CN109738348A - 基于颗粒计数的免疫凝集反应强度定量分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种基于颗粒计数的免疫凝集反应强度定量分析方法，依次按照如下步骤进行：测定样品免疫凝集前单位体积内颗粒数量X；测定样品免疫凝集后单位体积内颗粒数量Y，所述Y为单个颗粒数量y1与凝集颗粒数量y2之和，所述凝集颗粒是由至少两个单个颗粒凝集而成；以参数X及参数Y计算免疫凝集强度R。单位体积中凝集前后细胞个数减少幅度越大，凝集强度越高，可准确且稳定地对免疫凝集反应强度进行定量分析。
Description
技术领域
本发明涉及一种免疫凝集反应强度分析方法，尤其是一种准确且稳定的基于颗粒计数的免疫凝集反应强度定量分析方法。
背景技术
免疫凝集反应是指颗粒性抗原（细菌、红细胞、细胞性抗原及抗原致敏的胶乳颗粒等）与相应的抗体在适量的电解质存在的条件下，经过一定时间后凝聚成肉眼可见的凝集现象，分为直接凝集、间接凝集以及反向间接凝集等多种反应方式，典型的免疫凝集反应是人ABO血型鉴定。由于免疫凝集反应强度与抗体量有直接关系，凝集后会有游离的单个颗粒及由单个颗粒凝集而成的凝集颗粒共存的状态，难以对免疫凝集反应强度进行定量分析。以往，对于凝集反应强度的判定主要采用肉眼观察，主观影响较大，难以保证其准确性。近年来，试图采用图形分析方法，但因属于聚类分析技术，在连续定量中表现欠佳；亦有试图通过透射比浊分析对凝集反应强度进行定量，但因灵敏性和稳定性不足而未能广泛应用。目前，根据凝集后在特定介质中的沉浮变化（卡式配血）观察血液凝集反应结果，但也只能用于定性分析，对凝集反应强度的连续定量效果并不理想。
发明内容
本发明是为了解决现有技术所存在的上述问题，提供一种准确且稳定的基于颗粒计数的免疫凝集反应强度定量分析方法。
本发明的技术解决方案是：一种基于颗粒计数的免疫凝集反应强度定量分析方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：
a. 测定样品免疫凝集前单位体积内颗粒数量X；
b. 测定样品免疫凝集后单位体积内颗粒数量Y，所述Y为单个颗粒数量y1与凝集颗粒数量y2之和，所述凝集颗粒由至少两个单个颗粒凝集而成；
c. 以参数X及参数Y计算免疫凝集强度R。
本发明是将两个（或两个以上）聚集的颗粒视为一个颗粒，可以通过单位体积中凝集前后细胞个数的变化对凝集强度进行定量，单位体积中凝集前后细胞个数减少幅度越大，凝集强度越高，可准确且稳定地对免疫凝集反应强度进行定量分析。
具体实施方式
实施例1：
本发明基于颗粒计数的免疫凝集反应强度定量分析方法，依次按照如下步骤进行：
a. 用流式细胞仪设门区分单个红细胞和凝集（指两个和两个以上聚集）的红细胞，测定血液免疫凝集前单位体积内颗粒（红细胞）数量X，X=5万；
b. 用流式细胞仪测定样品免疫凝集后颗粒数量Y，可用肉眼观察不再发生凝集反应后进行测定，亦可达到常规免疫凝集反应时间后进行测定。所述Y为单个颗粒（红细胞）数量y1与凝集颗粒数量y2之和，凝集颗粒是指由抗红细胞抗体使至少两个单个红细胞（RBC）凝集而成的凝集颗粒，可用流式细胞仪分别设门测定单个颗粒数量y1及凝集颗粒数量y2，测定结果为y1=0.5万，y2=2万，则Y=2.5万
c. 以参数X及参数Y计算免疫凝集强度R，如R=（Y/X）×100%，结果R=2.5/5=50%，此种算法免疫凝集强度R越小说明凝集前后细胞个数减少幅度越大，即凝集反应强度越高；亦可用R=X-Y计算免疫凝集强度R，则R=5万-2.5万=2.5万，此种算法免疫凝集强度R越大说明凝集前后细胞个数减少幅度越大，即凝集反应强度越高。
实施例2：
本发明基于颗粒计数的反向间接免疫凝集（将抗体致敏于胶乳颗粒，检测抗原）反应强度定量分析方法，依次按照如下步骤进行：
a. 用流式细胞仪设门区分单个胶乳颗粒和凝集（指两个和两个以上聚集）的胶乳颗粒，测定免疫凝集前单位体积内颗粒数量X，X=3万；
b. 用流式细胞仪测定样品免疫凝集后颗粒数量Y，可用肉眼观察不再发生凝集反应后进行测定，亦可达到常规免疫凝集反应时间后进行测定。所述Y为单个颗粒数量y1与凝集颗粒数量y2之和，凝集颗粒是指由抗原物质使至少两个单个包被有抗体的致敏胶乳颗粒凝集而成的凝集颗粒，可用流式细胞仪分别设门测定单个颗粒数量y1及凝集颗粒数量y2，测定结果为y1=0.2万，y2=1万，则Y=1.2万
c. 以参数X及参数Y计算免疫凝集强度R，如R=（Y/X）×100%，结果R=1.2/3=40%，此种算法免疫凝集强度R越小说明凝集前后细胞个数减少幅度越大，即凝集反应强度越高；亦可用R=X-Y计算免疫凝集强度R，则R=3万-1.2万=2.8万，此种算法免疫凝集强度R越大说明凝集前后细胞个数减少幅度越大，即凝集反应强度越高。
Claims (1)
1.一种基于颗粒计数的免疫凝集反应强度定量分析方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：
a. 测定样品免疫凝集前单位体积内颗粒数量X；
b. 测定样品免疫凝集后单位体积内颗粒数量Y，所述Y为单个颗粒数量y1与凝集颗粒数量y2之和，所述凝集颗粒是由至少两个单个颗粒凝集而成；
c. 以参数X及参数Y计算免疫凝集强度R。
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- 2019-01-28 CN CN201910078257.1A patent/CN109738348A/zh active Pending
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