JPH06122634A - リポソームを用いるガン診断薬およびガン治療薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】グルクロン酸又はガラクツロン酸を結合してな
る糖脂質を少なくとも１種含有するリポソーム内に画像
診断薬を封入し、該リポソームを注射により投与するこ
とを特徴とするガン診断薬およびガン治療薬。 【効果】高感度にガンの診断を行うことができ且つ副作
用の少ないガン治療薬を提供できるようになった。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、リポソームを用いるガ
ン診断薬およびガン治療薬に関し、詳しくは、細網内皮
系（ＲＥＳ）組織による取込みを回避し、腫瘍組織に選
択的に分布するリポソームを用いるガン診断薬およびガ
ン治療薬に関する。

【０００２】なお、本発明において“リポソーム”と
は、リポソームとリピッドマイクロスフェア（脂肪乳
剤）の両方を意味するものとする。

【０００３】

【従来の技術】リポソームは、特に毒性の強い薬物の低
毒化、体内で不安定な薬物の安定化、生体内での薬物の
徐放化等に有効であり、更には細胞と融合したり取り込
まれたりする性質を利用して、特定の細胞に選択的に薬
物を移行させるための手段として利用できることが知ら
れている。このような性質を有するリポソームは、ガン
組織に薬剤を効率的に運搬するのに有用であり、かかる
性質により、診断面においては腫瘍部位の同定、ガンの
大きさの測定など治療方針の決定において重要な因子の
測定に利用できる。また、治療面においては、副作用の
強い制ガン剤を体内の他の正常な組織に障害を与えるこ
となく、腫瘍組織に選択的に移行させ、その副作用を抑
えることができるメリットがある。

【０００４】腫瘍組織にリポソームを選択的に移行させ
る方法としては、特開昭６１−１５８９３２号及び特開
昭６１−１５８９３３号が例示される。

【０００５】特開昭６１−１５８９３２号及び特開昭６
１−１５８９３３号の内容としては、６−アミノマンノ
ース誘導体のような正に帯電した化合物を組み込んだリ
ン脂質小胞を血流内に導入し、体内のマクロファージ又
はそれ以外の食細胞（細網内皮系）を飽和させ、細網内
皮系（以下、ＲＥＳと記載する）によるリポソームの取
り込みを阻害させた後、２０００オングストローム未満
のＤＳＰＣ／コレステロールより成る、制ガン剤、イメ
ージング剤等を封入したリポソームを血流中に導入し、
腫瘍組織に制ガン剤等を集めることを特徴としている。

【０００６】しかしながら、上記の方法によれば、免疫
を担当しているＲＥＳを飽和させるため、ＲＥＳが本来
果たすべき免疫応答反応ができなくなり、感染症等に対
し無防備になるという重大な問題がある。特にガン患者
は免疫力が低下しているので、ＲＥＳの飽和を伴うよう
な方法は臨床上好ましくない。

【０００７】リポソームを腫瘍組織へ選択的に移行させ
る別の技術としては、ＰＣＴ／ＵＳ８７／０３３９８に
記載のアレン及びパパショポラス（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＡＳ，Ｖｏｌ．８５，６
９４９−６９５３（１９８８））らの方法がある。これ
は： （ａ）リポソーム膜成分として、リジッド（ｒｉｇｉ
ｄ）な脂質（ＤＳＰＣ，ＳＭ）とコレステロールを用い
て膜を安定化し、（ｂ）さらに表面をＧＭ_１のようなシ
アル酸残基を持つリン脂質あるいはスルファチドのよう
な硫酸基を持つ糖脂質で修飾すること、及び（ｃ）リポ
ソームのサイズを０．０５〜０．５μｍに制御すること
を組み合わせることによりリポソームの血中滞留時間を
延長させ、ガン組織にリポソームを用いた薬物運搬を行
うものである。

【０００８】しかしながら、アレン及びパパショポラス
らの方法によれば、腫瘍組織にリポソームを集積させる
ことはできるが、その腫瘍組織への選択性は、未だ満足
のいくものではなかった。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ＲＥ
Ｓによって捕捉され難く、長時間にわたり高濃度で血中
に存在し且つ腫瘍組織に高度に選択的に移行する、リポ
ソームを利用したガン診断薬およびガン治療薬を提供す
ることにある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明者は、以前にウロ
ン酸を結合してなる糖脂質を含むリポソームがその血中
半減期を大幅に延長し得ることを報告した（特願昭６３
−４６８９５号参照）。このリポソームについてさらに
研究を重ねた結果、該リポソームは腫瘍組織へ極めて選
択的に移行し、ガンの診断および治療薬として有用であ
ることを見出した。

【００１１】即ち、本発明は、グルクロン酸又はガラク
ツロン酸を結合してなる糖脂質を少なくとも１種含有す
るリポソーム内に画像診断薬を封入してなるガン診断薬
を提供するものである。

【００１２】また、本発明は、グルクロン酸又はガラク
ツロン酸を結合してなる糖脂質を少なくとも１種含有す
るリポソーム内に制ガン剤を封入してなるガン治療薬を
提供するものである。

【００１３】グルクロン酸又はガラクツロン酸と糖脂質
を形成する脂質は、Ｏ−又はＳ−グリコシド結合を介し
て糖と結合する。糖脂質を形成する脂質としては、公知
のものが使用できるが、その中でも、ジアシルグリセラ
イド類、ジアルキルグリセライド類、スフィンゴシン、
セラミド、炭化水素及びコレステロールから選ばれた少
なくとも１種が好ましい。

【００１４】ジアシルグリセライド類としては、例え
ば、１，２−ジパルミトイルグリセライド、１，２−ジ
ステアロイルグリセライド、１−ステアロイル−３−パ
ルミトイルグリセライド、１，２−ジオレオイルグリセ
ライド等のアシル部分が炭素数１０〜４０程度、好まし
くは炭素数１４〜２４程度の飽和若しくは不飽和脂肪酸
である１，２−ジアシルグリセライド類、１，３−ジア
シルグリセライド類等を挙げることができる。

【００１５】ジアルキルグリセライド類としては、例え
ば、１，２−Ｏ−ジヘキサデシルグリセライド、１，２
−Ｏ−ジオクタデシルグリセライド、１−Ｏ−ヘキサデ
シル−３−Ｏ−オクタデシルグリセライド等のアルキル
部分が炭素数１０〜４０程度、好ましくは炭素数１４〜
２４程度の直鎖若しくは分枝状アルキル基である１，２
−Ｏ−ジアルキルグリセライド、１，３−Ｏ−ジアルキ
ルグリセライド類等を挙げることができる。

【００１６】炭化水素としては、例えば、炭素数１０〜
６０程度好ましくは１４〜４０程度、より好ましくは１
６〜２４程度の飽和若しくは不飽和の直鎖若しくは分枝
状の脂肪族炭化水素等を挙げることができる。上記脂質
は単独で若しくは２種以上併用して使用できる。

【００１７】本発明で使用する糖脂質は、グルクロン酸
又はガラクツロン酸と上記の脂質を、ケーニッヒ・クノ
ール法等の公知のグリコシド化法に供することにより製
造できる。

【００１８】本発明で、リポソーム内に封入する画像診
断薬としては、（１）テクネシウム９９ｍ、インジウム
−１１１、ガリウム−６７、コバルト−５７、亜鉛−６
５等のγ線を放出し、γカメラでの画像診断が可能なラ
ジオラベルマーカー、、具体的には９９ｍテクネシウム
−ジエチレントリアミンペンタ酢酸５ナトリウム錯体、
１１１−インジウム−ニトリロ三酢酸３ナトリウム錯
体、６７−ガリウム−三酢酸３ナトリウム錯体など、
（２）マンガン、銅、ガドリニウム、エルビウム、クロ
ム、鉄、コバルト、ニッケル等の塩などの核磁気共鳴
（ＮＭＲ）イメージングに用いられる常磁性物質、具体
的にはガドリニウム−クエン酸２ナトリウム、マンガン
−クエン酸２ナトリウム、ガドリニウム−ジエチレント
リアミンペンタ酢酸５ナトリウム錯体（Ｇｄ（ＩＩＩ）
−ＤＴＡＰ）、ランタン（ＩＩＩ）−ＤＴＡＰ、Ｆｅ
（ＩＩＩ）−ＤＴＡＰ、Ｍｎ（ＩＩＩ）−ＤＴＡＰな
ど、（３）ヒパーク メグルミンなどのＸ線イメージン
グ剤などを例示することができる。

【００１９】本発明で、リポソーム内に封入する制ガン
剤としては、公知の制ガン剤が広く用いられ、具体的に
は、シスプラチン、アドリアマイシン、ダウノマイシ
ン、メトトレキセート、ビンクリスチン、シトシンアラ
ビノシド、アラビノシルアデニン、アクチノマイシン
Ｄ、メルカプトポリシトシン、エピルビシン、サイクロ
ホスファミドなどの通常の制ガン剤の他に、ヨウ素１３
１、イットリウム９０、リン３２、ボロン１０（ボロン
化フェニルアラニン）などの放射性核種を例示すること
ができる。

【００２０】本発明では、リポソーム膜の構成成分とし
て、上記糖脂質とともにリン脂質、コレステロール等
の、糖脂質以外の公知の脂質を使用する。リン脂質とし
ては公知のものが何れも使用でき、その具体例として
は、例えば、大豆レチシン、卵黄レシチン、ジパルトイ
ルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジ
ルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ホスファ
チジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロー
ル、スフィンゴミエリン、ホスファチジルイノシトール
等のリン脂質、水素添加レシチン等の天然リン脂質に水
素添加を行ったものなどを挙げることができる。リポソ
ームの融合及び内封物の漏れ出しを更に防止するため
に、コレステロール及びホスファチジン酸、ホスファチ
ジルセリン、ホスファチジルグリセロール、カルジオピ
リン等の荷電を有するリン脂質を他のリン脂質とともに
用いてもよい。上記リン脂質は単独で若しくは２種以上
併用して使用することができる。

【００２１】なお、リピッドマイクロスフェアの構成成
分としては、公知の大豆油およびリン脂質が用いられ
る。

【００２２】本発明では、必要に応じ、リポソーム膜構
成成分として、上記脂質の他に、炭素数１０〜４０程
度、好ましくは炭素数１４〜２４程度の直鎖若しくは分
枝状の飽和若しくは不飽和の脂肪酸、前記脂肪酸のジグ
リセライド、トリグリセライド、コレステロールエステ
ル等を適宜使用してもよい。

【００２３】本発明で使用するリポソームは公知のリポ
ソームの形態とすることができる。その具体例として
は、例えば、多重膜リポソーム（ＭＬＶ；ｍｕｌｔｉｌ
ａｍｅｌｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅ）、小さな一枚膜リポ
ソーム（ＳＵＶ；ｓｍａｌｌｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ
ｖｅｓｉｃｌｅ）、大きな一枚膜リポソーム（ＬＵＶ；
ｌａｒｇｅ ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅ
）等を挙げることができる。

【００２４】本発明リポソームは公知の方法に従って製
造できる。以下にその一例を挙げる。

【００２５】まずリン脂質、本発明の糖脂質、必要に応
じてコレステロールを適当な溶媒に溶解する。次いで得
られた溶液を、例えばロータリーエバポレーターに入れ
て溶媒を留去し、エバポレーター内壁面に脂質のフィル
ムを形成する。この中に内封物の水溶液若しくは緩衝溶
液を加え、激しく振とうすることにより、本発明リポソ
ームの分散液を得ることができる。振とう後に必要に応
じて凍結融解超音波処理を行ってもよい。また、ポリカ
ーボネートフィルムを用いたリポソーム粒径のサイジン
グを行なってもよい。

【００２６】リン脂質の使用量は特に制限されず、使用
する内封物の種類等に応じて適宜選択すればよい。糖脂
質の使用量も特に制限はないが、リポソームの形成し易
さ等を考慮すると、糖脂質の脂質膜中に１〜５０モル％
程度、好ましくは５〜３０モル％程度含まれるように配
合すればよい。内封物としては、リポソームの用途に応
じて各種制ガン剤、画像診断薬の中から適宜選択して使
用すればよい。内封物の使用量も特に制限されず、内封
物の種類に応じて適宜選択すればよい。

【００２７】溶媒としては使用する脂質を溶解し得るも
のが何れも使用でき、例えば、クロロホルム、メチルク
ロロホルム、塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類、
ヘキサン、ヘプタン等の炭化水素類、ベンゼン、トルエ
ン、キシレン等の芳香族炭化水素類、ジエチルエーテ
ル、ジイソプロピルエーテル、エチレングリコールジメ
チルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル類等を
挙げることができる。溶媒を留去し脂質のフィルムを形
成する際の温度条件は特に制限されず、０〜１００℃程
度の広い範囲から適宜選択できるが、脂質の酸化を防ぐ
ことを考慮すると好ましくは２５〜６０℃程度、より好
ましくは３０〜４０℃程度とすればよい。また、リポソ
ーム調製時のｐＨ、塩濃度は、脂質及びリポソームの変
性が起らない範囲であれば特に制限されないが、通常ｐ
Ｈ７程度、オスモラリティ０．３程度とすればよい。

【００２８】得られたリポソーム分散液を、ゲル濾過、
遠心分離等の公知の方法に準じて精製することによっ
て、リポソームとリポソームに内封されなかった薬剤、
マーカー等とを分離することができる。分離されたリポ
ソームにリポソームの内封液と等張になるように調製し
た緩衝水溶液（Ｔｒｉｓ、リン酸、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰ
Ｓ等）を加えることにより、上記特定の糖脂質を含有し
た本発明リポソームの懸濁液が得られる。

【００２９】本発明で用いるリポソームの粒径は特に制
限されないが、通常０．０３〜０．８μｍ程度、好まし
くは０．０５〜０．５μｍ程度、より好ましくは０．１
〜０３μｍ程度とするのがよい。

【００３０】本発明のリポソームは、注射により生体に
投与する。投与法としては、腫瘍の存在部位により静脈
内注射、筋肉内注射、皮下注射、動脈内注射などをいず
れも用いることができるが、好ましくは静脈内注射が良
い。

【００３１】本発明のリポソームの投与量は、内封する
薬剤の種類により異なるが、ガン診断薬の場合には通常
成人に対し０．５ｍｇ〜１ｇ程度投与され、ガン治療薬
の場合には１ｍｇ〜１ｇ程度投与される。

【００３２】本発明のリポソームは、糖残基としてグル
クロン酸およびガラクツロン酸のいずれを用いた場合に
も優れた効果を発揮するが、ガラクツロン酸を用いた場
合により好ましい結果が得られる。

【００３３】

【発明の効果】本発明の方法によれば、以下のような優
れた効果が達成される。 ＊ 本発明で用いるガン診断薬は腫瘍部位に選択的に移
行するので極めて高感度且つ特異的にガンを診断するこ
とが可能である。 ＊ 本発明で用いるガン治療薬は腫瘍部位に選択的に移
行し、正常の組織にはほとんど制ガン剤は移行しないの
で、制ガン剤の副作用を大幅に軽減することができる。 ＊ 本発明で用いるリポソームは、生体内での半減期が
長いので、ガン診断剤およびガン治療薬としての投与量
及び投与回数を少なくすることができ、生体に対する副
作用も少なくすることができる。 ＊ 本発明で用いるリポソームは、本来生体内に存在す
る脂質を用いているので、生体に対する安全性が高い。

【００３４】

【実施例】以下、本発明を実施例、比較例および参考例
に基いて詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限
定されるものではない。

【００３５】

【参考例１】 ＊糖脂質の合成 グルクロノラクトン（半井化学薬品株式会社製）１７．
６ｇを触媒量のナトリウムメチラートの存在下メタノー
ル中で反応させ、メチル Ｄ−グルコピラノシル ウロ
ネートを得た。これを単離することなく、ピリジン４４
ｍｌ中無水酢酸６８ｍｌによりアセチル化し、メチル
（１，２，３，４−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グ
ルコピラノシル ウロネートとし、更にこれを臭化水素
飽和酢酸中にて臭素化し、メチル（２，３，４−トリ−
Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシル ブロマイ
ド）ウロネートを合成した。この臭素化物を単離するこ
となくパルミチルアルコール９．１ｇと酸化銀１４．１
ｇの存在下クロロホルム（溶媒）４０ｍｌ中２５℃で反
応させ、生成物をエタノールより再結晶し、メチル（ヘ
キサデシル ２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ
−グルコピラノシル）ウロネートを収率５０％（グルク
ロノラクトンより）で得た。更に、これをメタノール中
にて触媒量のナトリウムメチラートで脱アセチル化して
乾固した。得られた残渣を５０％メタノール水溶液に懸
濁し、水酸化カリウム４．８ｇを加えてエステル加水分
解を行なった後、希塩酸でｐＨ３に調整し、クロロホル
ム／メタノール（２／１）にて抽出し、淡黄色結晶とし
てヘキサデシル β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸
（以下、糖脂質Ａとする）を３０％（グルクロノラクト
ンより）の収率で得た。

【００３６】

【実施例１】後記の腫瘍部位集積性試験に供するため、
参考例１で得られる糖脂質Ａを用い、リポソーム膜成分
の１つとして^１４Ｃでラベルしたコレステロールオレエ
ートを、また、リポソーム内封物として^３Ｈ−イヌリン
を用い、以下のようにして本発明のガン診断薬を製造し
た。

【００３７】ナス型フラスコにジパルミトイルホスファ
チジルコリン（ＤＰＰＣ）８０マイクロモル、コレステ
ロール８０マイクロモル及び糖脂質Ａ ４０マイクロモ
ルをクロロホルム：メタノール＝２：１（ｖ：ｖ）２０
ｍｌに溶解して加え、さらに^１４Ｃ−コレステロールオ
レエート３０μＣｉを加えた後、ロータリーエバポレー
ターにて溶媒を留去した。フラスコ内に生成したフィル
ムに、^３Ｈ−イヌリン２００ｍＣｉを含む０．３Ｍグル
コース１．２５ｍｌを加え、ボルテックスミキサーに
て、フィルムがはがれ落ちるまで撹拌した。得られた乳
濁液を液体窒素にて凍結させた後、４０℃の温水で溶解
した。この操作を３回繰り返した。得られた乳濁液を、
０．１μｍのメンブランフィルターに３回通過させた。
処理液を５００００ｒｐｍ・３０分間遠心処理した。沈
殿物に０．１５ＭＮａＣｌを加えて懸濁し、３ｍｌとし
た。同様の操作を再度行い、本発明のガン診断剤である
糖脂質含有リポソーム（粒径０．１３５μｍ）懸濁液３
ｍｌを得た。

【００３８】

【比較例１】糖脂質Ａに代えてジパルミトイルホスファ
チジルグリセロール（ＤＰＰＧ）４０マイクロモルを使
用する以外は実施例１と同様にして、糖脂質を含有しな
いリポソーム懸濁液３ｍｌを得た。

【００３９】

【実施例２】 ＊担ガンマウスにおけるリポソームの体内分布 ５週令マウスの下股皮下に１匹当たり１０^７個のＳ１８
０細胞を移植した。１週間後にマウスの尾静脈より脂質
濃度で１２μｍｏｌのリポソームを投与した。１２時間
後にマウスを脱血し、各組織を摘出してその放射活性を
測定した。

【００４０】また、１２時間後および２４時間後に肝臓
とガン組織におけるリポソームの分布比率を上述と同様
の方法により測定した。結果を第１表、第２表、図１及
び図２に示す。

【００４１】 なお、第１表中：ＧｌｃＵＡリポソームは、実施例１で
得たリポソームを意味する。ＤＰＰＧリポソームは、比
較例１で得たリポソームを意味する。ＣｈＯは、コレス
テリルオレエートを意味する。

【００４２】 なお、第２表中：ＧｌｃＵＡリポソームは、実施例１で
得たリポソームを意味する。ＤＰＰＧリポソームは、比
較例１で得たリポソームを意味する。ＧＭ_１、硫脂質お
よびＨＰＩについての測定値は、デメトリアス・パパジ
ョポラス（Ｄｅｍｅｔｏｒｉｏｓ Ｐａｐｈａｊｏｐｏ
ｕｌｏｓ），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ，（１９８６） ６９４９−６９５３ に記載の
数値をそのまま使用した。

【００４３】第１表、第２表、図１および図２の結果か
ら、本発明の実施例１のガン診断剤は、比較例１のリポ
ソームに比べ、明かに腫瘍部位に集積していることが分
かる。このことは、グラフ化することにより一層明かと
なる。すなわち、^３Ｈ−イヌリンの１２時間後における
腫瘍集積率は、比較品の４．３倍である。

【００４４】

【実施例３】参考例１で得られる糖脂質Ａを用い、後記
画像診断試験に供するため、代表的画像診断薬であるテ
クネシウム９９ｍ−ジエチレントリアミンペンタ酢酸５
ナトリウムを用い、以下のようにして糖脂質を含有する
リポソーム（すなわち、本発明の診断剤）を調製した。

【００４５】ナス型フラスコにジパルミトイルホスファ
チジルコリン（ＤＰＰＣ）８０マイクロモル、コレステ
ロール８０マイクロモル及び糖脂質Ａ ４０マイクロモ
ルをクロロホルム：メタノール＝２：１（ｖ：ｖ）２０
ｍｌに溶解した後、ロータリーエバポレーターにて溶媒
を留去した。フラスコ内に生成したフィルムに、テクネ
シウム９９ｍ ２０ｍＣｉを含む０．３Ｍグルコース３
ｍｌを加え、ボルテックスミキサーにて、フィルムがは
がれ落ちるまで撹拌した。得られた乳濁液を液体窒素に
て凍結させた後、４０℃の温水で溶解した。この操作を
３回繰り返した。得られた乳濁液を、０．１μｍのメン
ブランフィルターに３回通過させた。処理液を５０００
０ｒｐｍ．３０分間遠心処理した。沈殿物に０．１５Ｍ
ＮａＣｌを加えて懸濁し、３ｍｌとした。同様の操作を
再度行ったのち、本発明のガン診断剤である糖脂質含有
リポソーム（粒径０．１４μｍ）懸濁液３ｍｌを得た。

【００４６】

【比較例２】糖脂質Ａに代えてジパルミトイルホスファ
チジルグリセロール（ＤＰＰＧ）４０マイクロモルを使
用する以外は実施例１と同様にして、糖脂質を含有しな
いリポソーム懸濁液３ｍｌを得た。

【００４７】

【実施例４】上記実施例３及び比較例２で得られたリポ
ソーム懸濁液及びフリーのテクネシウム９９ｍ（^９９ｍ
Ｔｃ）−グルコース溶液を、参考例２と同様に処理され
たマウスに、同じ手法にて、同量投与した。２時間後及
び２４時間後にマウスを脱血し、各組織を摘出してγ線
−カウンターにより放射活性を測定した。また、２，
４，８，１２及び２４時間後にγ線カメラにより全身イ
メージングを行った。血液は、２０００ｒｐｍ、５分間
遠心して血清部分３０μｌを取り、組織溶解剤（ソルエ
ン、Ｍｅｒｋ社）を１ｍｌ加え４０℃、２時間処理後、
過酸化水素水及びイソプロピルアルコールを加え、測定
用試料とした。各組織はその一部を血清と同様に処理し
て測定用試料とした。

【００４８】上記で調製した試料につき、γ線−カウン
ターにより^９９ｍＴｃの測定を行い、得られた値から、
２時間後及び２４時間後のリポソームの血中濃度（注入
時の濃度を１００とする）及び各組織への分布率（％）
を算出した。

【００４９】結果を、図２に示す。

【００５０】尚、各々の値は、１０匹のマウスより得た
値の平均値である。また、Ｔ（バー）は、標準偏差を示
す。

【００５１】図２より、画像診断薬を封入した本発明の
ガン診断薬は、明かに比較品及びフリーの^９９ｍＴｃ−
ＤＴＡＰに比較して腫瘍組織に集積していることが分か
る。

【００５２】尚、参考図面１〜５に実施例３のリポソー
ム（以下、本発明のリポソームとする）、比較例２のリ
ポソーム（以下、従来のリポソームとする）及びフリー
の^９９ｍＴｃの腫瘍組織及び他の臓器における分布の経
時変化を示す。

【００５３】尚、各参考図面中において：（Ａ）は、
^９９ｍＴｃを内封した実施例３のリポソームを投与した
ときの、一定時間後のγ線カメラの写真を示す。（Ｂ）
は、^９９ｍＴｃを内封した比較例２のリポソームを投与
したときの、一定時間後のγ線カメラの写真を示す。
（Ｃ）は、^９９ｍＴｃのみを投与したときの、一定時間
後のγ線カメラの写真を示す。

【００５４】また、参考図面中、^９９ｍＴｃの濃度が最
も高い方から順に赤、黄赤、黄、黄緑、緑、青、紫、青
紫の順である。

【００５５】さらに、各参考図面は、以下のものを示
す。即ち、 ＊参考図面１は、本発明及び従来のリポソーム、及び
^９９ｍＴｃのみを各々投与したときの２時間後のγ線カ
メラの写真を示す。 ＊参考図面２は、本発明及び従来のリポソーム、及び
^９９ｍＴｃのみを各々投与したときの４時間後のγ線カ
メラの写真を示す。 ＊参考図面３は、本発明及び従来のリポソーム、及び
^９９ｍＴｃのみを各々投与したときの８時間後のγ線カ
メラの写真を示す。 ＊参考図面４は、本発明及び従来のリポソーム、及び
^９９ｍＴｃのみを各々投与したときの１２時間後のγ線
カメラの写真を示す。 ＊参考図面５は、本発明及び従来のリポソーム、及び
^９９ｍＴｃのみを各々投与したときの２４時間後のγ線
カメラの写真を示す。

【００５６】さらにまた、参考図面中の臓器の位置は、
図３で示される通りである。

【００５７】参考図面の結果から、以下のことが明らか
となった。 （１）本発明のリポソームは、２時間後から腫瘍組織に
集まり始め、８時間〜１２時間後に最も良く集積し、２
４時間後においても腫瘍組織に多く分布している。しか
も、肝臓等の本来リポソームが集積し易い部位よりも腫
瘍組織に選択的に分布していることが明らかである。 （２）従来のリポソームは、本発明のリポソームに比較
して腫瘍組織への分布の立上がりが遅く且つ消失も速や
かである。また、肝臓、膀胱等への分布が多く、腫瘍組
織への選択性が低い。 （３）^９９ｍＴｃのみを投与した場合には、尿中への排
泄のためほぼ膀胱にのみ分布し、特定の臓器への分布選
択性は見られない。

【００５８】実施例１及び２で示されたように、本発明
の手法を用いることにより、効果的に腫瘍部位に薬剤を
集める事ができる。

【００５９】

【実施例５】 １）シスプラチン内封リポソームの調製 実施例１と同様の方法を用いてシスプラチン含有リポソ
ーム（糖脂質Ａを用いたものとＤＰＰＧを用いたもの）
を調製した。

【００６０】なお、本実施例においては^１４Ｃ−コレス
テロールオレエート及び^３Ｈ−イヌリンは用いなかっ
た。また、０．３Ｍグルコース液の代わりにシスプラチ
ン含有（１０００μｇ／ｍｌ）食塩水を用いた。 ２）ガン組織への分布率 実験例１と同様に、シスプラチンを内封したリポソーム
をマウスに投与し、一定時間後に組織に分布した白金量
を測定することにより、シスプラチンのガン組織への集
積を調べた。マウスは一群５匹を用い、その結果を第３
表に平均値で示す。

【００６１】 第３表の結果から、本発明のリポソームはガン組織へ特
異的に集積することが明らかとなった。 ３）腫瘍組織の成長抑制効果 上記２）のガン組織への分布率の測定と同様な条件で腫
瘍組織のサイズを測定した。結果を以下の第４表に示
す。

【００６２】 第４表の結果から、腫瘍組織の成長抑制効果は、糖脂質
Ａリポソームに最も顕著に見られることが明らかとなっ
た。

【００６３】

【実施例６】本発明で得られるリポソームを血中濃度試
験に供するため、リポソーム膜成分の１つとして^１４Ｃ
でラベルしたコレステロールオレエートを、またリポソ
ーム内封物として^３Ｈ−イヌリンを用い、以下のように
してリポソームを製造した。

【００６４】ナス型フラスコにジパルミトイルホスファ
チジルコリン（ＤＰＰＣ）８０マイクロモル及びβ−Ｄ
−ガラクトピラノシルウロン酸（糖脂質Ｂ）４０マイク
ロモルをクロロホルム：メタノール＝２：１（ｖ：ｖ）
２０ｍｌに溶解して加え、さらに^１４Ｃ−コレステロー
ルオレエート３０μｃｉを加えた後、ロータリーエバポ
レーターにて溶媒を留去した。フラスコ内に生成したフ
ィルムに、滅菌蒸留水０．７９ｍｌ，^３Ｈ−イヌリン２
００μｃｉ（０．２ｍｌ）を加えて、ボルテックスミキ
サーにて、フィルムがはがれ落ちるまで撹拌した。得ら
れた乳濁液を液体窒素にて凍結させた後、４０℃の温水
で溶解した。この操作を二回繰り返した後、滅菌済みの
３Ｍグルコース０．１１ｍｌを加え、凍結融解操作を２
回行った。得られた乳濁液を、０．１μｍのメンブラン
フィルターに２回通過させた。処理液を３０００ｒｐ
ｍ．３０分間遠心処理した。沈殿物に０．１５ＭＮａＣ
ｌを加えて懸濁し、２．５ｍｌとした。同様の操作を再
度行った後、β−Ｄ−ガラクトピラノシルウロン酸（糖
脂質Ｂ）を含む本発明の糖脂質含有リポソーム（粒径
０．１７μｍ）懸濁液３．２ｍｌを得た。

【００６５】

【実施例７】β−Ｄ−ガラクトピラノシルウロン酸（糖
脂質Ｂ）の代わりにβ−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸
（糖脂質Ａ）を用いる他は実施例６と同様にして、β−
Ｄ−グルコピラノシルウロン酸（糖脂質Ａ）を含む本発
明の糖脂質含有リポソーム（粒径０．１５μｍ）懸濁液
３．２ｍｌを得た。

【００６６】

【比較例１】β−Ｄ−ガラクトピラノシルウロン酸（糖
脂質Ｂ）の代わりにＤＰＰＧを用いる他は実施例６と同
様にして、ＤＰＰＧを含む対照用リポソーム（粒径０．
１６μｍ）懸濁液３．２ｍｌを得た。

【００６７】

【実施例８】 血清および組織への^３Ｈの分布率の測定 実施例６、実施例７および比較例１で得られたリポソー
ム懸濁液を用い、以下の操作に従って試験を行った。

【００６８】ラットの頸動脈よりリポソーム懸濁液０．
５ｍｌ（一匹あたり）を注入した。採血は１、２、４、
６、８、２２時間後に大腿部静脈より行った。採血した
血液は、２０００ｒｐｍ、５分間遠心し、血清部分３０
μｌを取り、組織溶解剤（ソルエン、Ｍｅｒｋ社製）を
１ｍｌ加え、４０℃、２時間処理後、過酸化水素水およ
びイソプロピルアルコールを加え、測定用試料とした。

【００６９】上記で調製した試料につき、液体シンチレ
ーションカウンターにより^３Ｈの測定を行い、得られた
値から各時間毎のリポソームの血中濃度（注入時の濃度
を１００とする）を算出した。結果を第５表に示す。な
お、各々の値は、５匹のラットより得た値の平均値であ
る。

【００７０】 第５表の結果から、糖脂質Ｂのリポソームは糖脂質Ａの
リポソームに比較して長い半減期を示す事が明らかであ
る。また、糖脂質ＡおよびＢのリポソームは、ＤＰＰＧ
のリポソームに比較して長時間にわたり高濃度で血中に
存在していることが明らかになった。

【図面の簡単な説明】

【図１】^３Ｈイヌリンの１２時間後における各組織への
分布比率を示す。

【図２】^１４Ｃ−コレステロールオレエートの１２時間
後における各組織への分布比率を示す。

【図３】臓器の位置を示す模式図である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 35/24 7431−4Ｃ 43/00 8415−4Ｃ 45/00 ＡＤＵ 8415−4Ｃ 47/26 Ｄ 7433−4Ｃ 49/02 Ｂ 7252−4Ｃ Ｃ 7252−4Ｃ 49/04 7252−4Ｃ // Ａ６１Ｋ 31/675 8314−4Ｃ 31/70 8314−4Ｃ 31/71 8314−4Ｃ 33/24 8314−4Ｃ 37/02 8314−4Ｃ

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】グルクロン酸又はガラクツロン酸を結合し
   てなる糖脂質を少なくとも１種含有するリポソーム内に
   画像診断薬を封入してなるガン診断薬。
2. 【請求項２】グルクロン酸又はガラクツロン酸を結合し
   てなる糖脂質を少なくとも１種含有するリポソーム内に
   制ガン剤を封入してなるガン治療薬。