアルロン酸ナトリウムとして５ｍｇ／ｍｌ以上となる
ように存在させて行う請求項１５記載の濾過方法。
【請求項１７】上記グリクロナンがアルギン酸である
請求項１２記載の濾過方法。
【請求項１８】メンブランフィルターとしてポアサイ
ズ０．２２μｍ以下のセルロース混合エステル膜または
ポリ弗化ビニリデン膜を用いる請求項１７記載の濾過方
法。
【請求項１９】被処理液は蛋白を含有するものである
請求項１８記載の濾過方法。
【請求項２０】アルギン酸を被処理液中に終濃度がア
ルギン酸ナトリウムとして１０ｍｇ／ｍｌ以上となるよ
うに存在させて行う請求項１９記載の濾過方法。
【請求項２１】メンブランフィルターで処理後、メン
ブランフィルターを通過した濾過助剤を濾液から分離も
しくは分解して除去する請求項８記載の濾過方法。