JPH06279496A - ハムスター脳ナトリウム利尿ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 ハムスター由来の３２個のアミノ酸でなる脳
ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）およびそれをコード
するＤＮＡ配列、該３２個のアミノ酸を含む９６個のア
ミノ酸でなるプロＢＮＰおよびそれをコードするＤＮＡ
配列、および該９６個のアミノ酸を含む１２２個のアミ
ノ酸でなるプレプロＢＮＰおよびそれをコードするＤＮ
Ａ配列が提供される。 【効果】 ハムスターＢＮＰあるいはその前駆体または
そのＤＮＡ配列を利用して、検体中のＢＮＰの検出、測
定がなされ、あるいはＢＮＰを含む各種試薬などが調製
され得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ハムスター由来の３２
個のアミノ酸でなる脳ナトリウム利尿ペプチドおよびそ
れをコードするＤＮＡ配列、該３２個のアミノ酸を含む
９６個のアミノ酸でなるポリペプチドおよびそれをコー
ドするＤＮＡ配列、および該９６個のアミノ酸を含む１
２２個のアミノ酸でなるポリペプチドおよびそれをコー
ドするＤＮＡ配列に関する。

【０００２】

【従来の技術】脳ナトリウム利尿ペプチド（BNP）は、
おもに心室から分泌される心臓ホルモンであり、心房性
ナトリウム利尿ペプチド（ANP）と同様に、血圧、水電
解質代謝調節に関与する可能性が示唆されている（Muko
yamaら、J. Clin. Invest. 87:1402 (1991)およびOgawa
ら、Circ. Res. 69: 491 (1991)）。高血圧性心肥大あ
るいは重症心不全の患者において、血中のＢＮＰ濃度が
ＡＮＰ濃度よりもより著しく上昇することが報告されて
いる（Mukoyamaら、N. Engl. J. Med 323, 757 (199
0)）。さらに、重症心不全の患者にヒトＢＮＰを静脈内
投与して、ＢＮＰが心機能を改善をすることが見いださ
れ、報告された（Yoshimuraら、Circulation84, 1581
(1991)）。

【０００３】脳ナトリウム利尿ペプチドが、血圧や心機
能に及ぼす影響の作用機作についての詳細はまだ十分に
解明されていない。この解明を進め、心臓に関連する様
々な疾患の治療に役立てていく必要がある。その為には
まず、このようなペプチドの構造を解析することが望ま
れる。

【０００４】現在、脳ナトリウム利尿ペプチドのうちの
いくつかは、そのアミノ酸配列が決定されており、さら
にペプチドの特性についても解明されている。例えば、
ブタの脳から、３２個のアミノ酸からなるペプチドが単
離され、配列決定された（Sudohら、Biochem Biophys R
es Comm 155:726-732 (1988)）。さらに、ラット由来ペ
プチド（Nakaoら、Hypertension 15:774-778 (199
0)）、ヒト由来ペプチド（Kambayashiら、FEBS Lett 25
9:341-345 (1990)およびHinoら、BBRC 167: 693-700(19
90)）、およびウシ由来ペプチド（Nguyenら、Mol. Endo
crinology 3:1823-1829 (1989)）の配列も決定されてい
る。アミノ酸配列分析および特性の解明によって、これ
らのＢＮＰの前駆体が存在することが知られている。前
駆体からＢＮＰにプロセシングされる際の開裂部位につ
いても、解明されている。

【０００５】さらに、脳ナトリウム利尿ペプチドをコー
ドするＤＮＡ配列のいくつかも解明されている。例え
ば、ラット由来ペプチド（Kojimaら、BBRC 159:1420-14
26 (1989)）、ヒト由来ペプチド（Sudohら、BBRC 159:1
427-1434 (1989)）、ヒト由来ペプチドおよびイヌ由来
ペプチド（Seilhamerら、BBRC 165:650-658 (1989)）を
コードするＤＮＡ配列は、知られている。

【０００６】上述のように、種々の動物由来のＢＮＰの
構造が解明されているが、ＢＮＰの種特異性やその他の
特性については、さらに検討していく必要があり、現在
知られていない動物種でのＢＮＰの構造解析が望まれて
いる。

【０００７】

【発明の目的】本発明の目的は、脳ナトリウム利尿ペプ
チド（ＢＮＰ）、特にハムスター脳ナトリウム利尿ペプ
チドおよびその前駆体のアミノ酸配列およびＤＮＡ配列
を明らかにすることである。

【０００８】

【発明の構成】発明者らは、ハムスター由来のｃＤＮＡ
ライブラリーを作成して、プローブでのスクリーニング
に供し、ハムスター由来のＢＮＰのＤＮＡ断片を得て、
その配列の決定を行うことにより、本発明を完成するに
至った。

【０００９】本発明のポリペプチドは、配列表の配列番
号１の６５位のAsnから９６位のTyrまでのアミノ酸配列
を含む。

【００１０】本発明のポリペプチドは、配列表の配列番
号１の１位のHisから９６位のTyrまでのアミノ酸配列を
含む。

【００１１】本発明のポリペプチドは、配列表の配列番
号１の−２６位のMetから９６位のTyrまでのアミノ酸配
列を含む。

【００１２】好ましい実施態様では、上記ポリペプチド
は、配列表の配列番号１の７４位のCysと９０位のCys
が、ジスルフィド結合をしている。

【００１３】本発明のＤＮＡ配列は、上記のいずれかに
記載のポリペプチドをコードする。好ましい実施態様で
は、上記ＤＮＡ配列は、配列表の配列番号１の３２５位
のＡから４２０位のＴまでのＤＮＡ配列でなる。

【００１４】好ましい実施態様では、上記ＤＮＡ配列
は、配列表の配列番号１の１３３位のＣから４２０位の
ＴまでのＤＮＡ配列でなる。

【００１５】好ましい実施態様では、上記ＤＮＡ配列
は、配列表の配列番号１の５５位のＡから４２０位のＴ
までのＤＮＡ配列でなる。

【００１６】本発明のハムスターＢＮＰおよびその前駆
体のＤＮＡ配列の同定の一例を、工程の順に以下に示
す。

【００１７】（１）ハムスターｃＤＮＡライブラリーの
調製およびスクリーニング 一般に、所望の遺伝子源として、適切なゲノムライブラ
リー、またはペプチドを合成する細胞からのｃＤＮＡラ
イブラリーのいずれをも用い得る。

【００１８】ＢＮＰは、脳および心臓に存在しているこ
とが知られている。従って、ｃＤＮＡライブラリーを調
製するために、脳組織を用いることもできるが、心臓を
好都合に用いることができる。ｃＤＮＡライブラリーの
調製方法は、当該技術分野ではよく知られている。ｃＤ
ＮＡライブラリーの好ましい調製方法は、例えば、Hyun
h, V.T.,ら、DNA Cloning Techniques-A Practical App
roach (IRL Press, Oxford, 1984)、ならびにOkayamaお
よび Berg, Mol Cell Biol (1983) 3:280-289に開示さ
れている。

【００１９】調製したｃＤＮＡライブラリーを、適当な
条件下で、適当なプローブでスクリーニングし、目的の
ＢＮＰをコードする遺伝子を得る。

【００２０】スクリーニングに用いるプローブは、例え
ば、既に配列が知られている他の動物種のＢＮＰｃＤＮ
Ａの一部のＤＮＡ断片であり得る。あるいは、以下の実
施例に示すように、ＰＣＲ法（Saikiら、Science, 230:
1350-1354 (1985)）で増幅させたハムスターＢＮＰｃＤ
ＮＡの一部の配列からなるＤＮＡ断片であり得る。以下
の実施例では、ＰＣＲ法による増幅は、多種の動物間で
ホモロジーの高い部分を基にして作成したプライマー、
および鋳型としてハムスターの心室の全ＲＮＡから調製
したｃＤＮＡを用いて行っている。

【００２１】 （２）ハムスターＢＮＰのｃＤＮＡ配列決定 上記（１）項で作成したｃＤＮＡライブラリーを上述の
プローブでスクリーニングして、陽性のクローンを得
る。この陽性のクローンに含まれるＤＮＡインサートを
適当な制限酵素で切り出し、サブクローニングを行った
後、ジデオキシ法などの公知のＤＮＡシークエンス法で
塩基配列の決定を行う。このＤＮＡインサートの制限酵
素地図を図２に示す。このようにして、１つのＤＮＡイ
ンサートから得られたハムスターＢＮＰを含むポリペプ
チドをコードするｃＤＮＡ塩基配列が決定された。この
ｃＤＮＡ配列およびそれに対応するアミノ酸配列を配列
表の配列番号１および図３に示す。

【００２２】（３）ｃＤＮＡ配列から推定されるハムス
ターＢＮＰおよびその前駆体の構造 上記遺伝子構造から推定されるアミノ酸配列と、既知の
ラット、ブタ、およびヒトのＢＮＰおよびその前駆体の
アミノ酸配列とを比較することによって、ハムスターＢ
ＮＰとその前駆体のペプチドの構造を決定することがで
きる。

【００２３】ハムスターＢＮＰとしては、配列表の配列
番号１に示すように、−２６位のアミノ酸であるMetか
ら９６位のTyrまでの１２２個のアミノ酸でなるプレプ
ロ型のＢＮＰ、１位のHisから９６位のTyrまでの９６個
のアミノ酸でなるプロ型のＢＮＰ、および６５位のAsn
から９６位のTyrまでの３２個のアミノ酸でなるＢＮＰ
が存在することがわかる。ハムスタープレプロ型ＢＮＰ
は、ラット、ブタ、およびヒトプレプロ型ＢＮＰとＤＮ
Ａレベルで７８％、６４％、および６３％の相同性しか
有さない。

【００２４】（４）ハムスターＢＮＰおよびその前駆体
のＤＮＡを用いた発現ベクターの構築および該発現ベク
ターを用いたポリペプチドの発現 ハムスターＢＮＰおよびその前駆体のＤＮＡ配列を用い
て、発現ベクターが構築される。例えば、ヒトインター
フェロンγ融合グルカゴン発現プラスミドであるTrppAT
ΔCyshuIFNγ／グルカゴン（ヨーロッパ特許出願公開０
３８１４３３号）に本発明のＤＮＡ断片を挿入して構築
される。この発現ベクターを適当な宿主細胞に導入する
ことによって形質転換体が得られる。宿主細胞として
は、例えば大腸菌Ｋ１２株Ｃ６００、ＪＭ１０３、ＡＧ
−１、９３１などが挙げられる。この形質転換体を適当
な条件で培養することにより、所望のハムスターＢＮＰ
あるいはその前駆体が得られる。

【００２５】（５）ハムスターＢＮＰの用途と投与 本発明のＢＮＰは、高血圧のような疾患の治療に有用で
ある。特にハムスターの高血圧モデルである心筋症ハム
スター（Cautin, M. Am. J. Pathol. 130, 552-568 (19
88)）にＢＮＰを投与することによって、血圧を下げる
効果があることがわかっている。このようなことから、
本発明のＢＮＰは、ＢＮＰの作用機序の解明、高血圧の
研究に用いることができる。

【００２６】本発明のＢＮＰペプチドは、Remington's
Phermaceutical Sciences, Mack Publishing 社、Esto
n、Paに記載されているような従来のペプチドの処方物
の形で投与され得る。好ましくは、このペプチドは、注
射によって、より好ましくは、静脈注射によって、投与
され得る。投与量のレベルは、被検体の約０．０１〜１
００μｇ／ｋｇである。

【００２７】

【実施例】本発明を以下の実施例によりさらに説明す
る。

【００２８】（１）ハムスターｃＤＮＡライブラリーお
よびプローブの調製 Ａ．ｃＤＮＡライブラリーの調製 ゴールデンシリアンハムスターの心臓の組織から、グア
ニジウムチオシアネート法によって、全ＲＮＡを抽出し
た。ポリ（Ａ）⁺ＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）ラテックス
（日本ロッシュ社製）を用いて単離した。

【００２９】ハムスターの全心臓のｍＲＮＡに相補的な
二本鎖ｃＤＮＡを、RNaseH法で合成した。このｃＤＮＡ
に、標準的な方法でEcoRI-NotI-BamHIアダプター（宝酒
造社製）をライゲーションさせた後、このｃＤＮＡを、
ファージベクターλZAPII（Stratagene社製）にライゲ
ーションさせ、標準法でインビトロでパッケージした。
このパッケージング反応物をプレーティングすると、約
２×１０⁶のそれぞれ独立のクローンを含むライブラリ
ーが得られた。次にこのクローンを増幅させた。

【００３０】Ｂ．プローブの作成 次に、上記Ａ項で得られたハムスターのｃＤＮＡライブ
ラリーをスクリーニングするために、プローブを作成し
た。ここではプローブとして、ハムスターＢＮＰのｃＤ
ＮＡフラグメントを、ＰＣＲ法によって増幅させて用い
ることとした。

【００３１】このためにまず、ＰＣＲ用の鋳型として、
ゴールデンシリアンハムスター（Mesocricetus auratu
s）の心室の全RNAから、Superscript^TM RNaseＨ^-逆転写
酵素(Bethesda Research Laboratories Inc., Gaithers
burg, MD)を用いて、cDNAを生成した。反応は、1μgの
全RNA、0.5μgのオリゴ(dT)₁₅ プライマー(Promega Bio
tech, Madison, WI)、100ユニットの逆転写酵素、およ
び0.5mMのデオキシヌクレオチドを含む10μｌの混合液
を、40℃で1時間インキュベーションして行った。

【００３２】反応後、1μlの反応生成液をPCRに供し
た。PCRはGeneAmp PCR試薬キット(Perkin Elmer Cetus,
Norwalk, CT)および各100pmol のセンスおよびアンチ
センスプライマーを用いて行った。センスおよびアンチ
センスプライマーは、それぞれ、5'-TCGGTCGACGGAGGTCA
CTCCCATCCTCTGG（SalI部位に下線）および5'-AGAGTCGAC
TGCAGCTGCAGCCAGGAGGTCTTC-3'（PstIおよびSalI部位に
下線）の配列を有するものを作成して用いた（配列表の
配列番号２および配列番号３ならびに図1）。図１の上
段に示すように、上記センスプライマーは、ラット、ブ
タ、およびヒトのプレプロBNPのシグナル配列開裂部位
周辺の領域のcDNA配列に基づいて作成した。同じく図１
の下段に示すように、アンチセンスプライマーは、ラッ
ト、ブタ、およびヒトのBNPの終止コドンの3'側に相当
するcDNA配列に基づいて作成した。これらの部分の配列
は、ラット、ブタ、およびヒトの間で高度に保存されて
いる。これらのプライマーは、モデル381A DNA合成機
(Applied Biosystems Inc., Foster City, CA)で合成さ
れた。

【００３３】PCRの反応は、反応混合物を、９４℃で
０．５分間インキュベートし、変性（９４℃で０．５分
間）、アニーリング（６０℃で０．５分間）、伸長（７
２℃で１分間）を３１サイクル繰り返すことによって行
い、７２℃での４分間のインキュベーションで終えた。
このPCRの増幅によって、約３５０ｂｐのＤＮＡ産物が
得られた。これを、SalIで消化し、配列を決定するため
に、pBluescriptベクター（Stratagene, La Jolla, C
A）中にサブクローニングした。

【００３４】このようにして得られた５つのクローンの
配列を決定したところ、２７６ｂｐのヌクレオチド配列
が、９２個の残基を有するペプチド配列をコードし、こ
れがラットのプロＢＮＰと６１％のホモロジーがあるこ
とがわかった。

【００３５】（２）ハムスターｃＤＮＡライブラリーの
スクリーニングおよびハムスターＢＮＰおよびその前駆
体をコードするＤＮＡ配列の決定 Ａ．ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング 上記（１）のＡ項のようにして得られたハムスターｃＤ
ＮＡライブラリーを、ハイブリダイゼーション用プロー
ブとして上記（１）のＢ項のようにして得られたプロー
ブを³²Ｐ標識したものを用いて、スクリーニングした。

【００３６】まず、上記（１）項のＡで得た心臓のｃＤ
ＮＡライブラリー由来の組換え体を、E.coli宿主細胞LE
392中に挿入し、約４×１０⁵個のファージをプレート
し、プラークを得た。このプラークをGeneScreenPlusナ
イロンフィルター（Du Pont, Boston, MA）に移した。
フィルターを、0.2Mトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１
ＭNaCl、１０％硫酸デキストラン、１％ドデシル硫酸ナ
トリウム（ＳＤＳ），２００μｇ／ｍｌ変性酵母ｔＲＮ
Ａ、および２００μｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡを含む
溶液中で、６０℃で一晩プレハイブリダイズさせた。次
に、上記プレハイブリダイゼーション溶液に³²Ｐ標識し
た上記プローブを加え、６０℃、１６時間ハイブリダイ
ゼーションを行った。ハイブリダイゼーションの後、そ
のフィルターを、２×ＳＳＣ（１×ＳＳＣは０．１５Ｍ
ＮａＣｌ、１５ｍＭクエン酸ナトリウム）および０．１
％ＳＤＳで２回、０．２×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ
で２回、６０℃で洗浄した。

【００３７】乾燥させたフィルターをオートラジオグラ
フィーにかけた。約４×１０⁵個のプラークのなかか
ら、７６個の一次陽性クローンを得た。これらのクロー
ンのそれぞれを、何回かのプレーティングによって単離
していき、３つの強いポジティブクローンを得た。これ
らの制限酵素のマッピングによって、すべてのクローン
が同一であることがわかった。

【００３８】 Ｂ．クローンのＤＮＡ配列の決定および解析 λZAPIIの販売元の指示に従って、上記のＡ項によって
得られたクローンのインビボ（大腸菌中）での切り出し
を行わせた。これにより、pBluescriptベクターが作成
され、ｃＤＮＡを増殖し、単離し、そして分析すること
ができるようになった。最長の挿入断片を有するクロー
ンの挿入断片のＤＮＡ配列を決定した。この時のＤＮＡ
の配列決定は、ダイデオキシチェーンターミネーション
法により行い、シークエナーゼVersion2.0（United Sta
tes Biochemical Corp., Cleveland, OH）を用いた。

【００３９】決定されたＤＮＡ配列を配列表の配列番号
１および図３に示す。この断片は、３６６塩基のオープ
ンリーディングフレームを有する６０３ｂｐの断片であ
る。

【００４０】開始コドンの周囲のヌクレオチド配列は、
真核生物の翻訳開始部位のコンセンサス配列と一致し
た。８９位から３６９位のヌクレオチド配列は、プロー
ブとして用いたハムスターＢＮＰｃＤＮＡフラグメント
と同一であった（図３）。”CAG”トリヌクレオチドリ
ピートの２つのコピーが、５’の非翻訳領域にあった
（図３の波線）。３’非翻訳領域は、典型的なAATAAAの
ポリアデニル化シグナルを含んでいた（図３の二重
線）。”ATTTA”モチーフの４つのコピーは、ｍＲＮＡ
の不安定性に関係しているようである（図３の太線）。

【００４１】ハムスターBNPｃＤＮＡのコーディング配
列は、ラット、ブタ、およびヒトのＢＮＰｃＤＮＡのコ
ーディング配列とそれぞれ、７８％、６４％、および６
３％のホモロジーを有していた。

【００４２】（３）推定アミノ酸配列の分析 推定アミノ酸配列の分析によって、ハムスターのプレプ
ロＢＮＰが、１２２個のアミノ酸配列からなることがわ
かった。ハムスタープレプロＢＮＰのＮ末端の疎水性の
２６個のペプチドは、シグナルペプチドを表しているよ
うである。−１位から４位までのアミノ酸配列Ser、Hi
s、Pro、Leu、Glyは、ハムスター、ラット、ブタ、およ
びヒトのプレプロＢＮＰで、同一である（図４）。ラッ
ト、ブタ、およびヒトＢＮＰは、プロＢＮＰ中で、１つ
のアルギニン残基に続いている。ブタおよびヒトのプロ
ＢＮＰでは、そのアルギニン残基の後ろで開裂されて、
３２残基のペプチドが生成される。ラットのプロＢＮＰ
でも、Ｃ末端の３２残基のペプチドは、１つのアルギニ
ン残基に続いているが、開裂は、この部位では起こらな
い。ラットのプロＢＮＰでは、開裂は別のアルギニン残
基で起こり、４５残基のＢＮＰとなる。ハムスターのプ
ロＢＮＰでは、Ｃ末端の３２個の残基を有するペプチド
は、１つのアルギニン残基に続いている。そして、ラッ
トプロＢＮＰの開裂部位に相当する位置は、Argではな
く、Glyである（図３）。これらのことから、ハムスタ
ーＢＮＰは、３２残基のペプチドであることが示唆され
る。Ｃ末端の３２残基のなかでは、Cys+74およびCys+90
との間の分子内シスルフィド結合による環構造ができる
と予想される（図３）。これは、ナトリウム利尿ペプチ
ドファミリーのメンバーで共通して起こることである。
環構造の中では、ハムスターＢＮＰは、ラット、ブタ、
およびヒトＢＮＰと、それぞれ８３％、７６％、および
６５％のホモロジーがある。

【００４３】

【発明の効果】本発明によれば、このように、ハムスタ
ー由来の３２個のアミノ酸でなるＢＮＰおよびそれをコ
ードするＤＮＡ配列、該３２個のアミノ酸を含む９６個
のアミノ酸でなるプロＢＮＰおよびそれをコードするＤ
ＮＡ配列、および該９６個のアミノ酸を含む１２２個の
アミノ酸でなるプレプロＢＮＰおよびそれをコードする
ＤＮＡ配列が得られる。このＤＮＡ配列は、ＢＮＰの発
現あるいは検体中のＢＮＰ遺伝子の検出および測定に有
用であり、このＢＮＰは、各種試薬、医薬として有用で
ある。

【００４４】

【配列表】

【００４５】

【配列番号：１】 配列の長さ：603 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源 生物名：ハムスター 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：５５．．４２０ 特徴を決定した方法：S 配列 GCAAGAGAGA GAGCAAGCCA CCACCACAGC AGCCTGGCCC ATCAATTCTG TGAC ATG 57 Met GAT CTC CGG AAG GTG CTG TCC CGG GTG GTT CTG TTC CTG CTT TTT CTC 105 Asp Leu Arg Lys Val Leu Ser Arg Val Val Leu Phe Leu Leu Phe Leu -25 -20 -15 -10 TAT CTG TCA CCG CTG GGA AGT CAC TCC CAC CCT CTG GGC AGT CCC AGC 153 Tyr Leu Ser Pro Leu Gly Ser His Ser His Pro Leu Gly Ser Pro Ser -5 1 5 CAG TCT CCG GAA CAA TCC AAG ATG CAG ACT CTG CTA GAC CTG CTG AGG 201 Gln Ser Pro Glu Gln Ser Lys Met Gln Thr Leu Leu Asp Leu Leu Arg 10 15 20 GAA AAG GCA GAG GCG GTG GCT CGG GGG CAG CTC CTG AAG GAC CAA GAC 249 Glu Lys Ala Glu Ala Val Ala Arg Gly Gln Leu Leu Lys Asp Gln Asp 25 30 35 GTC ATC ACA AAA GCA CCT CTC CAA AGC ACC CTT GGG TCT CAA GAC AGC 297 Val Ile Thr Lys Ala Pro Leu Gln Ser Thr Leu Gly Ser Gln Asp Ser 40 45 50 55 ACC CTC CAT GTC CTG CAG AAA CTT CGA AAC TCC AAG AAG ATG CAT AAT 345 Thr Leu His Val Leu Gln Lys Leu Arg Asn Ser Lys Lys Met His Asn 60 65 70 TCG GGC TGC TTT GGG CAG AGG ATA GAC AGA ATC GGC TCA TTC AGT CGT 393 Ser Gly Cys Phe Gly Gln Arg Ile Asp Arg Ile Gly Ser Phe Ser Arg 75 80 85 CTG GGC TGC AAT GTG CTG AAG CGG TAT TAGGATGAGC TCCCAGCTGC 440 Leu Gly Cys Asn Val Leu Lys Arg Tyr 90 95 AGACACCGGC TCCTGACTCC ACCTGGGGCT CCTTCCCCAA TGCTGGGACC CCCTTTTGAA 500 GTGATCCTAT TTATTTATTT ATTTTTATTT ATTTTTTGGT TGTTTTCTAC AAGACTGTTT 560 CTTACCTTTG AGCACAGACT TTTCATGGTG TAATAAACAC AGC 603

【００４６】

【配列番号：２】 配列の長さ：31 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成DNA 配列 TCGGTCGACG GAGGTCACTC CCATCCTCTG G 31

【００４７】

【配列番号：３】 配列の長さ：33 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成DNA 配列 AGAGTCGACT GCAGCTGCAG CCAGGAGGTC TTC 33

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のハムスターＢＮＰｃＤＮＡを単離する
ためのプローブの作成に用いた、ＰＣＲ用のセンスプラ
イマーおよびアンチセンスプライマーの作成を示す図で
ある。

【図２】本発明のハムスターＢＮＰをコードするＤＮＡ
断片の制限酵素地図を示す図である。

【図３】本発明のハムスターＢＮＰのＤＮＡ配列および
該配列から推定されるアミノ酸配列を示す配列図であ
る。

【図４】本発明のハムスターＢＮＰおよびラットＢＮ
Ｐ、ブタＢＮＰ、およびヒトＢＮＰのアミノ酸の相同性
を比較する図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 8310−2Ｊ // Ａ６１Ｋ 37/24 ＡＢＮ 8314−4Ｃ Ｃ０７Ｋ 99:00

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】配列表の配列番号１の６５位のAsnから９
   ６位のTyrまでのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
2. 【請求項２】配列表の配列番号１の１位のHisから９６
   位のTyrまでのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
3. 【請求項３】配列表の配列番号１の−２６位のMetから
   ９６位のTyrまでのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
4. 【請求項４】配列表の配列番号１の７４位のCysと９０
   位のCysが、ジスルフィド結合をしている、請求項１か
   ら３のいずれかに記載のポリペプチド。
5. 【請求項５】請求項１から３のいずれかに記載のポリペ
   プチドをコードするＤＮＡ配列。
6. 【請求項６】配列表の配列番号１の３２５位のＡから４
   ２０位のＴまでのＤＮＡ配列でなる、請求項５に記載の
   ＤＮＡ配列。
7. 【請求項７】配列表の配列番号１の１３３位のＣから４
   ２０位のＴまでのＤＮＡ配列でなる、請求項５に記載の
   ＤＮＡ配列。
8. 【請求項８】配列表の配列番号１の５５位のＡから４２
   ０位のＴまでのＤＮＡ配列でなる、請求項５に記載のＤ
   ＮＡ配列。