JPH06141716A - 稔性回復遺伝子の導入方法 - Google Patents
稔性回復遺伝子の導入方法Info
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- JPH06141716A JPH06141716A JP4276070A JP27607092A JPH06141716A JP H06141716 A JPH06141716 A JP H06141716A JP 4276070 A JP4276070 A JP 4276070A JP 27607092 A JP27607092 A JP 27607092A JP H06141716 A JPH06141716 A JP H06141716A
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- Japan
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- gene
- fertility
- rapeseed
- brassica
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- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】ナタネ等のブラシカ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）植
物および細胞質雄性不稔性（ＣＭＳ）に対応する稔性回
復遺伝子（Ｒｆ遺伝子）を有するラファナス属（Ｒａｐ
ｈａｎｕｓ）植物を属間交雑、次いで子房培養、さらに
必要に応じて連続戻交雑を行うことにより、Ｒｆ遺伝子
が導入されたブラシカ属植物を得る。 【効果】 本発明によれば、生物学的な属の違いにもか
かわらずラファナス属植物のＲｆ遺伝子を効率良くブラ
シカ属植物に導入することができる。よって、ラファナ
ス属植物のＣＭＳを利用したブラシカ属植物の雑種第一
代育種の実用化が期待できる。
物および細胞質雄性不稔性（ＣＭＳ）に対応する稔性回
復遺伝子（Ｒｆ遺伝子）を有するラファナス属（Ｒａｐ
ｈａｎｕｓ）植物を属間交雑、次いで子房培養、さらに
必要に応じて連続戻交雑を行うことにより、Ｒｆ遺伝子
が導入されたブラシカ属植物を得る。 【効果】 本発明によれば、生物学的な属の違いにもか
かわらずラファナス属植物のＲｆ遺伝子を効率良くブラ
シカ属植物に導入することができる。よって、ラファナ
ス属植物のＣＭＳを利用したブラシカ属植物の雑種第一
代育種の実用化が期待できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、属間交雑法によりラフ
ァナス属植物の稔性回復遺伝子をブラシカ属植物に導入
する方法および該方法により作成されたブラシカ属植物
に関する。
ァナス属植物の稔性回復遺伝子をブラシカ属植物に導入
する方法および該方法により作成されたブラシカ属植物
に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】細胞
質にある核外遺伝子には、細胞質雄性不稔（Ｃｙｔｏｐ
ｌａｓｍｉｃ Ｍａｌｅ Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ；以下、
「ＣＭＳ」と略すこともある）などの有用遺伝子が存在
することが知られている。このＣＭＳは、ハイブリッド
植物の作成に深い関連を持つことから、近年注目を集め
ている。
質にある核外遺伝子には、細胞質雄性不稔（Ｃｙｔｏｐ
ｌａｓｍｉｃ Ｍａｌｅ Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ；以下、
「ＣＭＳ」と略すこともある）などの有用遺伝子が存在
することが知られている。このＣＭＳは、ハイブリッド
植物の作成に深い関連を持つことから、近年注目を集め
ている。
【０００３】ブラシカ属植物におけるＣＭＳの利用に関
する研究は、自家不和合性のないナタネ（Ｂｒａｓｓｉ
ｃａ ｎａｐｕｓ）で特に盛んに行われている。しかし
ながら、従来より広く利用されてきたのはナタネ品種ポ
リマ（Ｐｏｌｉｍａ）由来のＣＭＳのみであり、このポ
リマのＣＭＳは高温条件下、特に２０℃以上で栽培する
と稔性が回復してしまう等のＣＭＳの安定性に関して問
題があった。そのため、ヘテローシス（雑種強勢）を示
すＦ1 （雑種第１代）種子の生産には充分に利用できて
いない。
する研究は、自家不和合性のないナタネ（Ｂｒａｓｓｉ
ｃａ ｎａｐｕｓ）で特に盛んに行われている。しかし
ながら、従来より広く利用されてきたのはナタネ品種ポ
リマ（Ｐｏｌｉｍａ）由来のＣＭＳのみであり、このポ
リマのＣＭＳは高温条件下、特に２０℃以上で栽培する
と稔性が回復してしまう等のＣＭＳの安定性に関して問
題があった。そのため、ヘテローシス（雑種強勢）を示
すＦ1 （雑種第１代）種子の生産には充分に利用できて
いない。
【０００４】一方、本願発明者らは先にＸ線照射したダ
イコン由来のプロトプラストとヨード化合物処理したブ
ラシカ属植物由来のプロトプラストとを融合させ、直接
ダイコン由来のプロトプラストからその細胞質遺伝子を
ナタネ等のブラシカ属植物由来のプロトプラストに導入
する方法（特開平１−２１８５３０号公報）、ダイコン
由来のサイトプラストとヨード化合物処理したブラシカ
属植物由来のプロトプラストとを融合させ、直接ダイコ
ン由来のサイトプラストからその細胞質遺伝子をナタネ
等のブラシカ属植物由来のプロトプラストに導入する方
法（特開平２−３０３４２６号公報）を提案した。しか
しＦ1 種子を生産するためには、稔性回復遺伝子（以
下、「Ｒｆ遺伝子」と略す）を有する片親が必要となる
が、ダイコン由来のＣＭＳ遺伝子をナタネに導入できて
も、ナタネにはこれに対応するＲｆ遺伝子が存在しない
ため、かかるＲｆ遺伝子をダイコンから導入しなければ
ならなかった。ダイコンＲｆ遺伝子をナタネへの導入す
る方法の一つとして属間交雑法が挙げられるが、交雑不
和合性や雑種致死性など、多くの遺伝的または生理的障
害があるため、従来の方法では属間雑種の獲得が極めて
困難な状況にあった。属間交雑によるダイコンＲｆ遺伝
子のナタネへの導入は、ＴＯＫＵＭＡＳＵのＣＭＳ
（Ｗ．Ｐａｕｌｍａｎｎ ＆ Ｇ．Ｒｏｂｂｅｌｅｎ，
Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，１００，２９９−３０
９（１９８８））、ＯＧＵＲＡのＣＭＳ（Ｒ．Ｐｅｌｌ
ａｎ−ｄｅｌｏｕｒｍｅ ｅｔ ａｌ．，７ Ｉｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒａｐｅｓｅｅｄ Ｃｏｎｇｒｅ
ｓｓ（１９８７））に関して試みられているが、実用化
にはまだ至っていない。
イコン由来のプロトプラストとヨード化合物処理したブ
ラシカ属植物由来のプロトプラストとを融合させ、直接
ダイコン由来のプロトプラストからその細胞質遺伝子を
ナタネ等のブラシカ属植物由来のプロトプラストに導入
する方法（特開平１−２１８５３０号公報）、ダイコン
由来のサイトプラストとヨード化合物処理したブラシカ
属植物由来のプロトプラストとを融合させ、直接ダイコ
ン由来のサイトプラストからその細胞質遺伝子をナタネ
等のブラシカ属植物由来のプロトプラストに導入する方
法（特開平２−３０３４２６号公報）を提案した。しか
しＦ1 種子を生産するためには、稔性回復遺伝子（以
下、「Ｒｆ遺伝子」と略す）を有する片親が必要となる
が、ダイコン由来のＣＭＳ遺伝子をナタネに導入できて
も、ナタネにはこれに対応するＲｆ遺伝子が存在しない
ため、かかるＲｆ遺伝子をダイコンから導入しなければ
ならなかった。ダイコンＲｆ遺伝子をナタネへの導入す
る方法の一つとして属間交雑法が挙げられるが、交雑不
和合性や雑種致死性など、多くの遺伝的または生理的障
害があるため、従来の方法では属間雑種の獲得が極めて
困難な状況にあった。属間交雑によるダイコンＲｆ遺伝
子のナタネへの導入は、ＴＯＫＵＭＡＳＵのＣＭＳ
（Ｗ．Ｐａｕｌｍａｎｎ ＆ Ｇ．Ｒｏｂｂｅｌｅｎ，
Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，１００，２９９−３０
９（１９８８））、ＯＧＵＲＡのＣＭＳ（Ｒ．Ｐｅｌｌ
ａｎ−ｄｅｌｏｕｒｍｅ ｅｔ ａｌ．，７ Ｉｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒａｐｅｓｅｅｄ Ｃｏｎｇｒｅ
ｓｓ（１９８７））に関して試みられているが、実用化
にはまだ至っていない。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記ナタ
ネ等のブラシカ属植物においても安定して高いヘテロー
シスを示すＦ1 育種を実現させるべく、上記ダイコン等
のラファナス属植物のＣＭＳとそのＲｆ遺伝子を利用す
ることに着目した。その結果、子房培養法を改良すれば
属間交雑によりラファナス属植物のＲｆ遺伝子を効率よ
くブラシカ属植物に導入できることを初めて見出し、本
発明を完成するに至った。
ネ等のブラシカ属植物においても安定して高いヘテロー
シスを示すＦ1 育種を実現させるべく、上記ダイコン等
のラファナス属植物のＣＭＳとそのＲｆ遺伝子を利用す
ることに着目した。その結果、子房培養法を改良すれば
属間交雑によりラファナス属植物のＲｆ遺伝子を効率よ
くブラシカ属植物に導入できることを初めて見出し、本
発明を完成するに至った。
【０００６】即ち本発明の要旨は、ブラシカ属（Ｂｒａ
ｓｓｉｃａ）植物および細胞質雄性不稔性に対応する稔
性回復遺伝子を有するラファナス属（Ｒａｐｈａｎｕ
ｓ）植物を属間交雑、次いで子房培養を行うことを特徴
とするブラシカ属植物へのＲｆ遺伝子の導入方法に存す
る。以下、本発明につき詳細に説明する。
ｓｓｉｃａ）植物および細胞質雄性不稔性に対応する稔
性回復遺伝子を有するラファナス属（Ｒａｐｈａｎｕ
ｓ）植物を属間交雑、次いで子房培養を行うことを特徴
とするブラシカ属植物へのＲｆ遺伝子の導入方法に存す
る。以下、本発明につき詳細に説明する。
【０００７】本発明で使用されるブラシカ属植物として
は、ラファナス属植物のＣＭＳを導入したもの、正常な
細胞質を有する優良品種等のいずれも使用できる。本発
明においてはナタネ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ）
が好ましく、具体的には小瀬菜ダイコンのＣＭＳを導入
したナタネ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ，ｃｖ．Ｗ
ｅｓｔａｒ）またはその優良栽培品種等が挙げられる。
は、ラファナス属植物のＣＭＳを導入したもの、正常な
細胞質を有する優良品種等のいずれも使用できる。本発
明においてはナタネ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ）
が好ましく、具体的には小瀬菜ダイコンのＣＭＳを導入
したナタネ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ，ｃｖ．Ｗ
ｅｓｔａｒ）またはその優良栽培品種等が挙げられる。
【０００８】ラファナス属植物としては、ラファナス属
植物のＲｆ遺伝子を持つ系統や品種であれば特に制限は
されない。本発明においてはダイコン（Ｒａｐｈａｎｕ
ｓｓａｔｉｖｕｓ）が好ましく、具体的には日本の小瀬
菜ダイコンや、中国のダイコン品種である園紅、心里美
等が挙げられる。本発明においては、まずブラシカ属植
物および細胞質雄性不稔性に対応する稔性回復遺伝子を
有するラファナス属植物とを属間交雑する。具体的に
は、開花したブラシカ属植物（品種の場合は除雄してお
く）にラファナス属植物の花粉を授粉すればよい。
植物のＲｆ遺伝子を持つ系統や品種であれば特に制限は
されない。本発明においてはダイコン（Ｒａｐｈａｎｕ
ｓｓａｔｉｖｕｓ）が好ましく、具体的には日本の小瀬
菜ダイコンや、中国のダイコン品種である園紅、心里美
等が挙げられる。本発明においては、まずブラシカ属植
物および細胞質雄性不稔性に対応する稔性回復遺伝子を
有するラファナス属植物とを属間交雑する。具体的に
は、開花したブラシカ属植物（品種の場合は除雄してお
く）にラファナス属植物の花粉を授粉すればよい。
【０００９】続いてブラシカ属植物を生育させ、３〜１
０日目の子房を切り取って滅菌した後、Ｎｉｔｓｃｈ
＆ Ｎｉｔｓｃｈ（１９６７）寒天培地などに置床す
る。このときの培地への添加物としては、０．１〜１ｇ
／ｌのカゼイン加水分解物（ＣＨ）や１〜１０％のココ
ナッツミルク（ＣＭ）が好適で、ショ糖濃度としては３
〜８％が適当である。培養条件は温度２５±１℃の恒温
室で、５００〜１０００ルクス、一日１２〜１４時間の
蛍光灯照明条件下で行うのが好ましい。
０日目の子房を切り取って滅菌した後、Ｎｉｔｓｃｈ
＆ Ｎｉｔｓｃｈ（１９６７）寒天培地などに置床す
る。このときの培地への添加物としては、０．１〜１ｇ
／ｌのカゼイン加水分解物（ＣＨ）や１〜１０％のココ
ナッツミルク（ＣＭ）が好適で、ショ糖濃度としては３
〜８％が適当である。培養条件は温度２５±１℃の恒温
室で、５００〜１０００ルクス、一日１２〜１４時間の
蛍光灯照明条件下で行うのが好ましい。
【００１０】培養２〜４週間後に、莢から発育した雑種
胚を取り出し、ホルモンフリーまたは０．０５〜０．２
ｍｇ／ｌのベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）を含むＭＳ
培地（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ ＆ Ｓｋｏｏｇ，１９６
２）またはＢ５培地（Ｇａｍｂｏｒｇ ｅｔ ａｌ．，
１９６８）に植えて発芽させる。本葉の展開が認められ
たものは、発根誘導培地（０．０５〜０．１ｍｇ／ｌの
ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）および０．０１〜０．０５ｍ
ｇ／ｌのＢＡＰを含むＭＳ培地）に移すことによって、
ラファナス属のＲｆ遺伝子が導入された健全な幼植物体
が得られる。一方、本葉の展開が認められなかったもの
は、下胚軸を細分して０．１〜２ｍｇ／ｌ程度のＮＡＡ
あるいはインドール酢酸（ＩＡＡ）、０．１〜２ｍｇ／
ｌ程度のＢＡＰおよび０．１〜２ｇ／ｌのＣＨを添加し
たＭＳ固形培地に置床して再分化させる。得られた不定
芽は正常に発芽したものと同様に発根を誘導することに
より、ラファナス属のＲｆ遺伝子が導入された健全な植
物体に育てることができる。
胚を取り出し、ホルモンフリーまたは０．０５〜０．２
ｍｇ／ｌのベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）を含むＭＳ
培地（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ ＆ Ｓｋｏｏｇ，１９６
２）またはＢ５培地（Ｇａｍｂｏｒｇ ｅｔ ａｌ．，
１９６８）に植えて発芽させる。本葉の展開が認められ
たものは、発根誘導培地（０．０５〜０．１ｍｇ／ｌの
ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）および０．０１〜０．０５ｍ
ｇ／ｌのＢＡＰを含むＭＳ培地）に移すことによって、
ラファナス属のＲｆ遺伝子が導入された健全な幼植物体
が得られる。一方、本葉の展開が認められなかったもの
は、下胚軸を細分して０．１〜２ｍｇ／ｌ程度のＮＡＡ
あるいはインドール酢酸（ＩＡＡ）、０．１〜２ｍｇ／
ｌ程度のＢＡＰおよび０．１〜２ｇ／ｌのＣＨを添加し
たＭＳ固形培地に置床して再分化させる。得られた不定
芽は正常に発芽したものと同様に発根を誘導することに
より、ラファナス属のＲｆ遺伝子が導入された健全な植
物体に育てることができる。
【００１１】植物体を馴化させるためには、例えば希釈
したハイポネックス（村上物産株式会社）等を栄養分と
して添加したバーミキュライト（昭和バーミキュライト
株式会社）等を使用することができる。本発明において
は、バーミキュライトおよび通気性に優れたミリラップ
（ミリポーア社製）を活用することにより、効率良く雑
種植物体を馴化することができる。
したハイポネックス（村上物産株式会社）等を栄養分と
して添加したバーミキュライト（昭和バーミキュライト
株式会社）等を使用することができる。本発明において
は、バーミキュライトおよび通気性に優れたミリラップ
（ミリポーア社製）を活用することにより、効率良く雑
種植物体を馴化することができる。
【００１２】得られた雑種植物は、これを花粉親あるい
は母親として、Ｂｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ、Ｂｒａｓ
ｓｉｃａ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ等との連続戻交雑を行
うことによって、細胞学的ならびに植物学的に安定し、
しかもラファナス属植物のＲｆ遺伝子を持ったブラシカ
属植物を作成することができる。
は母親として、Ｂｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ、Ｂｒａｓ
ｓｉｃａ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ等との連続戻交雑を行
うことによって、細胞学的ならびに植物学的に安定し、
しかもラファナス属植物のＲｆ遺伝子を持ったブラシカ
属植物を作成することができる。
【００１３】
【発明の効果】本発明によれば、生物学的な属の違いに
もかかわらず属間交雑によってラファナス属植物のＲｆ
遺伝子を効率良くブラシカ属植物に導入することができ
る。よって、ラファナス属植物のＣＭＳを利用したブラ
シカ属植物のＦ1育種の実用化が期待できる。
もかかわらず属間交雑によってラファナス属植物のＲｆ
遺伝子を効率良くブラシカ属植物に導入することができ
る。よって、ラファナス属植物のＣＭＳを利用したブラ
シカ属植物のＦ1育種の実用化が期待できる。
【００１４】
【実施例】以下、本発明につき実施例を挙げて詳細に説
明するが、その要旨を越えない限り以下に限定されるも
のではない。 実施例１ 小瀬菜ダイコンのＣＭＳ遺伝子を持ったナタネに、それ
に対応するＲｆ遺伝子を持つ小瀬菜ダイコンおよび中国
ダイコン品種の園紅と心里美の花粉を掛け合わせた。授
粉後４〜７日目の子房を切り取って、０．５％の次亜塩
素酸ナトリウム溶液で１０分間殺菌を行った。滅菌水で
３回洗浄した後、２０ｍｌの寒天培地が分注された直径
１０ｃｍのプラスチックシャーレに植え込んだ。このと
きの培地は、Ｎｉｔｓｃｈ ＆ Ｎｉｔｓｃｈ（１９６
７）の無機塩にＷｈｉｔｅ（１９４３）のビタミンと３
００ｍｇ／ｌのＣＨと２％のＣＭ、および５％のショ糖
を入れ、０．６％のアガロースで固形化したものを使用
した。また培養は、２５±１℃の恒温室で、１０００ル
クス、一日１４時間の蛍光灯照明条件下で行った。
明するが、その要旨を越えない限り以下に限定されるも
のではない。 実施例１ 小瀬菜ダイコンのＣＭＳ遺伝子を持ったナタネに、それ
に対応するＲｆ遺伝子を持つ小瀬菜ダイコンおよび中国
ダイコン品種の園紅と心里美の花粉を掛け合わせた。授
粉後４〜７日目の子房を切り取って、０．５％の次亜塩
素酸ナトリウム溶液で１０分間殺菌を行った。滅菌水で
３回洗浄した後、２０ｍｌの寒天培地が分注された直径
１０ｃｍのプラスチックシャーレに植え込んだ。このと
きの培地は、Ｎｉｔｓｃｈ ＆ Ｎｉｔｓｃｈ（１９６
７）の無機塩にＷｈｉｔｅ（１９４３）のビタミンと３
００ｍｇ／ｌのＣＨと２％のＣＭ、および５％のショ糖
を入れ、０．６％のアガロースで固形化したものを使用
した。また培養は、２５±１℃の恒温室で、１０００ル
クス、一日１４時間の蛍光灯照明条件下で行った。
【００１５】約１カ月培養を続けると、雑種胚の発育が
観察されるようになり、これらの胚を無菌条件下で莢か
ら摘出し、０．１ｍｇ／ｌのＢＡＰを含んだＢ５培地に
植え換えて発芽させた。正常に発芽したものは、０．１
ｍｇ／ｌのＮＡＡ、０．０１ｍｇ／ｌのＢＡＰ、３％の
ショ糖および０．２％のゲルライト（Ｋｅｌｃｏ，Ｄｉ
ｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｉｎ
ｃ．）を含むＭＳ培地に移して発根を促すと同時に、健
全な植物体に育てた。一方、本葉の展開が見られなかっ
たものは、伸長した胚軸を３〜５ｍｍに細分して１ｍｇ
／ｌのＢＡＰ、０．２５ｍｇ／ｌのＮＡＡ、５００ｍｇ
／ｌのＣＨ、１％のショ糖および０．６％のアガロース
を含んだＭＳ培地に植えて再分化させた。再生してきた
不定芽は、正常に発芽したものと同様に発根を誘導した
ところ、健全な植物体に生育した。
観察されるようになり、これらの胚を無菌条件下で莢か
ら摘出し、０．１ｍｇ／ｌのＢＡＰを含んだＢ５培地に
植え換えて発芽させた。正常に発芽したものは、０．１
ｍｇ／ｌのＮＡＡ、０．０１ｍｇ／ｌのＢＡＰ、３％の
ショ糖および０．２％のゲルライト（Ｋｅｌｃｏ，Ｄｉ
ｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｉｎ
ｃ．）を含むＭＳ培地に移して発根を促すと同時に、健
全な植物体に育てた。一方、本葉の展開が見られなかっ
たものは、伸長した胚軸を３〜５ｍｍに細分して１ｍｇ
／ｌのＢＡＰ、０．２５ｍｇ／ｌのＮＡＡ、５００ｍｇ
／ｌのＣＨ、１％のショ糖および０．６％のアガロース
を含んだＭＳ培地に植えて再分化させた。再生してきた
不定芽は、正常に発芽したものと同様に発根を誘導した
ところ、健全な植物体に生育した。
【００１６】このように培地上で本葉および根共に発達
してきた幼植物体は、１０００倍希釈のハイポネックス
を添加し、滅菌したバーミキュライトに移植して培養瓶
の蓋代わりに通気性のよいミリラップを使用することに
より、効率よく植物体を馴化することができた。上述し
た方法に従って、ＣＭＳナタネと小瀬菜ダイコン、ＣＭ
Ｓナタネと園紅およびＣＭＳナタネと心里美との交配を
行い、計９４４個の子房を培養したところ、２８５個の
雑種Ｆ1 植物体が得られた（平均育成率は３０．２
％）。一般に従来の属間雑種の育成率は２〜５％程度で
あるから、本発明における雑種Ｆ1 育成率は極めて高い
水準にあると考えられた。
してきた幼植物体は、１０００倍希釈のハイポネックス
を添加し、滅菌したバーミキュライトに移植して培養瓶
の蓋代わりに通気性のよいミリラップを使用することに
より、効率よく植物体を馴化することができた。上述し
た方法に従って、ＣＭＳナタネと小瀬菜ダイコン、ＣＭ
Ｓナタネと園紅およびＣＭＳナタネと心里美との交配を
行い、計９４４個の子房を培養したところ、２８５個の
雑種Ｆ1 植物体が得られた（平均育成率は３０．２
％）。一般に従来の属間雑種の育成率は２〜５％程度で
あるから、本発明における雑種Ｆ1 育成率は極めて高い
水準にあると考えられた。
【００１７】得られた雑種Ｆ1 植物をそれぞれ花粉親と
母親にして、ナタネ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ，
ｃｖ．Ｗｅｓｔａｒ）およびキャンペストリス（Ｂｒａ
ｓｓｉｃａ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ，ｃｖ．Ｔｏｂｉ
ｎ）との連続戻交雑、花粉稔性と稔実性および染色体数
を基準とする選抜を行ったところ、ダイコンのＲｆ遺伝
子を持ち、植物学的ならびに細胞学的に安定したナタネ
回復系が育成された。さらにこの回復系は、自殖によっ
て容易に維持され、かつＣＭＳナタネに交配することで
高いヘテローシスを示す雑種Ｆ1 を得ることができた。
母親にして、ナタネ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ，
ｃｖ．Ｗｅｓｔａｒ）およびキャンペストリス（Ｂｒａ
ｓｓｉｃａ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ，ｃｖ．Ｔｏｂｉ
ｎ）との連続戻交雑、花粉稔性と稔実性および染色体数
を基準とする選抜を行ったところ、ダイコンのＲｆ遺伝
子を持ち、植物学的ならびに細胞学的に安定したナタネ
回復系が育成された。さらにこの回復系は、自殖によっ
て容易に維持され、かつＣＭＳナタネに交配することで
高いヘテローシスを示す雑種Ｆ1 を得ることができた。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年７月２０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００７】本発明で使用されるブラシカ属植物として
は、ラファナス属植物のＣＭＳを導入したもの、正常な
細胞質を有する優良品種等のいずれも使用できる。本発
明においてはナタネ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ）
が好ましく、具体的にはナタネ品種 ウェスター（Ｂｒ
ａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ，ｃｖ．Ｗｅｓｔａｒ）に小
瀬菜ダイコンのＣＭＳを導入した品種またはその優良栽
培品種等が挙げられる。
は、ラファナス属植物のＣＭＳを導入したもの、正常な
細胞質を有する優良品種等のいずれも使用できる。本発
明においてはナタネ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ）
が好ましく、具体的にはナタネ品種 ウェスター（Ｂｒ
ａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ，ｃｖ．Ｗｅｓｔａｒ）に小
瀬菜ダイコンのＣＭＳを導入した品種またはその優良栽
培品種等が挙げられる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００８】ラファナス属植物としては、ラファナス属
植物のＲｆ遺伝子を持つ系統や品種であれば特に制限は
されない。本発明においてはダイコン（Ｒａｐｈａｎｕ
ｓｓａｔｉｖｕｓ）が好ましく、具体的には日本の小瀬
菜ダイコン（Ｒ．ｓａｔｉｖｕｓ，ｃｖ．Ｋｏｓｅｎ
ａ）や、中国のダイコン品種である園紅（Ｒ．ｓａｔｉ
ｖｕｓ，ｃｖ．Ｙｕａｎｈｏｎｇ）、心里美（Ｒ．ｓａ
ｔｉｖｕｓ，ｃｖ．Ｘｉｎｌｉｍｅｉ）等が挙げられ
る。本発明においては、まずブラシカ属植物および細胞
質雄性不稔性に対応する稔性回復遺伝子を有するラファ
ナス属植物とを属間交雑する。具体的には、開花したブ
ラシカ属植物（品種の場合は除雄しておく）にラファナ
ス属植物の花粉を授粉すればよい。
植物のＲｆ遺伝子を持つ系統や品種であれば特に制限は
されない。本発明においてはダイコン（Ｒａｐｈａｎｕ
ｓｓａｔｉｖｕｓ）が好ましく、具体的には日本の小瀬
菜ダイコン（Ｒ．ｓａｔｉｖｕｓ，ｃｖ．Ｋｏｓｅｎ
ａ）や、中国のダイコン品種である園紅（Ｒ．ｓａｔｉ
ｖｕｓ，ｃｖ．Ｙｕａｎｈｏｎｇ）、心里美（Ｒ．ｓａ
ｔｉｖｕｓ，ｃｖ．Ｘｉｎｌｉｍｅｉ）等が挙げられ
る。本発明においては、まずブラシカ属植物および細胞
質雄性不稔性に対応する稔性回復遺伝子を有するラファ
ナス属植物とを属間交雑する。具体的には、開花したブ
ラシカ属植物（品種の場合は除雄しておく）にラファナ
ス属植物の花粉を授粉すればよい。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１４】
【実施例】以下、本発明につき実施例を挙げて詳細に説
明するが、その要旨を越えない限り以下に限定されるも
のではない。 実施例１ 小瀬菜ダイコンのＣＭＳ遺伝子を持ったナタネ（Ｂ．ｎ
ａｐｕｓ，ＣＭＳ ｌｉｎｅ）に、それに対応するＲｆ
遺伝子を持つ小瀬菜ダイコン（Ｒ．ｓａｔｉｖｕｓ，ｃ
ｖ．Ｋｏｓｅｎａ）および中国ダイコン品種の園紅
（Ｒ．ｓａｔｉｖｕｓ，ｃｖ．Ｙｕａｎｈｏｎｇ）と心
里美（Ｒ．ｓａｔｉｖｕｓ，ｃｖ．Ｘｉｎｌｉｍｅｉ）
の花粉を掛け合わせた。授粉後４〜７日目の子房を切り
取って、０．５％の次亜塩素酸ナトリウム溶液で１０分
間殺菌を行った。滅菌水で３回洗浄した後、２０ｍｌの
寒天培地が分注された直径１０ｃｍのプラスチックシャ
ーレに植え込んだ。このときの培地は、Ｎｉｔｓｃｈ
＆ Ｎｉｔｓｃｈ（１９６７）の無機塩にＷｈｉｔｅ
（１９４３）のビタミンと３００ｍｇ／ｌのＣＨと２％
のＣＭ、および５％のショ糖を入れ、０．６％のアガロ
ースで固形化したものを使用した。また培養は、２５±
１℃の恒温室で、１０００ルクス、一日１４時間の蛍光
灯照明条件下で行った。
明するが、その要旨を越えない限り以下に限定されるも
のではない。 実施例１ 小瀬菜ダイコンのＣＭＳ遺伝子を持ったナタネ（Ｂ．ｎ
ａｐｕｓ，ＣＭＳ ｌｉｎｅ）に、それに対応するＲｆ
遺伝子を持つ小瀬菜ダイコン（Ｒ．ｓａｔｉｖｕｓ，ｃ
ｖ．Ｋｏｓｅｎａ）および中国ダイコン品種の園紅
（Ｒ．ｓａｔｉｖｕｓ，ｃｖ．Ｙｕａｎｈｏｎｇ）と心
里美（Ｒ．ｓａｔｉｖｕｓ，ｃｖ．Ｘｉｎｌｉｍｅｉ）
の花粉を掛け合わせた。授粉後４〜７日目の子房を切り
取って、０．５％の次亜塩素酸ナトリウム溶液で１０分
間殺菌を行った。滅菌水で３回洗浄した後、２０ｍｌの
寒天培地が分注された直径１０ｃｍのプラスチックシャ
ーレに植え込んだ。このときの培地は、Ｎｉｔｓｃｈ
＆ Ｎｉｔｓｃｈ（１９６７）の無機塩にＷｈｉｔｅ
（１９４３）のビタミンと３００ｍｇ／ｌのＣＨと２％
のＣＭ、および５％のショ糖を入れ、０．６％のアガロ
ースで固形化したものを使用した。また培養は、２５±
１℃の恒温室で、１０００ルクス、一日１４時間の蛍光
灯照明条件下で行った。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１６】このように培地上で本葉および根共に発達
してきた幼植物体は、１０００倍希釈のハイポネックス
を添加し、滅菌したバーミキュライトに移植して培養瓶
の蓋代わりに通気性のよいミリラップを使用することに
より、効率よく植物体を馴化することができた。
してきた幼植物体は、１０００倍希釈のハイポネックス
を添加し、滅菌したバーミキュライトに移植して培養瓶
の蓋代わりに通気性のよいミリラップを使用することに
より、効率よく植物体を馴化することができた。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１７】上述した方法に従って、ＣＭＳナタネ（Ｂ
ｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ，ＣＭＳ ｌｉｎｅ；ゲノ
ム構成はＡＡＣＣ、染色体数は２ｎ＝３８、花の色は黄
色）と小瀬菜ダイコン（Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖ
ｕｓ，ｃｖ．Ｋｏｓｅｎａ；ゲノム構成はＲRfＲRf、染
色体数は２ｎ＝１８、花の色は白色）、園紅（Ｒａｐｈ
ａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ，ｃｖ．Ｙｕａｎｈｏｎｇ；
ゲノム構成はＲRfＲRf、染色体数は２ｎ＝１８、花の色
は白色）、心里美（Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕ
ｓ，ｃｖ．Ｘｉｎｌｉｍｅｉ；ゲノム構成はＲRfＲRf、
染色体数は２ｎ＝１８、花の色は白色）それぞれとの交
配を行い、計９４４個の子房を培養したところ、２８５
個の雑種Ｆ1 植物体が得られた（平均育成率は３０．２
％）。一般に従来の属間雑種の育成率は２〜５％程度で
あるから、本発明における雑種Ｆ1育成率は極めて高い
水準にあると考えられた。例えば、ＣＭＳナタネと園紅
との交配から得られた雑種Ｆ1 系統（Ｙ１１−２３）
は、花粉稔性が４２．３％、ゲノム構成はＡＣＲRf、染
色体数は２ｎ＝２８、花の色は白色であった。得られた
雑種Ｆ1 植物をそれぞれ花粉親と母親にして、ナタネ
（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ，ｃｖ．Ｗｅｓｔａ
ｒ）およびキャンペストリス（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａ
ｍｐｅｓｔｒｉｓ，ｃｖ．Ｔｏｂｉｎ）との連続戻交
雑、花粉稔性と稔実性および染色体数を基準とする選抜
を行ったところ、ダイコンのＲｆ遺伝子を持ち、植物学
的ならびに細胞学的に安定したナタネ回復系が育成され
た。例えばＹ１１−２３系統とナタネとの戻交雑によっ
て得られたＹ１１−２３Ｗ−９系統（花粉稔性が４７．
０％、ゲノム構成はＡＡＣＣＲRf′、染色体数は２ｎ＝
４２、花の色は白色）をＣＭＳナタネと戻交雑すること
により、ＲＦ２２２系統（花粉稔性が７８．４％、ゲノ
ム構成はＡＡＣＣRf′、染色体数は２ｎ＝３８、花の色
は黄色）およびＲＦ２７７系統（花粉稔性が８３．１
％、ゲノム構成はＡＡＣＣRf′、染色体数は２ｎ＝３
８、花の色は黄色）などが得られた。またＹ１１−２３
系統とナタネとの戻交雑によって得られたＹ１１−２３
Ｗ−１０系統（花粉稔性が０．８％、ゲノム構成はＡＡ
ＣＣＲRf′、染色体数は２ｎ＝４６、花の色は白色）を
ナタネと戻交雑することにより、ＲＦ８８系統（花粉稔
性が９１．２％、ゲノム構成はＡＡＣＣRf′、染色体数
は２ｎ＝３８、花の色は黄色）、ＲＦ９２系統（花粉稔
性が７５．２％、ゲノム構成はＡＡＣＣRf′、染色体数
は２ｎ＝３８、花の色は黄色）、ＲＦ９４系統（花粉稔
性が７９．４％、ゲノム構成はＡＡＣＣRf′、染色体数
は２ｎ＝３８、花の色は黄色）およびＲＦ１３８系統
（花粉稔性が７３．４％、ゲノム構成はＡＡＣＣRf′、
染色体数は２ｎ＝３８、花の色は黄色）などが得られた
（下記の表 参照）。
ｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ，ＣＭＳ ｌｉｎｅ；ゲノ
ム構成はＡＡＣＣ、染色体数は２ｎ＝３８、花の色は黄
色）と小瀬菜ダイコン（Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖ
ｕｓ，ｃｖ．Ｋｏｓｅｎａ；ゲノム構成はＲRfＲRf、染
色体数は２ｎ＝１８、花の色は白色）、園紅（Ｒａｐｈ
ａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ，ｃｖ．Ｙｕａｎｈｏｎｇ；
ゲノム構成はＲRfＲRf、染色体数は２ｎ＝１８、花の色
は白色）、心里美（Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕ
ｓ，ｃｖ．Ｘｉｎｌｉｍｅｉ；ゲノム構成はＲRfＲRf、
染色体数は２ｎ＝１８、花の色は白色）それぞれとの交
配を行い、計９４４個の子房を培養したところ、２８５
個の雑種Ｆ1 植物体が得られた（平均育成率は３０．２
％）。一般に従来の属間雑種の育成率は２〜５％程度で
あるから、本発明における雑種Ｆ1育成率は極めて高い
水準にあると考えられた。例えば、ＣＭＳナタネと園紅
との交配から得られた雑種Ｆ1 系統（Ｙ１１−２３）
は、花粉稔性が４２．３％、ゲノム構成はＡＣＲRf、染
色体数は２ｎ＝２８、花の色は白色であった。得られた
雑種Ｆ1 植物をそれぞれ花粉親と母親にして、ナタネ
（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ，ｃｖ．Ｗｅｓｔａ
ｒ）およびキャンペストリス（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａ
ｍｐｅｓｔｒｉｓ，ｃｖ．Ｔｏｂｉｎ）との連続戻交
雑、花粉稔性と稔実性および染色体数を基準とする選抜
を行ったところ、ダイコンのＲｆ遺伝子を持ち、植物学
的ならびに細胞学的に安定したナタネ回復系が育成され
た。例えばＹ１１−２３系統とナタネとの戻交雑によっ
て得られたＹ１１−２３Ｗ−９系統（花粉稔性が４７．
０％、ゲノム構成はＡＡＣＣＲRf′、染色体数は２ｎ＝
４２、花の色は白色）をＣＭＳナタネと戻交雑すること
により、ＲＦ２２２系統（花粉稔性が７８．４％、ゲノ
ム構成はＡＡＣＣRf′、染色体数は２ｎ＝３８、花の色
は黄色）およびＲＦ２７７系統（花粉稔性が８３．１
％、ゲノム構成はＡＡＣＣRf′、染色体数は２ｎ＝３
８、花の色は黄色）などが得られた。またＹ１１−２３
系統とナタネとの戻交雑によって得られたＹ１１−２３
Ｗ−１０系統（花粉稔性が０．８％、ゲノム構成はＡＡ
ＣＣＲRf′、染色体数は２ｎ＝４６、花の色は白色）を
ナタネと戻交雑することにより、ＲＦ８８系統（花粉稔
性が９１．２％、ゲノム構成はＡＡＣＣRf′、染色体数
は２ｎ＝３８、花の色は黄色）、ＲＦ９２系統（花粉稔
性が７５．２％、ゲノム構成はＡＡＣＣRf′、染色体数
は２ｎ＝３８、花の色は黄色）、ＲＦ９４系統（花粉稔
性が７９．４％、ゲノム構成はＡＡＣＣRf′、染色体数
は２ｎ＝３８、花の色は黄色）およびＲＦ１３８系統
（花粉稔性が７３．４％、ゲノム構成はＡＡＣＣRf′、
染色体数は２ｎ＝３８、花の色は黄色）などが得られた
（下記の表 参照）。
【表１】 表 ダイコンの稔性回復遺伝子を導入したナタネ回復系の特性 ─────────────────────────────── 回復系番号 花色 染色体数（本） 花粉稔性（％） ─────────────────────────────── ＲＦ８８ 黄色 ３８ ９１．２ ＲＦ９２ 黄色 ３８ ７５．２ ＲＦ９４ 黄色 ３８ ７９．４ ＲＦ１３８ 黄色 ３８ ７３．４ ＲＦ２２２ 黄色 ３８ ７８．４ ＲＦ２７７ 黄色 ３８ ８３．１ ─────────────────────────────── さらにこの回復系は、自殖によって容易に維持され、か
つＣＭＳナタネに交配することで高いヘテローシスを示
す雑種Ｆ1 を得ることができた。
つＣＭＳナタネに交配することで高いヘテローシスを示
す雑種Ｆ1 を得ることができた。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】追加
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】ＣＭＳナタネと中国のダイコン品種である園紅
との属間交雑により得られる雑種Ｆ1、およびその雑種
Ｆ1をナタネと連続戻交雑して得られるナタネ回復系の
育成フローを表す図面である。
との属間交雑により得られる雑種Ｆ1、およびその雑種
Ｆ1をナタネと連続戻交雑して得られるナタネ回復系の
育成フローを表す図面である。
【図２】ダイコンの稔性回復遺伝子が導入されたナタネ
回復系ＲＦ８８の花器を表す、図面に代わる写真であ
る。
回復系ＲＦ８８の花器を表す、図面に代わる写真であ
る。
【図３】ダイコンの稔性回復遺伝子が導入されたナタネ
回復系ＲＦ８８の花粉を表す、図面に代わる写真であ
る。
回復系ＲＦ８８の花粉を表す、図面に代わる写真であ
る。
【図４】ダイコンの稔性回復遺伝子が導入されたナタネ
回復系ＲＦ８８の染色体を表す、図面に代わる写真であ
る。
回復系ＲＦ８８の染色体を表す、図面に代わる写真であ
る。
【手続補正７】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 栗原 宏幸 神奈川県横浜市緑区鴨志田町1000番地 株 式会社植物工学研究所内 (72)発明者 今村 順 神奈川県横浜市緑区鴨志田町1000番地 株 式会社植物工学研究所内
Claims (5)
- 【請求項１】 ブラシカ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）植物お
よび細胞質雄性不稔性に対応する稔性回復遺伝子を有す
るラファナス属（Ｒａｐｈａｎｕｓ）植物を属間交雑、
次いで子房培養を行うことを特徴とするブラシカ属植物
への稔性回復遺伝子の導入方法。 - 【請求項２】 子房培養後、連続戻交雑を行うことを特
徴とする請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 ブラシカ属植物が、ナタネ（Ｂｒａｓｓ
ｉｃａ ｎａｐｕｓ）であることを特徴とする請求項１
記載の方法。 - 【請求項４】 ラファナス属植物が、ダイコン（Ｒａｐ
ｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ）であることを特徴とする
請求項１記載の方法。 - 【請求項５】 請求項１記載の方法によりラファナス属
植物の稔性回復遺伝子が導入されたブラシカ属植物。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4276070A JPH06141716A (ja) | 1992-10-14 | 1992-10-14 | 稔性回復遺伝子の導入方法 |
| CA002108230A CA2108230C (en) | 1992-10-14 | 1993-10-12 | Methods for introducing a fertility restorer gene and for producing f1 hybrid of brassica plants thereby |
| CN93115012A CN1067511C (zh) | 1992-10-14 | 1993-10-14 | 引入育性恢复基因并由此制备芸苔属植物f1杂种的方法 |
| DE69329943T DE69329943T2 (de) | 1992-10-14 | 1993-10-14 | Verfahren zur Introduktion von einem fruchtbarkeitswiederherstellenden Gen und zur Produktion von Brassica F1-Hybriden |
| US08/136,023 US5644066A (en) | 1992-10-14 | 1993-10-14 | Methods for introducing a fertility restorer gene and for producing F1 |
| EP93116633A EP0599042B1 (en) | 1992-10-14 | 1993-10-14 | Methods for introducing a fertility restorer gene and for producing F1 hybrids of Brassica plants thereby |
| DK93116633T DK0599042T3 (da) | 1992-10-14 | 1993-10-14 | Fremgangsmåder til indføring af et fertilitetsgenopretningsgen og til produktion af F1-hybrid af brassica-planter dermed |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4276070A JPH06141716A (ja) | 1992-10-14 | 1992-10-14 | 稔性回復遺伝子の導入方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06141716A true JPH06141716A (ja) | 1994-05-24 |
Family
ID=17564387
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4276070A Pending JPH06141716A (ja) | 1992-10-14 | 1992-10-14 | 稔性回復遺伝子の導入方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06141716A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101871806B1 (ko) * | 2017-09-01 | 2018-06-28 | 주식회사 에프앤피 | 유채의 웅성불임성 회복 유전자형 판별용 마커 및 이를 이용한 판별방법 |
-
1992
- 1992-10-14 JP JP4276070A patent/JPH06141716A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101871806B1 (ko) * | 2017-09-01 | 2018-06-28 | 주식회사 에프앤피 | 유채의 웅성불임성 회복 유전자형 판별용 마커 및 이를 이용한 판별방법 |
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