JPH061272B2 - 抗原と白血球細胞抗体間の反応程度を測定する方法及びその装置 - Google Patents
抗原と白血球細胞抗体間の反応程度を測定する方法及びその装置Info
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- JPH061272B2 JPH061272B2 JP59228042A JP22804284A JPH061272B2 JP H061272 B2 JPH061272 B2 JP H061272B2 JP 59228042 A JP59228042 A JP 59228042A JP 22804284 A JP22804284 A JP 22804284A JP H061272 B2 JPH061272 B2 JP H061272B2
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- G01N15/10—Investigating individual particles
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- G—PHYSICS
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
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- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56972—White blood cells
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、抗原／白血球細胞抗体反応の領域に関する
ものであり、更に詳しくは、ヒトの血液に存在する細胞
抗体のレベルの間接的測定、および特殊な個人の血液に
存在する抗原と白血球細胞抗体間の反応程度を測定する
方法及びその装置に関する。
ものであり、更に詳しくは、ヒトの血液に存在する細胞
抗体のレベルの間接的測定、および特殊な個人の血液に
存在する抗原と白血球細胞抗体間の反応程度を測定する
方法及びその装置に関する。
アレルギーは、世界中の数百万の人々の生命に関する一
般的で、肉体的衰弱をもたらす現象である。アレルギー
反応を含む基本的な肉体上の反応は広く知られている。
般的で、肉体的衰弱をもたらす現象である。アレルギー
反応を含む基本的な肉体上の反応は広く知られている。
同化アミノ酸、すなわち、抗原（以下、一般に「本物
質」と称する〉が体内に入つたとき、身体の免疫防御シ
ステムは、それが、有害なものであるか（すなわち、そ
の物質が「毒素」または「アレルゲン」であるか）、ま
たは有害なものでないか（すなわち、その物質が「中
性」であるか）を識別する。その物質が中性のものであ
ると識別されれば、身体が、異常な仕方で反応すること
はない。
質」と称する〉が体内に入つたとき、身体の免疫防御シ
ステムは、それが、有害なものであるか（すなわち、そ
の物質が「毒素」または「アレルゲン」であるか）、ま
たは有害なものでないか（すなわち、その物質が「中
性」であるか）を識別する。その物質が中性のものであ
ると識別されれば、身体が、異常な仕方で反応すること
はない。
しかし、その物質が、アレルゲンであると識別された場
合、身体は、侵入アレルゲンとたたかう特殊細胞抗体を
作り出すことにより、それ自体を保護するように反応す
る。
合、身体は、侵入アレルゲンとたたかう特殊細胞抗体を
作り出すことにより、それ自体を保護するように反応す
る。
この場合に、本発明者が観察したことは、身体の最初の
反応が、白血球（leukocytes）の内圧を増大させ、それ
によつて白血球の外部細胞膜壁を破壊しながら、白血球
を拡大させることあり、このことが、細胞の中味が突出
することを可能にするということである。これが、アレ
ルゲンに対する白血球の観察された反応である。抗原／
抗体反応を試験する主たる既知の方法は、「細胞毒性試
験」として周知のものであり、北米耳鼻咽喉科学の４臨
床講義（４Otolaryngologic Clinics of North Americ
a）（No.３）ページ523−34（1971年10月）の食物アレ
ルギーの診断における細胞毒性反応で、W.T.K.Bryan等
により詳細に記述されている。本質的に、この方法は、
顕微鏡スライド上で予め乾燥された疑わしいアレルゲン
の少量の乾燥抽出物と、患者の血液サンプルを混合する
ことより成る。この混合物は、約２時間反応され、その
後、観察される。疑わしいアレルゲンと白血球との間の
反応がもしあれば、その程度が直接観察され、そして、
少数の観察された細胞の状態が、アレルギー反応の発生
を示しているかどうかを決定する訓練された技術者によ
り、疑わしいアレルゲンと白血球との間の反応の程度が
主観的に判定される。それ故に、この試験の精度は、こ
の試験を実施する技術者個人の能力および技倆に全面的
に存在する。それ故に、この試験が主観的なものである
ので、その信頼性は、技術者に与えられたトレーニング
の質に依存するであろう。従つて、その結果が、技術者
毎に異なるのは無理のないところである。詳述されてい
るような細胞毒性試験を実施するため、技術者を適切に
訓練するには長い教育期間を要することが注目される。
従つて、この試験の主観的性質は、それが信頼できない
もので、不正確性が生ずる恐れがあるので、極めて望ま
しくないものである。
反応が、白血球（leukocytes）の内圧を増大させ、それ
によつて白血球の外部細胞膜壁を破壊しながら、白血球
を拡大させることあり、このことが、細胞の中味が突出
することを可能にするということである。これが、アレ
ルゲンに対する白血球の観察された反応である。抗原／
抗体反応を試験する主たる既知の方法は、「細胞毒性試
験」として周知のものであり、北米耳鼻咽喉科学の４臨
床講義（４Otolaryngologic Clinics of North Americ
a）（No.３）ページ523−34（1971年10月）の食物アレ
ルギーの診断における細胞毒性反応で、W.T.K.Bryan等
により詳細に記述されている。本質的に、この方法は、
顕微鏡スライド上で予め乾燥された疑わしいアレルゲン
の少量の乾燥抽出物と、患者の血液サンプルを混合する
ことより成る。この混合物は、約２時間反応され、その
後、観察される。疑わしいアレルゲンと白血球との間の
反応がもしあれば、その程度が直接観察され、そして、
少数の観察された細胞の状態が、アレルギー反応の発生
を示しているかどうかを決定する訓練された技術者によ
り、疑わしいアレルゲンと白血球との間の反応の程度が
主観的に判定される。それ故に、この試験の精度は、こ
の試験を実施する技術者個人の能力および技倆に全面的
に存在する。それ故に、この試験が主観的なものである
ので、その信頼性は、技術者に与えられたトレーニング
の質に依存するであろう。従つて、その結果が、技術者
毎に異なるのは無理のないところである。詳述されてい
るような細胞毒性試験を実施するため、技術者を適切に
訓練するには長い教育期間を要することが注目される。
従つて、この試験の主観的性質は、それが信頼できない
もので、不正確性が生ずる恐れがあるので、極めて望ま
しくないものである。
この発明の目的は、疑わしいアレルゲンと、患者の白血
球の間の反応の程度を客観的に測定する方法と装置を提
供することにある。
球の間の反応の程度を客観的に測定する方法と装置を提
供することにある。
更に、この発明の目的は、精度および信頼性が、技術者
による顕微反応の主観的解釈によらない改良された方法
と装置を提供することにある。
による顕微反応の主観的解釈によらない改良された方法
と装置を提供することにある。
この発明の目的はまた、限られた顕微解釈とは対照的
に、数千の白血球の反応を得ることにある。これは、我
々に、より広範な平均値を与えるのであろう。また、正
常サイズ細胞分布から、特殊サイズ分布を得ることも、
この発明の目的である。
に、数千の白血球の反応を得ることにある。これは、我
々に、より広範な平均値を与えるのであろう。また、正
常サイズ細胞分布から、特殊サイズ分布を得ることも、
この発明の目的である。
更に、この発明の他の目的は、数千の白血球の計算に基
づく試験結果を得ること、および、抗原の存在下で白血
球の細胞変位のみならず、破壊の直接測定を得ることに
ある。
づく試験結果を得ること、および、抗原の存在下で白血
球の細胞変位のみならず、破壊の直接測定を得ることに
ある。
この発明の前述および他の目的に基づいて、疑わしいア
レルゲンと、少くとも１つの血液サンプルとの間の反応
の程度を客観的に測定するための方法が提供される。こ
の方法は、次の過程より構成される；患者の第１の血液
サンプルの白血球数を数えること；第１の血液サンプル
と同一の第２の血液サンプルと疑わしいアレルゲンを混
合すること；その混合物の白血球を数えること；および
第１の血液サンプルの白血球数と混合物のそれとを比較
することからなる。
レルゲンと、少くとも１つの血液サンプルとの間の反応
の程度を客観的に測定するための方法が提供される。こ
の方法は、次の過程より構成される；患者の第１の血液
サンプルの白血球数を数えること；第１の血液サンプル
と同一の第２の血液サンプルと疑わしいアレルゲンを混
合すること；その混合物の白血球を数えること；および
第１の血液サンプルの白血球数と混合物のそれとを比較
することからなる。
この発明の第１実施例について説明すると、最初の対照
サンプルの白血球数を数え、疑わしいアレルゲンを混合
した第２血液サンプルの白血球数を数え各計数値より構
成されるアウトプットされたデータを有するカウンタ
ー；カウンターが実施した白血球計数のサイズ分布を発
生させるため、これらのアウトプツトを分布するカウン
ターからアウトプツトされたデータを解析するアナライ
ザー；第１と第２血液サンプルの計数値と、それぞれの
サイズ分布を比較し、それによつて、疑わしいアレルゲ
ンがアレルギー反応を起すかどうかを測定するアナライ
ザーよりアウトプットされたデータを解析する比較手段
を提供することができる。
サンプルの白血球数を数え、疑わしいアレルゲンを混合
した第２血液サンプルの白血球数を数え各計数値より構
成されるアウトプットされたデータを有するカウンタ
ー；カウンターが実施した白血球計数のサイズ分布を発
生させるため、これらのアウトプツトを分布するカウン
ターからアウトプツトされたデータを解析するアナライ
ザー；第１と第２血液サンプルの計数値と、それぞれの
サイズ分布を比較し、それによつて、疑わしいアレルゲ
ンがアレルギー反応を起すかどうかを測定するアナライ
ザーよりアウトプットされたデータを解析する比較手段
を提供することができる。
第１図に示すように、この発明の装置１０は、各々直列
に接続したカウンター１２、アナライザー１４、コンピ
ュータ・インターフエース１６、コンピュータ１８、な
らびにコンピュータ１８よりアウトプツトされたデータ
を利用するデイスク２０、プリンター２２およびプリン
ター２４を備える。
に接続したカウンター１２、アナライザー１４、コンピ
ュータ・インターフエース１６、コンピュータ１８、な
らびにコンピュータ１８よりアウトプツトされたデータ
を利用するデイスク２０、プリンター２２およびプリン
ター２４を備える。
この発明の装置の操作を開始するために、そのユーザー
は、最初に、試験を受ける患者から血液サンプルを得な
ければならない。望ましくは、ユーザーは、試験中の血
液の凝固を防ぐため抗議固剤としてクエン酸ナトリウム
を用いて、被験者から蓚酸塩加血液１０ccを採る（すな
わち、血液は、ブルートップＢ−Ｄブランドのバキュテ
ーナーに貯蔵される。） 血液サンプルの全容量に均一細胞分布を確保するため
に、バキユテーナーから、連続流体循環能力のある装置
（図示せず）へ、既知の方法で血液を移すことが必要で
ある。
は、最初に、試験を受ける患者から血液サンプルを得な
ければならない。望ましくは、ユーザーは、試験中の血
液の凝固を防ぐため抗議固剤としてクエン酸ナトリウム
を用いて、被験者から蓚酸塩加血液１０ccを採る（すな
わち、血液は、ブルートップＢ−Ｄブランドのバキュテ
ーナーに貯蔵される。） 血液サンプルの全容量に均一細胞分布を確保するため
に、バキユテーナーから、連続流体循環能力のある装置
（図示せず）へ、既知の方法で血液を移すことが必要で
ある。
患者から採取した単一の血液サンプルを数多くのアレル
ギーの一群の試験中に用いることが望ましい。従つて、
血液は、試験用に、更に小さな複数のサンプルに分離さ
れる。望ましい分離方法は、適切な懸濁媒質、すなわ
ち、１０ccまたは２０ccのIsotonII（Coulter Electron
ics Ltd.製）を含む容器に１００マイクロリツトルの血
液を入れることである。用いられるIsotonIIの正確な量
は、重要でないが、同じ量が試験を通して、すなわち、
同じ血液の各サンプルに使用されなければならない。こ
れによって、供試および対照サンプルについて得られる
測定値が、この供試および対照サンプルが同一数の白血
球と容積とを有する故に、直接比較できることを保証す
るものである。
ギーの一群の試験中に用いることが望ましい。従つて、
血液は、試験用に、更に小さな複数のサンプルに分離さ
れる。望ましい分離方法は、適切な懸濁媒質、すなわ
ち、１０ccまたは２０ccのIsotonII（Coulter Electron
ics Ltd.製）を含む容器に１００マイクロリツトルの血
液を入れることである。用いられるIsotonIIの正確な量
は、重要でないが、同じ量が試験を通して、すなわち、
同じ血液の各サンプルに使用されなければならない。こ
れによって、供試および対照サンプルについて得られる
測定値が、この供試および対照サンプルが同一数の白血
球と容積とを有する故に、直接比較できることを保証す
るものである。
この点において、各サンプルは、IsotonIIおよび全血液
の混合物から成り、さらに白血球、赤血球および血小板
が含まれている。但し、検討される反応にとって重要な
粒子は白血球のみであり、白血球の細胞のみが計数され
ることが必要である。望ましい実施例では、カウンター
１２は、Coulter Counter ModelZ-Mで、これを一定サイ
ズの範囲内の粒子数を数えるように設定してもよい。か
くして、血小板は、白血球よりはるかに小さいので、血
小板のそれよりも大きなサイズで、白血球のそれよりも
小さいサイズ（例えば、４８ミクロン）の最小粒子サイ
ズを設定することにより、それらの計算を避けることは
簡単である。
の混合物から成り、さらに白血球、赤血球および血小板
が含まれている。但し、検討される反応にとって重要な
粒子は白血球のみであり、白血球の細胞のみが計数され
ることが必要である。望ましい実施例では、カウンター
１２は、Coulter Counter ModelZ-Mで、これを一定サイ
ズの範囲内の粒子数を数えるように設定してもよい。か
くして、血小板は、白血球よりはるかに小さいので、血
小板のそれよりも大きなサイズで、白血球のそれよりも
小さいサイズ（例えば、４８ミクロン）の最小粒子サイ
ズを設定することにより、それらの計算を避けることは
簡単である。
白血球とほぼ比較できるサイズである赤血球の計算を避
けるため、これらの細胞を除去することが望ましい。こ
のことは、赤血球を直ちに分解させる物質（「溶解」物
質）、例えば、ZapoglobinII（Coulter）を加えること
で望ましく達成される。代わりに、赤血球をサンプルか
ら機械的に除去することができる。赤血球を除去し、カ
ウンター１２を予め設定した最小サイズレベルにセツト
した後、カウンター１２は、最初のサンプルの白血球を
数え、分類（siZe）するのに使用することができる。こ
の最初のサンプルは、その中に疑わしいアレルゲンを導
入していないので、対照サンプルとして使用される。
けるため、これらの細胞を除去することが望ましい。こ
のことは、赤血球を直ちに分解させる物質（「溶解」物
質）、例えば、ZapoglobinII（Coulter）を加えること
で望ましく達成される。代わりに、赤血球をサンプルか
ら機械的に除去することができる。赤血球を除去し、カ
ウンター１２を予め設定した最小サイズレベルにセツト
した後、カウンター１２は、最初のサンプルの白血球を
数え、分類（siZe）するのに使用することができる。こ
の最初のサンプルは、その中に疑わしいアレルゲンを導
入していないので、対照サンプルとして使用される。
残余の（「供試」）血液サンプルも同様に扱われる。但
し、供試サンプルが、それに疑わしいアレルゲンが加え
られている場合は除く。現在、既知の溶解剤は、白血球
にとつて危険であるかもしれない。依つて、現在、次の
方法が望ましい。
し、供試サンプルが、それに疑わしいアレルゲンが加え
られている場合は除く。現在、既知の溶解剤は、白血球
にとつて危険であるかもしれない。依つて、現在、次の
方法が望ましい。
手順Ｉ：患者の決１００マイクロリツトルを予め定めら
れた量の懸濁媒質に入れる。血液の連続混合の故に、そ
の各１００マイクロリツトルは、実際に同一の数と細胞
サイズ分布を有するであろう。
れた量の懸濁媒質に入れる。血液の連続混合の故に、そ
の各１００マイクロリツトルは、実際に同一の数と細胞
サイズ分布を有するであろう。
手順II：予め混合した食物抽出物１００マイクロリツト
ルを供試サンプルに加える。対照サンプルには何も加え
ない。この２つのサンプルを６０分間放置する。
ルを供試サンプルに加える。対照サンプルには何も加え
ない。この２つのサンプルを６０分間放置する。
手順III：ZapoglobinIIを用いて、赤血球を溶解する。L
yse−Ｓ−II、Lyse−Ｓ−IIIまたはAcid Lyse（すべてC
oulter製）を用いて、正常な無反応白血球を破壊せず
に、反応白血球を溶解する。対照サンプルで数えられた
白血球の数に応じて、その薬剤５０マイクロリツトルか
それ以上を用いることが望ましい。そして、Lyse−Ｓ−
IIとLyse−Ｓ−IIIの１００マイクロリツトル混合物
は、正常白血球レベルにとつては、通常、十分なもので
ある。
yse−Ｓ−II、Lyse−Ｓ−IIIまたはAcid Lyse（すべてC
oulter製）を用いて、正常な無反応白血球を破壊せず
に、反応白血球を溶解する。対照サンプルで数えられた
白血球の数に応じて、その薬剤５０マイクロリツトルか
それ以上を用いることが望ましい。そして、Lyse−Ｓ−
IIとLyse−Ｓ−IIIの１００マイクロリツトル混合物
は、正常白血球レベルにとつては、通常、十分なもので
ある。
手順IV：溶解後３０秒で、白血球数と細胞分布の記録を
とる。
とる。
疑わしいアレルゲンの食物抽出物は、乾燥抽出物１００
mgを、IsotonIIまたはIII（または、その混合物）１０m
lに加えることにより、あるいは、注入可能、無parage
n、減菌水１０mlに加えることにより調製される。この
混合物を、２４時間、室温で放置した後、固形粒子をろ
過できるメツシユを通してろ過される。適切な抽出物
は、Hollister Steel Co.により製造されている。記述
したように調製された疑わしいアレルゲンは、１０日
間、４℃で貯蔵できる。記述したように調製した採取血
液１０立方センチメートルは、約７５の試験に適当であ
ろう。
mgを、IsotonIIまたはIII（または、その混合物）１０m
lに加えることにより、あるいは、注入可能、無parage
n、減菌水１０mlに加えることにより調製される。この
混合物を、２４時間、室温で放置した後、固形粒子をろ
過できるメツシユを通してろ過される。適切な抽出物
は、Hollister Steel Co.により製造されている。記述
したように調製された疑わしいアレルゲンは、１０日
間、４℃で貯蔵できる。記述したように調製した採取血
液１０立方センチメートルは、約７５の試験に適当であ
ろう。
この時点で、供試サンプルをカウンター１２に入れ、そ
の中の白血球数を数えることができる。
の中の白血球数を数えることができる。
カウンター１２でアウトプツトされたデータを視覚で読
み取り、供試サンプル中の白血球数が、対照のそれより
も少い、すなわち陽性の反応を示すかどうかを測定する
か、あるいは、それを、例えば、Coulter Channelyzer
のようなアナライザー１４にインプツトし、複数のサイ
ズ分布範囲の各々に存在する白血球の細胞母集団分布を
得ることができる。これを、「サイジング（sizing）」
と呼ぶ。
み取り、供試サンプル中の白血球数が、対照のそれより
も少い、すなわち陽性の反応を示すかどうかを測定する
か、あるいは、それを、例えば、Coulter Channelyzer
のようなアナライザー１４にインプツトし、複数のサイ
ズ分布範囲の各々に存在する白血球の細胞母集団分布を
得ることができる。これを、「サイジング（sizing）」
と呼ぶ。
アナライザー１４でアウトプツトされたデータを、イン
ターフエース１６を通して、既知の方法でコンピュータ
１８にインプツトし、データを記憶させ、各供試サンプ
ルの計算結果を、白血球のサイズ分布のみならず、対照
サンプルの計算と自動的に比較することができる。供試
サンプルにおける白血球数が、カウンター１２の誤差率
以上に、対照の白血球数より少なければ、陽性反応があ
る。また、サイズ分布効果の比較が、白血球の拡大を示
す場合、陽性反応がある。ひとたびすべての比較が行わ
れれば、コンピュータ１８でアウトプツトされたデータ
は、例えば、プリンター１８またはビデオ・デイスプレ
ー２４のような望ましい手段により表示され、また、将
来の引用のためにデイスク２０に記憶できる。
ターフエース１６を通して、既知の方法でコンピュータ
１８にインプツトし、データを記憶させ、各供試サンプ
ルの計算結果を、白血球のサイズ分布のみならず、対照
サンプルの計算と自動的に比較することができる。供試
サンプルにおける白血球数が、カウンター１２の誤差率
以上に、対照の白血球数より少なければ、陽性反応があ
る。また、サイズ分布効果の比較が、白血球の拡大を示
す場合、陽性反応がある。ひとたびすべての比較が行わ
れれば、コンピュータ１８でアウトプツトされたデータ
は、例えば、プリンター１８またはビデオ・デイスプレ
ー２４のような望ましい手段により表示され、また、将
来の引用のためにデイスク２０に記憶できる。
この方法で、患者が、被試験物質のいずれかにアレルギ
ー反応を有するか否かが、客観的に測定し得る。
ー反応を有するか否かが、客観的に測定し得る。
当業者には、極めて明らかなように、この発明は上記実
施例に限定されることはなく、この発明の精神と範囲に
反することなく種々変更態様のものを行うことができ
る。例えば、ひとたび白血球サンプルが患者から採取さ
れれば、結果が完了するまで、人間の介在または行為を
必要としなくなるように、装置全体を自動化させること
ができる。
施例に限定されることはなく、この発明の精神と範囲に
反することなく種々変更態様のものを行うことができ
る。例えば、ひとたび白血球サンプルが患者から採取さ
れれば、結果が完了するまで、人間の介在または行為を
必要としなくなるように、装置全体を自動化させること
ができる。
この発明に係る抗原と白血球細胞抗体間の反応程度を測
定する方法を実施することにより、アレルギー患者は被
試験体にアレルギー反応を示し、それにより客観的なデ
ータが得られ、各種アレルギー患者の病気治療に大きく
貢献するという効果をもつている。
定する方法を実施することにより、アレルギー患者は被
試験体にアレルギー反応を示し、それにより客観的なデ
ータが得られ、各種アレルギー患者の病気治療に大きく
貢献するという効果をもつている。
第１図は、この発明の測定装置の主要構成要素を諸関係
を示すブロツク図、第２図は、この発明の測定方法の手
順を示すフローチヤートである。
を示すブロツク図、第２図は、この発明の測定方法の手
順を示すフローチヤートである。
Claims (18)
- 【請求項１】疑わしいアレルゲンと最低１つの血液サン
プル間の反応程度を客観的に測定する方法であって； 第１の血液サンプルにおいて白血球数を計数する過程
と； 疑わしいアレルゲンを第１の血液サンプルと同一の第２
の血液サンプルに混合して混合物を作り、それによっ
て、アレルゲンを前記第２血液サンプルの白血球と反応
させる過程と； 前記混合物における無反応白血球数を計数する過程と；
及び 前記第１血液サンプルで計数された白血球数を、前記混
合物で計数された無反応白血球数と比較し、それによっ
て、疑わしいアレルゲンが、前記第２血液サンプルの白
血球と反応したかどうかを測定する過程を備えた抗原と
白血球細胞抗体間の反応程度を測定する方法。 - 【請求項２】第１血液サンプルの白血球を計数する前
に、第１血液サンプルに存在する赤血球を溶解する過程
を備えた特許請求の範囲第１項記載の抗原と白血球細胞
抗体間の反応程度を測定する方法。 - 【請求項３】混合物の無反応白血球を計数する前に、混
合物に存在する赤血球を溶解する過程を備えた特許請求
の範囲第１項記載の抗原と白血球細胞抗体間の反応程度
を測定する方法。 - 【請求項４】混合物の無反応白血球を計数する前に、混
合物中に反応白血球を溶解する過程を備えた特許請求の
範囲第１項記載の抗原と白血球細胞抗体間の反応程度を
測定する方法。 - 【請求項５】少くとも１つの第１血液サンプルおよび混
合物の白血球の計数が、複数のサイズの異なる範囲の各
々の白血球を計数することにより実施される特許請求の
範囲第１項記載の抗原と白血球細胞抗体間の反応程度を
測定する方法。 - 【請求項６】各サイズの範囲において計数された白血球
数を示すグラフを作る過程を備えた特許請求の範囲第５
項記載の抗原と白血球細胞抗体間の反応程度を測定する
方法。 - 【請求項７】少くとも１つの疑わしいアレルゲンと患者
血液の１つのサンプルとの間の反応程度を客観的に測定
する方法であって； そのサンプルを、ほぼ同等の白血球分布を有する対照サ
ンプルと少くとも１つの供試サンプルに分離する過程
と； 前記対照サンプル中の赤血球を溶解する過程と； 疑わしいアレルゲンを供試サンプルに混合して混合物を
作り、それによって、前記疑わしいアレルゲンを前記供
試サンプルに存在する白血球と反応させる過程と； 前記対照サンプル中の赤血球を溶解させる過程と； 前記対照サンプル中の白血球数を計数する過程と； 疑わしいアレルゲンを供試サンプルに混合して混合物を
作り、それによって、前記疑わしいアレルゲンを前記供
試サンプルに存在する白血球と反応させる過程と； 前記混合物中の赤血球を溶解させる過程と； 前記混合物中の反応白血球を溶解させる過程と； 前記混合物中の無反応白血球数を計数する過程と； 前記混合物中の無反応白血球数を、前記対照サンプル中
の白血球と比較し、それにより、前記疑わしいアレルゲ
ンが、患者の血液と反応をしたかどうかを測定する過程
を備えた抗原と白血球細胞抗体間の反応程度を測定する
方法。 - 【請求項８】対照サンプルおよび混合物中の白血球の計
数値が、複数のサイズの異なる範囲の各々において白血
球数を計数することにより実施され、また、この方法
が、更に、 対照サンプルおよび混合物の各々における白血球分布の
前記計数値のサイズ分布グラフを作る過程と； 対照サンプルの白血球計数値の前記サイズ分布グラフ
を、混合物の白血球計数値の前記サイズ分布グラフと比
較する過程を備えた特許請求の範囲第７項記載の抗原と
白血球細胞抗体間の反応程度を測定する方法。 - 【請求項９】混合物中で計数された白血球数が、対照サ
ンプル中で計数された白血球数よりも、使用した機器の
誤差率を超えた量だけ少い場合、疑わしいアレルゲンが
患者の血液とアレルギー反応を起こしたかどうかの測定
が陽性である特許請求の範囲第７項記載の抗原と白血球
細胞抗体間の反応程度を測定する方法。 - 【請求項１０】疑わしいアレルゲンと少くとも１つの血
液サンプルとの間の反応の程度を客観的に測定する方法
であって； 第１血液サンプル中の白血球数をサイジングする過程
と； 疑わしいアレルゲンを第１の血液サンプルと同一の第２
血液サンプルに混合して、混合物を作り、それによっ
て、アレルゲンを、前記第２の血液サンプルの白血球と
反応させる過程と； 前記混合物中の無反応白血球数をサイジングする過程
と；及び 前記第１血液サンプルのサイジングした白血球を、前記
混合物のサイジングした無反応白血球と比較し、それに
よって、疑わしいアレルゲンが、前記第２サンプル中の
白血球と反応したかどうかを測定する過程を備えた抗原
と白血球細胞抗体間の反応程度を測定する方法。 - 【請求項１１】第１血液サンプル中の白血球のサイジン
グの前に、前記血液サンプルに存在する赤血球を溶解す
る過程を備えた特許請求の範囲第１０項記載の抗原と白
血球細胞抗体間の反応程度を測定する方法。 - 【請求項１２】混合物中の無反応白血球をサイジングす
る前に、混合物に存在する赤血球を溶解する過程を備え
た特許請求の範囲第１０項記載の抗原と白血球細胞抗体
間の反応程度を測定する方法。 - 【請求項１３】混合物中の無反応白血球をサイジングす
る前に、混合物中の反応白血球を溶解する過程を備えた
特許請求の範囲第１０項記載の抗原と白血球細胞抗体間
の反応程度を測定する方法。 - 【請求項１４】少くとも１つの第１血液サンプルおよび
混合物の白血球のサイジングが、複数のサイズの異なる
範囲の各々の白血球数を計数することにより実施される
特許請求の範囲第１０項記載の抗原と白血球細胞抗体間
の反応程度を測定する方法。 - 【請求項１５】少くとも１つの疑わしいアレルゲンと患
者の血液サンプル１つとの間の反応程度を客観的に測定
する方法であって； サンプルを、ほぼ同等の白血球分布を有する対照サンプ
ルと少くとも１つの供試サンプルに分布させる過程と； 前記対照サンプル中の赤血球を溶解する過程と； 前記対照サンプル中の白血球をサイジングする過程と； 疑わしいアレルゲンを供試サンプルに混合して、混合物
を作り、それによって、前記アレルゲンを、前記供試サ
ンプルに存在する白血球と反応させる過程と； 前記混合物中の赤血球を溶解する過程と； 前記混合物中の反応白血球を溶解する過程と； 前記混合物中の白血球をサイジングする過程と；及び 前記混合物中の白血球のサイズ分布を、前記対照サンプ
ル中の白血球のサイズ分布と比較し、それによって、疑
わしいアレルゲンが、患者の血液との反応を起したかど
うかを測定する過程を備えた抗原と白血球細胞抗体間の
反応程度を測定する方法。 - 【請求項１６】対照および供試サンプル中の白血球のサ
イジングが、複数のサイズの異なる範囲の各々の白血球
数を計数することにより実施され、また、この方法が、
更に、 対照および供試サンプルの各々の計数のサイズ分布を生
じさせる過程と；および 対照サンプルの白血球計数値の前記サイズ分布を、供試
サンプルの白血球計数値の前記サイズ分布と比較する過
程を備えた特許請求の範囲第１５項記載の抗原と白血球
細胞抗体間の反応程度を測定する方法。 - 【請求項１７】混合物においてサイジングした白血球の
数が、対照サンプルにおいてサイジングした白血球数よ
りも、使用した機器の誤差率を超えた量だけ少い場合、
疑わしいアレルゲンが、患者の血液とアレルギー反応を
生じたかどうかの反応が陽性である特許請求の範囲第１
５項記載の抗原と白血球細胞抗体間の反応程度を測定す
る方法。 - 【請求項１８】疑わしいアレルゲンが、供試サンプルと
しての患者の第１の血液サンプルと混合され、患者の第
１の血液サンプルと同一の第２の血液サンプルが対照サ
ンプルとして用いられる、少くとも１つの疑わしいアレ
ルゲンと患者の血液との間の反応の程度を客観的に測定
する装置であって； その装置は、供試サンプルと対照サンプルの各々におけ
る白血球数を計数するカウンター(12)を備え、該カウン
ター(12)は、前記計数の各々よりなるアウトプットされ
たデータを有し； 前記供試サンプルおよび対照サンプルの各々における白
血球の細胞サイズ分布を得るため前記カウンター(12)よ
りアウトプットされたデータを解析するアナライザー(1
4)を備え、該アナライザー(14)は、前記カウンター(12)
よりアウトプットされたデータおよび前記細胞サイズ分
布を含むアウトプットされたデータを有し；及び 対照サンプル中の白血球数を供試サンプル中の白血球数
と比較し、前記供試サンプルと前記対照サンプルの各々
中の白血球のそれぞれの細胞サイズ分布を比較し、それ
によって、疑わしいアレルゲンが患者の血液と反応し、
従って、供試サンプルに存在する白血球数の減少が生じ
たか、または、供試サンプル中の白血球サイズ分布に変
化が生じたかどうか測定するために、前記アナライザー
(14)よりアウトプットされたデータを解析する比較手段
(18)を備えた抗原と白血球細胞抗体間の反応程度測定す
る装置。
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